CN102282174A - 抗人epo受体的抗体 - Google Patents
抗人epo受体的抗体 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102282174A CN102282174A CN2010800045182A CN201080004518A CN102282174A CN 102282174 A CN102282174 A CN 102282174A CN 2010800045182 A CN2010800045182 A CN 2010800045182A CN 201080004518 A CN201080004518 A CN 201080004518A CN 102282174 A CN102282174 A CN 102282174A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seq
- antibody
- district
- epo
- structural domain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 18
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 17
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid Substances OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 238000001262 western blot Methods 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 claims 1
- 101000852145 Homo sapiens Erythropoietin receptor Proteins 0.000 abstract description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 53
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 28
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 28
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 28
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 13
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 6
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 101000987586 Homo sapiens Eosinophil peroxidase Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 102000044890 human EPO Human genes 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 3
- 244000309466 calf Species 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 3
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 3
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 3
- 101100230376 Acetivibrio thermocellus (strain ATCC 27405 / DSM 1237 / JCM 9322 / NBRC 103400 / NCIMB 10682 / NRRL B-4536 / VPI 7372) celI gene Proteins 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108010006654 Bleomycin Proteins 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001561 bleomycin Drugs 0.000 description 2
- OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O bleomycin A2 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC=C(N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCC[S+](C)C)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C OYVAGSVQBOHSSS-UAPAGMARSA-O 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 230000010474 transient expression Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 101100046775 Arabidopsis thaliana TPPA gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=C[C@H](O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000031637 Erythroblastic Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000036566 Erythroleukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 108010001441 Phosphopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N Senegenin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@](C)(C(O)=O)[C@@H]2CC[C@@]3(C)C(CC[C@]4(CCC(C[C@H]44)(C)C)C(O)=O)=C4[C@@H](CCl)C[C@@H]3[C@]21C CWHJIJJSDGEHNS-MYLFLSLOSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 208000021841 acute erythroid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000006287 biotinylation Effects 0.000 description 1
- 238000007413 biotinylation Methods 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012219 cassette mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 108091036078 conserved sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000009871 tenuigenin Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000003146 transient transfection Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- XZZNDPSIHUTMOC-UHFFFAOYSA-N triphenyl phosphate Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(OC=1C=CC=CC=1)(=O)OC1=CC=CC=C1 XZZNDPSIHUTMOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 108700001624 vesicular stomatitis virus G Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
以特异性结合pY461，pY430或p465为特征的结合人EPO-R的抗体用于测定活化的EPO受体。
Description
发明背景
人红细胞生成素(EPO)是涉及祖红细胞的增殖和分化的166-aa糖蛋白。这些细胞反应由人EPO受体(EPO-R)——508-aa糖蛋白——介导。人EPO受体(EPO-R)是508个氨基酸长度的蛋白质(Swiss Prot P19235)，其含有单个跨膜结构域且已被分类为I型细胞因子受体的生长激素亚家族成员。EPO-R在例如Winkelmann，J.C.等人，Blood 76(1990)24-30和Jones，S.S.等人，Blood 76(1990)31-35)中有描述。EPO-R的活化通过二聚化发生(Matthews，D.J.，PNAS 93(1996)9471-9476)。EPO-R包含8个细胞质酪氨酸位点，其在用EPO刺激后被磷酸化(Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709；Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(1997)1806-1810)，导致“活化的EPO-R”。
抗EPO-R抗体记载于例如Andrea，A.D.，Blood 82(1993)46-52；Elliott，S.，Blood 107(2006)1892-1895；Kirkeby，A.，J.Nerosci.164(2007)50-58；Miura，O.，Arch.Biochem.306(1993)200-208；和EP 1 146 056，EP 1 327 681，EP 0 773 962，EP 0 776 370，US 2002/0031806，US 2003/0215444，US 2004/0058393，US 2004/0071694，US 2004/0175379，US 2005/0227289，US 2005/0244409，US 2006/0018902，US 6,998,124，US 7,053,184，US 7,081,523，WO 1995/005469，WO 1996/003438，WO 2000/061637，WO 2004/035603A2，WO 2005/100403A2。然而在目前已知的技术水平中，针对EPO-R的已知抗体不能够区分非活化的和活化的EPO-R(见Jelkmann，W.等人，Crit.Rev.Onc/Hematol.67(2008)39-61；Li，K.等人，J.Biol.Chem.278(2003)40702-40709，和Wu，H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94(1997)1806-1810)。
发明概述
本发明包含特异性结合活化的人EPO受体和区分非活化的和活化的EPO-R的抗体，其允许对EPO-R活化的特定分析，尤其是在来自人组织的细胞和活组织(biopsy)中。
本发明包含抗体，其特征在于特异性结合在第430位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ ID NO：25)，在第461位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)，或在第465位(下划线)包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)人EPO受体片段。
编号涉及不含信号肽的UniProtKB/Swiss-Prot P19235的EPO受体氨基酸序列。
根据本发明的抗体不结合在第430位没有磷酸酪氨酰残基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ ID NO：25)，在第461位没有磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)，或在第465位没有磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)EPO受体片段。
根据本发明的抗体在UT7细胞裂解物中特异性结合磷酸化的(活化的)EPO受体，所述细胞以100.000至500.000受体/细胞(EPO-R表达细胞)的量表达EPO-R并用500pM EPO处理以活化。根据本发明的抗体在表达EPO受体但不用EPO处理的UT7细胞裂解物中不结合EPO受体。可通过蛋白质印迹测量这些结合。
优选地本发明包含与人EPO-R结合的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：1，9或17的CDR3区作为重链可变结构域CDR3区。
优选地所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：1的CDR3区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR1区，或SEQ ID NO：9的CDR3区、SEQ ID NO：10的CDR2区和SEQ ID NO：11的CDR1区，或SEQ IDNO：17的CDR3区，SEQ ID NO：18的CDR2区和SEQ ID NO：19的CDR1区。
优选的所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：1的CDR3区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR1区，和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：4的CDR3区，SEQ ID NO：5的CDR2区和SEQ ID NO：6的CDR1区。
优选的所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：9的CDR3区、SEQ ID NO：10的CDR2区和SEQ ID NO：11的CDR1区，和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：12的CDR3区，SEQ ID NO：13的CDR2区和SEQ ID NO：14的CDR1区。
优选的所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：17的CDR3区，SEQ ID NO：18的CDR2区和SEQ ID NO：19的CDR1区和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：20的CDR3区，SEQ ID NO：21的CDR2区和SEQ IDNO：22的CDR1区。
优选地所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：7，15或23。
优选地所述抗体的特征在于轻链可变结构域包含SEQ ID NO：8，16或24。
优选地所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：7和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：8。
优选地所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：15和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：16。
优选地所述抗体的特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：23和轻链可变结构域包含SEQ ID NO：24。
优选地根据本发明的抗体的特征在于以至少10-8M-1至10-12M-1的结合亲和力结合EPO-R。
本发明的另一个实施方案是编码根据本发明的抗体的重链和轻链的核酸。
人和其他恒定链是目前技术水平中熟知的并由例如Kabat(见例如Johnson，G.和Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)描述。抗体进一步优选地为小鼠来源并包含根据Kabat的小鼠抗体的抗体可变序列框(见例如Johnson，G.和Wu，T.T.，Nucleic Acids Res.28(2000)214-218)。
根据本发明的抗体优选为小鼠、兔或人来源的。在人抗体中优选IgG1同种型。
本发明还提供了包含本发明的核酸、能够在原核或真核宿主细胞中表达所述核酸的表达载体，和用于重组生产这样的抗体的包含这些载体的宿主细胞。
本发明还包含含有根据本发明的载体的原核或真核宿主细胞。
本发明还包含制备根据本发明的重组人或人源化抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达根据本发明的核酸，和从所述细胞或细胞培养上清中回收所述抗体。本发明还包含可通过这样的重组方法得到的抗体。
本发明还包含根据本发明的抗体在测定/检测具有/表达活化的EPO受体的哺乳动物细胞中的用途。
优选地使用根据本发明的抗体测定人组织样品的活组织裂解物中的活化的EPO受体。优选地通过蛋白质印迹进行这样的检测。
发明详述
术语“抗体”包含抗体结构的多种形式，包括但不限于整个抗体和抗体片段。
“抗体片段”包含全长抗体的一部分，优选其可变结构域，或至少其抗原结合位点。抗体片段的示例包括双抗体、单链抗体分子和由抗体片段形成的多特异性抗体。在例如Houston，J.S.，Methods Enzymol.203(1991)46-88中描述了scFv抗体。此外，抗体片段包含具有VH结构域(即能够与VL结构域共同组装)或结合EPO-R的VL结构域(即能够与VH结构域共同组装为功能性抗原结合位点)的特征的单链多肽，由此提供具有特异性结合人EPO-R特性的抗体。
术语“人源化抗体”指这样的抗体，其框架和/或“互补决定区”(CDR)被修饰以包含与亲本免疫球蛋白的CDR相比不同物种的免疫球蛋白的CDR。在优选的实施方案中，将小鼠CDR移植到人抗体的框架区以制备“人源化抗体”。见例如Riechmann，L.等人，Nature 332(1988)323-327；和Neuberger，M.S.等人，Nature 314(1985)268-270。
术语“包含SEQ ID NO：1的重链CDR3区”表示抗体包含SEQ ID NO：1的氨基酸序列作为其重链CDR3区的序列。用相同的方式表示抗体的其他5个CDR区。
如此处使用的术语“结合活化的EPO-R”指抗体与人的活化EPO-R在通过蛋白质印迹测量的生化结合测定中的结合。如果抗体在1μg/ml抗体浓度下引起400或更高的S/N(信号/噪音)比，则认为结合。如此处使用的术语“不结合EPO-R”指抗体与人EPO-R在通过蛋白质印迹测量的生化结合测定中的结合。如果抗体在1μg/ml抗体浓度下引起低于400的S/N(信号/噪音)比，则认为不结合。在蛋白质印迹中检测不到根据本发明的抗体与非活化EPO R的结合，因此S/N比甚至低于10和优选低于约1或更低。
如此处使用的术语“EPO与EPO受体的结合”指EPO与人的活化EPO-R在通过蛋白质印迹测量的生化结合测定中的结合。如果EPO在1μg/ml的EPO浓度下引起不超过10的S/N(信号/噪音)比，则认为不结合。
如此处使用的术语“pY430”指对应成熟人红细胞生成素受体的第424-437位残基的在第430位包含磷酸酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(TPPHLKYLYLVVSD，SEQ ID NO：25)。如此处使用的术语“pY461”指对应成熟人红细胞生成素受体的第455-471位残基的在第461位包含磷酸酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(GLSDGPYSNPYENSLIP，SEQ ID NO：26)。如此处使用的术语“pY465”指对应成熟人红细胞生成素受体的第455-471位残基的在第465位包含磷酸酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(GLSDGPYSNPYENSLIP，SEQ ID NO：26)。
根据本发明的抗体的特征在于在0.1μg/ml的抗体浓度下在ELISA中以10或更高的S/N比特异性结合pY430，pY461或pY465。
如此处使用的术语“可变结构域”(轻链的可变结构域(VL)，重链的可变结构域(VH))表示轻链和重链结构域中的每对结构域，其直接参与抗体与抗原的结合。可变轻链和重链结构域具有相同的大体结构，每个结构域包含4个序列高度保守的框架(FR)区，FR区通过3个“高变区”(或互补决定区，CDR)连接。框架区采用β-折叠构象，CDR可能形成连接β-折叠结构的环。在每条链中的CDR通过框架区维持其三维结构并与来自其他链的CDR共同形成抗原结合位点。抗体的重链和轻链CDR3区在根据本发明的抗体的结合特异性/亲和力中发挥特别重要的作用，因此提供了本发明的另一个目的。
如此处使用的术语“抗体的抗原结合部分”指负责抗原结合的抗体的氨基酸残基。抗体的抗原结合部分包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基。“框架”或“FR”区是除了如此处定义的高变区残基以外的那些可变结构域。因此，抗体的轻链和重链可变区从N-到C-端包含FR1，CDR1，FR2，CDR2，FR3，CDR3和FR4结构域。特别地，重链的CD3是对抗原结合贡献最大并定义抗体性能的区域。CDR和FR区根据Kabat等人，Sequencesof Proteins of Immunological Interest，第五版，Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD(1991)的标准定义确定，和/或为来自“高变环”的那些残基。
如此处使用的术语“核酸”或“核酸分子”旨在包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可为单链或双链，但优选双链DNA。
在本申请中使用的术语“氨基酸”表示天然存在的羧基α-氨基酸组，包含丙氨酸(三字母编码：ala单字母编码：A)，精氨酸(arg，R)，天冬酰胺(asn，N)，天冬氨酸(asp，D)，半胱氨酸(cys，C)，谷氨酰胺(gln，Q)，谷氨酸(glu，E)，甘氨酸(gly，G)，组氨酸(his，H)，异亮氨酸(ile，I)，亮氨酸(leu，L)，赖氨酸(lys，K)，甲硫氨酸(met，M)，苯丙氨酸(phe，F)，脯氨酸(pro，P)，丝氨酸(ser，S)，苏氨酸(thr，T)，色氨酸(trp，W)，酪氨酸(tyr，Y)和缬氨酸(val，V)。
当将核酸置于与另一种核酸的功能性关系中时，核酸为“有效连接的”。例如，如果前序列或分泌前导DNA被表达为参与多肽分泌的前蛋白，则其与多肽DNA是有效连接的；如果启动子或增强子影响编码序列的转录，则其与编码序列是有效连接的；或如果核糖体结合位点处于有助于翻译的位置，则其与编码序列是有效连接的。通常，“有效连接”指连接的DNA序列是共线的，在分泌前导的情况下，连接的DNA序列是连续的且依读框的。然而，增强子不需要是连续的。通过在方便的限制位点的连接反应完成连接。如果这样的位点不存在，则依照传统做法是使用合成的寡核苷酸衔接子或接头。
如此处使用的，表达“细胞”、“细胞系”和“细胞培养物”可互换使用并且所有这些名称包括子代。因此，措辞“转化体”和“转化细胞”包括原代对象细胞和来源于其的培养物，不考虑转移次数。也应当理解，所有后代在DNA内容中可能不完全相同，由于无意或无意突变。也包括与筛选的原始转化细胞具有相同功能或生物学活性的突变后代。
有用的人重链恒定区示例包含SEQ ID NO：23的氨基酸。有用的人轻链恒定区示例包含SEQ ID NO：24的κ-轻链恒定区的氨基酸序列。
本发明包含检测或测定人细胞组织和活组织中的活化EPO-R的方法。
本发明包含根据本发明的抗体在诊断人细胞组织和活组织中的活化EPO-R的用途。
本发明包含根据本发明的抗体在准备用于检测或测定人细胞组织和活组织中的活化EPO-R的诊断测定中的用途。
根据本发明的抗体另外包括这样的抗体，其具有“保守序列修饰”(变体抗体)，不影响或改变根据本发明的抗体的上述特征的核苷酸和氨基酸序列修饰。可通过本领域已知的标准技术例如定点突变和PCR介导的突变引入修饰。保守氨基酸取代包括这样的氨基酸取代，其中氨基酸残基被替换为具有类似侧链的氨基酸残基。本领域已定义了具有类似侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)，无电荷极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)，β-分支侧链(例如苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此，在人抗EPO-R抗体中的预测的非必需氨基酸残基可优选的替换为来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基。因此此处的“变体”抗EPO-R抗体指这样的分子，其氨基酸序列与“亲本”抗EPO-R抗体的氨基酸序列在亲本抗体的一个或多个可变区具有多达10个，优选从约2至约5个添加、缺失和/或取代的差异。可通过基于Riechmann，L.等人，Nature 332(1988)323-327和Queen，C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033描述的分子建模突变进行氨基酸取代。
优选地通过重组方法制备根据本发明的抗体。这些方法在目前的技术水平中是广泛已知的，包含在原核和真核细胞中的蛋白质表达和之后的抗体多肽的分离以及通常纯化至可药用的纯度。用于蛋白质表达，将编码轻链和重链或其片段的核酸通过标准方法插入表达载体。在合适的原核或真核宿主细胞例如CHO细胞、NS0细胞、SP2/0细胞、HEK293细胞、COS细胞、酵母或大肠杆菌细胞中进行表达，并从细胞中(从上清中或在细胞裂解以后)回收抗体。
抗体的重组制备在目前的技术水平中是熟知的并在例如Makrides，S.C.，Protein Expr.Purif.17(1999)183-202；Geisse，S.等人，Protein Expr.Purif.8(1996)271-282；Kaufman，R.J.，Mol.Biotechnol.16(2000)151-161；Werner，R.G.，Drug Res.48(1998)870-880的综述文章中描述。
抗体可在整个细胞、细胞裂解物中或以部分纯化的或基本纯化的形式存在。通过标准技术包括碱/SDS处理、CsCl梯度离心(banding)、柱层析、琼脂糖凝胶电泳和本领域熟知的其他技术进行纯化以去除其他细胞成分或其他污染物，例如其他细胞核酸或蛋白质。见Ausubel，F.，等人，ed.Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing and WileyInterscience，New York(1987)。
例如Barnes，L.M.，等人，Cytotechnology 32(2000)109-123；Barnes，L.M.，等人，Biotech.Bioeng.73(2001)261-270描述了在NS0细胞中的表达。例如Durocher，Y.，等人，Nucl.Acids.Res.30(2002)E9描述了瞬时表达。Orlandi，R.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)3833-3837；Carter，P.，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(1992)4285-4289；Norderhaug，L.，等人，J.Immunol.Methods 204(1997)77-87描述了可变区的克隆。Schlaeger，E.-J.和Christensen，K.，in Cytotechnology 30(1999)71-83和Schlaeger，E.-J.，inJ.Immunol.Methods 194(1996)191-199描述了优选的瞬时表达系统(HEK 293)。
通过传统免疫球蛋白纯化程序例如蛋白质A-琼脂糖、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析从培养基中适当地分离单克隆抗体。使用传统程序可容易的分离和测序编码单克隆抗体的DNA和RNA。杂交瘤细胞可作为这些DNA和RNA的来源。一旦被分离，DNA可被插入表达载体，然后将其转染进原本不产生免疫球蛋白的宿主细胞例如HEK 293细胞、CHO细胞或骨髓瘤细胞，以获得重组单克隆抗体在宿主细胞中的合成。
通过引入合适的核苷酸改变至抗体编码DNA或通过肽合成产生人EPO-R抗体的氨基酸序列变体。可进行这些修饰，然而仅在非常有限的范围内，例如如上述的那些。例如，修饰不改变上述抗体的特征例如IgG同种型和表位结合，但可改进重组生产的产量、蛋白质的稳定性或易化纯化。
也可取代与维持抗EPO-R抗体的适当构象无关的任意半胱氨酸残基，通常将其取代为丝氨酸以改进分子的氧化稳定性和避免异常交联。相反地，可在抗体中加入半胱氨酸键以改进其稳定性(特别是当抗体为抗体片段例如Fc片段时)。
通过本领域已知的多种方法制备编码抗EPO-R抗体的氨基酸序列变体的核酸分子。这些方法包括但不限于从天然来源(在天然存在的氨基酸序列变体的情况下)分离或通过以前制备的人源化抗EPO-R抗体的变体或非变体形式的寡核苷酸介导的(或定点)突变、PCR突变和盒式突变制备。
根据本发明的重链和轻链可变结构域与启动子、翻译起点、恒定区、3’非翻译区、多聚腺苷酸化和转录终止序列组合以形成表达载体构建体。重链和轻链表达构建体可组合为单个载体，共转染、连续转染或分别转染至宿主细胞，然后其融合以形成表达2种链的单个宿主细胞。
在另一个方面，本发明提供了诊断组合物，例如用于在人细胞组织和活组织中的活化EPO-R的测定。
序列描述
SEQ ID NO：1重链CDR3，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：2重链CDR2，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：3重链CDR1，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：4轻链CDR3，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：5轻链CDR2，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：6轻链CDR1，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：7重链可变区，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：8轻链可变区，Mab C1.16.7.5
SEQ ID NO：9重链CDR3，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：10重链CDR2，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：11重链CDR1，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：12轻链CDR3，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：13轻链CDR2，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：14轻链CDR1，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：15重链可变区，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：16轻链可变区，Mab C1.8.7.16
SEQ ID NO：17重链CDR3，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：18重链CDR2，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：19重链CDR1，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：20轻链CDR3，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：21轻链CDR2，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：22轻链CDR1，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：23重链可变区，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：24轻链可变区，Mab C1.24.11.31
SEQ ID NO：25合成肽
SEQ ID NO：26合成肽
附图简述
图1：人EPOR在UT-7_EPOR细胞中的时间依赖性磷酸化。使用针对磷酸化人EPOR的不同单克隆抗体染色的UT7-EPOR细胞裂解物的蛋白质印迹分析。(a)pY430(C1.16.7.5)，(b)pY461(C1.8.7.16)，(c)pY465(C1.24.11.31)。仅在用EPO刺激细胞后，所有单克隆抗体特异性检测EPOR，未刺激的细胞(-)不被抗体标记。使用GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶)作为上样对照。
实施例1
磷酸-特异性EPOR单克隆抗体的生成
pY430(C1.16.7.5)：使用对应成熟人红细胞生成素受体的第424-437位残基的在第430位包含磷酸-酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(TPPHLKYLYLVVSD，SEQ ID NO：25)作为免疫原。
pY461(C1.8.7.16)：使用对应成熟人红细胞生成素受体的第455-471位残基的在第461位包含磷酸-酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(GLSDGPYSNPYENSLIP，SEQ ID NO：26)作为免疫原。
pY465(C1.24.11.31)：使用对应成熟人红细胞生成素受体的第455-471位残基的在第465位包含磷酸-酪氨酰残基的17个氨基酸的合成肽(GLSDGPYSNPYENSLIP，SEQ ID NO：26)作为免疫原。
用于免疫，将肽通过C端半胱氨酸与KLH偶联。用免疫原每4周免疫Balb/c小鼠1次，免疫3次，然后在融合前4天通过静脉注射加强免疫，收获脾细胞并与Ag8骨髓瘤细胞融合。使用肽包被的ELISA微滴定板根据标准程序通过对肽的磷酸-对非-磷酸(否则与磷酸肽相同)形式的差别检验完成磷酸特异性抗体的筛选。选择抗体克隆，因为其在用EPO刺激的细胞裂解物的蛋白质印迹中检测到一条对应EPOR的特异条带(实施例2)。
SDS-PAGE和蛋白质印迹：
根据标准程序和Invitrogen的
凝胶系统进行SDS-PAGE和蛋白质印迹。将对应5.104-105细胞的裂解物上样至
Novex 4-12％Bis-Tris凝胶的各道中。然后将蛋白质转移至PVDF(聚偏氟乙烯)膜上并与抗体和抗GAPDH抗体(Abcam m9484，Abcam plc UK)孵育，室温2小时或4℃过夜。清洗后，将膜与抗小鼠IgG-POD缀合物孵育并用ECL试剂(Lumi-LightPLUS蛋白质印迹底物，Roche Applied Science#2015218)显色。
根据仅特异性结合活化EPO受体且不结合非活化EPO受体选择C1.24.11.31，C1.16.7.5和C1.8.7.16抗体(图1)。
实施例2
UT-7细胞的活化
UT-7细胞系是人因子-依赖性红白血病细胞系(人骨髓急性髓细胞白血病细胞系DSMZ：ACC 137)，需要EPO用于长期生长。在另外包含L-谷氨酰胺(2mM)，非必需氨基酸(1x)和丙酮酸钠(1mM)(饥饿培养基)和添加10％胎牛血清和10U/ml GM-CSF的RPMI培养基中维持UT-7细胞。在与未转导细胞(25U/ml GM-CSF而不是10U/ml)相同的培养基中维持转导细胞(UT7/EPOR)，另外加入0.4mg/ml博来霉素(zeocine)。在每次刺激前，将细胞在添加L-谷氨酰胺(2mM)，非必需氨基酸(1x)，丙酮酸钠(1mM)和0.1％胎牛血清的RPMI培养基中孵育过夜使其饥饿。
转导：
用编码hEPOR和pVSV-G的逆转录病毒表达载体(编码弹状病毒水疱性口炎病毒G糖蛋白的表达载体)瞬间转染的GP2-293(ClontechLaboratories，Inc)细胞上清转导UT-7细胞。转导后2天将培养基替换为新鲜补充的包含0.4mg/ml博来霉素和25U/ml GM-CSF的RPMI。在选择后得到在其表面稳定表达EPOR的UT-7细胞的细胞系。
刺激：
血清饥饿的细胞用在饥饿培养基(补充0.1％胎牛血清)中的500pM红细胞生成素于指示的时候在37℃刺激1、3和5分钟。刺激后离心细胞，丢弃培养基并将沉淀孵育在冰冷的裂解缓冲液[Tris 20mM(pH7.4)，NaCl137mM，甘油10％，
P-401％，蛋白酶抑制剂1x(Pierce，#78410)，磷酸酶抑制剂1x(Pierce#78420)]中，4℃30分钟，然后在4℃13000rpm离心10分钟。在还原剂存在下在样品缓冲液(
Invitrogen)中煮沸裂解物上清或者直接用于SDS-PAGE。
根据如实施例1中描述的标准程序在用对应的生物素化肽包被的微滴定板上通过ELISA检测Mab的特异性结合。在1分钟以内已经可显示人EPOR的明显活化，而未刺激的细胞没有显示任何可检测的基础水平的活化。
实施例3
用于Mab与EPO活化的UT-7/EPOR细胞的结合的蛋白质印迹测定
如上述刺激UT7/EPOR细胞并通过蛋白质印迹分析。在蛋白质印迹中，Mab在用0.5nM EPO刺激1-5分钟的细胞中识别一条MW 66kD的对应EPOR的条带(图1)。在1分钟以内已经可显示人EPOR的明显活化，而未刺激的细胞没有显示任何可检测的基础水平的活化(图1)。使用GAPDH作为上样对照。因此，这些抗体特异性分析了ESA(红细胞生成素刺激剂)对EPOR的活化。
Claims (14)
1.结合EPO受体的抗体，其特征在于特异性结合在第430位包含磷酸酪氨酰残基的TPPHLKYLYLVVSD(SEQ ID NO：25)，在第461位包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)或在第465位包含磷酸酪氨酰残基的GLSDGPYSNPYENSLIP(SEQ ID NO：26)EPO受体片段。
2.根据权利要求1的抗体，其特征在于包含SEQ ID NO：1、9或17的CDR3区作为重链可变结构域CDR3区。
3.根据权利要求1的抗体，其特征在于重链可变结构域包含SEQ ID NO：1的CDR3区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR1区，或SEQ IDNO：9的CDR3区、SEQ ID NO：10的CDR2区和SEQ ID NO：11的CDR1区，或SEQ ID NO：17的CDR3区，SEQ ID NO：18的CDR2区和SEQ ID NO：19的CDR1区。
4.根据权利要求1或2的抗体，其特征在于在重链可变结构域中包含SEQ ID NO：7和在轻链可变结构域中包含SEQ ID NO：8，或在重链可变结构域中包含SEQ ID NO：15和在轻链可变结构域中包含SEQ ID NO：16，或在重链可变结构域中包含SEQ ID NO：23和在轻链可变结构域中包含SEQ IDNO：24。
5.编码根据权利要求3的抗体的重链的核酸，所述重链的特征在于包含SEQ ID NO：1的CDR3区、SEQ ID NO：2的CDR2区和SEQ ID NO：3的CDR1区，或SEQ ID NO：9的CDR3区、SEQ ID NO：10的CDR2区和SEQ ID NO：11的CDR1区，或SEQ ID NO：17的CDR3区、SEQ ID NO：18的CDR2区和SEQID NO：19的CDR1区。
6.编码根据权利要求4的抗体的重链的核酸，所述重链的特征在于包含SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：19作为可变结构域。
7.制备包含根据权利要求1至4的抗体的诊断试剂盒的方法。
8.表达载体，其特征在于包含根据权利要求5或6的核酸。
9.原核或真核宿主细胞，其特征在于包含根据权利要求8的载体。
10.制备根据权利要求3或4的重组人或人源化抗体的方法，其特征在于在原核或真核宿主细胞中表达根据权利要求5或6的核酸，并从所述细胞或细胞培养上清中回收所述抗体。
11.根据权利要求1至4的抗体在测定人细胞组织和活组织中的活化EPO受体中的用途。
12.根据权利要求11的用途，其特征在于样品为人组织裂解物。
13.根据权利要求12的用途，其特征在于通过蛋白质印迹或ELISA进行测定。
14.根据权利要求1至4的抗体，用于测定人细胞组织和活组织中的活化EPO受体。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP09000499.5 | 2009-01-15 | ||
| EP09000499 | 2009-01-15 | ||
| PCT/EP2010/000130 WO2010081679A2 (en) | 2009-01-15 | 2010-01-13 | Antibodies against human epo receptor |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102282174A true CN102282174A (zh) | 2011-12-14 |
| CN102282174B CN102282174B (zh) | 2014-02-26 |
Family
ID=40379757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201080004518.2A Expired - Fee Related CN102282174B (zh) | 2009-01-15 | 2010-01-13 | 抗人epo受体的抗体 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9221909B2 (zh) |
| EP (1) | EP2387586B1 (zh) |
| JP (4) | JP2012514985A (zh) |
| CN (1) | CN102282174B (zh) |
| CA (3) | CA2748758C (zh) |
| ES (1) | ES2528219T3 (zh) |
| SG (1) | SG172927A1 (zh) |
| WO (1) | WO2010081679A2 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102131829A (zh) * | 2008-08-28 | 2011-07-20 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗人epo受体抗体 |
Families Citing this family (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ603525A (en) | 2008-06-27 | 2015-02-27 | Celgene Avilomics Res Inc | Pyrimidine based compound and uses thereof |
| US11351168B1 (en) | 2008-06-27 | 2022-06-07 | Celgene Car Llc | 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors |
| US8338439B2 (en) | 2008-06-27 | 2012-12-25 | Celgene Avilomics Research, Inc. | 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors |
| ES2528219T3 (es) * | 2009-01-15 | 2015-02-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos contra el receptor de la EPO humana |
| PT2603081T (pt) | 2010-08-10 | 2017-01-13 | Celgene Avilomics Res Inc | Sal de besilato de um inibidor de btk |
| ES2776002T3 (es) | 2010-11-01 | 2020-07-28 | Celgene Car Llc | Compuestos heterocíclicos y usos de los mismos |
| JP5956999B2 (ja) | 2010-11-01 | 2016-07-27 | セルジーン アヴィロミクス リサーチ， インコーポレイテッド | ヘテロアリール化合物およびその使用 |
| EP2637502B1 (en) | 2010-11-10 | 2018-01-10 | Celgene CAR LLC | Mutant-selective egfr inhibitors and uses thereof |
| BR112013032235A2 (pt) | 2011-06-15 | 2016-11-22 | Hoffmann La Roche | anticorpos do receptor de epo anti-humano e métodos de uso |
| US9364476B2 (en) | 2011-10-28 | 2016-06-14 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Methods of treating a Bruton's Tyrosine Kinase disease or disorder |
| MY185243A (en) | 2012-03-15 | 2021-04-30 | Celgene Car Llc | Salts of an epidermal growth factor receptor kinase inhibitor |
| CA2866852C (en) | 2012-03-15 | 2020-12-29 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Solid forms of an epidermal growth factor receptor kinase inhibitor |
| CN104968678B (zh) | 2012-12-05 | 2018-12-11 | 诺华股份有限公司 | 靶向epo的抗体的组合物和方法 |
| US9126950B2 (en) | 2012-12-21 | 2015-09-08 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Heteroaryl compounds and uses thereof |
| WO2014124230A2 (en) | 2013-02-08 | 2014-08-14 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Erk inhibitors and uses thereof |
| US9492471B2 (en) | 2013-08-27 | 2016-11-15 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Methods of treating a disease or disorder associated with Bruton'S Tyrosine Kinase |
| US9415049B2 (en) | 2013-12-20 | 2016-08-16 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Heteroaryl compounds and uses thereof |
| WO2016025561A1 (en) | 2014-08-13 | 2016-02-18 | Celgene Avilomics Research, Inc. | Forms and compositions of an erk inhibitor |
| CN107922975B (zh) | 2015-08-12 | 2022-06-28 | 诺华股份有限公司 | 治疗眼科病症的方法 |
| JP7320291B2 (ja) | 2021-07-12 | 2023-08-03 | 有限会社 エコ・ライス新潟 | 液体冷凍保存用容器及び飲料の長期保存方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1686543A (zh) * | 2005-05-09 | 2005-10-26 | 叶新新 | Mods－mof的干预治疗药物epo抗体epo受体与制造方法及动物模型 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE323771T1 (de) | 1993-08-16 | 2006-05-15 | Jong Y Lee | Fragment des menschlichen erythropoietinrezeptors und antikörper dagegen |
| US5885574A (en) | 1994-07-26 | 1999-03-23 | Amgen Inc. | Antibodies which activate an erythropoietin receptor |
| US6998124B1 (en) | 1999-04-14 | 2006-02-14 | Smithkline Beecham Corporation | Erythropoietin receptor antibodies |
| JP2002544123A (ja) | 1999-04-14 | 2002-12-24 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | エリトロポイエチン受容体抗体 |
| US20040058393A1 (en) | 2000-04-17 | 2004-03-25 | Naoshi Fukishima | Agonist antibodies |
| WO2002033073A1 (fr) | 2000-10-20 | 2002-04-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Anticorps agoniste degrade |
| EP1654377A4 (en) | 2002-03-01 | 2010-03-24 | Roger Williams Hospital | PROCESSES AND COMPOSITIONS RELATED TO THE SHC PROTEIN FOR THE PROGNOSIS OF BREAST, PROSTATE AND EGG CANCER |
| JP2003310276A (ja) * | 2002-04-30 | 2003-11-05 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | １２１４位チロシンがリン酸化したＫＤＲ／Ｆｌｋ−１に対する情報伝達分子の結合を阻害する物質およびその利用方法 |
| US7396913B2 (en) | 2002-10-14 | 2008-07-08 | Abbott Laboratories | Erythropoietin receptor binding antibodies |
| TWI320716B (en) | 2002-10-14 | 2010-02-21 | Abbott Lab | Erythropoietin receptor binding antibodies |
| US20040071694A1 (en) | 2002-10-14 | 2004-04-15 | Devries Peter J. | Erythropoietin receptor binding antibodies |
| JP2005089354A (ja) * | 2003-09-16 | 2005-04-07 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | リン酸化されたβカテニンを選択的に認識する抗体 |
| US20050227289A1 (en) | 2004-04-09 | 2005-10-13 | Reilly Edward B | Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof |
| US20060018902A1 (en) | 2004-04-09 | 2006-01-26 | Reilly Edward B | Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof |
| AR060440A1 (es) * | 2006-04-14 | 2008-06-18 | Amgen Inc | Agonistas receptores de eritropoietina |
| ES2528219T3 (es) * | 2009-01-15 | 2015-02-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Anticuerpos contra el receptor de la EPO humana |
-
2010
- 2010-01-13 ES ES10700705.6T patent/ES2528219T3/es active Active
- 2010-01-13 JP JP2011545672A patent/JP2012514985A/ja active Pending
- 2010-01-13 CN CN201080004518.2A patent/CN102282174B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-13 SG SG2011050168A patent/SG172927A1/en unknown
- 2010-01-13 CA CA2748758A patent/CA2748758C/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-13 US US13/144,671 patent/US9221909B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-13 CA CA3018087A patent/CA3018087C/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-13 CA CA2965031A patent/CA2965031C/en not_active Expired - Fee Related
- 2010-01-13 EP EP10700705.6A patent/EP2387586B1/en not_active Not-in-force
- 2010-01-13 WO PCT/EP2010/000130 patent/WO2010081679A2/en active Application Filing
-
2014
- 2014-05-14 JP JP2014100146A patent/JP5980265B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-06-22 JP JP2016123178A patent/JP6143921B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2017
- 2017-05-09 JP JP2017092761A patent/JP6363255B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1686543A (zh) * | 2005-05-09 | 2005-10-26 | 叶新新 | Mods－mof的干预治疗药物epo抗体epo受体与制造方法及动物模型 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AGNETE KIRKEBY ET AL.: "Functional and immunochemical characterisation of different antibodies against the erythropoietin receptor", 《JOURNAL OF NEUROSCIENCE METHODS》 * |
| HONG WU ET AL.: "Functional interaction of erythropoietin and stem cell factor receptors is essential for erythroid colony formation", 《PNAS》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102131829A (zh) * | 2008-08-28 | 2011-07-20 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 抗人epo受体抗体 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA3018087C (en) | 2019-09-24 |
| CA3018087A1 (en) | 2010-07-22 |
| JP6143921B2 (ja) | 2017-06-07 |
| WO2010081679A2 (en) | 2010-07-22 |
| US20120122120A1 (en) | 2012-05-17 |
| CN102282174B (zh) | 2014-02-26 |
| EP2387586A2 (en) | 2011-11-23 |
| JP2012514985A (ja) | 2012-07-05 |
| WO2010081679A3 (en) | 2010-09-23 |
| CA2965031C (en) | 2018-12-04 |
| EP2387586B1 (en) | 2014-12-17 |
| CA2965031A1 (en) | 2010-07-22 |
| CA2748758A1 (en) | 2010-07-22 |
| JP5980265B2 (ja) | 2016-08-31 |
| CA2748758C (en) | 2017-06-13 |
| JP2016190862A (ja) | 2016-11-10 |
| US9221909B2 (en) | 2015-12-29 |
| SG172927A1 (en) | 2011-08-29 |
| JP6363255B2 (ja) | 2018-07-25 |
| JP2014204721A (ja) | 2014-10-30 |
| ES2528219T3 (es) | 2015-02-05 |
| JP2017136093A (ja) | 2017-08-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102282174B (zh) | 抗人epo受体的抗体 | |
| US20230279142A1 (en) | Humanized anti-muc1* antibodies | |
| US20210122815A1 (en) | Anti-interleukin-17a antibody, pharmaceutical composition thereof and use thereof | |
| KR20230018488A (ko) | 신종 코로나바이러스 스파이크 단백질 결합 분자 및 이의 응용 | |
| CN108251431B (zh) | 双载体系统及其用途 | |
| CN116635071A (zh) | 抗tspan8-抗cd3双特异性抗体和抗tspan8抗体 | |
| CN115109154A (zh) | 一种靶向cldn18.2的抗体或其抗原结合片段及其应用 | |
| CN115386006A (zh) | 抗gprc5d抗体、其制备方法与用途 | |
| CN115386007A (zh) | 抗gprc5d抗体、其制备方法与用途 | |
| TW202309083A (zh) | 抗ｃｌｄｎ４－抗ｃｄ１３７雙特異性抗體 | |
| CN115505043A (zh) | 特异性结合糖基化ceacam5的抗体 | |
| US20240150460A1 (en) | Anti-nkp30 antibody and application thereof | |
| CN115746144A (zh) | 抗tigit-pd1双特异性抗体及其应用 | |
| CN117700558B (zh) | 一种单克隆抗gprc5d抗体和抗gprc5d-car-nk细胞 | |
| US12122839B2 (en) | IFNGR binding synthetic cytokines and methods of use | |
| CN118666996A (zh) | 结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV刺突蛋白RBD表位的中和抗体ZJ-11及其应用 | |
| CN118359710A (zh) | 结合冠状病毒SARS-CoV-2和SARS-CoV刺突蛋白RBD的中和抗体ZJ-2及其应用 | |
| EA046350B1 (ru) | Анти-интерлейкин-17а антитело, фармацевтическая композиция и их применение |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140226 |