CN102911118B

CN102911118B - 一类苯并氮杂卓类衍生物及其制备方法和用途

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Publication number: CN102911118B
Application number: CN201210445465.9A
Authority: CN
Inventors: 梁艳书; 朱英杰; 丛萌; 郭桂梅; 支爽; 祁浩飞
Original assignee: Tianjin University of Commerce
Current assignee: Tianjin University of Commerce
Priority date: 2012-11-09
Filing date: 2012-11-09
Publication date: 2014-04-09
Anticipated expiration: 2032-11-09
Also published as: CN102911118A

Abstract

本发明公开了一类苯并氮杂卓类衍生物及其制备方法和用途，具有通式Ⅰ的结构：式中：所述R¹为：氢、卤素、卤素取代的C₁-C₄的烷基中的任一种；所述R²为氧或羟基；所述R³为氢、C₁-C₄的烷基、C₁-C₄烷氧基、卤素、羟基中的任一种。具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐，化学结构新颖，对肿瘤尤其是人肺腺癌细胞、人乳腺癌细胞、人胃癌细胞有明显的抑制作用，抑制作用与临床普遍使用的氟尿嘧啶相当。

Description

一类苯并氮杂卓类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，特别是涉及一类苯并氮杂卓类衍生物及其制备方法和用途。

背景技术

癌症目前已成为严重危害人类健康的一大顽症。据统计世界上每年罹患癌症的人有900万，死于癌症的患者为600万，几乎每秒钟就有一名癌症患者死亡。我国癌症年发病人数在120万左右，死于癌症的人数高达90万以上，待治疗的患者超过150万，并有逐年上升的趋势。因此癌症现已成为仅次于心血管疾病的第二大杀手。

临床上治疗肿瘤，一般采用手术、放疗、化疗三大疗法。化疗方法虽较为快捷，但治愈率很低，同时，临床研究发现目前使用的抗癌药物存在很大的不足，寻找新型的抗癌药物已成为新药研究的热点。

发明内容

本发明的目的是提供一类苯并氮杂卓类衍生物。

本发明的另一个目的是提供一类苯并氮杂卓类衍生物的药用盐。

本发明的另一个目的是提供一种一类苯并氮杂卓衍生物及其药用盐的制备方法。

本发明的再一个目的是提供一类以苯并氮杂卓衍生物及其药用盐为主要活性成分的药物组合物。

本发明还有一个目的是提供一类苯并氮杂卓类衍生物及其药用盐作为抗恶性肿瘤药物方面的应用，特别是在用于制备治疗乳腺癌、肺癌、胃癌药物方面的用途。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

一类苯并氮杂卓类衍生物，具有通式Ⅰ的结构：

式中：所述R¹为：氢、卤素、卤素取代的C₁-C₄的烷基中的任一种；

所述R²为：氧或羟基；

所述R³为氢、C₁-C₄的烷基、C₁-C₄烷氧基、卤素、羟基中的任一种。

本发明优选以下化合物：

1、1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮

2、1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

3、1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

4、1-(2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

5、1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮:

6、1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

7、1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

8、1-(2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮：

9、1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)7-氯-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

10、1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

11、1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

12、1-(2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

13、1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

14、1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

15、1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇：

16、1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇

通式Ⅰ的化合物药学上可接收的盐为所述通式Ⅰ的化合物与无机酸或有机酸成盐。优选：盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐、葡萄糖酸盐、氨基酸盐。

本发明一类苯并氮杂卓类衍生物的制备方法，包括下述步骤：

（1）通式Ⅱ的取代的苯并氮杂卓类化合物与2-氯乙基磺酰氯在碱性条件下反应制得中间体Ⅲ；

（2）中间体Ⅲ与通式Ⅳ的双（2-取代乙基）胺反应制得通式Ⅴ的化合物；

（3）通式Ⅴ的化合物溶于醇类溶剂中，加入硼氢化钠，反应制得化合物Ⅵ；

合成路线如下：

式中：R¹为：氢、卤素、卤素取代的C₁-C₄的烷基中的任一种；

所述R²为：氧或羟基；

本发明一类苯并氮杂卓类衍生物的具体制备方法为：通式Ⅱ的取代的苯并氮杂卓类化合物溶解，与2-氯乙基磺酰氯在缚酸剂的催化下，于-30-50℃反应制得中间体Ⅲ；中间体Ⅲ与通式Ⅳ的双（2-取代乙基）胺在溶剂中于-10-120℃反应制得通式Ⅴ的化合物；将通式Ⅴ的化合物溶于溶剂中，控制温度在-10-20℃，加入过量硼氢化钠，反应得到化合物Ⅵ。

其中，用于溶解通式Ⅱ的取代的苯并氮杂卓类化合物的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、N,N-二甲基甲酰胺、吡啶、乙腈、四氢呋喃或丙酮；所述缚酸剂为三乙胺、吡啶、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾；所述中间体Ⅲ与通式Ⅳ的双（2-取代乙基）胺反应的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、丙酮、苯或甲苯等；用于溶解通式Ⅴ的化合物的溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇。

一类苯并氮杂卓类衍生物药学上可接收的盐的具体的制备方法如下：将通式Ⅰ的化合物溶于溶剂中，于冰水浴下滴加盐酸乙醚至pH=2，制成盐酸盐；或将通式Ⅰ的化合物溶于溶剂中，加入与通式Ⅰ的化合物等摩尔的牛磺酸，加热搅拌得牛磺酸盐；将通式Ⅰ的化合物溶于溶剂中，于冰水浴下滴加浓硫酸至pH=3，制成硫酸盐。

一类苯并氮杂卓类衍生物的抗肿瘤的药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1或2的化合物；或权利要求3的药学上可接受的盐。

本发明通式Ⅰ的化合物化合物或药学上可接受的盐在用于制备抗肿瘤药物方面的应用。

特别是在用于制备治疗乳腺癌、肺癌、胃癌药物方面的用途。

本发明的含有通式Ⅰ的化合物对于治疗人类恶性肿瘤是有效的。本发明的含有通式Ⅰ的化合物可以不经任何配制直接给药，含有通式Ⅰ的化合物优选以药物制剂的形式使用，给药途径可以是非肠道途径（如静脉、肌肉给药）及口服给药。

本发明的含有通式Ⅰ的化合物的药物组合物制备如下：使用标准和常规的技术，使本发明含有通式Ⅰ的化合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成微粒或微球。固体剂型包括片剂、分散颗粒、胶囊、缓释片、缓释微丸等等。固体载体可以是稀释剂、香味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、崩解剂以及包裹剂中的至少一种物质。惰性固体载体包括磷酸镁、硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质，例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液体剂型包括溶剂、悬浮液例如注射剂、粉剂等等。

药物组合物以及单元剂型中含有的活性成份（本发明含有通式Ⅰ的化合物）的量可以根据患者的病情、医生诊断的情况特定地加以应用，所用的活性成分的量或浓度在一个较宽的范围内调节，通常，活性成分的量范围为组合物的0.5％～90％（重量），优选的范围为0.5%-70%。

本发明的具有式Ⅰ结构的化合物或其药学上可接受的盐，化学结构新颖，对肿瘤尤其是人肺腺癌细胞、人乳腺癌细胞、人胃癌细胞有明显的抑制作用。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1：

中间体Ⅲ-1的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5（2H）-酮3.91g（20mmol）、吡啶50mL，搅拌溶解，0℃下滴加2-氯乙基磺酰氯2.91g（24mmol），保持-10℃-5℃搅拌4h，TLC检测显示反应结束（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。

将反应液倾入200ml25℃冷水中，搅拌，有固体析出。过滤，滤饼水洗、干燥，得到棕黄色固体粗品。将此粗品用异丙醇重结晶，得到灰白色固体即为中间体Ⅲ-1，纯度98.1%（HPLC归一化法），收率81.0%。ES I-MS：321.0。

实施例2：

中间体Ⅲ-2的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入7-三氟甲基-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5（2H）-酮4.58g（20mmo l），加入乙腈50mL、碳酸氢钾5.0g（50mmo l）搅拌，0℃下搅拌，滴加2-氯乙基磺酰氯2.91g（24mmo l），保持5℃-20℃搅拌3h，TLC检测显示反应结束（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。

将反应液倾入200mL10℃蒸馏水中，乙酸乙酯萃取3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，蒸干溶剂，硅胶柱层析得到白色固体为中间体Ⅲ-2，纯度99.7%（HPLC归一化法），收率85.8%。ES I-MS：355.1。

实施例3：

1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮及化合物Ⅰ-1的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.22g（10mmol）中间体Ⅲ-1、2.0g（20mmo l）碳酸氢钾、2.02g（20mmo l）二丙基胺及50mL乙腈，搅拌，80℃-90℃反应12h后自然冷却至室温，滤去不溶物，滤液倒入100mL蒸馏水中，乙酸乙酯萃取3次,每次50mL，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸尽溶剂，硅胶柱层析得到白色即为固体化合物Ⅰ-1，纯度99.2%(HPLC归一化法)，收率81.6%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：387.1504。

实施例4：

1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-2的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.21g（10mmol）中间体Ⅲ-1、2.0g（20mmo l）三乙胺、2.84g（20mmo l）二氯乙基胺及50mL N,N二甲基甲酰胺，110℃-120℃反应10h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。

将反应液自然冷却至室温后，倒入15℃冷水中，搅拌，有固体析出，过滤出的固体粗产品用乙醇重结晶，得到淡黄色固体即为化合物Ⅰ-2，纯度99.0%(HPLC归一化法)，收率77.5%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：427.0412。

实施例5：

1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-3的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.21g（10mmol）中间体Ⅲ-1、2.0g（20mmo l）三乙胺、2.66g（20mmo l）双（2-甲氧基乙基）胺及50mL乙腈，70℃-80℃反应14h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。将反应液自然冷却至室温后倒入100mL蒸馏水中，乙酸乙酯萃取3次,每次50mL，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸尽溶剂，硅胶柱层析得到淡黄色固体即为化合物Ⅰ-3，熔点171℃-172.6℃，纯度98.5%(HPLC归一化法)，收率80.2%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：419.1402。

实施例6：

1-(2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-氯-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-4的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.21g（10mmol）中间体Ⅲ-1、50mL吡啶以及2.10g（20mmo l）2,2′-氮烷基乙基醇，115℃反应12h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3），蒸干溶剂，硅胶柱层析得到淡黄色液体即为化合物Ⅰ-4，纯度99.5%(HPLC归一化法)，收率85.2%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：391.1089。

实施例7：

1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-5的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.56g（10mmol）中间体Ⅲ-2、2.0g（20mmol）碳酸氢钾、2.02g（20mmol）二丙基胺及50mL N,N-二甲基甲酰胺，60℃-70℃反应12h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。将反应液自然冷却至室温，滤去不溶物，滤液倒入冷水中搅拌，析出黄色固体，过滤，将得到的粗产品用乙醇重结晶，得到白色固体即为化合物Ⅰ-5，纯度99.1%(HPLC归一化法)，收率75.9%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：421.1768。

实施例8：

1-(2-(双(2-氯乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-6的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.56g（10mmol）中间体Ⅲ-2、2.76g（20mmol）碳酸钾、2.84g（20mmol）二氯乙基胺及50ml三氯甲烷，50℃-60℃反应15h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=1:3）。过滤除去不溶物，滤液用饱和食盐水洗涤3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸尽溶剂，硅胶柱层析得到白色固体即为化合物Ⅰ-6，纯度99.2%(HPLC归一化法)，收率83.7%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：461.0675。

实施例9：

1-(2-(双(2-甲氧乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H)-酮即化合物Ⅰ-7的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.56g（10mmol）中间体Ⅲ-2、2.02g（20mmo l）三乙胺、2.66g（20mmo l）双（2-甲氧基乙基）胺及50mL乙腈，10℃-20℃反应12h，冷却至室温，反应液倒入蒸馏水中，乙酸乙酯萃取3次,每次50mL，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸尽溶剂，硅胶柱层析得到白色固体即为化合物Ⅰ-7，纯度99.5%(HPLC归一化法)，收率76.1%，HRMS(m/z)[M+H]+：453.1666。

实施例10：

1-(2-(双(2-羟基乙基)氨基)乙基磺酰基)-7-(三氟甲基）-3,4-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5(2H）-酮即化合物Ⅰ-8的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.56g（10mmol）中间体Ⅲ-2、2.0g（20mmo l）碳酸氢钾、2.10g（20mmo l）2,2′-氮烷基乙基醇及50mL三氯甲烷，30℃-40℃反应12h，冷却至室温，滤去不溶物，滤液用饱和食盐水洗涤3次,每次50mL，无水硫酸钠干燥，减压蒸尽溶剂，硅胶柱层析得到黄色液体即为化合物Ⅰ-8，纯度99.0%(HPLC归一化法)，收率78.8%，HRMS(m/z)[M+H]+：425.1353。

实施例11：

1-(2-(二丙基氨基)乙基磺酰基)7-氯-2,3,4,5-四氢-1H-苯并[b]氮杂卓-5-醇即化合物Ⅰ-9的制备：

在装有搅拌、温度计及冷凝器的反应瓶中加入3.87g（10mmo l）化合物Ⅰ-1、50mL甲醇，搅拌溶解，加入0.74克（20mmol）NaBH₄，5℃-15℃搅拌1h，TLC显示反应完全（展开剂：乙酸乙酯：石油醚=2:1）。

将反应液浓缩，固体用50mL三氯甲烷溶解，饱和食盐水洗涤3次,每次30mL，合并有机层，无水硫酸钠干燥，静置过夜。过滤不溶物，减压蒸尽溶剂，得到黄色油状物。

向黄色油状物中加入36mL乙醚与甲醇的混合溶剂，乙醚与甲醇的混合溶剂中乙醚与甲醇的体积比为5：1，室温搅拌1h，有固体析出，过滤，得到淡黄色固体即为化合物Ⅰ-9，纯度99.0%(HPLC归一化法)，收率93.0%，HRMS(m/z)[M+H]⁺：389.1660。

参照实施例11的方法，在-10℃-20℃条件下，即可合成化合物Ⅰ-10～Ⅰ-16。具体如表1所示。

表1

Ⅰ-14，熔点179.1℃-180.5℃;Ⅰ-15，熔点183.3℃-184.7℃。

实施例12

化合物Ⅰ-1成盐酸盐：取化合物Ⅰ-1白色固体产物2.0g，溶于8mL无水乙醚。冰水浴冷却至5℃，滴加11.1%的盐酸乙醚溶液至pH值为2，继续于冰水浴下搅拌约1h。过滤，真空干燥，得白色固体粉末即为化合物Ⅰ-1的盐酸盐。

采用实施例12的方法，采用化合物Ⅰ-2～Ⅰ-16作为原料可以得到化合物Ⅰ-2～Ⅰ-16的盐酸盐。

实施例13

化合物Ⅰ-2成牛磺酸盐：取化合物Ⅰ-2淡黄色固体产物2.0g，溶于10mL无水甲醇。加热至回流后加入与化合物Ⅰ-2等摩尔的牛磺酸，继续于回流下搅拌反应约1.5h。反应完毕，于室温下静置24h。析出浅黄色结晶即为化合物Ⅰ-2的牛磺酸盐，过滤，真空干燥。

采用实施例13的方法，采用化合物Ⅰ-1、化合物Ⅰ-3～Ⅰ-16作为原料可以得到化合物Ⅰ-1及化合物与Ⅰ-3～Ⅰ-16的牛磺酸盐。

实施例14

将化合物Ⅰ-1溶于乙醚中，于冰水浴下滴加浓硫酸至pH值=3，制成化合物与Ⅰ-1的硫酸盐。

采用实施例14的方法，采用化合物Ⅰ-2～Ⅰ-16作为原料可以得到化合物Ⅰ-2～Ⅰ-16的硫酸盐。

本发明的苯并氮杂卓类化合物的药物组合物可以使用本发明化合物中的任何活性化合物及其盐，优选使用实施例1-14中所描述的化合物。

实施例15：

用下述成分制备硬明胶胶囊：

制备工艺：将化合物Ⅰ-3、干淀粉、硬脂酸镁预先干燥，过100目筛备用。按处方量将上述成分混合后，填充入硬明胶胶囊中。

实施例16：

用下述成分制备片剂：

制备工艺：将化合物Ⅰ-4、淀粉、羧甲基淀粉钠盐、硬脂酸镁、滑石粉预先干燥，过100目筛备用。先将处方量的辅料淀粉、羧甲基淀粉钠盐、硬脂酸镁、滑石粉充分混匀。将化合物Ⅰ-4以递增稀释法加到混匀的上述辅料中，每次加时充分混匀2－3次，保证药与辅料充分混匀，过20目筛，在55℃通风烘箱中干燥2h，干颗粒过16目筛整粒，混合均匀，在压片机上压片。

实施例17：

注射液的制备：

制备方法：将聚山梨酯和丙二醇溶于蒸馏水中。取化合物Ⅰ-1的盐酸盐作为活性成分加入到已溶解聚山梨酯和丙二醇的蒸馏水中，加入氢氧化钠调节pH值至7，化合物Ⅰ-1的盐酸盐溶解。加入化合物Ⅰ-1的盐酸盐5%的活性炭，搅拌吸附30mi n，除炭、精滤、灌封、灭菌。

实施例18：

注射用冻干粉的制备：

化合物Ⅰ-2的牛磺酸盐100mg

药用碱0.1-7.0%

甘露醇55－85%

制备方法：取化合物Ⅰ-2的牛磺酸盐作为活性成分，加入5倍量（质量）注射用水，用氢氧化钠调节pH值至6-7使其溶解。再加入甘露醇，按注射剂的要求进行高压灭菌，加入化合物Ⅰ-2的牛磺酸盐5%的活性炭，采用微孔滤膜过滤，滤液进行分装，采用冷冻干燥法，制得疏松块状物，封口，即得。

体外的抗肿瘤作用：

（1）实验方法：

采用经典的细胞毒活性体外检测法MTT法，检测本发明化合物对体外培养的人肿瘤细胞的细胞增殖毒性。

（2）实验材料：

实验样品：本发明上述实施例中制备的化合物Ⅰ-1—Ⅰ-16，实验时样品以DMSO助溶，无血清DMEM培养基稀释到所需浓度，部分样品溶液呈悬浮状。主要试剂：MTT，Amresco公司分装，批号：04M0904；完全DMEM培养基，Gibco公司产品，批号：1290007；小牛血清，兰州民海生物，批号：20060509；胰蛋白酶，Amresco公司分装，批号：016B0604；氟尿嘧啶注射液，0.25g/10ml(支)，批号：0512022，天津金耀氨基酸有限公司。

实验仪器：超净工作台，苏州净化设备厂；CO₂培养箱，Thermo公司，型号：HERA Cell150；倒置显微镜，Carl Zeiss公司，型号：Axiovert200；酶联免疫检测仪，TECAN公司，型号：Sunrise；离心机，Kerdro公司，型号：Heraeus。

细胞株：SPCA1人肺腺癌细胞株、MCF7人乳腺癌细胞、SGC-7901人胃癌细胞，均购自中国科学院上海细胞研究所。

（3）实验步骤：

细胞培养：将SPCA1人肺腺癌细胞株、MCF7人乳腺癌细胞、SGC-7901人胃癌细胞，分别接种在含10%小牛血清，100I U/ml青霉素G钠盐及100μg/ml硫酸链霉素的DMEM培养液中，置于37℃、100%相对湿度、含5%CO₂的培养箱中，传代3次后备用。

MTT法测定：取对数生长期的上述三种肿瘤细胞，分别经0.25%胰蛋白酶消化后（悬浮细胞无须消化），悬浮于含10％小牛血清的DMEM培养液中，用玻璃滴管轻轻吹打成单细胞悬液，显微镜下用血细胞记数板记数活细胞。96孔培养板每孔接种细胞悬液90μL（细胞浓度调整为6～10×10⁴个/ml），在37℃、100%相对湿度、含5%CO₂、95%空气的培养箱培养24h后，每孔加10μL药液（终浓度设为：40μg/ml、20μg/ml、10μg/ml、5μg/ml和2.5μg/ml五个浓度）。另外，每个浓度设阴性对照（等浓度DMSO）及空白本底（不加细胞），各组均设6个复孔。再连续培养24h，然后每孔加入5mg/ml的MTT溶液10μL，继续培养4h后，仔细吸去上清液（悬浮细胞，需要先离心，再吸去上清）。每孔加入100μL DMSO，置微量振荡器震荡5min以使结晶完全溶解，酶标仪492nm单波长比色，测定OD值。以下述方法计算细胞生长抑制率作为评价指标。

抑制率(%)=[1-（实验组OD均值-空白组OD均值）/（对照组OD均值-空白组OD均值）]×100%。根据细胞生长抑制率，以直线回归方法计算IC₅₀值。

（4）实验结果如表2所示：

表2：对体外培养的肿瘤细胞的IC₅₀(μg/ml)

组别	SPCA1细胞	MCF7细胞	SGC-7901细胞
				Ⅰ-1	12,53	10.36	10.12
Ⅰ-2	14.70	13.00	11.83
				Ⅰ-3	10.89	9.54	10.27
Ⅰ-4	16.44	11.97	13.01
				Ⅰ-5	15.37	12.33	13.21
Ⅰ-6	13.55	10.64	11.59
				Ⅰ-7	13.52	9.78	11.52
Ⅰ-8	14.36	12.13	12.67
				Ⅰ-9	16.63	11.67	11.79
Ⅰ-10	13.96	11.06	10.51
				Ⅰ-11	11.54	10.16	9.78
Ⅰ-12	13.91	11.78	10.15
				Ⅰ-13	12.44	10.44	13.91
Ⅰ-14	10.58	9.01	10.85
				Ⅰ-15	9.73	9.11	12.68
Ⅰ-16	14.97	12.35	11.70
				氟尿嘧啶	16.49	12.82	13.16

（5）结论：

根据上述体外试验结果，我们可以看出具有式Ⅰ结构的化合物对上述3种人类肿瘤细胞具有比较强的抑制作用，抑制作用与临床普遍使用的氟尿嘧啶相当。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出的是，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一类苯并氮杂卓类衍生物或其药学上可接受的盐，其特征在于，该苯并氮杂卓类衍生物具有通式I的结构：

所述R²为：氧或羟基；

2.根据权利要求1所述的一类苯并氮杂卓类衍生物，其特征在于，包括以下化合物：

3.一种权利要求1所述的一类苯并氮杂卓类衍生物药学上可接收的盐，其特征在于，所述通式I的化合物与无机酸或有机酸成盐。

4.一种权利要求1所述的一类苯并氮杂卓类衍生物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)通式II的取代的苯并氮杂卓类化合物与2-氯乙基磺酰氯在碱性条件下反应制得中间体III；

(2)中间体III与通式IV的双(2-取代乙基)胺反应制得通式Ⅴ的化合物；

(3)通式Ⅴ的化合物溶于醇类溶剂中，加入硼氢化钠，反应制得化合物VI；即：

5.根据权利要求4所述的一类苯并氮杂卓类衍生物的制备方法，其特征在于，通式II的取代的苯并氮杂卓类化合物溶解，与2-氯乙基磺酰氯在缚酸剂的催化下，于-30－50℃反应制得中间体III；中间体III与通式IV的双(2-取代乙基)胺在溶剂中于-10－120℃反应制得通式V的化合物；将通式V的化合物溶于溶剂中，控制温度在-10－20℃，加入过量硼氢化钠，反应得到化合物VI。

6.根据权利要求5所述的一类苯并氮杂卓类衍生物的制备方法，其特征在于，用于溶解通式II的取代的苯并氮杂卓类化合物的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺、吡啶、乙腈、四氢呋喃或丙酮；所述缚酸剂为三乙胺、吡啶、碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾；所述中间体III与通式IV的双(2-取代乙基)胺反应的溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、乙腈、丙酮、苯或甲苯；用于溶解通式V的化合物的溶剂为甲醇、乙醇或异丙醇。

7.一种权利要求3所述的一类苯并氮杂卓类衍生物药学上可接收的盐的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：将通式I的化合物溶于溶剂中，于冰水浴下滴加盐酸乙醚至pH=2，制成盐酸盐；或将通式I的化合物溶于溶剂中，加入与通式I的化合物等摩尔的牛磺酸，加热搅拌得牛磺酸盐；将通式I的化合物溶于溶剂中，于冰水浴下滴加浓硫酸至pH=3，制成硫酸盐。

8.一种含有权利要求1或2所述苯并氮杂卓类衍生物或权利要求3所述的药学上可接受的盐的抗肿瘤的药物组合物，包含治疗有效量的权利要求1或2的化合物；或权利要求3的药学上可接受的盐。

9.权利要求1或2所述的化合物或权利要求3所述的药学上可接受的盐在用于制备抗肿瘤药物方面的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，在用于制备治疗乳腺癌、肺癌、胃癌药物方面的用途。