CN101612292A - 一种天然植物土茯苓提取物的应用方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，该应用方法是将天然植物土茯苓提取物应用于抑制组胺释放的药物、化妆品及保健食品中。本发明采用抑制肥大细胞释放组胺的试验模型，确认天然植物土茯苓提取物的抗过敏与止痒效果。

Description

一种天然植物土茯苓提取物的应用方法

技术领域

本发明涉及一种皮肤抗过敏、止痒有效活性成分，该活性成分为天然植物土茯苓提取物，尤其是涉及一种天然植物土茯苓提取物的应用方法。

背景技术

近年的流行病学调查显示，过敏性疾病具有逐年增加的趋势，特别是由环境原因引起的过敏反应及抗遗传性过敏性皮肤炎的增加趋势尤为显著，已成为不可忽视的社会现象。其问题的出现不仅由于过敏源的逐年增加、大气污染、食品和化妆品的添加物的滥用，而且也由于近年来人们饮食习惯的变化。过敏性疾病的治疗方法通常以消除过敏源为本，进而根据临床症状的程度、起因及发病机制进行选择性药物治疗。常见的过敏症一般为I型过敏反应，如过敏性鼻炎、支气管哮喘及荨麻疹等疾病，由肥大细胞脱颗粒释放组胺等化学递质介导，刺激血管扩张，增大血管通透性，促进支气管平滑肌收缩，提高末端神经感应等过度生物体应激反应。因此，对I型过敏性疾病的治疗，临床上主要使用抗组胺剂及对肥大细胞脱颗粒具有抑制活性的抗过敏药物。

皮肤瘙痒经常伴随过敏症状产生。介导瘙痒的受体位于真皮与表皮连接处的无髓C纤维游离神经末梢上，通过神经突触连接二级神经元，然后通过脊髓丘脑束到达丘脑的板层核，最后到达大脑皮质，产生瘙痒感觉。近年来的研究证实多种化学介质如组胺等能引起实验性瘙痒，这些介质通过与无髓C纤维游离神经末梢上的特异性受体结合而产生痒感神经冲动。参与瘙痒的递质多而复杂，但也一些共同的递质如组胺、白介素等。其中组胺源性瘙痒是目前研究最清楚的瘙痒传导途径。

抗组胺药是目前临床治疗瘙痒和过敏的首选药。但是，目前合成的抗组胺药在临床使用中多数出现瞌睡、口渴、胃肠消化系统受损等副作用，长期服用也存在一定的临床安全性问题。

临床应用的抗过敏制剂局限于暂时性的缓解，而不能从根本上改善过敏性体质。从身体健康及生活习惯角度出发，一种有效且安全的用于止痒和抗过敏的医药品、保健食品或化妆品为人们所期待。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可以作为食物调料剂，毒性较低，并能在较低的浓度下抑制组胺的释放，能很好的祛除皮肤瘙痒，达到抗敏作用天然植物土茯苓提取物的应用方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，该应用方法是将天然植物土茯苓提取物应用于抑制组胺释放的药物、化妆品或保健食品中，提供抗过敏、止痒效果。所述的土茯苓提取物添加浓度范围为0.001％～100％(W/W)。

所述的天然植物土茯苓提取物包括采用溶剂萃取、水蒸汽蒸馏法或二氧化碳超临界萃取得到的粗土茯苓提取物，以及萃取后采用精制方法得到的精制土茯苓提取物。

所述的溶剂萃取是将天然植物土茯苓粉碎后置于提取溶剂中，土茯苓与提取溶剂的质量比为2/1-1/40，在20-100℃下，浸泡0.1-336h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

所述的提取溶剂为水、有机溶剂或者有机溶剂水溶液。

所述的有机溶剂为1-5个碳的醇、乙酸乙酯、二丙二醇或者石油醚中的一种或几种。

所述的有机溶剂水溶液中有机溶剂为1-5个碳的醇或二丙二醇中的一种或几种。

所述的1-5个碳的醇包括乙醇、甲醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇。

所述的二氧化碳超临界萃取是将天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超临界萃取装置的提取釜中，采用食品级二氧化碳萃取压力在15-45MPa，萃取温度30-55℃，二氧化碳流量8-25kg/h进行超临界萃取，萃取时间0.5-4h，然后分离釜调整分离压力3-10MPa，分离温度为30-50℃，分离出流浸膏，得土茯苓提取物。

所述的水蒸汽蒸馏法是将天然植物土茯苓粉碎后置于铺纱布的箅子，把箅子放入连接冷凝器的不锈钢蒸锅中，通入压力为0.12MPa～0.15MPa水蒸汽，蒸馏时间为0.5-4h，然后收集冷凝器中水层上的液体，得土茯苓提取物。

所述的精制方法是将溶剂萃取或二氧化碳超临界萃取获得的土茯苓提取物经非极性树脂吸附后，采用洗脱剂洗脱，浓缩至浸膏，得到精制的土茯苓提取物。

所述的洗脱剂为水或体积浓度为30％～95％的有机溶剂水溶液，有机溶剂为乙醇或甲醇。

所述的洗脱剂优选水或体积浓度为25％～50％的有机溶剂水溶液，有机溶剂优选乙醇。

所述的非极性树脂包括HPD100，D101，HZ891。

本发明提供的天然植物土茯苓提取物，可以多种口服剂型投放市场，用于改善过敏。当然，土茯苓提取物也可以与常用的赋形剂等医药用载体结合并制剂化。必要时也可以添加一些防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂等制剂添加物。

可以根据市场需要及消费者的心理要求改换剂型，例如使用片剂、颗粒剂、胶囊剂等剂型。

比较适宜的赋形剂，一般考虑有乳糖、白糖、D-甘露醇、淀粉、结晶纤维素等。润滑剂一般应采用硬脂酸镁、硬脂酸钙、滑石粉等。溶剂通常使用精制水、乙醇、丙二醇等。防腐剂一般采用氯丁醇、苄醇、二羟基乙酸等。抗氧化剂通常以亚硫酸盐、抗坏血酸等比较适宜。

本发明提供的土茯苓提取物，也可以原型、水溶液稀释后作为皮肤外用剂使用。当然也可以通过与医药用载体结合制成一定的制剂，如气雾剂、液体制剂、提取物、混悬剂、乳剂、软膏剂、半流体制剂、擦剂、洗剂等剂型提供化妆品、医药品市场的消费。

本发明在传统医学的基础上，结合药理学和药效学等现代科学，建立一种评估天然植物提取物的抗组胺释放模型，并在此基础上对药物进行药理药效学测定。组胺是一种经典的致痒介质，主要储存于体内肥大细胞和碱性粒细胞中，任何刺激肥大细胞的因素，如变应性、物理性、精神性等因素均可使肥大细胞脱颗粒释放出组胺，导致瘙痒。因此具有稳定肥大细胞，减少组胺释放作用的物质可用于治疗由组胺所致的瘙痒症。

除特殊说明外，本发明涉及的试剂和原料均市售可得。

与现有技术相比，本发明的最大效果在于：本发明的土茯苓提取物除了传统的复方外，国内外文献都没有单味土茯苓提取物可以抑制组胺的释放而达到皮肤抗敏作用的报道，这是本发明最大的亮点。土茯苓提取物可以制成中药制剂，用来抑肥大细胞和碱性粒细胞中的组胺释放，从而起到皮肤抗过敏的效果。且其为天然植物提取物，副作用小。

具体实施方式

下面用实施例来进一步说明本发明，但本发明并不受其限制。

下述各实施例中的原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂的比例均为重量比。

实施例1

取土茯苓100g，提取液A为纯水，配置洗脱剂B：去离子水，C：30％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HZ891，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶12∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在30℃浸泡72h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HZ891吸附后，用B洗脱后洗脱剂弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例2

取土茯苓100g，提取液A为纯水，配置洗脱剂B：去离子水，C：30％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：D101，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶12∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在50℃提取5h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经D101吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例3

取土茯苓100g，提取液A为纯水，配置洗脱剂B：去离子水，C：30％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：H103，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶8∶2∶9∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在80℃提取三次，每次2h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经H103吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例4

取土茯苓100g，提取液A为纯水，配置洗脱剂B：去离子水，C：30％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HPD100，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶8∶2∶12∶8。

将土茯苓粉碎后以提取液A在70℃提取两次，每次3h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HPD100吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例5

取土茯苓100g，提取液A为乙醇，配置洗脱剂B：去离子水，C：50％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HZ891，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶12∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在30℃提取48h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HZ891吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例6

取土茯苓100g，提取液A为甲醇，配置洗脱剂B：去离子水，C：50％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：D101，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶2∶12∶8。

将土茯苓粉碎后以提取液A在50℃提取12h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经D101吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例7

取土茯苓100g，提取液A为乙酸乙酯，配置洗脱剂B：去离子水，C：50％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：H103，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶8∶3∶12∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在80℃提取三次，每次2h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经H103吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例8

取土茯苓100g，提取液A为石油醚，配置洗脱剂B：去离子水，C：50％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HPD100，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶12∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在70℃提取两次，每次3h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HPD100吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例9

取土茯苓100g，配置提取液A为30％乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：75％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HZ891，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶20∶3∶12∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在30℃提取24h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HZ891吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例10

取土茯苓100g，配置提取液A为50％乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：75％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：D101，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶9∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在50℃提取8h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经D101吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例11

取土茯苓100g，提取液A为75％乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：75％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：H103，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶9∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在80℃提取两次，每次2h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经H103吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例12

取土茯苓100g，提取液A为85％乙醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：75％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HPD100，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶9∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在70℃提取两次，每次3h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HPD100吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例13

取土茯苓100g，配置提取液A为30％甲醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：95％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HZ891，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶20∶3∶12∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在30℃提取72h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HZ891吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例14

取土茯苓100g，配置提取液A为50％甲醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：95％乙醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：D101，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶9∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在50℃提取8h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经D101吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例15

取土茯苓100g，提取液A为75％甲醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：95％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：H103，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶10∶3∶9∶12。

将土茯苓粉碎后以提取液A在70℃提取两次，每次3h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经H103吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

实施例16

取土茯苓100g，提取液A为85％甲醇水溶液(V/V)，配置洗脱剂B：去离子水，C：95％甲醇水溶液(V/V)，选择非极性树脂：HPD100，原药∶提取液∶树脂∶洗脱剂B∶洗脱剂C＝1∶8∶3∶9∶9。

将土茯苓粉碎后以提取液A在70℃提取两次，每次3h，浓缩到约为1mg/ml生药浓度的药液，经HPD100吸附后，用B洗脱后洗脱剂B弃去，收集洗脱剂C洗脱段。浓缩至浸膏，得土茯苓提取物。

效果实施例1土茯苓提取物抑制组胺释放实验

土茯苓提取物由实施例3制备，测定组胺释放方法如下：

1.肥大细胞分离纯化

采用Anna Nemeth等的方法略加改进，正常SD大鼠放血脱颈椎处死，腹腔注射预冷的PBS(含1％FCS)15ml，轻轻按摩腹部2min，吸取腹腔灌洗液并置入细胞培养皿中，于37℃，5％CO₂细胞培养箱静置30min，等待巨噬细胞附壁后轻轻吸取细胞悬液离心(4℃，1500r/min)10min，调节细胞悬液约0.5ml。7ml P-F10(Percoll-HamF10)在4℃，3000r/min离心20min形成梯度，将浓缩的细胞悬液轻轻铺入梯度之上4℃，2000r/min离心20min分离细胞，收集界面下1/3细胞，用PBS洗涤2次(1000r/min，离心10min)后重悬，锥虫蓝染色检测细胞活力，甲苯胺蓝染色检测细胞纯度，得纯度大于95％的肥大细胞。调节细胞密度约10⁶/ml，置于含10％FCS的DMEM培养基中待用。

2.药物处理

将肥大细胞调整为约含RPMCs 5×10⁴个/组，加入不同浓度的土茯苓提取液，置入37℃，5％CO2孵箱中孵育20分钟，取出后立即加入compound48/80(0.5ug/ml)，置入37℃，5％CO2孵箱中孵育10分钟，取出立即放入冰水浴中5min终止反应，模型对照组以PBS取代药物，正常对照组为未加入药物和compound48/80处理组。

3.样品准备

将各管以4℃，6000r/min离心10分钟，吸取上清液测定释放到胞外的组胺量A；沉淀用PBS重悬，100℃煮沸10min裂解细胞，测定残留在细胞内的组胺量A。

4.组胺的测定

上述各样品加入高氯酸(0.4mol/L)，离心(4℃，6000r/min)10分钟取上清。采用Shore等荧光测定改良法进行测定：取1.6ml上清夜置于已经加入1.5g NaCl的具塞试管中，再加入4.0ml正丁醇和0.2ml 2.5N NaOH，立即混匀，置康氏震荡器震荡5分钟，静置分层后取出3.6ml正丁醇相到已经加入1.2ml0.1N HCL和2.0ml正庚烷的10ml具塞试管中，震荡5分钟，弃有机相，取1.0ml HCL相到试管中，用三蒸水稀释一倍，加0.5ml 0.4N NaOH碱化，混匀并迅速加入0.1％OPT甲醇液0.1ml，立即混匀并在21-22℃反应10分钟，加0.5ml0.5N HCL酸化终止缩合反应，并使荧光物质稳定。

每个数据均为3个平行复管的平均数。根据测得的荧光强度，分别按下式计算各组细胞的组胺释放率(P释放)和组胺释放抑制率(P抑制)。

P释放＝(上清液组胺量A-自发分泌组胺量)/(上清液组胺量A+细胞内组胺量B)×100％；

P抑制＝(1-药物组组胺释放量/模型组组胺释放量)×100％。

其中自发分泌组胺量＝正常细胞上清液中的组胺量。

各组实验数据以均数±标准差(±S)表示，应用方差分析，将每个实验组与对照组进行比较，P＜0.05为差异有显著性意义，P＜0.01为差异有非常显著性意义。

由抗组胺释放模型测得实例3制备土茯苓提取物组胺释放量效关系如表1：

表1-实施例3土茯苓提取物组胺释放率

由表1可知，由实施例3制备的土茯苓提取物在浓度1.6025ug/ml-25ug/ml时具有抑制组胺释放的作用，在25ug/ml时，组胺释放率为7.55％。

效果实施例2土茯苓提取物抑制组胺释放实验

土茯苓提取物由实施例15制备，除了加入的药物换成了实施例15制备的，其余测定步骤同效果实施例1。

由抗组胺释放模型测得实例15制备土茯苓提取物抑制组胺释放量效关系如表2：

表2-实施例15土茯苓提取物组胺释放率

由表2可知，由实施例15制备的土茯苓提取物在浓度1.6025ug/ml-25ug/ml时具有抑制组胺释放的作用，在25ug/ml时，组胺释放率为6.84％。

实施例17

将天然植物土茯苓粉碎后置于水中，土茯苓与水的质量比为2/1，在100℃下，浸泡0.1h，过滤，将滤液浓缩得到生药浓度为1mg/ml的溶液，该溶液经非极性树脂HPD100吸附后，采用体积浓度为30％的乙醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，浓缩至浸膏，得到土茯苓提取物。

实施例18

将天然植物土茯苓粉碎后置于有机溶剂乙醇中，土茯苓与有机溶剂乙醇的质量比为1/40，在20℃下，浸泡72h，过滤，将滤液浓缩得到生药浓度为1mg/ml的溶液，该溶液经非极性树脂HZ891吸附后，采用体积浓度为50％的乙醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，浓缩至浸膏，得到土茯苓提取物。

实施例19

将天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的体积浓度为10％，土茯苓与乙醇水溶液的质量比为1/6，在30℃下，浸泡20h，过滤，将滤液浓缩得到生药浓度为1mg/ml的溶液，该溶液经非极性树脂HZ891吸附后，采用体积浓度为60％的甲醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，浓缩至浸膏，得到土茯苓提取物。

实施例20

将天然植物土茯苓粉碎后置于甲醇水溶液中，甲醇的体积浓度为95％，土茯苓与甲醇水溶液的质量比为1/8，在90℃下，浸泡60h，过滤，将滤液浓缩得到生药浓度为1mg/ml的溶液，该溶液经非极性树脂D101吸附后，采用体积浓度为95％的甲醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，浓缩至浸膏，得到土茯苓提取物。

实施例21

将天然植物土茯苓粉碎后置于甲醇水溶液中，甲醇的体积浓度为85％，土茯苓与甲醇水溶液的质量比为1/20，在90℃下，浸泡60h，过滤，得到土茯苓提取物。

实施例22

将天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的体积浓度为70％，土茯苓与乙醇水溶液的质量比为1/30，在50℃下，浸泡36h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例23

将天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超临界萃取装置的提取釜中，采用食品级二氧化碳萃取压力在15MPa，萃取温度30℃，二氧化碳流量25kg/h进行超临界萃取，萃取时间4h，然后分离釜调整分离压力3MPa，分离温度为50℃，分离出流浸膏，得土茯苓提取物。

实施例24

将天然植物土茯苓粉碎后置于二氧化碳超临界萃取装置的提取釜中，采用食品级二氧化碳萃取压力在45MPa，萃取温度55℃，二氧化碳流量8kg/h进行超临界萃取，萃取时间0.5h，然后分离釜调整分离压力10MPa，分离温度为30℃，分离出流浸膏，将流浸膏用体积浓度为75％的乙醇调整到生药浓度为1mg/ml的溶液，该溶液经非极性树脂HZ891吸附后，采用体积浓度为50％的乙醇水溶液为洗脱剂进行洗脱，浓缩至浸膏，得到土茯苓提取物。

实施例25

将天然植物土茯苓粉碎后置于铺纱布的箅子，把箅子放入连接冷凝器的不锈钢蒸锅中，通入压力为0.12MPa水蒸汽，蒸馏时间为4h，然后收集冷凝器中水层上的液体，得土茯苓提取物。

实施例26

所述的水蒸汽蒸馏法是将天然植物土茯苓粉碎后置于铺纱布的箅子，把箅子放入连接冷凝器的不锈钢蒸锅中，通入压力为0.15MPa水蒸汽，蒸馏时间为0.5h，然后收集冷凝器中水层上的液体，得土茯苓提取物。

实施例27

将天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的体积浓度为95％，土茯苓与乙醇水溶液的质量比为1/30，在70℃下，提取10h，过滤，浓缩，干燥，加入1％硫酸溶液沉淀，收集沉淀，干燥，得土茯苓提取物，其中含有花旗松素、光叶菝葜甙、甲基丁二酸、紫丁香酸。

实施例28

将天然植物土茯苓粉碎后置于乙醇水溶液中，乙醇的体积浓度为95％，土茯苓与乙醇水溶液的质量比为1/30，在20℃下，提取336h，过滤，浓缩至浸膏，拌入4倍量80-100目硅胶，依次用30-60℃石油醚、氯仿、甲醇提取，收集氯仿洗脱部分，浓缩，干燥，得土茯苓提取物。

实施例29

将天然植物土茯苓粉碎后置于甘油水溶液中，甘油的体积浓度为10％，土茯苓与甘油水溶液的质量比为1/40，在100℃下，提取1h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例30

将天然植物土茯苓粉碎后置于丙二醇水溶液中，丙二醇的体积浓度为1％，土茯苓与丙二醇水溶液的质量比为1/20，在95℃下，提取2h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例31

将天然植物土茯苓粉碎后置于1，3-丁二醇水溶液中，1，3-丁二醇的体积浓度为30％，土茯苓与1，3-丁二醇水溶液的质量比为1/10，在90℃下，提取3h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例32

将天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇水溶液中，二丙二醇的体积浓度为15％，土茯苓与二丙二醇水溶液的质量比为1/40，在85℃下，提取6h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例33

将天然植物土茯苓粉碎后置于1，3-丁二醇中，土茯苓与1，3-丁二醇的质量比为1/10，在90℃下，提取3h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例34

将天然植物土茯苓粉碎后置于丙二醇中，土茯苓与丙二醇的质量比为1/5，在90℃下，提取3h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例35

将天然植物土茯苓粉碎后置于甘油中，土茯苓与甘油的质量比为1/10，在90℃下，提取3h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例36

将天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇中，土茯苓与二丙二醇的质量比为1/10，在70℃下，提取10h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例37

将天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇体积比为1∶1∶1∶1的混合液中，土茯苓与混合液的质量比为1/10，在70℃下，提取10h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例38

将天然植物土茯苓粉碎后置于二丙二醇、丙二醇、甘油、1，3-丁二醇、水体积比为1∶1∶1∶1∶1的混合液中，土茯苓与混合液的质量比为1/10，在70℃下，提取10h，过滤，得土茯苓提取物。

实施例39

将100g天然植物土茯苓粉碎后置于水中，土茯苓与水的质量比为1/10，在70℃下，提取10h，过滤，浓缩为浸膏，把浸膏加入1000g体积浓度为70％的乙醇水溶液中，沉淀，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

实施例40

将100g天然植物土茯苓粉碎后置于体积浓度为70％的乙醇水溶液中，土茯苓与乙醇水溶液的质量比为1/10，在70℃下，提取10h，过滤，浓缩为浸膏，把浸膏加入1000g水中，沉淀，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

采用上述实施例方法得到的提取物应用于抑制组胺释放的药物、化妆品或保健食品中，从而达到皮肤止痒，抗过敏作用，提取物包括溶剂萃取、二氧化碳超临界萃取、萃取后精制的土茯苓提取物或者土茯苓提取物单体，土茯苓提取物单体包括花旗松素、光叶菝葜甙、甲基丁二酸、紫丁香酸等等。

Claims (8)

1.一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，该应用方法是将天然植物土茯苓提取物应用于抑制组胺释放的药物、化妆品及保健食品中，提供抗过敏，止痒效果，所述的土茯苓提取物添加浓度范围为0.001％～100％(W/W)。

2.根据权利要求1所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的天然植物土茯苓提取物包括采用溶剂萃取、水蒸汽蒸馏法或二氧化碳超临界萃取得到的粗土茯苓提取物，以及萃取后采用精制方法得到的精制土茯苓提取物及其单体。

3.根据权利要求2所述的一种天然植物芍药提取物的应用方法，其特征在于，所述的溶剂萃取是将天然植物土茯苓粉碎后置于提取溶剂中，土茯苓与提取溶剂的质量比为2/1-1/40，在20-100℃下，浸泡0.1-336h，过滤，浓缩，得土茯苓提取物。

4.根据权利要求3所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的提取溶剂为水、有机溶剂或者有机溶剂水溶液。

5.根据权利要求4所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的有机溶剂为1-5个碳的醇、乙酸乙酯、二丙二醇或者石油醚中的一种或几种。

6.根据权利要求4所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的有机溶剂水溶液中有机溶剂为1-5个碳的醇或二丙二醇中的一种或几种。

7.根据权利要求5或6所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的1-5个碳的醇包括乙醇、甲醇、甘油、丙二醇、1，3-丁二醇。

8.根据权利要求1所述的一种天然植物土茯苓提取物的应用方法，其特征在于，所述的药物、化妆品及保健食品分别为药物、化妆品及保健食品可接收的形式。