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CN101668421B - 用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽 - Google Patents

用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽 Download PDF

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CN101668421B CN200780050006.8A CN200780050006A CN101668421B CN 101668421 B CN101668421 B CN 101668421B CN 200780050006 A CN200780050006 A CN 200780050006A CN 101668421 B CN101668421 B CN 101668421B
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Abstract

本发明提供用于治疗甲状旁腺功能亢进、骨病和/或高钙血症的方法和试剂盒。特别地，提供利用聚阳离子钙调节肽来降低血清PTH和血清钙的方法。所述钙调节肽可以用来治疗患有例如下列各项的疾病的受试者：原发性、继发性或三发性甲状旁腺功能亢进；恶性高钙血症；转移性骨病；或骨质疏松症。

Description

用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽
对相关申请的交叉参考
本申请要求于2006年11月16日提交的美国临时申请序列号60/859,597的优先权。该文件的内容通过引用完全结合于本文。
技术领域
本发明涉及聚阳离子钙调节肽及其药物组合物，并且涉及所述肽和组合物用于在需要所述治疗的受试者中减少甲状旁腺激素(PTH)和/或治疗高钙血症的方法中的应用。
背景技术
钙的体内稳态
钙的体内稳态是机体通过其保持充足的钙水平的机制。该过程是高度调节性的，并且包括在钙吸收、转运、在骨中存储、在其它组织中沉积、和排泄之间的复杂的相互作用。
PTH是血清钙水平的最重要的调节剂，并且作用通过经由骨再吸收作用增加钙从骨的释放而提高血液中的钙浓度；提高钙从肾小管的再吸收；并且通过增加维生素D的活性形式1，25-(OH)2维生素D的产量而提高在小肠中的钙吸收。PTH还刺激磷从肾脏的排泄，并且增加从骨的释放。
PTH分泌受钙感应受体(CaSR)调节，钙感应受体(CaSR)是表达在甲状旁腺细胞细胞表面上的一种G-蛋白偶联受体，其检测细胞外钙离子(Ca2+)浓度的小波动并且通过改变PTH的分泌而响应。Ca2+对CaSR的激活在数秒到数分钟内抑制PTH的分泌，并且该过程可以由该受体的蛋白激酶C(PKC)磷酸化调控。CaSR还表达在成骨细胞上和在肾脏中，在肾脏中它调节肾的Ca2+排泄。
另外，PTH调节磷的体内稳态。PTH刺激在顶端膜(刷状缘膜)和基底外侧膜二者上的甲状旁腺激素受体1(PTHR1)。由于通过在刷状缘膜上的肾Na+/磷酸盐(NaPi-IIa)协同转运体的内在化而减少，PTHR1刺激导致磷酸盐(Pi)尿路排泄的增加。预计PKC激活类似地减少Pi排泄。
PTH还参与骨中的成骨细胞和破骨细胞的调节。PTH通过提高钙的骨再吸收和肾吸收而增加血清Ca2+。PTH刺激成骨细胞产生RANK配体(RANKL)，其与RANK受体结合并且激活破骨细胞，导致骨再吸收的增加和血清Ca2+的增加。护骨蛋白(OPG)是RANKL的诱杀型受体，其阻断骨再吸收。骨质疏松症由破骨细胞的骨再吸收和成骨细胞的骨形成过程之间的不平衡导致。
高钙血症和甲状旁腺功能亢进
人体含有约1kg钙，其中99％沉积在骨中。在正常条件下，循环钙离子(Ca2+)严格保持在约8-10mg/dL(即，2.25-2.5mmol/L；～600mg)的水平。约1g元素钙(Ca2+)是日常摄取的。在该量中，吸收约200mg/天，并且排泄800mg/天。另外，约500mg/天通过骨再吸收释放，或沉积在骨中。每天约10g Ca2+通过肾过滤，其中约200mg出现在尿中，并且其余的被重新吸收。
高钙血症是在血液中升高的钙水平。急性高钙血症可以导致胃肠症状(厌食、恶心、呕吐)；肾症状(尿频(polvuria)、多饮)，神经肌肉症状(抑郁、意识模糊、木僵、昏迷)和心脏症状(心搏徐缓、第一度房室(firstdegree atrio-ventricular))症状。慢性高钙血症也与胃肠症状(消化不良、便秘、胰腺炎)；肾症状(肾石病、肾钙质沉着)，神经肌肉症状(虚弱)和心脏(高血压阻滞、毛地黄敏感性)症状相关。异常心律可以导致，并且短QT时间间隔和加宽的T波的EKG发现表示高钙血症。高钙血症可以是无症状的，症状主要在高钙水平(12.0mg/dL或3mmol/l)发生。认为严重的高钙血症(在15-16mg/dL或3.75-4mmol/l以上)是医学紧急事件：在这些水平，可以导致昏迷和心脏停博。
高钙血症通常由甲状旁腺功能亢进引起，甲状旁腺功能亢进导致过量的骨再吸收和升高的血清钙水平。在原发性偶发性甲状旁腺功能亢进中，PTH由单甲状旁腺腺瘤过量产生；较不常见地，多个腺瘤或弥散的甲状旁腺腺体增生可能是原因。增加的PTH分泌导致骨再吸收的净增加，释放Ca2+和磷酸盐(Pi)。PTH还提高Ca2+的肾再吸收，并且抑制磷酸盐(Pi)的再吸收，这导致血清钙的净增加和磷酸盐的减少。
当血浆Ca2+水平减少刺激PTH分泌时，发生继发性甲状旁腺功能亢进。继发性甲状旁腺功能亢进的最重要的起因是慢性肾不足，诸如在多囊肾病或慢性肾盂肾炎中的那些，或是慢性肾衰竭，诸如在血液透析患者中的那些。响应由低钙摄入、GI病症、肾不足、维生素D缺乏、和肾高钙尿症导致的低血钙症可能产生过量的PTH。在长期的继发性甲状旁腺功能亢进和高钙血症之后，可能发生三发性甲状旁腺功能亢进。
恶性病是非PTH介导的高钙血症的最常见的起因。恶性高钙血症是癌症的罕见但严重的并发症，影响10％-20％的癌症患者，并且可能与实体瘤和白血病一起发生。该病症具有突然的发作，并且具有非常低的预后，平均存活仅为6周。在肿瘤细胞中，生长因子(GF)调节甲状旁腺激素-相关蛋白(PTHrP)的生产。肿瘤细胞可能受自分泌GF的刺激而增加PTHrP的生成，导致提高的骨再吸收。转移到骨的肿瘤细胞也可以分泌PTHrP，其可以再吸收骨，并且释放额外的GF，其又以旁分泌方式作用进一步增加PTHrP生成。
钙模拟剂(Calcimimetic Agents)
钙模拟剂是模拟钙在各种组织上的作用的药物。已经描述了具有对甲状旁腺钙感应受体(CaSR)的活性的苯烷基胺钙模拟剂。参见Nemeth等，美国国家科学院学报(Proc.Natl.Acad.Sci.)，95：4040-4045(1998)。一种这样的试剂，Cinacalcet，市售用于甲状旁腺功能亢进的治疗。另外，CaSR还可以感应和响应其它二价和多价阳离子，以及有机聚阳离子，诸如精胺、六环(hexacyclin)、聚赖氨酸、聚精氨酸、鱼精蛋白、淀粉状β-肽、新霉素、和庆大霉素，尽管报道这些阳离子缺乏针对CaSR的敏感性并且具有针对CaSR的相对低的功效。参见Nagano和Nemeth，药学科学杂志(J.Pharmacol.Sci.)，97：355-360(2005)；还参见Brown等，骨矿物质研究杂志(J.Bone Miner.Res.)，6：1217-1225(1991)。
蛋白激酶C
蛋白激酶C(PKC)是参与各种细胞功能，包括细胞生长、基因表达调控和离子通道活性的信号转导中的关键酶。PKC家族的同工酶包括至少11种不同的蛋白激酶，基于它们的同源性和针对激活剂的敏感性，它们可以分成至少3个亚家族。经典或cPKC亚家族的成员，α，β(βI，βII)，和γ同工酶，包含由同工酶-特有的(可变或V)区域间隔的4个同源结构域(Cl，C2，C3和C4)，并且激活需要钙、磷脂酰丝氨酸(PS)、和二酰基甘油(DG)或佛波醇酯。新型或nPKC亚家族成员，δ，ε，η，和θ同工酶，激活不需要钙。最后，非典型的或aPKC亚家族成员，ζ和λ/ι同工酶，对DG、佛波醇酯和钙不敏感。
关于PKC同工酶亚细胞分布的研究表明PKC的激活导致其在细胞内的重新分布(也称为易位)，以致激活的PKC同工酶与质膜、细胞骨架元件、核、和其它亚细胞区室缔合。似乎不同PKC同工酶特有的细胞功能由它们的亚细胞定位决定。例如，发现激活的βI PKC在核内，而发现激活的βII PKC在心肌细胞的核周和细胞外周处。此外，在相同的细胞中，εPKC结合交叉-条纹状结构(可能是收缩性的元件)，并且在激活后或在向固定细胞加入外源激活的εPKC后，细胞-细胞接触。不同PKC同工酶在细胞不同区域的定位又似乎是由于激活的同工酶与称为关于激活的C-激酶的受体(RACKs)的特异性锚定分子的结合引起。
认为RACKs通过将激活的PKC同工酶选择性锚定至它们各自的亚细胞位点而行使功能。RACKs仅结合激活的PKC，并且不必需是该酶的底物。与RACKs的结合也不是通过该激酶的催化结构域介导。PKC的易位反映激活的酶与锚定在细胞特定部分的RACKs的结合，并且与RACKs的结合是PKC产生其细胞响应所必需的。抑制PKC与RACKs的体内结合抑制PKC易位和PKC-介导的功能。
已经鉴定了编码RACK1和RACK2的cDNA克隆。二者均是G蛋白β亚基的同源物，所述G蛋白β亚基是另一种易位蛋白激酶即β-肾上腺素能受体激酶β-ARK的受体。与G-蛋白相似，RACK1，和RACK2具有7个WD40重复。最近的数据表明RACK1是关于激活的βII PKC的选择性锚定蛋白。研究已经表明RACK2(也称为β’-COP)是关于εPKC的选择性结合蛋白。Csukai等，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)1997；272：29200-29206。
PKC的易位是PKC同工酶正确功能所必需的。模拟RACKs上的PKC-结合位点或PKC上的RACK-结合位点的肽是PKC的同工酶-特异性易位抑制剂，其在体内选择性抑制该酶的功能。
发明概述
本发明涉及聚阳离子钙调节肽及其药物组合物，并且涉及所述肽和组合物在用于在需要所述治疗的受试者中减少甲状旁腺激素(PTH)和/或治疗高钙血症的方法中的应用。
在一方面中，本发明提供用于在受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用治疗有效量的钙调节肽，由此减少血清PTH。
在另一个方面中，本发明提供用于治疗高钙血症的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用治疗有效量的钙调节肽，由此减少血清钙。
在另一个方面中，本发明提供用于治疗骨病的方法，所述方法包括给需要其的受试者施用治疗有效量的聚阳离子钙调节肽，由此减少骨转换。
在一些实施方案中，所述钙调节肽包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的聚阳离子肽；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的货物肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
在其它实施方案中，所述钙调节肽包含：
a)第一聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述第一聚阳离子肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；
其中所述第二聚阳离子肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节肽包含6-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸。在其它实施方案中，所述钙调节肽包含：
聚阳离子肽，其包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
其中所述第一含有巯基的残基包含可以作为游离巯基巯基或处于保护形式的巯基基团。
在一些实施方案中，治疗有效量的钙调节肽足以将血清PTH减少至少20％，在施用所述钙调节肽后持续至少10小时。在某些实施方案中，确定PTH水平的减少为血清全部PTH的减少。在其它实施方案中，治疗有效量的钙调节肽足以将血清全部PTH减少低于治疗前基线水平的至少20％，在施用所述钙调节肽后持续至少10小时。
在其它实施方案中，治疗有效量的钙调节肽足以将血清PTH减少30％-70％，在施用所述钙调节肽后持续至少48小时。
在某些实施方案中，治疗有效量的钙调节肽足以将血清钙减少至少5％，在施用所述钙调节肽后持续至少10小时。
在其它实施方案中，治疗有效量的钙调节肽足以将血清钙减少5％-20％，在施用所述钙调节肽后持续至少48小时。
本发明的方法有效用于治疗患有以升高的血清PTH水平、升高的血清钙水平、或二者为特征的病症或疾病的受试者。在一些实施方案中，本发明的方法还可以有效用于治疗患有以减少的血清磷酸盐水平为特征的病症或疾病的受试者。
在一些实施方案中，所述受试者是人。在其它实施方案中，所述受试者是人，并且减少血清PTH。在某些实施方案中，所述受试者是人，并且减少血清钙。在其它实施方案中，所述受试者是人，并且减少骨转换。
在一些实施方案中，所述受试者患有原发性甲状旁腺功能亢进、继发性甲状旁腺功能亢进、三发性甲状旁腺功能亢进、恶性高钙血症、转移性骨病(例如骨肉瘤)、佩吉特病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨软化、软骨钙质沉着病、软骨发育不全、骨软骨炎、囊性成骨不全、先天性低磷酸酯酶症、纤维瘤性损伤、纤维性结构不良、多发性骨髓瘤、溶骨性骨病、假体周围(periprosthetic)骨质溶解、牙周病、骨质疏松症、异常骨转换、或高转换性骨病。
在具体实施方案中，所述受试者患有原发性、继发性或三发性甲状旁腺功能亢进。在优选实施方案中，所述受试者患有继发性甲状旁腺功能亢进(有时称为SHPT)。预测在患有SHPT的受试者中的血清PTH的减少将降低骨转换。在其它实施方案中，所述受试者患有恶性高钙血症或转移性骨病(例如，骨肉瘤)。在其它实施方案中，所述受试者患有骨质疏松症。
在一个方面中，本发明提供钙调节肽，其包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的聚阳离子肽；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的货物肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
在另一个方面中，本发明提供钙调节肽，其包含：
a)第一聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述第一聚阳离子肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；
其中所述第二聚阳离子肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节肽包含6-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
在另一个方面中，本发明提供钙调节肽，其包含：
聚阳离子肽，其包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
其中所述第一含有巯基的残基包含可以作为游离巯基或处于保护形式的巯基基团。
在一些这样的实施方案中，所述聚阳离子肽还包含第二含有巯基的残基，其与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。在这样的情形中，二硫键的形成构成环形聚阳离子钙调节肽。
在另一个方面中，本发明提供与聚乙二醇(PEG)缀合形成加入聚乙二醇的肽的本文所述的钙调节肽。在优选实施方案中，PEG具有约5kDa-约40kDa的平均分子量。
在另一个方面中，本发明提供包含本文进一步所述的钙调节肽和一种或多种药用赋形剂的药物组合物。
有效用于本发明方法的肽可以利用常规液相或固相技术进行化学合成，或可以重组产生。包含至少一种药用赋形剂和所述肽的药物组合物也考虑用于本文提供的方法。
本发明的方法可以有效用于治疗甲状旁腺功能亢进、骨病、和其它高钙血症。示例性的疾病包括但不限于：甲状旁腺功能亢进(原发性、继发性和三发性)、恶性高钙血症、转移性骨病、佩吉特病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨软化、软骨钙质沉着病、软骨发育不全、骨软骨炎、囊性成骨不全、先天性低磷酸盐血症、纤维瘤性损伤、纤维性结构不良、多发性骨髓瘤、溶骨性骨病、假体周围骨质溶解、牙周病、骨质疏松症、异常骨转换、或其它形式的高转换骨病。
附图简述
图1显示在通过12-小时静脉内输注以12.5mg/kg给药KAI-1455的犬中PTH、血清钙和血清磷酸盐(iP)水平之间的关系。
图2显示通过12小时的静脉内输注以25mg/kg的剂量给药KAI-1455的犬中的血清钙水平，在12-小时输注过程中补充钙(2mg元素钙/kg/小时)，并且在EOI后3-6小时再次补充。
图3显示通过12小时的静脉内输注以25mg/kg的剂量给药KAI-1455的犬中的血清磷酸盐水平，在12-小时输注过程中补充钙(2mg元素钙/kg/小时)，并且在EOI后3-6小时再次补充。
图4显示通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg/小时的剂量施用KAI-1455的受试者中，KAI-1455在人血浆中的血浆药物代谢动力学。在给药前，给药过程中的1，3，6，9，12小时时间点，以及在输注结束后的2，5，7，10，15，20，30和60分钟，确定KAI-1455浓度(ng/mL)。
图5显示在通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后3，6，9，12，15，18，21，24和48小时的离子化钙(mmol/L)。
图6显示在通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后3，6，9，12，15，18，21，24和48小时的总钙(mg/dL)。
图7显示在通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后3，6，9，12，15，18，21，24和48小时的钙水平的百分数变化。
图8显示在通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后3，6，12，15，18，24和48小时的血浆PTH水平(pg/mL)。
图9显示在通过12小时的静脉内输注以18，54，81和162mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后3，6，12，15，18，24和48小时的血浆PTH水平的百分数变化。
图10显示在通过4小时的静脉内输注以54和108mg/kg的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时的离子化钙(mmol/L)。
图11显示在通过4小时的静脉内输注以54和108mg/kg/小时的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时的总钙(mg/dL)。
图12显示在通过4小时的静脉内输注以54和108mg/kg/小时的剂量施用KAI-1455的人中，在输注开始时、和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时的血浆PTH水平(pg/mL)。
图13显示在通过3小时的静脉内输注以9mg/kg/小时的给药速率施用KP-1524(SEQ ID NO：9)的麻醉大鼠(n＝4)中，在输注前、和在1，2，3和4小时的时间点的总钙(mg/dL)和血浆PTH(pg/mL)。
图14显示在通过3小时的静脉内输注以9mg/kg/小时的给药速率施用KP-9706(SEQ ID NO：6)的麻醉大鼠(n＝4)中，在给药前、和在1，2，3，4和24小时的时间点的总钙(mg/dL)水平。
图15显示在大鼠EDTA血浆中关于KAI-1455(SEQ ID NO：7)，KP-9706(SEQ ID NO：6)和KP-9803(SEQ ID NO：8)的体外血浆稳定性数据。
发明详述
本发明涉及使用聚阳离子肽预防、治疗或改善甲状旁腺功能亢进、骨病和/或其它高钙血症的方法。
当用于本文时，除非另外指明，术语“甲状旁腺功能亢进”是指原发性、继发性和三发性甲状旁腺功能亢进。在一个优选的实施方案中，使用本发明的钙调节肽治疗患有继发性甲状旁腺功能亢进的受试者以降低血浆PTH水平。未治疗的患有中度严重性的甲状旁腺功能亢进的SHPT患者通常具有＞300pg/ml的基线循环完整PTH水平，并且水平超过600pg/mL。在一个优选的实施方案中，血清PTH的减少测量为低于治疗前基线水平的完整PTH的减少。
当用于本文时，“钙调节肽”是包含一个或多个聚阳离子肽和总共3-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸的肽，其中所述带正电荷的氨基酸包含在所述聚阳离子肽内，并且其中所述钙调节肽能够在一个或多个靶组织中、或在受试者中降低血清PTH和/或钙水平。在某些实施方案中，当将治疗有效量的钙调节肽施用给需要所述治疗的受试者时，所述钙调节肽能够降低血清PTH和/或血清钙水平。在优选实施方案中，所述钙调节肽包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸。在特别优选的实施方案中，所述钙调节肽包含6-12个在生理pH下带正电荷的氨基酸。本发明的钙调节肽包含总共约4-35个氨基酸残基，包括带正电荷的氨基酸残基。
在某些实施方案中，本发明的钙调节肽包括聚阳离子肽和货物肽，每一个包括包含巯基的残基，其中所述包含巯基的残基通过二硫键连接。
在其它实施方案中，所述钙调节肽包括两个聚阳离子肽，每个包括包含巯基的残基，所述残基通过二硫键连接。在一些这样的实施方案中，所述第一聚阳离子肽和第二聚阳离子肽是相同的，以致二硫键的形成构成同型二聚体结构。在其它实施方案中，所述第一聚阳离子肽和第二聚阳离子肽是不同的，以致二硫键的形成构成异型二聚体结构。
在其它实施方案中，所述钙调节肽包含单一聚阳离子肽和至少一个包含巯基的残基，其中所述包含巯基的残基含有游离的巯基或所述巯基部分以被保护的形式存在。在一些这样的实施方案中，所述钙调节肽包含单一聚阳离子肽和两个彼此以二硫键键合的包含巯基的残基，(即，所述巯基部分以二硫化物基团被内部“保护”)，其中二硫键的形成提供环形的钙调节肽。
当用于本文时，“聚阳离子肽”是指包含2-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸、和至少一个包含巯基的残基的肽，其中所述聚阳离子肽在肽的氨基端、羧基端、或两端进行化学修饰(即，“加帽的”)。
聚阳离子肽可以在长度上总共3-25个氨基酸残基、优选地总共5-25个氨基酸残基变化，并且可以由单重复的带正电荷的氨基酸残基组成，或可以包含多个天然的或非天然的氨基酸残基。在优选实施方案中，所述聚阳离子肽包含5-20个带正电荷的氨基酸、优选5-15个带正电荷的氨基酸、更优选地包含6-12个带正电荷的氨基酸。
在一些实施方案中，所述钙调节肽仅包含一个聚阳离子肽。在其它实施方案中，所述钙调节肽包含两个聚阳离子肽，其中每一个优选地包含3-10个带正电荷的氨基酸。
优选的聚阳离子肽包括TAT-衍生的肽，例如具有SEQ ID NO：5的序列的加帽的Cys-TAT肽或具有SEQ ID NO：29的序列的截短的肽。还优选包括3-7个精氨酸残基的聚阳离子肽。在一些实施方案中，所述精氨酸残基是连续的，诸如具有SEQ ID NOs：19-26的序列的加帽的聚精氨酸肽。在其它实施方案中，所述聚阳离子肽可以包含不连续的3-7个精氨酸残基，诸如具有SEQ ID NO：32的肽。
当用于本文时，术语“带正电荷的氨基酸”是指在生理pH下(在血浆中～7.4)带正电荷的氨基酸残基。
带正电荷的氨基酸独立地选自生理pH下带正电荷的天然的或非天然的具有L-或D-构型的氨基酸，或它们的外消旋物，或它们具有任何手性纯度程度的混合物。在一些实施方案中，所述带正电荷的氨基酸选自天然的氨基酸。在其它实施方案中，所述带正电荷的氨基酸选自天然的和/或非天然的氨基酸。在具体实施方案中，所述带正电荷的氨基酸独立地选自由下列各项组成的组：组氨酸、赖氨酸、精氨酸、2，3-二氨基丙酸(Dap)、2，4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸、和高精氨酸。
当治疗肽进入受试者的血浆中时，它变得易受肽酶的攻击。外肽酶是典型的非特异性酶，其从肽或蛋白的氨基或羧基末端裂解氨基酸残基。内肽酶，其在氨基酸序列内部裂解，也可以是非特异性的；然而，内肽酶通常识别特定的氨基酸序列(识别位点)并且在这些位点处或附近裂解肽。
一种保护肽组合物免于蛋白水解降解的方法包括“化学修饰”或“加帽”肽的氨基和/或羧基末端。当用于本文时，术语“化学修饰”或“加帽”可互换使用，指通过共价修饰向肽的末端引入保护基团。适当的保护基团在不减小肽的生物学活性的条件下起作用给肽的末端加帽。
不希望受到理论束缚，据信将所述聚阳离子肽的至少一端加帽对于获得充分的血浆稳定性和暴露以在体内获得治疗相关的PTH水平和/或钙减少是重要的。所述保护或“加帽”基团可以有效用来保护肽免于受到血清蛋白酶的蛋白水解降解。
将所述肽的氨基末端乙酰化是一种包含该肽免于蛋白水解降解的优选方法。将所述肽的羧基末端酰胺化也是一种保护所述肽免于蛋白水解降解的优选方法。然而，其它的加帽基团是可能的。例如，氨基端可以通过酰基化或磺酰化形成酰胺或磺酰胺而被加帽。类似地，羧基端可以被酯化、或转化成仲酰胺、和酰基磺酰胺等。在一些实施方案中，所述氨基端或羧基端可以包含PEG化位点，即，氨基或羧基端可以通过与适当官能化的PEG反应而化学修饰。
保护肽免受内肽酶作用典型地包括鉴定并消除肽的内肽酶识别位点。蛋白酶识别位点是本领域普通技术人员公知的。因此，可以鉴定潜在的内肽酶识别位点，并且然后通过改变所述识别位点内的氨基酸序列而消除所述位点。可以移动或去除在识别序列内的残基以破坏识别位点。优选地，对鉴定的蛋白酶识别位点包括的一个或多个氨基酸进行保守取代。
在优选实施方案中，聚阳离子肽的氨基端通过乙酰化化学修饰以提供N-乙酰基肽。在更优选的实施方案中，聚阳离子肽的羧基端通过酰胺化化学修饰，以在C-端提供伯羧酰胺。在特别优选的实施方案中，氨基端和羧基端均分别通过乙酰化和酰胺化被加帽。
当用于本文时，术语“包含巯基的残基”是指包含巯基的氨基酸或包含巯基的化合物，其包括氨基基团和/或羧基基团，以致其可以结合到多肽中，其中所述巯基基团可以处于被保护的或未被保护的形式，并且当所述巯基基团处于其游离形式时，其能够形成二硫键。
包含巯基的残基的代表性实例包括，例如，半胱氨酸、高半胱氨酸、和巯基丙酸。当所述包含巯基的残基包含手性中心时，它可以以L-或D-构型存在，或作为外消旋物，或以任何手性纯度程度存在。在常见的实施方案中，所述包含巯基的残基包括半胱氨酸或高半胱氨酸。
所述包含巯基的残基可以位于聚阳离子肽链的任何位置，包括氨基端、羧基端、或一些其它的位置。为了化学合成的便利，包含巯基的残基通常利用包含处于被保护形式的包含巯基部分的结构单元偶联到肽链上。
在一些实施方案中，在聚阳离子肽和货物肽之间、或在第一和第二聚阳离子肽之间形成二硫键的包含巯基的残基是相同的(即，半胱氨酸-半胱氨酸，或高半胱氨酸-高半胱氨酸)。在其它实施方案中，所述两个包含巯基的残基可以是不同的。
在某些实施方案中，所述包含巯基的氨基酸可以处于被保护的形式。用于巯基部分的适当的保护基团包括，例如，硫酯衍生物，特别是硫代乙酰或硫代苯甲酰基类似物；硫代碳酸酯；半硫缩醛，诸如1-乙氧基乙基，甲氧基甲基和聚甲醛硫醚；和二硫化物保护基团，诸如在包含巯基的残基的游离巯基和取代的或未取代的苯硫酚部分之间形成的二硫化物。
在一些实施方案中，所述巯基保护基团可以在体内裂解。所述被保护的包含巯基的残基可以作用为前体药物，掩蔽游离的巯基并且修饰包括这样的被保护的包含巯基的残基的钙调节肽的物理化学、药物代谢动力学和/或药效特征。
连接包含巯基的残基可以放置在所述聚阳离子肽和/或货物肽的序列中的任何位置。例如，在某些实施方案中，所述第一和第二包含巯基的残基可以位于两个聚阳离子肽的氨基端，或在其它实施方案中，位于聚阳离子肽和货物肽的氨基端。连接包含巯基的残基可以放置在所述肽的羧基端，或备选地在所述聚阳离子肽和货物肽中之一的氨基端，和在另一个肽的羧基端。备选地，连接包含巯基的残基可以放置在聚阳离子肽和/或货物肽中的任一个或二者的序列内的任何位置处。
在一些实施方案中，第一包含巯基的残基位于第一聚阳离子或聚阳离子肽的氨基端或羧基端。在其它实施方案中，所述第一含有巯基的残基位于除第一聚阳离子或聚阳离子肽的氨基端或羧基端之外的位置。在一些实施方案中，第二含有巯基的残基位于第二聚阳离子或货物肽的氨基端或羧基端。在其它实施方案中，第二含有巯基的残基位于除第二聚阳离子或货物肽的氨基端或羧基端之外的位置。
在一个优选的实施方案中，所述第一和第二含有巯基的残基都是半胱氨酸残基。在其它实施方案中，还可以使用高半胱氨酸类似物来在两个聚阳离子肽之间或在聚阳离子肽和货物肽之间形成二硫键。例如，高半胱氨酸的应用可以在货物肽、聚阳离子肽或在二者中使用，并且可以稳定该组合物并且减少二硫键交换。其它半胱氨酸同系物也有效用于二硫键形成。类似地，半胱氨酸和高半胱氨酸的立体异构体将抑制二硫键的交换。
在一些实施方案中，第二含有巯基的残基是所述聚阳离子肽中的另一个残基，以致在第一和第二含有巯基的残基之间形成二硫键构成环形的聚阳离子肽。
当用于本文时，术语“货物肽”是指5-25个氨基酸的肽，其包含第二含有巯基的残基。在常见的实施方案中，所述货物肽通过在第一和第二含有巯基的残基之间形成分子间二硫键而与所述聚阳离子肽共价连接。在一些情形中，所述货物肽可以包含带正电荷的氨基酸残基。然而，存在带正电荷的氨基酸残基不是货物肽的必需特征。在某些实施方案中，所述货物肽包含同工酶特异性PKC调节肽。
当用于本文时，当化合物作用在参与骨重建和/或钙体内稳态的特定的PKC同工酶时，该化合物是“同工酶-特异性的”，其与不能区分PKC同工酶的非特异性肽或化合物相反。
当用于本文时，“PKC调节肽”定义为能够在一个或多个靶组织中完全或部分激活或抑制PKC同工酶活性的化合物。PKC调节肽可以在不同组织中表现出不同的同工酶特异性、激活剂或抑制剂活性和/或激活剂或抑制剂活性水平(完全或部分的)。
在一些实施方案中，所述货物肽是PKC调节肽，其中所述PKC调节肽包含这样的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括与选自由SEQ ID NOs：1和2组成的组的肽大于50％的序列同一性。在其它方法中，所述PKC调节肽包括包含选自由SEQ ID NOs：1和2组成的组的肽的5-9个连续残基的氨基酸序列。在某些方法中，所述PKC调节肽包括选自由SEQ ID NOs：1和2组成的组的氨基酸序列。在其它实施方案中，所述货物肽是PKC调节肽，其中所述PKC调节肽包括包含与已知具有PKC调节活性的肽的大于50％的序列同一性的氨基酸序列。
在其它实施方案中，本发明的钙调节肽包括包含与选自由SEQ IDNOs：6，7，8，9，10，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，28，28，31，和32组成的组的肽的大于50％的序列同一性的氨基酸序列。在其它实施方案中，所述钙调节肽包括包含选自由SEQ ID NOs：6，7，8，9，10，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，28，28，31，和32组成的组肽的6-15个连续残基的氨基酸序列。在某些方法中，所述钙调节肽包括选自由SEQ ID NOs：7，9，10，和12组成的组的氨基酸序列。
在具体实施方案中，所述钙调节肽包括与货物肽二硫键键合的聚阳离子肽，如本文进一步所述。在优选实施方案中，所述钙调节肽选自具有SEQID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，或SEQ ID NO：12的序列的肽。
在其它实施方案中，所述钙调节肽包括与第二聚阳离子肽二硫键键合的第一聚阳离子肽，如本文进一步所述。在优选实施方案中，所述钙调节肽选自具有SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：18的序列的肽。
在其它实施方案中，所述钙调节肽包括包含第一含有巯基残基的单个聚阳离子肽，其中所述巯基基团以被保护的或未保护的形式存在，如本文进一步所述。在一些这样的实施方案中，所述钙调节肽还包括第二含有巯基的残基，以致二硫键的形成构成环形肽。在优选实施方案中，所述钙调节肽选自具有SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：14，SEQ ID NOs：19-26，SEQ IDNO：29，或SEQ ID NO：32的序列的肽。
KAI-1455(SEQ ID NO：7)包含同工酶-特异性PKC调节肽作为货物肽。包含其它货物肽的钙调节肽，例如，KP-1524(SEQ ID NO：9)，也在大鼠中以与KAI-1455相似的水平(实施例11和12)显著降低总钙和PTH水平。不希望受到理论束缚，与货物肽连接二硫化物作用为前体药物以在体内保护所述聚阳离子肽，延长其在血浆内作用的持续时间是可能的。不希望受到理论束缚，所述货物肽可以提供提高或稳定钙和PTH调节活性的前体药物形式是可能的。
本发明的钙调节肽包括至少一个包含巯基的残基，其中所述巯基基团可以作为游离巯基、被保护的巯基存在，或可以与作为第二含有巯基的残基二硫键键合。在常见的实施方案中，所述钙调节肽包括至少两个彼此二硫键键合的包含巯基的残基。
包含具有游离巯基基团的单个包含巯基的残基的钙调节肽表现出与KAI-1455所示的水平相当的水平的体外活性。例如，具有包含游离巯基的N-端半胱氨酸残基的加帽的TAT-衍生的肽(SEQ ID NO：5)，当在体外检测时，表现出与KAI-1455相当的活性。
包括具有游离的巯基基团的单一包含巯基的残基的钙调节肽本身可以有效用于本发明的方法，或所述巯基基团可以作为前体药物施用，其通过如本文进一步所述将所述游离的巯基基团保护在可在体内裂解的保护基团内。在对包含巯基的治疗剂的保护领域中，所述基团是已知的。
在另一个方面中，本发明提供包含聚阳离子肽(如本文进一步所述)和至少一种药用赋形剂的药物组合物。
在另一个方面中，本发明提供用于治疗甲状旁腺功能亢进、高钙血症和/或骨病的方法，所述方法包括施用治疗有效量的本文所述的钙调节肽，并且还包括用治疗有效量的选自由下列各项组成的组的试剂治疗受试者：抗再吸收的二膦酸盐试剂、整联蛋白阻断剂、激素替代治疗剂、选择性雌激素受体调节剂、组织蛋白酶K抑制剂、维生素D治疗、消炎剂、低剂量PTH治疗、降钙素、RANK配体的抑制剂、针对RANK配体的抗体、护骨蛋白、adensosine拮抗剂和ATP质子泵抑制剂。
在本发明的另一个方面中，所述钙调节肽以有效减小血清PTH或PTH作用的量施用。
在一些实施方案中，血清PTH的减少为低于基线治疗前水平至少1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％，25％或30％，在施用所述钙调节肽后持续至少10小时。在具体实施方案中，血清PTH的减少在施用后10小时是至少20％。在优选实施方案中，血清PTH的减少是低于基线治疗前水平15-40％，优选地20-50％，更优选地30-70％，在施用所述钙调节肽后持续至少48小时。
在本发明的另一个方面中，所述钙调节肽以有效减少血清钙或钙作用的量施用。
在一些实施方案中，所述血清钙的减少低于基线治疗前水平至少1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％或25％，在施用所述钙调节肽后持续至少10小时。在优选实施方案中，血清钙的减少在施用后10小时为至少5％。在优选实施方案中，血清钙的减少是低于基线治疗前水平5-10％，优选地5-20％，在施用所述钙调节肽后持续至少48小时。
在另一个方面中，本发明提供用于在需要其的受试者中治疗甲状旁腺功能亢进和/或高钙血症的方法，所述方法包括：施用治疗有效量的聚阳离子肽，所述聚阳离子肽包括与选自由SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：9，SEQ IDNO：10，或SEQ ID NO：12组成的组的肽有大于50％的序列同一性的氨基酸序列，由此减少血清PTH和/或钙。
在本申请内，除非另外阐明，术语的定义和本申请技术的举例说明可以在一些公知的参考文献中的任一种中找到，诸如：Sambrook，J.，等，分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)，冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory Press)(1989)；Goeddel，D.，编，基因表达技术(Gene Expression Technology)，酶学方法(Methods inEnzymology)，185，学院出版社(Academic Press)，圣地亚哥，CA(1991)；“蛋白纯化指南”(“Guide to Protein Purification”)在Deutshcer，M.P.，编，酶学方法(Methods in Enzymology)中，学院出版社(Academic Press)，圣地亚哥，CA(1989)；Innis，等，PCR方法：方法和应用指南(PCR Protocols：AGuide to Methods and Applications)，学院出版社(Academic Press)，圣地亚哥，CA(1990)；Freshney，R.I.，动物细胞培养：基础技术手册(Culture ofAnimal Cells：A Manual of Basic Technique)，第2版，Alan Liss，公司.纽约，纽约(1987)；Murray，E.J.，编，基因转运和表达方法(Gene Transfer andExpression Protocols)，第109-128页，The Humana Press公司.，Clifton，NJ和Lewin，B.，基因VI(Genes VI)，牛津大学出版社(Oxford UniversityPress)，纽约(1997)。
通过参考下述本发明优选实施方案以及其中包括的实施例的详细描述可以更容易地理解本发明。然而，在公开和描述本方法之前，应该理解，本发明不限于特定的核酸、特定的多肽、特定的细胞类型、特定的宿主细胞、特定的条件、或特定的方法等等，当然其可以变化，并且对于本领域技术人员来说，其中的各种改进和变化是显而易见的。还应该理解，本文所用的术语仅是出于描述具体实施方案的目的，并不意欲限制。还应该理解，除非在本文中专门限定，本文所用的术语给出相关领域已知的常规意思。
当用于本文时，单数形式“一种(a)”，“一种(an)”，和“所述(the)”包括复数引用，除非另外指明。例如，“一种”调节肽包括一种或多种调节肽。
当用于本文时，″治疗有效量″是产生理想的治疗效果所需要的量。例如，在高钙血症的受试者中减少血清钙的方法中，治疗有效量是将血清钙水平减少至少1％，2％，3％，4％，5％，6％，7％，8％，9％，10％，11％，12％，13％，14％，15％，16％，17％，18％，19％，20％或25％所需要的量。
当用于本文时，“受试者”是指患有高钙血症和/或骨病的人或动物受试者。
当用于本文时，″肽″和″多肽″可互换使用，并且是指由肽键连接的氨基酸残基链组成的化合物。除非另外指明，肽的序列以从氨基端到羧基端的顺序提供。
为了确定两个氨基酸序列的百分数同源性，为了最佳比较目的(例如，为了与另一个多肽最佳比对，可以在一个多肽序列中引入缺口)，比对所述序列。然后比较在相对应的氨基酸位置处的氨基酸残基。当在一个序列中的位置被与另一个序列相对应位置处相同的氨基酸残基占有时，那么所述分子在该位置处是相同的。当用于本文时，氨基酸或核酸“同源性”等价于氨基酸或核酸“同一性”。因此，在两种序列之间的序列同一性百分数是由所述序列共有的相同位置的数目的函数(即，序列同一性百分数＝相同位置的数目/位置总数x 100)。
为了本发明的目的，使用载体NTI 6.0(PC)软件包(InforMax.7600Wisconsin Ave.，Bethesda，MD 20814)确定在两种多肽序列之间的序列同一性百分数。使用缺口开口罚分10和缺口延长罚分0.1而确定两种多肽之间的同一性百分数。所有其它的参数设置为默认的设置。
如果它具有与亲本肽或多肽的至少5个氨基酸残基的连续序列相同或相似的氨基酸序列，那么肽或肽片段“衍生于”亲本肽或多肽。
当用于本文时，“保守氨基酸取代”是不引起所选择的多肽或蛋白质的活性或三级结构的显著变化的取代。这样的取代典型地包括将所选择的氨基酸残基用具有相似的物理化学性质的不同的残基替换。通过物理化学性质对氨基酸分组是本领域的技术人员已知的。例如，在本领域已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族，并且其包括碱性侧链(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸、谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)，β-支链侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
本发明的另一个方面涉及分离的多肽、及其生物活性部分的应用。当用于本文时，当通过重组DNA技术产生时，“分离的”或“纯化的”多肽或其生物活性部分不含一些细胞物质，或者当化学合成时，其不含化学前体或其它化学品。表述“基本上不含细胞物质”包括这样的多肽的制备物，其中所述多肽与它在其中天然或重组产生的细胞的一些细胞成分分离。
当所述多肽或其生物活性部分重组产生时，它还优选地基本上不含培养基，即，培养基具有小于约20％，更优选地小于约10％，并且最优选地小于约5％的所述多肽制备物的体积。表述“基本上不含化学前体或其它化学品”包括这样的多肽的制备物，其中所述多肽与参与所述多肽合成的的化学前体或其它化学品分离。在一个实施方案中，表述“基本上不含化学前体或其它化学品”包括具有小于约30％(干重)的化学前体或其它化学品，更优选地小于约20％的化学前体或其它化学品，还更优选地小于约10％的化学前体或其它化学品，并且最优选地小于约5％的化学前体或其它化学品的多肽的制备物。在优选的实施方案中，分离的多肽、或其生物活性部分不含来自domain多肽来源的同一生物体的污染多肽。
用于使所述聚阳离子肽与所述货物肽缀合的非限制性方法包括通过二硫键缀合，和作为单链或线性多肽合成。所述聚阳离子肽还可以通过接头与货物肽缀合。在一些实施方案中，所述接头是1-5个氨基酸的肽，2-4个氨基酸的肽，或2-3个氨基酸的肽。
PKC同工酶的肽调节剂
先前已经描述了PKC同工酶的多种肽调节剂。例如，美国专利号5,783,405描述了多种调节PKC同工酶，包括β、θ、δ、ε、和γ同工酶的活性的肽。待审美国专利申请号10/843,271描述了δPKC调节肽及其衍生物。美国专利号6,165,977描述了εPKC调节肽及其衍生物。美国专利号6,855,693描述了来自α，βI，βII，γ，δ，ε，η，μ，Θ，和ζ同工酶的多种调节肽以及修饰的片段。每一专利和专利申请通过引用完全结合于此。
PKC同工酶-特异性抑制肽可以衍生自位于特定的同工酶的C2/V1结构域中的特异性RACK-结合位点。同工酶-特异性肽调节剂可以衍生自在每种PKC同工酶中与相对应的RACK序列相似的假RACK(ψRACK)序列。据信ψRACK序列与PKC的RACK结合位点形成分子内相互作用，稳定无活性或“闭合的”构象。干扰该分子内相互作用的肽可以使所述无活性形式不稳定，增强PKC的易位和RACK结合。Chen等，美国国家科学院学报(Proc.Nat.Acad.Sci.)2001；98：11114-11119。
同工酶-特异性肽调节剂可以缀合到有效促进肽穿过细胞膜转运的载体部分上。所述载体部分的实例包括，但不限于，TAT-衍生的肽、触角载体肽、和聚精氨酸肽。已经报道TAT-缀合的肽通过循环有效递送至器官中，并且与基因靶向递送相比，该递送形式可以提供优点，原因在于递送是即时的，并且因此较不易受由信号转导调节剂诱导的适应性的影响。
ψεRACK，其包括氨基酸序列HDAPIGYD(SEQ ID NO：1)，是一种同工酶-选择性肽，设计结合并且‘稳定’εPKC成为暴露RACK结合位点的构象，由此使得εPKC能够与其RACK结合。ψεRACK在几种重要的方式上不同于PKC的小分子激活剂(诸如二酰基甘油(DAG)或佛波醇酯)。第一，与DAG或佛波醇酯相比较，ψεRACK结合εPKC上不同的位点。第二，ψεRACK仅结合在εPKC同种型中为该同种型特有的位点，而DAG和佛波醇酯结合所有PKC共有的位点。ψεRACK的这种特异性赋予与非选择性分子相比显著的优点。最后，ψεRACK处理导致εPKC易位中的适度生理改变，即使在施用延长的时间期间时。这些数据表明，ψεRACK加强εPKC的活性，但是没有直接激活PKC，该方式中PKC由DAG激活。
已经报道εPKC的易位在局部缺血的预先调节中起重要作用。ψεRACK(SEQ ID NO：1)在体内和离体表现出针对局部缺血-再灌注损伤的心脏保护作用，并且在没有引起εPKC脱敏或下调的条件下，减少在局部缺血-再灌注过程中致死性心律不齐的发生。
还已经报道εPKC在调节神经、内分泌、外分泌、炎症、和免疫系统的活化中起作用。控制的εPKC激活可能在阿尔茨海默病的发展中起保护作用，而其不受控制的慢性激活可能导致严重的疾病，如恶性肿瘤和糖尿病。
为了促进穿过生物膜转运，可以将包括氨基酸序列CHDAPIGYD(SEQ ID NO：2)的包含N-端半胱氨酸的ψεRACK肽与聚阳离子肽共价连接。
制备了ε-PKC调节肽(SEQ ID NO：6)，其包括通过二硫键与TAT(SEQ ID NO：4)缀合的肽SEQ ID NO：2，并且制备了钙调节肽(SEQ IDNO：7)，其包括通过二硫键与N-酰基化C-酰胺化的TAT(SEQ ID NO：5)缀合的肽SEQ ID NO：2。包括SEQ ID NO：7的肽，本文也称为KAI-1455(或KP-1455)，具有下文所示的结构。
Figure G2007800500068D00221
(SEQ ID NO：7)。
在高剂量动物毒性学研究中已经令人惊讶地发现，KAI-1455(SEQ IDNO：7)引起血清钙水平的显著减少。在三种物种(在临床情形中的大鼠、犬和人受试者)中观察到在静脉内输注KAI-1455后的血清钙水平的减少。钙的最低点似乎在输注结束时出现，而在输注结束后钙的抑制可以持续大于24小时。对血清钙的作用是剂量依赖性的和可逆的。
在通过12小时的输注向男性志愿者施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)的单一递增剂量研究中，观察到离子化的和总钙的显著减少，在EOI附近观察到最大减少。在最高浓度(162mg/kg，12小时)观察到大于15％的最大的钙变化百分数。在同一研究中，观察到血浆PTH水平(pg/mL)的剂量依赖性减少，在EOI处观察到最大减少。对于在最高剂量组(162mg/kg，12小时)中的受试者，在EOI和在EOI后12小时观察到PTH的显著减少，在EOI后36小时仍然可观察到低于治疗前基线水平的持续减少。对于在81和162mg/kg剂量组中的受试者观察到大于40％的血浆PTH水平的最大减少百分数，在EOI后12小时水平仍然显著低于基线。
在通过3小时静脉内输注施用低剂量KAI-1455的犬中，没有观察到血清钙的显著变化；然而，在2.75小时，即在输注结束前，PTH水平增加。在使用足以引起低钙血症的KAI-1455剂量的犬中观察到血清PTH的减少。
基于血清钙、骨代谢和PTH之间的关系，本发明人相信本发明的钙调节肽，诸如KAI-1455，应该有益于甲状旁腺功能亢进和各种形式的骨病和/或高钙血症的治疗。与目前的治疗剂相比，这些化合物可以具有优点，原因在于它们可以肠胃外施用，并且可能与胃肠副作用无关，不通过细胞色素P450代谢，并且可以导致血清PTH和钙的更有效的减少。
本发明的方法可以单独或与其它用于治疗高钙血症和/或骨病的方法组合使用。这样的其它方法包括，但不限于，使用下列试剂的治疗：诸如抗再吸收的二膦酸盐试剂，如阿仑膦酸盐和利塞膦酸盐；整联蛋白阻断剂，诸如αvβ3拮抗剂；用于激素替代治疗的缀合的雌激素，诸如PREMPROTM，PREMARINTM和ENDOMETRIONTM；选择性雌激素受体调节剂(SERMs)，诸如雷洛昔芬，屈洛昔芬，CP-336，156(Pfizer)和拉索昔芬；组织蛋白酶(cathespin)K抑制剂；维生素D治疗；低剂量PTH治疗(使用或不使用雌激素)；降钙素；RANK配体的抑制剂；针对RANK配体的抗体；护骨蛋白；adensosine拮抗剂；和ATP质子泵抑制剂。
尽管PTH典型地与骨再吸收有关，在某些情形中，已经发现PTH刺激成骨细胞的累积和骨生长。据信PTH的成骨作用通过刺激前成骨细胞增殖和休眠的衬细胞转化为活性成骨细胞而发生。PTH还可以起作用通过增加成骨细胞活性和/或通过防止细胞程序性死亡增加生命周期而构建骨。因此，PTH的小增加可能具有合成代谢影响，导致骨生长。
在一个实施方案中，钙调节肽以足以降低PTH和血清钙二者水平的剂量施用。在另一个实施方案中，钙调节肽以足以减少PTH而不显著影响血清钙水平的剂量施用。在另一个实施方案中，钙调节肽以足以增加PTH而不显著影响血清钙水平的剂量施用。
制剂
制备这些制剂或组合物的方法包括使本发明的化合物与载体和任选地，一种或多种助剂缔合的步骤。通常，所述制剂通过均匀地并且紧密地使本发明的化合物与脂质载体或细分的固体载体或二者相缔合，并且然后，如果需要，将所述产物定形而制备。
适合肠胃外施用的本发明的药物组合物包括一种或多种本发明的化合物，其与一种或多种药用无菌等渗水性或非水性溶液、分散液、混悬液或乳液、或无菌散剂组合，所述无菌散剂可以恰好在使用前重构成无菌的可注射溶液或分散体，其可以包含糖、醇、抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂、使得所述制剂与目的受体的血液等渗的溶质、或混悬剂或增稠剂。
可以用于本发明的药物组合物中的适宜的水性和非水性载体的实例包括水，醇，多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、以及它们的适当的混合物，植物油，如橄榄油，和可注射的有机酯，如油酸乙酯。可以保持恰当的流动性，例如，通过使用涂层物质，如磷脂酰胆碱，在分散体的情形中通过保持需要的颗粒大小，并且通过使用表面活性剂而进行。
这些组合物还可以包含佐剂，如防腐剂，湿润剂，乳化剂和分散剂。防止微生物在本发明的化合物上的作用可以通过包含各种抗细菌和抗真菌剂，例如，对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等而得到保证。还可以需要地在所述组合物中包含等渗剂，如糖、氯化钠等。另外，可注射药物形式的延长吸收可以通过包含延迟吸收的试剂如单硬脂酸铝和明胶而导致。
在一些情形中，为了延长药物的作用，需要减缓从皮下或肌内注射的药物吸收。这可以通过使用具有很小的水溶性的晶态或非晶态的物质的液体混悬液而实现。那么药物的吸收速率取决于它的溶解速率，而溶解速率又可能取决于晶体大小和晶体形式。备选地，肠胃外施用的药物形式的延迟吸收通过将所述药物溶解或悬浮在油性赋形剂中而实现。
例如，聚阳离子肽可以以在通过用液体重构固体形式的药物制备的溶液形式递送至人。该溶液可以进一步用输注流体诸如0.9％的氯化钠注射液、5％的葡萄糖注射液和乳酸盐林格氏注射液稀释。优选地，所述重构的和稀释的溶液在4-6小时内使用，以递送最大功效。备选地，聚阳离子肽可以以片剂或胶囊的形式递送至人。
可注射的长效制剂形式通过在生物可降解的聚合物如聚交酯-聚乙交酯中形成本发明化合物的微胶囊基质而制备。取决于药物与聚合物的比例，和所用的特定聚合物的性质，可以控制药物释放的速率。其它可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。长效注射制剂还通过将药物包埋在与机体组织相容的脂质体或微乳液中而制备。
适于口服施用的本发明的制剂可以是下列形式：胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂(使用调味成分，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、散剂、粒剂或作为在水性或非水性液体中的溶液或混悬液、或者作为水包油或油包水液体乳状液、或者作为酏剂或糖浆、或者作为软锭剂(使用惰性成分，诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯胶)和/或作为漱口剂等，每一种包含预先确定量的本发明的化合物作为活性组分。本发明的化合物还可以作为大丸剂、舐剂(electuary)或糊剂施用。
当本发明的化合物作为药物施用给人和动物时，它们可以自身给药或者作为药物组合物给药，所述药物组合物包含，例如，0.1到99％(更优选地，10到30％)的活性成分与药用载体的组合。这些化合物可以通过任何适当的施用途径施用给人和其它动物用于治疗，所述施用途径包括，例如，皮下注射，皮下长效制剂，静脉内注射，和静脉内或皮下输注。
不管所选择的施用途径，可以以适当的水合形式应用的本发明的化合物，和/或本发明的药物组合物，通过本领域的技术人员已知的常规方法配制成药用剂型。
活性组分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平可以不同，以便获得有效实现对于具体的患者、组合物和施用模式的理想的治疗反应而对患者没有毒性的活性组分的量。
选择的剂量水平将取决于各种因素，包括本发明所用的特定化合物、或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所用的特定化合物的排泄或代谢速率，吸收的速率和程度，治疗的持续时间，与所用的特定化合物组合应用的其它药物、化合物和/或物质，治疗的患者的年龄、性别、体重、病况、综合健康情况和已有的医药史，以及医药领域公知的类似因素。
在本领域内具有普通技术的医生或兽医可以容易地确定并且开出所需要的有效量的药物组合物。例如，医生或兽医可以从低于需要的水平的用于所述药物组合物中的本发明的化合物的剂量开始，以获得理想的治疗作用，并且逐渐增加剂量直到获得理想的作用。
通常，本发明化合物的适合的日常剂量应该是有效产生治疗作用的最低剂量的所述化合物的量。这样的有效剂量通常取决于上述因素。一般地，当用于指定的作用时，本发明的化合物对于患者的口服、静脉内、脑室内(intracerebroventricular)和皮下的剂量，将在从约1mcg到约5mg/kg体重/小时的范围内。在其它实施方案中，剂量将在约5mcg到约2.5mg/kg体重/小时的范围内。在其它实施方案中，剂量将在约5mcg到约1mg/kg体重/小时的范围内。
如果需要，所述活性化合物的有效每日剂量可以在一整天当中以适当的间隔作为分开施用的两次、三次、四次、五次、六次或更多的分剂量进行施用，任选地，以单位剂型施用。在一个实施方案中，化合物以一剂量/每天施用。在其它实施方案中，化合物连续施用，如通过静脉内或其它途径。在其它实施方案中，化合物以不如每日一次那样频繁地施用，诸如每周一次或更少。
尽管本发明的化合物可以单独施用，但是优选地将所述化合物作为药物制剂(组合物)进行施用。
通常接受这种治疗的受试者是需要其的任何动物，包括灵长类动物，特别是人，以及其它哺乳动物，如马、牛、猪和羊；以及家禽和宠物。
本发明的化合物可以按原样或者与药用载体的混合物进行施用，并且还可以与抗微生物药剂如青霉素、头孢菌素类、氨基糖苷和糖肽联合施用。因此，联合治疗包括以在后续施用时先施用的活性化合物的治疗作用没有完全消失的方式，顺序、同时和分开施用活性化合物。
用于所公开的化合物的可能的施用途径
这些化合物可以通过任何适当的施用途径施用给人和其它动物，用于治疗。当用于此处时，术语施用“途径”意欲包括，但不限于，皮下注射，皮下长效制剂，静脉内注射，静脉内或皮下输注，眼内注射，皮肤内注射，肌内注射，腹膜内注射，气管内施用，脂肪内(intraadiposal)施用，关节内施用，鞘内施用，硬膜外施用，吸入，鼻内施用，口服施用，舌下施用，口腔施用，直肠施用，阴道施用，池内施用和局部施用，或通过局部递送(例如，通过导管或斯滕特固定模(stent))施用。所述聚阳离子肽还可以以缓慢释放剂型施用或共同施用。当系统施用时，所公开的化合物具有功效。
如上文所述，本发明的方法可以单独或与其它用于治疗高钙血症和/或骨病的方法组合使用。所述其它方法包括，但不限于，使用下列试剂的治疗：诸如二膦酸盐试剂，整联蛋白阻断剂，激素替代治疗，选择性雌激素受体调节剂，组织蛋白酶K抑制剂，维生素D治疗，消炎剂，低剂量PTH治疗(使用或不使用雌激素)，降钙素，RANK配体的抑制剂，针对RANK配体的抗体，护骨蛋白，adensosine拮抗剂和ATP质子泵抑制剂。
要用于组合方案的具体的治疗(疗法或步骤)组合应该考虑需要的治疗剂和/或步骤与要获得的需要的治疗效果的相容性。还应该理解，所用的治疗可以对于同一种疾病获得需要的效果(例如，本发明化合物可以与用于治疗同一种疾病的另一种药剂同时施用)，或者它们可以获得不同的效果(例如，对任何不利作用的控制)。当用于本文时，已知通常施用来治疗或预防特别的疾病或病况的额外的治疗药剂是“适合所述被治疗的疾病或病况”的。
本文定义的本发明的组合治疗可以通过同时、顺序或分开施用所述治疗的单个成分的方式而实现。
本发明的化合物或其药用组合物还可以结合到用于涂敷可移植的医学装置的组合物中，所述可移植的医学装置如假体、人造阀、血管移植物、斯滕特固定模和导管。因此，在另一个方面中，本发明包括用于涂敷可植入装置的组合物，其包含如上文一般描述的本发明的化合物，和适合涂敷所述可植入装置的载体。在另一个方面中，本发明包括用包含如上文一般描述的本发明的化合物和适合涂敷所述可植入装置的载体的组合物涂敷的可植入装置。
例如，血管斯滕特固定模已经用于克服再狭窄(损伤后的血管壁再狭窄)。然而，使用斯滕特固定模或其它可植入装置的患者具有形成血块或血小板激活的危险。这些不需要的作用可以通过将所述装置用包含激酶抑制剂的药用组合物预先涂敷而防止或减轻。适当的涂层和涂敷的可植入装置的一般制备在美国专利号6,099,562；5,886,026；和5,304,121中描述，其通过引用完全结合于此。所述涂层典型地是生物相容性聚合物物质，如水凝胶聚合物、聚甲基二硅氧烷、聚己内酯、聚乙二醇、聚乳酸、乙烯乙酸乙烯酯、以及它们的混合物。所述涂层可以任选地进一步由适宜的氟硅氧烷、多糖、聚乙二醇、磷脂或它们的组合的顶部涂层(topcoat)覆盖，以赋予所述组合物控制释放的特征。
用于确定治疗功效的可能的临床标记
本发明的治疗方法的功效的确定可以通过多种方法确定。
血清钙的正常水平处于8.0-10.8mg/dL(2.0-2.7mmol/L)的范围内。在某些情形中，治疗功效可以通过测量与钙相关的血清和尿标记确定，所述标记包括但不限于，总的和离子化的血清钙，白蛋白，血清PTH，PTHrP，磷酸盐，维生素D，和镁。
在其它情形中，功效可以通过测量骨矿物质密度(BMD)，或通过测量关于骨形成和/或血清或尿中的骨再吸收的生化标记而确定。可能的骨形成标记包括，但不限于，总碱性磷酸酶，骨碱性磷酸酶，骨钙蛋白，undercarboxylated骨钙蛋白，C-端前胶原I型前肽，和N-端前胶原I型前肽。可能的骨再吸收标记包括，但不限于，羟脯氨酸，羟赖氨酸，糖基-半乳糖基羟赖氨酸，半乳糖基羟赖氨酸，吡啶啉，脱氧吡啶啉，I型胶原的N-端交联的端肽，I型胶原的C-端交联的端肽，通过MMPs产生的I型胶原的C-端交联的端肽，骨涎蛋白，酸性磷酸酶和酒石酸抗性酸性磷酸酶。
预测当本发明的治疗方法对需要其的受试者实施时，所述治疗方法将产生通过例如下列各项中的一种或多种测量的作用：总血清钙，离子化的血清钙，白蛋白，血清PTH，PTHrP，磷酸盐，维生素D，镁，骨矿物质密度(BMD)，总碱性磷酸酶，骨碱性磷酸酶，骨钙蛋白，羧化不全骨钙蛋白(under carboxylated osteocalcin)，C-端前胶原I型前肽，N-端前胶原I型前肽，羟脯氨酸，羟赖氨酸，糖基-半乳糖基羟赖氨酸，半乳糖基羟赖氨酸，吡啶啉，脱氧吡啶啉，I型胶原的N-端交联的端肽，I型胶原的C-端交联的端肽，通过MMPs产生的I型胶原的C-端交联的端肽，骨涎蛋白，酸性磷酸酶和酒石酸抗性酸性磷酸酶。作用包括预防性治疗以及已有疾病的治疗。
生物学有效的分子可以使用共价键或非共价相互作用可操作性地连接到本发明的肽上。在具体实施方案中，所述可操作性连接的生物学有效分子可以利用赋予作为所连接的分子的一部分的所述肽性质而改变本发明上述实施方案中的肽的药物代谢动力学。所述生物学有效分子可以赋予所述肽的一些性质包括，但不限于：将肽递送至体内的不连续的位置；将肽的活性集中在体内需要的位置并且减少其在其它位置的作用；减少用肽治疗的副作用；改变肽的渗透性；改变肽的生物利用度或递送至机体的速率；改变用肽治疗的作用持久性；改变肽的稳定性；改变肽的作用发作和衰减的速率；通过允许肽具有功效而提供允许的作用。
在另一个方面中，本发明的钙调节肽可以缀合到聚乙二醇(PEG)上。所选择的PEG可以是任意便利的分子量，并且可以是直链的或支链的，并且可以任选地通过接头缀合。PEG的平均分子量优选在约2千道尔顿(kDa)-约100kDa范围内，更优选地约5kDa-约40kDa的范围内。
肽调节肽可以通过位于货物肽和/或一种或多种聚阳离子肽上的任何位置处的适当的氨基酸残基缀合到PEG上。聚阳离子和货物肽，如本文进一步所述，可以任选地包含与PEG缀合的额外的氨基酸残基，包括例如，额外的碱性残基，诸如赖氨酸。
在本领域内已知加入聚乙二醇的肽提高缀合的肽的血浆半衰期。在本领域中，关于制备加入聚乙二醇的肽的多种方法是已知的。例如，PEG部分可以连接到氨基端，羧基端，或通过所述的肽的侧链，任选地通过存在连接基团连接。在其它实施方案中，所述PEG部分可以与包含巯基的氨基酸如半胱氨酸的硫连接，或可以偶联到碱性氨基酸如赖氨酸或精氨酸的侧链上。
PEG基团通常通过经过PEG部分上的反应基团(例如，醛、氨基、巯基、酯、或羧酸基团)与本发明化合物上的反应基团(例如，醛、氨基、酯、酸或巯基基团)的酰基化或还原烷基化而附着到本发明的肽上，本发明化合物上的反应基团可以位于聚阳离子或货物肽的氨基端、羧基端、或侧链位置。用于制备合成肽的加入聚乙二醇的一种方法由通过在溶液中缀合连接组合肽和PEG部分组成，所述肽和PEG部分分别携带彼此相互反应的官能团。肽可以利用常规液相或固相合成技术容易地制备。肽和PEG的缀合典型地在水相中进行，并且可以通过反相HPLC监测。使用本领域技术人员已知的标准技术，可以容易地纯化和表征加入聚乙二醇的肽。本发明的肽的一个或多个单个残基还可以用已知与特定的侧链或末端残基反应的各种衍生试剂进行修饰。例如，赖氨酰(lysinyl)残基和氨基端残基可以与琥珀酸酐或其它类似的羧酸酐反应，其使赖氨酰或氨基残基上的电荷变为相反的。其它适宜的试剂包括，例如，亚氨酸酯，如甲基皮考林酰亚胺(methyl picolinimidate)；吡哆醛；吡哆醛磷酸；氯硼氢化物；三硝基苯磺酸；邻-甲基异脲；2，4，-戊二酮；和转氨酶催化的与乙醛酸(glyoxalate)的反应。精氨酰残基可以通过与常规试剂如苯甲酰甲醛、2，3-丁二酮、1，2-环己二酮和茚三酮反应而进行修饰。
另外，可以修饰本发明的聚阳离子肽以包括非阳离子残基，其提供有效用于开发用于生物分析ELISA测量的抗体的免疫原性残基，以及评估免疫原性。例如，所述聚阳离子肽可以通过结合酪氨酸和/或甘氨酸残基而修饰。对于将光谱标记引入到酪氨酰残基中来特异性修饰酪氨酰残基是特别感兴趣的。非限制性实例包括与芳香重氮化合物或四硝基甲烷反应。最常见的，N-乙酰咪唑和四硝基甲烷分别用于形成邻-乙酰基酪氨酰和3-硝基衍生物。
包含所公开的化合物的试剂盒
本发明还提供实施本发明的治疗方案的试剂盒。这样的试剂盒包括治疗有效量的具有作为CaSR调节剂活性的聚阳离子肽，其以药用形式，单独的或与其它以药用形式存在的药剂组合。优选的药物形式包括与无菌盐水、右旋糖溶液、缓冲液或其它药用无菌流体组合的肽。备选地，所述组合物可以是冻干的或干燥的。在这种情形中，所述试剂盒可以进一步包括药用溶液，优选是无菌的，以形成用于注射目的的溶液。在另一个实施方案中，所述试剂盒可以进一步包括针头或注射器，优选是以无菌形式包装的，用于注射所述组合物。在其它实施方案中，所述试剂盒进一步包括将所述组合物施用给受试者的使用说明方式。所述使用说明方式可以是书面插页、录音磁带、视听带或任何其它指导将所述组合物施用给受试者的方式。
在一个实施方案中，所述试剂盒包含：(i)第一容器，其包含具有作为CaSR调节剂活性的钙调节肽；和(ii)关于使用的使用说明方式。
在另一个实施方案中，所述试剂盒包括：(i)第一容器，其包含具有作为CaSR调节剂活性的钙调节肽；(ii)第二容器，其包含抗钙血症(anticalcemic)药剂；和(iii)关于使用的使用说明方式。
在一个实施方案中，所述抗钙血症药剂是选自由下列各项组成的组的药剂：二膦酸盐试剂，激素替换治疗剂，维生素D治疗，低剂量PTH(使用或不使用雌激素)，和降钙素。
在相关方面中，本发明提供包括上述试剂盒的内容物的制品。例如，本发明提供这样的制品，其包括有效量的具有作为CaSR调节剂活性的钙调节肽，所述肽单独的或与其它药剂组合，和指示治疗本文所述的疾病的应用的使用说明。
本发明的多肽在本文中通过它们的SEQ ID NO：或通过内部参考号引用，所述内部参考号指定为KAI-号和/或KP-号，其在本文中可互换使用。例如，具有SEQ ID NO：7的肽可以在本文中不同地称为KAI-1455或KP-1455。本领域技术人员应该理解，这样的数字可以互换使用，并且是指同一多肽序列。
除非另外指明，本文引用的所有文件通过引用完全结合。
实施例
提供下述实施例进行举例说明，而不是限制本发明。本发明的主要特征可以用于不同的实施方案而不背离本发明的范围。在不背离本发明的真实精神和范围的条件下，熟练的技术人员可以进行各种改进。
实施例1
制备检测和赋形剂/对照制品
将适量的KAI-1455(SEQ ID NO：7)溶解在用于注射的在水中(由ITR供应)的32.5mg/mL甘露醇和32.5mg/mL蔗糖的溶液中，以获得10mg/mL KAI-1455的储液浓度。如果需要，调整pH为～5。用注射用无菌盐水稀释储液，以获得最终剂量溶液浓度。在施用给动物之前，通过0.22pmPVDF滤器(Millipore)将溶液过滤到无菌容器/袋中，并且保持冷冻直至在给药前不久，然后允许加温至室温。
赋形剂对照溶液通过采用适当体积的在WFI中的32.5mg/mL甘露醇/32.5mg/mL蔗糖溶液，并且用SF1将其稀释约4.44-倍(即，与用于检测制品的高剂量溶液相同的稀释比例)进行制备。
实施例2
在具有14-天恢复期的大鼠中对KAI-1455的单剂量连续静脉内输注毒性和 毒性动力学/组织分布的研究
本研究在获自查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)，Raleigh，NC的Sprague Dawley大鼠(品系Crl：CD(SD))中进行。研究中包括总共42只大鼠(21只雄性和21只雌性)，每组n＝3。在治疗开始时的平均体重范围为7-11kg。在治疗开始时的平均年龄范围是6-7周，用于导管插入术，10-12周，用于开始治疗。在治疗开始时的平均体重为100-400克。
施用检测和对照/赋形剂制品：
动物由供应商通过股静脉插入导管。通过经由植入股静脉的导管的静脉内输注施用适当的剂量。通过连续的静脉内输注以10，20和45mg/kg经24小时和以45mg/kg经6小时的剂量施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)给大鼠。所有的动物以单一连续剂量持续约6或24小时给药。剂量体积为20mL/kg；对提供24-小时输注的动物的给药速率为0.83mL/kg/小时，并且对提供6-小时输注的动物的给药速率为3.33mL/kg/小时。在前剂量期间以保持的速率输注无菌盐水溶液。个体动物绝对剂量体积基于第1天的体重。在结束最终剂量后，对动物停止输注。在最终剂量后，切断用于动物的导管，打结，并且保留在原位。
利用外部泵装置在指定给药时间间隔给每只动物递送目标剂量体积。利用系绳和带状装置(tether and harness device)保持经由泵的输注。
结果：
由于极端的低钙血症，经24小时以45mg/kg施用KAI-1455的动物变得处于死亡的边缘，并且在第2天施以安乐死。所有其它剂量组在输注结束后24-42小时具有正常的钙水平。以20mg/kg施用KAI-1455的动物在给药后第3天表现出血清钙的剂量依赖性减少。在这些动物中的钙水平到第14天恢复正常，这表明由用KAI-1455治疗引起的总血清钙减少是可逆的。血清钙水平提供在表1中。
表1在输注结束后2，3和14天的总血清钙(mg/dL)
Figure G2007800500068D00331
在经24小时以45mg/kg接受KAI-1455的大鼠中在EOI后24小时观察到血清磷酸盐水平的明显升高。在20mg/kg剂量组中观察到血清磷酸盐的可能持续不变的增加。所有其它剂量组在EOI后24-42小时具有正常的血清磷酸盐(数据未显示)。
实施例3
在毕尔格猎犬(Beagle dog)中对KAI-1455单剂量(24-小时)连续静脉内输 注毒性和毒性动力学/组织分布的研究
本研究在获自马歇尔生物资源公司(Marshall BioResources，Inc.)的毕尔格猎犬中进行。研究中包括总共24只犬(12只雄性，12只雌性)，每组n＝3/性别。在治疗开始时的平均体重范围为7-11kg。在治疗开始时的平均年龄范围是7-11月龄。
施用检测和对照/赋形剂制品：
通过插入到头静脉或隐静脉之一中的并且通过医学级别的管道与输注泵连接的一次性留置导管(或
Figure G2007800500068D00333
)，以0.83mL/kg/小时的给药速率，通过静脉内输注在单一24-小时的时间期间内施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)和对照制品。基于每只动物的最近的实际体重来计算输注的实际体积(mL)。
KAI-1455以10，20和40mg/kg/的剂量，经过24小时施用。在输注结束(EOI)后第3、24小时确定血清钙水平(mmol/L)。
在输注开始之前，每只犬的输注管线预先用适当的给药溶液充满，以确保在输注泵打开时立即开始对动物给药。这确保将完整的剂量给与动物。输注袋以适当的时间间隔变化(如果需要)，并且在输注开始之前和结束时记录体重。
结果：
在输注结束后24小时观察到总血清钙的剂量依赖性减少。血清钙水平显示在表2中。
表2给药后24小时的总血清钙水平
Figure G2007800500068D00341
实施例4
对毕尔格猎犬以12-小时静脉内输注施用KAI-1455的安全性药理学研究
以1，5和12.5mg/kg的剂量，经过12小时(n＝3/剂量)通过连续静脉内输注对毕尔格猎犬施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)。在12小时的时间点、输注结束(EOI)后立即、和在EOI后24小时确定对血清钙的影响。
结果：
在EOI观察到血清钙的剂量依赖性减少。在EOI观察到最大的钙减少。在EOI后24小时观察到钙水平的部分恢复，在12.5mg/kg剂量组，动物仍然表现出血清钙与基线水平相比可检测的减少。血清钙水平显示在表3中。
表3给药前、在输注结束(EOI)时、和在EOI后12小时的总血清钙(mg/dL)
 剂量(mg/kg)   输注持续时间(小时)   0小时   12小时(EOI)  36小时(EOI后24小时)  在EOI的变化％
  1   12   10.6   10.4   -2.2
  5   12   10.6   9.6   -9.7
  12.5   12   10.5   8.8   9.5   -15.9
在EOI和在EOI后24小时观察到血清磷酸盐水平的剂量依赖性减少。血清磷酸盐水平显示在表4中。
表4给药前和在输注结束(EOI)时的血清磷酸盐(mg/dL)
  剂量(mg/kg)   输注持续时间(小时)   0小时   12小时(EOI)   ％变化
  1   12   4.7   4.4   -7.0
  5   12   4.6   5.4   17.3
  12.5   12   4.5   6.4   39.6
对于在12.5mg/kg剂量组中的动物，在EOI和在EOI后24小时观察到PTH的显著减少。在EOI，血浆PTH水平减少至基线治疗前水平的约15％，在EOI后24小时具有约50％基线治疗前水平的持续不变的减少。PTH水平(pg/mL)显示在表5中。
表5给药前和在输注结束时的PTH(pg/mL)
  剂量(mg/kg)   输注持续时间(小时)   0小时   12小时(EOI)
  12.5   12   68.7   10.2
PTH、血清钙、和血清磷酸盐水平之间的关系显示在图1中。钙水平的减少与血清磷酸盐的增加和PTH的减少相一致。
实施例5
在Sprague Dawley大鼠中的KAI-1455的单剂量钙输注研究
本研究设计来在大鼠中研究在以45mg/kg单剂量KAI-1455(SEQ IDNO：7)的约24-小时的静脉内输注期间内血清钙变化的时间过程，并且研究补充钙以改善与KAI-1455输注的毒性相关的临床症状的可能性。
本研究在获自查尔斯河实验室(Charles River Laboratories)，Hollister，CA.的Sprague Dawley大鼠(品系Crl：CD(SD)IGS BR)中进行。在本研究中包括总共20只大鼠(n＝5/性别/组)。在治疗开始时的平均年龄范围是5-8周(收到时)。在治疗开始时的平均体重是160-380克。
施用检测和对照/赋形剂制品：
动物由供应商在颈静脉插入导管。将动物分组并且按照表6治疗。
表6组分配
总静脉内输注时间为～24小时。
*在第二次～12小时的输注过程中，组2接受终浓度为0.8mg/mL元素钙的包含钙的输注物(infusate)(与KAI-1455给药溶液混合)。
**在第一次12-小时的输注期间测试制品在输注物中的终浓度为～2.25mg/mL，并且对于第二次12-小时输注所述终浓度为～0.75mg/mL。
***对于第一次12-小时的输注，输注速率为～0.83mL/kg/小时(～10mL/kg总体积)，并且对于第二次12-小时的输注期间，输注速率为～2.5mL/kg/小时(～30mL/kg总体积)。
基于最近的体重计算用于个体动物的绝对剂量体积。
制备3种检测制品给药溶液用于本研究。对于在第一次12小时输注过程中的施用，通过用SFI稀释10mg/mL的储液以获得2.25mg/mL的最终KAI-1455浓度，而对两组制备单一溶液。第一套给药注射器充满该溶液用于输注。
对于组1，在第二次12小时输注的过程中，通过用SFI稀释10mg/mL储液以获得0.75mg/mL的最终KAI-1455浓度制备用于施用的给药溶液。用于组1的第二套给药注射器充满该溶液用于输注。
对于组2，在第二次12小时输注过程中施用的给药溶液包含浓度为0.75mg/mL的KAI-1455，以及终浓度为0.8mg/mL元素钙的葡萄糖酸钙。该溶液通过首先将10mg/mL储液稀释在加大体积的需要的SFI中，并且然后加入适量的葡萄糖酸钙，然后加入更多的SFI，以达到需要的体积而制备。用于组2的第二套给药注射器充满该溶液用于输注。
可商购获得的10％葡萄糖酸钙注射液用于钙补充。该溶液包含9mg元素钙/mL。在第二次12-小时输注过程中对组2施用的给药溶液中的元素钙的需要的终浓度为～0.8mg/mL。
血液收集和采样方法：
通过静脉穿刺从限制的清醒的动物的外周静脉收集血液。在每个时间点(除了终止时间点之外)，从过夜禁食的动物收集约1.1mL血液。对于所有的动物，在输注前、研究开始后12小时(在开始补充钙之前)、在输注结束时、和在尸检时，测量离子化的钙、PTH、和总血清钙。
结果：
在12小时的时间点，在开始钙输注之前，对于所有动物的平均总钙从10.5mg/dL下降到8.0mg/dL。在第二个12小时的输注过程中，在接受单独的KAI-1455的大鼠中，平均总钙进一步下降到6.8mg/dL，并且在接受KAI-1455和钙的大鼠中下降到7.6mg/dL(图8)。接受KAI-1455和钙补充的8只大鼠没有一只死亡(2只大鼠在开始钙输注之前死亡；一只与12小时的血液汲取有关，并且另一只在输注开始后5小时死亡)，而仅接受KAI-1455的10只大鼠中有3(30％)死亡。在24-小时的KAI-1455输注的后一半过程中通过静脉内输注补充钙(2mg/kg/小时)部分减弱了与KAI-1455有关的血清钙减少，其足以防止与高剂量KAI-1455输注相关的死亡率。到48小时(EOI后24小时)时，观察到的钙下降恢复。
实施例6
在毕尔格猎犬中KAI-1455的单剂量钙输注研究
在犬中研究低钙血症的剂量-响应和时间过程，以及通过提供钙补充防止低钙血症和改善毒性临床症状的可能性。
对3只犬连续(在剂量之间有适当的平衡(washout)期间)施用12.5，1.0和5mg/kg(在12小时内输注)的剂量，以彻底表征低钙血症的剂量-响应和其它终点，并且以研究血清钙的变化、临床症状、PTH、QT延长、和对动物的其它作用之间的关系。
在该阶段研究之后，同一只犬用来研究钙补充防止或改善毒性的潜力。在该后期阶段中，所有的三只犬均在12小时内接受25mg/kg的KAI-1455(即，先前与明显的垂死性相关的剂量)，但是它们在输注开始时补充葡萄糖酸钙，以2mg元素钙/kg/小时的速率(即，在上述大鼠钙补充研究中使用的相同速率)与KAI-1455同时输注。在输注过程中每3小时且在输注后定时地监测血清钙。
结果：
在同时接受钙补充的KAI-1455输注过程中，在12-小时输注结束时，钙的微小增加倾向于正常，这之后钙水平开始下降(图2)。在EOI后～3小时，动物开始表现出低钙血症的症状。重新开始钙输注，并且持续～3小时，此时动物的症状迅速消退。在KAI-1455输注后24小时时测量的钙浓度又倒退至正常以下水平，这表明在额外的钙补充后KAI-1455的作用仍在进行中(虽然较不明显得多)。在12小时的输注过程中，血清磷酸盐水平增加，并且在EOI后6小时保持高于基线(图3)。
实施例7
SEQ ID NOs表
表7肽序列和相应的SEQ ID NOs
Figure G2007800500068D00391
Figure G2007800500068D00401
实施例8
在人志愿者中的KAI-1455单升高剂量研究
研究设计：
在健康的人志愿者中进行KAI-1455(SEQ ID NO：7)的双盲、随机的、安慰剂控制的单升高剂量研究。最初的研究设计要求向7组同龄组通过静脉内输注历经12小时施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)，初始剂量为1mg/kg。剂量升高依赖于在前剂量的安全性。每个同龄组随机分配4名年轻的男性受试者(n＝4)。同龄组是随机性的，以便3名受试者接受活性药物，和一名受试者接受安慰剂。
在剂量同龄组之间的1周随访期间内监测受试者。对每名受试者确定研究终点，包括临床和实验安全性，药物代谢动力学，血清离子化的钙(iCa)，总钙，磷酸盐，和血浆PTH。
结果：
KAI-1455一般在1-162mg/kg的剂量范围内，历时12小时是安全的并且被很好地耐受。KAI-1455与血清钙和血浆PTH的剂量依赖性减少相关。血清钙和血浆PTH的减少在输注结束(EOI)时达到最低点，但是在以最高剂量输注结束后多至36小时保持被抑制。≤0.1mg/kg/小时的给药速率与用12-小时输注血清钙的＜10％的平均最大减少相关。
血浆药物代谢动力学：
通过静脉内输注在12小时内对健康男性志愿者施用18，54，81和162mg/kg KAI-1455(SEQ ID NO：7)的剂量。在12小时输注过程中在1，3，6，9，和12小时的时间点确定KAI-1455的血浆浓度(ng/mL)，并且测量在输注结束(EOI)后多至1小时。以最高剂量，从9-12小时时间点获得约100ng/mL的持续不变的血浆浓度，其在EOI后约30分钟逐渐恢复到基线(图4)。
治疗组的离子化的钙：
在输注开始时，和在输注开始后3，6，9，12，15，18，21，24和48小时确定血清离子化的钙(mmol/L)。观察到离子化的钙的剂量依赖性减少，在约15和18小时的时间点(即，EOI后3-6小时)观察到最大的钙减少。以最高剂量，最大的钙减少在EOI后保持12小时。在EOI后12小时观察到钙水平的部分恢复，在54，81，和162mg/kg剂量组，在EOI后12和36小时，与基线相比，受试者仍然表现出离子化钙的显著减少(图5)。
治疗组的总钙：
在输注开始时，和在输注开始后3，6，9，12，15，18，21，24和48小时，确定总钙水平(mg/dL)。也观察到总钙的剂量依赖性减少，在约15和18小时的时间点(即，EOI后3-6小时)观察到最大的钙减少。以最高剂量，最大的钙减少在EOI后保持12小时。在EOI后12小时观察到钙水平的部分恢复，在54，81，和162mg/kg剂量组，在EOI后12和36小时，与基线相比，受试者仍然表现出总钙的显著减少(图6)。
治疗组的钙变化百分数：
对于每个治疗组，确定钙变化百分数。在约15和18小时的时间点(即，EOI后3-6小时)观察到最大的变化百分数。在162mg/kg剂量组，观察到大于15％的钙的最大减少百分数(图7)。
治疗组的血浆PTH：
在输注开始时，和在输注开始后3，6，12，15，18，24和48小时，确定治疗组的血浆PTH水平(pg/mL)。在EOI观察到血浆PTH的最大减少。对于162mg/kg剂量组中的受试者，在EOI和在EOI后12小时观察到PTH的显著减少，在EOI后36小时仍可观察到低于治疗前基线水平的持续不变的减少(图8)。
治疗组的血浆PTH变化百分数：
对于每个治疗组确定血浆PTH水平的变化百分数。在EOI观察到最大变化百分数。对于81和162mg/kg剂量组中的受试者，观察到大于40％的血浆PTH水平的最大变化百分数，在EOI后12小时，水平仍显著低于基线，在EOI后36小时PTH水平恢复至基线(图9)。
实施例9
在人志愿者中KAI-1455的4小时输注研究
研究设计：
通过持续4小时的静脉内输注对另外两个同龄组以54或108mg/kg的剂量施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)。在对12-小时输注确定最大耐受剂量后招募同龄组。每个同龄组随机分配4名年轻的男性受试者(n＝4)。同龄组是随机的，以便3名受试者接受活性药物，和一名受试者接受安慰剂。
在输注结束(EOI)后监测受试者持续36小时。对每个治疗组，确定研究终点，包括离子化的钙(iCa)，和血浆PTH。≤0.2mg/kg/小时的给药速率与用4-小时输注血清钙的＜10％的平均最大减少相关。
治疗组的离子化的钙：
在输注开始时，和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时，确定血清离子化的钙(mmol/L)。观察到离子化钙的剂量依赖性减少，对于54mg/kg剂量组，在EOI后约4小时观察到最大离子化钙的减少，并且对于108mg/kg剂量组，在EOI后12小时观察到最大离子化钙的减少(图10)。
治疗组的总钙：
同样，在输注开始时，和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时，确定总钙(mg/dL)的减少。观察到离子化钙的剂量依赖性减少，对于54mg/kg剂量组，在EOI后约8小时观察到最大总钙的减少，并且对于108mg/kg剂量组，在EOI后12小时观察到最大总钙的减少，对于108mg/kg剂量组，在EOI后32小时观察到总钙的显著减少(图11)。
治疗组的血浆PTH：
在输注开始时，和在输注开始后2，3，4，6，8，12，16和36小时，确定治疗组的血浆PTH水平(pg/mL)。在EOI观察到血浆PTH的最大减少。对于108mg/kg剂量组的受试者，在EOI和在EOI后8小时观察到血浆PTH的显著减少(图12)。
实施例10
在麻醉的大鼠中KP-1524的4小时输注研究
研究设计：
本研究设计用来确定货物肽对钙调节肽减少总钙和/或血浆PTH水平的能力的影响。
材料和方法：
对用异氟烷麻醉的大鼠(n＝4)通过3小时的静脉内输注以9mg/kg的剂量率施用KP-1524(SEQ ID NO：9)。给对照动物(n＝4)输注盐水。在输注前、和在1，2，3和4小时的时间点采集血液样品。确定总钙(mg/dL)和PTH(pg/mL)。
结果：
治疗的动物表现出总钙和PTH水平的显著减少。在EOI后1小时观察到最大的总钙(mg/dL)减少(图13(A))。到2小时的时间点观察到血浆PTH(pg/mL)的最大减少，并且血浆PTH的显著减少持续到EOI后1小时(图13(B))。在盐水处理的动物中观察到的血浆PTH水平升高可能是由多尿导致的。
实施例11
在麻醉的大鼠中KAI-1455和KP-1524的3小时输注研究
材料和方法：
对用异氟烷麻醉的大鼠(n＝3)通过3小时的静脉内输注以9mg/kg的剂量率施用KAI-1455(SEQ ID NO：7)和KP-1524(SEQ ID NO：9)。对照动物(n＝2)输注盐水。在输注前、和在1，2，3，6和24小时的时间点采集血液样品。确定总钙(mg/dL)和PTH(pg/mL)。
结果：
治疗的动物表现出总钙和PTH水平的显著减少，在EOI附近观察到最大的减少。对KAI-1455和KP-1524二者，总钙的减少持续到EOI后多至4小时，并且对于这两种肽，总钙和PTH的减少是相当的(数据未显示)。
实施例12
在麻醉的大鼠中KAI-9706的3小时输注研究
研究设计：
本研究设计用来确定加帽基团对阳离子肽减少钙和血浆PTH的作用。
材料和方法：
对用异氟烷麻醉的大鼠(n＝4)通过3小时的静脉内输注以9mg/kg的剂量率施用KP-9706(SEQ ID NO：6)。对照动物(n＝4)输注盐水。在输注前、和在1，2，3，4和24小时的时间点采集血液样品。确定总钙(mg/dL)和PTH(pg/mL)。
结果：
KP-9706没有表现出总钙(图14)或血浆PTH水平的减少(数据未显示)。
实施例13
在大鼠EDTA血浆中的体外血浆稳定性
材料和方法：
对于KAI-1455(SEQ ID NO：7)，KP-9706(SEQ ID NO：6)和KP-9803(SEQ ID NO：8)，在大鼠EDTA血浆中确定体外血浆稳定性。
结果：
加帽的钙调节肽，即KAI-1455(SEQ ID NO：7)，在血浆中比未加帽的肽，即KP-9706(SEQ ID NO：6)和KP-9803(SEQ ID NO：8)的任一种，基本上更稳定。在大鼠EDTA血浆中，KAI-1455表现出ca.50分钟的半衰期(t1/2)。KP-9706(SEQ ID NO：6)和KP-9803(SEQ ID NO：8)分别表现出ca.5和10分钟的半衰期(图15)。在人和犬血浆中观察到相似的结果(数据未显示)。
实施例14
在麻醉的大鼠中KAI-1586和KAI-1633的3小时输注研究
研究设计：
本研究设计用来确定二硫键和/或半胱氨酸残基对钙调节肽减少总钙和血浆PTH的作用。
材料和方法：
对用异氟烷麻醉的大鼠(n＝3)通过3小时的静脉内输注以9mg/kg的剂量率施用KAI-1633(SEQ ID NO：11)。对照动物(n＝4)输注盐水。在输注前、和在1，2，3，4和24小时的时间点采集血液样品，用于确定总钙(mg/dL)和PTH(pg/mL)。
结果：
KAI-1633没有表现出总钙或血浆PTH水平的减少(数据未显示)。对于9mg/kg的KAI-1633的稳定状态的血浆浓度通过ELISA确定为约3500ng/mL。通过比较，对于9mg/kg KAI-1455的稳定状态的血浆浓度通过ELISA确定为约2200ng/mL。稳定状态药物代谢动力学数据表明，KAI-1455和KAI-1633表现出相似的系统暴露。观察到的在减少总钙和血浆PTH的功效中的差异不能完全归因于这两种化合物之间的药物代谢动力学差异。
实施例15
代表性的实施方案
包括下述代表性实施方案，以举例说明而不是限制本发明。
1.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平，其中所述钙调节肽包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的聚阳离子肽；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的货物肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
2.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平，其中所述钙调节肽包含：
a)第一聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基；其中所述第一聚阳离子肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；其中所述第二聚阳离子肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节肽包含6-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
3.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平，其中所述钙调节肽包含：
聚阳离子肽，其包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
其中所述第一含有巯基的残基包含可以作为游离巯基或处于保护形式的巯基基团。
4.实施方案1、2或3中任一项的应用，其中当向受试者施用治疗有效量的钙调节肽时，血清PTH减少。
5.实施方案4的应用，其中所述治疗有效量的钙调节肽足以在施用所述钙调节肽后持续至少10小时将血清PTH减少至少20％。
6.实施方案4的应用，其中所述治疗有效量的钙调节肽足以在施用所述钙调节肽后持续至少48小时将血清PTH减少30％-70％。
7.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低血清钙水平，其中所述钙调节肽包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的聚阳离子肽；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的货物肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
8.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低血清钙水平，其中所述钙调节肽包含：
a)第一聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基；其中所述第一聚阳离子肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；其中所述第二聚阳离子肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节肽包含6-16个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
9.钙调节肽在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低血清钙水平，其中所述钙调节肽包含：
聚阳离子肽，其包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
其中所述第一含有巯基的残基包含可以作为游离巯基或处于保护形式的巯基基团。
10.实施方案7，8或9中任一项的应用，其中当向受试者施用治疗有效量的钙调节肽时，血清钙减少。
11.实施方案10的应用，其中所述治疗有效量的钙调节肽足以在施用所述钙调节肽后持续至少10小时将血清钙减少至少5％。
12.实施方案10的应用，其中所述治疗有效量的钙调节肽足以在施用所述钙调节肽后持续至少48小时将血清钙减少5％-20％。
13.实施方案1-12中任一项的应用，其中所述受试者患有原发性甲状旁腺功能亢进、继发性甲状旁腺功能亢进、三发性甲状旁腺功能亢进、恶性高钙血症、转移性骨病、佩吉特病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨软化、软骨钙质沉着病、软骨发育不全、骨软骨炎、囊性成骨不全、先天性低磷酸酯酶症、纤维瘤性损伤、纤维性结构不良、多发性骨髓瘤、溶骨性骨病、假体周围骨质溶解、牙周病、骨质疏松症、异常骨转换、或高转换性骨病。
14.实施方案1-13中任一项的应用，其中所述受试者患有继发性甲状旁腺功能亢进。
15.钙调节肽，其包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的聚阳离子肽；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的货物肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
16.钙调节肽，其包含：
a)第一聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基；其中所述第一聚阳离子肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二聚阳离子肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；其中所述第二聚阳离子肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节肽包含6-16个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
17.钙调节肽，其包含：
聚阳离子肽，其包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基；
其中所述聚阳离子肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
其中所述第一含有巯基的残基包含可以作为游离巯基或处于保护形式的巯基基团。
18.实施方案17的钙调节肽，其还包含第二含有巯基的残基，所述第二含有巯基的残基与第一含有巯基的残基以二硫键键合。
19.实施方案15-18中任一项的钙调节肽，其中所述带正电荷的氨基酸独立地选自由下列各项组成的组：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、2，3-二氨基丙酸(Dap)、2，4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸、和高精氨酸。
20.实施方案15-19中任一项的钙调节肽，其中所述第一含有巯基的残基位于所述聚阳离子肽的氨基端或羧基端。
21.实施方案15-19中任一项的钙调节肽，其中所述第一含有巯基的残基位于所述聚阳离子肽除氨基端或羧基端之外的位置。
22.实施方案15，16或18中任一项的钙调节肽，其中所述第二含有巯基的残基位于所述货物肽的氨基端或羧基端。
23.实施方案15，16或18中任一项的钙调节肽，其中所述第二含有巯基的残基位于所述货物肽除氨基端或羧基端之外的位置。
24.实施方案15-23中任一项的钙调节肽，其中所述聚阳离子肽的氨基端被化学修饰为乙酰胺。
25.实施方案15-24中任一项的钙调节肽，其中所述聚阳离子肽的羧基端被化学修饰为伯羧酰胺。
26.实施方案15-25中任一项的钙调节肽，其中所述聚阳离子肽的氨基端被化学修饰为乙酰胺，并且所述聚阳离子肽的羧基端被化学修饰为伯羧酰胺。
27.实施方案15-26中任一项的钙调节肽，其中所述第一含有巯基的残基和第二含有巯基的残基，如果存在，独立地选自由半胱氨酸、高半胱氨酸、和巯基丙酸组成的组。
28.前述实施方案中任一项的钙调节肽，其缀合到聚乙二醇(PEG)上。
29.钙调节肽，其具有SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：17，或SEQ ID NO：18的氨基酸序列。
30.一种药物组合物，其包含前述实施方案中任一项的钙调节肽，和至少一种药用赋形剂。

Claims (28)

1.钙调节组合物在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平，其中所述钙调节组合物包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的第一肽，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；
其中所述第一肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的第二肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
2.钙调节组合物在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低甲状旁腺激素(PTH)水平，其中所述钙调节组合物包含：
a)第一肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一包含巯基的残基，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；其中所述第一肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二包含巯基的残基；
其中所述第二肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节组合物包含6-30个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
3.权利要求1或2的应用，其中当向受试者施用治疗有效量的所述钙调节组合物时，血清PTH减少。
4.权利要求3的应用，其中所述治疗有效量的钙调节组合物足以在施用所述钙调节组合物后持续至少10小时将血清PTH减少至少20%。
5.权利要求4的应用，其中所述治疗有效量的钙调节组合物足以在施用所述钙调节组合物后持续至少48小时将血清PTH减少30%-70%。
6.钙调节组合物在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低血清钙水平，其中所述钙调节组合物包含：
a)包含5-20个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的第一肽，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；
其中所述第一肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的第二肽；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
7.钙调节组合物在制备药物中的应用，所述药物用于在需要其的受试者中降低血清钙水平，其中所述钙调节组合物包含：
a)包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基的第一肽，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；其中所述第一肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)第二肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二包含巯基的残基；其中所述第二肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节组合物包含6-16个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
8.权利要求6或7的应用，其中当向受试者施用治疗有效量的钙调节组合物时，血清钙减少。
9.权利要求8的应用，其中所述治疗有效量的钙调节组合物足以在施用所述钙调节组合物后持续至少10小时将血清钙减少至少5%。
10.权利要求8的应用，其中所述治疗有效量的钙调节组合物足以在施用所述钙调节组合物后持续至少48小时将血清钙减少5%-20%。
11.权利要求1、2、6和7中任一项的应用，其中所述受试者患有原发性甲状旁腺功能亢进、继发性甲状旁腺功能亢进、三发性甲状旁腺功能亢进、恶性高钙血症、转移性骨病、佩吉特病、骨关节炎、类风湿性关节炎、骨软化、软骨钙质沉着病、软骨发育不全、骨软骨炎、囊性成骨不全、先天性低磷酸酯酶症、纤维瘤性损伤、纤维性结构不良、多发性骨髓瘤、溶骨性骨病、假体周围(periprosthetic)骨质溶解、牙周病、骨质疏松症、异常骨转换、或高转换性骨病。
12.权利要求1、2、6和7中任一项的应用，其中所述受试者患有继发性甲状旁腺功能亢进。
13.钙调节组合物，其包含：
a)包含3-10个在生理pH下带正电荷的氨基酸、氨基端、羧基端、和第一含有巯基的残基的第一肽，所述第一肽的长度为5-25个氨基酸，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；并且
其中所述第一肽在氨基端、羧基端或两端进行化学修饰；和
b)包含第二含有巯基的残基的第二肽，所述第二肽的长度为5-25个氨基酸；
其中所述第二含有巯基的残基与所述第一含有巯基的残基以二硫键键合。
14.钙调节组合物，其包含：
a)包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第一氨基端、第一羧基端、和第一含有巯基的残基的第一肽，所述第一肽的长度为5-25个氨基酸，所述第一肽包含TAT-衍生的肽；其中所述第一肽在第一氨基端、第一羧基端或两端进行化学修饰；和
b)长度为5-25个氨基酸的第二肽，其包含至少3个在生理pH下带正电荷的氨基酸、第二氨基端、第二羧基端、和第二含有巯基的残基；其中所述第二肽在第二氨基端、第二羧基端或两端进行化学修饰；
其中所述钙调节组合物包含6-16个在生理pH下带正电荷的氨基酸。
15.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述带正电荷的氨基酸独立地选自由下列各项组成的组：精氨酸、赖氨酸、组氨酸、2,3-二氨基丙酸(Dap)、2,4-二氨基丁酸(Dab)、鸟氨酸、和高精氨酸。
16.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一含有巯基的残基位于所述第一肽的氨基端或羧基端。
17.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一含有巯基的残基位于所述第一肽除氨基端或羧基端之外的位置。
18.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第二含有巯基的残基位于所述第二肽的氨基端或羧基端。
19.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第二含有巯基的残基位于所述第二肽除氨基端或羧基端之外的位置。
20.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一肽的氨基端被化学修饰为乙酰胺。
21.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一肽的羧基端被化学修饰为伯羧酰胺。
22.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一肽的氨基端被化学修饰为乙酰胺，并且所述第一肽的羧基端被化学修饰为伯羧酰胺。
23.权利要求13或14的钙调节组合物，其中所述第一含有巯基的残基和第二含有巯基的残基，如果存在，独立地选自由半胱氨酸、高半胱氨酸、和巯基丙酸组成的组。
24.权利要求13或14的钙调节组合物，其缀合到聚乙二醇(PEG)上。
25.钙调节组合物，其具有SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:9，SEQ IDNO:10，SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:13的氨基酸序列。
26.一种药物组合物，其包含前述权利要求中任一项的钙调节组合物，和至少一种药用赋形剂。
27.权利要求1、2、6和7中任一项的应用，其中所述第一肽包含SEQID NO:3。
28.权利要求13和14中任一项的组合物，其中所述第一肽包含SEQID NO:3。
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Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2348114B1 (en) 2004-04-21 2018-07-25 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Bone delivery conjugates and method of using same to target proteins to bone
CN101668421B (zh) 2006-11-16 2014-05-21 凯制药公司 用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽
KR20090115852A (ko) * 2007-01-19 2009-11-09 카이 파마슈티컬즈 안정성 및 전달 효율을 증가시키기 위한 펩타이드 조성물의 변형
RU2557654C3 (ru) 2009-07-29 2017-07-05 Каи Фармасьютикалз, Инк. Терапевтические агенты для снижения уровней паратиреоидного гормона
WO2012013326A1 (en) * 2010-07-30 2012-02-02 Curevac Gmbh Complexation of nucleic acids with disulfide-crosslinked cationic components for transfection and immunostimulation
WO2012050673A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 Wisconsin Alumni Research Foundation Methods for the treatment of x-linked hypophosphatemia and related disorders
PL2717896T3 (pl) 2011-06-08 2017-05-31 Kai Pharmaceuticals, Inc. Środki lecznicze do regulowania poziomu fosforu w surowicy krwi
MX355063B (es) 2011-11-10 2018-04-04 Kai Pharmaceuticals Inc Calcimiméticos y métodos para su uso.
ES2816009T3 (es) * 2011-12-14 2021-03-31 Univ Arkansas Administración de agentes terapéuticos mediante una proteína de unión a colágeno
ES2633989T3 (es) 2013-06-28 2017-09-26 Amgen Inc. Formulación líquida estable de amg 416 (velcalcetida)
US10822596B2 (en) 2014-07-11 2020-11-03 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating craniosynostosis
MX2017007392A (es) 2014-12-05 2019-01-24 Alexion Pharma Inc Tratamiento de convulsiones con fosfatasa alcalina recombinante.
CA2973883A1 (en) 2015-01-28 2016-08-04 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating a subject with an alkaline phosphatase deficiency
US11352612B2 (en) 2015-08-17 2022-06-07 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Manufacturing of alkaline phosphatases
EP3355904A4 (en) 2015-09-28 2019-06-12 Alexion Pharmaceuticals, Inc. IDENTIFICATION OF EFFECTIVE DOSE SHEETS FOR TISSUE-SPECIFIC ALKALINE PHOSPHATASE ENZYMERSAT THERAPY OF HYPOPHOSPHATASIA
US11400140B2 (en) 2015-10-30 2022-08-02 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating craniosynostosis in a patient
WO2017155569A1 (en) 2016-03-08 2017-09-14 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypophosphatasia in children
US10898549B2 (en) 2016-04-01 2021-01-26 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypophosphatasia in adolescents and adults
WO2017173413A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Treating muscle weakness with alkaline phosphatases
US10988744B2 (en) 2016-06-06 2021-04-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Method of producing alkaline phosphatase
EP3500289B1 (en) 2016-08-18 2024-10-09 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Asfotase alfa for use in treating tracheobronchomalacia
WO2018148573A1 (en) 2017-02-10 2018-08-16 The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas Collagen-binding agent compositions and methods of using the same
EP3600383A4 (en) 2017-03-31 2020-10-28 Alexion Pharmaceuticals, Inc. METHODS FOR TREATMENT OF HYPOPHOSPHATASIA (HPP) IN ADULTS AND ADOLESCENTS
CN107899019B (zh) * 2017-11-23 2020-04-21 湘潭大学 一种键合细胞穿透肽的智能型高分子键合药及其制备方法
JP2021519590A (ja) 2018-03-30 2021-08-12 アレクシオン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 糖タンパク質の製造
CN112349362A (zh) * 2019-08-08 2021-02-09 深圳先进技术研究院 一种甲状旁腺激素分泌监测与调控系统
AU2022218782A1 (en) 2021-02-12 2023-08-17 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Alkaline phosphatase polypeptides and methods of use thereof
TW202247854A (zh) * 2021-06-08 2022-12-16 大陸商北京拓界生物醫藥科技有限公司 一種鈣敏感受體激動劑的組成物及其應用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000336099A (ja) * 1999-05-27 2000-12-05 Sekisui Chem Co Ltd ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬
US20030036627A1 (en) * 2001-02-16 2003-02-20 Montelaro Ronald C. Virus derived antimicrobial peptides

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5869473A (en) 1988-08-02 1999-02-09 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing hyperparathyroidism
US5602116A (en) 1988-08-02 1997-02-11 Bone Care International, Inc. Method for treating and preventing secondary hyperparathyroidism
CA1333616C (en) 1989-03-09 1994-12-20 Hector F. Deluca 19-nor-vitamin d compounds
US5246925A (en) 1989-03-09 1993-09-21 Wisconsin Alumni Research Foundation 19-nor-vitamin D compounds for use in treating hyperparathyroidism
US5304121A (en) 1990-12-28 1994-04-19 Boston Scientific Corporation Drug delivery system making use of a hydrogel polymer coating
AU9131091A (en) 1990-11-07 1992-06-11 Scripps Research Institute, The Peptides that inhibit platelet binding of adhesion molecules
US6031003A (en) 1991-08-23 2000-02-29 Nps Pharmaceuticals, Inc. Calcium receptor-active molecules
US5994341A (en) 1993-07-19 1999-11-30 Angiogenesis Technologies, Inc. Anti-angiogenic Compositions and methods for the treatment of arthritis
AU7634694A (en) 1993-08-20 1995-03-21 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Bridged polycationic polymer-oligonucleotide conjugates and methods for preparing same
US5783405A (en) 1994-02-01 1998-07-21 Terrapin Technologies, Inc. Rapid screening method for effectors of signal transduction
CA2145214A1 (en) 1995-02-28 1996-08-29 Rick E. Preddie Agents for pre-symptomatic diagnosis, prevention and cure huntington's disease (hd) in humans
US6099562A (en) 1996-06-13 2000-08-08 Schneider (Usa) Inc. Drug coating with topcoat
US5688489A (en) 1995-09-15 1997-11-18 Resolution Pharmaceuticals, Inc. Non-receptor mediated imaging agents
US5895368A (en) 1996-09-23 1999-04-20 Medisystems Technology Corporation Blood set priming method and apparatus
WO1998017299A1 (en) 1996-10-18 1998-04-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Isozyme-specific activators of protein kinase c, methods and compositions
US6258774B1 (en) 1998-03-19 2001-07-10 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Carrier for in vivo delivery of a therapeutic agent
US6274169B1 (en) 1999-08-02 2001-08-14 Abbott Laboratories Low oxygen content compostions of 1α, 25-dihydroxycholecalciferol
US6051567A (en) 1999-08-02 2000-04-18 Abbott Laboratories Low oxygen content compositions of 1α, 25-dihydroxycholecalciferol
IL153378A0 (en) 2000-07-18 2003-07-06 Bone Care Internat Inc STABILIZED 1alpha-HYDROXY VITAMIN D
US20080249016A1 (en) 2000-09-18 2008-10-09 Sanos Bioscience A/S Use of GLP-2 in a combination treatment for bone-related disorders
US20020168354A1 (en) * 2000-11-10 2002-11-14 Daria Mochly-Rosen psiepsilonRack peptide composition and method for protection against tissue damage due to ischemia
WO2002057413A2 (en) * 2001-01-18 2002-07-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Peptides for activation and inhibition of delta pkc
AU2002240312A1 (en) 2001-02-08 2002-08-19 Pankaj Paranjp Enhanced oral and transcompartmental delivery of therapeutic or diagnostic agents using polymer conjugates
AU2002247724B2 (en) 2001-02-23 2008-02-07 Polyphor Ltd. Template-fixed peptidomimetics with antimicrobial activity
JP2005287302A (ja) 2002-04-03 2005-10-20 Haruhiko Fujiwara ポリペプチドの架橋方法
US20040018976A1 (en) 2002-05-14 2004-01-29 Feder John N. Polynucleotide encoding novel human G-protein coupled receptors, and splice variants thereof
WO2004093821A2 (en) 2003-04-22 2004-11-04 Hawaii Biotech, Inc. Treatment of anthrax infection using inhibitors of lethal factor protease activity
EP1680446B1 (en) 2003-11-05 2007-10-31 Pevion Biotech Ltd. Compositions comprising melittin-derived peptides and methods for the potentiation of immune responses against target antigens
US20050187156A1 (en) * 2003-12-11 2005-08-25 Daria Mochly-Rosen Isozyme-specific antagonists of protein kinase C
US7939634B2 (en) 2004-01-27 2011-05-10 Compugen Ltd. Polynucleotides encoding polypeptides and methods using same
US7265092B2 (en) * 2004-09-30 2007-09-04 Kai Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation
AU2006285127A1 (en) 2005-08-30 2007-03-08 Acologix, Inc. Regulation of mineral and skeletal metabolism
AU2006292228B2 (en) * 2005-09-19 2013-02-21 Kai Pharmaceuticals, Inc. Protein kinase C peptide modulators of angiogenesis
WO2007038172A2 (en) 2005-09-23 2007-04-05 Nitto Denko Corporation Guanidinium carriers
CN101668421B (zh) 2006-11-16 2014-05-21 凯制药公司 用于治疗甲状旁腺功能亢进和高钙血症的聚阳离子钙调节肽
KR20090115852A (ko) 2007-01-19 2009-11-09 카이 파마슈티컬즈 안정성 및 전달 효율을 증가시키기 위한 펩타이드 조성물의 변형
AU2008308679B2 (en) 2007-10-02 2015-01-29 Marina Biotech, Inc. Lipopeptides for delivery of nucleic acids
WO2009075773A2 (en) 2007-12-07 2009-06-18 Goldstein Steven A Identification of toxin ligands
RU2557654C3 (ru) 2009-07-29 2017-07-05 Каи Фармасьютикалз, Инк. Терапевтические агенты для снижения уровней паратиреоидного гормона

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000336099A (ja) * 1999-05-27 2000-12-05 Sekisui Chem Co Ltd ペプチド及びｃ型肝炎抗体検出用試薬
US20030036627A1 (en) * 2001-02-16 2003-02-20 Montelaro Ronald C. Virus derived antimicrobial peptides

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