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CN102240278A - 治疗与视黄醇有关的疾病的方法、分析和组合物 - Google Patents

治疗与视黄醇有关的疾病的方法、分析和组合物 Download PDF

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CN102240278A
CN102240278A CN2011101246344A CN201110124634A CN102240278A CN 102240278 A CN102240278 A CN 102240278A CN 2011101246344 A CN2011101246344 A CN 2011101246344A CN 201110124634 A CN201110124634 A CN 201110124634A CN 102240278 A CN102240278 A CN 102240278A
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J·利希特
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Abstract

本文描述了通过调节运甲状腺素蛋白(TTR)和视黄醇结合蛋白(RBP)在患者中的利用率来治疗某些与视黄醇有关的疾病和病症的方法和组合物。例如，该方法和组合物提供作治疗剂来治疗和/或预防与年龄相关的黄斑变性和/或营养不良、代谢性疾病、自发性颅内高压、骨肥厚和蛋白质错折叠和聚集疾病。所述的组合物可以用作单试剂治疗或与其他试剂或疗法联合使用。此外，本文描述了选择适当的可以调节TTR和RBP在患者中的利用率的试剂的方法和分析法。

Description

治疗与视黄醇有关的疾病的方法、分析和组合物
本申请是申请号200580041886.3、名称为“治疗与视黄醇有关的疾病的方法、分析和组合物”的中国专利申请的分案申请。
有关申请
本发明要求(a)2004年12月8日提交的美国临时申请序列号60/634,449，(b)2005年3月10日提交的美国临时申请序列号60/660,924，(c)2005年3月11日提交的美国临时申请序列号60/660,904，(d)2005年4月18日提交的美国临时申请序列号60/672,405和(e)2005年7月11日提交的美国临时申请序列号60/698,512的权益；在此将上述专利申请以整体引入本文作为参考。
技术领域
本文所述的方法和组合物涉及在患者中治疗与视黄醇有关的疾病，包括在患者中调节视黄醇结合蛋白(RBP)和运甲状腺素蛋白(TTR)的活性或利用率。
背景技术
类视黄醇对于维持正常生长、发展、免疫、再生、视力和其他生理过程是重要的。相反地，类视黄醇的产生或作用异常与疾病过程的表现有关。
例如，全世界超过1亿的儿童缺乏维生素A，导致这些儿童发生失明和死亡。在靶器官和组织，例如眼中维生素-A水平过量也会在许多视网膜疾病，包括黄斑变性中导致失明。很多种的病症，一般称作玻璃体视网膜疾病，可以作用于位于眼睛背面部分的玻璃体和视网膜，这些疾病包括视网膜病和黄斑变性和营养不良。黄斑变性是一组眼部疾病，是美国55岁及以上的人群中首要的致盲原因，影响了超过1000万美国人。一些研究表明，在下个十年新的黄斑变性的病例数将会增加6倍，具有了流行的特性。与年龄有关的黄斑变性或营养不良(一种特别地使人虚弱的疾病)导致视力逐渐丧失，并最终严重损害中央视觉。
异常水平的维生素A，和/或与其结合的运输蛋白(视黄醇结合蛋白(RBP)和运甲状腺素蛋白(TTR))也与其他疾病包括代谢性疾病的表现有关。一个例子是在糖尿病中观察到的，其中异常水平的视黄醇在I型和II型糖尿病患者中都可以见到，但在正常的患者中观察不到。其他疾病包括脑假瘤(PTC)、自发性颅内高压(IIH)和与骨有关的疾病包括颈椎病、脊骨肥厚和弥漫性特发性骨肥厚(DISH)。此外，维生素A和/或与其结合的运输蛋白，特别是TTR在蛋白质错折叠和聚集性疾病，例如阿尔茨海默病和系统性淀粉样变性中发挥作用。
与视黄醇有关的生理学表现有关的疾病仍然是世界性的一个问题。因此，需要提供一种治疗这些疾病的方法和组合物。
发明简述
本文描述的鉴定和检测试剂的方法和组合物，其中该试剂在哺乳动物中调节视黄醇结合蛋白(RBP)或运甲状腺素蛋白(TTR)水平或活性。同时本文描述的是鉴定化合物和治疗剂的分析法，以及通过施用化合物或治疗剂治疗患视黄醇有关的疾病的患者或病人的方法和组合物，其中所述施用导致在所述患者或病人中调节了RBP或TTR水平或活性。同时本文也描述了治疗患有与视黄醇有关的疾病的患者的方法，包括通过施用这些化合物在患者中调节RBP或TTR水平或活性。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中调节RBP或TTR转录的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中全反式视黄醛的产生。在一个实施方案中，该试剂可以选自RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中全反式视黄醛的产生。该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸，siRNA，脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、核酶和单克隆抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中全反式视黄醛的产生。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗RBP与视黄醇的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。该调节剂可以选自：视黄基衍生物、多卤化的芳香烃、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的视黄基衍生物是具有下列结构的化合物，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物：
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺、和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，所述取代基选自(C2-C7)烯基、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基、和杂环。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的视黄基衍生物是具有下列结构的化合物，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物：
Figure BSA00000495897200042
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2，或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，所述取代基选自(C2-C7)烯基、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基和杂环。
在进一步的实施方案中，(a)X1是NR2，其中R2是H或(C1-C4)烷基；(b)x是0；(c)x是1并且L1是-C(O)-；(d)R3是任选取代的芳基；(e)R3是任选取代的杂芳基；(f)X1是NH并且R3是任选取代的芳基，包括在进一步的实施方案中，(i)芳基具有1个取代基，(ii)芳基具有1个选自卤素、OH、O(C1-C4)烷基、NH(C1-C4)烷基、O(C1-C4)氟代烷基、和N[(C1-C4)烷基]2的取代基，(iii)芳基具有1个OH取代基，(v)芳基是苯基，或(vi)芳基是萘基；(g)该化合物是
或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物；(h)该化合物是4-羟苯基视黄酰胺，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物；(i)该化合物是4-甲氧苯基视黄酰胺，或(j)4-氧代芬维A胺，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物。
在进一步的实施方案中，施用通式(II)的化合物是用于治疗眼部病症，包括降低在患者体内降低血清视黄醇的水平。在进一步的实施方案中，(a)有效量的该化合物是系统性施用于该哺乳动物；(b)有效量的该化合物是口服施用于该哺乳动物；(c)有效量的该化合物是静脉施用于该哺乳动物；(d)有效量的该化合物是经眼施用于该哺乳动物；(e)有效量的该化合物是通过离子电渗疗法施用的；或(f)有效量的该化合物是通过注射施用于该哺乳动物。
在进一步的实施方案中，该哺乳动物是人，所包括的实施方案，(a)该人是Stargardt病的突变ABCA4基因的携带者或该人是Stargardt病的突变ELOV4基因的携带者，或在与年龄有关的黄斑变性有关的补体因子H中具有遗传变异，或(b)该人具有眼部疾病或特征，其中眼部疾病或特征选自Stargardt病、隐性视网膜色素变性、地图状萎缩(其中盲点是一个非限制性的例子)、光感受器变性、干性AMD、隐性锥体-杆体营养不良、渗出性(或湿性)与年龄有关的黄斑变性、锥体-杆体营养不良和视网膜色素变性。在一个进一步的实施方案中，该哺乳动物是视网膜变性的动物模型。
在进一步的实施方案中，该方法包括多次施用有效量的在哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂，包括的进一步实施方案，其中(i)多次施用之间的时间是至少一周；(ii)多次施用之间的时间是至少一天；和(iii)该化合物是基于每日施用于该哺乳动物；或(iv)该化合物是每12小时施用于该哺乳动物。在进一步的或可替代的实施方案中，该方法包括休药期，其中暂时停止药物的施用或暂时减少要施用的化合物的剂量；在休药期结束时，恢复化合物的剂量。休药期的长度可以是2天到1年不等。
在进一步的实施方案中，该方法包括施用至少一种其他试剂，选自一氧化氮产生的诱导物、抗炎剂、生理可接受的抗氧化剂、生理可接受的矿物质、带负电荷的磷脂、类癌瘤、他汀类、抗血管生成药、基质金属蛋白酶抑制剂、13-顺式-维甲酸(包括13-顺式-维甲酸的衍生物)、11-顺式-维甲酸(包括11-顺式-维甲酸的衍生物)、9-顺式-维甲酸(包括9-顺式-维甲酸的衍生物)和视黄胺的衍生物。在进一步的实施方案中，
(a)其他试剂是一氧化氮产生的诱导物，包括的实施方案，其中一氧化氮产生的诱导物选自瓜氨酸、鸟氨酸、硝基化的L-精氨酸、亚硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羟基-L-精氨酸、亚硝基化的N-羟基-L-精氨酸、硝基化的L-高精氨酸和亚硝基化的L-高精氨酸；
(b)其他试剂是抗炎剂，包括的实施方案，其中抗炎剂选自非甾体抗炎药、脂肪氧合酶抑制剂、泼尼松、地塞米松和环氧合酶抑制剂；
(c)其他试剂是至少一种生理可接受的抗氧化剂，包括其中生理可接受的抗氧化剂选自维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、辅酶Q和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基的实施方案，或以下实施方案，其中(i)至少一种生理可接受的抗氧化剂是与在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂施用，或(ii)至少两种生理可接受的抗氧化剂是与在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂施用；
(d)其他试剂是至少一种生理可接受的矿物质，包括其中生理可接受的矿物质选自锌(II)化合物、铜(II)化合物和硒(II)化合物的实施方案，或进一步包含给哺乳动物施用生理可接受的抗氧化剂的实施方案；
(e)其他试剂是带负电荷的磷脂，包括其中带负电荷的磷脂是磷脂酰甘油的实施方案；
(f)其他试剂是类胡萝卜素，包括其中类胡萝卜素选自叶黄素和玉米黄素的实施方案；
(g)其他试剂是他汀类，包括其中他汀类选自罗苏伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、达伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀钙和二氢康帕丁的实施方案；
(h)其他试剂是抗血管生成药，包括其中抗血管生成药是RhufabV2、色氨酰基-tRNA合成酶、抗-VEGF peg化适体、角鲨胺、乙酸阿奈司他、考布他汀A4前药、MacugenTM、米非司酮、subtenon曲安奈德、玻璃体内晶体曲安奈德、AG3340、氟轻松和VEGF-Trap的实施方案；
(i)其他试剂是基质金属蛋白酶抑制剂，包括其中基质金属蛋白酶抑制剂是金属蛋白酶组织抑制剂、α2-巨球蛋白、四环素、氧肟酸盐、螯合剂、合成的MMP片段、琥珀酰巯嘌呤、磷酰胺和羟氨基酸的实施方案；
(j)其他试剂是补体抑制剂，仅仅用于举例，包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8和C9的抗体，例如在U.S.5,635,178；5,843,884；5,847,082；5,853,722；和Rollins等人；Transplantation，60：1284-1292(1995)(将他们的全部内容引入本文作为参考)中公开的那些；
(k)其他试剂是鱼油，仅仅用于举例，包括ω3脂肪酸；
(l)其他试剂是13-顺式-维甲酸(包括13-顺式-维甲酸的衍生物)、11-顺式-维甲酸(包括11-顺式-维甲酸的衍生物)或9-顺式-维甲酸(包括9-顺式-维甲酸的衍生物)；
(m)其他试剂是视黄胺的衍生物，包括全-反式-视黄胺的衍生物、13-顺式-视黄胺的衍生物、11-顺式-视黄胺的衍生物或9-顺式视黄胺的衍生物；
(n)施用其他试剂(i)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之前，(ii)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之后，(iii)与施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂同时，或(iv)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之前和之后，或
(o)其他试剂和在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂是在相同的药物组合物中施用的。
在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用体外的流变疗法(rheopheresis)。在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用一种治疗方法，选自限制性视网膜易位、光动力学疗法、玻璃疣激光法、黄斑裂洞手术、黄斑易位手术、Phi-运动、质子束疗法、视网膜剥离和玻璃体手术、巩膜弯曲、黄斑下手术、瞳孔热疗法、光系统I疗法、微电流刺激、抗炎剂、RNA干扰、施用眼部药物例如碘依可酯或二乙氧磷酰硫胆碱或碳酸酐酶抑制剂、微芯片移植、干细胞疗法、基因替代疗法、核酶基因疗法、光感受器/视网膜细胞移植和针灸。
在进一步的实施方案中，该方法包括使用激光光凝术从哺乳动物的眼中除去玻璃疣。
在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的第二试剂，其中第一化合物与第二化合物不同。
在进一步的实施方案中，提供一种能检测和/或定量视黄醇-RBP-TTR复合物形成的装置，其中至少一部分的TTR是荧光标记的。
在一个实施方案中，该视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)、或乙基视黄酰胺。在另一个实施方案中，多卤化的芳香烃是羟基化的多卤化芳香烃代谢产物。羟基化的多卤化芳香烃代谢产物可以是羟基化的多氯联苯代谢产物。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的双氯芬酸类似物可以选自：2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯甲酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯甲酸；3，5，-二氯-4-[(4-硝基苯基)氨基]苯甲酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯乙酸和2-[(2，6-二氯-4-羧酸-苯基)氨基]苯乙酸。
在其他实施方案中，本文所述的方法和组合物中的非甾体抗炎剂可以是氟芬那酸、二氟尼柳、二氟尼柳类似物、二氯芬那酸、吲哚美辛、尼氟酸或舒林酸。在一个实施方案中，二氟尼柳类似物可以是3′，5′-二氟联苯-3-羟基；2′，4′-二氟联苯-3-羧酸；2′，4′-二氟联苯-4-羧酸；2′-二氟联苯-3-羧酸；2′-二氟联苯-4-羧酸；3′，5′-二氟联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟联苯-4-羧酸；2′，6′-二氟联苯-3-羧酸；2′，6′-二氟联苯-4-羧酸；联苯-4-羧酸；4′氟-4-羟基联苯-3-羧酸；2′-氟-4-羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟-4-羟基联苯-3-羧酸；2′，4′-二氯-4-羟基联苯-3-羧酸；4-羟基联苯-3-羧酸；3′5′-二氟-4′羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟-4′羟基联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯-4′羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氯-4′羟基联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯-3-甲酰联苯；3′，5′-二氯-2-甲酰联苯；2′，4′-二氯联苯-3-羧酸；2′，4′-二氯联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯联苯-3-基-甲醇；3′，5′-二氯联苯-4-基-甲醇；或3′，5′-二氯联苯-2-基-甲醇。
在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物中的黄酮类可以是3-甲基-4′，6-二羟基-3′，5′-二溴黄酮或3′，5′-二溴-2′，4，4′，6-四羟基橙酮。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的强心剂是米利酮。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的小分子是N-苯基邻氨基苯甲酸、甲基红、媒染橙I、二芳胺、N-苄基-对氨基苯甲酸、呋塞米、芹菜配基、白藜芦醇、二芳胺或二苯并呋喃。在一个实施方案中，甲状腺激素类似物可以是甲状腺素-丙酸、甲状腺素-乙酸或SKF94901。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述调节RBP或TTR水平或活性减少了哺乳动物眼中全反式视黄醛的产生。在一个实施方案中，该试剂可以选自：视黄基衍生物、多卤化的芳香烃、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的视黄基衍生物是具有下列结构的化合物，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物：
Figure BSA00000495897200101
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，其中取代机选自(C2-C7)烯基，、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基和杂环。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的视黄基衍生物是具有下列结构的化合物，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物：
Figure BSA00000495897200111
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，其中取代基选自(C2-C7)烯基、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基和杂环。
在进一步的实施方案中，(a)X1是NR2，其中R2是H或(C1-C4)烷基；(b)x是0；(c)x是1并且L1是-C(O)-；(d)R3是任选取代的芳基；(e)R3是任选取代的杂芳基；(f)X1是NH并且R3是任选取代的芳基，包括在进一步的实施方案中，(i)芳基具有1个取代基，(ii)芳基具有1个选自卤素、OH、O(C1-C4)烷基、NH(C1-C4)烷基、O(C1-C4)氟代烷基和N[(C1-C4)烷基]2的取代基，(iii)芳基具有1个OH取代基，(v)芳基是苯基，或(vi)芳基是萘基；(g)该化合物是
Figure BSA00000495897200112
或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物；(h)该化合物是4-羟苯基视黄酰胺，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物；(i)该化合物是4-甲氧苯基视黄酰胺，或(j)4-氧代芬维A胺，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物。
在进一步的实施方案中，施用通式(II)的化合物是用于治疗眼部病症，包括降低在患者体内降低血清视黄醇的水平。在进一步的实施方案中，(a)有效量的该化合物是系统性施用于该哺乳动物；(b)有效量的该化合物是口服施用于该哺乳动物；(c)有效量的该化合物是静脉施用于该哺乳动物；(d)有效量的该化合物是经眼施用于该哺乳动物；(e)有效量的该化合物是通过离子电渗疗法施用的；或(f)有效量的该化合物是通过注射施用于该哺乳动物。
在进一步的实施方案中，该哺乳动物是人，所包括的实施方案，(a)该人是Stargardt病的突变ABCA4基因的携带者或该人是Stargardt病的突变ELOV4基因的携带者，或在与年龄有关的黄斑变性有关的补体因子H中具有遗传变异，或(b)该人具有眼部疾病或特征，其中疾病或特征选自Stargardt病、隐性视网膜色素变性、地图状萎缩(其中盲点是一个非限制性的例子)、光感受器变性、干性AMD、隐性锥体-杆体营养不良、渗出性(或湿性)与年龄有关的黄斑变性、锥体-杆体营养不良和视网膜色素变性。在一个进一步的实施方案中，该哺乳动物是视网膜变性的动物模型。
在进一步的实施方案中，该方法包括多次施用有效量的在哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂，包括的进一步实施方案，其中(i)多次施用之间的时间是至少一周；(ii)多次施用之间的时间是至少一天；和(iii)该化合物是基于每日施用于该哺乳动物；或(iv)该化合物是每12小时施用于该哺乳动物。在进一步的或可替代的实施方案中，该方法包括休药期，其中暂时停止药物的施用或暂时减少要施用的化合物的剂量；在休药期结束时，恢复化合物的剂量。休药期的长度可以是2天到1年不等。
在进一步的实施方案中，该方法包括施用至少一种其他试剂，选自一氧化氮产生的诱导物、抗炎剂、生理可接受的抗氧化剂、生理可接受的矿物质、带负电荷的磷脂、类癌瘤、他汀类、抗血管生成药、基质金属蛋白酶抑制剂、13-顺式-维甲酸(包括13-顺式-维甲酸的衍生物)、11-顺式-维甲酸(包括11-顺式-维甲酸的衍生物)、9-顺式-维甲酸(包括9-顺式-维甲酸的衍生物)、和视黄胺的衍生物。在进一步的实施方案中，
(a)其他试剂是一氧化氮产生的诱导物，包括其中一氧化氮产生的诱导物选自瓜氨酸、鸟氨酸、硝基化的L-精氨酸、亚硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羟基-L-精氨酸、亚硝基化的N-羟基-L-精氨酸、硝基化的L-高精氨酸和亚硝基化的L-高精氨酸的实施方案；
(b)其他试剂是抗炎剂，包括其中抗炎剂选自非甾体抗炎药、脂肪氧合酶抑制剂、泼尼松、地塞米松、和环氧合酶抑制剂的实施方案；
(c)其他试剂是至少一种生理可接受的抗氧化剂，包括其中生理可接受的抗氧化剂选自维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、辅酶Q、和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基的实施方案，或以下实施方案，其中(i)至少一种生理可接受的抗氧化剂是与在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂施用，或(ii)至少两种生理可接受的抗氧化剂是与在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂施用；
(d)其他试剂是至少一种生理可接受的矿物质，包括其中生理可接受的矿物质选自锌(II)化合物、Cu(II)化合物和硒(II)化合物的实施方案，或进一步包含给哺乳动物施用生理可接受的抗氧化剂的实施方案；
(e)其他试剂是带负电荷的磷脂，包括其中带负电荷的磷脂是磷脂酰甘油的实施方案；
(f)其他试剂是类胡萝卜素，包括其中类胡萝卜素选自叶黄素和玉米黄素的实施方案；
(g)其他试剂是他汀类，包括其中他汀类选自罗苏伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、达伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀钙和二氢康帕丁的实施方案；
(h)其他试剂是抗血管生成药，包括其中抗血管生成药是RhufabV2、色氨酰基-tRNA合成酶、抗-VEGF peg化适体、角鲨胺、乙酸阿奈司他、考布他汀A4前药、MacugenTM、米非司酮、subtenon曲安奈德、玻璃体内晶体曲安奈德、AG3340、氟轻松和VEGF-Trap的实施方案；
(i)其他试剂是基质金属蛋白酶抑制剂，包括其中基质金属蛋白酶抑制剂是金属蛋白酶组织抑制剂、α2-巨球蛋白、四环素、氧肟酸盐、螯合剂、合成的MMP片段、琥珀酰巯嘌呤、磷酰胺和羟氨基酸的实施方案；
(j)其他试剂是补体抑制剂，仅仅用于举例，包括C1、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8和C9的抗体，例如在U.S.5,635,178；5,843,884；5,847,082；5,853,722；和Rollins等人；Transplantation，60：1284-1292(1995)(在此将他们的全部内容引入本文作为参考)中公开的那些；
(k)其他试剂是鱼油，仅仅用于举例，包括ω3脂肪酸；
(l)其他试剂是13-顺式-维甲酸(包括13-顺式-维甲酸的衍生物)、11-顺式-维甲酸(包括11-顺式-维甲酸的衍生物)或9-顺式-维甲酸(包括9-顺式-维甲酸的衍生物)；
(m)其他试剂是视黄胺的衍生物，包括全-反式-视黄胺的衍生物、13-顺式-视黄胺的衍生物、11-顺式-视黄胺的衍生物或9-顺式视黄胺的衍生物；
(n)施用其他试剂(i)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之前，(ii)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之后，(iii)与施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂同时，或(iv)在施用在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂之前和之后，或
(o)其他试剂和在所述哺乳动物中调节RBP与TTR结合的试剂是在相同的药物组合物中施用的。
在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用体外的流变疗法。在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用一种治疗方法，选自限制视网膜易位、光动力学疗法、玻璃疣激光法、黄斑裂洞手术、黄斑易位手术、Phi-运动、质子束疗法、视网膜剥离和玻璃体手术、巩膜弯曲、黄斑下手术、瞳孔热疗法、光系统I疗法、微电流刺激、抗炎剂、RNA干扰、施用眼部药物例如碘依可酯或二乙氧磷酰硫胆碱或碳酸酐酶抑制剂、微芯片移植、肝细胞疗法、基因替代疗法、核酶基因疗法、光感受器/视网膜细胞移植和针灸。
在进一步的实施方案中，该方法包括使用激光光凝术从哺乳动物的眼中除去玻璃疣。
在进一步的实施方案中，该方法包括给哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的第二试剂，其中第一化合物与第二化合物不同。
在进一步的实施方案中，提供一种能检测和/或定量视黄醇-RBP-TTR复合物形成的装置，其中至少一部分的TTR是荧光标记的。
在一个实施方案中，该视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。在另一个实施方案中，多卤化的芳香烃是羟基化的多卤化芳香烃代谢产物。羟基化的多卤化芳香烃代谢产物可以是羟基化的多氯联苯代谢产物。
本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR转录抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺的产生。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗RBP与视黄醇的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。该调节剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR转录抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中脂褐素的产生。该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中脂褐素的产生。该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中脂褐素的产生。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。该调节剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中脂褐素的产生。该试剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR转录抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中玻璃疣的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中玻璃疣的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中玻璃疣的产生。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。该调节剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节减少了哺乳动物眼中玻璃疣的产生。在一些实施方案中，该试剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR转录抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节预防哺乳动物眼中的与年龄有关的黄斑变性或营养不良。在该实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节预防哺乳动物眼中的与年龄有关的黄斑变性或营养不良。在一个实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节预防哺乳动物眼中的与年龄有关的黄斑变性或营养不良。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。该调节剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节预防哺乳动物眼中的与年龄有关的黄斑变性或营养不良。在该实施方案中，该试剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR转录抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节保护哺乳动物的眼睛免受光的损害。在另一个实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的RBP或TTR翻译抑制剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节保护哺乳动物的眼睛免受光的损害。在一些实施方案中，该试剂可以选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的调节哺乳动物中RBP与TTR结合的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节保护哺乳动物的眼睛免受光的损害。该调节剂可以结合到RBP或TTR上，以抑制哺乳动物中RBP和TTR的结合。该调节剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在该实施方案中，该调节剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给该哺乳动物施用至少一次有效量的在所述哺乳动物中提高RBP或TTR清除率的试剂，其中所述RBP或TTR水平或活性的调节保护哺乳动物的眼睛免受光的损害。在一些实施方案中，该试剂可以选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物中调节视黄醇结合蛋白(RBP)或运甲状腺素蛋白(TTR)水平或活性，包括给该哺乳动物至少一次有效量的至少一种选自RBP转录抑制剂、TTR转录抑制剂、RBP翻译抑制剂、TTR翻译抑制剂、RBP清除剂、TTR清除剂、RBP拮抗剂、RBP激动剂、TTR拮抗剂和TTR激动剂的化合物。
在一些实施方案中，RBP转录抑制剂选自RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸，siRNA、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、适体、Zn-指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。在其他的实施方案中，TTR转录抑制剂选自脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在其他的实施方案中，RBP翻译抑制剂选自RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、适体，核酶和单克隆抗体。在其他的实施方案中，TTR翻译抑制剂选自脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，RBP清除剂选自：视黄基衍生物、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体、和抗体。在另一个实施方案中，TTR清除剂选自：甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在另一个实施方案中，RBP激动剂或拮抗剂是视黄基衍生物。在另一个实施方案中，TTR激动剂或拮抗剂选自甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
本文所述的方法和组合物也用于治疗与年龄有关的黄斑变性或营养不良，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
本文所述的方法和组合物也用于减少哺乳动物眼中全反式视黄醛的产生，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于减少哺乳动物眼中N-亚视黄基-N-视黄基乙醇胺的产生，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于减少哺乳动物眼中脂褐素的产生，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于减少哺乳动物眼中玻璃疣的产生，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于保护哺乳动物的眼免受光的损害，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除率。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于治疗与视黄醇有关的疾病，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的至少一种选自下组的化合物：RBP转录抑制剂、TTR转录抑制剂、RBP翻译抑制剂、TTR翻译抑制剂、RBP清除剂、TTR清除剂、RBP拮抗剂、RBP激动剂、TTR拮抗剂、TTR激动剂和视黄醇结合受体拮抗剂。在一个实施方案中，RBP转录抑制剂选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、锌指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。
在另一个实施方案中，TTR转录抑制剂选自RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸，siRNA、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂适体、Zn-指结合蛋白、核酶和单克隆抗体。在另一个实施方案中，RBP翻译抑制剂选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸，siRNA、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、适体，核酶和单克隆抗体。在另一个实施方案中，RBP翻译抑制剂选自：RXR/RAR激动剂、RXR/RAR拮抗剂、雌激素激动剂、雌激素拮抗剂、睾酮激动剂、睾酮拮抗剂、孕酮激动剂、孕酮拮抗剂、地塞米松激动剂、地塞米松拮抗剂、反义寡核苷酸、siRNA、脂肪酸结合蛋白拮抗剂、C/EBP激动剂、C/EBP拮抗剂、HNF-1激动剂、HNF-1拮抗剂、HNF-3激动剂、HNF-3拮抗剂、HNF-4激动剂、HNF-4拮抗剂、HNF-6激动剂、HNF-6拮抗剂、适体、核酶和单克隆抗体。
在一个实施方案中，RBP清除剂选自：视黄基衍生物、多卤化的芳香烃、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。可替代地，视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。在另一个实施方案中，多卤化的芳香烃是羟基化的多卤化芳香烃代谢产物，具体地有多氯化联苯代谢产物。
在另一个实施方案中，TTR清除剂选自：甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在另一个实施方案中，RBP激动剂或拮抗剂可以是视黄基衍生物例如N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。在另一个实施方案中，TTR激动剂或拮抗剂选自：多卤化的芳香烃、甲状腺激素激动剂、甲状腺激素拮抗剂、双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。在一个实施方案中，该小分子化合物可以是白藜芦醇或二芳胺。在另一个实施方案中，视黄醇结合蛋白受体拮抗剂可以是棕榈酸视黄酯水解酶的抑制剂，更特别地棕榈酸视黄酯水解酶抑制剂可以是3，4，3′，4′-四氯二苯。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物用于施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。在一些实施方案中，与视黄醇有关的疾病可以是糖尿病、骨肥厚、自发性颅内高压、淀粉样变性病、阿尔茨海默病和
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综合征。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中治疗I型或II型糖尿病，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物调节RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。
在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物还包括施用第二化合物，其选自(a)降低葡萄糖的激素或拟激素(例如，胰岛素、GLP-1或GLP-1类似物、exendin-4或liraglutide)，(b)降低葡萄糖的磺酰脲(例如，醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、微粉化的格列本脲或格列齐特)，(c)降低葡萄糖的双胍(二甲双胍)，(d)降低葡萄糖的氯茴苯酸(例如，那格列奈或瑞格列奈)，(e)降低葡萄糖的噻唑烷二酮或其他的PPAR-γ激动剂(例如，吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮或isagitazone)，(f)降低葡萄糖的对PPAR-γ和PPAR-α都具有亲和力的双作用PPAR激动剂(例如，BMS-298585和tesaglitazar)，(g)降低葡萄糖的α-葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖或米格列醇)，(h)不靶向于葡萄糖-6-磷酸酶转位酶的降低葡萄糖的反义化合物，(i)抗肥胖的食欲抑制剂(例如苯丁胺)，(j)抗肥胖的脂肪吸收抑制剂例如奥利斯特，(k)睫状节神经细胞营养因子的抗肥胖修饰形式，其抑制刺激食欲的饥饿信号，(l)降脂的胆酸盐螯合树脂(例如，考来烯胺、考来替泊和盐酸考来维仑)，(m)降脂的HMG CoA-还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、西立伐他汀、普伐他汀、阿伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，(n)烟酸，(o)降脂的纤维酸衍生物(例如，氯贝丁酯、吉非贝齐、非诺贝特、苯扎贝特和环丙贝特)，(p)包括普罗布考、新霉素、右旋甲状腺素的试剂，(q)植物-睾醇酯，(r)胆固醇吸收抑制剂(例如，依则替米贝)，(s)CETP抑制剂(例如torcetrapib和JTT-705)，(t)MTP抑制剂(例如，英普他派)，(u)胆酸转运体(顶端的钠依赖性胆酸转运体)的抑制剂，(v)肝CYP7a的调节剂，(w)ACAT抑制剂(例如，阿伐麦布)，(x)降脂的雌激素替代治疗剂(例如，tamoxigen)，(y)合成的HDL(例如，ETC-216)，或(z)降脂的抗炎剂(例如，糖皮质激素)。当第二化合物具有不同的靶和/或通过与本文所述的试剂(即调节RBP或TTR水平或活性的那些)不同的作用方式发挥作用时，期望联合施用(例如同时、连续或分别施用)这两种试剂可以为糖尿病患者提供加和和/或协同的治疗益处。为了相同的原因，相对于不存在组合时各试剂的剂量，期望这两种试剂的联合施用(例如同时、连续或分别施用)可以降低每种或其中一种的剂量，同时仍然能达到期望的治疗益处，包括(仅用作举例)，降低血糖和控制HbA1c。
在一个实施方案中，第一化合物施用于患II型糖尿病的哺乳动物。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物眼中治疗自发性颅内高压，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中降低RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。本文所述的方法和组合物也进一步包括施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中治疗骨肥厚，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。本文所述的方法和组合物也进一步包括施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中治疗淀粉样变性病，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中抑制RBP或TTR转录或翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中提高RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物抑制RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。本文所述的方法和组合物也进一步包括施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中治疗阿尔茨海默病，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中增强RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中增强RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中降低RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物促进RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。本文所述的方法和组合物也进一步包括施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。
本文所述的方法和组合物也用于在哺乳动物中治疗
Figure BSA00000495897200311
综合征，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的第一化合物，其中所述第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的水平或活性。在一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR转录。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR翻译。在另一个实施方案中，第一化合物在哺乳动物中调节RBP或TTR的清除。在另一个实施方案中，第一化合物调节RBP与TTR结合。这样的试剂能够与RBP或TTR结合，以在哺乳动物中抑制RBP与TTR结合。此外，该试剂也可以拮抗视黄醇与RBP的结合，以抑制RBP或RBP-试剂复合物与TTR结合。在一些实施方案中，第一化合物可以是视黄基衍生物，其中视黄基衍生物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺(也称″HPR″或″芬维A胺″或″4-羟苯基视黄酰胺″或″羟基苯基视黄酰胺″)、N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺(″MPR″；HPR最常见的代谢产物)或乙基视黄酰胺。本文所述的方法和组合物也进一步包括施用第二化合物，其中第二化合物选自一氧化氮产生的诱导物、抗氧化剂、抗炎剂、矿物质、抗氧化剂、类胡萝卜素、带负电荷的磷脂和他汀类。
在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物中的有效量的化合物可以系统性施用于该哺乳动物。在一些实施方案中，该化合物可以口服施用于该哺乳动物。在其他的实施方案中，该化合物可以静脉施用于该哺乳动物；在其他的实施方案中，该化合物可以经眼施用于该哺乳动物。在另一个实施方案中，该化合物可以通过注射施用于该哺乳动物。
在上述任意的实施方案中，本文所述的方法和组合物中的哺乳动物是人。在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物可以包括多次施用有效量的该化合物。在一些实施方案中，多次施用之间的时间是至少一周。在其他的实施方案中，多次施用之间的时间是至少一天。在另一个实施方案中，化合物是基于每日施用于该哺乳动物的。
本文所述的方法和组合物也可以进一步包括给哺乳动物施用一氧化氮产生的诱导物。在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用抗炎剂。在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用至少一种抗氧剂。本文所述的方法和组合物中的抗氧剂可以选自维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、辅酶Q和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括施用至少一种抗氧剂和本文所公开的化合物。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用至少一种矿物质。在该实施方案中，矿物质可以选自锌(II)化合物、铜(II)化合物和硒(II)化合物。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物中的矿物质可以进一步与至少一种抗氧剂施用。
在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用类胡萝卜素。在该实施方案中类胡萝卜素可以选自叶黄素和玉米黄素。在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用带负电荷的磷脂。在该实施方案中，带负电荷的磷脂可以是磷脂酰甘油。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物可以进一步包括给哺乳动物施用他汀类。在本文所述的方法和组合物中他汀类可以选自罗苏伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、达伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀钙和二氢康帕丁。
在其他的实施方案中，本文所述的方法和组合物中的化合物可以每12小时施用于哺乳动物。在一些实施方案中，本文所述的方法和组合物进一步包括给哺乳动物施用流变疗法。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物进一步包括检测哺乳动物眼中玻璃疣的产生。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物进一步包括测定哺乳动物眼中脂褐素的水平。在另一个实施方案中，本文所述的方法和组合物进一步包括测定哺乳动物眼睛的视力。在一个实施方案中，本文所述的方法和组合物进一步包括测定A2E和A2E前体的自发性荧光。
在一些实施方案中，黄斑变性是Stargardt病。在其他的实施方案中，黄斑变性是干性与年龄有关的黄斑变性。在一个实施方案中，人是Stargardt病基因的携带者。所述的方法和组合物也可以进一步包括确定哺乳动物是否是Stargardt病基因的携带者。
在一些实施方案中，治疗黄斑变性的药物组合物可以包含本文所述的方法和组合物中的化合物和药学可接受的载体。在一个实施方案中，药学可接受的载体是适合眼部施用的。
本文所述的方法和组合物的其他目的、特征和优点通过下文的详述将会变得更清楚。但是，应当理解，这些详述和具体实施例，是说明具体的实施方案，仅仅是用于解释说明，因为从该详述出发，在本发明精神和范围内的各种改变和变更对于本领域技术人员将是显而易见的。
在本说明书中提及的所有出版物和专利申请都通过参考以相同的程度引入本文，就如同分别具体地将每篇出版物或专利申请通过参考引入本文。
附图说明
本文所述的方法和组合物的新的特征将会用权利要求的细节列出。通过参考下面描述说明性实施方案的详述和附图将会更好地理解本发明的特征和优点，其中在详述中利用了本文所述的原理：
附图1表示的是用本文所述的方法和组合物治疗与视黄醇有关和/或玻璃体视网膜疾病的流程图。
附图2表示的是血清HPR水平与血清视黄醇水平和眼部类视黄醇和A2E水平的关系。
附图3表示的是给野生型小鼠施用HPR对(A)血清视黄醇水平和(B)眼部类视黄醇水平的效果。
附图4表示的是在HPR不存在或存在的条件下RBP-TTR复合物得到的FRET谱的例子，其中TTR已经用荧光部分来标记。
附图5表示的是用本文所述的FRET法确定的HPR与视黄醇-RBP-TTR复合物形成的剂量依赖性抑制作用的例子。
附图6表示的是使用HPR、13-顺式-维甲酸和全反式维甲酸用本文所述的FRET法确定的抑制视黄醇-RBP-TTR复合物形成的比较。
附图7a-7c表示的是血清的乙腈提取物的各种反相LC分析。给小鼠施用DMSO(附图7a)、10mg/kg N-4-(羟基苯基)视黄酰胺(HPR)(FIG 7b)、或20mg/kg HPR(附图7c)14天得到血清。
附图8表示的是血清视黄醇作为芬维A胺浓度的函数的关系。
附图9a表示的是通过荧光猝灭测定的视黄醇和视黄醇结合蛋白质之间相互作用的对照结合分析。
附图9b表示的是在HPR(2μM)存在下，通过荧光猝灭测定的视黄醇和视黄醇结合蛋白质之间相互作用的结合分析。
附图10a表示的是在abca4无效突变小鼠中，HRP对于A2PE-H2生物合成的作用。
附图10b表示的是在abca4无效突变小鼠中，HRP对于A2E生物合成的作用。
附图11表示的是通过荧光猝灭测定的N-4-(甲氧基苯基)视黄酰胺(MPR)与视黄醇结合蛋白(RBP)的结合。
附图12表示的是通过体积排阻色谱和UV/可见分光光度法测定的TTR与RBP-MPR结合的调节。
附图13表示的是A2PE-H2和A2E的水平作为芬维A胺剂量和治疗时间(图A-F)的函数和在ABCA4无效突变小鼠中脂褐素自发荧光作为芬维A胺治疗(图A-F)的函数的分析。
附图14表示的是芬维A胺浓度与在ABCA4无效突变小鼠中视黄醇、A2PE-H2和A2E降低的关系。
附图15表示的是类视黄醇组合物，在光适应的DMSO-和HPR-处理的小鼠(图A)中；HPR对视觉生色团再生的作用(图B)；HPR对漂白的生色团再生的作用(图C)；以及杆功能(图D)、杆和锥体功能(图E)和从光漂白中再生(图F)的电生理学测定。
附图16表示的是DMSO-和HPR-处理的动物的视网膜的光学显微镜检查。
附图17表示的是在12天的休药期后，对照小鼠的洗眼环提取物的吸收和荧光光谱(图A)，和先前保持在HPR疗法中的小鼠的吸收和荧光光谱(图B)；在28天的休药期后，对照小鼠的洗眼环提取物的吸收和荧光光谱(图C)，和先前保持在HPR疗法中的小鼠的吸收和荧光光谱(图D)；直方图表示的是在图A-D中所述的小鼠的相对A2E水平。
附图18表示3个月大的三个系的小鼠的A2E、A2PE和A2PE-H2的相对浓度。
具体实施方式
现在将会针对本文所述的方法和组合物中的实施方案进行详细的描述。下列的实施例部分说明的是实施方案的例子。
除非另有定义，在本文中使用的所有技术和科技术语都与本发明所属领域技术人员的一般性理解具有相同的含义。在此将本文涉及的所有专利和出版物引入作为参考。
如本文所使用，术语“ABCA4基因”是指编码rim蛋白或RmP的基因。ABCA4基因也称作是ABCR基因。
如本文所使用，术语“抗氧剂”是指预防、延迟或以其他方式抑制化合物或生物物质氧化的合成或天然的物质。
如本文所使用，术语“去卷积”是指将数据、信息和/或图像转换成(至少部分地)构成组分的方法。例如，特征是复波形式的荧光或吸收光谱可以在数学上去卷积成包含复波形式的单个的吸收或荧光峰。适当的数学方法和算法是本领域公知的，去卷积数据、信息和/或图像的适当的软件包是商业可用的。
如本文所使用，术语“视觉循环的分裂”等等是指直接或间接调节与视觉循环有关的至少一种酶的活性。
如本文所使用，术语“分散”是指在另一种介质中分散一种物质。分散可以包括均匀化、分级、打碎、流化、或减小物质尺寸的步骤，以促进悬浮步骤。
如本文所使用，视黄基衍生物是指一种通过各种顺式或反式视黄醛异构体中一种与其他化合物或系列化合物反应产生的化合物。
如本文所使用，术语“与年龄有关的黄斑变性或营养不良”或“ARMD”是指一种使人虚弱的疾病，其包括干或湿性ARMD。占总数约90％的干性ARMD也称作萎缩性、非渗出性或玻璃疣性黄斑变性。对于干性ARMD，玻璃疣典型地蓄积于视网膜色素上皮细胞(RPE)组织下/在布鲁赫膜内。当玻璃疣影响到黄斑中的光感受器的功能时，然后就会发生视觉损害。干性ARMD导致在很多年内视觉的逐步损害。干性ARMD可以导致湿性ARMD。湿性ARMD可以快速发展，导致对中央视觉的严重损害。黄斑营养不良包括Stargardt病，也称作Stargardt黄斑营养不良或黄点状眼底，其是青少年最多发的黄斑营养不良。
如本文所使用，术语“哺乳动物”是指所有的哺乳动物，包括人。哺乳动物包括(仅仅用于举例)人、非人的灵长类、牛、狗、猫、山羊、绵羊、猪、大鼠、小鼠和兔。
如本文所使用，术语“生物样品”是指血浆、血液、尿、粪便、组织、粘液、泪或唾液。
如本文所使用，术语“有效量”是指在药物制剂或方法中治疗剂的总量，足以对患者或病人显示有意义的益处。
如本文所使用，术语“调节”是指提高或降低浓度或者增加或减少核酸或多肽的表达，增强或减弱核酸或多肽结合或其他功能性特性。
如本文所使用，术语“眼部疾病或病症”是指涉及眼睛或有关组织的任何疾病或病症。非限制性的例子包括涉及视网膜和/或黄斑变性的疾病或病症，包括视网膜和/或黄斑营养不良，和视网膜和/或黄斑变性。
如本文所使用，术语“固定”是指化学或生物类物质共价或非共价地附着到载体上。
如本文所使用，术语“灵长类”是指最高等的哺乳动物，例如人、猿和猴。
如本文所使用，术语“玻璃体视网膜疾病”是指与玻璃体或视网膜有关的任何疾病或病症，包括(仅用于举例)糖尿病性视网膜病、黄斑变性、早产儿视网膜病和视网膜色素变性。
如本文所使用，术语“与视黄醇有关的疾病”是指与维生素A、视黄醇或其有关运输蛋白异常水平有关的任何疾病或病症，包括在患者中与视黄醇结合蛋白和运甲状腺素蛋白有关的疾病。
如本文所使用，术语“危险”是指发生某一事件的可能性。
视觉循环
脊椎动物的视网膜包含两种类型的光感受器细胞。杆状细胞是专门用于暗光条件下的视觉。锥体细胞敏感性较差，提供非常短暂和很高的空间分辨率的视觉，并提供色觉。在日光条件下，杆状细胞应答饱和，视觉完全是由锥体细胞介导的。这两种类型的细胞都包含一种含有很多膜状盘的外节结构。视觉换能的反应发生在这些膜状盘的表面上。在视觉中第一个步骤是通过视蛋白-色素分子吸收光子，该步骤包括视黄醛生色团的11-顺式到全反式异构化作用。在恢复光敏性前，所得到的全反式视黄醛必须从视蛋白脱辅基蛋白中分离出来并异构成11-顺式视黄醛。
全反式视黄醛是一种视觉循环的类视黄醇，其与磷脂酰乙醇胺缩合产生二视黄醛类N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺。11-顺式-视黄醛是视紫质的光敏部分，当主动吸收带中的光的光子攻击该分子时，其转变成全反式视黄醛。该方法是通过11-顺式视黄醛到全反式视黄醛异构化的一系列的化学反应进行的。在一系列的化学步骤中，与特定的杆状细胞或锥体细胞结合的神经纤维遇到了在脑中作为视觉信号感知的刺激物。
视紫质再生的视觉循环
视紫质是一种G蛋白偶联受体，具有两种生理学途径：光转导和/或从漂白中恢复(将激活的组分恢复到黑暗状态)和类视黄醇循环(产生11-反式-视黄醛。脊椎动物的光转导是由光化学反应引发的，其中与其视蛋白部分结合(视紫质＝视蛋白+11-反式-视黄醛)的11-反式-视黄醛经过异构化成为全反式视黄醛，在视蛋白中发生构象改变。在脊椎动物中，光敏受体构象的恢复(恢复成黑暗状态)需要通过类视黄醇循环从全反式视黄醛生成11-反式-视黄醛。在人体中异构化和色素再生的整个循环，对于视紫质是以分钟为单位的，显著地快于锥体色素。全反式视黄醛到全反式视黄醇的还原发生在光感受器的外节中，而所有其他反应，包括异构化发生在视网膜色素上皮细胞(RPE)中。全反式.-视黄亚基Schiff碱和全反式视黄醛从与视蛋白结合袋中分离，以及导致其中视蛋白-结合袋中释放的分子步骤仍然不能完整地解释。全反式视黄醛从盘中的移出可以通过ATP-结合盒运输体(ABCA4)来促进，其中的突变是一系列视网膜疾病，包括Stargardt′s病、锥体-杆体营养不良、视网膜色素变性和可能的黄斑变性的病因。
此外，全反式视黄醛通过NADPH-依赖性全反式视黄醇脱氢酶还原成全反式视黄醇，其中NADPH-依赖性全反式视黄醇脱氢酶是一种属于大基因家族的短链醇脱氢酶(SCAD)的膜相关的酶。全反式视黄醇经难以确定的过程转移到RPE中，该过程可能涉及在光感受器间基质(IPM)中存在类似于IRBP和RBP的组分，或RPE中由捕获性类微维生素A(例如不溶性脂肪酸视黄酯)驱动的被动扩散。在RPE中的酯化作用涉及酰基从卵磷脂转移到视黄醇上并通过卵磷脂：视黄醇酰基转移酶(LRAT)催化。这些酯可以是未知酶-称作异构体水解酶-的底物，该酶利用视黄酯水解的能量，以将全反式视黄醇转变成11-顺式-视黄醇，因此，驱动反应进行。可替代地，这两种反应可以单独进行，即可以首先通过视黄基酯水解酶水解该酯，然后通过中间体异构成11-顺式视黄醇。然后在NAD-和NADP-依赖性11-反式视黄醇脱氢酶(另一种短链脱氢酶家族成员)催化的反应下将11-顺式-视黄醇氧化成11-顺式-视黄醛。最后，11-顺式-视黄醛以IRBP-依赖性或非依赖性形式移动到杆状光感受器的背面，其与视蛋白结合以再生视觉色素。
与脊椎动物眼睛的解剖学结构、视紫质再生的视觉循环和A2E-环氧乙烷生物合成有关的进一步信息在2005年6月10日提交的U.S.专利申请11/150,641、2005年8月17日提交的PCT专利申请US2005/29455和2004年10月25日提交的U.S.临时专利60/622,213中提供，将上述专利的公开内容以整体引入本文作为参考。
黄斑或视网膜变性和营养不良。
黄斑变性(也称作视网膜变性)是一种涉及视网膜的中心部分-黄斑退化的疾病。约85％到90％的黄斑变性病例是“干”(萎缩的或非渗出性)性。在干性黄斑变性中，视网膜的退化与黄斑下小的黄色沉积物，即玻璃疣的形成有关；此外，在RPE中脂褐素的蓄积会导致地图状萎缩。该现象导致黄斑变细和脱水。在视网膜中由玻璃疣导致的变细的区域和程度与中央视觉的损害直接有关。视网膜的色素层的变性和光感受器上的玻璃疣变成萎缩的并可以导致中央视觉的缓慢损害。
在“湿性”黄斑变性中，形成新的血管(即新血管形成)以改善视网膜组织，特别是黄斑下的血液供应，其中黄斑下是视网膜的一部分，其负责我们敏锐的中央视觉。新的血管容易被损坏，有时会破裂，导致出血和对周围组织的损害。尽管湿性黄斑变性只占所有黄斑变性病例的10％，但它导致了约90％的与黄斑变性有关的失明。新血管形成可以导致视觉的快速损害、视网膜组织最终瘢痕化和眼内出血。该瘢痕组织和血在视觉中产生了黑的变形的区域，通常眼睛正常性失明。湿性黄斑变性通常是从视觉的中央区域的畸变开始。直线变成波浪状。许多患黄斑变性的人也报告视力模糊和在他们视觉区域有黑色斑点。生长促进蛋白，称作血管内皮生长因子或VEGF，靶向于触发眼内的异常血管生长。该发现引发了对抑制或阻断VEGF的实验药物的积极研究。研究已经表明，抗-VEGF剂可以用于阻断和预防异常的血管生长。这些抗-VEGF剂阻止或抑制了VEGF刺激，这样血管较少生长。这些抗-VEGF剂也可以成功地抗血管生成抑制或阻断VEGF诱导视网膜下血管生长的能力，以及血管渗漏。
Stargardt病是一种黄斑营养不良，其显示为一种在儿童中发生的隐性黄斑变性。见例如，Allikmets等人，Science，277：1805-07(1997)；Lewis等人，Am.J.Hum.Genet.，64：422-34(1999)；Stone等人，Nature Genetics，20：328-29(1998)；Allikmets，Am.J.Hum.Gen.，67：793-799(2000)；Klevering，等人，Ophthalmology，111：546-553(2004)。Stargardt病的临床特征是中央视觉的逐步损害和黄斑上的RPE的逐渐萎缩。在人ABCA4基因中的Rim蛋白(RmP)突变对Stargardt病负责。在疾病过程的早期，患者显示暗适应延迟，但其他的杆状细胞功能正常。组织学上，Stargardt病与RPE细胞中脂褐素色素颗粒的沉积有关。
ABCA4的突变也涉及到隐性视网膜色素变性，参见例如，Cremers等人，Hum.Mol.Genet.，7：355-62(1998)，隐性锥体-杆体营养不良，参见上文，和非渗出性与年龄有关的黄斑变性，参见例如，Allikmets等人，Science，277：1805-07(1997)；Lewis等人，Am.J.Hum.Genet.，64：422-34(1999)，尽管在AMD中ABCA4突变的发生率是不确定的。参见Stone等人，Nature Genetics，20：328-29(1998)；Allikmets，Am.J.Hum.Gen.，67：793-799(2000)；Klevering，等人，Ophthalmology，111：546-553(2004)。与Stargardt病类似，这些疾病与杆状细胞暗适应延迟有关。参见Steinmetz等人，Brit.J.Ophthalm.，77：549-54(1993)。脂褐素在RPE细胞中的沉积也可以在AMD中显著地发现，参见Kliffen等人，Microsc.Res.Tech.，36：106-22(1997)，以及发现一些视网膜色素变性病例。参见Bergsma等人，Nature，265：62-67(1977)。
此外，有几种类型的黄斑变性影响儿童、青少年或成人，其一般称作早期发作性或少年性黄斑变性。这些类型中的许多都是遗传的，应看作是黄斑营养不良，而不是变性。黄斑营养不良的一些例子包括：锥体-杆体营养不良、角膜营养不良、Fuch′s营养不良、Sorsby′s黄斑营养不良、贝斯特病和青年性视网膜劈裂症及Stargardt病。
在此阶段检查患者的眼科医生可以注意到这些玻璃疣的存在，尽管大多数人没有这类症状。当玻璃疣在检查中注意到时，需要随时间而进行监测。许多超过60岁的人会有一些玻璃疣。
代谢性疾病
代谢性疾病包括I和II型糖尿病，也与视黄醇水平异常有关。
I型糖尿病(胰岛素依赖型糖尿病)
I型糖尿病是一种严重性的糖尿病。如果不加以治疗，I型糖尿病会导致患者的酮病和快速退化。约10-20％的糖尿病患者归为I型，主要包括青年个体。非肥胖患者也包含I型糖尿病患者，尽管数量不多。
I型糖尿病是一种分解代谢的疾病，其中胰岛素的循环水平是大量缺失的，血浆高血糖素水平升高。据信，I型糖尿病具有自身免疫源，可能是在受影响个体中由于胰B细胞的传染性或毒性环境发作而导致的。为了支持自身免疫的理论，已经在I型糖尿病患者中检测了胰岛素和胰岛细胞，并与非糖尿病个体对比。
在未成年人中，较低水平的视黄醇，和观测到视黄醇结合蛋白(RBP)水平降低和RBP尿分泌物增加，与I型糖尿病有关。参见Basu，TK，等人Am.J.Clin.Nutr.50：329-331(1989)；Durbey，SW等人，糖尿病Care 20：84-89(1997)。较低水平的视黄醇和RBP伴随着锌代谢的伴随性降低，锌是肝细胞中RBP合成必需的因子。参见Cunningham，JJ等人Metabolism 42：1558-1562(1994)。相反地，在I型糖尿病患者中生育酚或维生素E的水平没有改变。参见Basu，TK等人(1989)。
尽管在肝储藏细胞中维生素A的水平升高，但观测到的视黄醇水平较低。参见Tuitoek PJ等人Br.J.Nutr.75：615-622(1996)。揭示维生素A的状态和胰岛素分泌之间的联系的研究表明，只有胰岛素治疗可以在I型糖尿病患者中减轻维生素A水平受到的抑制。Tuitoek，PJ等人，J.Clin.Biochem.Nutr.19：165-169(1996)。相反地，维生素A的食品添加剂不会使维生素A的代谢有效性正常化。同上。
这些研究表明维生素A和胰岛素的相互关系调节了葡萄糖载体进入肌肉和脂肪细胞。进一步的研究通过表明正常胰岛素分泌需要维生素A而强化了这种关系。参见Chertow，BS等人，J.Clin.Invest.79：163-169(1987)。视黄醇是胰岛素从维生素A-缺乏的灌注的胰岛细胞中释放所必需的。同上。体内试验表明，维生素A-缺乏的大鼠损害了葡萄糖诱导的急性胰岛素释放，其仅仅用充足的维生素A才能得到改善。同上。维生素A可以在胰岛素分泌中通过在胰岛和胰岛素分泌细胞中活化转谷氨酰胺酶而发挥其作用，参见Driscoll HK，等人，Pancreas 15：69-77(1997)，并且是胎儿的胰岛发展和在成人中预防葡萄糖耐受不良所需要的，参见Matthews，KA等人，J.Nutr.134：1958-1963(2004)，在糖尿病患者中进一步强化了维生素A和视黄醇在胰岛素释放和血糖水平的调节中的作用。
II型糖尿病(非胰岛素依赖型糖尿病)
II型糖尿病包含一个不同种类组的轻型糖尿病。II型糖尿病通常发生在成年人中，但偶尔也会发生在儿童期。
II型糖尿病经典地表现为胰岛素对血浆葡萄糖水平的不敏感性。高达85％的II性糖尿病是肥胖者，对内源性胰岛素的不敏感性肯定与脂肪的腹部分布有关。胰岛素不敏感性的原因与胰岛素作用中后-受体的缺陷有关。这与过度膨胀的细胞内储藏所(例如膨胀的脂肪细胞和过度营养的肝或肌细胞)有关，并降低了餐后从循环中清除营养物的能力。随后的高胰岛素血症也会导致细胞内胰岛素感受器的进一步向下调节。此外，在连续作用下葡萄糖载体蛋白(例如GLUT4)也向下调节，导致患者中高血糖的情况恶化。
与I型糖尿病相反，II型糖尿病患者表现为RBP水平选择性升高，观测到视黄醇为正常到升高的水平。参见Sasaki，H等人，″Am.J.Med.Sci.310：177-82(1995)；Basualdo CG等人J.Am Coll.Nutr.16：39-45(1997)；Abahausain，MA等人，Eur.J.Clin.Nutr.53：630-635(1999)。在II型糖尿病患者中维甲酸(全反式RA和13-顺式RA)水平也降低。Yamakoshi，Y等人，Biol.Pharm.Bull 25：1268-1271(2002)。其他维生素，包括维生素E(生育酚)和类胡萝卜素的水平在糖尿病和对照组中均不变，已知会影响维生素A代谢的锌、白蛋白和TTR水平也不变。同上。
在II型糖尿病中RBP水平的选择性升高，和在I型糖尿病中RBP的选择性降低支持了RBP和维生素A在胰岛素控制血糖水平中的作用。RBP水平的升高的原因在于糖尿病患者的胰岛素水平升高(高胰岛素血症)。Basualdo等人(1997)。RBP水平与患者的高血糖的严重性有关。同上。先前已经证明了类视黄醇增强了人的胰岛素敏感性。参见Hartmann，D.等人Eur.J.Clin.Pharmacol.42：523-8(1992)。在I和II型糖尿病中RBP水平与胰岛素敏感度的逆相关表明了这是一种在哺乳动物患者中控制胰岛素敏感性的治疗方法。
自发性颅内高压(OS)
IIH，也称作脑假瘤(PTC)，是一种在没有可鉴定的致病因子的情况下在脑周围液体中高压的病症。这种病症主要出现在分娩年龄的妇女中。症状通常在体重增加的时期开始出现或恶化。典型的症状包括头痛、脉冲同步耳鸣和视觉问题(视乳头水肿)，在未治疗的病例中其可以导致严重和永久性的视觉损害。
尽管IIH的病因未知，但研究者已经考虑到过量的维生素A水平作为候选者，因为维生素A过多症的症状和标志与IIH相仿。研究表明，在IIH患者中血清视黄醇水平显著高于对照组，尽管在两组中维生素A摄取或视黄酯浓度并没有显著性差异。参见Jacobson，DM等人，Neurology，54：2192-3(1999)。
与骨有关的疾病
骨肥厚是一种骨发生过度生长的病症。该病症导致从正常骨中伸出的物质形成，这在很多的肌肉与骨骼疾病中可以见到。弥散性自发性骨骼骨肥厚(DISH)是一种类型的骨肥厚，特征是锥体的流动性钙化作用和骨化作用。在DISH患者中放射照相的异常情况是在胸椎中最常观测到的，导致了在脊柱前存在不透射线的盾。除了颈髓中间物作为骨肥厚或脊柱韧带骨化的结果，后纵韧带(OPLL)的骨化也与DISH的患者的频率增加有关。骨肥厚或DISH患者伴随的其它疾病包括急性骨折和脊柱的假关节。
尽管DISH和OPLL发病机制现在仍然未知，但这两种疾病都与血清视黄醇和RBP的高水平有关。参见Kodama，T等人，In vivo 12：339-344(1998)；Kilcoyne，RF，J.Am.Acad.Dermatol.19：212-216(1988)提示DISH和OPLL发病机制中维生素A的可能作用。其他研究表明在骨肥厚患者中发生先天性功能性RBP缺乏和视黄醇和RBP的异常水平。De Bandt，M.等人，J.Rheumatol.22：1395-8(1995)。医学说明也报道了在老年患者中发生了维生素A过多症和变性关节病。参见Romero，JB等人，Bull Hosp.Jt.Dis.54：169-174(1996)。
蛋白质错折叠和聚集疾病
蛋白质错折叠和聚集与几种疾病有关，一般称作淀粉样变性病，包括阿尔茨海默病、帕金森病和全身性淀粉样变性病。这些疾病伴随次级蛋白质结构的错折叠而发生，其中正常的可溶性蛋白质形成了富含β-层结构的不溶性细胞细胞外原纤维，称作淀粉样纤维，会导致器官功能障碍。在人淀粉样变性病已经描述了20种不同的纤维蛋白，包括运甲状腺素蛋白(TTR)，每一种都具有不同的临床现象。
野生型TTR蛋白与老年人系统性淀粉样变性病有关，后者是由心脏组织中TTR纤维的沉积而引起的一种散发病症。相反地，突变TTR蛋白与家族性淀粉样多神经病和心肌病有关，该沉积物主要作用于外周性和自助神经系统以及心脏。负责组织选择性沉积的机制现在并不知道。在淀粉样变性病产生中，TTR与单体形式的纤维产生有关。促进TTR四聚体稳定化的化合物，例如小分子白藜芦醇和二芳胺，在体外抑制了淀粉样纤维形成。参见Reixach，N.等人，PNAS101：2817-2822(2004)。
运甲状腺素蛋白也与阿尔茨海默病有关，但与淀粉样变性病中淀粉样纤维的产生相反，TTR在体外和体内抑制了淀粉样β蛋白的形成。参见Schwartzman，AL等人，Amyloid.11：1-9(2004)；Stein，TD和Johnson，JA，J.Neurosci.22：7380-7388(2002)。维生素A也显示了体外抗淀粉样遗传和淀粉样-β纤维失稳定作用。参见Ono，K.，等人，Exp.Neurol.189：380-392(2004).；
综合征
综合征(也称作
Figure BSA00000495897200463
综合征)是一种在非常小的年龄时影响儿童的罕见的常染色体隐性疾病。症状包括失明或与锥体-杆体营养不良有关的婴儿的严重视力障碍、耳聋、在第一年期间发生肥胖、II型糖尿病的发展和严重的胰岛素耐受、黑棘皮病(皮肤黑斑的发展)、促性腺激素过多性性腺功能减退和甲状腺缺乏。
与
Figure BSA00000495897200464
综合征有关的突变集中于染色体2p中的14.9cM区域。Collin，GB等人，Hum.MoI.Gen.6：213-219(1997)。与治疗个体疾病的症状表现不同，当前对于综合征患者没有有效的治疗方法。
维生素A水平的调节
维生素A(全反式视黄醇)是重要的细胞营养素，其不能从头合成，因此必须从食物来源获得。维生素A是一种总称，其命名的是具有视黄醇的生理活性，包括结合活性的任意化合物。一种视黄醇等价物(RE)相当于1μg的全反式视黄醇(3.33IU)或6μg(10IU)的β-胡萝卜素的特异性生物学活性。β-胡萝卜素、视黄醇和视黄醛(维生素A醛)都具有有效的和可靠的维生素A活性。这些化合物中的每一种都是来自植物前体分子，胡萝卜素(一族称作类胡萝卜素A的分子中的一个成员)。包括在它们醛基末端连接2个分子的视黄醛的β-胡萝卜素也称作原维生素型的维生素A。
摄取的β-胡萝卜素在肠的内腔通过β胡萝卜素双氧合酶分裂得到视黄醛。视黄醛通过视黄醛还原酶还原成视黄醇，所述酶是在肠内NADPH需要的酶，其后酯化成棕榈酸。
在摄取后，在食物中视黄醇运输到肝中结合到脂类聚集物上。参见Bellovino等人，MoI.Aspects Med.，24：411-20(2003)。当在肝中时，视黄醇与视黄醇结合蛋白(RBP)形成了复合物，然后分泌到血液循环中。在视黄醇-RBP全蛋白质递送到肝外的靶组织例如眼中前，它必须与运甲状腺素蛋白(TTR)结合。Zanotti和Berni，Vitam.Horm.，69：271-95(2004)。它是次级复合物，允许视黄醇较长时间保留在循环中。与TTR结合促进了RBP从肝细胞中释放，并阻止RBP-视黄醇复合物的肾过滤。视黄醇-RBP-TTR复合物递送到吸收视黄醇的靶组织中，并用于各种细胞过程。视黄醇经由RBP-TTR复合物通过循环递送到细胞中是细胞和组织获得视黄醇的主要途径。
通过将RBP结合到靶细胞的细胞感受器上以从复合的视黄醇-RBP-TTR型的视黄醇摄取到细胞中。该相互作用导致了RBP-感受器复合物的胞吞作用和视黄醇随后从复合物中释放，或视黄醇结合到细胞的视黄醇结合蛋白(CRBP)上，并随后apoRBP通过细胞释放到血浆中。其他途径试图使用可替代的机制使视黄醇进入到细胞中，包括单独摄取视黄醇进入细胞中。参见Blomhoff(1994)的综述。
本文所述的方法和组合物可以用于在哺乳动物患者中调节维生素A的水平。特别地，可以通过在哺乳动物中调节视黄醇结合蛋白(RBP)和运甲状腺素蛋白(TTR)的利用率或活性来调节维生素A的水平。本文所述的方法和组合物用于在哺乳动物患者中调节RBP和TTR的水平或活性，接着调节维生素A的水平。在患者中提高或降低维生素A的水平可以影响视黄醇在靶器官和组织中的利用率。因此，提供一种调节视黄醇或视黄醇衍生物利用率的方法，可以相应地调节由于靶器官和组织内局部视黄醇或视黄醇衍生物缺乏或过量而导致的疾病状况。
例如，A2E是脂褐素的主要荧光团，其是在黄斑或视网膜变性或营养不良，包括与年龄有关的黄斑变性和Stargardt病中形成的，原因在于视觉循环中类视黄醇、全反式视黄醛(A2E的一种前体)的过量产生。因此，在视网膜中维生素A和全反式视黄醛的减少将会有利于减少A2E和脂褐素的产生，有利于与年龄有关的黄斑变性的治疗。研究已经证实，降低血清视黄醇对减少RPE中的A2E和脂褐素具有有益效果。例如，维持缺乏维生素A的饮食的动物显示了脂褐素聚积显著减少。Katz等人，Mech.Ageing Dev.，35：291-305(1986)；Katz等人，Mech.Ageing Dev.，39：81-90(1987)；Katz等人，Biochim.Biophys.Acta，924：432-41(1987)。降低维生素A水平可以有利于黄斑变性和营养不良发展的进一步证据是Radu和他的同事提供的，其中眼部维生素A水平的减少导致了脂褐素和A2E都减少。Radu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，100：4742-7(2003)；Radu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，101：5928-33(2004)。
施用维甲酸类似物、N-4-(羟基苯基)视黄酰胺(HPR或芬维A胺)已经表明可以导致血清视黄醇和RBP降低。Formelli等人，Cancer Res.49：6149-52(1989)；Formelli等人，J.Clin Oncol.，11：2036-42(1993)；Torrisi等人，Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev.，3：507-10(1994)。体外研究证明，HPR干扰了TTr与RBP之间的正常作用。Malpeli等人，Biochim.Biophys.Acta 1294：48-54(1996)；Holven等人，Int.J.Cancer 71：654-9(1997)。
因此，通过阻止视黄醇与apo RBP或holo RBP(RBP+视黄醇)与其运输蛋白结合，或增加RBP和TTR肾脏排泄来抑制视黄醇递送到细胞中的调节剂(例如HPR)可以用于降低血清维生素A水平和在靶组织例如眼中视黄醇和其衍生物的产生。
类似地，降低视黄醇运输蛋白、视黄醇结合蛋白(RBP)和运甲状腺素蛋白(TTR)利用率的调节剂也可以用于降低血清维生素A水平和在靶组织例如眼中视黄醇和其衍生物的产生。例如，据显示，TTR是玻璃疣组成中的一个组分，提示TTR和与年龄有关的黄斑变性直接有关。Mullins，RF，FASEB J.14：835-846(2000)；Pfeffer BA等人，Molecular Vision 10：23-30(2004)。
希望通过在哺乳动物中调节RBP和/或TTR水平或活性的相同途径可以发现治疗代谢性疾病的应用，其中代谢性疾病是例如I型或II型糖尿病、IIH、与骨有关的疾病例如骨肥厚、蛋白质错折叠和聚集性疾病例如系统性淀粉样变性和阿尔茨海默病、和
Figure BSA00000495897200491
综合征。
因此本文所述的方法和组合物中的一个实施方案用于在哺乳动物中调节RBP或TTR水平或活性，包括给哺乳动物施用至少一次有效量的至少一种选自RBP转录抑制剂、TTR转录抑制剂、RBP翻译抑制剂、TTR翻译抑制剂、RBP清除剂、TTR清除剂、RBP拮抗剂、RBP激动剂、TTR拮抗剂、TTR激动剂和视黄醇结合蛋白受体拮抗剂的化合物。
视黄醇结合蛋白(RBP)和运甲状腺素蛋白(TTR)
视黄醇结合蛋白或RBP是一个多肽单链，分子量约为21kD。已经克隆出了RBP和其序列，并确定了氨基酸序列。Colantuni等人，Nuc.Acids Res.，11：7769-7776(1983)。RBp的三维结构显示了专门的疏水口袋，以用于结合和保护脂溶性的维生素视黄醇。Newcomer等人，EMBO J.，3：1451-1454(1984)。在体外试验中，培养的肝细胞显示了可以合成和分泌RBP。Blaner，W.S.，Endocrine Rev.，10：308-316(1989)。随后的实验证明许多细胞包含RBP的mRNA，提示RBP合成在整个身体内具有广泛的分布。参见Blaner(1989)。大多数肝分泌的RBP包含1∶1摩尔比的视黄醇，并且正常的RBP分泌需要结合到RBP上的视黄醇。
在细胞中，RBP与内质网中高浓度的视黄醇紧密结合。视黄醇与RBp的结合启动了视黄醇-RBP从内质网向高尔基复合体的易位，然后从细胞中分泌出视黄醇-RBP。从肝细胞中分泌的RBP也有助于视黄醇从肝细胞易位到星形细胞，其中发生了视黄醇-RBP直接分泌到血浆中。
在血浆中，约95％的血浆RBP与运甲状腺素蛋白(TTR)按1∶1摩尔/摩尔比结合，其中基本上全部的血浆维生素A都结合到RBP上。TTR是一种性质良好的血浆蛋白质，包含4个相同的亚单元，分子量为54,980。通过X射线衍射说明的完整三维结构显示了广阔的四面体排列的β-层。Blake等人，J.MoI.Biol.，121：339-356(1978)。一个通道通过四聚体的中心，在其中设置有两个甲状腺素的结合位点。但是，由于负协同性仅有1个甲状腺素分子可以正常地结合到TTR上。据认为，TTR与RBP-视黄醇的络合作用减少了视黄醇的肾小球过滤，因此，将视黄醇和RBP的血浆半衰期延长了3倍。
TTR和RBP转录和翻译的调节
缺乏RBP的小鼠其视黄醇功能和维生素A的利用率受到损害。Quardro，L，等人EMBO J.18：4633-4644(1999)，在此通过参考将其以整体引入本文。尽管RBP-/-小鼠可以在肝细胞中获得和储藏视黄醇，但它们缺乏动员这些肝视黄醇储藏物的能力，导致维生素A稀少的状态，使小鼠完全依赖于有规律地摄取饮食中的维生素A。Quardro(1999)。类似地，在缺乏运甲状腺素蛋白的小鼠中视黄醇水平也受到了抑制，只具有低水平的循环视黄醇和RBP，Epiksopou，V.，等人Proc.Natl.Acad.Sci 90：2375-2379(1993)；van Bennekum，A.M.，等人，J.Biol.Chem.276：1107-1113(2001)，证明了TTR维持了血浆中视黄醇和视黄醇代谢物的正常水平。
因此，在患者中调节RBP或TTR的方法和组合物直接影响视黄醇的结合，和随后视黄醇向眼中的递送。如果一种试剂减少了患玻璃体视网膜疾病例如视网膜病和黄斑变性的患者眼中的视黄醇的递送，然后会在眼中产生少量的全反式视黄醛，在相同的眼中也会产生少量的A2E。由于A2E对眼睛的细胞，特别是对眼睛的视网膜包含的细胞具有毒性，因此，在患玻璃体视网膜疾病的患者的眼中A2E的量降低期望可以提供益处。因此，调节(特别是向下调节)RBP和TTR的血清水平期望可以给各种玻璃体视网膜病症和疾病包括但不限于视网膜病和黄斑变性的患者提供益处。此外，期望这种调节可以对例如治疗代谢性疾病例如I型或II型糖尿病、IIH、与骨有关的疾病例如骨肥厚、蛋白质错折叠和聚积疾病例如系统性淀粉样变性和阿尔茨海默病、和
Figure BSA00000495897200501
综合征的患者产生益处。促进TTR和RBP血清水平降低的方法包括(仅仅是举例)，向下调节TTR和/或RBP的转录、向下调节TTR和/或RBP的翻译、抑制TTR和/或RBP的翻译后修饰、促进TTR和/或RBP的细胞内降解、抑制TTR和/或RBP的细胞外分泌、和/或提高TTR和/或RBP的血清清除率。
本文所述的方法和组合物中的一个实施方案是通过任意的影响TTR或RBP转录的方法调节TTR或RBP的水平或活性，因此影响细胞内各自的mRNA转录的表达。因此，RBP或TTR受体的表达向下调节，例如，通过编码RBP或TTR的反义寡核苷酸到mRNA，或通过该mRNA转录的向下调节、或通过mRNA转运、处理、分解的调节等等。这种向下调节或调节可以使用本领域已知的方法，例如通过使用转录的抑制剂。
也可以调节视黄醇结合蛋白受体从RBP和TTR mRNA的翻译，以作为向下调节该蛋白质表达的方法。这种向下调节或调节可以使用本领域已知的方法，例如通过使用RBP或TTR翻译的非特异性或特异性抑制剂。
例如，通过施用RBP转录或翻译的特异性或非特异性抑制剂可以调节RBP转录或翻译。已经克隆出了人RBP的5′-转录调节区并进行了测序。参见D′Onofrio，C等人EMBO J.4：1981-1989(1985)；Colontuoni，V.等人，EMBO J.6：631-636(1987)，将这两篇文献都通过参考引入本文。小鼠RBP表达可以通过维甲酸来调节，其中全反式维甲酸和9-顺式维甲酸显示出了以剂量和时间依赖性的方式诱导RBP mRNA表达。Jessen，KA和Satre，MA，Mol.Cell Biochem.211：85-94(2000)。因此，本文所述的一个实施方案是维甲酸激动剂和拮抗剂，例如RXR和RAR拮抗剂、或视黄基甲酯(参见Sani，BP，等人Biochem.Biophys.Res.Commun.，223：293-298(1996)，通过参考引入本文)在细胞中调节RBP转录或翻译的应用。RBP的其他转录和翻译调节剂包括雌激素、孕酮、睾酮和地塞米松(参见Eberhardt，DM等人，Biol.Reprod.60：714-720(1999)；Bucco RA等人，Endocrinology37：3111-3122(1996)；McKearin，D.M.等人，J.Biol.Chem 263：3261-3265(1988))。HNF-4是锌指结合蛋白家族中的一员，也调节RBP和TTR的表达。Duncan，S.A.等人Development 124：279-287(1997)；Hayashi，Y.等人，J.Clin.Pathol.：Mol.Pathol.52：19-24(1999)，将这两篇文献都通过参考引入本文。因此，HNF-4激动剂和拮抗剂以及锌指结合蛋白可以用于调节RBP或TTR的转录和翻译。
TTR是由各种肝特异性转录因子包括肝核因子(HNF)1、HNF-3、HNF-4和HNF-6调节的。参见Hayashi，Y等人，J.Clin.Pathol.：Mol.Pathol.52：19-24(1999)；Samadani，U.等人，Mol.Cell Biol.16：6273-6284(1996)，将这两篇文献都通过参考以整体引入本文。CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)和脂肪酸结合蛋白也与在肝细胞的TTR反式激活中发挥作用有关。参见Hayashi(1999)；Puskas，L.G.等人Proc.Natl.Acad.Sci.100：1580-1585(2003)，通过参考以整体引入本文。
RBP或TTR转录或翻译的其他转录和翻译调节剂包括siRNA、核酶、抗体、反义寡核苷酸或适体。
在一个实施方案中，短链干扰RNAs(siRNAs)可以通过RNA干扰(RNAi)或转录后基因沉默(PTGS)调节RBP或TTR转录或翻译(参见例如Ketting等人(2001)Genes Develop.15：2654-2659)。SiRNA分子可以通过在siRNA分子跨越的区域内分裂mRNA分子而靶向于同源mRNA分子的破坏。因此，siRNAs能靶向和分裂同源TTR或RBP mRNA，并因此用于在患者中调节TTR或RBP水平或活性。
在另一个实施方案中，核酶可以用于调节RBP或TTR转录或翻译。核酶是酶的RNA分子，能够催化RNA的特异性分裂。核酶作用的机制包括与靶RNA互补的核酶分子的序列特异性水解，然后发生核内水解分裂。核酶分子的组合物必须包括一种或多种与靶基因mRNA互补的序列，必须包括负责分裂mRNA的公知的催化序列。对于该序列，参见例如U.S.5,093,246。当在识别特异性位点识别序列中分裂mRNA的核酶用于破坏编码RBP或TTR的mRNAs时，也可以使用双髻鲨核酶。双髻鲨核酶在与靶mRNA形成互补碱基对的侧翼区所指示的位置分裂mRNAs。这种独特的要求是靶mRNA具有2种碱的下列序列：5′-UG-3′。双髻鲨核酶的构造和制备是本领域公知的。本文所述的核酶也包括RNA内切酶(下作″Cech-型核酶″)，例如在嗜热四膜虫(Tetrahymena thermophilia)中天然存在的那种(称作IVS，或L-19IVS RNA)。Cech-型核酶具有八个碱基对作用位点，其中在发生靶RNA分裂后，水解成靶RNA序列。本文所述的方法和组合物包括Cech-型核酶，其靶向于编码RBP或TTR的基因中存在的八个碱基对活性位点序列。
在另一个实施方案中，可以在患者中使用抗体来调节TTR或RBP转录或翻译。本文使用的术语“抗体”是指一种多肽，包含特异性结合和识别抗原的免疫球蛋白基因或片段的框架区。所识别的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区，以及无数的免疫球蛋白可变区基因。轻链分为κ或λ。重链分为γ、μ、α、δ或ε，它们依次分别定义了免疫球蛋白的种类IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。在每种IgG类中，有不同的亚型(例如，IgG1、IgG2等)。典型地，抗体的抗体结合区对于确定结合的特异性和亲和力是最为关键的。
示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单位包含四聚体。每个四聚体由两对相同的多肽链组成，每对具有一个轻链(约25kD)和一个重链(约50-70kD)。每个链的N-末端定义为约100-110或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语“可变的轻链”(VL)和可变的重链(VH)分别是指这些轻和重链。
制备抗体的方法是本领域公知的。参见，例如，Kohler &Milstein(1975)Nature 256：495-497；Harlow & Lane(1988)Antibodies：a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Lab.，Cold Spring Harbor，N.Y.)。编码感兴趣的抗体的重和轻链的基因可以从细胞中克隆，例如，编码单克隆抗体的基因可以从杂交瘤中克隆并用于制备重组单克隆抗体。编码单克隆抗体的重和轻链的基因文库可以由杂交瘤和浆细胞来产生。这些重和轻链基因产物的随机合并产生了大量的具有不同的抗原特异性的抗体。制备单链抗体或重组抗体的技术(U.S.4,946,778；U.S.4,816,567)适于制备在融合蛋白和本发明的方法中使用的抗体。同时，转基因小鼠或其它生物体例如哺乳动物表达人或人源化抗体。另外，噬菌体展示技术可以用于鉴定与所选择的抗原特异性结合的抗体和异侧Fab片段。
优选抗体的筛选和选择可以通过本领域已知的各种方法来进行。对靶抗原具有特异性的单克隆抗体存在的起始筛选可以通过使用例如基于ELISA的方法来进行。次级筛选优选是鉴定和选择所需的单克隆抗体，以用于构建多重特异性的本发明的融合蛋白。次级筛选可以用本领域已知的任意适当方法来进行。
本文所述的调节剂也可以包含一种或多种反义化合物，包括反义RNA和反义DNA，其仅是举例性的，能够降低患者内RBP或TTR的内源水平。因此，包括能够在细胞内降低RBP或TTR表达水平而降低外源性TTR或RBP水平或活性的调节剂。优选地，反义化合物包含与RBP或TTR核酸互补的序列。
在一个实施方案中，该反义化合物包含低聚物反义化合物，特别是寡核苷酸。反义化合物特别地与一种或多种编码RBP或TTR的核酸杂交。如本文所使用，术语“编码RBP或TTR的核酸”包括编码RBP或TTR的DNA、从这些DNA转录的RNA(包括前-mRNA和mRNA)和来自这些RNA的cDNA。
低聚物化合物和其靶核酸的特异性杂交干扰了核酸的正常功能。通过特异性与靶核酸杂交的化合物对靶核酸功能的调节一般称作“反义”。被干扰的DNA的功能包括复制和转录。被干扰的RNA的功能包括所有生命功能，例如，RNA向蛋白质翻译位点的易位、从RNA向蛋白质的翻译、RNA向获得一种或多种mRNA的剪接，和在RNA内进行的或由RNA促进的催化活性。这些干扰靶核酸的全部效果是调节了视黄醇结合蛋白受体或维甲酸合成酶(包括视黄醇脱氢酶和视黄醛脱氢酶)的表达。反义构造的详述参见U.S.6,100,090(Monia等人)，和Neckers等人，1992，Crit Rev Oncog3(1-2)：175-231，其中的教导都通过参考特别地引入本文。
在另一个实施方案中，适体(aptamers)用于调节患者体内RBP或TTR转录或翻译。适体涉及在组合库(典型地体外)中选择而产生的试剂，其中靶分子一般虽然不只是蛋白质或核酸，但其用于从分子的组合库中选择；虽然不只是寡核苷酸，但是是能与靶分子结合的那些。这些选择的试剂被确定为初级适体。术语“适体”不仅包括其最初形式的初级适体，也包括来自初级适体(即通过最小化和/或修饰)的次级适体。因此，适体必须作为配体来发挥作用，与它们的靶分子结合。参见Stull和Szoka，Pharmaceutical Res.12(4)：465-483(1995)。在本文所述的方法和组合物中，与涉及转录或翻译、调节转录或翻译的核酸或蛋白质结合的适体可以用于在患者体内调节RBP或TTR转录或翻译。
可以使用两种或更多调节剂的组合，例如RBP调节剂和TTR转录或翻译调节剂的组合。这些多重疗法可以同时或连续施用，例如，轮流施用。
在患者中RBP或TTR结合或清除的调节
在与RBP结合的视黄醇被运输到血流中以递送到眼中时，其必须与TTR复合。它是次级复合物，允许视黄醇在循环中保留较长的时间。当不存在TTR时，视黄醇-RBP复合物会快速从尿中排出。类似地，当不存在RBP时，视黄醇在血流中运输和通过细胞吸收将会减少。
因此，本发明的另一个实施方案是通过调节RBP或TTR的结合性质或清除率，来调节RBP或TTR的利用率以与血流中的视黄醇或视黄醇-RBP复合，如上所述，TTR与RBP全蛋白质的结合降低了RBP和视黄醇的清除率。因此，通过调节RBP或TTR的利用率或活性，同样可以在需要的患者中调节视黄醇的水平。
例如视黄醇与RBP结合的拮抗剂可以在本文所述的方法和组合物中使用。视黄醇与RBP结合的拮抗剂可以包括与视黄醇竞争性结合RBP的视黄醇衍生物或类似物。可替代地，拮抗剂可以包含与天然RBP竞争性地结合视黄醇但不会将视黄醇递送到细胞中的RBP片段。这可以包括对RBP与视黄醇结合蛋白受体在细胞上结合很重要的片段。可替代地，或除此以外，也可以使用例如在细胞表面上能与RBP或其它蛋白质结合的免疫球蛋白，只要它能干扰RBP结合视黄醇和/或通过RBP与视黄醇结合蛋白受体结合而吸收视黄醇的能力。如上，免疫球蛋白可以是单克隆或多克隆抗体。
如上所述，可以调节RBP与视黄醇结合的方法是与RBP激动剂或拮抗剂例如视黄醇类似物竞争性结合。因此，本文所述的方法和组合物的一个实施方案是提供调节RBP水平或活性的RBP激动剂或RBP拮抗剂。例如，施用维甲酸类似物N-4-(羟基苯基)视黄酰胺(HPR或芬维A胺)已经显示其导致了血清视黄醇和RBP较大程度的降低。Formelli等人，Cancer Res.49：6149-52(1989)；Formelli等人，J.Clin Oncol.，11：2036-42(1993)；Torrisi等人，Cancer Epidemiol.Biomarkers Prev.，3：507-10(1994)。体外研究表明，HPR干扰TTR与RBP的正常的相互作用。参见Malpeli等人，Biochim.Biophys.Acta 1294：48-54(1996)；Holven等人，Int.J.Cancer 71：654-9(1997)。
RBP水平或活性的可能的调节剂的其他例子包括维生素A的衍生物，例如维甲酸(全反式维甲酸)和异维甲酸(13-顺式-维甲酸)，它们用于治疗痤疮和某些其他的皮肤疾病。其他衍生物包括乙基视黄酰胺。在本文所述的方法和组合物的一些方面，可以单独使用视黄醇的衍生物、视黄基衍生物和有关的类视黄醇，或与其它的视黄醇衍生物或有关的类视黄醇组合使用。
RBP水平或活性的进一步可能的调节剂包括具有通式(I)和(II)结构的视黄基衍生物，或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物：
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，其中取代基选自(C2-C7)烯基、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基和杂环；或
Figure BSA00000495897200572
其中X1选自NR2、O、S、CHR2；R1是(CHR2)x-L1-R3，其中x是0、1、2或3；L1是单键或-C(O)-；R2是选自H、(C1-C4)烷基、F、(C1-C4)氟代烷基、(C1-C4)烷氧基、-C(O)OH、-C(O)-NH2、-(C1-C4)烷基胺、-C(O)-(C1-C4)烷基、-C(O)-(C1-C4)氟代烷基、-C(O)-(C1-C4)烷基胺和-C(O)-(C1-C4)烷氧基的部分；和R3是H或是任选被1-3个独立选择的取代基取代的部分，其中取代基选自(C2-C7)烯基，、(C2-C7)炔基、芳基、(C3-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基和杂环；或其活性代谢物、或药学可接受的前药或溶剂化物。
芬维A胺(下文称作羟基苯基视黄酰胺)是具有通式(II)结构的化合物的一个例子，特别适用于本文所述的组合物和方法。如下文所解释，芬维A胺可以用作视黄醇-RBP结合的调节剂。在本文所述的方法和组合物的一些方面，芬维A胺的衍生物可以用于替代芬维A胺或与芬维A胺联合使用。如本文所所使用，“芬维A胺衍生物”是指化学结构是由芬维A胺化学衍生得到的化合物。
在一些实施方案中，可以使用的芬维A胺的衍生物包括但不限于N-(4-羟基苯基)视黄酰胺-O-葡萄糖醛酸苷的C-糖苷和芳酰胺类似物，包括但不限于4-(视黄氨基)苯基-C-葡萄糖醛酸苷，4-(视黄氨基)苯基-C-葡萄糖苷、4-(视黄氨基)苯基-C-木糖苷、4-(视黄氨基)苄基-C-葡萄糖醛酸苷、4-(视黄氨基)苄基-C-葡萄糖苷、4-(视黄氨基)苄基-C-木糖苷；和视黄基β-葡萄糖醛酸苷类似物，例如1-(β-D-葡萄吡喃糖基)视黄酰胺和1-(D-葡萄吡喃糖尿基)视黄酰胺，如U.S.5,516,792、5,663,377、5,599,953、5,574,177和Bhatnagar等人，Biochem.Pharmacol.，41：1471-7(1991)所述，将上述每一篇都通过参考引入本文。，
在其他的实施方案中，其他维生素A衍生物可以包括在U.S.4,743,400中所述的那些，通过参考引入本文。这些类视黄醇包括例如，全反式视黄氯、全反式-4-(甲氧基苯基)视黄酰胺(甲氧基苯基视黄酰胺)、13-顺式-4-(羟基苯基)视黄酰胺和全反式-4-(乙氧基苯基)视黄酰胺。通过参考引入本文的U.S.4,310,546描述了N-(4-酰氧基苯基)-全反式视黄酰胺，例如，N-(4-乙酰氧基苯基)-全反式-视黄酰胺、N-(4-丙酰氧基苯基)-全反式-视黄酰胺和N-(4-正丁酰氧基苯基-)-全反式-视黄酰胺，所有这些都可以考虑用于某些实施方案中。
其他维生素A衍生物或代谢产物，例如N-(1H-四唑-5-基)视黄酰胺、N-乙基视黄酰胺、13-顺式-N-乙基视黄酰胺，N-丁基视黄酰胺、依维甲酸(阿昔曲丁)、依曲替酯、维甲酸(全反式-维甲酸)或异维甲酸(13-顺式-维甲酸)都可以考虑用于某些实施方案中。参见U.S.临时专利申请60/582,293和60/602,675；并参见Turton等人，Int.J.Exp.Pathol.，73：551-63(1992)，所有文献都通过参考引入本文。
类似地，TTR结合的调节可以与TTR配体结合的竞争性结合剂例如甲状腺素或三碘甲状腺素或它们各自的类似物，或在TTR上RBP结合的竞争性结合剂一起发生。TTR是一种四聚体蛋白质，包含相同的127个氨基酸β-层夹层亚单元，其三维构型是已知的。Blake，C等人，J.Mol.Biol.61：217-224(1971)；Blake，C.等人，J.Mol.Biol.121：339-356(1978)。TTR与全-RBP复合，并通过阻止RBP和视黄醇的肾小球过滤而延长了视黄醇和RBP的半衰期。因此，调节TTR与全-RBP的结合可以通过降低这些组合物的半衰期来调节RBP和视黄醇水平。
与全-RBP复合的TTR的三维结构显示了，TTR的天然配体，甲状腺素不会干扰与RBP全蛋白质的结合。Monaco，H.L.等人Science，268：1039-1041(1995)。但是，涉及甲状腺结合的竞争性抑制剂的研究表明，可以发生TTR-RBP全蛋白质复合物的分裂，导致患者血浆视黄醇水平降低。例如，代谢产物3，4，3′，4′-四氯联苯减少了TTR上的RBP结合位点，抑制了TTR-RBP全蛋白质复合物的产生。参见Brouwer，A.等人Chem.Biol.Interact.，68：203-17(1988)；Brouwer，A.等人，Toxicol.Appl.Pharmacol.85：310-312(1986)。因此，本文所述的方法和组合物的一个实施方案包括羟基化多卤化的芳香烃代谢物在调节TTR或RBP利用率中的应用。
仅仅是举例，其他的TTR调节剂包括双氯芬酸、双氯芬酸类似物、小分子化合物、内分泌激素类似物、黄酮类、非甾体抗炎药、二价抑制剂、强心剂、拟肽、适体和抗体。
在一个实施方案中，非甾体抗炎药可以用作TTR调节剂，包括但不限于氟芬那酸、甲芬那酸、甲氯芬那酸、二氟尼柳、双氯芬酸、舒林酸或吲哚美辛。参见Peterson，S.A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.95：12956-12960(1998)；Purkey，H.E.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.98：5566-5571(2001)，将这两篇都通过参考以整体引入本文。
双氯芬酸类似物可以与本文所述的方法和组合物联合使用。双氯芬酸类似物的一些例子包括2-[(2，6-二氯苯基)氨基]苯甲酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯甲酸；3，5，-二氯-4-[(4-硝基苯基)氨基]苯甲酸；2-[(3，5-二氯苯基)氨基]苯乙酸和2-[(2，6-二氯-4-羧酸-苯基)氨基]苯乙酸。参见Oza，V.B.等人，J.Med.Chem.45：321-332(2002，通过参考以整体引入本文。类似地，二氟尼柳类似物与本文所述的方法和组合物联合使用。二氟尼柳类似物的例子包括3′，5′-二氟联苯-3-醇；2′，4′-二氟联苯-3-羧酸；2′，4′-二氟联苯-4-羧酸；2′-二氟联苯-3-羧酸；2′-二氟联苯-4-羧酸；3′，5′-二氟联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟联苯-4-羧酸；2′，6′-二氟联苯-3-羧酸；2′6′-二氟联苯-4-羧酸；联苯-4-羧酸；4′氟-4-羟基联苯-3-羧酸；2′-氟-4-羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟-4-羟基联苯-3-羧酸；2′，4′-二氯-4-羟基联苯-3-羧酸；4-羟基联苯-3-羧酸；3′5′-二氟-4′羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氟-4′羟基联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯-4′羟基联苯-3-羧酸；3′，5′-二氯-4′羟基联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯-3-甲酰联苯；3′，5′-二氯-2-甲酰联苯；2′，4′-二氯联苯-3-羧酸；2′，4′-二氯联苯-4-羧酸；3′，5′-二氯联苯-3-基-甲醇；3′，5′-二氯联苯-4-基-甲醇；或3′，5′-二氯联苯-2-基-甲醇。参见Adamski-Werner，S.L.等人，J.Med.Chem.47：355-374(2004)，其教导通过参考以整体引入本文。与小分子类似物连接成一个化合物的二价抑制剂可以与本文所述的方法和组合物联合使用。Green，N.S.等人，J.Am.Chem.Soc，125：13404-13414(2003)。
黄酮类和有关的化合物也显示与甲状腺素竞争性地结合TTR。仅仅是举例，可以与本文所述的方法和组合物联合使用的一些黄酮类包括3-甲基-4′，6-二羟基-3′，5′-二溴黄酮或3′，5′-二溴-2′，4，4′，6-四羟基橙酮。与黄酮有关的Flavenoids和类黄酮也可以用作TTR结合的调节剂。此外，强心剂也显示与甲状腺素竞争性地结合TTR。参见Pedraza，P.等人，Endocrinology 137：4902-4914(1996)，通过参考引入本文。仅仅是举例，这些试剂包括米利酮和氨吡酮。参见Davis，PJ等人，Biochem.Pharmacol.36：3635-3640(1987)；Cody，V.，Clin.Chem.Lab.Med.40：1237-1243(2002)。
此外，激素类似物、激动剂和拮抗剂显示了是甲状腺激素包括甲状腺素和三碘甲状腺素的有效的竞争性抑制剂。例如一种雌激素拮抗剂己烯雌酚显示可以结合并抑制甲状腺素结合。参见Morais-de-Sa，E.等人，J.Biol.Chem.Epub.(Oct.6，2004)，通过参考以整体引入本文。甲状腺素-丙酸、甲状腺素乙酸和SKF-94901是可以作为TTR结合的调节剂的甲状腺素类似物的一些例子。参见Cody，V.(2002)。此外，维甲酸也已经显示可以抑制甲状腺素与人运甲状腺素蛋白结合。Smith，TJ等人，Biochim.Biophys.Acta，1199：76(1994)。
其他实施方案包括使用小分子抑制剂作为TTR结合的抑制剂。一些例子包括N-苯基邻氨基苯甲酸、甲基红、媒染橙I、二芳胺、N-苄基-对氨基苯甲酸、呋塞米、芹菜配基、白藜芦醇、二苯并呋喃、尼氟酸或舒林酸。参见Baures，P.W.等人Bioorg.&Med.Chem.6：1389-1401(1998)，通过参考引入本文。
在本文中使用的调节剂也意欲包括蛋白质、多肽或肽，包括但不限于结构蛋白、酶、细胞因子(例如干扰素和/或白细胞介素)、抗生素、多克隆或单克隆抗体或其有效部分，例如Fv片段(其抗体或其部分可以是天然的、合成的或来自人的)、多肽激素、受体、信号分子或其他蛋白质；核酸，如下定义但不限于寡核苷酸或修饰寡核苷酸、反义寡核苷酸或修饰反义寡核苷酸、cDNA、染色体DNA、人造或天然的染色体(例如酵母人工染色体)或其一部分、RNA包括mRNA、tRNA、rRNA或核酶，或核酸肽(PNA)；病毒或病毒样颗粒；核苷酸或核糖核苷酸或其合成类似物，其可以是修饰的或未修饰的；氨基酸或其类似物，其可以是修饰的或未修饰的；非肽(例如，甾类)激素；蛋白多糖；脂类；或糖类。也包括小分子，其包括无机和有机化学物，结合并占据了多肽的活性位点，因此使得催化部位难以接近底物，而使正常的生理学活动被阻断。小分子的例子包括但不限于小肽或肽样分子。
调节活性的检测
本文所述的化合物和组合物可以用于通过常规方法检测对RBP或TTR利用率干扰的分析。例如，可以用本文所述的任意化合物或组合物治疗患者，并用常规技术定量RBP或TTR水平。参见Sundaram，M.等人，Biochem.J.362：265-271(2002)。例如，典型的非竞争性夹层分析是在U.S.4,486,530中所述的分析法，通过参考引入本文。在该方法中，夹层复合物，例如免疫复合物是在分析培养基中形成的。该复合物包含被分析物、第一抗体或与被分析物结合的结合成员，和第二抗体，或与被分析物或被分析物与第一抗体的复合物结合的结合成员，或结合成员。随后，检测该夹层复合物，并涉及在样品中被分析物的存在和/或量。由于在复合物中存在标记物，其中第一抗体和第二抗体之一或两者、或结合成员中包含标记物或能与标记物结合的取代物。样品可以是血浆、血、粪便、组织、肌肉、泪、唾液或尿，例如检测对RBP或TTR清除率的调节。对该方法更详细的描述，参见U.S.Re 29,169和4,474,878，将其有关内容通过参考引入本文。
在上述夹层分析的变化方法中，在适当培养基中的夹层与标记的抗体或被分析物的结合成员接触，并培养较长的时间。然后，将培养基同与第二抗体结合的载体或被分析物的结合成员接触。在培养期过后，从培养基中分离载体并洗涤除去未结合的试剂。检查载体或培养基是否存在标记物，其与被分析物的存在或量有关。对该方法更详细的描述，参见U.S.4,098,876，将其有关内容通过参考引入本文。
本文所述的调节剂也可以用于体外分析，以检测RBP或TTR活性的干扰。例如，调节剂可以加入到包含RBP、TTR和视黄醇的样品中以检测复合物分裂。可以标记一种组分，例如RBP、TTR、视黄醇或调节剂以确定是否发生复合物形成的分裂。可以通过常规方法，例如上述的夹层分析来检测和/或测定复合物形成和随后的分裂。其他检测系统例如RBP-TTR-视黄醇复合物形成的FRET检测可以用于检测对RBP或TTR结合的调节。参见U.S.临时专利申请No.60/625,532″Fluorescence Assay for Modulators of retinol Binding″，通过参考以整体引入本文。
体外基因表达分析可以用于检测本文所述的调节剂对RBP或TTR转录或翻译的调节。例如，如Wodicka等人，Nature Biotechnology15(1997)(通过参考以整体引入本文)所述，因为mRNA杂交与基因表达水平有关，因此可以比较杂交模式来确定不同的基因表达。作为一个非限制性的例子，可以用调节剂处理的样品的杂交模式与没有进行处理或用其他化合物或不同量的相同化合物处理的样品的杂交模式进行比较。用DNA排列技术来分析这些样品，参见U.S.专利No.6,040,138，通过参考以整体引入本文。也可以通过在体外分析中分析由RBP或TTR启动子区驱动的报告蛋白的表达，用重组DNA技术来分析RBP或TTR活性的基因表达分析。参见，例如，Rapley和Walker，Molecular Biomethods Handbook(1998)；Wilson和Walker，Principals and Techniques of Practical Biochemistry(2000)，通过参考以整体引入本文。
也可以使用体外翻译分析来检测本文所述的RBP或TTR调节或翻译。仅仅是举例，调节剂对翻译的调节可以通过使用无细胞的蛋白翻译系统来检测，例如大肠杆菌提取物、兔网织红细胞裂解物和麦胚提取物，参见Spirin，A.S.，Cell-free protein synthesisbioreactor(1991)，通过参考以整体引入本文，包括在存在或不存在本文所述的调节剂的条件下比较蛋白质的翻译。调节剂对蛋白质翻译的影响也可以用蛋白质胶电泳或免疫复合分析来检测以确定在加入调节剂后质和量的差异。
此外，包括但不限于小分子、多肽、核酸和抗体的其他可能的调节剂也可以用上述的体外检测法来筛选。例如，根据上述的教导，本文所述的方法和组合物可以用于筛选小分子库、核酸库、肽库或抗体库。筛选库例如组合库或上述所列的其他库的方法，可以参见U.S.5,591,646；5,866,341；和6,343,257，通过参考以整体引入本文。
调节剂活性的体内检测
除了上述的体外方法，本文所述的方法和组合物也可以与体内检测和/或对TTR或RBP利用率的调节活性的定量结合使用。例如，将标记的TTR或RBP注射到患者中，其中候选的调节剂是在注射标记的TTR或RBP之前、其间或之后加入。患者可以是哺乳动物，例如人；但是也可以使用其他哺乳动物，例如灵长类、马、狗、绵羊、山羊、兔、小鼠或大鼠。然后从患者中移出生物样品，检测标记物以确定TTR或RBP的利用率。生物样品可以包含但不限于血浆、血、尿、粪便、肌肉、组织、泪或唾液。根据标记物的性质，本文所述的对标记试剂的监测可以用本领域普通技术人员已知的任意常规方法来进行。检测化学发光、放射性标记或其他标记的化合物的监测装置的例子在U.S.4,618,485；5,981,202中有记载，其有关内容通过参考引入本文。
治疗方法、剂量和联合治疗
包含本文所述的化合物的组合物可以施用于预防性或治疗性疗法。术语“治疗”是指预防性和/或治疗性疗法。在治疗性应用中，该组合物以组以确保或至少部分地阻止疾病、病症或病况的症状的量施用于已经患有疾病、病况或病症的患者。对该应用有效的量将取决于疾病、病症或病况的严重度和病程、先前的治疗、患者的健康情况和对药物的应答、治疗医生的判断。认为通过常规试验(例如，剂量递增的临床试验)确定治疗有效量是在本领域的技术范围内。
在预防性应用中，包含本文所述的化合物的组合物施用于对特定疾病、病症或病况敏感或有危险的患者。该量定义为“预防有效量或剂量”。在该应用中，精确的剂量也取决于患者的健康情况、体重等等。认为通过常规试验(例如，剂量递增的临床试验)确定治疗预防有效量是在本领域的技术范围内。
术语“增强”或“提高”是指增加或延长所需效果的效力或持续时间。因此，当增强治疗剂的效果时，术语“增强”是指增加或延长效力或持续时间、其他治疗机对系统的效果。本文使用的“增强有效量”是指某一剂量足以增强其他治疗剂对期望的系统的效果。当在患者中使用时，对该应用有效的量将取决于疾病、病症或病况的严重度和病程、先前的治疗、患者的健康情况和对药物的应答、治疗医生的判断。
在患者的情况没有改善的情况中，医生慎重施用该化合物可以是长期施用，也即施用较长的时间，包括在患者整个一生，以改善或控制或限制患者的疾病或病况。
在患者的情况改善的情况中，医生慎重施用该化合物可以是连续给予或暂时中止一段较长的时间(即“休药期”)。
当患者的情况已经改善时，如果必要施用维持剂量。随后，可以降低作为症状函数的施用剂量或频率或两者皆降到一定水平保持改善的疾病、病症或病况。但是，当症状有任何复发时，患者可以要求进行基于长期的间歇疗法。
符合该量的给定试剂的量将会由于各自因素而不同，例如特定的化合物、疾病的情况和其严重度、需要治疗的患者或宿主的性质(例如体重)，但尽管如此，可以根据该情况周围的特定情况包括例如，所施用的具体试剂、给药途径、要治疗的疾病、和要治疗的患者或宿主，使用本领域已知的方法进行常规确定。但是一般地，成人治疗所使用的剂量典型地是每日0.02-5000mg优选每日1-1500mg。方便地，所需剂量可以在单剂量或者同时(或在较短时间内)或间隔适当间期，例如每日2，3，4或更多亚剂量施用的多剂量中。
在一些情况中，施用至少一种本文所述的化合物(或其药学可接受的盐、酯、酰胺、前药或溶剂化物)与另一种治疗剂的组合是适当的。仅仅是举例，如果接受本文的一种化合物的患者发生的一种副作用是炎症，那么施用抗炎剂和起始的治疗剂是适当的。或者，仅仅是举例，通过施用佐剂(即佐剂本身仅具有很小的治疗益处，但与其他治疗剂组合时增强了患者总的治疗益处)增强了本文所述的一种化合物的治疗有效性。或者，仅仅是举例，可以通过施用本文所述的化合物和另一种也具有治疗益处的治疗剂(其也包括治疗法)来增强患者的益处。仅仅是举例，在施用本文所述的化合物治疗黄斑变性时，可以通过给患者提供另一种治疗剂或黄斑变性疗法来得到增强的治疗益处。在任何情况下，不管要治疗的是什么疾病、病症或病况，患者所具有的总益处将简单地是两种治疗剂的加和，或患者可以得到协同性益处。
具体地，可能的联合治疗的非限制性例子包括使用至少一种调节RBP或TTR水平或活性的化合物以及一氧化氮(NO)诱导物、他汀类、带负电荷的磷脂、抗氧化剂、矿物质、抗炎剂、抗血管生成药、基质金属蛋白酶抑制剂和类胡萝卜素。在一些情况中，适当的组合试剂可以完全落在多个范围内(仅仅是举例，叶黄素是抗氧化剂和类胡萝卜素)。此外，调节RBP或TTR水平或活性的化合物也可以与其他为患者提供益处的试剂一起施用，包括但不仅限于环孢霉素A。
此外，调节RBP或TTR水平或活性的化合物也可以与为患者提供加和或协同性益处的方法联合使用，包括但不仅限于使用体外流变疗法(也称作膜差异过滤)、使用可植入的微型望远镜、玻璃疣的激光光凝术和微刺激疗法。
使用抗氧化剂也会对患黄斑变性和营养不良的患者显示益处。参见，例如，Arch.Ophthalmol.，119：1417-36(2001)；Sparrow等人，J.Biol.Chem.，278：18207-13(2003)。可以与调节RBP或TTR水平或活性的至少一种化合物联合使用的适当的抗氧化剂的例子包括维生素C、维生素E、β-胡萝卜素和其它类胡萝卜素、辅酶Q、和4-羟基-2，2，6，6-四甲基哌啶-N-氧基(也称Tempol)、叶黄素、丁基化羟基甲苯、白藜芦醇、trolox类似物(PNU-83836-E)和覆盆子提取物。
使用某些矿物质也会对患黄斑变性和营养不良的患者显示益处。参见，例如，Arch.Ophthalmol.，119：1417-36(2001)。可以与调节RBP或TTR水平或活性的至少一种化合物联合使用的适当的矿物质的例子包括包含铜的矿物质，例如氧化铜(仅仅是举例)；包含锌的化合物，例如氧化锌(仅仅是举例)；和包含硒的化合物。
使用某些带负电荷的磷脂也会对患黄斑变性和营养不良的患者显示益处。参见，例如，Shaban & Richter，Biol.Chem.，383：537-45(2002)；Shaban等人，Exp.Eye Res.，75：99-108(2002)。可以与调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合使用的适当的带负电荷的磷脂的例子包括心磷脂和磷脂酰甘油。当与调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合施用时，带正电荷和/或中性磷脂也可以对患黄斑变性和营养不良的患者显示益处。
使用某些类胡萝卜素与在光感受器细胞中维持必需的光保护有关。类胡萝卜素是天然产生的萜类的黄色到红色的色素，其可以在植物、藻类、细菌或某些动物例如鸟类和贝类中发现。类胡萝卜素是一大类分子，其中已经鉴定出了超过600种天然产生的类胡萝卜素。类胡萝卜素包括烃类(胡萝卜素)和它们氧合、醇化的衍生物(叶黄素)。它们包括actinioerythrol、虾青素、斑蝥素、辣椒黄素、辣椒红素、β-8′-脱辅基胡萝卜素醛(apo-胡萝卜素醛)、β-12′-脱辅基胡萝卜素醛、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、″胡萝卜素″(α和β-胡萝卜素的混合物)、γ-胡萝卜素、β-cyrptoxanthin、叶黄素、番茄红素、violerythrin、玉米黄素和其包含羟基或羧基成员的酯。许多自然中产生的类胡萝卜素是顺式-和反式异构体的形式，而合成的化合物通常是外消旋混合物。
在人中，视网膜选择性主要蓄积两种类胡萝卜素：玉米黄素和叶黄素。认为这两种类胡萝卜素是保护视网膜的，因为它们强烈地抗氧化和吸收蓝光。用鹌鹑的研究确认了，用缺乏类胡萝卜素的饮食培养的组具有低浓度玉米黄素的视网膜，受到严重的光损害，这通过非常高数量的光感受器细胞的细胞凋亡得到证实，而高浓度的玉米黄素的组只有很小的损害。可以与调节RBP或TTR水平或活性的至少一种化合物联合使用的适当的类胡萝卜素的例子包括叶黄素和玉米黄素，以及上述任意的类胡萝卜素。
适当的一氧化氮诱导物包括在体内刺激内源性NO或提高内源性内皮细胞衍生舒张因子(EDRF)水平的化合物或是一氧化氮合成酶的底物。这些化合物包括L-精氨酸、L-高精氨酸和N-羟基-L-精氨酸、包括它们的硝基化和亚硝基化类似物(例如，硝基化的L-精氨酸、亚硝基化的L-精氨酸、硝基化的N-羟基-L-精氨酸、亚硝基化的N-羟基-L-精氨酸、硝基化的L-高精氨酸和亚硝基化的L-高精氨酸)、L-精氨酸的前体和/或生理学可接受的盐，包括例如，瓜氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、包含这些氨基酸中的至少一个的多肽、精氨酸酶的抑制剂(例如，N-羟基-L-精氨酸和2(S)-氨基-6-硼己酸)和一氧化氮合成酶的底物、细胞因子、阿糖腺苷、缓激肽、钙网织蛋白、双醋苯啶和酚酞。EDRF是一种内皮分泌的血管舒张因子，已被鉴定为一氧化氮或与其紧密相关的衍生物(Palmer等人，Nature，327：524-526(1987)；Ignarro等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84：9265-9269(1987))。
他汀类可以作为降脂剂和/或适当的一氧化氮诱导物。此外，已经证明了使用他汀和延迟黄斑变性发生或发展之间的关系。G.McGwin等人，British Journal of Ophthalmology，87：1121-25(2003)。因此，当与调节RBP或TTR水平或活性的至少一种化合物联合施用时，他汀类可以为患有眼部病症(例如黄斑变性和营养不良、视网膜营养不良)的患者提供益处适当的他汀，仅仅是举例，包括罗苏伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、达伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀钙(其是阿伐他汀的半钙盐)和二氢康帕丁。
可以与调节RBP或TTR水平或活性的至少一种化合物一起使用的抗炎剂包括但不仅限于阿司匹林和其他水杨酸盐、色苷酸钠、奈多罗米、茶碱、齐留通、扎鲁司特、孟鲁司特、普仑司特、吲哚美辛和脂氧合酶抑制剂；非甾体抗炎药(NSAIDs)(例如布洛芬和萘普生)；泼尼松、地塞米松、环氧合酶抑制剂(即，COX-1和/或COX-2抑制剂，例如NaproxenTM，或CelebrexTM)；他汀类(仅仅是举例，罗苏伐他汀、匹伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、西立伐他汀、美伐他汀、velostatin、氟伐他汀、康帕丁、洛伐他汀、达伐他汀、fluindostatin、阿伐他汀、阿伐他汀钙(其是阿伐他汀的半钙盐)和二氢康帕丁)；和分离的类固醇。
适当的基质金属蛋白酶(MMPs)也可以与调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合施用，以治疗眼部疾病或与黄斑或视网膜变性有关的症状。已知MMPs水解细胞外基质的大部分组分。这些蛋白酶在许多生物过程例如正常组织改造、胚胎发生、伤口愈合合和血管发生中发挥主要作用。但是，在许多疾病状态包括黄斑变性中观测到MMp的过度表达。已经鉴定了许多MMP，其中大多数是多区域锌内肽酶。已知多种金属蛋白酶抑制剂(参见例如Whittaker M.等人，Chemical Reviews 99(9)：2735-2776(1999)对MMP抑制剂的综述)。MMP抑制剂的代表性例子包括金属蛋白酶的组织抑制剂(TIMPs)(例如，TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3或TMP-4)、α2-微球蛋白、四环素类(例如四环素、米诺环素、多西环素)、氧肟酸盐(例如，巴马司他、MARIMISTAT和托卡特)、螯合剂(例如，EDTA、半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、D-青霉胺和金盐)、合成的MMP片段、琥珀酰巯嘌呤、磷酰胺和羟甲酸。可以与调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合使用的MMP抑制剂的例子包括上述任意的抑制剂。
使用抗血管生成或抗-VEGF药也显示了对患黄斑变性和营养不良的患者提供益处。与调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合使用的适当的抗血管生成或抗-VEGF药的例子包括Rhufab V2(LucentisTM)、色氨酰基-tRNA合成酶(TrpRS)、Eye001(抗-VEGF Peg化适体)、角鲨胺，RetaaneTM 15mg(长效混悬的乙酸阿奈司他；Alcon，Inc.)、考布他汀A4前药(CA4P)、MacugenTM、MifeprexTM(米非司酮-ru486)、subtenon曲安奈德、玻璃体内晶体曲安奈德、普啉司他(AG3340-合成的基质金属蛋白酶抑制剂，Pfizer)、氟轻松(包括氟轻松眼内植入剂，Bausch & Lomb/控制递送系统)、VEGFR抑制剂(Sugen)和VEGF-Trap(Regeneron/Aventis)。
其他用于缓解视力损伤的药物治疗剂可以与至少一种调节RBP或TTR水平或活性的化合物联合使用。这些治疗剂包括但不限于试剂VisudyneTM并使用非热能激光、PKC 412、Endovion(NeuroSearchA/S)、神经营养因子包括例如胶质细胞衍生的神经营养因子和睫状节神经细胞营养因子、diatazem、多佐胺、Phototrop、9-顺式-视黄醛、眼睛药物(包括Echo Therapy)包括碘依可酯或二乙氧膦酰硫胆碱或碳酸酐酶抑制剂、AE-941(AEterna Laboratories，Inc.)、Sirna-027(Sirna Therapeutics，Inc.)、pegaptanib(NeXstar Pharmaceuticals/GileadSciences)、神经营养因子(仅仅是举例，包括NT-4/5、Genentech)、Cand5(Acuity Pharmaceuticals)、ranibizumab(Genentech)、INS-37217(Inspire Pharmaceuticals)、整联蛋白拮抗剂(包括来自JeriniAG和Abbott Laboratories的那些)、EG-3306(Ark Therapeutics Ltd.)、BDM-E(BioDiem Ltd.)、沙利度胺(如果使用，是例如由EntreMed，Inc.生产的)、cardiotrophin-1(Genentech)、2-甲氧基雌二醇(Allergan/Oculex)、DL-8234(Toray Industries)、NTC-200(Neurotech)、四锍钼酸盐(University of Michigan)、LYN-002(Lynkeus Biotech)、微藻化合物(Aquasearch/Albany，Mera Pharmaceuticals)、D-9120(Celltech Group pic)、ATX-S10(Hamamatsu Photonics)、TGF-β2(Genzyme/Celtrix)、酪氨酸激酶抑制剂(Allergan，SUGEN，Pfizer)、NX-278-L(NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences)、Opt-24(OPTISFrance SA、视网膜细胞神经节神经保护剂(Cogent Neurosciences)、N-硝基吡唑衍生物(Texas A&M University System)、K-P-102(Krenitsky Pharmaceuticals)和环孢霉素A。参见U.S.专利申请公开号20040092435。
为了治疗糖尿病，本文所述的方法和组合物进一步包括施用第二化合物，其选自(a)降低葡萄糖的激素或拟激素(例如，胰岛素、GLP-1或GLP-1类似物、exendin-4或liraglutide)，(b)降低葡萄糖的磺酰脲(例如，醋酸己脲、氯磺丙脲、甲苯磺丁脲、妥拉磺脲、格列美脲、格列吡嗪、格列本脲、微粉化的格列本脲或格列齐特)，(c)降低葡萄糖的双胍(二甲双胍)，(d)降低葡萄糖的氯茴苯酸(例如，那格列奈或瑞格列奈)，(e)降低葡萄糖的噻唑烷二酮或其他的PPAR-γ激动剂(例如吡格列酮、罗格列酮、曲格列酮或isagitazone)，(f)降低葡萄糖的对PPAR-γ和PPAR-α都具有亲和力的双作用PPAR激动剂(例如，BMS-298585和tesaglitazar)，(g)降低葡萄糖的α-葡糖苷酶抑制剂(例如，阿卡波糖或米格列醇)，(h)不靶向于葡萄糖-6-磷酸酶转位酶的降低葡萄糖的反义化合物，(i)抗肥胖的食欲抑制剂(例如苯丁胺)，(j)抗肥胖的脂肪吸收抑制剂例如奥利斯特，(k)睫状节神经细胞营养因子的抗肥胖修饰形式，其抑制刺激食欲的饥饿信号，(l)降脂的胆酸盐螯合树脂(例如，考来烯胺、考来替泊、和盐酸考来维仑)，(m)降脂的HMG CoA-还原酶抑制剂(例如，洛伐他汀、西立伐他汀、普伐他汀、阿伐他汀、辛伐他汀和氟伐他汀)，(n)烟酸，(o)降脂的纤维酸衍生物(例如氯贝丁酯、吉非贝齐、非诺贝特、苯扎贝特和环丙贝特)，(p)包括普罗布考、新霉素、右旋甲状腺素的试剂，(q)植物-睾醇酯，(r)胆固醇吸收抑制剂(例如，依则替米贝)，(s)CETP抑制剂(例如torcetrapib和JTT-705)，(t)MTP抑制剂(例如英普他派)，(u)胆酸转运体(顶端的钠依赖性胆酸转运体)的抑制剂，(v)肝CYP7a的调节剂，(w)ACAT抑制剂(例如阿伐麦布)，(x)降脂的雌激素替代治疗剂(例如tamoxigen)，(y)合成的HDL(例如，ETC-216)，或(z)降脂的抗炎剂(例如糖皮质激素)。当第二化合物具有不同的靶和/或通过与本文所述的试剂(即调节RBP或TTR水平或活性的那些)不同的作用方式发挥作用时，期望联合施用(例如同时、连续或分别施用)这两种试剂可以为糖尿病患者提供加和和/或协同的治疗益处。为了相同的原因，相对于不存在组合时各试剂的剂量，期望这两种试剂的联合施用(例如同时、连续或分别施用)可以降低每种或其中一种的剂量，同时仍然能达到期望的治疗益处，包括(仅用作举例)降低血糖和控制HbA1c。
在任何情况中，多种治疗剂(其中一种是本文所述的化合物)可以以任意顺序或甚至同时施用。如果是同时，多种治疗剂可以以单一、统一的形式，或以多种形式(仅仅是举例，作为单一药丸或2个分开的药丸)。一种治疗剂可以以多剂量给予，或两种都是以多剂量给予。如果不同时，多剂量之间的时间可以从超过0周到小于4周不等。此外，联合方法、组合物和制剂并不限于仅使用两种试剂；我们预测可以使用多种的治疗组合。仅仅是举例，调节RBP或TTR水平或活性的化合物可以与至少一种抗氧化剂和至少一种带负电荷的磷脂一起提供；或调节RBP或TTR水平或活性的化合物可以与至少一种抗氧化剂和至少一种一氧化氮产生的诱导物一起提供；或调节RBP或TTR水平或活性的化合物可以与至少一种一氧化氮产生的诱导物和至少一种带负电荷的磷脂一起提供；等等。
此外，调节RBP或TTR水平或活性的化合物可以与为患者提供加和或协同益处的方法联合使用。已知的、目的或被认为是缓解视力受损的方法包括但不限于“限制视网膜易位”、光动力学疗法(仅用作举例包括，靶向于受体的PDT、Bristol-Myers Squibb，Co.；与PDT注射的卟吩姆钠；维替泊芬，QLT Inc.；罗替泊芬与PDT，MiraventMedical Technologies；他拉泊芬与PDT，Nippon Petroleum；莫特沙芬镥，Pharmacyclics，，Inc.)、反义寡核苷酸(包括，例如，NovagaliPharma SA试验的产品和ISIS-13650，Isis Pharmaceuticals)、激光光凝术、玻璃疣激光法、黄斑裂洞手术、黄斑易位手术、可植入的微型望远镜、Phi-运动血管造影术(也称显微-激光疗法和进料导管疗法)、质子束疗法、微刺激疗法、视网膜剥离和玻璃体手术、巩膜弯曲、黄斑下手术、瞳孔热疗法、光系统I疗法、使用RNA干扰(RNAi)、体外流变疗法(也称做膜差异过滤和电疗法)、微芯片移植、干细胞疗法、基因替代疗法、核酶基因疗法(包括低氧应答元素的基因疗法，Oxford Biomedica；Lentipak，Genetix；PDEF基因疗法，GenVec)、光感受器/视网膜细胞移植(包括可移植的视网膜上皮细胞，Diacrin，Inc.；视网膜细胞移植，Cell Genesys，Inc.)和针灸。
可以使用使个体受益的进一步的组合包括使用基因试验来确定个体是否是突变基因的携带者，其中已知突变基因与某些眼部病症有关。仅用作举例，在人体内ABCA4基因的缺乏被认为是与五种不同的视网膜表型包括Stargardt病、锥体-杆体营养不良、与年龄相关的黄斑变性和视网膜色素变性有关。参见例如，Allikmets等人，Science，277：1805-07(1997)；Lewis等人，Am.J.Hum.Genet.，64：422-34(1999)；Stone等人，Nature Genetics，20：328-29(1998)；Allikmets，Am.J.Hum.Gen.，67：793-799(2000)；Klevering，等人，Ophthalmology，111：546-553(2004)。这些患者有望在本文所述的方法中获得治疗性和/或预防性益处。
除了上述的成分，本文公开的制剂进一步包括一种或多种任选的在药物制剂领域使用的附加成分，即稀释剂、缓冲剂、调味剂、着色剂、粘合剂、表面活性剂、增稠剂、润滑剂、悬浮剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等等。
该化合物也可以多次施用于患者，多次施用之间的时间包括至少数小时，或1天，或长达1周或更长时间。该化合物也可以每12小时、每天、每两天、每三天、每一周或其他任何适当的可以有效调节维生素A水平的时间施用。
在施用上述化合物的同时，也可以检测患者的与视黄醇相关的疾病过程的生理学现象。例如，可以检测患者与年龄相关的黄斑变性或营养不良的生理学现象，例如在患者眼中玻璃疣的形成、测定患者眼中脂褐素的水平、测定A2E和A2E的前体的自发荧光，和测定患者眼中N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺的水平。此外，也可以检测患者维生素A水平的改变或干扰，以及生物样品中的RBP和TTR水平或活性。
实施例
下列实施本文所述方法的成分、过程和方法与上述的那些相对应。下面的方法用细节描述了当前检测和筛选视黄醇结合的调节剂的方法的优选实施方案。任何未具体描述的方法、材料、试剂或赋形剂是分析和筛选领域技术人员普遍知道的和可获得的。
实施例1：抑制TTR的基因表达的化合物的鉴定
可以将受试化合物施用于用TTR表达构造转染的人细胞的培养基，并在37℃下培养10到45分钟。将没有转染的相同类型细胞的培养基在没有受试化合物的情况下培养相同的时间，以提供阴性对照。
然后根据Chirgwin等人，Biochem.18，5294-99，(1979)所述从两种培养基中分离RNA。用20到30μg总RNA制备NorthernRNA印迹，并与32P标记的TTR-特异性探针杂交。先前已经描述了检测TTR mRNA转录的探针。相对于没有受试化合物时得到的信号降低了TTR-特异性信号的受试化合物即鉴定为TTR基因表达的抑制剂。
实施例2：与RBP结合和/或抑制RBP的基因表达的化合物
可以将受试化合物施用于用RBP表达构造转染的人细胞的培养基，并在37℃下培养10到45分钟。将没有转染的相同类型细胞的培养基在没有受试化合物的情况下培养相同的时间，以提供阴性对照。
然后根据Chirgwin等人，Biochem.18，5294-99，(1979)所述从两种培养基中分离RNA。用20到30μg总RNA制备Northern RNA印迹，并与32P标记的RBP-特异性探针杂交。相对于没有受试化合物时得到的信号降低了RBP-特异性信号的受试化合物即鉴定为RBP基因表达的抑制剂。
实施例3：检测A2E和/或前体的存在
在abcr-/-和野生型小鼠中，通过HPLC确定在RPE中A2E的水平，通过使用共焦激光扫描检眼镜并测定它们在430nm处的吸收可以确定A2E的水平。
实施例4：测定对视力受损的保护
下面研究是根据Sieving，P.A.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，98：1835-40(2001)进行的。对于长期的曝光研究，将7周大的Sprague-Dawley雄性大白鼠放置于5lux荧光白光的12:12小时亮/暗循环中。对于急性曝光研究，在暴露于漂白光之前，将大鼠进行暗适应过夜，然后进行ERG测定。将大鼠暴露于2,000lux白色荧光中48小时。记录随后7天的ERGs，立即进行组织学研究。
处死大鼠，取出眼睛并切片。在两个半球上每200μm测定外核层厚度和杆状外节(ROS)长度上的柱细胞数，平均该数得到整个视网膜上细胞改变的测定值。通过HPLC确定在RPE中A2E的水平，通过使用共焦激光扫描检眼镜并测定它们在430nm处的吸收可以确定A2E的水平。
实施例5：检测眼部治疗、疗法或药物的有效性
评价对黄斑或视网膜变性和营养不良有作用的治疗、疗法或药物的有效性可以是三个步骤，其包括1)患者的起始测定，例如患者眼中玻璃疣的形成，患者眼中地图状萎缩的大小和数目、通过测定A2E或脂褐素或A2E的前体的自发荧光测定患者眼中的脂褐素水平、或测定患者眼中N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺水平。2)给患者提供治疗、疗法或药物，3)在步骤(2)后测定患者眼中玻璃疣的形成，患者眼中地图状萎缩的大小和数目、通过测定A2E或脂褐素或A2E的前体的自发荧光测定患者眼中的脂褐素水平、或测定患者眼中N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺水平，评估结果，其将表明治疗、疗法或药物可能具有需要的效果。需要的效果可以包括玻璃疣形成的减少或中止，患者眼中的脂褐素水平、A2E或A2E的前体的自发荧光、或患者眼中的N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺水平。可以在有或没有非治疗间隔的情况下重复施用步骤2-3。患者可以包括但不限于小鼠和/或大鼠和/或人类患者。
实施例6：检测TTR或RBP调节剂对糖尿病患者的有效性
TTR或RBP调节剂可以在良好确定的老鼠模型中测定，包括(非肥胖性糖尿病)老鼠，以及Biobreeding(BB)和链脲霉素-诱导的糖尿病大鼠。参见U.S.6,770,272，以整体引入本文，和Tuitoek，PJ，等人，Int.J.Vitam.Nutr.Res.66：101-5(1996)。可以在小鼠或大鼠中再次测定化合物对抗糖尿病产生的作用，或将该化合物施用于具有已确定的糖尿病症状的小鼠。
简言之，在糖尿病症状产生前，通过腹腔内注射将TTR或RBP施用到6周大的小鼠中。在25周大时检查该小鼠，其中在对照动物和治疗组中糖尿病发病率的降低表明其在糖尿病治疗中的可能的治疗候选者。
TTR或RBP调节剂也可以施用于人类患者来抑制糖尿病的发展。该化合物可以在药学可接受的载体(例如，盐水)中配制成用于口服、静脉内、皮下、肌内、经皮或吸入施用。当发现葡萄糖代谢中抗-β细胞自身免疫和/或细微的前糖尿病症状的改变时，治疗组合物可以施用于患者(即，早期的钝性i.v.葡萄糖耐受试验)，并根据患者的应答，以每天或低至每周1次的频率重复施用。可以用标准方法检测在要治疗的人的葡萄糖耐受实验中葡萄糖水平、抗-β细胞自身抗体水平或异常情况来确定该调节剂的优选剂量。
实施例7：血清HPR水平与血清视黄醇，和眼睛类视黄醇与A2E水平的关系的体内分析
为了探求在视循环中HPR的作用，检查小鼠中HPR的体内作用。因此，将HPR施用于ABCA4无效突变小鼠(5-20mg/kg，，i.p.在DMSO中)，共28天。对照小鼠仅接受DMSO载体。在治疗期结束后，测定在眼组织中类视黄醇含量以及血清中视黄醇和HPR的浓度。观测到血清视黄醇的极大降低是血清HPR升高的函数。该作用与眼的类视黄醇和A2E(一种毒性的基于类视黄醇的荧光团)的同等程度的降低有关。因此，测定的类视黄醇和A2E的各个计算的降低百分数几乎相等(参见附图2)。这些结果表明，由于系统施用HPR而引起的眼的类视黄醇和A2E的降低是由血清视黄醇水平的降低引起的。
为了确保在ABCA4无效小鼠中所观测到的HPR的作用不是由基因突变造成的，给野生型小鼠施用5天的HPR(20mg/kg，i.p.在DMSO中)。对照小鼠仅接受DMSO载体。在HPR治疗的最后一天，将小鼠暴露于不变的光照中(1000lux，10分钟)，以“刺激”视循环产生视觉荧光团。在光照期后立即处死小鼠，确定血清和眼组织中类视黄醇的浓度。数据(参见附图3)显示，对视黄酯或视觉荧光团的合成没有显著的抑制。如上述研究，HPR导致了血清视黄醇(～55％)、眼部视黄醇(～40％)和眼部视黄醛(～30％)显著降低。尽管HPR在治疗期没有在眼组织内蓄积(～5μM)。但没有观测到对LRAT或Rpe65异构酶活性的作用。
用RBP4-/-小鼠和ABCA4-/-小鼠的遗传杂交来检查RBP在血清和眼组织中对视黄醇水平的介导的作用。当施用剂量为10mg/kg时，在HPR研究中观测到该杂交的第一代小鼠(即RBP4/ABCA4+/-)中RBP-视黄醇降低的水平相当(血清RBP-视黄醇降低～50-60％)。此外，RBP4/ABCA4+/-小鼠显示了眼部视黄醇的同等程度地降低(降低～60％)。这些发现与用HPR对RBP-视黄醇的药理调节期间得到的数据相符，因此，强烈表明基于A2E的荧光团将会成比例地减少。在接受急性或慢性剂量的HPR的小鼠中没有观测到LRAT活性的抑制。
实施例8：检测RBP/TTR相互作用的高通量分析
血清视黄醇和RBP的降低与毒性脂褐素荧光团的伴随降低相关。因为影响RBP-TTR相互作用的化合物将会直接影响眼中的荧光团水平，发展出了预防RBP与TTR相互作用的小分子的高通量筛选。该筛选使用RBP和TTR的探针标记的形式，其中当复合时其参与到独特的荧光共振能转移(FRET)事件中。干扰RBP-TTR相互作用的化合物预防了FRET。在附图4中显示了在该类型的分析过程中得到的样品谱。这些数据表明在不存在(实线)和存在(虚线)HPR(1μM)时RBP-TTR(0.5μM未标记的RBP+0.5μM Alexa430-TTR)的相互作用。将该样品在37℃下培养30分钟，然后用330nm光照射。所示的发射光谱范围是400-600nm。HPR与RBP结合，并阻止了与TTR的相互作用，因此HPR的此性质用于确认该筛选检测对RBP-TTR相互作用抑制作用的能力。HPR的存在与视黄醇和TTR-探针的荧光的显著降低有关，表明复合作用丧失。此外，该分析的设计允许区别与RBP干扰的化合物和干扰TTR的化合物。因此，通过使用两种不同的激发能(对蛋白质和视黄醇分别是280nm和330nm)和实现对视黄醇和TTR-探针的荧光的同时检测，可以容易地确定预定的小分子的“靶”。
实施例9：分析确认和与常规技术的比较
如色谱法和分光光度测定技术所示，HPR是RBP-TTR相互作用的有效抑制剂(参见，例如，Radu RA，Han Y，Bui TV，Nusinowitz S，Bok D，Lichter J3Widder K，Travis GH和Mata NL；Reductions inSerum Vitamin A Arrest Accumulation of Toxic Retinal Fluorophores：A Potential Therapy for Treatment of Lipofuscin-based Retinal Diseases，Invest Ophthalmol.Vis Sci，in press(2005))。因此，HPR可以用作阴性对照来确认高通量分析检测RBP-TTR相互作用的抑制剂的能力。因此，HPR可以不同的浓度(0-4μM)使用，使用如实施例7指定的条件来评价高通量分析。如附图5所示，高通量分析可以有效地检测类似于HPR的抑制RBP-TTR相互作用的化合物。
在生理学上，RBP-视黄醇必须与TTR复合，以实现RBP-视黄醇的高稳态浓度。该相互作用建立了较大分子的复合物，该复合物可以耐受肾小球过滤并允许视黄醇递送到肝外的靶组织。RBP-TTR相互作用的抑制导致循环RBP降低，因为相对较小的RBP-配体复合物将会通过肾小球过滤而失去。然后循环RBP的降低导致了循环视黄醇的降低。数名研究者已经确定了体内HPR的这种作用。该体内作用也可以用全反式和13-顺式维甲酸来观测(参见，例如，Berni R，Clerici M，Malpeli G，Cleris L，FormelliF；Retinoids：in vitro interactionwith retinol-binding proteinand influence on plasma retinol，FASEB J.(1993)7：1179-84)。
该作用的作用机制可以通过RBP-TTR相互作用的分裂来解释。为了探求该可能性和进一步确认RBP-TTR筛选，用分析HPR的特定条件检查全反式维甲酸和13-顺式维甲酸的作用。所获得的数据(参见附图6)与体内数据完全符合。该发现进一步确认了该分析检测RBP-TTR相互作用的已知的生理学抑制剂的能力。
实施例10：试验调节RBP或TTR水平或活性的化合物治疗黄斑变性的效力-芬维A胺作为说明性的化合物
为了预试，所有人类患者进行常规的眼部检查，包括荧光素血管造影术、测定视力、电生理学参数和生物化学和流变参数。包括的标准如下：至少一只眼睛的视力在20/160和20/32之间，AMD的标志例如玻璃疣、细的萎缩、色素凝集、色素上皮脱离或视网膜下新血管形成。该研究排除怀孕或积极母乳喂养儿童的患者。
将诊断为黄斑变性或在眼中逐渐形成A2E、脂褐素或玻璃疣的200名人类患者分成约100名患者的对照组和100名患者的试验组。将芬维A胺每日施用于试验组。按与芬维A胺施用于试验组相同的方法给对照组施用安慰剂。
芬维A胺或安慰剂给患者的施用可以是口服或胃肠外以有效抑制黄斑变性的发展或复发的量施用。有效剂量的范围是约1-4000mg/m2，高达每日三次。
在对照和试验组中测定黄斑变性进展的一种方法是用线性评估和强迫选择法通过早期糖尿病性视网膜病研究(ETDRS)表(Lighthouse，Long Island，NY)测定最好的校正视力(Ferris等人Am JOphthalmol，94：97-98(1982))。视力是以logMAR记录。在ETDRS表上一条线的改变相当于0.1logMAR。在对照和试验组中测定黄斑变性进展的另一种方法包括使用视野检查，包括但不限于Humphrey视野检查，和测定/检测患者眼中N-视黄亚基-磷脂酰乙醇胺、二氢-N-视黄亚基-N-视黄基-磷脂酰乙醇胺、N-视黄亚基-N-视黄基-磷脂酰乙醇胺、二氢-N-视黄亚基-N-视黄基-乙醇胺、和/或N-视黄亚基-磷脂酰乙醇胺的自发荧光或吸收光谱。用各种设备，包括但不限于共焦激光扫描检眼镜来测定自发荧光。参见Bindewald等人，Am.J.Ophthalmol.，137：556-8(2004)。
在对照和试验组中测定黄斑变性进展的其他方法包括进行眼底照相、用Heidelberg视网膜血管照影照片观测自发荧光随时间的改变(或可替代地，在M.Hammer等人Ophthalmologe 2004 Apr.7[Epub ahead of patent]中描述的技术)，和随访时在基线、三、六、九和十二月时进行荧光素血管照影照片。形态变化的项目包括下列的改变(a)玻璃疣大小、性质和分布；(b)脉络膜新生血管的发展和进展；(c)其他间隔期的眼底变化或异常情况；(d)阅读速度和/或阅读敏度；(e)暗点大小；或(f)地图状萎缩区域的大小和数目。此外，任选施用阿姆斯勒方格表试验和显色试验。
为了评估药物施用期间视力的统计学改善，检查者使用ETDRS(LogMAR)表和标准折射和视力记录。在整个可用的治疗后间隔期访问期间从极限开始的平均ETDRS(LogMAR)最佳矫正视力(BCVA)的评估目的是确定视力的统计学改善。
为了评价对照和试验组的ANOVA(各组之间的方差分析)，在整个可用的治疗后间隔期访问期间从极限开始的ETDRS(LogMAR)视力的平均改变用两组ANOVA，与用SAS/STAT软件(SAS InstitutesInc，Gary，North Carolina)测定的具有未确定共方差的重复测定分析比较。
在开始研究后，毒性评价包括在下一年每三个月，在该年以后每四个月，随后每六个月一次。也可以在这些访问中评估芬维A胺及其代谢产物N-(4-甲氧基苯基)-视黄酰胺的血浆水平。毒性评价包括使用芬维A胺的患者以及对照组的患者。
实施例11：试验调节RBP或TTR水平或活性以减少A2E产生效力的化合物治疗黄斑变性的效力-芬维A胺作为说明性化合物
如实施例1所述相同的实验设计，包括预试、施用、剂量和毒性评价实验也可以用于测定调节RBP和TTR水平或活性的化合物在降低或以其他方式限制患者眼中A2E产生中的效力。
测定或检测A2E的产生的方法，包括使用自发荧光测定患者眼中的N-视黄亚基-磷脂酰乙醇胺、二氢-N-视黄亚基-N-视黄基-磷脂酰乙醇胺、N-视黄亚基-N-视黄基-磷脂酰乙醇胺、二氢-N-视黄亚基-N-视黄基-乙醇胺和/或N-视黄亚基-磷脂酰乙醇胺。用各种设备包括但不限于共焦激光扫描检眼镜(参见Bindewald，et ah，Am.J.Ophthalmol，137：556-8(2004))，或如实施例1的自发荧光或吸收光谱测定技术测定自发荧光。其他可以用作特定治疗效力的替代性标志的其他试验包括如实施例1所述，使用视力和视野检查、阅读速度和/或阅读敏度检查、测定暗点和/或地图状萎缩区地大小和数目。使用实施例1所述的统计分析。
实施例12：测定调节RBP或TTR水平或活性的化合物对减少脂褐素产生的效力-芬维A胺作为例证性化合物
如实施例1所述相同的实验设计，包括预试、施用、剂量和毒性评价实验也可以用于测定调节RBP和TTR水平或活性的化合物在减少或以其他方式限制患者眼中脂褐素产生中的效力。使用实施例1所述的统计分析。
其他可以用作特定治疗效力的替代性标志的其他试验包括如实施例1所述，使用视力和视野检查、阅读速度和/或阅读敏度检查、测定暗点和/或地图状萎缩区地大小和数目、和测定/检测某些化合物的在患者眼中的自发荧光。
实施例13：测定调节RBP或TTR水平或活性的化合物对减少玻璃疣产生的效力-芬维A胺作为例证性化合物
如实施例1所述相同的实验设计，包括预试、施用、剂量和毒性评价实验也可以用于测定调节RBP和TTR水平或活性的化合物在减少或以其他方式限制患者眼中玻璃疣产生中的效力。也使用实施例1所述的统计分析。
在对照和试验组中测定黄斑变性累积产生的方法包括进行眼底照相、和随访时在基线、三、六、九和十二月时进行荧光素血管照影照片。形态变化的项目包括下列的改变(a)玻璃疣大小、性质和分布；b)脉络膜新生血管的发展和进展；(c)其他间隔期的眼底变化或异常情况；。其他可以用作特定治疗效力的替代性标志的其他试验包括如实施例1所述，使用视力和视野检查、测定暗点和/或地图状萎缩区地大小和数目、和测定/检测某些化合物的在患者眼中的自发荧光。
实施例14：abca4无效突变的小鼠中芬维A胺对于脂褐素(和/或A2E)蓄积的效力：I相-计量应答和对血清视黄醇的作用
也可以意识到，HPR降低动物和人类患者的血清视黄醇的作用引导我们去探求其降低脂褐素和毒性二-类视黄醇共轭物、A2E的可能性。该途径的理论是基于2条独立路线的科学证据：1)通过抑制已知的视循环酶(11-顺式视黄醇脱氢酶)降低了视循环中维生素A的浓度，导致脂褐素和A2E极大地降低；2)维持缺乏维生素A饮食的动物显示其脂褐素蓄积引入注目的降低。因此，本实施例的目的是检验在动物模型中HPR的作用，其表明脂褐素和A2E在abca4无效突变小鼠的眼组织中大量蓄积。
通过检查HPR对血清视黄醇的作用开始初期研究。将动物分成3组，给予DMSO、10mg/kg HPR或20mg/kg HPR 14天。在研究期结束时，从动物中收集血，制备血清，通过反相LC/MS分析血清的乙腈提取物。进行UV-可见光谱和质量/电荷分析来确定对洗脱峰的鉴定。从这些分析得到的样品色谱图如所示：附图7a.-接受HPR载体DMSO的abca4无效突变小鼠的提取物；附图7b.-10mg/kg HPR；附图7c.-20mg/kg HPR。该数据清楚地表明血清视黄醇剂量依赖性低降低。定量数据表明，对于10mg/kg HPR，全反式视黄醇降低了40％，参见附图8。对于20mg/kg HPR，血清视黄醇降低了72％，参见附图8。视黄醇和HPR在血清中的稳态浓度(20mg/kg HPR)分别确定为2.11μM和1.75μM。
基于这些发现，我们试图进一步探求在HPR治疗期间视黄醇降低的机制。一个站得住脚的假设是HPR可以通过竞争RBP上的视黄醇结合位点而取代视黄醇。与视黄醇类似，HPR在蛋白质荧光区吸收(猝灭)光能；但与视黄醇不同的是HPR不会发射荧光。因此，可以通过观测蛋白质(340nm)和视黄醇(470nm)荧光的减少来测定取代视黄醇对RBP全蛋白质的取代。我们用类似与上述确定的20mg/kg HPR时的14天试验类似的RBP-视黄醇/HPR浓缩物进行了竞争型结合分析。从这些分析获得的数据表明，在生理温度下，HPR有效地取代RBP-视黄醇全蛋白中的视黄醇，参见附图9b。HPR与RBP的竞争型结合是剂量依赖性的和可饱和的。在对照分析中，视黄醇荧光的降低与蛋白质荧光的并发性升高有关，参见附图9a。确定该作用是由于温度效应，因为在37℃下RBP-视黄醇解离常数随着时间的增加而提高(降低亲和力)。总之，这些数据提示，相对于RBP全蛋白质(例如1.0μM HPR、0.5μM RBP)，超过等摩尔当量的HPR的增加将导致产生体内取代RBP的显著份数的视黄醇。
实施例15：abca4无效突变小鼠中芬维A胺对于脂褐素(和/或A2E)蓄积的效力：II相-abca4无效突变小鼠的长期治疗
我们开始一个月的研究来评价HPR对abca4无效突变小鼠中A2E和A2E前体降低的作用。每日给abca4无效突变小鼠(BL6/129，2月大)施用在DMSO中的HPR(20mg/kg，ip)，共28天。对照的年龄/品系相配的小鼠仅接受DMSO载体。在0、14和28天采集小鼠的样品(n＝3/组)，摘除眼睛，提取氯仿可溶的组分(脂类、类视黄醇和脂类-类视黄醇共轭物)。通过颈脱位法处死小鼠，摘除眼睛，分别在冰冻管中冰冻折断。然后通过具有在线荧光检测的HPLC分析样品提取物。该研究的结果表明，A2E前体、A2PE-H2值得注意地在早期降低，参见附图10a，并且随后A2E降低，参见附图10b。定量分析表明在HPR治疗28天后，A2PE-H2降低了70％，A2E降低了55％。可以进行类似的研究以确定HPR治疗对于视网膜电描记法和形态学表型的作用。
实施例16：MPR与视黄醇结合蛋白(RBP)结合的荧光猝灭研究
在室温下在PBS中分别用0、0.25、0.5、1和2μM的MPR培养0.5μM的Apo-RBP 1小时。作为对照，用1μM的HPR或1μM的atROL培养相同浓度的Apo-RBP。所有混合物包含0.2％乙醇(v/v)。用280nm激发波长和3nm带通在290nm到550nm测定发射光谱。
如附图11所示，MPR表现出对RBP荧光的浓度依赖性猝灭。在1μM的MPR下，0.5μM的RBP猝灭饱和。由于所观察到的荧光猝灭可能是由于蛋白质芳香残基和所连接的MPR分子之间的荧光共振能转移产生的，计划将MPR与RBP结合。通过MPR猝灭的程度小于atROL和HPR，后两者是与RBP结合的另外两种配体。
实施例17：运甲状腺素蛋白(TTR)与RBP结合的大小排除研究
在室温下在PBS中用50μM的MPR培养10μM的Apo-RBP 1小时。然后向该溶液中加入10μM的TTR，并将混合物在室温下再培养1小时。通过BioRad Bio-Sil SEC125凝胶过滤柱(300x7.8mm)分析包含或不包含TTR的50μl样品。在对照实验中，以相同方式分析atROL-RBP和atROL-RBP-TTR的混合物。
如附图12a所示，MPR-RBP样品显示了在360nm处具有强吸收的RBP洗脱峰(在11ml)，表明RBP与MPR结合；在用TTR培养后，该360nm处的吸收保留在了RBP洗脱峰中，而TTR洗脱峰(在8.6ml)没有包含明显的360nm处的吸收(参见附图12b)，表明MPR-RBP没有与TTR结合。在atROL-RBP对照实验中，RBP洗脱峰显示了强烈的330nm处的吸收(参见附图12c)；在与TTR培养后，超过一半的330nm吸收移动到TTR洗脱峰上(参见附图12d)，表明atROL-RBP与TTR结合。因此，MPR抑制了TTR与RBP的结合。
实施例18：作为HPR浓度函数的血清视黄醇的分析
每日给予ABCA4无效突变小鼠指定剂量的在DMSO中的HPR(i.p.)，共28天(n＝4只小鼠/剂量组)。在研究期结束时，采集血样并制备血清。在用乙腈沉淀血清蛋白后，通过LC/MS从可溶相确定视黄醇和HPR的浓度(参见附图8)。通过UV-vis吸收光谱和用可信标准的样品共洗脱证实对所洗脱化合物的鉴定。
实施例19：在ABCA4无效突变小鼠中HPR浓度与视黄醇、A2PE-H2和A2E降低的关系
标绘在实施例25(28天的时间点)的附图13的图A-G中所示的数据的组平均数，表明了血清HPR升高和血清视黄醇降低之间的密切关系(参见附图14)。血清视黄醇降低与A2E和前体化合物(A2PE-H2)降低之间高度相关。当血清视黄醇仅降低20％时，观测到在2.5mg/kg剂量组中A2PE-H2显著降低(～47％)。该不成比例的降低的原因在于：与其它组相比，该组中2个月大的动物内在的眼部类视黄醇含量较低。如果这些动物在2.5mg/kg剂量维持较长时间，可能将会实现A2E更大的降低。
实施例20：HPR对类视黄醇、A2E荧光团和视网膜生理稳态浓度的作用
作为HPR-(每日10mg/kg，28天)处理的结果，在光适应的DMSO-和HPR-治疗的小鼠中对类视黄醇组合物的分析(附图15，图A)表明视循环类视黄醇降低了约50％。附图15的图B和C显示了在这些小鼠中HPR不影响视觉生色团的再生(图B是视觉生色团的生物合成，图C是漂白的生色团再循环)。附图15的图D-F是杆状功能(图D)、杆和锥体功能(图E)和从光漂白中恢复(图F)的电生理测定。在HPR-治疗的小鼠中仅有的值得注意的差别是延迟了暗适应。
每日给予ABCA4无效突变小鼠指定剂量的在DMSO中的HPR或仅给予DMSO，共28天(n＝16小鼠/治疗组)。在研究开始时，2.5mg/kg组的小鼠是2个月大，在其它组的小鼠是3个月大。在指定时间，从每组取代表性的小鼠(n＝4)以分析A2E前体化合物(参见附图13，A2PE-H2，图A、C和E)和A2E(参见附图13，图B、D和F)。摘除眼睛，对半切开，通过氯仿/甲醇-水相分配法从后极中提取脂溶性组分。通过LC分析样品提取物。通过UV-vis吸收光谱和用可信标准的样品共洗脱证实对所洗脱化合物的鉴定。注意：在10mg/kg组中适当的年龄和品系-相配的小鼠的局限性导致难以在14-天间隔中分析。该数据表明在研究期间A2PE-H2和A2E的剂量-依赖性降低。
在附图13中图G-1显示的形态学/组织学证据表明在abcr无效突变小鼠的RPE中脂褐素自发荧光显著降低(Stargardt′s动物模型)。治疗情况如上所述。在HPR治疗的动物中自发荧光的水平与年龄相配的野生型动物相当。附图16显示的是DMSO-和HPR-治疗的动物视网膜的光学显微镜检查。在视网膜细胞结构中没有观测到畸形的形态或对完整性的损害。
脂褐素在视网膜色素上皮细胞中的蓄积是在视网膜的各种变性疾病中观测到的共同的病理学特征。存在于脂褐素颗粒中的毒性的基于维生素A的荧光团(A2E)与RPE和光感受器细胞的死亡有关。在这些实验中，我们使用了动物模型，其通过证明脂褐素蓄积加速来评价根据血清维生素A(视黄醇)的降低的治疗途径的效力。芬维A胺有效地和可逆地降低了血清视黄醇。给Stargardt′s病基因(ABCA4)具有无效突变的小鼠施用HPR导致血清视黄醇/视黄醇结合蛋白大幅降低，阻止了RPE中A2E和脂褐素自发荧光的蓄积。从生理学上讲，由于适当地延迟了暗适应，因此HPR-诱导的视觉生色团的降低是明显的；生色团再生的动力学是正常的。重要地，也鉴定了HPR对维生素A酯化作用和生色团动员的特异性细胞内作用。这些发现表明A2E生物合成对维生素A-的依赖性并证实了容易地可转移到患基于脂褐素的视网膜疾病的人类患者的治疗途径。
实施例21：在休药期坚持HPR疗法的益处
每日给ABCA4-/-小鼠施用HPR(10mg/kg在DMSO中)，共28天。对照ABCA4-/-小鼠仅在相同时期接受DMSO。28天治疗后的A2E前体(A2PE-H2)和A2E的生化(HPLC)分析表明在HPR治疗的小鼠眼中这些荧光团减少(附图13)。通过荧光显微术进一步分析确认生化数据，并显示在HPR治疗的ABCA4-/-小鼠中脂褐素自发荧光水平与未治疗的野生型小鼠中观测到的相当(附图13)。通过光学显微镜进行的组织学检查表明视网膜细胞结构或形态没有改变(附图16)。重要的是，在停止HPR治疗后，所观测到的脂褐素自发荧光的降低持续了较长的时间。在28天治疗后停止施用HPR(10mg/kg)或DMSO，在2周和4周后再评价。
我们通过HPLC检查了洗眼杯提取物，通过吸收和荧光测定进行了检测。通过在线光谱分析和用可信标准的共洗脱证实了对指定峰的鉴定。数据表明，在不接受HPR剂量12天后(即，12天的休药期)在先前维持HPR治疗(附图17，图A)动物中，A2E和前体(A2PE-H2和A2PE)水平相对于对照小鼠(附图17，图B)显著地降低。在28天休药期后的小鼠中观测到了类似的结果：A2E和前体(A2PE-H2和A2PE)水平相对于对照小鼠显著地降低(比较附图17图C治疗的小鼠，和附图17图D对照小鼠)。进一步地，在12或28天休药期后A2E和前体(A2PE-H2和A2PE)水平保持在28天治疗后立即测定的水平上或与之接近(即，相对于对照组降低了约50％)，尽管在28天休药期后A2E和前体(A2PE-H2和A2PE)的量相对于12天休药期的水平提高了几个百分点。尽管在HPR休药期动物眼中A2E和前体(A2PE-H2和A2PE)的水平持续降低，但我们在28天休药期未能检测到HPR或HPR代谢产物(例如，MPR)。附图17的图C和D中的迹线表明自发荧光的强度与所指定的峰有关。清楚地，峰的荧光反映的是A2E、A2PE和A2PE-H2的丰富程度。
在临床试验期间，通过将患者保持在较低剂量的HPR中，然后在较高剂量下证实临床效力，这些数据与毒性有关。该分析可以避免通过显微镜再证实的需要。根据我们的知识，该作用在其它治疗选自Stargardt病、干性与年龄相关的黄斑变性、基于脂褐素的视网膜变性、光感受器变性和地图状萎缩的眼部病症或特征的方法中没有观测到。而且在降低哺乳动物眼中N-视黄亚基-N-视黄基乙醇胺的产生的方法，或降低哺乳动物眼中脂褐素产生的方法中也没有观测到。HPR降低了血清视黄醇水平，导致所治疗动物的眼中视黄醇水平的降低。一旦眼中的视黄醇水平降低，在随后的眼中视黄醇水平升高之间有一个时间延迟。单独或联合地，尽管在血清或眼中不存在HPR，但眼中的A2E、A2PE和A2PE-H2产生保持低水平。
实施例22：确认RBP对于A2E值得注意的蓄积的治疗靶
我们已经探求了降低脂褐素荧光团的非药理学方法以证实我们在患者中基于降低RBP水平的治疗途径，在该研究中，通过基因操作降低了RBP蛋白质水平。已经产生了两种新品系的表达视黄醇结合蛋白(RBP4)杂交突变的小鼠。第一品系携带仅位于RBP部位的杂交突变(RBP+/-)；第二品系携带在ABCA4和RBP部位的基因突变(ABCA4+/-/RBP4+/-)。因此，两个品系都实现了RBP表达和血清视黄醇降低～50％。RBP+/-小鼠在ABCA4部位是野生型的，因此，不会蓄积过量的A2E荧光团。但是，ABCA4+/-小鼠将会蓄积A2E荧光团，其水平是在ABCA4-/-(无效纯合)小鼠中所观测到的约50％。有争论的是在ABCA4+/-/RBP+/-小鼠中RBP的表达降低是否对A2E荧光团的蓄积有作用。
已经在三个月的时间里每月检测这些小鼠中A2E和前体荧光团(A2PE和A2PE-H2)的水平，并与ABCA4+/-小鼠的荧光团水平比较。该数据提供了在三个月大的三个品系的小鼠中的荧光团水平(附图18)。总的来说，ABCA4+/-/RBP+/-小鼠总荧光团水平相对于ABCA4+/-小鼠先前的水平降低了～70％。事实上，在ABCA4+/-/RBP+/-小鼠中测定的荧光团水平与RBP+/-小鼠中观测到的水平接近。这些数据证明了RBP可以作为治疗靶降低眼中的荧光团水平。进一步地，这些数据表明在患者中抑制RBP转录或翻译的试剂或方法也会(a)降低患者的血清视黄醇水平，和(b)为本文所述的与视黄醇有关的疾病提供治疗益处。进一步地，增强患者RBP清除的试剂或方法也会产生这样的作用和益处。
根据本文公开，不需要过多的试验即可实施并完成本文公开或要求保护的所有方法。对本领域技术人员显而易见地，可以使用各种变化而不脱离本发明的概念、精神和范围。尤其显而易见地，某些涉及化学和生物学的试剂可以取代本文所述的试剂，同时还达到了相同或相似的结果。所有这些对本领域技术人员显而易见的类似的替代方式和变更都在附属的权利要求定义的本发明的精神、范围和概念内。

Claims (10)

1.有效量的化合物在制备用于治疗Stargardt病的系统配制药物中的用途，其中所述化合物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺或N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺。
2.有效量的化合物在制备用于在携带突变ABCA4基因的哺乳动物中治疗或预防疾病或病症的系统配制药物中的用途，其中所述化合物是N-(4-羟基苯基)视黄酰胺或N-(4-甲氧基苯基)视黄酰胺。
3.权利要求2所述的用途，其中所述疾病或病症包括隐性视网膜色素变性、锥体-杆体营养不良、隐性锥体-杆体营养不良或非渗出性与年龄有关的黄斑变性。
4.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述化合物抑制视黄醇结合蛋白与运甲状腺素蛋白结合。
5.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述药物是为口服、静脉、离子电渗施用或注射施用而系统配制的。
6.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述Stargardt病与RPE细胞中脂褐素色素颗粒的沉积有关。
7.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述化合物降低血清维生素A水平。
8.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述化合物降低RPE中的A2E或脂褐素。
9.权利要求1-3中任一项所述的用途，其中所述哺乳动物是突变ABCA4基因或突变ELOV4基因的携带者。
10.权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述哺乳动物是人。
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