CN102892764A - (r)-1(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-n-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1h-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的固体形式 - Google Patents

Abstract

本发明涉及(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(化合物1)以基本上结晶形式(形式A)或无定形形式存在的固体形式、其药用组合物及其治疗方法。

Description

(R)-1(2,2-二氟苯并[D][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的固体形式

本发明的技术领域

本发明涉及(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的固态形式，例如结晶和无定形形式，其药用组合物及其使用方法。

发明背景

CFTR为在多种细胞类型，包括吸收和分泌上皮细胞表达的cAMP/ATP-介导的阴离子通道，在这里所述通道调节跨膜的阴离子通量以及其它离子通道和蛋白质的活性。在上皮细胞中，CFTR的正常运作对于保持电解质在整个身体包括在呼吸和消化组织的运输至关重要。CFTR由约1480个氨基酸组成，其编码由串联重复的跨膜结构域组成的蛋白质，每一个跨膜结构域含有6个跨膜螺旋和核苷酸结合域。两个跨膜结构域由大的极性调节性(R)-结构域连接，后者具有多个调节通道活性和细胞运输的磷酸化位点。

编码CFTR的基因已被鉴定和测序(参见Gregory, R.J. et al. (1990) Nature 347:382-386; Rich, D.P. et al. (1990) Nature 347:358-362), (Riordan, J.R. et al. (1989) Science 245:1066-1073)。该基因的缺陷引起CFTR突变，导致囊性纤维化("CF")，后者为人类中最常见的致命的遗传性疾病。在美国，囊性纤维化影响每约二千五百个婴儿中的一个。在一般的美国人口中，高达1000万人带有单拷贝的缺陷基因而没有明显的不良影响。相比之下，带有双拷贝的CF相关基因的个体遭受CF的衰弱和致命影响，包括慢性肺病。

在患有囊性纤维化的患者，在呼吸道上皮细胞内源性表达的CFTR的突变导致顶端阴离子分泌减少，造成离子和流体输送不平衡。所生成的阴离子运输减少有助于增强肺部的粘液积聚和伴随的微生物感染，这最终导致CF患者死亡。除了呼吸道疾病以外，CF患者通常患有胃肠道问题和胰腺功能不全，如果不及时治疗将导致死亡。另外，大多数患有囊性纤维化的男性不能生育并且在患有囊性纤维化的女性当中生育率下降。与双拷贝CF相关基因的严重影响形成对照，带有单拷贝的CF相关基因的个体呈现对霍乱和对由于腹泻造成的脱水的耐受性增加--这也许可以解释在人口中存在相对高频率的CF基因。

CF染色体的CFTR基因的序列分析揭示了多种致病突变(Cutting, G.R. et al. (1990) Nature 346:366-369; Dean, M. et al. (1990) Cell 61:863:870; 和Kerem, B-S. et al. (1989) Science 245:1073-1080; Kerem, B-S et al. (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:8447-8451)。迄今为止，CF基因的多于1000种致病突变已被鉴定，如由科学和医学文献报道的那样。最普遍的突变是在CFTR氨基酸序列的508位(并且通常称为ΔF508-CFTR)苯丙氨酸缺失。这种突变发生于约70%的囊性纤维化病例，并且与严重疾病相关。其它突变包括R117H和G551D。

ΔF508-CFTR的508残基缺失阻止初生蛋白的正确折叠。这导致突变蛋白不能离开ER和通过质膜。结果，存在于膜上的通道数目远少于在表达野生型CFTR的细胞观察到的。除了通量受损，突变还导致通道门控缺陷。膜上的通道数目减少和门控缺陷一同导致阴离子跨上皮细胞运输减少，造成离子和流体输送缺陷。(Quinton, P.M. (1990), FASEB J. 4: 2709-2727)。然而研究显示，膜上的ΔF508-CFTR数目减少为功能性的，尽管少于野生型CFTR。(Dalemans et al. (1991), Nature Lond. 354: 526-528; Denning et al., 在上; Pasyk and Foskett (1995), J. Cell. Biochem. 270: 12347-50)。除了ΔF508-CFTR，造成通量、合成和/或通道门控缺陷的CFTR的其它致病突变可被上-或下调，以改变阴离子分泌和修改疾病进展和/或严重性。

尽管除阴离子外CFTR还运送多种分子，很清楚这种作用(阴离子运送)代表跨上皮细胞运送离子和水的重要机制中的一个要素。其它要素包括上皮Na⁺通道、ENaC、Na⁺/2Cl^-/K⁺协同转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATPase泵和基侧膜K⁺通道，它们负责吸收氯进入细胞。

这些要素共同起效以实现经其细胞内的选择性表达和定位跨上皮细胞的定向输送。通过存在于顶端膜上的ENaC和CFTR和在细胞的基底外侧表面表达的Na⁺-K⁺-ATPase泵和Cl^-通道的协调活性来发生氯吸收。氯自腔侧的继发性主动转运导致氯在细胞内累计，这些氯然后可经Cl^-通道被动离开细胞，造成矢量运输。在基底外侧表面排列的Na⁺/2Cl^-/K⁺协同转运蛋白、Na⁺-K⁺-ATPase泵和基侧膜K⁺通道和在腔侧的CFTR协调氯经腔侧的CFTR分泌。因为水自身可能从未主动转运，其跨上皮细胞的流动取决于钠和氯的总体流动产生的微小经上皮的渗透梯度。

如以上讨论的那样，认为ΔF508-CFTR的508残基缺失阻止初生蛋白的正确折叠，导致这种突变蛋白不能离开ER和通过质膜。结果，在质膜上存在数量不足的成熟蛋白，并且在上皮组织中的氯转运显著减少。事实上，ATP结合盒(ABC)转运蛋白通过ER机构的有缺陷的内质网(ER)处理的这种细胞现象，已经显示不仅是CF疾病，而且是广泛范围的其它相关和遗传性疾病的基础。ER机构可能不起作用的两种方式为通过失去与蛋白的ER输出偶合导致降解，或者通过这些有缺陷的/错误折叠蛋白的ER累积[Aridor M, et al., Nature Med., 5(7), 第745-751页(1999); Shastry, B.S., et al., Neurochem. International, 43, 第1-7页(2003); Rutishauser, J., et al., Swiss Med Wkly, 132, 第211-222页(2002); Morello, JP et al., TIPS, 21, 第466-469页(2000); Bross P., et al., Human Mut., 14, 第186-198页(1999)]。

在美国出版的专利申请US20090131492(所述出版物通过引用以其全部结合到本文中)中公开了作为CFTR活性的调节剂，并因此用于治疗CFTR介导的疾病比如囊性纤维化的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。然而，需要所述化合物的稳定固体形式，这种形式可易于用于适合用作治疗剂的药用组合物。

发明概述

本发明涉及具有以下结构的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺(下文称为“化合物1”)的固体形式：

　　　　　　化合物1

化合物1及其药学上可接受的组合物用于治疗或减轻CFTR介导的疾病比如囊性纤维化的严重性。一方面，化合物1以本文描述和表征的称为形式A的基本上结晶和盐游离形式存在。另一方面，化合物1以本文描述和表征的无定形形式存在。与其作为药物的效力有关的固体的性质可能取决于固体的形式。例如，在药物物质，固体形式的变化可导致性质比如熔点、溶出度、口服吸收、生物利用度、毒理学结果并且甚至临床试验结果的差异。

本文描述的方法可用于制备包含化合物1的形式A或无定形形式或两者兼而有之的本发明组合物。用于这种方法的组分的量和特征如本文描述的那样。

绘图的简短描述

图1为化合物1的X-射线粉末衍射图。

图2为化合物1的差示扫描量热法(DSC)示踪图。

图3为化合物1的热重分析(TGA)图。

图4为自化合物1形式A的单晶计算的X-射线粉末衍射图。

图5为用DCM作为溶剂，通过料浆技术(2周)制备的化合物1形式A的实际X-射线粉末衍射图。

图6为化合物1形式A的差示扫描量热法(DSC)示踪图。

图7为自乙腈通过快速蒸发法制备的化合物1形式A的实际X-射线粉末衍射图。

图8为使用EtOAc和庚烷，通过抗溶剂法制备的化合物1形式A的实际X-射线粉末衍射图。

图9为化合物1形式A基于单晶X-射线分析的构象图。

图10为显示化合物1形式A的堆垛次序的构象图。

图11为化合物1形式A的固态¹³C NMR谱(15.0 kHz自旋)。

图12为化合物1形式A的固态¹⁹F NMR谱(12.5 kHz自旋)。

图13为来自快速蒸发旋转蒸发法的化合物1无定形形式的X-射线粉末衍射图。

图14为通过快速蒸发旋转蒸发法制备的化合物1无定形形式的调制式差示扫描量热法(MDSC)示踪图。

图15为通过快速蒸发旋转蒸发法制备的化合物1无定形形式的热重分析(TGA)图。

图16为通过喷雾干燥法制备的化合物1无定形形式的X-射线粉末衍射图。

图17为通过喷雾干燥法制备的化合物1无定形形式的调制式差示扫描量热法(MDSC)示踪图。

图18为化合物1无定形形式的固态¹³C NMR谱(15.0 kHz自旋)。

图19为化合物1无定形形式的固态¹⁹F NMR谱(12.5 kHz自旋)。

发明详述

定义

除非另外指明，应适用本文使用的以下定义。

本文使用的术语“CFTR”意指囊性纤维化跨膜转运调节因子或其能够调节活性，非限制地包括ΔF508 CFTR和G551D CFTR的突变(对于CFTR突变参见例如http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/)。

本文使用的术语“无定形”指的是由无序排列的分子组成并且不具有可辨别的晶格的固体形式。

本文使用的“结晶”指的是其中结构单元以固定的几何模式或格排列，使得结晶固体具有刚性长程序的化合物或组成。构成晶体结构的结构单元可为原子、分子或离子。结晶固体显示固定熔点。

本文使用的术语“调制”意指增加或减少例如活性达可测量。

本文使用的术语“化学稳定的”意指固体形式的化合物1在受到指定条件时不分解为一种或多种不同的化合物，例如受到40℃/75%相对湿度特定的时间段，例如1天、2天、3天、1周、2周或者更长。在一些实施方案中，固体形式的化合物1中有少于25%分解，在一些实施方案中，少于约20%，少于约15%，少于约10%，少于约5%，少于约3%，少于约1%，少于约0.5%的所述形式的化合物1在所指定的条件下分解。在一些实施方案中，没有可测量的固体形式的化合物1分解。

本文使用的术语“物理稳定的”意指化合物1的固体形式在受到特定条件时不变成为化合物1的一种或多种不同物理形式(例如如经XRPD、DSC等测量的不同固体形式)，例如受到40℃/75%相对湿度特定的时间段，例如1天、2天、3天、1周、2周或者更长。在一些实施方案中，少于25%的化合物1的固体形式在受到指定条件时变成为一种或多种不同的物理形式。在一些实施方案中，化合物1的少于约20%，少于约15%，少于约10%，少于约5%，少于约3%，少于约1%，少于约0.5%的固体形式在受到指定条件时变成为化合物1的一种或多种不同物理形式。在一些实施方案中，没有可测量的化合物1的固体形式变成为化合物1的一种或多种不同物理形式。

本文使用的短语“基本上无定形的化合物1”与短语“无定形的化合物1”、“基本上不含结晶化合物1的无定形的化合物”和“基本上无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺”可互换使用。在一些实施方案中，基本上无定形的化合物1具有少于约30%的结晶化合物1，例如少于约30%的结晶化合物1，例如少于约25%的结晶化合物1，少于约20%的结晶化合物1，少于约15%的结晶化合物1，少于约10%的结晶化合物1，少于约5%的结晶化合物1，少于约2%的结晶化合物1。

本文使用的短语“基本上结晶的化合物1形式A”与“化合物1形式A”和“基本上不含无定形化合物1的结晶化合物1形式A”可互换使用。在一些实施方案中，基本上结晶的化合物1形式A具有少于约30%的无定形化合物1或其它固体形式，例如少于约30%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约25%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约20%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约15%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约10%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约5%的无定形化合物1或其它固体形式，少于约2%的无定形化合物1或其它固体形式。在一些实施方案中，基本上结晶的化合物1形式A具有少于约1%的无定形化合物1或其它固体形式.

术语“基本上不含”(如在短语“基本上不含形式X”中)，当关于化合物1的指定固体形式(例如本文描述的无定形或结晶形式)时，意指存在少于20% (按重量计)的指定形式或co-form (例如化合物1的结晶或无定形形式)，更优选地存在少于10% (按重量计)的指定形式，更优选地存在少于5% (按重量计)的指定形式，和最优选地存在少于1% (按重量计)的指定形式。

术语“基本上纯的”，当关于化合物1的指定固体形式(例如本文描述的无定形或结晶固体形式)时，意指指定的固体形式含有少于20% (按重量计)的残余组分比如化合物1的备选多晶形或同构结晶形式或者co-form。优选的是化合物1的基本上纯的固体形式含有少于10% (按重量计)的化合物1的备选多晶形或同构结晶形式，更优选地含有少于5% (按重量计)的化合物1的备选多晶形或同构结晶形式，和最优选地含有少于1% (按重量计)的化合物1的备选多晶形或同构结晶形式。

本文使用的“分散体”指的是其中一种物质(分散相)以离散单元分布于全部第二种物质(连续相或溶媒)中的分散系统。分散相的大小可显著变化(例如纳米尺寸的胶体粒子，至大小为多个微米)。通常，分散相可为固体、液体或气体。在固体分散体的情况下，分散和连续相两者为固体。在药学应用中，固体分散体可包括在无定形聚合物(连续相)中的结晶药物(分散相)或者在无定形聚合物(连续相)中的无定形药物(分散相)。在一些实施方案中，无定形固体分散体包括构成分散相的聚合物和构成连续相的药物。在一些实施方案中，分散体包括无定形化合物1或基本上无定形的化合物1。

术语“固体无定形分散体”一般指两种或更多种组分，通常为药物和聚合物的固体分散体，但是可能含有其它组分比如表面活性剂或其它药用赋形剂，其中化合物1为无定形或基本上无定形(例如基本上不含结晶化合物1)，并且无定形药物的物理稳定性和/或溶出和/或溶解度被其它组分增强。

本文使用的术语“约”和“大约”，当与组合物或剂型中的成分的剂量、量或重量百分数结合使用时，意指由本领域普通技术人员公认提供相当于自指定剂量、量或重量百分数得到的药理作用的剂量、量或重量百分数。具体地讲，术语“约”或“大约”意指如由本领域普通技术人员测定的对特定值可接受的误差，其部分地取决于所述数值被如何测量或测定。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在1、2、3或4个标准偏差内。在某些实施方案中，术语“约”或“大约”意指在给定数值或范围的30%、25%、20%、15%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%、0.5%、0.1%或0.05%内。

缩写“MTBE”和“DCM”分别代表甲基叔丁基醚和二氯甲烷。

缩写“XRPD”代表X-射线粉末衍射。

缩写“DSC”代表差示扫描量热法。

缩写“TGA”代表热重分析。

除非另外指出，本文描绘的结构也意指包括所述结构的所有异构体(例如对映、非对映和几何(或构象))形式，例如对每一个不对称中心的R和S构型，(Z)和(E)双键异构体以及(Z)和(E)构象异构体。因此，本发明化合物的单一立体化学异构体以及对映异构体、非对映异构体和几何(或构象) 异构体的混合物处于本发明的范围内。本文包括化合物1的所有互变异构形式。例如，化合物1可作为互变异构体存在，本文包括其两者：

另外，除非另外指出，本文描绘的结构也意指包括仅在存在富含一种或多种同位素的原子方面不同的化合物。例如，其中一个或多个氢原子用氘或氚替代，或者一个或多个碳原子用富含¹³C-或¹⁴C-的碳替代的化合物1处于本发明的范围内。这样的化合物例如用作分析工具、生物测定中的探针或具有改善的治疗状况的化合物。

一方面，本发明的特征为描述为结晶形式A的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

在另一个实施方案中，形式A特征在于在使用Cu Kα辐射得到的X-射线粉末衍射中，在19.3-19.7°、21.5-21.9°和16.9 - 17.3°的一个或多个峰。在另一个实施方案中，形式A特征在于在约19.5、21.7和17.1°的一个或多个峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在20.2-20.6°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约20.4°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在18.6-19.0°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约18.8°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在24.5-24.9°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约24.7°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在9.8-10.2°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约10.0°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在4.8-5.2°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约5.0°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在24.0-24.4°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约24.2°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在18.3-18.7°的峰。在另一个实施方案中，形式A的进一步特征在于在约18.5°的峰。

在另一个实施方案中，形式A的特征在于与图4基本上相似的衍射图。在另一个实施方案中，形式A的特征在于与图5基本上相似的衍射图。

另一方面，本发明的特征为具有单斜晶系、C2空间群和以下晶胞大小的晶体形式的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺：a = 21.0952(16) Å, α = 90°, b = 6.6287(5) Å, β = 95.867(6)°, c = 17.7917(15) Å, 和 γ = 90°。

另一方面，本发明的特征为包含形式A和药学上可接受的载体的药用组合物。在另一个实施方案中，药用组合物进一步包含另外的治疗剂。在另一个实施方案中，另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

另一方面，本发明的特征为制备形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺在溶剂中浆化有效量的时间。在另一个实施方案中，溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、MTBE、乙酸异丙酯、水/乙醇、水/乙腈、水/甲醇或水/异丙醇。在另一个实施方案中，有效量的时间为24小时-2周。在另一个实施方案中，有效量的时间为24小时-1周。在另一个实施方案中，有效量的时间为24小时-72小时。

另一方面，本发明的特征为制备形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于溶剂中并蒸发溶剂。在另一个实施方案中，溶剂为丙酮、乙腈、甲醇或异丙醇。

另一方面，本发明的特征为制备形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于第一溶剂中，并加入(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺不溶于其中的第二溶剂。在另一个实施方案中，第一溶剂为乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或丙酮。在另一个实施方案中，第二溶剂为庚烷或水。在另一个实施方案中，在搅拌第一溶剂和(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的溶液的同时加入第二溶剂。

另一方面，本发明的特征为固体基本上无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。在另一个实施方案中，无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺包含少于约5%的结晶(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

另一方面，本发明的特征为包含无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和药学上可接受的载体的药用组合物。在另一个实施方案中，药用组合物进一步包含另外的治疗剂。在另一个实施方案中，另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

另一方面，本发明的特征为制备无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于合适的溶剂中，并通过旋转蒸发除去溶剂。在另一个实施方案中，溶剂为甲醇。

另一方面，本发明的特征为包含无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和聚合物的固体分散体。在另一个实施方案中，聚合物为羟丙基甲基纤维素(HPMC)。在另一个实施方案中，聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。

在另一个实施方案中，聚合物以10%重量-80%重量的量存在。在另一个实施方案中，聚合物以30%重量-60%重量的量存在。在另一个实施方案中，聚合物以约49.5%重量的量存在。

在另一个实施方案中，(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以10%重量-80%重量的量存在。在另一个实施方案中，(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以30%重量-60%重量的量存在。在另一个实施方案中，(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以约50%重量的量存在。

在另一个实施方案中，固体分散体进一步包含表面活性剂。在另一个实施方案中，表面活性剂为十二烷基硫酸钠。在另一个实施方案中，表面活性剂以0.1%重量-5%重量的量存在。在另一个实施方案中，表面活性剂以约0.5%重量的量存在。

在另一个实施方案中，聚合物为以49.5%重量的量存在的醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)，表面活性剂为以0.5%重量的量存在的十二烷基硫酸钠，和(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以50%重量的量存在。

另一方面，本发明的特征为包含固体分散体和药学上可接受的载体的药用组合物。在另一个实施方案中，药用组合物还包含另外的治疗剂。在另一个实施方案中，另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

另一方面，本发明的特征为制备无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺喷雾干燥。

在另一个实施方案中，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和合适的溶剂混合，然后将所述混合物喷雾干燥，以得到无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。在另一个实施方案中，溶剂为醇。在另一个实施方案中，溶剂为甲醇。

在另一个实施方案中，所述方法包括：a) 形成包含(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺、聚合物和溶剂的混合物；和b) 将所述混合物喷雾干燥以形成固体分散体。

在另一个实施方案中，聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。在另一个实施方案中，聚合物以固体分散体的10%重量-80%重量的量存在。在另一个实施方案中，聚合物以固体分散体的约49.5%重量的量存在。在另一个实施方案中，溶剂为甲醇。在另一个实施方案中，混合物还包含表面活性剂。在另一个实施方案中，表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SLS)。在另一个实施方案中，表面活性剂以固体分散体的0.1%重量-5%重量的量存在。在另一个实施方案中，表面活性剂以固体分散体的约0.5%重量的量存在。

在另一个实施方案中，聚合物为以固体分散体的约49.5%重量的量存在的醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)，溶剂为甲醇，并且混合物还包含以固体分散体的约0.5%重量的量存在的十二烷基硫酸钠。

另一方面，本发明的特征为在受试者中治疗CFTR介导的疾病的方法，所述方法包括给予受试者有效量的形式A、无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，或者无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的固体分散体。

在另一个实施方案中，CFTR介导的疾病选自囊性纤维化、哮喘、吸烟引起的COPD、慢性支气管炎、鼻窦炎、便秘、胰腺炎、胰功能不全、先天性双侧输精管缺如(CBAVD)引起的男性不育、轻度肺疾病、特发性胰腺炎、变应性支气管肺曲霉病(ABPA)、肝病、遗传性肺气肿、遗传性血色病、凝血纤溶缺陷、蛋白C缺乏症、1型遗传性血管性水肿、脂质处理缺陷、家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症(abetalipoproteinemia)、溶酶体贮积病、I-细胞疾病/假性赫尔勒病(pseudo-Hurler)、粘多醣症、Sandhof病/黑蒙性痴呆(Sandhof/Tay-Sachs)、克里格勒-纳贾尔II型综合征、多内分泌病变/高胰岛素血症、糖尿病、拉伦侏儒症、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑素瘤、1型糖酵解CDG (glycanosis CDG type 1)、先天性甲状腺功能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经性(neurophyseal) DI、肾性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅氏病、神经退行性疾病、阿耳茨海默氏病、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克氏病、一些多聚谷氨酰胺神经障碍、亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性(spinocerebullar)共济失调、脊髓延髓肌肉萎缩症、齿状核红核苍白球路易斯体萎缩(dentatorubal pallidoluysian)、强直性肌营养不良、海绵状脑病、遗传性克雅氏病(由于朊蛋白加工缺陷)、法布里病、斯脱斯勒-史茵克综合征(Straussler-Scheinker syndrome)、COPD、干眼病、斯耶格伦氏病、骨质疏松症、骨质减少、戈汉综合征、氯离子通道病、先天性肌强直症(汤姆孙和贝克尔形式)、III型巴特氏综合征、Dent病、惊跳症(hyperekplexia)、癫痫、惊跳症、溶酶体贮积病、Angelman综合征、原发性纤毛运动障碍(PCD)、纤毛结构和/或功能的遗传性疾病、伴随内脏逆位的PCD (也称为卡塔格内综合征)、不伴随内脏逆位的PCD或纤毛发育不全。在另一个实施方案中，CFTR介导的疾病为囊性纤维化。在另一个实施方案中，受试者具有伴随ΔF508突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。在另一个实施方案中，受试者具有伴随R117H突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。在另一个实施方案中，受试者具有伴随G551D突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。

在另一个实施方案中，所述方法包括给予另外的治疗剂。在另一个实施方案中，治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

另一方面，本发明的特征为包含形式A、无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，或包含无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的固体分散体及其使用说明书的的药剂盒。

制备化合物1形式A和无定形形式的方法

化合物1为起点，并且在一个实施方案中可按照流程1-4，通过使酰氯部分与胺部分偶合来制备。

流程1. 酰氯部分的合成.

流程2. 酰氯部分的备选合成.

流程3. 胺部分的合成.

流程4. 化合物1的形成

　　　　　　　　　　　　　化合物1

形成化合物1形式A的方法

在一个实施方案中，形式A通过将化合物1在合适的溶剂中浆化有效量的时间进行制备。在另一个实施方案中，合适的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、MTBE、乙酸异丙酯、各种比例的水/乙醇溶液、各种比例的水/乙腈溶液、各种比例的水/甲醇溶液或各种比例的水/异丙醇溶液。例如各种比例的水/乙醇溶液包括水/乙醇1:9 (vol/vol)、水/乙醇1:1 (vol/vol)和水/乙醇9:1 (vol/vol)。各种比例的水/乙腈溶液包括水/乙腈1:9 (vol/vol)、水/乙腈1:1 (vol/vol)和水/乙腈9:1 (vol/vol)。各种比例的水/甲醇溶液包括水/甲醇1:9 (vol/vol)、水/甲醇1:1 (vol/vol)和水/甲醇9:1 (vol/vol)。各种比例的水/异丙醇溶液包括水/异丙醇1:9 (vol/vol)、水/异丙醇1:1 (vol/vol)和水/异丙醇9:1 (vol/vol)。

通常，把约40 mg的化合物1用约1.5 ml的合适溶剂(目标浓度为26.7 mg/ml)在室温下浆化有效量的时间。在一些实施方案中，有效量的时间为约24小时-约2周。在一些实施方案中，有效量的时间为约24小时-约1周。在一些实施方案中，有效量的时间为约24小时-约72小时。然后收集固体。

在另一个实施方案中，形式A通过将化合物1溶解于合适的溶剂中，然后蒸发溶剂进行制备。在一个实施方案中，合适的溶剂为其中化合物1具有大于20 mg/ml的溶解度的溶剂。例如，这些溶剂包括乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、丙酮等。

通常，将化合物1溶解于合适的溶剂中，过滤，然后放置缓慢蒸发或快速蒸发。缓慢蒸发的实例为用其中具有一个戳洞的封口膜覆盖包含化合物1溶液的容器比如小瓶。快速蒸发的实例为无覆盖地放置包含化合物1溶液的容器比如小瓶。然后收集固体。

另一方面，本发明的特征为制备形式A的方法，所述方法包括将化合物1溶解于第一溶剂中，并加入化合物1在其中具有不佳溶解度(溶解度<1 mg/ml)的第二溶剂。例如，所述第一溶剂可为化合物1在其中具有大于20 mg/ml溶解度的溶剂，例如乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或丙酮。所述第二溶剂可为例如庚烷或水。

通常，将化合物1溶解于第一溶剂中并过滤，以除去任何晶种。在搅拌的同时缓慢加入第二溶剂。固体沉淀并经过滤收集。

制备无定形化合物1的方法

从化合物1或化合物1形式A开始，通过旋转蒸发或通过喷雾干燥方法可制备化合物1的无定形形式。

将化合物1溶解于合适的溶剂如甲醇中，并旋转蒸发甲醇，剩下泡沫，产生化合物1无定形形式。在一些实施方案中，温水浴用于加快蒸发。

也可使用喷雾干燥方法自化合物1形式A制备化合物1无定形形式。喷雾干燥为一种将液体进料转化为干燥颗粒形式的方法。任选地，二级干燥过程比如流化床干燥或真空干燥可用于把残留的溶剂减少至药用可接受的水平。典型地，喷雾干燥包括使高度分散的液体悬浮液或溶液与足够体积的热空气接触，以蒸发和干燥液滴。要喷雾干燥的制剂可为任何溶液、粗粒悬浮液、浆料、胶态分散体或糊剂，它们可使用所选择的喷雾干燥设备雾化。在标准程序下，制剂被喷雾成温热过滤的空气流，其蒸发溶剂并将干燥的产物传送至收集器(例如旋风分离器)。所消耗的空气然后与溶剂一起排出，或者备选地所消耗的空气被送往冷凝器以捕获和潜在回收溶剂。市售可得到的设备类型可用于实施喷雾干燥。例如，市售的喷雾干燥器由Buchi Ltd. And Niro制造(例如由Niro制造的PSD line喷雾干燥器) (参见US 2004/0105820; US 2003/0144257)。

喷雾干燥通常采用约3%-约30%重量，例如约4%-约20%重量，优选地为至少约10%的固体负荷的材料(即药物和赋形剂)。通常，固体负荷的上限通过所生成溶液的粘度(例如泵送能力)和溶液中组分的溶解度进行控制。一般地，溶液的粘度可确定所生成的粉末产品中的粒子大小。

用于喷雾干燥的技术和方法可见于Perry’s Chemical Engineering Handbook, 第6版, R.H. Perry, D.W. Green & J.O. Maloney编辑), McGraw-Hill book co. (1984); 和Marshall“Atomization and Spray-Drying”50, Chem. Eng. Prog. Monogr. Series 2 (1954)。通常，喷雾干燥采用以下入口温度进行：约60℃-约200℃，例如约95℃-约185℃、约110℃-约182℃、约96℃-约180℃，例如约145℃。喷雾干燥通常伴随以下出口温度进行：约30℃-约90℃，例如约40℃-约80℃、约45℃-约80℃，例如约75℃。雾化流速通常为约4 kg/h-约12 kg/h，例如约4.3 kg/h-约10.5 kg/h，例如约6 kg/h或约10.5 kg/h。进料流速通常为约3 kg/h-约10 kg/h，例如约3.5 kg/h-约9.0 kg/h，例如约8 kg/h 或约7.1 kg/h。雾化比通常为约0.3-1.7，例如约0.5-1.5，例如约0.8或约1.5。

去除溶剂可需要随后的干燥步骤，比如盘式干燥、流化床干燥(例如约室温-约100℃)、真空干燥、微波干燥、滚筒干燥或双锥形真空干燥(例如约室温-约200℃)。

在一个实施方案中，固体分散体被流化床干燥。

在一种方法中，溶剂包括挥发性溶剂，例如具有少于约100℃的沸点的溶剂。在一些实施方案中，溶剂包括溶剂的混合物，例如挥发性溶剂的混合物或者挥发性与非挥发性溶剂的混合物。当使用溶剂的混合物时，这种混合物可包含一种或多种非挥发性溶剂，例如，其中非挥发性溶剂以少于约15%，例如少于约12%、少于约10%、少于约8%、少于约5%、少于约3%或少于约2%存在于混合物中。

优选的溶剂为其中化合物1具有至少约10 mg/ml (例如至少约15 mg/ml、20 mg/ml、25 mg/ml、30 mg/ml、35 mg/ml、40 mg/ml、45 mg/ml、50 mg/ml或者更大)的溶解度的那些溶剂。更优选的溶剂包括其中化合物1具有至少约20 mg/ml的溶解度的那些溶剂。

可被试验的示例性溶剂包括丙酮、环己烷、二氯甲烷、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮(DMI)、二甲亚砜(DMSO)、二噁烷、乙酸乙酯、乙醚、冰醋酸(HAc)、甲乙酮(MEK)、N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)、甲基叔丁基醚(MTBE)、四氢呋喃(THF)、戊烷、乙腈、甲醇、乙醇、异丙醇、乙酸异丙酯和甲苯。示例性的共溶剂包括丙酮/DMSO、丙酮/DMF、丙酮/水、MEK/水、THF/水、二噁烷/水。在双溶剂系统中，溶剂可以约0.1%-约99.9%存在。在一些优选的实施方案中，水为与丙酮的共溶剂，其中水以约0.1%-约15%，例如约9%-约11%，例如约10%存在。在一些优选的实施方案中，水为与MEK的共溶剂，其中水以约0.1%-约15%，例如约9%-约11%，例如约10%存在。在一些实施方案中，溶剂溶液包含3种溶剂。例如，丙酮和水可与第三种溶剂比如DMA、DMF、DMI、DMSO或HAc混合。在其中无定形的化合物1为固体无定形分散体的组分的情况下，优选的溶剂溶解化合物1和聚合物两者。合适的溶剂包括以上描述的那些溶剂，例如MEK、丙酮、水、甲醇，及其混合物。

可改变粒度和干燥温度范围以制备最佳的固体分散体。如由熟练的实践者应意识到的那样，粒度小将导致改善溶剂的去除。然而申请人已经发现，较小的粒子可导致粒子蓬松，其在一些情况下对于下游处理比如压片不能提供最佳的固体分散体。在较高温度下，可发生化合物1的结晶或化学降解。在较低温度下，不能去除足够量的溶剂。本文的方法提供最佳粒度和最佳干燥温度。

通常，粒度使得D10 (μm)小于约5，例如小于约4.5、小于约4.0或小于约3.5，D50 (μm)通常小于约17，例如小于约16、小于约15、小于约14、小于约13，和D90 (μm)通常小于约175，例如小于约170、小于约170、小于约150、小于约125、小于约100、小于约90、小于约80、小于约70、小于约60或小于约50。通常喷雾干燥的粒子的体积密度为约0.08 g/cc-约0.20 g/cc，例如约0.10-约0.15 g/cc，例如约0.11 g/cc或约0.14 g/cc。喷雾干燥的粒子的振实密度，通常对于轻敲10次，在约0.08 g/cc-约0.20 g/cc，例如约0.10-约0.15 g/cc的范围内，例如为约0.11 g/cc或约0.14 g/cc；对于轻敲500次，在0.10 g/cc-约0.25 g/cc，例如约0.11-约0.21 g/cc的范围内，例如为约0.15 g/cc、约0.19 g/cc或约0.21 g/cc；对于轻敲1250次，在0.15 g/cc-约0.27 g/cc，例如约0.18-约0.24 g/cc的范围内，例如为约0.18 g/cc、约0.19 g/cc、约0.20 g/cc或约0.24 g/cc；和对于轻敲2500次，在0.15 g/cc-约0.27 g/cc，，例如约0.18-约0.24 g/cc的范围内，例如为约0.18 g/cc、约0.21 g/cc、约0.23 g/cc或约0.24 g/cc。

聚合物

包含无定形化合物1和聚合物(或固态载体)的固体分散体也包括在本文中。例如，化合物1作为固体无定形分散体的组分，作为无定形化合物存在。这种固体无定形分散体通常包含化合物1和聚合物。示例性的聚合物包括纤维素类聚合物比如HPMC或HPMCAS和含有吡咯烷酮的聚合物比如PVP/VA。在一些实施方案中，这种固体无定形分散体包含一种或多种另外的赋形剂比如表面活性剂。

在一个实施方案中，聚合物能够溶解于水性介质中。聚合物的溶解度可为不依赖于pH的或pH依赖性的。后者包括一种或多种肠溶聚合物。术语“肠溶聚合物”指的是相对于胃的更多酸性环境，优先溶于肠的较少酸性环境的聚合物，例如不溶于酸性的水性介质但是当pH高于5-6时可溶的聚合物。合适的聚合物应为化学和生物学上惰性的。为了改善固体分散体的物理稳定性，聚合物的玻璃化转变温度(T_g)应尽可能地高。例如，优选的聚合物具有至少等于或大于药物(即化合物1)的玻璃化转变温度的玻璃化转变温度。其它优选的聚合物具有在药物(即化合物1)的约10-约15℃内的玻璃化转变温度。聚合物的合适的玻璃化转变温度的实例包括至少约90℃、至少约95℃、至少约100℃、至少约105℃、至少约110℃、至少约115℃、至少约120℃、至少约125℃、至少约130℃、至少约135℃、至少约140℃、至少约145℃、至少约150℃、至少约155℃、至少约160℃、至少约165℃、至少约170℃、或至少约175℃ (如在干燥条件下测量的那样)。不希望受到理论的束缚，认为优先的机制是具有较高T_g的聚合物通常在室温下具有较低分子可动性，这可能是稳定无定形固体分散体的物理稳定性的关键因素。

另外，聚合物的吸湿性应低至例如少于约10%。为了在该应用中比较的目的，聚合物或组合物的吸湿性在约60%相对湿度下表征。在一些优选的实施方案中，聚合物具有少于约10%的水吸收，例如少于约9%、少于约8%、少于约7%、少于约6%、少于约5%、少于约4%、少于约3%或少于约2%的水吸收。吸湿性也可影响固体分散体的物理稳定性。通常，聚合物中吸附的水分可大大地减小聚合物以及生成的固体分散体的T_g，这将进一步减小以上描述的固体分散体的物理稳定性。

在一个实施方案中，聚合物为一种或多种水溶性的聚合物或部分水溶性的聚合物。水溶性或部分水溶性的聚合物非限制地包括纤维素衍生物(例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC))或乙基纤维素；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；聚乙二醇(PEG)；聚乙烯醇(PVA)；丙烯酸酯，比如聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit® E)；环糊精(例如β-环糊精)及其共聚物和衍生物，包括例如PVP-VA (聚乙烯吡咯烷酮-醋酸乙烯酯)。

在一些实施方案中，聚合物为羟丙基甲基纤维素(HPMC)，比如HPMC E50、HPMCE15或HPMC60SH50)。

如本文讨论的那样，聚合物可为pH依赖性的肠溶聚合物。这样的pH依赖性肠溶聚合物非限制地包括纤维素衍生物(例如邻苯二甲酸乙酸纤维素(CAP))、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯(HPMCP)、醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)、羧甲基纤维素(CMC)或其盐(例如钠盐比如(CMC-Na))；乙酸纤维素偏苯三酸酯(CAT)、羟丙基纤维素乙酸邻苯二甲酸酯(HPCAP)、羟丙基甲基纤维素醋酸邻苯二甲酸酯(HPMCAP)和甲基纤维素醋酸邻苯二甲酸酯(MCAP)或聚甲基丙烯酸酯(例如Eudragit® E)。在一些实施方案中，聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。在一些实施方案中，聚合物为醋酸羟丙甲纤维素琥珀酸酯HG级(HPMCAS-HG)。

在又一个实施方案中，聚合物为聚乙烯吡咯烷酮共聚物，例如乙烯吡咯烷酮/醋酸乙烯酯共聚物(PVP/VA)。

在其中化合物1与聚合物，例如与HPMC、HPMCAS或PVP/VA聚合物形成固体分散体的实施方案中，聚合物相对于固体分散体的总重量的量在约0.1%-99%重量的范围内。除非另外指定，如所描述的药物、聚合物及其它赋形剂在分散体中的百分数以重量百分数给出。聚合物的量一般地为至少约20%，并且优选地为至少约30%，例如至少约35%、至少约40%、至少约45%或约50% (例如49.5%)。所述量一般地为约99%或者更少，并且优选地为约80%或者更少，例如约75%或者更少、约70%或者更少、约65%或者更少、约60%或者更少，或者约55%或者更少。在一个实施方案中，聚合物以分散体的总重量的最多约50% (并且甚至更具体地讲，在约40%-50%之间，比如约49%、约49.5%或约50%)的量存在。HPMC和HPMCAS可以多种级别得自ShinEtsu，例如HPMCAS可以多种级别得到，包括AS-LF、AS-MF、AS-HF、AS-LG、AS-MG、AS-HG。这些级别中的每一种随着乙酸酯和琥珀酸酯的取代百分数而变化。

在一些实施方案中，化合物1和聚合物以大致相等的量存在，例如聚合物和药物中的每一种组成分散体的重量百分数的约一半。例如，聚合物以约49.5%存在和药物以约50%存在。

在一些实施方案中，所合并的化合物1和聚合物在喷雾干燥之前代表非固体分散体的1%-20% w/w总固体含量。在一些实施方案中，所合并的化合物1和聚合物在喷雾干燥之前代表非固体分散体的5%-15% w/w总固体含量。在一些实施方案中，所合并的化合物1和聚合物在喷雾干燥之前代表非固体分散体的约11% w/w总固体含量。

在一些实施方案中，所述分散体还包含其它次要成分，比如表面活性剂(例如SLS)。在一些实施方案中，表面活性剂以少于分散体的约10%存在，例如少于约9%，少于约8%，少于约7%，少于约6%，少于约5%，少于约4%，少于约3%，少于约2%，约1%或约0.5%存在。

在包含聚合物的实施方案中，聚合物应以有效稳定固体分散体的量存在。稳定包括抑制或防止化合物1的结晶。这样的稳定将抑制化合物1从无定形转化为结晶形式。例如，聚合物应防止至少一部分(例如约5%、约10%、约15%、约20%、约25%、约30%、约35%、约40%、约45%、约50%、约55%、约60%、约65%、约70%、约75%或者更大)的化合物1从无定形转化为结晶形式。稳定化作用可例如通过测量固体分散体的玻璃化转变温度、测量无定形材料的松弛速率或者通过测量化合物1的溶解度或生物利用度来测量。

用于与化合物1组合，例如形成固体分散体比如无定形固体分散体的合适的聚合物应具有一种或多种以下性质：

聚合物的玻璃化转变温度应具有比化合物1的玻璃化转变温度低不少于约10-15℃的温度。优选地，聚合物的玻璃化转变温度大于化合物1的玻璃化转变温度，并且通常比药品期望的储存温度高至少50℃。例如，至少约100℃、至少约105℃、至少约105℃、至少约110℃、至少约120℃、至少约130℃、至少约140℃、至少约150℃、至少约160℃、至少约160℃或者更大。

聚合物应为相对非吸湿性的。例如，当在标准条件下储存时，聚合物应吸附少于约10%的水，例如少于约9%、少于约8%、少于约7%，少于约6%，或少于约5%，少于约4%，或少于约3%的水。优选地，当在标准条件下储存时，聚合物应基本上不含吸附水。

聚合物在适合于喷雾干燥法的溶剂中，相对于化合物1应具有相似或更好的溶解度。在优选的实施方案中，聚合物应溶解于一种或多种与化合物1相同的溶剂或溶剂系统中。优选的是聚合物溶于含有至少一种非羟基溶剂的溶剂比如二氯甲烷、丙酮或其组合中。

当与化合物1合并时，相对于化合物1在不存在聚合物时的溶解度，或相对于化合物1在与参考聚合物合并时的溶解度，例如在固体分散体或在液体分散体中的聚合物应增大化合物1在水性和生理相对介质中的溶解度。例如，通过减少从固体无定形分散体或从液体悬浮液转化为结晶化合物1的无定形化合物1的量，聚合物应增大无定形化合物1的溶解度。

聚合物应减小无定形物质的松弛速率。

聚合物应增大化合物1的物理和/或化学稳定性。

聚合物应改善化合物1的可制造性。

聚合物应改善化合物1的处理、给药或储存性能中的一种或多种。

聚合物不应与其它药用组分例如赋形剂不利地相互作用。

候选聚合物(或其它组分)的适用性可使用本文描述的形成无定形组合物的喷雾干燥法(或其它方法)进行测试。候选组合物可依据稳定性、耐晶体形成性或其它性能进行比较，并且与参考制剂例如净的无定形化合物1或结晶化合物1的制剂进行比较。例如，候选组合物可被测试以确定其禁止出现溶剂介导的结晶的时间，还是在受控条件下，在给定的时间转化率达至少50%、75%、100%或110%以及参考制剂，或者候选组合物可被测试以确定相对于结晶化合物1其是否改善生物利用度或溶解度。

表面活性剂

固体分散体或其它组合物可包含表面活性剂。表面活性剂或表面活性剂混合物通常应减小固体分散体与水性介质之间的界面张力。合适的表面活性剂或表面活性剂混合物也可增强化合物1自固体分散体的水溶解度和生物利用度。连同本发明一起使用的表面活性剂非限制地包括脱水山梨醇脂肪酸酯(例如Spans®)、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯(例如Tweens®)、十二烷基硫酸钠(SLS)、十二烷基苯磺酸钠(SDBS)、磺基丁二酸钠二辛酯(Docusate)、去氧胆酸钠盐(DOSS)、脱水山梨醇单硬脂酸酯、脱水山梨醇三硬脂酸酯、十六烷基三甲基溴化铵(HTAB)、N-十二烷基肌氨酸钠、油酸钠、肉豆蔻酸钠、硬脂酸钠、棕榈酸钠、月桂酸聚乙二醇甘油酯(Gelucire 44/14)、乙二胺四乙酸(EDTA)、维生素E d-α生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)、卵磷脂、MW 677-692、谷氨酸单钠单水合物、辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(Labrasol)、PEG 8辛酸/癸酸甘油酯类、二乙二醇单乙基醚(Transcutol)、二乙二醇单乙醚、Solutol HS-15、聚乙二醇硬脂酸酯15 (Solutol HS-15)、聚乙二醇/羟基硬脂酸酯、牛磺胆酸、丙二醇嵌段聚醚 F68、嵌段式聚醚(Pluronic F108)和嵌段式聚醚(Pluronic F127) (或任何其它聚氧乙烯-聚氧丙乙烯共聚物(Pluronics®)或饱和的聚乙醇酸化甘油酯(Gelucirs®))。可连同本发明一起使用的这类表面活性剂的具体实例非限制地包括Span 65、Span 25、Tween 20、Capryol 90、Pluronic F108、十二烷基硫酸钠(SLS)、维生素E TPGS、嵌段式聚醚类和共聚物。SLS通常为优选的。

表面活性剂(例如SLS)相对于固体分散体的总重量的量可在0.1-15%之间。优选地，该量为约0.5%-约10%，更优选地为约0.5%-约5%，例如约0.5-4%、约0.5-3%、约0.5-2%、约0.5-1%或约0.5%。

在某些实施方案中，表面活性剂相对于固体分散体的总重量的量为至少约0.1%，优选地为约0.5%。在这些实施方案中，表面活性剂将以不多于约15%，和优选地不多于约12%、约11%、约10%、约9%、约8%、约7%、约6%、约5%、约4%、约3%、约2%或约1%的量存在。其中表面活性剂以约0.5%重量的量存在的实施方案为优选的。

候选表面活性剂(或其它组分)可以与对测试聚合物描述的类似方式测试用于本发明的适用性。

用途、剂型和给药

药学上可接受的组合物

在本发明的另一方面，提供了药学上可接受的组合物，其中这些组合物包含本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1，并且任选地包含药学上可接受的载体、佐剂或溶媒。在某些实施方案中，这些组合物任选地进一步包含一种或多种另外的治疗剂。

如以上描述的那样，本发明的药学上可接受的组合物另外包含药学上可接受的载体、佐剂或溶媒，当本文使用时，当适合于要求的具体剂型时，其包括任何和全部溶剂、稀释剂或其它液体溶媒、分散或悬浮助剂、表面活性剂、等渗剂、增稠或乳化剂、防腐剂、固体粘合剂、润滑剂等。Remington's Pharmaceutical Sciences, 第6版, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980)公开了用于配制药学上可接受的组合物的各种载体和用于其制备的已知技术。除了在任何常规载体介质的范围内与本发明的化合物不相容，比如通过产生任何不需要的生物效应或以与药学上可接受的组合物的任何其它组分有害的方式相互作用，预期其用途在本发明的范围内。可用作药学上可接受的载体的材料的一些实例非限制地包括离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白比如人血清白蛋白、缓冲物质比如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸或山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质比如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、羊毛脂；糖类比如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉比如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物比如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和纤维素乙酸酯；黄蓍胶粉、麦芽、明胶、滑石粉；赋形剂比如可可脂和栓剂蜡；油类比如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类比如丙二醇或聚乙二醇；酯类比如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂比如氢氧化镁和氢氧化铝；海藻酸、无热原水、等渗盐水、林格氏溶液、乙醇和磷酸盐缓冲液，以及其它非毒性相容性润滑剂比如十二烷基硫酸钠和硬脂酸镁，和着色剂、脱模剂、包衣剂、甜味剂、矫味剂和香料、防腐剂和抗氧剂也可根据配方设计师的判断存在于组合物中。

化合物和药学上可接受的组合物的用途

在仍然另一个方面，本发明提供治疗与CFTR有关的病症、疾病或障碍的方法。在某些实施方案中，本发明提供治疗与CFTR活性缺乏有关的病症、疾病或障碍的方法，所述方法包括给予需要它的受试者，优选地为哺乳动物包含本文描述的固态形式的化合物1形式A或无定形化合物1的组合物。

本文使用的“CFTR介导的疾病”为选自以下的疾病：囊性纤维化、哮喘、吸烟引起的COPD、慢性支气管炎、鼻窦炎、便秘、胰腺炎、胰腺功能不全、先天性双侧输精管缺如(CBAVD)引起的男性不育、轻度肺疾病、特发性胰腺炎、变应性支气管肺曲霉病(ABPA)、肝病、遗传性肺气肿、遗传性血色病、凝血纤溶缺陷、蛋白C缺乏症、1型遗传性血管性水肿、脂质处理缺陷、家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病、I-细胞疾病/假性赫尔勒病、粘多醣症、Sandhof病/黑蒙性痴呆、克里格勒-纳贾尔II型综合征(Crigler-Najjar type II)、多内分泌病变/高胰岛素血症、糖尿病、拉伦侏儒症、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑素瘤、1型糖酵解CDG、先天性甲状腺功能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经性DI、肾性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅氏病、神经退行性疾病、阿耳茨海默氏病、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克氏病、一些多聚谷氨酰胺神经障碍、亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓延髓肌肉萎缩症、齿状核红核苍白球路易斯体萎缩、强直性肌营养不良、海绵状脑病、遗传性克雅氏病(由于朊蛋白加工缺陷)、法布里病、斯脱斯勒-史茵克综合征、COPD、干眼病、斯耶格伦氏病、骨质疏松症、骨质减少、戈汉综合征、氯离子通道病、先天性肌强直症(汤姆孙和贝克尔形式)、III型巴特氏综合征、Dent病、惊跳症、癫痫、惊跳症、溶酶体贮积病、Angelman综合征、原发性纤毛运动障碍(PCD)、纤毛结构和/或功能的遗传性疾病、不伴随内脏逆位的PCD (也称为卡塔格内综合征)、伴随内脏逆位的PCD或纤毛发育不全。

在某些实施方案中，本发明提供在人治疗CFTR介导的疾病的方法，所述方法包括给予所述人有效量的包含本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1的组合物的步骤。

根据备选的优选实施方案，本发明提供在人治疗囊性纤维化的方法，所述方法包括给予所述人包含本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1的组合物的步骤。

根据本发明，化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物的“有效量”为有效治疗或减轻以上列举的任何疾病的严重性的量。

化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物可使用有效治疗或减轻以上列举的一种或多种疾病的严重性的任何量和任何给药途径给药。

在某些实施方案中，本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物用于治疗或减轻患者的囊性纤维化的严重性，所述患者在呼吸道和非呼吸道上皮细胞的顶端膜呈现残留的CFTR活性。使用本领域已知的方法可易于检测在上皮表面存在残留的CFTR活性，例如标准电生理学、生物化学或组织化学技术。这类方法使用体内或体外电生理技术测量汗液或唾液的Cl^-浓度，或者监测细胞表面密度的体外生化或组织化学技术确定CFTR活性。使用这类方法，在杂合或同型结合多种不同突变的患者，包括在同型结合或杂合最常见的突变ΔF508及其它突变比如G551D突变或R117H突变的患者可易于检测残留的CFTR活性。

在一个实施方案中，本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物用于治疗或减轻患者囊性纤维化的严重性，所述患者的囊性纤维化处于呈现残留CFTR活性的某些基因型例如III类突变(调节或门控受损)、IV类突变(转运改变)或V类突变(合成减少)的范围内(Lee R. Choo-Kang, Pamela L., Zeitlin, Type I, II, III, IV, and V cystic fibrosis Tansmembrane Conductance Regulator Defects and Opportunities of Therapy; Current Opinion in Pulmonary Medicine 6:521-529, 2000)。呈现残留CFTR活性的其它患者基因型包括对这些类型之一同型结合或与包括I类突变、II类突变或缺乏分类的突变的任何其它类型突变杂合的患者。

在一个实施方案中，本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物用于治疗或减轻患者囊性纤维化的严重性，所述患者的囊性纤维化处于某些临床表型的范围内，例如通常与上皮细胞顶端膜的残留CFTR活性的量有关的中度至轻度临床表型。这种表型包括呈现胰腺功能不全的患者或诊断出患有特发性胰腺炎和先天性双侧输精管缺如或轻度肺疾病的患者。

所需要的确切数量在受试者之间变化，取决于受试者的物种、年龄和一般条件、感染的严重性、具体药物、其给药方式等。本发明化合物优选地以便于给药和剂量一致的单位剂型配制。本文使用的词句“单位剂型”指的是适合于要治疗的患者的药物的物理离散单位。然而应该理解，本发明化合物和组合物总每天用法由主治医生在合理的医学判断范围内确定。对于任何具体患者或生物体的具体有效剂量水平将依多种因素而定，这些因素包括被治疗的障碍和障碍的严重性、所采用的具体化合物的活性、所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；给药次数、给药途径和所采用的具体化合物的排泄速率、治疗持续时间、与所采用的具体化合物组合或同时使用的药物以及医学领域熟知的类似因素。本文使用的术语“患者”或“受试者”意指动物，优选地为哺乳动物，和最优选地为人。

本发明药学上可接受的组合物可依被治疗的感染的严重性而定，经口服、直肠、非肠道、脑池内、阴道内、腹膜内、局部(如通过粉剂、软膏剂或滴剂)、颊、作为口或鼻喷雾剂等给予人和其它动物。在某些实施方案中，本发明化合物可以约0.01 mg/kg-约50 mg/kg，并且优选地以约1 mg/kg-约25 mg/kg受试者体重每天，一天一次或多次的剂量水平口服或非肠道给药，以得到要求的治疗作用。

在某些实施方案中，单位剂型中的化合物1形式A或无定形化合物1的剂量为100 mg-1000 mg。在另一个实施方案中，化合物1形式A或无定形化合物1的剂量为200 mg-900 mg。在另一个实施方案中，化合物1形式A或无定形化合物1的剂量为300 mg-800 mg。在另一个实施方案中，化合物1形式A或无定形化合物1的剂量为400 mg-700 mg。在另一个实施方案中，化合物1形式A或无定形化合物1的剂量为500 mg-600 mg。

可注射的制剂例如注射用无菌水或油混悬剂可按照已知技术，使用合适的分散剂或润湿剂和助悬剂配制。注射用无菌制剂也可为在非毒性非肠道可接受的稀释剂或溶剂中的注射用无菌溶液剂、混悬剂或乳剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液剂。可采用的可接受的溶媒和溶剂为水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的固定油被常规用作溶剂或悬浮介质。为了该目的，可采用任何温和的固定油，包括合成的甘油单-或二酯。另外，脂肪酸如油酸用于制备注射剂。

注射用剂型可被灭菌，例如通过经截留细菌的过滤器过滤，或者通过在使用前加入以无菌固体组合物的形式存在的可溶解或分散于无菌水或其它注射用无菌介质中的灭菌剂。

用于直肠或阴道给药的组合物优选地为栓剂，这种栓剂可通过混合本发明的化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体例如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡来制备，栓剂蜡在环境温度下为固体，但是在体温下为液体，因此在直肠或阴道腔内融化并释放活性化合物。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这样的固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的赋形剂或载体例如枸橼酸钠或磷酸二钙和/或以下组分混合：a) 填充剂或增量剂例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸，b) 粘合剂例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯树胶，c) 湿润剂例如甘油，d) 崩解剂例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠，e) 溶液阻滞剂例如石蜡，f) 吸收加速剂例如季铵化合物，g) 润湿剂例如鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯，h) 吸收剂例如高岭土和膨润土，和i) 润滑剂例如滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可包含缓冲剂。

相似类型的固体组成也可用作使用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。固体剂型的片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可用包衣料和壳例如肠溶包衣以及药用配制领域熟知的其它包衣料制备。它们可任选地含有遮光剂，并且也可具有仅，或者优先地在肠道的某些部分，任选地以延迟的方式释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包括聚合物和蜡。相似类型的固体组成也可用作使用赋形剂例如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的软和硬填充明胶胶囊中的填充剂。

活性化合物也可以含有一种或多种上述赋形剂的微囊化形式存在。固体剂型的片剂、糖衣丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可用包衣料和壳例如肠溶包衣、控释包衣及以及药物配制领域熟知的其它包衣料制备。在这样的固体剂型中，活性化合物可与至少一种惰性稀释剂例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。这样的剂型也可如常规实施的那样，包含除惰性稀释剂以外的另外物质，例如压片润滑剂和其它压片助剂例如硬脂酸镁和微晶纤维素。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况下，所述剂型也可包含缓冲剂。它们可任选地含有遮光剂，并且也可具有仅，或者优先地在肠道的某些部分，任选地以延迟的方式释放活性成分的组成。可使用的包埋组合物的实例包含聚合物和蜡。

也应该意识到，本文描述的化合物1形式A或无定形化合物1或其药学上可接受的组合物可用于联合疗法，就是说，化合物1形式A或无定形化合物1可在一种或多种其它需要的治疗及或医疗手术的同时、之前或之后给药。用于组合方案的疗法(治疗剂或手术)的特定组合应考虑所需要的治疗剂和/或手术的相容性以及要达到的需要的治疗效果。也应该意识到，所采用的疗法可对相同的障碍达到需要的效果(例如本发明化合物可与用于治疗相同障碍的另一种药物同时给药)，或者它们可达到不同的效果(例如控制任何副作用)。本文使用的通常给予以治疗或预防特定疾病或病症的另外的治疗剂被认为“适合于被治疗的疾病或病症”。

在一个实施方案中，所述另外的药物选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、除本发明化合物以外的CFTR调节剂，或营养剂。

在一个实施方案中，所述另外的药物为3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸。在另一个实施方案中，所述另外的药物为N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。在另一个实施方案中，所述另外的药物选自表1：

表1

在另一个实施方案中，所述另外的药物为以上药物的任何组合。例如，组合物可包含化合物1、3-(6-(1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)环丙烷甲酰胺基)-3-甲基吡啶-2-基)苯甲酸和N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。在另一个实例中，组合物可包含化合物1、N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺和来自表1的任何一种化合物，即表1中的化合物1-14，或其任何组合。

在一个实施方案中，所述另外的治疗剂为抗生素。用于本文的示例性抗生素包括妥布霉素，包括妥布霉素吸入性粉末(TIP)；阿奇霉素；噻肟单酰胺菌素(aztreonam)，包括噻肟单酰胺菌素的雾化形式；阿米卡星，包括其脂质体剂型；环丙沙星，包括其适合于经吸入给药的剂型；左氧氟沙星，包括其气雾剂；和两种抗生素例如磷霉素与妥布霉素的组合。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为粘液溶解药(mucolyte)。用于本文的示例性粘液溶解药(mucolytes)包括Pulmozyme®。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为支气管扩张剂。示例性的支气管扩张剂包括沙丁胺醇、硫酸奥西那林(metaprotenerol sulfate)、醋酸吡布特罗、沙美特罗或tetrabuline sulfate。

在另一个实施方案中，所述另外的药物有效恢复肺部气道表面液体。这类药物改善盐进出细胞的运动，使得肺部气道中的粘液被更多水合，并因此更易于清除。示例性的这类药物包括高渗盐水、地纽福索钠([[(3S, 5R)-5-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1-基)-3-羟基氧杂戊环-2-基(hydroxyoxolan-2-yl)]甲氧基-羟基磷酰基] [[[(2R,3S,4R,5R)-5-(2,4-二氧代嘧啶-1-基)-3,4-二羟基氧杂戊环-2-基]甲氧基-羟基磷酰基]氧基-羟基磷酰基]磷酸氢盐)或甘露醇(bronchitol) (甘露醇的吸入剂型)。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为抗炎剂，即可减少肺部炎症的药物。用于本文的示例性的这类药物包括布洛芬、二十二碳六烯酸(DHA)、西地那非、吸入性谷胱甘肽、吡格列酮、羟氯喹或斯伐他汀。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为除化合物1形式I以外的CFTR调节剂，即具有调节CFTR活性作用的药物。示例性的这类药物包括ataluren (“PTC124®”；3-[5-(2-氟苯基)-1,2,4-噁二唑-3-基]苯甲酸)、西那普肽、兰考韦泰、地来司他(一种重组人中性粒细胞弹性蛋白酶抑制剂)、cobiprostone (7-{(2R, 4aR, 5R, 7aR)-2-[(3S)-1,1-二氟-3-甲基苯基]-2-羟基-6-氧代八氢环戊二烯并[b]吡喃-5-基}庚酸)和N-(5-羟基-2,4-二叔丁基-苯基)-4-氧代-1H-喹啉-3-甲酰胺。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为营养剂。示例性的营养剂包括胰脂肪酶(胰酶替代品)，包括Pancrease®、Pancreacarb®、Ultrase®或Creon®、Liprotomase® (以前的Trizytek®)、Aquadeks®或谷胱甘肽吸入。在一个实施方案中，所述另外的营养剂为胰脂肪酶。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为选自以下的化合物：庆大霉素、姜黄素、环磷酰胺、4-苯基丁酸酯、美格鲁特、非洛地平、尼莫地平、Philoxin B、染料木素(geniestein)、芹黄素；cAMP/cGMP调节剂例如咯利普兰、西地那非、米力农、他达拉非、氨力农、异丙肾上腺素、沙丁胺醇和沙美特罗；脱氧精胍菌素、HSP 90抑制剂、HSP 70抑制剂、蛋白酶体抑制剂例如环氧霉素、乳胞素等。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为在WO 2004028480、WO 2004110352、WO 2005094374、WO 2005120497或WO 2006101740中公开的化合物。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为呈现CFTR调节活性的苯并(c)喹嗪

衍生物或呈现CFTR调节活性的苯并吡喃衍生物。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为在US7202262、US6992096、US20060148864、US20060148863、US20060035943、US20050164973、WO2006110483、WO2006044456、WO2006044682、WO2006044505、WO2006044503、WO2006044502或WO2004091502中公开的化合物。

在另一个实施方案中，所述另外的药物为在WO2004080972、WO2004111014、WO2005035514、WO2005049018、WO2006099256、WO2006127588或WO2007044560中公开的化合物。

这些组合用于治疗本文描述的疾病，包括囊性纤维化。这些组合也用于本文描述的试剂盒。

存在于本发明组合物中的另外治疗剂的量应不多于通常以包含所述治疗剂作为唯一活性药物的组合物给予的量。优选地，目前公开的组合物中的另外治疗剂的量将在通常存在于包含所述药物作为唯一治疗活性药物的组合物中的量的约50%-100%范围内。

本文描述的化合物1形式A和无定形形式或其药学上可接受的组合物也可加入到用于涂覆可植入的医疗装置例如假体、人工瓣膜、人造血管、支架和导管的组合物中。因此，另一方面，本发明包括用于涂覆可植入的装置并且在本文的类别和子类中的组合物，这种组合物包含本文描述的化合物1形式A和/或无定形形式或其药学上可接受的组合物和适合于涂覆所述可植入的装置的载体。在又一方面，本发明包括用包含本文描述的化合物1形式A和/或无定形形式或其药学上可接受的组合物和适合于涂覆所述可植入的装置的载体的组合物涂覆的可植入装置。合适的涂覆层和涂覆的可植入装置的通法制备描述于美国专利6099562、5886026和5304121中。这种涂覆层通常为可生物相容的聚合材料例如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚已酸内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯-醋酸乙烯酯，及其混合物。涂覆层可任选地用氟硅橡胶、多糖、聚乙二醇、磷脂或其组合的合适顶面涂覆层进一步覆盖，以赋予组合物控释特性。

为了可以更加充分地理解本文描述的发明，阐述以下实施例。应该理解，这些实施例仅用于说明的目的，并且不以任何方式理解为限制本发明。

实施例

方法和材料

调制式差示扫描量热法(MDSC)和差示扫描量热法(DSC)

调制式差示扫描量热法(MDSC)用于测试化合物的无定形形式和喷雾干燥的分散体的玻璃化转变温度。差示扫描量热法(DSC)用于测定结晶材料的熔点和在不同的多晶形物之间进行辨别。数据使用TA DSC Q2000示差扫描热量计(TA Instruments, New Castle, DE)收集。这种仪器用铟校正。将约1-5 mg样品称重至用有一个洞的盖子卷曲的铝密封的锅中。对于MDSC以2℃/分钟的加热速率，伴随每60秒调整+/-1℃，从-20℃-220℃扫描样品。对于DSC以10℃/分钟的加热速率，从25℃-220℃扫描样品。数据通过Thermal Advantage Q Series^TM软件(版本: 2.7.0.380)收集和通过Universal Analysis软件(版本: 4.4A, build: 4.4.0.5) (TA Instruments, New Castle, DE)分析。

XRPD (X-射线粉末衍射)

X-射线粉末衍射用于表征迄今产生的各批样品的物理形式和表征所鉴定的不同多晶形。化合物的XRPD数据在PANalytical X’pert Pro Powder X-ray Diffractometer (Almelo, the Netherlands)上收集。XRPD图在室温下用铜辐射(1.54060 A)记录。X-射线使用Cu密封管，在45 kV, 40 mA下，用Nickel Kβ (镍Kβ)抑制滤波器产生。入射光束由可变发散狭缝组成，以确保在样品上和在衍射光侧为恒定的发光波长；使用具有以扫描模式测量的2.12° 2θ的工作长度的快速线性固态探测器。把粉末样品在零背景硅固定装置的缩进区压紧并进行扫描以获得更好的统计数据。在4-40 ° 2θ测量对称扫描，步长为0.017 °和扫描阶跃时间为15.5秒。数据收集软件为X’pert Data Collector (版本2.2e)。数据分析软件为或者X’pert Data Viewer (版本1.2d)或者X’pert Highscore (版本: 2.2c)。

热重分析(TGA)

TGA用于研究所表征的各批样品中的残留溶剂的存在，并且确定样品发生分解的温度。TGA数据在TA Q500 Thermogravimetric Analyzer (热解重量分析仪) (TA Instruments, New Castle, DE)上收集。以10℃/分钟的加热速率，从25℃-300℃扫描重约2-5 mg的样品。数据通过Thermal Advantage Q Series^TM软件(版本2.5.0.255)收集和通过通用分析(Universal Analysis)软件(版本4.4A, build 4.4.0.5) (TA Instruments, New Castle, DE)分析。

化合物1形式A单晶结构测定

衍射数据在配备有密封管Cu Kα源和Apex II CCD检测器的Bruker Apex II衍射仪上获得。结构使用SHELX程序 (Sheldrick,G.M.,Acta Cryst., (2008) A64, 112-122)解析和精修。基于强度统计和系统消光解析和精修C2空间群的结构。使用类似的衍射测定绝对构型。Flack参数精确至0.00 (18)表明所述模型代表正确的对映体[(R)]。

固态NMR

固态NMR在配备有Bruker-Biospin 4 mm HFX探针的Bruker-Biospin 400 MHz宽孔光谱仪上进行。样品被压紧至4 mm ZrO₂转子中并在Magic Angle Spinning (MAS)条件下旋转，旋转速度为12.5 kHz。质子弛豫时间首先使用H MAS T₁饱和恢复松弛实验测量，以建立¹³C 交叉极化(CP) MAS试验的适当的再循环延迟。碳CPMAS实验的CP接触时间设为2 ms。采用具有线性斜坡的CP质子脉冲(从50%至100%)。Hartmann-Hahn匹配基于外参比样品(甘氨酸)进行优化。氟MAS谱伴随质子去耦进行记录。为获得¹³C和¹⁹F两者，使用TPPM15去耦序列，场强为约100 kHz。

Vitride® (双(2-甲氧基乙氧基)氢化铝钠[或NaAlH₂(OCH₂CH₂OCH₃)₂], 65 wgt%溶液在甲苯中)购自Aldrich Chemicals。

2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-羧酸购自Saltigo (the Lanxess Corporation的隶属机构)。

在化合物的名称未正确描述化合物的结构的本申请的任何地方，结果替代名称并以结构为主。

化合物1的合成

酸部分

(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇的合成.

将市售可得到的2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-羧酸(1.0当量)在甲苯(10体积)中浆化。经加料漏斗以一定速度加入红铝® (Vitride®) (2当量)，以保持温度为15-25℃。在加入结束时，使温度升至40℃反应2小时，然后经加料漏斗小心加入10% (w/w) NaOH水溶液(4.0当量)，期间保持温度在40-50℃。在搅拌另外30分钟后，在40℃下分离各层。把有机相冷却至20℃，然后用水(2 x 1.5体积)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到粗品(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇，其直接用于下一步。

5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯的合成.

把(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-甲醇(1.0当量)溶于MTBE (5体积)中。加入催化量的DMAP (1 mol%)并经加料漏斗加入SOCl₂ (1.2当量)。以维持反应器中的温度为15-25℃的速度加入SOCl₂。使温度升至30℃反应1小时，然后冷却至20℃，然后经加料漏斗加入水(4体积)，期间保持温度在低于30℃。在搅拌另外30分钟之后，分离各层。搅拌有机层并加入10% (w/v) NaOH水溶液(4.4体积)。在搅拌15-20分钟之后，分离各层。然后干燥(Na₂SO₄)有机相，过滤并浓缩，得到粗品5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯，其直接用于下一步。

(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈的合成.

将5-氯甲基-2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯(1当量)在DMSO (1.25体积)中的溶液加入到NaCN (1.4当量)在DMSO (3体积)中的浆状物中，期间保持温度在30-40℃之间。搅拌混合物1小时，然后加入水(6体积)，随后加入MTBE (4体积)。在搅拌30分钟之后，分离各层。用MTBE (1.8体积)提取水层。用水(1.8体积)洗涤合并的有机层，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩，得到粗品(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈，其直接用于下一步。¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.44 (br s, 1H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H)。

(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-1-乙基乙酸酯-乙腈的合成.

把反应器用氮气吹洗并加入900 mL甲苯。溶剂经氮气喷射进行脱气不少于16小时。然后向反应器中先后加入Na₃PO₄ (155.7 g, 949.5 mmol)、双(二亚芐基丙酮)钯(0) (7.28 g, 12.66 mmol)。在23℃下，经10分钟，自氮气吹洗的加料漏斗加入叔丁基膦在己烷中的10% w/w溶液(51.23 g, 25.32 mmol)。使混合物搅拌50分钟，此时经1分钟加入5-溴-2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯(75 g, 316.5 mmol)。在搅拌另外50分钟之后，经5分钟向混合物中加入氰基乙酸乙酯(71.6 g, 633.0 mmol)，随后以一份加入水(4.5 mL)。经40分钟把混合物加热至70℃，并且每1-2小时经HPLC分析反应物至产物的转化百分率。在观察到完全转化(一般地在5-8小时之后100%转化)之后，使混合物冷却至20-25℃并通过硅藻土垫过滤。硅藻土垫用甲苯(2 X 450 mL)冲洗并把合并的有机物在真空下，在60-65℃下浓缩至300 mL。向浓缩物加入225mL DMSO并在真空下，在70-80℃下浓缩，直到溶剂的活跃蒸馏停止。使溶液冷却至20-25℃并在步骤2的制备中，用DMSO稀释至900 mL。¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ 7.16-7.10 (m, 2H), 7.03 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.63 (s, 1H), 4.19 (m, 2H), 1.23 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。

(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈的合成.

向来自以上的(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-1-乙基乙酸酯-乙腈的DMSO溶液中经20分钟加入3 N HCl (617.3 mL, 1.85 mol)，同时保持内部温度< 40℃。然后经1小时把混合物加热至75℃，并且每1-2小时经HPLC分析%转化率。当观察到转化率> 99%(一般在5-6 h后)时，把反应物冷却至20-25℃并用MTBE (2 X 525 mL)提取，在提取期间足够的时间允许完全相分离。用5% NaCl (2 X 375 mL)洗涤合并的有机提取物。然后把溶液转移至适合于1.5-2.5托真空蒸馏的配备冷却接收瓶的设备。在< 60℃下真空浓缩溶液以除去溶剂。在125-130℃ (烘箱温度)和1.5-2.0托下自生成的油蒸馏出(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈。以66%收率自5-溴-2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯(2个步骤)分离为澄明的油的(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈，并且HPLC纯度为91.5% AUC (相当于95%的w/w内含成分)。¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.44 (br s, 1H), 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.22 (dd, J = 8.2, 1.8 Hz, 1H), 4.07 (s, 2H)。

(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈的合成.

将(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-乙腈(1.0当量)、50 wt% KOH水溶液(5.0当量)、1-溴-2-氯乙烷(1.5当量)和Oct₄NBr (0.02当量)的混合物在70℃下加热1小时。使反应混合物冷却，然后用MTBE和水处理。用水和盐水洗涤有机相，然后除去溶剂，得到(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈。¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 7.43 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.30 (dd, J = 8.4, 1.9 Hz, 1H), 1.75 (m, 2H), 1.53 (m, 2H)。

1-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸的合成.

将(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷甲腈使用在乙醇(5体积)中的6 M NaOH (8当量)在80℃下水解过夜。使混合物冷却至室温并真空蒸发乙醇。残余物用水和MTBE处理，加入1 M HCl并分离各层。然后用二环己基胺(0.97当量)处理MTBE层。使浆状物冷却至0℃，过滤并用庚烷洗涤，得到相应的DCHA盐。所述盐用MTBE和10%枸橼酸处理并搅拌，直到所有固体溶解。分离各层，并用水和盐水洗涤MTBE层。溶剂换为庚烷，随后过滤， 在50℃下于真空烘箱中干燥过夜后得到1-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸。ESI-MS m/z 理论值242.04, 实测值241.58 (M+1)⁺; ¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.40 (s, 1H), 7.40 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.17 (dd, J = 8.3, 1.7 Hz, 1H), 1.46 (m, 2H), 1.17 (m, 2H)。

胺部分

2-溴-5-氟-4-硝基苯胺的合成.

向烧瓶中先后加入3-氟-4-硝基苯胺(1.0当量)和乙酸乙酯(10体积)并搅拌以使全部固体溶解。分批加入N-溴代琥珀酰亚胺(1.0当量)以保持内部温度为22℃。在反应结束时，在旋转蒸发仪上真空浓缩反应混合物。使残余物在蒸馏水(5体积)中浆化以溶解并除去琥珀酰亚胺。(琥珀酰亚胺也可经水处理程序去除)。倾析水并把固体用2-丙醇(5体积)浆化过夜。过滤生成的浆状物并用2-丙醇洗涤湿滤饼，伴随N₂流，在50℃下于真空烘箱中干燥过夜，直到达到恒重。分离到黄褐色固体(50%产率, 97.5% AUC)。其它杂质为溴代-区域异构体(1.4% AUC)和二溴代-加合物(1.1% AUC)。H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8.19 (1 H, d, J = 8.1 Hz), 7.06 (br. s, 2 H), 6.64 (d, 1 H, J = 14.3 Hz)。

苄基羟乙酸化-4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐的合成.

向在N₂下彻底干燥的烧瓶中加入以下物质：活化的粉状4A分子筛(50 wt%基于2-溴-5-氟-4-硝基苯胺)、2-溴-5-氟-4-硝基苯胺(1.0当量)、高氯酸锌二水合物(20 mol%)和甲苯(8体积)。在室温下搅拌混合物NMT 30分钟。最后，以稳流加入在甲苯(2体积)中的(R)-苄基缩水甘油醚(2.0当量)。把反应物加热至80℃ (内部温度)并搅拌约7小时或者直到2-溴-5-氟-4-硝基苯胺为< 5%AUC。

把反应物冷却至室温并先后加入硅藻土(50 wt%)和乙酸乙酯(10体积)。过滤生成的混合物以去除硅藻土和分子筛，并用乙酸乙酯(2体积)洗涤。用氯化铵溶液(4体积, 20% w/v)洗涤滤液。用碳酸氢钠溶液(4体积 x 2.5% w/v)洗涤有机层。在旋转蒸发仪上真空浓缩有机层。把生成的浆状物溶于乙酸异丙酯(10体积)中并把该溶液转移至Buchi氢化器。

向氢化器中加入5wt% Pt(S)/C (1.5 mol%)并在N₂下，在30℃ (内部温度)下搅拌混合物。反应物先后用N₂和氢气吹洗。把氢化器压力调节至1巴氢气并快速搅拌混合物(>1200 rpm)。在反应结束时，通过硅藻土垫过滤催化剂并用二氯甲烷(10体积)洗涤。真空浓缩滤液。用二氯甲烷(2体积)去除任何剩余的乙酸异丙酯并在旋转蒸发仪上浓缩至干。

把生成的残余物溶于二氯甲烷(10体积)中。加入对-甲苯磺酸一水合物(1.2当量)并搅拌过夜。过滤产物，用二氯甲烷(2体积)洗涤并抽吸干燥。把湿滤饼转移至干燥盘并置于真空烘箱中，伴随N₂流下于45℃下干燥，直到达到恒重。分离到为灰白色固体的苄基羟乙酸化-4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐

手性纯度测定为>97%ee。

(3-氯-3-甲基丁-1-炔基)三甲基硅烷的合成.

把炔丙醇(1.0当量)加入到容器中。加入盐酸水溶液(37%, 3.75体积)并开始搅拌。在固体醇溶解期间，观察到适度的吸热(5-6℃)。把生成的混合物搅拌过夜(16小时)，缓慢变为深红色。向30 L夹套式容器中加入水(5体积)，然后冷却至10℃。把反应混合物经真空缓慢转移至水中，同时保持混合物的内部温度低于25℃。加入己烷(3体积)并把生成的混合物搅拌0.5小时。使这些相沉降，排出水相(pH < 1)并弃去。使用旋转蒸发器真空浓缩有机相，得到为红色油的产物。

(4-(苄氧基)-3,3-二甲基丁-1-炔基)三甲基硅烷的合成.

方法A

该部分中的所有当量和体积描述符号基于250 g反应物。把镁屑(69.5 g, 2.86 mol, 2.0当量)加入到3 L的4颈反应器中，并在氮气下用磁力搅拌器搅拌0.5小时。把反应器浸没在冰水浴中。把炔丙基氯(250 g, 1.43 mol, 1.0当量)在THF (1.8 L, 7.2体积)中的溶液伴随搅拌下缓慢加入到反应器中，直到观察到初始升温(~10℃)。使用¹H-NMR光谱经IPC确认格氏试剂形成。一旦放热减弱，缓慢加入溶液的剩余部分，期间保持批次温度<15℃。加入需要~3.5小时。把生成的深绿色混合物倾析到2 L带盖的瓶中。

该部分中的所有当量和体积描述符号基于500 g反应物。向22 L反应器中加入苄基氯甲基醚(95%, 375 g, 2.31 mol, 0.8当量)在THF (1.5 L, 3体积)中的溶液。用冰水浴冷却反应器。把以上制备的4批格氏试剂中的2批合并，然后经加料漏斗缓慢加入到苄基氯甲基醚溶液中，期间保持批温度低于25℃。加入需要1.5小时。把反应混合物搅拌过夜(16小时)。

该部分中的所有当量和体积描述符号基于1 kg反应物。在30 L夹套反应器中制备15%氯化铵溶液(1.5 kg在8.5 kg水中, 10体积)。使溶液冷却至5℃。将以上两个格氏反应混合物合并，然后经集管容器转移至氯化铵溶液中。在该猝灭中观察到放热，猝灭以例如保持内部温度低于25℃的速度进行。一旦转移完成，将容器外壳温度设为25℃。加入己烷(8 L, 8体积)并搅拌混合物0.5小时。在使这些相沉降之后，排出水相(pH 9)并弃去。用水(2 L, 2体积)洗涤剩余的有机相。使用22 L旋转蒸发器真空浓缩有机相，提供为橙色油的粗品产物。

方法B

把镁屑(106 g, 4.35 mol, 1.0当量)加入到22 L反应器中，然后悬浮于THF (760 mL, 1体积)中。容器用冰水浴冷却，以使得批温度达到2℃。向反应器中缓慢加入炔丙基氯(760 g, 4.35 mol, 1.0当量) 在THF (4.5 L, 6体积)中的溶液。在加入100 mL之后，停止加入并搅拌混合物直到观察到升温13℃，表明格氏试剂的开始形成。一旦放热减弱，缓慢加入另外500 mL炔丙基氯溶液，其间保持批次温度<20℃。使用¹H-NMR光谱经IPC确认格氏试剂形成。缓慢加入剩余的炔丙基氯溶液，其间保持批次温度<20℃。加入需要~1.5小时。把生成的深绿色溶液搅拌0.5小时。使用¹H-NMR光谱经IPC确认格氏试剂形成。向反应器加料漏斗中加入纯净的苄基氯甲基醚，然后滴加入到反应器中，其间保持批次温度低于25℃。加入需要1.0小时。把反应混合物搅拌过夜。使用与方法A相同的程序和相对量的材料进行水处理和浓缩，得到为橙色油的产物。

4-苄氧基-3,3-二甲基丁-1-炔的合成.

向30 L夹套反应器中加入甲醇(6体积)，然后冷却至5℃。向反应器中加入氢氧化钾(85%, 1.3当量)。当氢氧化钾溶解时观察到升温15-20℃。把外壳温度设为25℃。加入4-苄氧基-3,3-二甲基-1-三甲基甲硅烷基丁-1-炔(1.0当量)在甲醇(2体积)中的溶液，并搅拌生成的混合物，直到反应完成，如经HPLC监测的那样。在25℃下的典型反应时间为3-4小时。用水(8体积)稀释反应混合物，然后搅拌0.5小时。加入己烷(6体积)，并把生成的混合物搅拌0.5小时。使这些相沉降，然后排出水相(pH 10-11)并弃去。先后用KOH (85%, 0.4当量)在水(8体积)中的溶液和水(8体积)洗涤有机相。然后使用旋转蒸发器浓缩有机相，得到为橙黄色油的标题物料。该物料的典型纯度在80%范围内，主要存在单一杂质。¹H NMR (400 MHz, C₆D₆) δ 7.28 (d, 2 H, J = 7.4 Hz), 7.18 (t, 2 H, J = 7.2 Hz), 7.10 (d, 1H, J = 7.2 Hz), 4.35 (s, 2 H), 3.24 (s, 2 H), 1.91 (s, 1 H), 1.25 (s, 6 H)。

苄基羟乙酸化(Benzylglycolated) 4-氨基-2-(4-苄氧基-3,3-二甲基丁-1-炔基)-5-氟苯胺的合成.

通过在EtOAc (5体积)和饱和NaHCO₃溶液(5体积)中搅拌所述固体，直到得到澄明的有机层，使苄基羟乙酸化-4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐成游离碱(freebased)。分离生成的各层，先后用饱和NaHCO₃溶液(5体积)和盐水洗涤有机层并真空浓缩，得到为油的苄基羟乙酸化-4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐。

然后，向烧瓶中加入苄基羟乙酸化-4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐(游离碱, 1.0当量)、Pd(OAc) (4.0 mol%), dppb (6.0 mol%)和粉状K₂CO₃ (3.0当量)，并在室温下与乙腈(6体积)一起搅拌。通过用N₂通风口鼓泡将生成的反应混合物脱气约30分钟。然后以快速流加入溶解于乙腈(2体积)中的4-苄氧基-3,3-二甲基丁-1-炔(1.1当量)，加热至80℃并搅拌，直到实现完全消耗4-铵-2-溴-5-氟苯胺甲苯磺酸盐。把反应浆状物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤并用乙腈(2体积)洗涤。真空浓缩滤液并将残余物再次溶解于EtOAc (6体积)中。有机层用NH₄Cl溶液(20% w/v, 4体积)和盐水(6体积)洗涤两次。浓缩生成的有机层，得到棕色的油并原样用于下一步反应。

N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚的合成.

在室温下，将苄基羟乙酸化4-氨基-2-(4-苄氧基-3,3-二甲基丁-1-炔基)-5-氟苯胺的粗品油溶解于乙腈(6体积)中，并加入(MeCN)₂PdCl₂ (15 mol%)。生成的混合物使用N₂通风口脱气约30分钟。然后把反应混合物在80℃下，于N₂覆盖下搅拌过夜。使反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤并用乙腈(1体积)洗涤滤饼。真空浓缩生成的滤液并再次溶于EtOAc (5体积)中。加入Deloxane-II THP (5 wt%基于N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚的理论产率)并在室温下搅拌过夜。然后通过硅胶垫(深度2.5英寸, 直径6英寸滤器)过滤混合物并用EtOAc (4体积)洗涤。把滤液浓缩为深棕色残余物，并原样用于下一步反应。

再次纯化粗品N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚：

把粗品N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚溶解于二氯甲烷(~1.5体积)中并通过硅胶垫过滤，最初使用30% EtOAc/庚烷，其中杂质弃去。然后用50% EtOAc/庚烷洗涤硅胶垫以分离N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚，直到在滤液观察到淡淡的颜色。真空浓缩该滤液，得到棕色的油，其在室温下放置结晶。¹H NMR (400 MHz, DMSO) δ 7.38-7.34 (m, 4 H), 7.32-7.23 (m, 6 H), 7.21 (d, 1 H, J = 12.8 Hz), 6.77 (d, 1H, J = 9.0 Hz), 6.06 (s, 1 H), 5.13 (d, 1H, J = 4.9 Hz), 4.54 (s, 2 H), 4.46 (br. s, 2 H), 4.45 (s, 2 H), 4.33 (d, 1 H, J = 12.4 Hz), 4.09-4.04 (m, 2 H), 3.63 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 3.56 (d, 1H, J = 9.2 Hz), 3.49 (dd, 1H, J = 9.8, 4.4 Hz), 3.43 (dd, 1H, J = 9.8, 5.7 Hz), 1.40 (s, 6 H)。

化合物1的合成

苄基保护的化合物1的合成

将1-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸(1.3当量)在甲苯(2.5体积, 基于1-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸)中浆化，并把混合物加热至60℃。经加料漏斗加入SOCl₂ (1.7当量)。把生成的混合物搅拌2小时。使用旋转蒸发仪蒸除甲苯和过量的SOCl₂。加入另外的甲苯(2.5体积, 基于1-(2,2-二氟-1,3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基)-环丙烷羧酸)并再次蒸馏。将粗品酰氯溶于二氯甲烷(2体积)中，并经加料漏斗加入到N-苄基羟乙酸化-5-氨基-2-(2-苄氧基-1,1-二甲基乙基)-6-氟吲哚(1.0当量)和三乙胺(2.0当量)在二氯甲烷(7体积)中的混合物中，同时保持0-3℃ (内部温度)。生成的混合物在0℃下搅拌4小时，然后温热至室温反应过夜。向反应混合物中加入蒸馏水(5体积)，搅拌NLT 30分钟并分离各层。先后用20 wt% K₂CO₃ (4体积x 2)和盐水(4体积)洗涤有机相并浓缩，得到为稠的棕色油的粗品苄基保护的化合物1，其使用硅胶垫过滤以进一步纯化。

硅胶垫过滤：将粗品苄基保护的化合物1在活性炭Darco-G (10wt%, 基于苄基保护的化合物1的理论产率)存在下溶于乙酸乙酯(3体积)中，并在室温下搅拌过夜。向该混合物中加入庚烷(3体积)并通过硅胶垫(粗品苄基保护的化合物1的2x重量)过滤。用乙酸乙酯/庚烷(1:1, 6体积)洗涤硅胶垫或直到在滤液没有检测到什么颜色。真空浓缩滤液，得到为粘稠棕红色油的苄基保护的化合物1，并直接用于下一步。

再次纯化：把苄基保护的化合物1再次溶于二氯甲烷(1体积, 基于苄基保护的化合物1的理论产率)中并加载到硅胶垫(粗品苄基保护的化合物1的2x重量)上。用二氯甲烷(2体积, 基于苄基保护的化合物1的理论产率)洗涤硅胶垫并弃去滤液。用30%乙酸乙酯/庚烷(5体积)洗涤硅胶垫并真空浓缩滤液，得到为粘稠橙红色油的苄基保护的化合物1，并直接用于下一步。

化合物1的合成

方法A

把20 L高压釜用氮气冲洗3次，然后加入披钯炭(Evonik E 101 NN/W, 5% Pd, 60%湿的, 200 g, 0.075 mol, 0.04当量)。高压釜然后用氮气冲洗3次。经抽吸向高压釜加入粗品苄基保护的化合物1 (1.3 kg, ~1.9 mol)在THF (8 L, 6体积)中的溶液。把容器加盖并然后用氮气冲洗3次。伴随温和搅拌下，把容器用氢气吹洗3次，经用氮气稀释排放至大气。把高压釜用氢气增压至3巴，并把搅拌速率增加至800 rpm。观察到快速吸氢(溶解)。一旦吸收减弱，把容器加热至50℃。

为了安全目的，在每一个工作日结束时关闭恒温器。把容器用氢气增压至4巴并然后与氢气发生器专用液罐分离。

在2整天的反应之后，向混合物中加入另外的Pd/C (60 g, 0.023 mol, 0.01当量)。这通过用氮气冲洗3次并然后通过固体加料口加入催化剂实现。如之前那样重新开始反应。在4整天之后，根据HPLC认为反应完成，不仅起始原料而且相应于一-苄基化中间体的峰消失。

通过硅藻土垫过滤反应混合物。用THF (2 L, 1.5体积)洗涤容器和滤饼。然后用水润湿硅藻土垫并适当地弃去滤饼。使用旋转蒸发器浓缩合并的滤液和THF洗液，得到为黑油的粗品产物，1 kg。

在以下纯化中的当量和体积基于1 kg粗品物料。把粗品黑油溶于1:1乙酸乙酯-庚烷中。把混合物加到烧结漏斗中，已经用1:1乙酸乙酯-庚烷饱和的硅胶垫(1.5 kg, 1.5 wt.当量)。硅胶垫首先用1:1乙酸乙酯-庚烷(6 L, 6体积)冲洗，然后用纯的乙酸乙酯(14 L, 14体积)冲洗。以4个部分收集洗脱剂，部分经HPLC分析。

在以下纯化中的当量和体积基于0.6 kg粗品物料。经旋转蒸发浓缩部分3，得到棕色泡沫(600 g)，然后再次溶解于MTBE (1.8 L, 3体积)中。把深棕色的溶液在环境温度下搅拌过夜，期间发生结晶。加入庚烷(55 mL, 0.1体积)并把混合物搅拌过夜。使用布氏漏斗过滤混合物并用3:1 MTBE-庚烷(900 mL, 1.5体积)洗涤滤饼。把滤饼空气干燥1小时，然后在环境温度下真空干燥16小时，得到253 g为灰白色固体的VXc-661。

用于以下纯化的当量和体积基于1.4 kg粗品物料。将来自以上硅胶过滤的部分2和3以及来自先前反应的物料合并并浓缩，得到1.4 kg黑油。把混合物再次进行以上描述的硅胶过滤(1.5 kg硅胶, 先后用3.5 L, 2.3体积的1:1乙酸乙酯-庚烷和9 L, 6体积的纯乙酸乙酯洗脱)，浓缩得到褐色泡沫状固体(390 g)。

用于以下纯化的当量和体积基于390 g粗品物料。褐色固体不溶于MTBE，因此溶于甲醇(1.2 L, 3体积)中。使用配备有长程蒸馏头的4 L莫顿反应器，把混合物蒸馏至2体积。加入MTBE (1.2 L, 3体积)并把混合物蒸馏回至2体积。加入第2份MTBE (1.6 L, 4体积)并把混合物蒸馏回至2体积。加入第3份MTBE (1.2 L, 3体积)并把混合物蒸馏回至3体积。经GC分析蒸馏物显示其包含~ 6%甲醇。把恒温器设为48℃ (低于MTBE-甲醇共沸混合物的沸腾温度, 其沸腾温度为52℃)。使混合物经2小时冷却至20℃，期间发生相对快速结晶。在把混合物搅拌2小时之后，加入庚烷(20 mL, 0.05体积)并把混合物搅拌过夜(16小时)。使用布氏漏斗过滤混合物并用3:1 MTBE-庚烷(800 mL, 2体积)洗涤滤饼。把滤饼空气干燥1小时，然后在环境温度下真空干燥16小时，得到130 g为灰白色固体的化合物1。

方法B

把苄基保护的化合物1溶解并用THF (3体积)冲洗，以去除任何剩余的残留溶剂。把苄基保护的化合物1再次溶解于THF (4体积)中，并加入到含有5 wt% Pd/C (2.5 mol%, 60%湿的, Degussa E5 E101 NN/W)的氢化器中。把反应物的内部温度调节至50℃，并先后用N₂ (x5) 和氢气(x3)冲洗。把氢化器压力调节至3巴氢气并快速搅拌(>1100 rpm)混合物。在反应结束时，通过硅藻土垫过滤催化剂并用THF (1体积)洗涤。真空浓缩滤液，得到棕色泡沫残余物。将生成的残余物溶解于MTBE (5体积)中，并加入0.5N HCl溶液(2体积)和蒸馏水(1体积)。把混合物搅拌NLT 30分钟并分离生成的各层。先后用10wt% K₂CO₃溶液(2体积x2)和盐水洗液洗涤有机相。把有机层加入到含有硅胶(25 wt%)、Deloxan-THP II (5wt%, 75%湿的)和Na₂SO₄的烧瓶中并搅拌过夜。通过硅藻土垫过滤生成的混合物并用10%THF/MTBE (3体积)洗涤。真空浓缩滤液，得到为淡褐色泡沫的粗品化合物1。

自母液回收化合物1：选项A.

硅胶垫过滤：真空浓缩母液，得到棕色泡沫，将其溶于二氯甲烷(2体积)中，并通过硅胶垫(粗品化合物1的3x 重量)过滤。用乙酸乙酯/庚烷(1:1, 13体积)洗涤硅胶垫并弃去滤液。硅胶垫用10% THF/乙酸乙酯(10体积)洗涤并真空浓缩滤液，得到为淡褐色泡沫的化合物1。按照以上结晶程序分离剩余的化合物1。

自母液回收化合物1：选项B.

硅胶柱色谱法：在硅胶上层析(50%乙酸乙酯/己烷-100%乙酸乙酯)之后，分离为淡褐色泡沫的要求的化合物。按照以上结晶程序分离剩余的化合物1。

图1显示化合物1的X-射线粉末衍射图。化合物1的DSC示踪显示在图2中。图2中的DSC示踪表明化合物1不是纯的固相。与化合物1形式A相比较在119℃存在额外的峰(参见图6)。化合物1的TGA示踪显示在图3中。

化合物1也可通过在美国出版的专利申请US20090131492中公开的几种合成途径之一制备，其通过引用结合到本文中。

化合物1形式A的合成

浆化方法

对于EtOAc、MTBE、乙酸异丙酯或DCM，把约40 mg的化合物1与1-2 ml任何一种以上溶剂一起加入到小瓶中。把浆状物在室温下搅拌24小时-2周，并经把悬浮液离心收集(带有滤器)化合物1形式A。图5公开了通过该方法，用DCM作为溶剂得到的化合物1形式A的XRPD图。

对于EtOH/水溶液，把约40 mg的化合物1加入到3个单独的小瓶中。在第一个小瓶中加入1.35 ml的EtOH和0.15 ml水。在第二个小瓶中加入0.75 ml的EtOH和0.75 ml水。在第三个小瓶中加入0.15 ml的EtOH和1.35 ml水。所有3个小瓶在室温下搅拌24小时。然后离心分离(带有滤器)每一混悬液，以收集化合物1形式A。

对于异丙醇/水溶液，把约40 mg的化合物1加入到3个单独的小瓶中。在第一个小瓶中加入1.35 ml的异丙醇和0.15 ml水。在第二个小瓶中加入0.75 ml的异丙醇和0.75 ml水。在第三个小瓶中加入0.15 ml的异丙醇和1.35 ml水。所有3个小瓶在室温下搅拌24小时。然后离心分离(带有滤器)每一混悬液，以收集化合物1形式A。

对于甲醇/水溶液，把约40 mg的化合物1加入到小瓶中。加入0.5 ml甲醇和1 ml水并在室温下搅拌悬浮液24小时。把悬浮液离心(带有滤器)以收集化合物1形式A。

对于乙腈，把约50 mg的化合物1与2.0 ml乙腈一起加入到小瓶中。在室温下搅拌悬浮液24小时并经离心(带有滤器)收集化合物1形式A。

对于乙腈/水溶液，把约50 mg的化合物1溶解于2.5 ml乙腈中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液并向小瓶中吸取1 ml。加入2.25 ml水，得到浑浊的悬浮液。在室温下搅拌悬浮液24小时并经离心(带有滤器)收集化合物1形式A。

慢蒸发法

把约55 mg的化合物1溶解于0.5 ml丙酮中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液并向小瓶中吸取0.2 ml。小瓶用其中具有一个戳洞的封口膜覆盖并放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。

快蒸发法

对于异丙醇，把约43 mg的化合物1溶解于2.1 ml异丙醇中，在声处理之后得到澄明的溶液。把溶液过滤到小瓶中并无盖放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。

对于甲醇，把约58 mg的化合物1溶解于0.5 ml甲醇中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液，向无盖小瓶中吸取0.2 ml并放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。

对于乙腈，把约51 mg的化合物1溶解于2.5 ml乙腈中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液，向无盖小瓶中吸取一半溶液并放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。图7公开了经该方法制备的化合物1形式A的XRPD图。

抗溶剂法

对于EtOAc/庚烷，把约30 mg的化合物1溶解于1.5 ml的EtOAc中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液并在缓慢搅拌的同时向过滤的溶液中加入2.0 ml庚烷。把溶液搅拌另外10分钟并放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。图8公开了经该方法制备的化合物1形式A的XRPD图。

对于异丙醇/水，把约21 mg的化合物1溶解于1.0 ml异丙醇中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液，得到0.8 ml溶液。在缓慢搅拌的同时加入1.8 ml水。加入另外0.2 ml水，得到浑浊的悬浮液。搅拌停止5分钟，得到澄明的溶液。把溶液搅拌另外2分钟并放置。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。

对于乙醇/水，把约40 mg的化合物1溶解于1.0 ml乙醇中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液并加入1.0 ml水。把溶液在室温下搅拌1天。经过滤收集重结晶的化合物1形式A。

对于丙酮/水，把约55 mg的化合物1溶解于0.5 ml丙酮中，在声处理之后得到澄明的溶液。过滤溶液并向小瓶中吸取0.2 ml。加入1.5 ml水，然后加入另外0.5 ml水，得到浑浊的悬浮液。把悬浮液在室温下搅拌1天。经过滤收集化合物1形式A。

以下表2概述形成化合物1形式A的各种技术。

表2.

溶媒	重结晶方法	残留固体的结果
			ACN	快蒸发	形式A
甲醇	快蒸发	形式A
			乙醇	N/A	N/A
IPA	快蒸发	形式A
			丙酮	慢蒸发	形式A
EtOAc	浆状物	形式A
			DCM	浆状物	形式A
MTBE	浆状物	形式A
			乙酸异丙酯	浆状物	形式A
水/乙醇1:9	N/A	N/A
			水/乙醇1:1	浆状物	形式A
水/乙醇9:1	浆状物	形式A
			水/ACN 9:4	浆状物	形式A
水/甲醇2:1	浆状物	形式A
			水/IPA 1:9	N/A	N/A
水/IPA 9:1	浆状物	形式A
			水/IPA 7:3	浆状物	形式A
甲醇/水4:3	浆状物	形式A
			EtOAc/庚烷3:4	抗溶剂	形式A
IPA/水2:5	抗溶剂	形式A
			乙醇/水1:1	抗溶剂	形式A
丙酮/水1:10	抗溶剂	形式A
			乙醇/水5:6	抗溶剂	N/A
甲苯	N/A	N/A
			MEK	N/A	N/A
水	N/A	N/A

自化合物1形式A的单晶结构计算的X-射线衍射图显示于图4中。表3列出对图1计算的峰。

表3

化合物1形式A的实际X-射线粉末衍射图显示于图5中。表4列出图5的实际峰。

表4

化合物1形式A的DSC示踪显示于图6中。化合物1形式A的熔点出现在约172-178℃。

对化合物1形式A得到单晶数据，提供关于晶体结构的另外细节，包括晶格大小和堆积。

晶体制备

通过自浓的甲醇溶液(10 mg/ml)慢蒸发得到化合物1形式A的晶体。选择具有0.20 × 0.05 × 0.05 mm尺寸的化合物1形式A的无色晶体，用矿物油清洁，安装于MicroMount并聚集在Bruker APEXII衍射仪上。得到在倒晶格空间分开的3批40个框架，提供取向矩阵和初始晶胞参数。得到最后的晶胞参数并基于完整的数据集精修。

实验

对0.83 Å分辨率使用0.5°步长，每一个框架曝光30秒，得到倒晶格空间的衍射数据集。数据在室温[295 (2) K]下收集。强度的集成(Integration of intensities)和晶胞参数的精修使用APEXII软件实现。在数据收集后观察晶体没有显示分解的迹象。

表5. 化合物1形式A的晶体数据

C26H27F3N2O6	F(000) = 1088
		Mr = 520.50	D x = 1.397 Mg m-3
单斜的, C2	Cu Kα辐射, λ = 1.54178 Å
		Hall符号: C 2y	来自3945反射的晶胞参数
a = 21.0952 (16) Å	θ = 2.5°
		b = 6.6287 (5) Å	μ = 0.97 mm-1
c = 17.7917 (15) Å	T = 295 K
		β = 95.867 (6)°	棱柱
V = 2474.8 (3) Å 3	0.20 × 0.05 × 0.05 mm
		Z = 4

几何学：使用全协方差矩阵评价所有esds (除了两个l.s.平面之间的双面角的esd)。单独考虑晶胞esds评价距离、角度和扭转角的esds；晶胞参数的esds之间的相关性仅在它们被晶体对称性限定时使用。晶胞esds的近似(各向同性)处理用于评价l.s.平面的esds。

表6. 化合物1形式A晶体的数据收集参数

APEX II衍射仪	R int = 0.027
		辐射源: 细焦密封管	θmax = 67.8°, θmin = 2.5°
石墨	h = -25→24
		8766测量的反射	k = -7→7
3945独立反射	l = -19→16
		具有I > 2σ(I)的3510反射

数据收集：Apex II；晶胞晶修：Apex II；数据简化：Apex II；用于解析结构的程序：SHELXS97 (Sheldrick, 1990)；用于精修结构的程序：SHELXL97 (Sheldrick, 1997)；分子图形学：汞(Mercury)；用于制作出版材料的软件：publCIF。

表7. 化合物1形式A晶体的精修参数.

对F 2的精修	氢场地位置: 自邻近位置推断
		最小二乘矩阵: 全	用独立和约束的精修的混合处理的H原子
R[F 2 > 2σ(F 2)] = 0.043	w = 1/[σ2(F o 2) + (0.0821P)2 + 0.2233P]，其中P = (F o 2 + 2F c 2)/3
		wR(F 2) = 0.119	(Δ/σ)max < 0.001
S = 1.05	Δ>max = 0.14 e Å-3
		3945反射	Δ>min = -0.13 e Å-3
443参数	消光校正: SHELXL, Fc*=kFc[1+0.001xFc2λ3/sin(2θ)]-1/4
		1约束	消光系数: 0.00016 (15)
0约束	绝对结构: Flack H D (1983), Acta Cryst. A39, 876-881
		一级原子场地位置: 结构不变的直接方法	Flack参数: 0.00 (18)
二级原子场地位置: 差傅里叶图(difference Fourier map)

精修：对ALL反射的F²精修。加权R-因子wR和拟合优度S基于F²，常规R-因子R基于F，F对负F²设为零。F²的阈值表达>2σ(F²)仅用于计算R-因子(gt)等，并且与对精修的反射选择不相关。基于F²的R-因子在统计学上约为基于F的两倍那样大，并且基于ALL数据的R-因子甚至更大。

基于单晶X-射线分析的化合物1形式A的构象图片显示在图9和10中。末端-OH基团经氢键网络连接，形成具有4个相邻分子的四聚物集群(tetrameric cluster) (图10)。其它羟基起氢键供体作用，与相邻分子的羰基形成氢键。晶体结构显示分子的致密堆积。化合物1形式A为单斜的C2空间群，具有以下晶胞大小：a = 21.0952(16) Å, b = 6.6287(5) Å, c = 17.7917(15) Å, β= 95.867(6) °, γ = 90°。

化合物1形式A的固态¹³C NMR谱显示在图11中。表8提供相关峰的化学位移。

表8.

化合物1形式A的固态¹⁹F NMR谱显示在图12中。具有星号的峰意指旋转边带。表9提供相关峰的化学位移。

表9.

化合物1无定形形式的合成

旋转蒸发法

化合物1无定形形式也经旋转蒸发获得。把化合物1 (约10 g)溶解于180 ml的MeOH中，并在50℃浴中旋转蒸发为泡沫。DSC (图14)和XRPD (图13)确认为化合物1的无定形形式。图15公开了用该方法制备的化合物1无定形形式的TGA示踪图。

喷雾干燥法

将9.95 g醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯HG级(HPMCAS-HG)与50 mg十二烷基硫酸钠(SLS)一起称重至500 ml烧杯中。把MeOH (200 ml)与固体混合。把物料搅拌4小时。为了确保最大溶解，在搅拌2小时后把溶液进行声处理5分钟，然后继续搅拌剩余的2小时。最后的(fin) HPMCAS悬浮液仍保持在溶液中。然而，在倾斜容器之后视觉观察确定没有胶粘的部分残留在容器壁上或粘于底部。

把化合物1形式A (10 g)倾入到500 ml烧杯中，并继续搅拌系统。把溶液使用以下参数进行喷雾干燥：

配方描述：化合物1形式A/HPMCAS/SLS (50/49.5/0.5)

BUCHI 小型喷雾干燥仪

T入口(定位点) 　　　　145℃

T出口(起点) 　　　　　75℃

T出口(终点) 　　　　　55℃

氮气压力　　　　　　　75磅/平方英寸

吸气器　　　　　　　　100%

泵　　　　　　　　　　35%

旋转流量计　　　　　　40 mm

过滤器压力　　　　　　65 mbar

冷凝器温度　　　　　　-3℃

运行时间　　　　　　　1小时

回收约16 g的化合物1无定形形式(80%产率)。化合物1无定形形式经XRPD (图16)和DSC (图17)确认。

化合物1无定形形式的固态¹³C NMR谱显示在图8中。表10提供相关峰的化学位移。

表10.

化合物1无定形形式的固态¹⁹F NMR谱显示在图19中。具有星号的峰意指旋转边带。表11提供相关峰的化学位移。

表11.

以下表12列举化合物1的另外分析数据。

表12.

试验

检测和测量化合物的ΔF508-CFTR校正性能的使用

用于试验化合物的ΔF508-CFTR调节性能的膜电位光学方法

光学膜电位试验采用Gonzalez和Tsien (参见Gonzalez, J.E. and R.Y. Tsien (1995) “Voltage sensing by fluorescence resonance energy transfer in single cells” Biophys J 69(4): 1272-80, 和Gonzalez, J.E. and R.Y. Tsien (1997) “使用荧光共振能量转移的细胞膜电位的改进的指示器(Improved indicators of cell membrane potential that use fluorescence resonance energy transfer)” Chem Biol 4(4): 269-77)描述的电压敏感的FRET传感器，结合用于测量荧光变化的使用仪器例如电压/离子探针读出仪(Voltage/Ion Probe Reader) (VIPR) (参见Gonzalez, J.E., K. Oades, et al. (1999) “用于筛选离子-通道标靶的细胞基分析法和仪器(Cell-based assays and instrumentation for screening ion-channel targets)” Drug Discov Today 4(9): 431-439)。

这些电压敏感试验基于膜可溶性电压敏感染料DiSBAC₂(3)和附着于质膜出口小叶并起FRET供体作用的荧光磷脂CC2-DMPE之间的荧光共振能量转移的变化。膜电位(V_m)的变化引起荷负电的DiSBAC₂(3)跨质膜重新分布和来自CC2-DMPE的能量转移的量相应地发生变化。荧光发射的变化使用VIPR^TM II监测，后者为集成的液体处理器和荧光检测器，被设计在96-或384-孔微量滴定板中进行基于细胞的筛选。

1. 校正化合物的鉴定

为了鉴定校正与ΔF508-CFTR相关的运输缺陷的小分子，开发了单独添加HTS检测格式。在受试化合物存在或不存在(阴性对照)下，把细胞在无血清培养基中，于37℃下温育16小时。作为阳性对照，把在384-孔板中铺展的细胞于27℃下温育16小时，以“温度校正”ΔF508-CFTR。细胞随后用Krebs Ringer溶液冲洗3X，并加载电压敏感染料。为了激活ΔF508-CFTR，向每孔中与不含Cl^-的培养基一起加入10 μM毛喉素和CFTR增效剂、染料木素(20 μM)。加入不含Cl^-的培养基促进应答于ΔF508-CFTR激活的Cl^-流出，并使用基于FRET的电压传感器染料光学监测生成的膜去极化。

2. 增效剂化合物的确证

为了鉴定ΔF508-CFTR的增效剂，开发了双重添加HTS检测格式。在第一次添加期间，向每孔中加入不含Cl^-的培养基与或不与受试化合物。22秒后，第二次加入含有2-10 μM毛喉素的不含Cl^-的培养基以激活ΔF508-CFTR。在两次添加之后细胞外Cl^-浓度为28 mM，这促进应答于ΔF508-CFTR激活的Cl^-流出，并使用基于FRET的电压传感器染料光学监测生成的膜去极化。

3. 溶液

浴液#1: (以mM表示)	NaCl 160、KCl 4.5、CaCl2 2、MgCl2 1、HEPES 10, pH 7.4含NaOH。
		不含氯的浴液:	浴液#1中的氯化物盐用葡糖酸盐替代。
CC2-DMPE:	制备为在DMSO中的10 mM储备溶液并储存于-20℃下。
		DiSBAC2(3):	制备为在DMSO中的10 mM储备溶液并储存于-20℃下。

4. 细胞培养

稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞用于膜电位的光学测量。在175 cm²培养瓶中，于5% CO₂和90 %湿度下，在37℃下把细胞保持在用2 mM谷氨酰胺、10%小牛血清、1 X NEAA、β-ME、1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES补充的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中。对所有的光学测定，把细胞以30000/孔接种在384孔涂有基底胶的板中，并在27℃下培养24小时用于增效剂鉴定之前于37℃下培养2小时。对于校正测定，于27℃或37℃下，在化合物存在和不存在下把细胞培养16-24小时。

用于测试化合物的ΔF508-CFTR调节性能的电生理实验

1. 尤斯室(Using chamber)实验

在表达ΔF508-CFTR的极化上皮细胞上进行尤斯室(Ussing chamber)实验以进一步表征在光学试验中鉴定的ΔF508-CFTR调节剂。在Costar Snapwell细胞培养池(cell culture inserts)上生长的FRT^{Δ F508-CFTR}上皮细胞被安装在尤斯室(Ussing chamber) (Physiologic Instruments公司，San Diego，CA)中，并采用电压钳系统使单层持续短路(生物工程系，爱荷华大学，IA和Physiologic Instruments公司，San Diego，CA)。通过应用2-mV脉冲测量跨上皮膜电阻。在这些条件下，FRT上皮细胞证实了4 KΩ/ cm²或者更多的电阻。把溶液维持在27℃下并用空气鼓泡。电极电位偏移和流体电阻采用无细胞池校正。在这些条件下，电流反映了Cl^-通过在顶端膜中表达的ΔF508-CFTR的流动。采用MP100A-CE界面和AcqKnowledge软件(v3.2.6; BIOPAC Systems, Santa Barbara, CA)数字获得I_SC。

2. 校正化合物的确证

典型方案使用基底外侧至顶端膜Cl^-浓度梯度。为建立这种梯度，正常的林格氏液被用于基底外侧膜，而顶端NaCl 用等克分子数的葡萄糖酸钠替代(用NaOH滴定至pH 7.4)以给出跨上皮细胞的大的Cl^-浓度梯度。所有试验用完整的单层进行。为了充分激活ΔF508-CFTR，应用毛喉素(10 µM)和PDE抑制剂，IBMX (100 µM)，随后加入CFTR增效剂染料木素(50 μM)。

如在其它细胞类型观察到的那样，在低温下温育稳定表达ΔF508-CFTR的FRT细胞增加CFTR在质膜中的功能密度。为了测定校正化合物的活性，把细胞在37℃下用10 µM受试化合物温育24小时，并随后在记录之前冲洗3X。把在化合物处理的细胞中cAMP-和染料木素-介导的I_SC归一化为27℃和37℃对照组并表示为活性百分比。与37℃对照组相比较，用校正化合物预先温育细胞显著增加cAMP-和染料木素-介导的I_SC。

3. 增效剂化合物的鉴定

典型方案使用基底外侧至顶端膜Cl^-浓度梯度。为建立这种梯度，正常的林格氏液被用于基底外侧膜并用制霉菌素(360 µg/ml)通透，而顶端NaCl 用等克分子数的葡萄糖酸钠替代(用NaOH滴定至pH 7.4)以给出跨上皮细胞的大的Cl^-浓度梯度。制霉菌素渗透化作用后30分钟进行所有实验。把毛喉素(10 µM)和所有受试化合物加入到细胞培养池的两侧。将假定的ΔF508-CFTR增效剂的效力与已知增效剂染料木素的效力相比较。

4. 溶液

基底外侧溶液(以mM表示)：	NaCl (135)、CaCl2 (1.2)、MgCl2 (1.2)、K2HPO4 (2.4)、KHPO4 (0.6)、N-2-羟基乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES) (10)和葡萄糖(10)。溶液用NaOH滴定至pH 7.4。
		顶端溶液(以mM表示)：	与基底外侧溶液相同，用葡萄糖酸钠(135)替代NaCl。

5. 细胞培养

表达ΔF508-CFTR (FRT^{Δ F508-CFTR})的Fisher大鼠上皮(FRT)细胞用于自我们的光学试验鉴定的假定ΔF508-CFTR调节剂的尤斯室(Ussing chamber)实验。在Costar Snapwell细胞培养池中培养细胞，并于37℃和5% CO₂下，在5%小牛血清、100 U/ml青霉素和100 µg/ml链霉素补充的Coon’s改良的Ham’s F-12培养基中培养5天。在用于表征化合物的增效剂活性之前，于27℃下把细胞温育16-48小时以校正ΔF508-CFTR。为了测定校正化合物的活性，于27℃或37℃下，在化合物存在或不存在下把细胞温育24小时。

6. 全细胞记录

采用穿孔膜片、全细胞记录监测温度和受试化合物校正的稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3细胞中的宏观ΔF508-CFTR电流(I_{Δ F508})。简言之，采用Axopatch 200B膜片钳放大器(Axon Instruments公司，Foster City，CA)室温下进行I_{Δ F508}的电压钳记录。所有记录在10 kHz的采样频率和1 kHz低通滤波下获得。当充满胞内溶液时吸量管有一个5-6 MΩ的阻力。在这些记录条件下，计算的室温下Cl^-的逆转电位(E_Cl)为-28 mV。所有记录具有>20 GΩ的密封电阻和<15 MΩ串联电阻。采用配备有连同Clampex 8 (Axon Instruments公司)的Digidata 1320 A/D界面的PC进行脉冲产生、数据采集和分析。浴含有< 250 µl的盐水并采用重力驱动的灌注系统以2 ml/分钟的速率持续灌注。

7. 校正化合物的确证

为了测定校正化合物用于增加功能性ΔF508-CFTR在质膜中的密度的活性，我们使用以上描述的穿孔膜片记录技术测量用校正化合物处理24-hr后的电流密度。为了充分激活∆F508-CFTR，把10 µM 毛喉素和 20 µM染料木素加至细胞。在我们的记录条件下，在27℃下温育24小时后的电流密度高于在37℃下温育24小时后观察到的电流密度。这些结果与已知的低温温育对质膜中∆F508-CFTR的密度的作用相吻合。为了测定校正化合物对CFTR电流密度的作用，于37℃下把细胞与10 µM的受试化合物温育24小时，并把电流密度与27℃和37℃对照组(%活性)相比较。记录之前，用胞外记录培养液冲洗细胞3X以除去任何残留的受试化合物。与37℃对照组相比较，用10 µM的校正化合物预先温育显著增加cAMP-和染料木素依赖的电流。

8. 增效剂化合物的鉴定

采用穿孔膜片记录技术也研究ΔF508-CFTR增效剂在稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3细胞中增加宏观ΔF508-CFTR Cl^-流(I_{Δ F508})的能力。自光学试验鉴定的增效剂诱发了与光学试验中观察到的类似效力和有效性的I_{Δ F508}的剂量依赖性增加。在检测的所有细胞中，在使用增效剂之前和期间的反转电位为约-30 mV，其为计算的E_Cl (-28 mV)。

9. 溶液

胞内溶液(以mM表示)：	Cs-天冬氨酸(90)、CsCl (50)、MgCl2 (1)、HEPES (10)和240 µg/ml两性霉素-B (用CsOH把pH调至7.35)。
		胞外溶液(以mM表示)：	N-甲基-D-葡糖胺(NMDG)-Cl (150)、MgCl2 (2)、CaCl2 (2)、HEPES (10) (用HCl把pH调至 7.35)。

10. 细胞培养

稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞用于全细胞记录。在175 cm²培养瓶中，于5% CO₂和90 %湿度下，在37℃下把细胞保持在用2 mM谷氨酰胺、10%小牛血清、1 X NEAA、β-ME、1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES补充的Dulbecco’s改良Eagle’s培养基中。对全细胞记录，把2500-5000细胞接种到聚-L-赖氨酸涂覆的玻璃盖玻片上并在用前于27℃下培养24-48小时以试验增效剂的活性；并且于37℃下在校正化合物存在或不存在下温育用于测量校正剂的活性。

11. 单通道记录

采用切除的内面外向式膜片观察NIH3T3细胞中稳定表达的温度校正的ΔF508-CFTR的单通道活性和增效剂化合物的活性。简言之，采用Axopatch 200B膜片钳放大器(Axon Instruments公司)室温下进行单通道活性的电压钳记录。所有记录在10 kHz的采样频率和400 Hz低通滤波下获得。当充满胞外溶液时，膜片钳(Patch pipettes)自Corning Kovar Sealing #7052玻璃(World Precision Instruments公司，Sarasota，FL)制作并具有5-6 MΩ的电阻。通过加入1 mM Mg-ATP和75 nM的cAMP依赖的蛋白激酶、催化亚基(PKA，Promega公司. Madison，WI)，在切除后激活ΔF508-CFTR。在通道活性稳定后，采用重力驱动的微灌注术系统灌注膜片。邻近膜片放置流入物，导致1-2 秒内溶液完全交换。为在快速灌注期间维持ΔF508-CFTR活性，把非特异性磷酸酶抑制剂F^- (10 mM NaF)加入到浴液中。在这些记录条件下，通道活性在整个膜片记录期间保持恒定(最高达60 分钟)。通过自胞内溶液移动至胞外溶液的正电荷产生的电流(阴离子以相反方向移动)作为正电流显示。钳制电压(pipette potential) (Vp)保持在80 mV。

自包含≤2个活性通道的膜片分析通道活性。在实验过程中同时开口的最大数量决定了活性通道的数量。为了测定单通道电流幅度，自120秒的ΔF508-CFTR活性记录的数据于100 Hz被“离线(off-line) 过滤”，然后采用Bio-Patch Analysis软件(Bio-Logic Comp. 法国)用于构建用多高斯函数拟合的所有点振幅直方图。自120秒的通道活性测定总微观电流和开放概率(Po)。采用Bio-Patch软件或自关系式Po = I/i(N)测定Po，其中I =平均电流，i =单通道电流幅值，和N =膜片中活性通道的数量。

12. 溶液

胞外溶液(以mM表示)：	NMDG (150)、天冬氨酸(150)、CaCl2 (5)、MgCl2 (2)和HEPES (10) (用Tris碱把pH调至 7.35)。
		胞内溶液(以mM表示)：	NMDG-Cl (150)、MgCl2 (2)、EGTA (5)、TES (10)和Tris碱(14) (用HCl把pH调至 7.35)。

13. 细胞培养

稳定表达ΔF508-CFTR的NIH3T3小鼠成纤维细胞用于离体膜膜片钳记录。在175 cm²培养瓶中，于5% CO₂和90 %湿度下，在37℃下把细胞维持在用2 mM谷氨酰胺、10%小牛血清、1 X NEAA、β-ME、1X青霉素/链霉素和25 mM HEPES补充的Dulbecco’s改良的Eagle’s培养基中。对单通道记录，把2500-5000个细胞接种到聚-L-赖氨酸涂布的玻璃盖玻片上并在用前于27℃下培养24-48小时。

采用以上描述的程序，测量化合物1的活性即EC50s并显示在表13中。

表13.

。

Claims (80)

1. 特征为结晶形式A的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

2. 权利要求1的形式A，其中形式A的特征在于在使用Cu Kα辐射得到的X-射线粉末衍射中，在19.3-19.7°、21.5-21.9°和16.9-17.3°的一个或多个峰。

3. 权利要求2的形式A，其中形式A的特征在于在约19.5、21.7和17.1°的一个或多个峰。

4. 权利要求2或3的形式A，其中形式A的进一步特征在于在20.2-20.6°的峰。

5. 权利要求2-4中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约20.4°的峰。

6. 权利要求2-5中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在18.6-19.0°的峰。

7. 权利要求2-6中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约18.8°的峰。

8. 权利要求2-7中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在24.5-24.9°的峰。

9. 权利要求2-8中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约24.7°的峰。

10. 权利要求2-9中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在9.8-10.2°的峰。

11. 权利要求2-10中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约10.0°的峰。

12. 权利要求2-11中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在4.8-5.2°的峰。

13. 权利要求2-12中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约5.0°的峰。

14. 权利要求2-13中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在24.0-24.4°的峰。

15. 权利要求2-14中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约24.2°的峰。

16. 权利要求2-15中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在18.3-18.7°的峰。

17. 权利要求2-16中任何一项的形式A，其中形式A的进一步特征在于在约18.5°的峰。

18. 权利要求1-17中任何一项的形式A，其中形式A的特征在于与图4基本上相似的衍射图。

19. 权利要求1-17中任何一项的形式A，其中形式A的特征在于与图5基本上相似的衍射图。

20. 一种(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的晶体形式，其具有单斜晶系、C2空间群和以下晶胞大小：

a = 21.0952(16) Å　　α = 90°

b = 6.6287(5) Å　　　β = 95.867(6)°

c = 17.7917(15) Å　　γ = 90°。

21. 一种药用组合物，其包含权利要求1-20中任何一项的形式A和药学上可接受的载体。

22. 权利要求21的药用组合物，所述组合物还包含另外的治疗剂。

23. 权利要求22的药用组合物，其中所述另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

24. 一种制备权利要求1-19中任何一项的形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺在溶剂中浆化有效量的时间。

25. 权利要求24的方法，其中的溶剂为乙酸乙酯、二氯甲烷、MTBE、乙酸异丙酯、水/乙醇、水/乙腈、水/甲醇或水/异丙醇。

26. 权利要求24或25的方法，其中有效量的时间为24小时-2周。

27. 一种制备权利要求1-19中任何一项的形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于溶剂中并蒸发溶剂。

28. 权利要求27的方法，其中溶剂为丙酮、乙腈、甲醇或异丙醇。

29. 一种制备权利要求1-19中任何一项的形式A的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于第一溶剂中，并加入(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺不溶于其中的第二溶剂。

30. 权利要求29的方法，其中所述第一溶剂为乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或丙酮。

31. 权利要求29或30的方法，其中所述第二溶剂为庚烷或水。

32. 权利要求29-31中任何一项的方法，其中在搅拌第一溶剂和(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的溶液的同时加入第二溶剂。

33. 固体基本上无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

34. 权利要求33的无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，其包含少于约5%的结晶(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

35. 一种药用组合物，其包含权利要求33或34的无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和药学上可接受的载体。

36. 权利要求35的药用组合物，所述组合物还包含另外的治疗剂。

37. 权利要求36的药用组合物，其中所述另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

38. 一种制备权利要求33或34的无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺溶解于合适的溶剂中，并通过旋转蒸发除去溶剂。

39. 权利要求38的方法，其中所述溶剂为甲醇。

40. 一种固体分散体，其包含权利要求33或34的无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和聚合物。

41. 权利要求40的固体分散体，其中所述聚合物为羟丙基甲基纤维素(HPMC)。

42. 权利要求40或41的固体分散体，其中所述聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。

43. 权利要求40-42中任何一项的固体分散体，其中所述聚合物以10%重量-80%重量的量存在。

44. 权利要求40-43中任何一项的固体分散体，其中所述聚合物以30%重量-60%重量的量存在。

45. 权利要求40-44中任何一项的固体分散体，其中所述聚合物以约49.5%重量的量存在。

46. 权利要求40-45中任何一项的固体分散体，其中(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以10%重量-80%重量的量存在。

47. 权利要求40-46中任何一项的固体分散体，其中(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以30%重量-60%重量的量存在。

48. 权利要求40-47中任何一项的固体分散体，其中(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以约50%重量的量存在。

49. 权利要求40-48中任何一项的固体分散体，其还包含表面活性剂。

50. 权利要求49的固体分散体，其中表面活性剂为十二烷基硫酸钠。

51. 权利要求49或50的固体分散体，其中所述表面活性剂以0.1%重量-5%重量的量存在。

52. 权利要求49-51中任何一项的固体分散体，其中所述表面活性剂以约0.5%重量的量存在。

53. 权利要求49的固体分散体，其中所述聚合物为以49.5%重量的量存在的醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)，所述表面活性剂为以0.5%重量的量存在的十二烷基硫酸钠，和(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺以50%重量的量存在。

54. 一种药用组合物，所述组合物包含权利要求40-53中任何一项的固体分散体和药学上可接受的载体。

55. 权利要求54的药用组合物，所述组合物还包含另外的治疗剂。

56. 权利要求55的药用组合物，其中所述另外的治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

57. 一种制备无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺喷雾干燥。

58. 权利要求57的方法，所述方法包括将(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺和合适的溶剂混合，然后将所述混合物喷雾干燥，得到无定形(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺。

59. 权利要求58的方法，其中所述溶剂为醇。

60. 权利要求58或59的方法，其中所述溶剂为甲醇。

61. 权利要求57-60中任何一项的方法，所述方法包括

a) 形成包含(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺、聚合物和溶剂的混合物；和

b) 将所述混合物喷雾干燥以形成固体分散体。

62. 权利要求61的方法，其中所述聚合物为醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)。

63. 权利要求61或62的方法，其中所述聚合物以固体分散体的10%重量-80%重量的量存在。

64. 权利要求61-63中任何一项的方法，其中所述聚合物以固体分散体的约49.5%重量的量存在。

65. 权利要求61-64中任何一项的方法，其中所述溶剂为甲醇。

66. 权利要求61-65中任何一项的方法，其中所述混合物进一步包含表面活性剂。

67. 权利要求66的方法，其中的表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SLS)。

68. 权利要求66或67的方法，其中所述表面活性剂以固体分散体的0.1%重量-5%重量的量存在。

69. 权利要求66-68中任何一项的方法，其中所述表面活性剂以固体分散体的约0.5%重量的量存在。

70. 权利要求61的方法，其中所述聚合物为以固体分散体的约49.5%重量的量存在的醋酸羟丙基甲基纤维素琥珀酸酯(HPMCAS)，所述溶剂为甲醇，并且所述混合物进一步包含以固体分散体的约0.5%重量的量存在的十二烷基硫酸钠。

71. 一种在受试者治疗CFTR介导的疾病的方法，所述方法包括给予受试者有效量的权利要求1-19中任何一项的形式A、权利要求33或34的无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，或者权利要求40的固体分散体。

72. 权利要求71的方法，其中CFTR介导的疾病选自囊性纤维化、哮喘、吸烟引起的COPD、慢性支气管炎、鼻窦炎、便秘、胰腺炎、胰功能不全、先天性双侧输精管缺如(CBAVD)引起的男性不育、轻度肺病、特发性胰腺炎、变应性支气管肺曲霉病(ABPA)、肝病、遗传性肺气肿、遗传性血色病、凝血纤溶缺陷、蛋白C缺乏症、1型遗传性血管性水肿、脂质处理缺陷、家族性高胆固醇血症、1型乳糜微粒血症、无β脂蛋白血症、溶酶体贮积病、I-细胞疾病/假性赫尔勒病、粘多醣症、Sandhof病/黑蒙性痴呆、克里格勒-纳贾尔II型综合征、多内分泌病变/高胰岛素血症、糖尿病、拉伦侏儒症、髓过氧化物酶缺乏、原发性甲状旁腺功能减退、黑素瘤、1型糖酵解CDG、先天性甲状腺功能亢进、成骨不全、遗传性低纤维蛋白原血症、ACT缺乏、尿崩症(DI)、神经性DI、肾性DI、夏-马-图三氏综合征、佩-梅氏病、神经退行性疾病、阿耳茨海默氏病、帕金森病、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性核上性麻痹、皮克氏病、一些多聚谷氨酰胺神经障碍、亨廷顿氏病、I型脊髓小脑性共济失调、脊髓延髓肌肉萎缩症、齿状核红核苍白球路易斯体萎缩、强直性肌营养不良、海绵状脑病、遗传性克雅氏病(由于朊蛋白加工缺陷)、法布里病、斯脱斯勒-史茵克综合征、COPD、干眼病、斯耶格伦氏病、骨质疏松症、骨质减少、戈汉综合征、氯离子通道病、先天性肌强直症(汤姆孙和贝克尔形式)、III型巴特氏综合征、Dent病、惊跳症、癫痫、惊跳症、溶酶体贮积病、Angelman综合征、原发性纤毛运动障碍(PCD)、纤毛结构和/或功能的遗传性疾病、伴随内脏逆位的PCD (也称为卡塔格内综合征)、不伴随内脏逆位的PCD或纤毛发育不全。

73. 权利要求71的方法，其中CFTR介导的疾病选自囊性纤维化、COPD、骨质疏松症或肺气肿。

74. 权利要求71的方法，其中CFTR介导的疾病为囊性纤维化。

75. 权利要求71-74中任何一项的方法，其中所述受试者具有伴随ΔF508突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。

76. 权利要求71-74中任何一项的方法，其中所述受试者具有伴随R117H突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。

77. 权利要求71-74中任何一项的方法，其中所述受试者具有伴随G551D突变的囊性纤维化跨膜受体(CFTR)。

78. 权利要求71-77中任何一项的方法，其中所述方法包括给予另外的治疗剂。

79. 权利要求78的方法，其中所述治疗剂选自粘液溶解剂、支气管扩张剂、抗生素、抗感染剂、抗炎剂、CFTR增效剂或营养剂。

80. 一种药剂盒，其包含权利要求1-19中任何一项的形式A、权利要求33或34的无定形的(R)-1-(2,2-二氟苯并[d][1,3]间二氧杂环戊烯-5-基)-N-(1-(2,3-二羟基丙基)-6-氟-2-(1-羟基-2-甲基丙-2-基)-1H-吲哚-5-基)环丙烷甲酰胺，或者权利要求40的固体分散体，及其使用说明书。

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