CN101810624B - 一种治疗结肠癌的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗结肠癌的药物及其制备方法，包括药物有效成份和药用辅料制成的药剂，药物有效成份为：3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷，其制备方法步骤：①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入甲醇或乙醇，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；②将步骤①中流浸膏水分散，氯仿进行萃取，得浸膏；③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，回收溶剂，放置后析出白色粉末，抽滤得到3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷；④按重量比取3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为2090％，其余为药用辅助料，按常规制备方法制成药剂。本发明主要治疗结肠癌未转移症状，无毒副作用，配合手术后的化疗期使用，从而减轻患者痛苦。

Description

一种治疗结肠癌的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及药品，是一种治疗结肠癌的药物及其制备方法。 

背景技术

据报道的统计数据表明，结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率逐年以2％左右递长率增加，同时治疗结肠癌的药物也在不断推向市场。西药常用药物主要有：氟尿嘧啶、丝裂霉素、亚硝脲素及呋喃氟尿嘧啶等，中药常用药主要有消癌平片、珍香胶囊、西黄丸、抗癌平丸、华蟾素口服液、复方斑蝥胶囊等。临床表明，有些西药虽然疗效较好，但对胃肠粘膜有较强的刺激作用，并对肝肾有较大损伤，特别是长期服用对患者自身免疫力的损害也较大；中药的副作用虽然少了很多，但是，疗效欠佳；无论是治疗结肠癌未转移症、还是结肠癌多发转移症，其临床效果甚微，所以，手术治疗为患者的主要选择，但是，手术后的化疗期一般均联合使用治疗结肠癌的西药，因此，给患者带来较大痛苦。 

发明内容

本发明的目的是，提供一种治疗结肠癌的药物及其制备方法，主要治疗结肠癌未转移症状，无毒副作用，配合手术后的化疗期使用，从而减轻患者痛苦。 

本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：一种治疗结肠癌的药物，包括药物有效成份和药用辅料制成的药剂，药物有效成份为：3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷，其结构式为： 

本发明所述药剂剂型为片剂或胶囊。 

本发明所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂。 

本发明所述药剂剂型为散剂或颗粒剂。 

本发明的一种治疗结肠癌的药物的制备方法，包括以下步骤： 

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1-24小时，重复提取1-3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏； 

②将步骤①中流浸膏用5-10倍于流浸膏重量的水分散，取加水量1/3体积的氯仿进行萃取，重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏； 

③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，将石油醚-丙酮体积比为80∶20部分合并，回收溶剂，放置后析出白色粉末，抽滤得到3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷； 

④按重量比取3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为2090％，其余为药用辅助料，按照药剂的常规制备方法制成药剂。 

本发明药物的有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为单体物质，呈白色粉末状。 

本发明药物有效成份的结构式用高分辨快原子轰击质谱给出准分子离子峰m/z为409.3474[M-H]+(C₂₉H₄₅O，计算值：409.3465)，分子式为C₂₉H₄₄O。红外光谱(溴化钾)cm^-1：3464(OH)，2938(饱和C-H)，1452、1386(CH₃)。无畸变极化转移增强谱(DEPT谱)显示分子中含有7个甲基(CH₃)，9个亚甲基(CH₂)，6个次甲基(CH)和7个季炭。核磁共振-氢谱(¹H-NMR谱)显示5个甲基单峰信号δ0.95(H-26)，1.02(H-25)，1.05(H-27)，1.08(H-24)，1.27(H-23)和2个甲基双峰信号0.88(H-29，3H，d，J＝6.9Hz)，0.96(H-30，3H，d，J＝7.9Hz)；一个连氧碳上的氢信号δ3.50(H-12，1H，dd，J＝10.8，5.2Hz)和一个烯氢信号δ5.71(H-12，m)。核磁共振-炭谱(¹³C-NMR)谱显示4个烯碳特征信号δ117.5(C-12)、δ128.9(C-17)、δ133.5(C-18)和137.6(C-13)以及1个连氧碳信号78.2(C-3)，本发明药物有效成份为28位缺失的乌苏烷型化合物。经DEPT谱、异核多重键相关谱(HMBC谱)、异核多量子相干谱(HMQC谱)使本发明药物的有效成份C、H归属得以确认，其名称为3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷(3β-hydroxy-28-norurs-12，17(18)-dien)。 

本发明药物有效成份来源于地榆炭，地榆炭有较好的凝血止血作用、敛疮作用。申请人研究发现，地榆炭中的3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷对结肠肿瘤细胞有显著的抑制其生长的作用，并且还能抑制结肠肿瘤新生血管的形成，从而为治疗结肠癌未 转移症状提供了极好的基础。 

实验表明3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷具有显著的药理作用。 

1、抗肿瘤 

本发明药物的有效成份为乌苏烷型五环三萜化合物，熊果酸(乌苏酸)是该类化合物的代表性成分。熊果酸为一广谱的抗肿瘤化合物，在体外对多种肿瘤细胞有毒性作用。熊果酸不但能抑制肿瘤细胞生长，而且还能抑制肿瘤新生血管的形成。 

1.1材料 

人结肠癌细胞系HT29(HTB-38，购自：美国标准菌种收藏所，美国马里兰州罗克韦尔市)置于RPMI-1640(Hyclone，美国犹他州洛根市)培养液中进行培养，培养液中含有10％小牛血清(Hyclone，美国犹他州洛根市)及抗生素(100单位/毫升青霉素，及100毫克/毫升链霉素)(Hyclone，美国犹他州洛根市)。细胞在37℃，5％二氧化碳培养箱中进行孵育。 

受试样品为3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷，临用时以二甲亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)溶解，加培养液稀释至所需浓度，使DMSO终浓度为1％。 

1.2.实验方法 

取处于指数生长期的HT-29细胞，应用0.25％胰酶和3毫摩尔/升乙二胺四乙酸混合消化液进行消化，调整细胞浓度为每毫升1×10⁴，按每孔0.1毫升接种于96孔细胞培养板中。无血清RPMI-1640同步化后24小时，细胞继续在不同药物作用浓度下培养48小时，每浓度组设3个复孔，实验重复3次。培养后进行噻唑兰(MTT)比色(MTT 5毫克/毫升，37摄氏度，4小时)并绘制药物浓度与540纳米吸光度之间的关系曲线。细胞存活率(％)＝实验组吸光度/正常组吸光度×100％。 

1.3.实验结果 

实验结果 

本发明药物有效成份对人结肠癌细胞HT29的抑制作用 

由附图9可知，本发明药物有效成份对人结肠癌细胞HT29的生长具有较强的抑制作用，并且显示一定的剂量依赖关系，在最高剂量(20微克/毫升)时，对细胞的抑制作用最强，达到93.93％。 

本发明所述药物经动物实验表明对结肠症具有极显著的治疗作用； 

本发明药物对结肠癌细胞HT29荷瘤小鼠的治疗作用动物实验如下： 

1、实验材料： 

人结肠癌细胞系HT29(HTB-38，购自：美国标准菌种收藏所，美国马里兰州罗克韦尔市)。ICR小鼠，雌性，体重20±2克(山东大学动物中心，实验动物许可号SCXK鲁20030004)；小鼠白介素-2、肿瘤坏死因子-α酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒均购自晶美生物工程有限公司。 

受试药物3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷注射液，生理盐水稀释至所需浓度。 

2、实验方法： 

将人结肠癌细胞株接种于正常小鼠腹腔内，让其大量繁殖，7天后抽取腹水(无血性)，用灭菌生理盐水稀释成细胞浓度为5×10⁶个/毫升的接种液，于小鼠腹背侧部皮下注射含5×10⁶癌细胞的悬液0.5毫升，成瘤后用组织块套管针法皮下移植为实体瘤。 

将结肠癌皮下移植的小鼠随机分为5组，各组于移植后第6天开始给药，阳性组为环磷酰胺，空白组和模型组为生理盐水，每天给药1次，共用7天后停药。末次给药24小时后摘眼球取血，收集血液，取血清-20℃备用。临用前平衡至室温，按照ELISA试剂盒说明书步骤进行操作，测定细胞因子白介素-2、肿瘤坏死因子-α的水平；颈椎脱臼处死小鼠，剥取瘤块、胸腺，计算抑瘤率、胸腺指数。 

抑瘤率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％ 

胸腺指数＝胸腺重量/体重*10(why) 

与模型组相比*P＜0.05 **P＜0.01  与正常组相比：#P＜0.05 ##P＜0.01 

受试本发明药物可抑制小鼠移植性肿瘤的生长，高、中剂量组抑瘤率分别为51.52％、46.09％，与模型组相比P＜0.01或P＜0.05；阳性对照环磷酰胺可明显抑制小鼠肿瘤的生长，但小鼠体重明显偏小，胸腺指数明显偏低，本发明药物各剂量组不会降低小鼠体重和胸腺指数，本发明药物对正常机体影响较小，无明显毒副作用。 

与正常组相比：#P＜0.05 ##P＜0.01    与模型组相比：^*P＜0.05 ^**P＜0.01 

与正常组比较，模型组和阳性组荷瘤小鼠细胞因子水平明显降低(P＜0.01)，与模型组比较，化合物高、中剂量组小鼠细胞因子明显升高(P＜0.01或0.05)，从而调节淋巴细胞的生长分化、激活巨噬细胞，在抗肿瘤免疫中起着重要的调节作用。 

动物实验表明，本发明药物具有极好的结肠癌肿瘤抑制作用，不会明显降低小鼠胸腺 指数；还可升高小鼠细胞因子白介素-2、肿瘤坏死因子-α水平，从而可通过调节荷瘤小鼠的免疫功能而发挥抗肿瘤的作用。 

实验表明由于本发明药物对治疗结肠癌有显著的效果，因此，患者可以在结肠癌治疗中使用本发明所述的各种药物剂型。本发明药物还可以替代手术后的化疗期联合使用的西药，从而彻底消除西药的毒副作用。 

附图说明

附图1本发明药物有效成份紫外图谱；附图2为本发明药物有效成份红外图谱；附图3为本发明药物有效成份高分辨快原子轰击质谱；附图4为本发明药物有效成份核磁共振氢谱；附图5为本发明药物有效成份核磁共振炭谱；附图6为本发明药物有效成份无畸变极化转移增强谱；附图7为本发明药物有效成份异核多量子相干谱；附图8为本发明药物有效成份异核多重键相关谱；附图9为本发明药物有效成份对人结肠癌细胞HT29的抑制作用效果图。 

具体实施方式

实施例 

本发明药物包括药物有效成份和药用辅料制成的药剂，药物有效成份为：3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷，其结构式为： 

药物有效成份的重量百分比为20-90％，其余为药用辅料。本发明药物可以制成各种剂型，如：注射剂：水针剂、冻干粉剂，片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或口服液。 

本发明药物的制备方法是先采用地榆炭提取药物有效成份，然后按照常规制药方法制备成所需药剂，包括以下步骤： 

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1-24小时，重复提取1-3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏； 

②将步骤①中流浸膏用5-10倍于流浸膏重量的水分散，取加水量1/3体积的氯仿进行萃取，重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏； 

③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，将石油醚-丙酮体积比为80∶20部分合并，回收溶剂，放置后析出白色粉末，抽滤得到3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷； 

④按重量比取3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为2090％，其余为药用辅助料，按照药剂的常规制备方法制成药剂。 

本发明药物在制备注射液时，其药物有效成份的重量比取30-60％为佳，其他药物剂型有效成份取30-90％为佳， 

本发明药物的有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为单体物质，呈白色粉末状。 

举例说明几种剂型： 

①水针剂：1000毫升 

药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷25克，吐温80 10毫升，氯化钠8克。 

取药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷25克，加吐温80 10毫升，注射用水250毫升，加热溶解，滤过，加10％碳酸钠调酸碱度至7.0-7.5，加入氯化钠，加注射用水至1000毫升，G₃垂熔漏斗(玻璃)滤过，分装，灌封，100摄氏度流通蒸汽灭菌30分钟，分装于1毫升安瓿瓶中，每支含有含3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷25毫克。 

②胶囊剂：1000粒 

药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50克，微晶纤维素50克，硬脂酸镁1克。 

取药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50克，微晶纤维素50克，硬脂酸镁1克，混匀，装胶囊，每粒重0.1克，含3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50毫克。 

③散剂：1000包 

药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50克，乳糖450克。 

取药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50克、乳糖450克，研细， 混匀，过筛，分包，每包重0.5克，含3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50毫克。 

④片剂：1000片 

药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50克，羟丙甲纤维素20克，糊精30克，硬脂酸镁1克。 

药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷、羟丙甲纤维素、糊精混合，以75％乙醇为粘合剂制湿颗粒，过22目筛，50摄氏度干燥3小时，22目筛整粒，加入硬脂酸镁混匀压片，每片重0.1克，含药物有效成份3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷50毫克。 

Claims (4)

1.一种治疗结肠癌的药物，其特征在于：包括药物有效成份为：3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷和药用辅料制成的药剂，3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷的结构式为：

其制备方法包括以下步骤：

①取地榆炭粉碎后为药物原料，加入原料十倍量的甲醇或乙醇，或含水醇类，常温或加热至60℃-90℃，提取1-24小时，重复提取1-3次，过滤，滤液在常压或减压下浓缩得到流浸膏；

②将步骤①中流浸膏用5-10倍于流浸膏重量的水分散，取加水量1/3体积的氯仿进行萃取，重复萃取5-8次，将萃取液常压或减压回收溶剂，得浸膏；

③将步骤②的浸膏进行硅胶柱层析分离，采用石油醚-丙酮系统梯度洗脱，将石油醚-丙酮体积比为80∶20部分合并，回收溶剂，放置后析出白色粉末，抽滤得到3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷；

④按重量比取3β-羟基-28-缺失-12，17(18)-二烯乌苏烷为20-90％，其余为药用辅助料，按照药剂的常规制备方法制成药剂。

2.根据权利要求1所述的一种治疗结肠癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为片剂或胶囊。

3.根据权利要求1所述的一种治疗结肠癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为水针剂或冻干粉剂。

4.根据权利要求1所述的一种治疗结肠癌的药物，其特征在于：所述药剂剂型为散剂或颗粒剂。

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