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CN101568550B - 用于表达mphosph1或depdc1多肽的癌症的肽疫苗 - Google Patents

用于表达mphosph1或depdc1多肽的癌症的肽疫苗 Download PDF

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CN101568550B CN2007800467286A CN200780046728A CN101568550B CN 101568550 B CN101568550 B CN 101568550B CN 2007800467286 A CN2007800467286 A CN 2007800467286A CN 200780046728 A CN200780046728 A CN 200780046728A CN 101568550 B CN101568550 B CN 101568550B
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Abstract

本发明提供具有如SEQ ID NO：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255中所示氨基酸序列的肽，以及具有取代、缺失或添加1个、2个或几个氨基酸的上述氨基酸序列的肽，其中所述肽具有细胞毒性T细胞诱导能力。本发明还提供用于治疗或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病例如癌症的药物，所述药物含有这些肽作为活性成分。本发明的肽也可用作疫苗。

Description

用于表达MPHOSPH1或DEPDC1多肽的癌症的肽疫苗
技术领域
本申请要求2006年10月17日提交的美国临时申请号60/852,575的权益，将其全部内容通过提述并入本文。
本发明涉及生物科学领域，更具体地说，涉及癌症治疗领域。特别是，本发明涉及可充当及其有效的癌症疫苗的新肽，还涉及用于治疗和预防的肿瘤的含此类肽的药物。
背景技术
已经证明了CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别呈递在I类MHC分子上的、源自肿瘤相关抗原(TAA)的表位肽，并且使肿瘤细胞溶解。自从作为首个TAA实例的MAGE家族的发现以来，已经使用免疫学方法发现了许多其它TAA(Boon T.(1993)Int J Cancer 54：177-80.；Boon T.等，(1996)J ExpMed 183：725-9.；van der Bruggen P等，(1991)Science 254：1643-7.；Brichard V等，(1993)J Exp Med 178：489-95.；Kawakami Y等，(1994)J Exp Med 180：347-52.)。它们中的一些目前正在临床开发中被当作免疫治疗的靶标。迄今为止发现的TAA包括MAGE(van der Bruggen P等，(1991)Science 254：1643-7.)、gp100(Kawakami Y等，(1994)J Exp Med 180：347-52.)、SART(Shichijo S等，(1998)J Exp Med 187：277-88.)、和NY-ESO-1(Chen Y.T.等，(1997)Proc.Natl.Acd.Sci.USA，94：1914-8.)。另一方面，已经证明，某些已显示在肿瘤细胞中以某种程度特异性地过表达的基因产物被识别为诱导细胞免疫应答的靶标。这些基因产物包括p53(Umano Y等，(2001)Br J Cancer，84：1052-7.)、HER2/neu(Tanaka H等，(2001)Br J Cancer，84：94-9.)、CEA(Nukaya I等，(1999)Int.J.Cancer 80，92-7.)等等。
尽管关于TAA的基础和临床研究取得了显著进展(Rosenberg SA等，(1998)Nature Med，4：321-7.；Mukherji B.等，(1995)Proc Natl Acad Sci USA，92：8078-82.；Hu X等，(1996)Cancer Res，56：2479-83.)，然而目前可用的适合于癌症治疗的候选TAA数非常有限。在癌细胞中大量表达并且其表达限定于癌细胞的TAA将有望成为免疫治疗靶标的候选。
HLA-A24和HLA-A0201均是日本人和白人的群体中普通的HLA等位基因(Date Y等，(1996)Tissue Antigens 47：93-101.；Kondo A等，(1995)JImmunol 155：4307-12.；Kubo RT等，(1994)J Immunol 152：3913-24.；Imanishi等，Proceeding of the eleventh International Histocompatibility Workshop andConference Oxford University Press，Oxford，1065(1992)；Williams F等，(1997)Tissue Antigen 49：129-33.)。因此，由这些HLA等位基因呈递的癌症的抗原肽可能在日本人和白人患者的癌症治疗中有特定效用。另外，已知曝露于高浓度的肽通常可导致低亲和力CTL的体外诱导，在抗原呈递细胞(APC)上生成高水平的特异性肽/MHC复合物，这些复合物能够有效活化所述CTL(Alexander-Miller等，(1996)Proc Natl Acad Sci USA 93：4102-7.)。
近来由于cDNA微阵列技术的发展，构建与正常细胞比较的恶性细胞的基因表达综合谱已经成为了可能(Okabe，H.等，(2001)Cancer Res.，61，2129-37.；Lin YM.等，(2002)Oncogene，21；4120-8.；Hasegawa S.等，(2002)Cancer Res 62：7012-7.)。这种手段使人们能够了解癌细胞的复杂性质和癌发生的机制，并能更容易地鉴定出肿瘤中表达失调的基因(Bienz M.等，(2000)Cell 103，311-20.)。在已被鉴定为在癌症中上调的转录物中，MPHOSPH1(M期磷蛋白1(M-phase phosphoprotein 1)；GenBank登录号NM_016195；SEQ IDNos.1，2)和DEPDC1(含DEP结构域的蛋白1(DEP domain containing 1)；GenBank登录号BM683578)是新近发现的。参见WO 2004/031413、WO2006/085684和WO 2007/013,665，将它们的全部内容通过提述并入本文。人们已经描述了DEPDC1的两种不同转录变体，即DEPDC1V1(SEQ ID No.3，4)和DEPDC1V2(SEQ ID No：5，6)。已经证明了这些基因在所分析病例的不同癌组织的肿瘤细胞中特异性地上调(见下文)；然而，Northern印迹分析证明这些基因产物不存在于正常生命器官中(参见PCT/JP2006/302684)。由于源自MPHOSPH1和DEPDC1的免疫原性肽可能可以用来杀伤表达这些抗原的肿瘤细胞，所以发明人对这些基因特别有兴趣。
由于细胞毒性药物诸如M-VAC经常引起严重副作用，所以显然基于充分了解的作用机制精心选择新的靶分子对于开发将不良副作用风险最小化的有效抗癌药物是重要的。为了这个目的，发明人先前对多种癌症和正常人组织进行了表达谱分析，并且发现了在癌症中特异性过表达的多种基因(LinYM，等，Oncogene.2002Jun 13；21：4120-8.；Kitahara O，等，Cancer Res.2001May 1；61：3544-9.；Suzuki C，等，Cancer Res.2003 Nov 1；63：7038-41.；Ashida S，Cancer Res.2004 Sep 1；64：5963-72.；Ochi K，等，Int J Oncol.2004Mar；24(3)：647-55.；Kaneta Y，等，Int J Oncol.2003Sep；23：681-91.；Obama K，Hepatology.2005 Jun；41：1339-48.；Kato T，等，Cancer Res.2005 Jul1；65：5638-46.；Kitahara O，等，Neoplasia.2002 Jul-Aug；4：295-303.；Saito-Hisaminato A等，DNA Res 2002，9：35-45.)。其中，MPHOSPH1(内部编号C2093)和DEPDC1(内部编号B5860N)是经鉴定在多种癌症中过表达的基因。特别地，MPHOSPH1被鉴定为在膀胱癌(bladder cancer)、乳腺癌(breastcancer)、宫颈癌(cervical cancer)、胆管细胞癌(cholangincellular carcinoma)、CML、结肠直肠癌(colorectal cancer)、胃癌(gastric cancer)、NSCLC、淋巴瘤(lymphoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、前列腺癌(prostate cancer)、肾癌(renalcarcinoma)、软组织肿瘤(soft tissue tumor)中过表达。类似地，DEPDC1被鉴定为在膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、SCLC、软组织肿瘤中过表达。
MPHOSPH1早先被鉴定为在G2/M过渡时被特异性磷酸化的蛋白质之一，并且被表征为正端导向的驱动蛋白相关蛋白(plus-end-directed kinesinrelated protein)(Abaza A等，J Biol Chem 2003，278：27844-52.)。更具体地说，先前已经有文献记载MPHOSPH1是一种正端导向的分子马达(plus-end-directed molecular motor)，它在胞质分裂中扮演重要角色，并且在HeLa细胞中在分裂后期至分裂末期的过程中在纺锤体的中间区积累(AbazaA等，J Biol Chem 2003，278：27844-52；Kamimoto T等，J Biol Chem 2001，276：37520-8)。MPHOSPH1cDNA编码一种1780个氨基酸的蛋白质，该蛋白质由三个结构域构成：NH2-驱动蛋白马达结构域(NH2-kinasin motor domain)、中心卷曲螺旋-茎结构域(central coiled coil-stalk domain)、和C-球形尾部结构域(C-globular tail domain)。同时，这些数据提示MPHOSPH1是NH2型驱动蛋白相关蛋白。
关于DEPDC1，尚不清楚它的功能。这种蛋白质中包含的DEP结构域同样存在于Dishevelled、Eg1-10和Pleckstrin中。果蝇(Drosophila)Dishevelled中的DEP结构域在拯救平面极性缺陷(planar polarity defect)和诱导JNK信号传导中扮演重要角色；然而，它在人类中的功能尚不清楚。但是，如PCT/JP2006/302684所披露的，DEPDC1 siRNA能够抑制癌细胞的生长。这些结果证明DEPDC1在大多数癌细胞的生长中发挥重要作用。
发明内容
如上所述，已经确定MPHOSPH1(M期磷蛋白1)和DEPDC1(含DEP结构域的蛋白1)在多种癌症中上调。更具体地，利用以全基因组cDNA微阵列进行的基因表达谱分析(gene expression profiling)鉴定了这些基因。如上文所讨论的，已经证明了MPHOSPH1和DEPDC1的表达在多种肿瘤细胞中特异性地上调，包括肺癌和膀胱癌。如表1中所述，证明了MPHOSPH1的表达在31例膀胱癌的30例中，36例乳腺癌的8例中，全部18例宫颈癌中，17例胆管细胞癌的5例中，31例CML的25例中，11例结肠直肠癌的6例中，14例胃癌的6例中，全部5例NSCLC中，全部7例淋巴瘤中，10例骨肉瘤的6例中，22例前列腺癌的7例中，18例肾癌的10例中和21例软组织肿瘤的15例中有效升高(validly elevated)。同时，如表1中所述，证明了DEPDC1的表达在25例膀胱癌的23例中，在13例乳腺癌的6例中，全部12例宫颈癌中，全部6例胆管细胞癌中，4例CML的3例中，4例结肠直肠癌的2例中，全部6例NSCLC中，全部7例淋巴瘤中，14例骨肉瘤的10例中，24例前列腺癌的11例中，全部14例SCLC中和31例软组织瘤的22例中有效升高。
本发明基于，至少部分地基于对这些基因的基因产物(MPHOSPH1和DEPDC1)的特异性表位肽的鉴定，所述特异性表位肽能够诱导对相应分子有特异性的细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)。如下文将详细讨论的，使用源自MPHOSPH1或DEPDC1的HLA-A*2402和HLA-A*0201结合性候选肽刺激健康供体的外周血单核细胞(PBMC)。然后建立了针对用各种候选肽冲击(pulse)过的HLA-A24或HLA-A2阳性靶细胞具有特定细胞毒性的CTL克隆和/或细胞系。这些结果证实这些肽是HLA-A24或HLA-A2限定性表位肽(HLA-A24 or HLA-A2 restricted epitope peptides)，其能够诱导针对表达MPHOSPH1或DEPDC1的细胞的强效且特异性的免疫应答。
因此，本发明提供用于治疗或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1的过表达相关的疾病，例如癌症。这些方法包括向需要的受试者施用本发明的MPHOSPH1和/或DEPDC1多肽。这类肽的施用导致抗肿瘤免疫性的诱导。因此，本发明提供用于诱导受试者体内抗肿瘤免疫性的方法，这类方法包括向患者施用MPHOSPH1和/或DEPDC1多肽的步骤；本发明还提供用于治疗或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1的过表达相关的疾病(例如癌症)的药物组合物，所述组合物包括MPHOSPH1和/或DEPDC1多肽。示例性癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、和软组织肿瘤。
即，本申请包括以下实施方案，和它们的任意组合。
一种具有细胞毒性T细胞诱导能力的分离的肽，其中所述肽源自SEQ ID NO：2、4和6的氨基酸序列。
一种少于约15个氨基酸的分离的肽，其选自由包含SEQ ID NO：7、8或12的氨基酸序列的肽组成的群组；或一种具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中所述肽包含选自SEQ ID NO：7、8和12的氨基酸序列，其中取代、缺失或添加了1个、2个或几个氨基酸。
项[2]的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中从N-末端起的第二个氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸。
项[2]的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中C-末端氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。
一种少于约15个氨基酸的分离的肽，其选自由包含SEQ ID NO：9、10、11、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、253、254和255的氨基酸序列的肽组成的群组；或一种具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中所述肽包含选自SEQ ID NO：9、10、11、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、253、254和255的氨基酸序列，其中取代、缺失或添加了1个、2个或几个氨基酸。
项[5]的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中从N-末端起的第二个氨基酸是亮氨酸或甲硫氨酸。
项[5]的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中C-末端氨基酸是缬氨酸或亮氨酸。
一种载体，其中的DNA编码[1]-[7]中任一项的肽。
一种用于治疗或预防与SEQ ID NO：1、3和/或5所示基因的过表达相关的疾病的药物组合物，所述组合物包含一种或多种[1]-[7]中任一项的肽。
项[9]的药物组合物，其中所述疾病是癌症。
项[10]的药物组合物，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
一种外来体(exosome)，其表面上呈现(present)包含[1]-[7]中任一项的肽以及HLA抗原的复合物。
项[12]的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A24。
项[13]的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A2402。
项[12]的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A2。
项[13]的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A0201。
一种诱导具有高的细胞毒性T细胞诱导能力的抗原呈递细胞的方法，包括将抗原呈递细胞与[1]-[7]中任一项的肽接触的步骤。
一种通过将T细胞与[1]-[7]中任一项的肽接触来诱导细胞毒性T细胞的方法。
一种诱导具有高的细胞毒性T细胞诱导能力的抗原呈递细胞的方法，所述方法包括将下述基因转移至抗原呈递细胞的步骤，所述基因包含编码[1]-[7]中任一项的肽的多核苷酸。
一种分离的细胞毒性T细胞，所述细胞是通过将T细胞与权利要求1-7中任一项的肽接触而被诱导的，或者所述细胞是用下述核酸转导的，所述核酸编码在HLA-A24或HLA-A2的背景下与权利要求1-7中任一项的肽结合的TCR亚基多肽。
一种抗原呈递细胞，所述细胞包含HLA抗原与[1]-[7]中任一项的肽之间形成的复合物。
项[21]的抗原呈递细胞，所述细胞是通过项[17]的方法诱导的。
一种用于抑制表达SEQ ID NO：1、3和/或5的基因的细胞增殖的疫苗，其中所述疫苗包含[1]-[7]中任一项的肽作为活性成分。
项[23]的疫苗，其中所述细胞是癌细胞。
项[24]的疫苗，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
项[23]的疫苗，配制成用于向HLA抗原是HLA-A24或HLA-A2的受试者施用。
一种治疗或预防受试者中与SEQ ID NO：1、3和/或5所示基因的过表达相关的疾病的方法，包括向所述受试者施用疫苗，所述疫苗包含一种或多种[1]-[7]中任一项的肽、所述肽的免疫学活性片段、或编码所述肽或其免疫学活性片段的多核苷酸。
项[27]的方法，其中所述疾病是癌症。
项[28]的方法，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
或者，本发明还涉及诱导细胞毒性T细胞的方法，包括将T细胞与通过项[19]的方法产生的抗原呈递细胞接触的步骤。
在结合附图和实施例阅读以下详述后，本发明的这些和其它目的和特征将变得更加显而易见。然而，应该理解无论是前述的发明内容还是下文的详述均为本发明的优选实施方案，而非对本发明或本发明的其它可供选择的实施方案的限制。
附图简述
[图1]
图1A描述的是用于筛选表位肽的IFN-γELISPOT测定法的结果，所述结果进而证实MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)是IFN-γ的强力生产者。根据下文实施例的“材料和方法”部分中描述的方案生成了针对源自MPHOSHP1的那些肽的CTL。所示为得到的具有可检测的特异性CTL活性的CTL。具体而言，与对照相比，4号孔中用MPHOSPH1-A24-9-278刺激的细胞显示了可识别用肽冲击过的(peptide pulsed)的靶细胞的强力IFN-γ产生。图1B描述的是在有限稀释(MPHOSPH1-A24-9-278CTL克隆)之后用于筛选CTL克隆的IFN-γELISPOT测定法的结果。扩增(expand)阳性孔中的细胞并且进行有限稀释。如所示结果所证实，建立了与针对未用肽冲击的靶相比针对肽冲击的靶具有较高的特异性CTL活性的CTL克隆。
[图2]
图2A描述的是用于筛选表位肽细胞毒性的IFN-γELISPOT测定法结果，所述结果进而证实MPHOSPH1-A24-10-278(SEQ ID NO：8)是IFN-γ的强力生产者。根据下文实施例的“材料和方法”部分中描述的方案生成了针对源自MPHOSHP1的那些肽的CTL。所示为得到的具有可检测的特异性CTL活性的CTL。具体而言，与对照相比，8号孔中用MPHOSPH1-A24-10-278刺激的细胞显示了强的IFN-γ产生。图2B描述的是在有限稀释(MPHOSPH1-A24-10-278CTL克隆)之后筛选CTL克隆的IFN-γELISPOT测定法的结果。扩增阳性孔中的细胞并且进行有限稀释。如所示结果所证实的，建立了与针对未用肽冲击过的靶相比，针对经MPHOSPH1-A24-10-278冲击的靶具有较高特异性CTL活性的CTL克隆。
[图3]
图3A描述用MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)刺激的CTL克隆的建立。这种CTL克隆展示出高度的针对用MPHOSPH1-A24-9-278冲击的靶细胞(A24LCL)的特异性CTL活性，但是针对未用肽冲击的相同的靶细胞(A24LCL)未显示显著CTL活性。图3B描述用MPHOSPH1-A24-10-278(SEQID NO：8)刺激的CTL克隆的建立。这种CTL克隆展示出高度的针对用MPHOSPH1-A24-10-278冲击的靶细胞的特异性CTL活性，而该克隆针对未用肽冲击的相同靶细胞(A24LCL)未显示显著CTL活性。
R表示应答物：CTL克隆。
S表示刺激物：用肽冲击过的A24-LCL(1×104/孔)。
[图4]
图4描述MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)在具有HLA-A24的靶细胞表面的表达。使用由MPHOSPH1-A24-9-278激发产生的CTL克隆作为效应细胞，测定了针对用全长MPHOSPH1基因和HLA-A*2402分子二者共同转染的COS7的特异性CTL活性。制备用全长MPHOSPH1转染但不用HLA-A*2402转染的COS7和用HLA-A*2402转染但不用全长MPHOSPH1转染的COS7作为对照。CTL克隆针对用MPHOSPH1和HLA-A24二者共同转染的COS7展示出高度的特异性CTL活性。然而，该克隆针对未用MPHOSPH1或HLA-A24(neither MPHOSPH1nor HLA-A24)转染的COS7未显示显著特异性CTL活性。
R表示应答物：CTL克隆。
S表示刺激物：COS7转染子(1×104/孔)。
[图5]
图5描述的是针对内源表达MPHOSPH1的膀胱癌细胞系的CTL活性。用MPHOSPH1-A24-9-278肽诱导建立的CTL克隆识别内源表达MPHOSPH1的肿瘤细胞。HT1376、RT-4和J82细胞分别内源表达MPHOSPH1。CTL克隆针对具有HLA-A*2402基因型的HT1376显示了IFN-γ的产生，但是针对非HLA-A*2402基因型的RT-4和J82未显示应答。
[图6]
图6描述的是使用MPHOSPH1-A24-9-278肽进行的体内免疫原性分析。在第0天和第7天向BALB/c小鼠皮下注射用IFA缀合的肽。在第14天，收集接种过的小鼠的脾细胞并用作应答细胞(responder cell)，并且使用1×104个用MPHOSPH1-A24-9-278肽冲击过的RLmale1细胞作为刺激细胞(stimulator cell)来进行IFN-γ ELISPOT测定。标明了每只小鼠的点形成计数(spot forming counts)(SFC)；为五只小鼠(Ani1～Ani5)接种表位肽，为三只小鼠(nega1～nega3)注射模拟物IFA乳剂作为阴性对照。
[图7]
图7描述的是筛选表位肽的IFN-γ ELISPOT测定的结果，该结果进而证实MPHOSPH 1-A2-9-282(SEQ ID NO：9)、MPHOSPH1-A2-9-638(SEQ IDNO：10)和MPHOSPH1-A2-10-1714(SEQ ID NO：11)具有强力的IFN-γ产生活性。根据下文所列实施例的“材料和方法”部分中描述的方案生成了针对源自MPHOSHP1的那些肽的CTL。所示为得到的具有可检测的特异性CTL活性的CTL。具体而言，图7A证实与对照相比用MPHOSPH1-A2-9-282刺激的1号和5号孔中的细胞显示了足以识别用肽冲击的靶细胞的强力的IFN-γ产生。图7B证实与对照相比用MPHOSPH1-A2-9-638刺激的8号孔中的细胞显示了足以识别用肽冲击过的靶细胞的强力的IFN-γ产生。图7C证实与对照相比用MPHOSPH1-A2-10-1714刺激的4号孔中的细胞显示了可识别用肽冲击过的靶细胞的强力的IFN-γ产生。
[图8]
图8描述的是用MPHOSPH1-A02-9-282、(SEQ ID NO：9)MPHOSPH1-A02-9-638(SEQ ID NO：10)和MPHOSPH1-A02-10-1714(SEQID NO：11)刺激的CTL细胞系的建立。扩增阳性孔中的细胞，并且如所述结果所示，建立了这样的CTL细胞系，所述细胞系针对用MPHOSPH1-A02-9-282冲击的靶(A)、用MPHOSPH1-A02-9-638冲击的靶(B)或用MPHOSPH1-A02-10-1714冲击的靶(C)具有更高的特异性CTL活性(相比于针对未用肽冲击的靶的活性)。
R表示应答物：CTL细胞系。
S表示刺激物：用肽冲击过的T2(1×104个/孔)。
[图9]
图9A描述在有限稀释(MPHOSPH1-A2-9-282CTL克隆)之后用于筛选CTL克隆的IFN-γELISPOT测定的结果。扩增阳性孔中的细胞并且进行有限稀释。如所述结果所示，建立了这样的CTL克隆，所述CTL克隆针对用MPHOSPH1-A2-9-282(SEQ ID NO：9)冲击的靶的特异性CTL活性高于针对未用肽冲击的靶的活性。图9B描述的是用MPHOSPH1-A02-9-282刺激的CTL克隆的建立。所述CTL克隆针对用MPHOSPH1-A2-9-282冲击的靶细胞(T2)展示出高度的特异性CTL活性，但是针对未用肽冲击的相同靶细胞(T2)无显著CTL活性。
R表示应答物：CTL克隆。
S表示刺激物：用肽冲击过的T2(1×104/孔)。
[图10]
图10A描述的是用于筛选表位肽的IFN-γELISPOT测定的结果，该结果进而证实DEPDC1-A24-9-294(SEQ ID NO：12)是强的IFN-γ生产者。根据下文所列实施例的“材料和方法”部分中描述的方案生成了针对源自DEPDC1的那些肽的CTL。所示为得到的表现出可检测的特异性CTL活性的CTL。用DEPDC1-A24-9-294刺激的10号孔中的细胞与对照相比显示了可识别用肽冲击过的靶细胞的强的IFN-γ生产。图10B描述的是在有限稀释之后(DEPDC1-A24-9-294CTL克隆)筛选CTL克隆的IFN-γELISPOT测定的结果。扩增阳性孔中的细胞并且进行有限稀释。如所述结果所示，建立了这样的CTL克隆，所述CTL克隆针对用DEPDC1-A24-9-294冲击的靶的特异性CTL活性高于针对未用肽冲击过的靶的活性。
[图11]
图11描述的是用DEPDC1-A24-9-294(SEQ ID NO：12)刺激的CTL克隆的建立。所述CTL克隆显示出高度的针对用DEPDC1-A24-9-294冲击过的靶细胞(A24LCL)的特异性CTL活性，而针对未用肽冲击的相同靶细胞(A24LCL)未显示显著CTL活性。
R表示应答物：DEPDC-A24-9-294CTL克隆。
S表示刺激物：用肽冲击的A24-LCL(1×104个/孔)。
[图12]
图12描述的是具有HLA-A24的靶细胞表面上DEPDC1-A24-9-294(SEQID NO：12)的表达。使用由DEPDC1-A24-9-294激发产生的CTL克隆作为效应细胞，测定了针对用全长DEPDC1基因和HLA-A*2402分子二者共同转染的COS7的特异性CTL活性。制备了用全长DEPDC1转染但不用HLA-A*2402转染的COS7和用HLA-A*2402转染但不用全长DEPDC1转染的COS7作为对照。建立的CTL克隆针对用DEPDC1和HLA-A24二者共同转染的COS7展示出高度的特异性CTL活性。然而，该克隆针对未用DEPDC1或HLA-A24转染的COS7未显示显著的特异性CTL活性。
R表示应答物：DEP-A24-9-294CTL克隆。
S表示刺激物：COS7转染子(1×104个/孔)。
[图13]
图13描述的是针对内源表达DEPDC1的膀胱癌细胞系的CTL活性。用DEPDC1-A24-9-294肽诱导的建立的CTL克隆(established CTL clone inducedwith DEPDC1-A24-9-294peptide)识别内源表达DEPDC1的肿瘤细胞。HT1376、RT-4和J82细胞分别内源表达DEPDC1。所述CTL克隆针对具有HLA-A*2402基因型的HT1376显示了IFN-γ的产生，但是针对非HLA-A*2402基因型的RT-4和J82未显示应答。
[图14]
图14描述的是使用DEPDC1-A24-9-29肽进行的体内免疫原性分析。在第0天和第7天向BALB/c小鼠皮下注射用IFA缀合的肽。在第14天，收集接种过的小鼠的脾细胞并用作应答细胞，并且使用1×104个用DEPDC1-A24-9-294肽冲击过的RLmale1细胞作为刺激细胞来进行IFN-γELISPOT测定。标明了每只小鼠的点形成计数(SFC)；为五只小鼠(Ani1～Ani5)接种表位肽，为两只小鼠(nega1和nega2)注射模拟物IFA乳剂作为阴性对照。
[图15]
图15描述了用于筛选表位肽的IFN-γELISPOT测定中DEPDC1-A02-10-644、-10-575、-10-506、-10-765、-10-395、-10-224、-9-297、-10-296和-10-302的强力IFN-γ产生。以“材料和方法”中描述的方式生成了针对源自DEPDC1的那些肽的CTL。与对照相比，用DEPDC1-A02-10-644刺激的4号和7号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-10-575刺激的2号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-10-506刺激的7号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-10-765刺激的1号孔中的细胞和用DEPDC1-A02-10-395刺激的1号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-10-224刺激的1号和2号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-9-297刺激的4号孔中的细胞，用DEPDC1-A02-10-296刺激的3号和4号孔中的细胞和用DEPDC1-A02-10-302刺激的2号、3号、5号和7号孔中的细胞显示了强力的IFN-γ产生。
[图16]
图16描述的是用DEPDC1-A02-10-296肽生成的CTL细胞系的IFN-γ产生。通过DEPDC1-A02-10-296肽激发产生的建立的CTL细胞系具有强力的IFN-γ产生活性。该图显示，针对用肽刺激的靶细胞产生了IFN-γ，但是针对未用肽刺激的靶细胞未显示IFN-γ产生。使用的靶细胞是在细胞表面表达HLA-A2分子的T2细胞。
[图17]
图17描述的是针对内源表达DEPDC1和HLA-A2分子的靶的CTL活性。上方图中显示的是，用DEPDC1-A02-10-296肽产生的、建立的CTL细胞系，针对内源表达DEPDC1V2和HLA-A2的靶细胞具有IFN-γ产生活性。使用DEPDC1-A02-10-296肽的情况在下方图中显示。制备了用DEPDC1V1-9-674或DEP-9-462肽刺激的、仅表达DEPDC1V2和仅表达HLA-A2的靶细胞，作为阴性对照。靶细胞是从稳定表达HLA-A2或模拟物(mock)的HEK293转染子制备的。
[图18]
图18描述的是病例2中的抗原表达。在病例2中，MPHOSPH1和DEPDC1均强力表达。因此，接种了源自MPHOSPH1和DEPDC1的两类表位肽。
[图19]
图19描述的是对病例2中膀胱癌局部复发的临床评估。根据RECIST标准评估病例2为SD。
[图20]
图20描述的是病例3中的抗原表达。在病例3中，DEPDC1强力表达。因此，我们仅接种了源自DEPDC1的表位肽。
[图21]
图21描述的是对病例3中转移性肺右叶的临床评估。在接种之后进展速度被降低。特别的是，肿瘤大小在第三个疗程之后减小。
[图22]
图22描述的是对病例3中转移性肺左叶的临床评估。进展速度在接种之后被降低。特别的是，肿瘤大小在第三个疗程之后减小。
[图23]
图23描述的是病例3中的抗肿瘤效果。在接种之后转移性肿瘤的进展速度被降低。
[图24]
图24描述的是病例3中的特异性CTL应答。在接种之后强烈地表现特异性CTL应答。
[图25]
图25描述的是病例4中的抗原表达。在病例4中，MPHOSPH1和DEPDC1被表达。因此，接种了源自MPHOSPH1和DEPDC1的两种表位肽。
[图26]
图26描述的是对病例4中膀胱癌局部复发的临床评估。在第一接种疗程之后，根据RECIST标准肿瘤大小降低了20％。
发明详述
除非另有特定的说明，本说明书中使用的术语“一个(a)”或“一种(an)”和“该/所述(the)”是指至少一个或至少一种。
除非另有定义，本说明书中使用的所有技术和科学术语的意思与本发明所属技术领域普通技术人员所通常理解的意思相同。
新的TAA的鉴定，特别是对诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的那些TAA的鉴定，为人们进一步开发肽接种策略在多种类型的癌症中的临床应用提供了保证(Boon T等，(1996)J Exp Med 183：725-9.；van der Bruggen P等，(1991)Science 254：1643-7.；Brichard V等，(1993)J Exp Med 178：489-95.；Kawakami Y等，(1994)J Exp Med 180：347-52.；Shichijo S等，(1998)J ExpMed 187：277-88.；Chen YT等，(1997)Proc.Natl.Acd.Sci.USA，94：1914-8.；Harris CC，(1996)J Natl Cancer Inst 88：1442-55.；Butterfield LH等，(1999)Cancer Res 59：3134-42.；Vissers JL等，(1999)Cancer Res 59：5554-9.；van derBurg SH等，(1996)J.Immunol 156：3308-14.；Tanaka F等，(1997)Cancer Res57：4465-8.；Fujie T等，(1999)Int J Cancer 80：169-72.；Kikuchi M等，(1999)IntJ Cancer 81：459-66.；Oiso M等，(1999)Int J Cancer 81：387-94.)。如上所述，人们先前使用cDNA微阵列技术确定了MPHOSPH1(M期磷蛋白1；GenBank登录号NM_016195；SEQ ID Nos.1，2)和DEPDC1(含DEP结构域的蛋白1；GenBank登录号BM683578)，更具体而言是它的两种变体DEPDC1V1(SEQID Nos.3，4)和DEPDC1V2(SEQ ID No.5，6)在多种癌症中过表达。MPHOSPH1先前被鉴定为G2/M过渡时被特异性磷酸化的蛋白质之一，并且被表征为正端导向的驱动蛋白相关蛋白(Abaza A等，J Biol Chem 2003，278：27844-52.)。更具体地，先前已经有文献记载MPHOSPH1是一种正端导向的分子马达，在胞质分裂中扮演重要角色，并且在HeLa细胞中在分裂后期至分裂末期的过程中在纺锤体的中间区积累(Abaza A等，J Biol Chem 2003，278：27844-52；Kamimoto T等，J Biol Chem 2001，276：37520-8.)。MPHOSPH1cDNA编码一种1780个氨基酸的蛋白质，所述蛋白质由三个结构域构成：NH2-驱动蛋白马达结构域(NH2-kinasin motor domain)，中心卷曲螺旋-茎结构域，和C-球形尾部结构域。这些数据提示MPHOSPH1是NH2型驱动蛋白相关蛋白。
DEPDC1蛋白的功能尚不清楚。在Dishevelled、Egl-10和Pleckstrin中发现了这种蛋白质中包括的DEP结构域。具体而言，果蝇Dishevelled中的DEP结构域在平面极性缺陷的拯救和JNK信号传导的诱导中扮演重要角色；然而，它在人类中的功能尚不清楚。但是，如PCT/JP2006/302684中所公开的，DEPDC1(内部编号B5860N)具有由12和11个外显子组成的两种不同的转录变体，分别对应于DEPDC1V1和V2。注意到V1第8外显子中的可选变异，并发现其它剩余的外显子为两种变体所共有。V2变体没有V1的第8外显子，但是在最后一个外显子内产生相同的终止密码子。B5860NV1和B5860NV2变体的全长cDNA序列分别由5318和4466个核苷酸组成。这些变体的ORF始于各自的第1外显子内。最终，V1和V2转录物分别编码811个和527个氨基酸。siRNA抑制了癌细胞的生长。这些结果证实DEPDC1在大多数癌细胞的生长中发挥重要作用。
如PCT/JP2006/302684中所公开的，MPHOSPH1和DEPDC1在膀胱癌中过表达，但是在正常组织中显示最低表达(minimal expression)。此外，发现这些基因具有与细胞增殖相关的重要功能。
在本发明中，证明了源自MPHOSPH1或DEPDC1的肽是限定于HLA-A24和HLA-A2的TAA表位，HLA-A24和HLA-A2是在日本人和白人群体中常见的HLA等位基因。具体而言，利用它们对HLA-A24和HLA-A2的结合亲和力，鉴定了源自MPHOSPH1或DEPDC1的HLA-A24和HLA-A2结合肽的候选物。在通过装载有这些肽的树突细胞(DC)体外刺激T细胞之后，成功地使用MPHOSPH1-A24-9-278(IYNEYIYDL(SEQ ID NO：7))、MPHOSPH1-A24-10-278(IYNEyIYDLF(SEQ ID NO：8))、MPHOSPH1-A2-9-282(YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9))、MPHOSPH1-A2-9-638(RLAIFKDLV(SEQ ID NO：10))、MPHOSPH1-A2-10-1714(TMSSsKLSNV(SEQ ID NO：11))、DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))、DEPDC1-A02-10-644(SLMIhTFSRC(SEQ ID NO：240))、DEPDC1-A02-10-575(SLLPaSSMLT(SEQ ID NO：241))、DEPDC1-A02-10-506(QLCRsQSLLL (SEQ ID NO：243))、DEPDC1-A02-10-765(KQFQkEYPLI(SEQ ID NO：244))、DEPDC1-A02-10-395(IMGGSCHNLI (SEQ ID NO：249)、DEPDC1-A02-10-224(NMANtSKRGV(SEQ ID NO：253))、DEPDC1-A02-9-297(ELFVNILGL(SEQ ID NO：226))、DEPDC1-A02-10-296(YELFvNILGL(SEQ ID NO：254))、DEPDC1-A02-10-301(NILGlLQPHL(SEQ ID NO：255))、DEPDC1-A2-9-589(LLQPHLERV(SEQ ID NO：192))、DEPDC1-A2-9-619(LLMRMISRM(SEQID NO：195))、DEPDC 1-A2-9-290(LLTFEYYEL(SEQ ID NO：197))、DEPDC1-A2-9-563(RLCKSTIEL(SEQ ID NO：209))、DEPDC1-A2-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))、DEPDC1-A2-10-674(FLMDhHQEIL(SEQID NO：228))和DEPDC1-A2-10-302(ILVVcGYITV(SEQ ID NO：230))建立了CTL。这些CTL针对用肽冲击过的A24LCL和T2细胞展现出强力的细胞毒活性。此外，源自这些细胞的CTL克隆还分别展现出针对表达MPHOSPH1或DEPDC1的HLA-A24或HLA-A2阳性细胞的特异性细胞毒性。然而，这些CTL克隆针对仅表达这些肽(包括HLA-A24、HLA-A2、MPHOSPH1和DEPDC1)中的一种的细胞不表现细胞毒活性。这些结果合起来提示MPHOSPH1和DEPDC1作为癌细胞的TAA是有用的，并且MPHOSPH1-A24-9-278(IYNEYIYDL(SEQ ID NO：7))、MPHOSPH1-A24-10-278(IYNEyIYDLF(SEQ ID NO：8))、MPHOSPH1-A2-9-282(YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9))、MPHOSPH1-A2-9-638(RLAIFKDLV(SEQ ID NO：10))、MPHOSPH1-A2-10-1714(TMSSsKLSNV(SEQ ID NO：11))、DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))、DEPDC1-A02-10-644(SLMIhTFSRC(SEQ ID NO：240))、DEPDC1-A02-10-575(SLLPaSSMLT(SEQ ID NO：241))、DEPDC1-A02-10-506(QLCRsQSLLL(SEQ ID NO：243))、DEPDC1-A02-10-765(KQFQkEYPLI(SEQ ID NO：244))、DEPDC1-A02-10-395(IMGGSCHNLI(SEQ ID NO：249)、DEPDC1-A02-10-224(NMANtSKRGV(SEQ ID NO：253))、DEPDC1-A02-9-297(ELFVNILGL(SEQ ID NO：226))、DEPDC1-A02-10-296(YELFvNILGL(SEQ ID NO：254))、DEPDC1-A02-10-301(NILGlLQPHL(SEQ ID NO：255))、DEPDC1-A2-9-589(LLQPHLERV(SEQ ID NO：192))、DEPDC1-A2-9-619(LLMRMISRM(SEQID NO：195))、DEPDC1-A2-9-290(LLTFEYYEL(SEQ ID NO：197))、DEPDC1-A2-9-563(RLCKSTIEL(SEQ ID NO：209))、DEPDC1-A2-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))、DEPDC1-A2-10-674(FLMDhHQEIL(SEQID NO：228))和DEPDC1-A2-10-302(ILVVcGYITV(SEQ ID NO：230))是限定于HLA-A24或HLA-A2的各TAA的表位肽。由于这些抗原在大多数癌症中过表达，并且与肿瘤细胞增殖相关，它们作为针对癌症的免疫治疗靶是有用的。示例性癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
因此，本发明进一步提供治疗或预防受试者中与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病例如癌症的方法，这样的方法包括向需要的患者施用免疫原性肽的步骤，所述肽小于约40个氨基酸，经常小于约20个氨基酸，通常小于约15个氨基酸，并且具有SEQ ID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的氨基酸序列。或者，所述免疫原性肽可以由SEQ ID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的序列构成，其中取代、缺失或添加了1个、2个或几个(例如，多至5个)氨基酸，条件是所得变体肽保留所述免疫原性(即，诱导对表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞例如癌症有特异性的CTL的能力)。取代、缺失或添加的残基数通常是5个氨基酸或更少，优选4个氨基酸或更少，更优选3个氨基酸或更少，甚至更优选一个或两个氨基酸。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
已知变体肽(即氨基酸序列经修饰的肽，所述修饰是通过对原始氨基酸序列进行一个、两个或几个氨基酸残基的取代、缺失或添加来进行的)保留原始生物学活性(Mark DF等，(1984)Proc Natl Acad Sci USA 81：5662-6.；Zoller MJ and Smith M，(1982)Nucleic Acids Res 10：6487-500.；Dalbadie-McFarland G等，(1982)Proc Natl Acad Sci USA 79：6409-13.)。在本发明的上下文中，优选氨基酸修饰导致对原始氨基酸侧链性质的保留(该过程被称为保守氨基酸取代)。氨基酸侧链性质的实例包括疏水氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)，亲水氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)，以及共同具有以下官能团或特征的侧链：脂族侧链(G、A、V、L、I、P)；含羟基侧链(S、T、Y)；含硫原子的侧链(C、M)；含羧酸和酰胺的侧链(D、N、E、Q)；含碱侧链(base containing side-chain)(R、K、H)；和含芳基侧链(aromatic containing side-chain)(H、F、Y、W)。注意，圆括号内的字母表示氨基酸的单字母编码。
在优选的实施方案中，免疫原性肽是九肽(9聚体)或十肽(10聚体)。
本发明进一步提供对受试者中与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)诱导抗肿瘤免疫性的方法，这样的方法包括向需要的受试者施用本发明的免疫原性肽，即具有SEQ ID NO：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的氨基酸序列或其变体(即，包括1个、2个或几个氨基酸的取代、缺失或添加)的肽，的步骤。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
在本发明的上下文中，受试者优选是哺乳动物。示例性哺乳动物包括，但不限于，例如，人、非人灵长类、小鼠、大鼠、犬、猫、马或牛(cow)。
在本发明中，可以藉由体内或回体(ex vivo)方案向受试者施用所述肽。此外，本发明还提供使用九肽或十肽制造用于治疗或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)的免疫原性组合物的用途，所述九肽或十肽选自下组：具有SEQ ID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254和255的氨基酸序列(及其变体)的肽。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
对MPHOSPH1-A24-9-278(IYNEYIYDL (SEQ ID NO：7))、MPHOSPH1-A24-10-278(IYNEyIYDLF(SEQ ID NO：8))、MPHOSPH1-A2-9-282(YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9))、MPHOSPH1-A2-9-638(RLAIFKDLV(SEQ ID NO：10))、MPHOSPH1-A2-10-1714(TMSSsKLSNV(SEQ ID NO：11))、DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))、DEPDC1-A2-9-589(LLQPHLERV(SEQ ID NO：192))、DEPDC1-A2-9-619(LLMRMISRM(SEQ ID NO：195))、DEPDC1-A2-9-290(LLTFEYYEL(SEQID NO：197))、DEPDC1-A2-9-563(RLCKSTIEL(SEQ ID NO：209))、DEPDC1-A2-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))、DEPDC1-A2-10-674(FLMDhHQEIL(SEQ ID NO：228))、DEPDC1-A2-10-302(ILVVcGYITV(SEQID NO：230))DEPDC1-A02-10-644(SLMIhTFSRC(SEQ ID NO：240))、DEPDC1-A02-10-575(SLLPaSSMLT(SEQ ID NO：241))、DEPDC1-A02-10-506(QLCRsQSLLL(SEQ ID NO：243))、DEPDC1-A02-10-765(KQFQkEYPLI(SEQ ID NO：244))、DEPDC1-A02-10-395(IMGGSCHNLI(SEQ ID NO：249)、DEPDC1-A02-10-224(NMANtSKRGV(SEQ ID NO：253))、DEPDC1-A02-9-297(ELFVNILGL(SEQ ID NO：226))、DEPDC1-A02-10-296(YELFvNILGL(SEQ ID NO：254))和DEPDC1-A02-10-301(NILGlLQPHL(SEQ ID NO：255))的同源性分析显示它们不与源自任何已知的人基因产物的肽具有显著同源性。因此，显著降低了针对这些分子的免疫治疗产生未知的或不期望的免疫应答的可能性。
关于HLA抗原，本文所示数据证实使用A-24型或A-2型抗原(据称在日本人中高表达)有利于获得有效的结果。使用诸如A-2402和A-0201等亚型是更优选的。通常，在临床上，预先调查需要治疗的患者的HLA抗原类型，进而能够选择对患者抗原具有高结合亲和力水平或具有通过抗原呈递而诱导细胞毒性T细胞(CTL)的能力的适合的肽。此外，为了获得具有高结合亲和力和CTL诱导能力的肽，可以基于天然存在的MPHOSPH1和DEPDC1部分肽进行1个、2个或几个氨基酸的取代、缺失或添加。在本文中，术语“几个”意指5个或更少，更优选3个或更少。此外，除了天然呈现的肽，由于呈现的肽序列与HLA抗原结合的规律性是已知的(Kubo RT，等，(1994)J.Immunol.，152，3913-24.；Rammensee HG，等，(1995)Immunogenetics.41：178-228.；Kondo A，等，(1995)J.Immunol.155：4307-12.)，所以可以基于这种规律性对本发明的免疫原性肽进行修饰。例如，可优选使用这样的具有高HLA-24结合亲和力的肽，其中将N末端起的第二个氨基酸用苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸取代。同样，C-末端氨基酸被取代为苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸的肽也可优选使用。另一方面，可以优选使用具有高HLA-A2结合亲和力并且N末端起的第二个氨基酸被取代为亮氨酸或甲硫氨酸取代的肽，以及C末端氨基酸被取代为缬氨酸或亮氨酸的肽。此外，可以向所述肽的N末端和/或C末端添加1至2个氨基酸。
然而，当所述肽序列与具有其它不同功能的内源或外源蛋白质的部分氨基酸序列相同时，可能引发副作用，诸如针对具体物质的自身免疫病或变应性症状等。因此，优选避免所述免疫原性序列与已知蛋白质的氨基酸序列匹配的情况。这种情况可以通过使用可用数据库进行同源性搜索来避免。如果同源性搜索确认自然界中不存在1个、2个或几个氨基酸不同的肽(peptides inwhich 1，2or several different amino acids do not exist in nature)，那么可以避免上述氨基酸序列被修饰(例如增加HLA抗原的结合亲和力和/或增加CTL诱导能力的修饰)的危险(the danger that modifications of the above-mentionedamino acid sequence that，for example，increase the binding affinity with HLAantigens，and/or increase the CTL inducibility can be avoided)。
尽管预期如上所述对HLA抗原具有高结合亲和力的肽可作为高效的癌症疫苗，但是对于候选肽--它们是以高结合亲和力的存在作为指标选择的--而言，必须考察它们CTL诱导能力是否确实存在CTL诱导能力。CTL诱导能力可以通过常规方法加以确认：通过诱导携带人MHC抗原的抗原呈递细胞(例如，B淋巴细胞、巨噬细胞和树突细胞)，或更具体地说，源自人外周血单个核白细胞的树突细胞，并且，在用感兴趣的肽刺激之后，与CD8阳性细胞混合，再测量针对所述靶细胞的细胞毒活性。作为反应体系，可以使用制备为表达人HLA抗原的转基因动物(例如，在BenMohamed L，等，(2000)Hum.Immunol.；61(8)：764-79Related Articles，Books，Linkout.中描述的那些)。例如，可以用51Cr等对靶细胞进行放射标记，并且可以根据从靶细胞释放的放射性来计算细胞毒活性。或者可以这样检查，通过测量在携带固定化肽的抗原呈递细胞的存在下由CTL产生并释放的IFN-γ，并且使用抗IFN-γ单克隆抗体使培养基上的抑制区可视化。
如上所述对肽的CTL诱导能力的检查结果发现，对HLA抗原具有高结合亲和力的那些肽不一定具有高诱导能力。然而，选自下述肽的九肽或十肽显示出特别高的CTL诱导能力，所述肽具有IYNEYIYDL(SEQ ID NO：7)、IYNEyIYDLF(SEQ ID NO：8)、YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9)、RLAIFKDLV(SEQ ID NO：10)、TMSSsKLSNV(SEQ ID NO：11)、EYYELFVNI(SEQ ID NO：12)、LLQPHLERV(SEQ ID NO：192)、LLMRMISRM(SEQ ID NO：195)、LLTFEYYEL(SEQ ID NO：197)、RLCKSTIEL(SEQ ID NO：209)、CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225)、FLMDhHQEIL(SEQ ID NO：228)、ILVVcGYITV(SEQ ID NO：230)、DEPDC1-A02-10-644(SLMIhTFSRC(SEQID NO：240))、DEPDC1-A02-10-575(SLLPaSSMLT(SEQ ID NO：241))、DEPDC1-A02-10-506(QLCRsQSLLL(SEQ ID NO：243))、DEPDC1-A02-10-765(KQFQkEYPLI(SEQ ID NO：244))、DEPDC1-A02-10-395(IMGGSCHNLI(SEQ ID NO：249)、DEPDC1-A02-10-224(NMANtSKRGV(SEQ ID NO：253))、DEPDC1-A02-9-297(ELFVNILGL(SEQ ID NO：226))、DEPDC1-A02-10-296(YELFVNILGL(SEQ ID NO：254))和DEPDC1-A02-10-301(NILGlLQPHL(SEQ ID NO：255))所示的氨基酸序列。
如上所述，本发明提供具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，即具有SEQID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的氨基酸序列或其变体(即，其中取代、缺失或添加了1个、2个或几个氨基酸)的那些肽。因此，优选的是，所述由SEQ ID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255或其变体中所示的9个或10个氨基酸构成的氨基酸序列不匹配于另一内源蛋白相关的氨基酸序列。具体而言，在N末端起的第二个氨基酸处取代为亮氨酸或甲硫氨酸的氨基酸取代，在C末端氨基酸处取代为缬氨酸或亮氨酸的氨基酸取代，和在N末端和/或C末端处添加1至2个氨基酸的氨基酸添加是优选变体的实例。本领域技术人员将认识到除了氨基酸取代和添加，所述肽的免疫学活性片段也可以在本发明的方法中使用。用于测定活性片段的方法是本领域熟知的。通过用这些经修饰的肽进行刺激而获得的CTL克隆能够识别原来的肽并且引起表达所述原始肽的细胞的损害。
本发明的肽能够使用公知的技术制备。例如，可以使用重组DNA技术或化学合成以合成方法制备所述肽。本发明的肽可以个别地合成或作为更长的包含两个或多个肽的多肽合成。本发明的肽优选是分离的，即，基本上不含其它天然存在的宿主细胞蛋白及其片段。
本发明的肽可以含有修饰，诸如糖基化、侧链氧化或磷酸化；只要所述修饰不破坏如本文所述的肽的生物学活性，即与HLA抗原结合并诱导CTL的能力。其它修饰包括掺入例如可以用于增加肽的血清半衰期的D-氨基酸或其它氨基酸模拟物。
本发明的肽可以作为组合制备，所述组合包括两个或更多个本发明的肽，用作与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病例如癌症所用的疫苗，这样的疫苗在体内诱导CTL。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。所述肽可以是鸡尾酒混合物(cocktail)或者可以使用标准技术使其彼此缀合(conjugate)。例如，可以将所述肽表达成单一多肽序列。组合中的肽可以是相同的或不同的。通过施用本发明的肽，使所述肽以高密度呈现于抗原呈递细胞的HLA抗原上，进而诱导CTL，所述CTL特异性地针对所展示的肽和HLA抗原之间形成的复合物起反应。或者，可以用本发明的肽来刺激表面具有固定化的本发明的肽的抗原呈递细胞，所述抗原呈递细胞是通过从受试者取出树突细胞来获得的。向对应的(respective)受试者再施用这些细胞可诱导CTL，并且由此能够增加对靶细胞的进攻性。
更具体地，本发明提供用于治疗和/或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)的增殖、转移等的药物，所述药物包括一种或多种本发明的肽。本发明的肽在治疗与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病(例如癌症)方面尤其有用。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
本发明的肽可以作为通过常规配制方法配制好的药物组合物直接向受试者施用。在这类情况下，除了本发明的肽，可以适当地包括通常用于药物的载体(carrier)、赋形剂等，不对此进行具体限制。本发明的免疫原性组合物可以用于治疗和预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病例如癌症。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
包含一种或多种本发明的肽作为活性成分、用于治疗和/或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病例如癌症的免疫原性组合物，可以进一步包括佐剂以有效建立细胞免疫。或者，它们可以与其它活性成分一起施用，诸如抗癌剂。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。合适的剂型包括颗粒。合适的佐剂在文献中有述(JohnsonAG.(1994)Clin.Microbiol.Rev.，7：277-89.)。示例性佐剂包括，但不限于，磷酸铝、氢氧化铝和明矾。此外，可以方便地使用脂质体制剂、其中将药物与几微米直径的珠子结合的颗粒制剂、和其中将脂质与所述肽结合的制剂。施用的方法可以是口服(oral)、真皮内(intradermal)、皮下(subcutaneous)、静脉内(intravenous)注射等，并且可以包括系统施用或对靶向的肿瘤附近的局部施用。本发明的肽的剂量可以根据所治疗的疾病、患者的年龄、体重、施用方法等进行适当调整。尽管剂量通常为0.001mg至1000mg，优选0.01mg至100mg，更优选0.1mg至10mg，优选每几天至几个月施用一次，但是本领域技术人员能够容易地选择适当的剂量和施用方法，因为对这些参数的选择和优化完全属于常规技术。
本发明进一步提供称作外来体(exosome)的胞内泡囊，其表面提呈由本发明的肽和HLA抗原形成的复合物。外来体可以通过，例如，使用在国际公布的日文翻译公布特表平11-510507号和特表2000-512161号中详细描述的方法来制备，并且优选使用从治疗和/或预防的目标受试者获得的抗原呈递细胞制备。本发明的外来体可以作为癌症疫苗接种，类似于本发明的肽。
所用HLA抗原的类型必须与需要治疗和/或预防的受试者匹配。例如，在日本人群体中，HLA-A24或HLA-A2，尤其是HLA-A2402或HLA-A0201，通常是适合的。
在一些实施方案中，本发明的疫苗组合物包括致敏(prime)细胞毒性T淋巴细胞的成分。已经确定脂质是能够在体内使CTL针对病毒抗原致敏的作用物。例如，可以将棕榈酸残基附接于赖氨酸残基的ε-和α-氨基，再与本发明的免疫原性肽连接。然后所述脂质化的肽(lapidated peptide)可以直接施用、在微团或颗粒中施用、并入脂质体中施用、或在佐剂中乳化施用。作为脂质致敏CTL应答的另一实例，大肠杆菌脂蛋白诸如三棕榈酰-S-甘油基半胱氨酰丝氨酰-丝氨酸(tripalmitoyl-S-glycerylcysteinlyseryl-serine)(P3CSS)当共价附接于适当的肽时可以用于致敏CTL(参见，例如，Deres K，等，(1989)Nature342：561-4.)。
本发明的免疫原性组合物还可包括编码一种或多种本文公开的免疫原性肽的核酸。参见，例如，WolffJA等，(1990)Science 247：1465-8；美国专利第5，580,859；5,589,466；5,804,566；5,739,118；5,736,524；5,679,647号；和WO 98/04720。基于DNA递送技术的实例包括“裸DNA”、协助(bupivicaine、聚合物、肽介导的)递送、阳离子脂质复合物、和颗粒介导的递送(“基因枪”)或压力介导的递送(参见，例如，美国专利第5,922,687号)。
本发明的免疫原性肽也可以通过病毒载体或细菌载体来表达。合适的表达载体的实例包括减毒的病毒宿主，诸如痘苗或禽痘。这种方法涉及痘苗病毒的使用，例如，用作表达编码所述肽的核苷酸的载体。当引入宿主时，所述重组痘苗病毒表达所述免疫原性肽，并且由此引发免疫应答。可用于免疫方案的痘苗载体和方法在美国专利第4,722,848号中描述。另一合适载体是BCG(卡介苗(Bacille Calmette Guerin))。BCG载体在Stover CK，等，(1991)Nature 351：456-60中描述。可用于治疗施用或免疫的多种其它载体，例如，腺病毒和腺伴随病毒载体、逆转录病毒载体、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)载体、脱毒炭疽毒素载体等是本领域已知的。参见，例如，Shata MT，等，(2000)Mol.Med.Today 6：66-71；Shedlock DJ and Weiner DB.，等，(2000)J.Leukoc.Biol.68：793-806；和Hipp JD，等，(2000)In Vivo 14：571-85。
本发明还提供使用一种或多种本发明的肽诱导抗原呈递细胞的方法。所述抗原呈递细胞可以这样诱导，通过从外周血单核细胞诱导树突细胞，再用一种或多种本发明的肽在体外、回体或在体内接触(刺激)它们。当向受试者施用本发明的肽时，受试者体内诱导生成固定有本发明的肽的抗原呈递细胞。或者，可以在将本发明的肽固定至抗原呈递细胞之后，将所述细胞作为疫苗施用于受试者。例如，回体的施用可以包括下列步骤：
a：从受试者收集抗原呈递细胞，和
b：将步骤a的抗原呈递细胞与本发明的肽接触。
可以将通过步骤b获得的抗原呈递细胞作为疫苗施用给受试者。
本发明还提供用于诱导具有高水平的细胞毒性T细胞诱导能力的抗原呈递细胞的方法，其中所述方法包括在体外向抗原呈递细胞转移基因的步骤，所述基因由编码一种或多种本发明的肽的多核苷酸构成。引入的基因可以是DNA或RNA的形式。关于引入的方法，没有特殊的限制，本领域常规进行的多种方法，诸如脂质转染法、电穿孔和磷酸钙方法可以适用。更具体地，转染可以如Reeves ME，等，(1996)Cancer Res.，56：5672-7.；Butterfield LH，等，(1998)J.Immunol.，161：5607-13.；Boczkowski D，等，(1996)J.Exp.Med.，184：465-72.；国际公布的日文翻译公布特表2000-509281号中所述来进行。通过将基因转移至抗原呈递细胞中，基因在所述细胞中进行转录、翻译等，然后由I类或II类MHC加工获得的蛋白，再通过呈递途径以呈递部分肽。
本发明进一步提供使用一种或多种本发明的肽诱导CTL的方法。当本发明的肽被施用给受试者时，受试者体内诱导出CTL，由此增强靶向表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞例如癌细胞的免疫系统的强度。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。或者，本发明的肽可以在回体的治疗方法的背景下使用，其中用一种或多种本发明的肽在体外接触(刺激)源自受试者的抗原呈递细胞和CD8阳性细胞或外周血单个核白细胞，然后，在诱导CTL之后，将细胞返回受试者。例如，所述方法可以包括以下步骤：
a：从受试者收集抗原呈递细胞，
b：将步骤a的抗原呈递细胞与本发明的肽接触，
c：将步骤b的抗原呈递细胞与CD8+T细胞混合并且进行共培养从而诱导细胞毒性T细胞，和
d：从步骤c的共培养物收集CD8+T细胞。
步骤d获得的具有细胞毒活性的CD8+T细胞可以作为疫苗向受试者施用。
本发明进一步提供使用本发明的肽产生活化的细胞毒性T细胞的方法。例如，所述方法可以包括以下步骤：
a：从受试者收集T细胞，和
b：将T细胞与以下肽接触。
(1)选自下组的小于约15个氨基酸的分离的肽：具有SEQ ID NOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254和255的氨基酸序列的肽。
(2)具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中所述肽具有选自SEQ IDNOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254和255的氨基酸序列，其中取代、缺失或添加了1个、2个或几个氨基酸。
本发明还提供使用本发明的肽产生APC的方法，所述APC具有诱导活化T细胞的能力。例如，所述方法可以包括将抗原呈递细胞与所述肽接触以产生在表面呈递所述肽和HLA抗原的抗原呈递细胞的步骤。
在本发明的上下文中，“活化的细胞毒性T细胞”诱导IFN-γ产生、IFN-γ释放和肿瘤细胞的死亡。
本发明进一步提供使用本发明的肽诱导的分离的细胞毒性T细胞。所述细胞毒性T细胞是通过用呈递一种或多种本发明的肽的抗原呈递细胞进行刺激而被诱导的，优选源自作为治疗和/或预防的靶的受试者，并且可以单独施用或与其它药物组合施用，所述其它药物包括一种或多种本发明的肽或具有抗肿瘤活性的外来体。获得的细胞毒性T细胞特异性地针对呈递本发明的肽、或优选呈递与诱导所用的肽相同的肽的细胞起作用。靶细胞可以是内源表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞，或是用MPHOSPH1和/或DEPDC1基因转染的细胞。由于本发明的肽的刺激而在细胞表面呈递这些肽的细胞也可成为攻击的靶。
本发明还提供呈递HLA抗原与一种或多种本发明的肽形成的复合物的抗原呈递细胞。这些抗原呈递细胞是通过与本发明的肽或编码这些肽的核苷酸接触而获得的，优选源自作为治疗和/或预防的靶的受试者，并且能够作为疫苗单独施用或与其它药物组合施用，所述其它药物包括本发明的肽、外来体或细胞毒性T细胞。
本发明还提供组合物和使用该组合物的方法，所述组合物包含编码能够形成T细胞受体(TCR)亚基的多肽的核酸。TCR亚基能够形成TCR，TCR赋予T细胞对呈递MPHOSPH1或DEPDC1的肿瘤细胞的特异性。通过使用本领域已知的方法，可以鉴定用一种或多种本发明的肽诱导的CTL的TCR亚基α链和β链的核酸(WO2007/032255和Morgan等，J Immunol，171，3288(2003))。衍生的TCR优选以高亲和力(avidity)结合展示MPHOSPH1或DEPDC1肽的靶细胞，并且任选地在体内和体外介导对呈递MPHOSPH1或DEPDC1肽的靶细胞的有效杀伤。
可以将编码TCR亚基的核酸纳入合适的载体例如逆转录病毒载体。这些载体是本领域熟知的。通常可以将所述核酸或包含它们的载体转移至T细胞中，所述T细胞优选来自患者。有利地，本发明提供现成组合物(off-the-shelfcomposition)，利用该组合物能够快速地修饰患者自身的T细胞(或另一哺乳动物的T细胞)以迅速且简单地产生具有卓越的癌细胞杀伤性质的修饰T细胞。
同样，本发明提供通过用核酸转导来制备的CTL，所述核酸编码与MPHOSPH1或DEPDC1肽(例如在HLA-A24或HLA-A2的背景下，SEQ IDNOs：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255)结合的TCR亚基多肽。经转导的CTL能够在体内归巢于(home to)癌细胞，并且通过已知的体外培养方法扩增(例如，Kawakami等，J Immunol.，142，3452-3461(1989))。可以使用本发明的T细胞来形成可用于在需要治疗或保护的患者中治疗或预防癌症的免疫原性组合物(WO2006/031221)。
在本发明的上下文中，术语“疫苗”(也称为免疫原性组合物)指当接种入动物中时诱导抗肿瘤免疫性或抑制癌症的物质。根据本发明，提出具有SEQ ID NO：7、8或12的氨基酸序列的多肽是HLA-A24限定性表位肽(restricted epitope peptide)，并且提出具有SEQ ID NO：9、10、11、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的氨基酸序列的多肽是HLA-A2限定性表位肽，所述限定性表位肽可以诱导针对表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞例如表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的癌细胞的强力且特异性的免疫应答。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。因此，本发明还包括使用具有SEQ ID NO：7、8、9、10、11、12、192、195、197、209、225、226、228、230、240、241、243、244、249、253、254或255的氨基酸序列或其变体(即，包括1个、2个或几个氨基酸的取代、缺失或添加)的多肽诱导抗肿瘤免疫的方法。概括而言，抗肿瘤免疫包括以下列为例的免疫应答：
-针对包含表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞的肿瘤的细胞毒性淋巴细胞的诱导，
-识别包含表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞的肿瘤的抗体的诱导，和
-抗肿瘤细胞因子产生的诱导。
因此，当某种肽在接种至动物中时诱导这些免疫应答中的任何一种，则判定所述肽具有诱导抗肿瘤免疫的效果。肽对抗肿瘤免疫的诱导可以通过在体内或体外观察宿主中免疫系统对所述肽的应答来检测。
例如，用于检测细胞毒性T淋巴细胞的诱导的方法是公知的。进入活体的外来物质通过抗原呈递细胞(APCs)的作用被呈递给T细胞和B细胞。以抗原特异性方式响应于由APC呈递的抗原的T细胞由于所述抗原的刺激而分化成细胞毒性T细胞(也称为细胞毒性T淋巴细胞或CTL)，然后增殖；这种过程在本文称为T细胞的“活化”。因此，由特定肽造成的CTL诱导，可以通过将所述肽由APC呈递给T细胞并且检测对CTL的诱导来加以评估。此外，APC具有活化CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞和NK细胞的效果。由于CD4+T细胞在抗肿瘤免疫中也很重要，可以利用这些细胞的活化作用作为指示(indicator)来评估所述肽的抗肿瘤免疫诱导作用。
使用树突细胞(DC)作为APC来评估CTL诱导作用的方法是本领域熟知的。DC是在APC中具有最强CTL诱导作用的代表性APC。在这种方法中，最初将受试多肽与DC接触，然后将这种DC与T细胞接触。在与DC接触之后检测到对感兴趣的细胞具有细胞毒性作用的T细胞，表明受试多肽具有诱导细胞毒性T细胞的活性。针对肿瘤的CTL活性可以，例如，使用51Cr-标记的肿瘤细胞的裂解作为指示来检测。或者，公知使用3H-胸苷摄取活性或LDH(乳糖脱氢酶)释放作为指示项来评估肿瘤细胞的损害程度。此外，也可以通过测量在携带固定化肽的抗原呈递细胞的存在下由CTL产生并释放的IFN-γ来检测，所述测量通过用抗IFN-γ抗体使IFN-γ显现来进行，诸如ELISPOT测定法。
除了DC之外，外周血单个核细胞(PBMCs)也可用作APC。据报道通过在GM-CSF和IL-4存在下培养PBMC使其对CTL的诱导增强。类似地，已经证明CTL可通过在钥孔血蓝蛋白(KLH)和IL-7存在下培养PBMC来诱导。
通过这些方法确认具有CTL诱导活性的受试多肽是具有DC活化作用并且继而具有CTL诱导活性的多肽。因此，诱导针对肿瘤细胞的CTL的多肽可用作针对与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)的疫苗。此外，通过与所述多肽接触而获得了诱导针对与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病(例如癌症)的CTL的能力的APC可用作针对所述疾病的疫苗。此外，由于APC呈递多肽抗原而获得了细胞毒性的CTL也可用作针对与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病(例如癌症)的疫苗。这些利用APC和CTL所致的抗肿瘤免疫，用于治疗与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病(例如癌症)的治疗方法，称作细胞免疫疗法。预期的癌症包括，但不限于，膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC、软组织肿瘤。
通常，在将多肽用于细胞免疫疗法时，可以通过组合多种具有不同结构的多肽并且将它们与DC接触来增加CTL诱导的效率。因此，当用蛋白片段刺激DC时，使用多种类型片段的混合物是有利的。
多肽对抗肿瘤免疫的诱导可以通过观察抗肿瘤抗体产生的诱导来进一步确认。例如，当在用多肽免疫的实验动物中诱导产生了抗所述多肽的抗体，并且肿瘤细胞的生长、增殖和/或转移受到这些抗体的抑制时，则确定所述多肽可诱导抗肿瘤免疫性。
抗肿瘤免疫性可以通过施用本发明的疫苗来诱导，并且抗肿瘤免疫的诱导可用于治疗和预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病，例如癌症。与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)的发病的治疗或预防可以包括抑制表达MPHOSPH1和/或DEPDC1的细胞(例如癌细胞)的生长，使这些细胞退化(involution)，和抑制这些细胞例如癌细胞的发生。患有与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关疾病(例如癌症)的个体的病死率的降低，血液中疾病标志物(marker)的减少，伴随疾病的可检测症状的减轻等也包括在疾病(例如癌症)的治疗或预防中。这些治疗和预防效果优选在统计学上是显著的，例如，在5％或更低的显著水平观察，其中将针对MPHOSPH1和/或DEPDC1相关疾病(例如癌症)的疫苗的治疗或预防效果与未施用疫苗的对照相比。例如，斯氏t检验、Mann-Whitney U检验或ANOVA可以用于测定统计学显著性。
由于(in that)本发明提供用于治疗或预防与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病(例如癌症)的方法，可以向患有所述疾病或有风险发生(或易患)所述疾病的受试者预防性或治疗性地施用所述治疗化合物或组合物。这样的受试者可以使用标准临床方法来鉴定。在本发明的上下文中，预防施用发生在明显的疾病临床症状显现之前，由此预防疾病或病症或者延迟它的发展。在医学领域背景下，术语“预防”包括降低疾病病死率或发病率负荷(burden)的任何活性。预防可以发生在初级、次级和三级预防水平。初级预防避免疾病的发生，而次级和三级水平的预防包括以预防疾病进展和症状出现为目的的活动，以及通过恢复功能和减少疾病相关的并发症来降低已患疾病影响的活动。
在本发明的上下文中，术语“有效的(efficacious)”指治疗导致受试者中癌症大小、普遍性(prevalence)或转移潜力的降低。当预防性施用治疗时，“有效的”意思是治疗延迟或防止非癌(non cancer)的发生或减轻癌症的临床症状。对癌症的评估可以使用标准临床规程进行。另外，治疗的有效性可以联合任何用于诊断或治疗癌症的已知方法来测定。例如，癌症可以通过组织病理学诊断或通过鉴定症状性异常来诊断。
上述具有免疫学活性的肽，或编码这样的肽的多核苷酸或载体，可以与佐剂组合。佐剂指当与具有免疫学活性的肽一起(或相继)施用时，使针对所述肽的免疫应答增强的化合物。合适的佐剂的实例包括霍乱毒素、沙门菌毒素(salmonella toxin)、明矾等，但是不限于此。另外，本发明的疫苗可以适当地与药学可接受载体组合。这些载体的实例是无菌水、生理盐水、磷酸盐缓冲液、培养液(culture fluid)等。另外，疫苗可以按照需要含有稳定剂、悬剂、防腐剂、表面活性剂等。所述疫苗可以系统施用或局部施用。疫苗施用可以通过单次施用进行或通过多次施用加强(boost)。
当使用APC或CTL作为本发明的疫苗时，与MPHOSPH1和/或DEPDC1过表达相关的疾病例如癌症可以例如通过回体方法来治疗或预防。更具体地，收集接受治疗或预防的受试者的PBMC，在体外与本发明的肽接触。在诱导APC或CTL之后，可以将细胞施用给受试者。APC也可以通过以回体方式将编码所述肽的载体引入PBMC来诱导。体外诱导的APC或CTL在施用之前可以加以克隆。通过克隆并培养具有高度的靶细胞破坏活性的细胞，可以更有效地实施细胞免疫疗法。另外，以这种方式分离的APC和CTL可以用于这样的细胞免疫疗法，该细胞免疫疗法不仅可针对细胞所来源的个体，还可以针对其它个体中相似类型的疾病。
在以下实施例中将描述本发明的多个方面，这些实施例旨在说明本发明并帮助本领域普通技术人员进行和使用本发明。所述实施例不意在以任何方式另外限制本发明的范围。
尽管在实施或试验本发明时可以使用与本文所述类似或等同的方法和材料，但是下文将描述几种合适的方法和材料。
实施例
接下来，通过以下实施例来示例(并非限制)本发明。然而，本文描述的材料和方法等仅为说明本发明的几个方面，而不意欲以任何形式限制本发明的范围。同样，在本发明的实施或检验中可以使用与本文所述类似或等同的方法和材料等。
实施例1
材料和方法
细胞系
A24LCL细胞(HLA-A24/24)、人的类B淋巴母细胞细胞系(humanB-lymphoblastoid cell line)、T2细胞和COS7购自ATCC。
选择源自MPHOSOH1和DEPDC1的肽的候选物
使用结合预测软件″BIMAS″(bimas.dcrt.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken_parker_comboform)(Parker KC，等，(1994)J Immunol.；152(1)：163-75.；Kuzushima K，等，(2001)Blood.；98(6)：1872-81.)预测了与HLA-A*2402和HLA-A*0201分子结合的源自MPHOSOH1或DEPDC1的9聚肽或10聚肽。这些肽依照标准固相合成方法由Sigma(Sapporo，Japan)合成，并且通过反相HPLC纯化。肽的纯度(＞90％)和身份分别通过分析型HPLC和质谱测定。将肽以20mg/ml溶解在二甲亚砜(DMSO)中并且贮藏在-80℃。
体外CTL诱导
使用源自单核细胞的树突细胞(DC)作为抗原呈递细胞(APC)来诱导针对HLA上呈现的肽的CTL应答。DC是如其它文献中所述在体外生成的(NukayaI等，(1999)Int.J.Cancer 80，92-7.，Tsai V等，(1997)J.Immunol158：1796-802.)。简言之，用Ficoll-Paque(Pharmacia)溶液从正常志愿者(HLA-A*2402和/或HLA-A*0201)分离外周血单个核细胞(PBMC)，通过粘附于塑料组织培养瓶(Becton Dickinson)对所述外周血单个核细胞进行分离，从而将它们富集成单核细胞级分。将富集的单核细胞群体在1000U/mlGM-CSF(Genzyme)和1000U/mlIL-4(Genzyme)存在下在含2％热灭活自体血清(AS)的AIM-V(Invitrogen)中培养。培养7天之后，将生成细胞因子的DC在AIM-V中用20mcg/ml合成肽在3mcg/ml β2-微球蛋白存在下于20℃冲击4小时。然后将这些肽冲击过的DC用MMC(30mcg/ml，进行30分钟)灭活，并且以1∶20比例与自体CD8+T细胞混合，其中所述自体CD8+T细胞是通过用Dynabeads M-450CD8(Dynal)和DETACHa BEADTM(Dynal)的阳性选择获得的。这些培养物放入(set up in)48孔平板(Corning)中；每孔在0.5ml AIM-V/2％AS中含有1.5×104个经肽冲击的DC、3×105个CD8+T细胞和10ng/mlIL-7(Genzyme)。三天之后，对这些培养物补充IL-2(CHIRON)至终浓度为20IU/ml。在第7天和第14天，进一步用经肽冲击的自体DC再次刺激所述T细胞。每次均通过与上文所述相同的方法制备DC。在第21天，在第3轮肽冲击之后，用经肽冲击的A24LCL细胞或T2细胞来测试CTL。
CTL扩增流程
使用类似于Riddell SR，等(Walter EA等，(1995)N Engl J Med333：1038-44.；Riddel SR，等，(1996)Nature Med.2：216-23.)所述的方法在培养中扩增CTL。将总共5×104个CTL在40ng/ml抗CD3单克隆抗体(Pharmingen)存在下重悬在通过MMC灭活的含两种人类B淋巴母细胞细胞系的25ml AIM-V/5％AS中。培养开始后的次日，向培养物添加120IU/mlIL-2。在第5、8和11天用含30IU/ml IL-2的新鲜AIM-V/5％AS为培养物补料。
CTL克隆的建立
在96孔圆底微量滴定板(Nalge Nunc International)中稀释至每孔具有0.3、1和3个CTL。将CTL与7×104个细胞/孔的两种人类B淋巴母细胞细胞系、30ng/ml抗CD3抗体和125U/ml IL-2一起在总共150mcl/孔的含5％AS的AIM-V中培养。10天之后向培养基添加50mcl/孔的IL-2，从而使IL-2终浓度达到125U/ml。在第14天测试CTL的CTL活性，并且使用与上述相同的方法扩增CTL克隆。
特异性CTL活性
为了检验特异性CTL活性，进行了IFN-γELISPOT测定和IFN-γELISA。
简言之，制备了经肽冲击的A24-LCL或T2细胞(1×104/孔)作为刺激细胞。使用48孔中培养的细胞或有限稀释后的CTL克隆作为应答细胞。按照生产流程(under manufacture procedure)进行IFN-γELISPOT测定和ELISA。
细胞培养和转染
建立了用Epstein Bar病毒转化的HLA-A24B-LCL(A24LCL)。Jiyoye、EB-3、COS7、HT1376、RT-4和J82购自美国典型培养物保藏中心(Rockville，MD)。将A24LCL、Jiyoye和EB-3维持在含10％胎牛血清(GEMINIBio-Products)和1％抗生素溶液(Sigma)的RPMI1640中。将COS7、HT1376、RT-4和J82维持在适合的培养基和抗生素中。COS7和HEK的转染使用FUGENE6(Roche)进行。HEK-A2细胞，作为表达HLA-A*0201分子的稳定克隆，通过pcDNA6.2-HLA-A2质粒转染建立，并且通过有限稀释方法在5mcg/ml Blastcidin S存在下分离。
表位肽在BALB/c小鼠中的免疫原性
为了诱导肽特异性CTL，使用每只小鼠100ml疫苗混合物来提供免疫，所述混合物含有50mcl(100mcg)的HLA-A24限定性肽和50mcl IFA。在第0天将所述疫苗皮下注射至右胁进行第一次免疫，并且在第7天注射至左胁进行第二次免疫。在第14天，使用经接种小鼠的脾细胞，不加以任何体外刺激，作为应答细胞，并且以使用或未使用肽冲击的RLmale1细胞作为刺激细胞，进行IFN-γELISPOT测定。
结果
癌症中MPHOSPH1和DEPDC1的表达增强
使用cDNA微阵列从多种癌症获得的全局基因表达谱数据(global geneexpression profile data)揭示了MPHOSPH1(GenBank登录号NM_016195；SEQ ID No.1)和DEPDC1(GenBank登录号BM683578)(具有两种变体DEPDC1V1(SEQ ID Nos.3)和DEPDC1V2(SEQ ID No.5))的表达升高。与相应的正常组织相比，MPHOSPH1的表达在31例膀胱癌的30例中，36例乳腺癌的8例中，全部18例宫颈癌中，17例胆管细胞癌的5例中，31例CML的25例中，11例结肠直肠癌的6例中，14例胃癌的6例中，全部5例NSCLC中，全部7例淋巴瘤中，10例骨肉瘤的6例中，22例前列腺癌的7例中，18例肾癌的10例中和21例软组织肿瘤的15例中有效升高。与相应的正常组织相比，DEPDC1的表达在25例膀胱癌的23例中，在13例乳腺癌的6例中，全部12例宫颈癌中，全部6例胆管细胞癌中，4例CML的3例中，4例结肠直肠癌的2例中，全部6例NSCLC中，全部7例淋巴瘤中，14例骨肉瘤的10例中，24例前列腺癌的11例中，全部14例SCLC中和31例软组织瘤的22例中有效升高(表1)。
[表1]
在癌组织中观察到MPHOSPH1或DEPDC1与正常对应组织相比的存在上调的情况的比例
膀胱癌 乳腺癌 宫颈癌   胆管细胞癌 CML   结肠直肠癌 胃癌
  MPHOSPH1   30/31   8/36   18/18   5/17   25/31   6/11   6/14
  DEPDC1   23/25   6/13   12/12   6/6   3/4   2/4   -
NSCLC 淋巴瘤 骨肉瘤   前列腺癌 肾癌 SCLC   软组织肿瘤
  MPHOSPH1   5/5   7/7   6/10   7/22   10/18   -   15/21
  DEPDC1   6/6   7/7   10/14   11/24  -   14/14   22/31
源自MPHOSPH1或DEPDC1的HLA-A24和HLA-A2结合肽的预测
表2按照结合亲和力的顺序列出了MPHOSPH1的HLA-A*2402结合肽。表2A所列为源自MPHOSPH1的9聚肽，表2B所列为源自MPHOSPH1的10聚肽。
表3按照结合亲和力的顺序列出了MPHOSPH1的HLA-A*0201结合肽。表3A所列为源自MPHOSPH1的9聚肽，表3B所列为源自MPHOSPH1的10聚肽。
表4按照结合亲和力的顺序列出了DEPDC1V1和V2的HLA-A*2402结合肽。表4A所列为源自DEPDC1V1和V2的9聚肽，表4B所列为源自DEPDC1V1和V2的10聚肽。
表5按照结合亲和力的顺序列出了DEPDC1V1和V的HLA-A*0201结合肽。表5A所列为源自DEPDC1V1和V2的9聚肽，表5B所列为源自DEPDC1V1和V2的10聚肽。
[表2A]
源自MPHOSPH1的HLA-A*2402结合性9聚肽
起始位置说明从MPHOSPH1的N末端起的氨基酸编号。结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表2B]
源自MPHOSPH1的HLA-A*2402结合性10聚肽
起始位置说明自MPHOSPH1的N末端起的氨基酸编号。结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表3A]
源自MPHOSPH1的HLA-A*0201结合性9聚肽
Figure G2007800467286D00361
起始位置说明自MPHOSPH1的N末端起的氨基酸编号数。
结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表3B]
源自MPHOSPH1的HLA-A*0201结合性10聚肽
Figure G2007800467286D00371
起始位置说明自MPHOSPH1的N末端起的氨基酸编号数。
结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表4A]
源自DEPDC1的HLA-A*2402结合性9聚肽
起始位置说明自DEPDC1的N末端起的氨基酸编号数。
结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表4B]
源自DEPDC1的HLA-A*2402结合性10聚肽
Figure G2007800467286D00381
起始位置说明自DEPDC1的N末端起的氨基酸编号数。
结合得分源自“材料和方法”中描述的″BIMAS″。
[表5A]
源自DEPDC1的HLA-A*0201结合性9聚肽
Figure G2007800467286D00382
起始位置说明自DEPDC1的N末端起的氨基酸编号数。
结合得分源自材料和方法中描述的″BIMAS″。
[表5B]
源自DEPDC1的HLA-A*0201结合性10聚肽
Figure G2007800467286D00391
起始位置说明距DEPDC1的N末端的氨基酸数。
结合得分源自材料和方法中描述的″BIMAS″。
使用预测的来自MPHOSPH1的HLA-A*2402限定性肽刺激T细胞
根据上文“材料和方法”部分所说明的方案生成了源自MPHOSHP1(SEQ ID No：2)的那些肽的CTL。如通过IFN-γELISPOT测定法所评估的，得到的具有可检测特异性CTL活性的CTL示于图1A和图2A。在图1A中，用MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)刺激的4号孔中的细胞与对照相比显示了强力的IFN-γ产生。在图2A中，用MPHOSPH1-A24-10-278(SEQ IDNO：8)刺激的8号孔中的细胞与对照相比显示了强力的IFN-γ产生。然后将这些阳性孔中的细胞扩增并且进行有限稀释。如图1B(MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7))和图2B(MPHOSPH1-A24-10-278(SEQ ID NO：8))中所示，建立了针对经肽冲击的靶的特异性CTL活性高于针对未经肽冲击的靶的活性的CTL克隆。
用MPHOSPH1-A24-9-278(IYNEYIYDL(SEQ ID NO：7))(图3A)和MPHOSPH1-A24-10-278(IYNEYIYDLF(SEQ ID NO：8))(图3B)刺激的CTL克隆针对经肽冲击的靶显示了强力的特异性CTL活性，而对未经任何肽冲击的靶未显示任何显著的特异性CTL活性。这说明所述CTL克隆具有肽特异性细胞毒性。
针对表达MPHOSPH1的靶细胞的特异性CTL活性
检验了建立的针对这些肽生成的CTL克隆识别内源表达MPHOSPH1和HLA-A*2402的靶细胞的能力。用全长MPHOSPH1基因和HLA-A*2402分子二者转染的COS7是内源表达MPHOSPH1和HLA-A*2402的靶细胞的一种具体模型，使用通过MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)生成的CTL克隆作为效应细胞测试了针对这种COS7的特异性CTL活性。制备了用全长MPHOSPH1转染但未用HLA-A*2402转染的COS7，以及用HLA-A*2402转染但是未用全长MPHOSPH1转染的COS7作为对照。CTL克隆针对用MPHOSPH1和HLA-A24二者转染的COS7具有最高的特异性CTL活性。然而，该CTL克隆针对未用MPHOSPH1或HLA-A24转染的COS7未显示显著的特异性CTL活性(图4)。
这些结果清楚地表明，MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)与HLA-A24分子一起在靶细胞表面天然表达，并且被CTL所识别。
针对内源表达MPHOSPH1的膀胱癌细胞系的CTL活性
检验了建立的针对MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)肽生成的CTL克隆识别内源表达MPHOSPH1的肿瘤细胞的能力。使用针对MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)生成的CTL克隆作为效应细胞试验了针对内源表达MPHOSPH1和HLA-A24的HT1376细胞的CTL活性。使用内源表达MPHOSPH1但是不表达HLA-A24的J82细胞和RT-4细胞作为靶细胞。建立的CTL克隆针对表达MPHOSPH1和HLA-A24二者的HT1376细胞显示出高IFN-γ产生。另一方面，所述CTL针对表达MPHOSPH1但是不表达HLA-A24的J82和RT-4细胞未显示显著的CTL活性(图5)。这清楚地表明MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)肽与HLA-A24一起天然地移至(processed to)肿瘤细胞表面，并且被CTL所识别。
在BALB/c小鼠中使用MPHOSPH1-A24-9-278肽进行的体内CTL诱导
已知H-2Kd分子(小鼠I类MHC之一)具有类似于HLA-A24分子的肽锚基序(peptide anchor motif)，并且与HLA-A24限定性肽部分地交叉反应。其后发明人使用BALB/c小鼠进行MPHOSPH1-A24-9-278肽接种(H-2Kd)来检验了该肽是否在体内诱导CTL。在第0天和第7天将IFA缀合的肽皮下注射入BALB/c小鼠。在第14天，收集脾细胞并且作为应答细胞用于ELISPOT测定。与仅注射IFA的对照小鼠(nega1～3)相比，所有注射了肽的小鼠(Ani1～5)的脾细胞显示出强力的IFN-γ产生(图6)。这个数据表明MPHOSPH1-A24-9-278肽即使在体内也能够引发CTL应答。
使用预测的来自MPHOSPH1的HLA-A*0201限定性肽刺激T细胞
如图7中所示，通过IFN-γELISPOT测定法评估了得到的具有可检测的特异性CTL活性的CTL。如图7A中所示，用MPHOSPH1-A2-9-282(YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9))刺激的1号和5号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。如图7B中所示，用MPHOSPH1-A2-9-638(RLAIFKDLV(SEQ ID NO：10))刺激的8号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。如图7C中所示，用MPHOSPH1-A2-10-1714(TMSSsKLSNV(SEQ ID NO：11))刺激的4号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。
如图8A(MPHOSPH1-A2-9-282(SEQ ID NO：9))、图8B(MPHOSPH1-A2-9-638(SEQ ID NO：10))和图8C(MPHOSPH1-A2-10-1714(SEQ ID NO：9))中所示，扩增了阳性孔中的这些细胞，并且建立了针对用肽冲击的靶的特异性CTL活性高于针对未用肽冲击的靶的活性的CTL细胞系。
通过MPHOSPH1-A2-9-282(YIYDLFVPV(SEQ ID NO：9))刺激的CTL克隆(图9A和9B)针对用肽冲击的靶显示了强力的特异性CTL活性，而对未用任何肽刺激的靶没有任何显著的特异性CTL活性。
使用预测的来自DEPDC1的HLA-A*2402限定性肽刺激T细胞
根据上文“材料和方法”部分所述方案生成了源自DEPDC1的那些肽的CTL。如通过IFN-γELISPOT测定法所评估的，得到的具有可检测特异性CTL活性的CTL示于图10。如图10A中所示，用DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))刺激的10号孔中的细胞与对照相比显示了强力的IFN-γ产生。因此，将阳性孔中的细胞扩增并且进行有限稀释。如图10B(DEPDC1-A24-9-294(SEQ ID NO：12))中所示，建立了针对经肽冲击的靶的特异性CTL活性高于针对未经肽冲击的靶的活性的CTL克隆。通过DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))刺激的CTL克隆(图11)针对经肽冲击的靶显示了强力的特异性CTL活性，而对未经任何肽冲击的靶没有任何显著的特异性CTL活性。该结果表明所述CTL克隆具有肽特异性细胞毒性。
针对表达DEPDC1和HLA-A*2402的靶细胞的特异性CTL活性
检查了建立的针对这些肽生成的CTL克隆识别内源表达DEPDC1和HLA-A*2402的靶细胞的能力。用全长DEPDC1基因和HLA-A*2402分子二者转染的COS7充当内源表达DEPDC1和HLA-A*2402的细胞的一种具体模型，使用通过DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))生成的CTL克隆作为效应细胞测试了针对这种COS7的特异性CTL活性。制备了用全长DEPDC1转染但未用HLA-A*2402转染的COS7，以及用HLA-A*2402转染但是未用全长DEPDC1转染的COS7作为对照。CTL克隆针对用DEPDC1和HLA-A24二者转染的COS7显示了高度的特异性CTL活性。然而，该CTL克隆针对未用MPHOSPH1或HLA-A24转染的COS7未显示显著的特异性CTL活性(图12)。
这些结果清楚地表明，DEPDC1-A24-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))与HLA-A24分子一起在靶细胞表面天然表达，并且被CTL所识别。
针对内源表达DEPDC1的膀胱癌细胞系的CTL活性
检验了建立的针对DEPDC1-A24-9-294肽生成的CTL克隆识别内源表达DEPDC1的肿瘤细胞的能力。使用针对DEPDC1-A24-9-294生成的CTL克隆作为效应细胞试验了针对内源表达DEPDC1和HLA-A24的HT1376细胞的CTL活性。使用内源表达DEPDC1但是不表达HLA-A24的J82细胞和RT-4细胞作为靶细胞。建立的CTL克隆针对表达DEPDC1和HLA-A24二者的HT1376细胞显示出高IFN-γ产生。另一方面，所述CTL针对表达DEPDC1但是不表达HLA-A24的J82和RT-4细胞未显示显著的CTL活性(图13)。这清楚地表明DEPDC1-A24-9-294与HLA-A24分子一起天然地移至肿瘤细胞表面，并且被CTL所识别。
在BALB/c小鼠中使用DEPDC1-A24-9-294肽进行的体内CTL诱导
已知H-2Kd分子(小鼠I类MHC之一)具有类似于HLA-A24分子的肽锚基序，并且与HLA-A24限定性肽部分地交叉反应。其后发明人使用BALB/c小鼠通过用DEPDC1-A24-9-294肽接种(H-2Kd)检验了这种肽是否在体内诱导CTL。在第0天和第7天将IFA缀合的肽皮下注射入BALB/c小鼠。在第14天，收集脾细胞并且作为应答细胞用于ELISPOT测定。与仅注射IFA的对照小鼠(nega1、2)相比，所有注射了肽的小鼠(Ani1～5)的脾细胞显示出强力的IFN-γ产生(图14)。这个数据表明DEPDC1-A24-9-294肽即使在体内也能够引发CTL应答。
使用预测的来自DEPDC1的HLA-A*0201限定性肽刺激T细胞
图15和表6中所示为通过IFN-γELISPOT测定法筛选时得到的具有可检测的特异性CTL活性的CTL。用DEPDC1-A02-10-644((SLMIHTFSRCSEQ ID NO：240))刺激的4号和7号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-575(SLLPASSMLT(SEQ ID NO：241))刺激的2号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-506(QLCRSQSLLL(SEQ ID NO：243))刺激的7号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-765(KQFQKEYPLI(SEQID NO：244))刺激的1号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-395(IMGGSCHNLI(SEQ ID NO：249))刺激的1号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-224(NMANTSKRGV(SEQ ID NO：253))刺激的1号和2号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-297(ELFVNILGL(SEQ IDNO：226))刺激的4号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-296(YELFVNILGL(SEQ ID NO：254))刺激的3号和4号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-301(NILGLLQPHL(SEQ ID NO：255))刺激的2号、3号、5号和7号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-598(LLQPHLERV(SEQ ID NO：192))刺激的6号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-619(LLMRMISRM(SEQ ID NO：195))刺激的6号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-290(LLTFEYYEL(SEQ ID NO：197))刺激的2号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-563(RLCKSTIEL(SEQ ID NO：209))刺激的5号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))刺激的1号和3号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。用DEPDC1-A02-10-674(FLMDhHQEIL(SEQ ID NO：228))刺激的1号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。最后，用DEPDC1-A02-10-302(ILVVcGYITV(SEQ ID NO：230))刺激的2号和6号孔中的细胞与对照相比显示出强力的IFN-γ产生。
通过DEPDC1-A02-10-296(YELFVNILGL(SEQ ID NO：254))和DEPDC1-A02-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))刺激的CTL细胞系(图16)针对经过肽冲击的靶显示了强力的特异性CTL活性，而针对未经任何肽冲击的靶未显示任何显著的特异性CTL活性。这表明所述CTL克隆具有肽特异性细胞毒性。
[表6]
候选的来自DEPDC1的HLA-A*0201限定性肽
Figure G2007800467286D00441
针对表达DEPDC1和HLA-A*0201的靶细胞的特异性CTL活性
检验了建立的针对DEPDC1-A02-10-296肽(YELFVNILGL(SEQ ID NO：254))和DEPDC1-A02-9-653肽(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))生成的CTL克隆识别内源表达DEPDC1和HLA-A2的靶细胞的能力。首先，我们为了有效地测定特异性CTL应答建立了组成型表达HLA-A*0201的HEK293细胞系(HEK-A2)。用全长DEPDC1基因转染的HEK-A2细胞是表达DEPDC1和HLA-A2的靶细胞的一种具体模型，使用建立的通过DEPDC1-A02-10-296(YELFVNILGL(SEQ ID NO：254))或DEPDC1-A02-9-653(CVLCCAEEV(SEQ ID NO：225))生成的CTL细胞系作为效应细胞测试了针对这种HEK-A2细胞的特异性CTL活性。制备了用表达模拟物(Mock)的载体转染的HEK-A2和用源自DEPDC1的非对应肽(no corresponding peptide derived fromDEPDC1)冲击的HEK-A2作为阴性对照。建立的CTL细胞系针对DEPDC1转染的HEK-A2显示出特异性CTL活性。另一方面，该CTL细胞系针对用表达模拟物的载体转染的HEK-A2和用DEPDC1-A02-9-674肽或DEPDC1-A02-9-462肽刺激的HEK-A2未显示显著的特异性CTL活性(图17)。这清楚地表明DEPDC1-A02-10-296和DEPDC1-A02-9-653与HLA-A2分子一起天然移至靶细胞表面并且被CTL所识别。
抗原肽的同源性分析
针对本发明的肽建立的CTL显示了强力的特异性CTL活性。这提示MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)、MPHOSPH1-A24-10-278(SEQ IDNO：8)、MPHOSPH1-A2-9-282(SEQ ID NO：9)、MPHOSPH1-A2-9-638(SEQID NO：10)、MPHOSPH1-A2-10-1714(SEQ ID NO：11)、DEPDC1-A24-9-294(SEQ ID NO：12)、DEPDC1-A2-9-589(SEQ ID NO：192)、DEPDC1-A2-9-619(SEQ ID NO：195)、DEPDC1-A2-9-290(SEQ ID NO：197)、DEPDC1-A2-9-563(SEQ ID NO：209)、DEPDC1-A2-9-653(SEQ ID NO：225)、DEPDC1-A2-10-674(SEQ ID NO：228)、DEPDC1-A2-10-302(SEQ ID NO：230)、DEPDC1-A02-10-644(SEQ ID NO：240)、DEPDC1-A02-10-575(SEQ IDNO：241)、DEPDC1-A02-10-506(SEQ ID NO：243)、DEPDC1-A02-10-765(SEQ ID NO：244)、DEPDC1-A02-10-395(SEQ ID NO：249)、DEPDC1-A02-10-224(SEQ ID NO：253)、DEPDC1-A02-9-297(SEQ ID NO：226)、DEPDC1-A02-10-296(SEQ ID NO：254)和DEPDC1-A02-10-301(SEQID NO：255)的序列可能与源自其它已知使人免疫系统致敏的分子的肽同源。为了排除这种可能性，使用BLAST算法(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/blast.cgi)以上述肽序列作为查询项进行了同源性分析。没有发现显著的序列同源性。
这些结果提示MPHOSPH1-A24-9-278(SEQ ID NO：7)、MPHOSPH1-A24-10-278(SEQ ID NO：8)、MPHOSPH1-A2-9-282(SEQ ID NO：9)、MPHOSPH1-A2-9-638(SEQ ID NO：10)、MPHOSPH1-A2-10-1714(SEQID NO：11)、DEPDC1-A24-9-294(SEQ ID NO：12)、DEPDC1-A2-9-598(SEQID NO：192)、DEPDC1-A2-9-619(SEQ ID NO：195)、DEPDC1-A2-9-290(SEQID NO：197)、DEPDC1-A2-9-563(SEQ ID NO：209)、DEPDC1-A2-9-653(SEQID NO：225)、DEPDC1-A2-10-674(SEQ ID NO：228)、DEPDC1-A2-10-302(SEQ ID NO：230)DEPDC1-A02-10-644(SEQ ID NO：240)、DEPDC1-A02-10-575(SEQ ID NO：241)、DEPDC1-A02-10-506(SEQ ID NO：243)、DEPDC1-A02-10-765(SEQ ID NO：244)、DEPDC1-A02-10-395(SEQ IDNO：249)、DEPDC1-A02-10-224(SEQ ID NO：253)、DEPDC1-A02-9-297(SEQID NO：226)、DEPDC1-A02-10-296(SEQ ID NO：254)和DEPDC1-A02-10-301(SEQ ID NO：255)的序列是独特的，因此它们引起不期望的对任何不相关分子的免疫应答的风险较低。
讨论
对新的TAA，尤其是诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的TAA的鉴定，为人们进一步开发肽接种策略在多种类型的癌症中的临床应用提供了保证(Boon T.等，(1996)J Exp Med 183：725-9.；van der Bruggen P等，(1991)Science 254：1643-7.；Brichard V等，(1993)J Exp Med 178：489-95.；KawakamiY等，(1994)J Exp Med 180：347-52.；Shichijo S等，(1998)J Exp Med187：277-88.；Chen YT等，(1997)Proc.Natl.Acd.Sci.USA，94：1914-8.；HarrisCC.，(1996)J Natl Cancer Inst 88：1442-5.；Butterfield LH等，(1999)Cancer Res59：3134-42.；Vissers JL等，(1999)Cancer Res 59：5554-9.；van der Burg SH等，(1996)J.Immunol 156：3308-14.；Tanaka F等，(1997)Cancer Res 57：4465-8.；Fujie T等，(1999)Int J Cancer 80：169-72.；Kikuchi M等，(1999)Int J Cancer 81：459-66.；Oiso M等，(1999)Int J Cancer 81：387-94.)。
DNA微阵列技术能够揭示恶性细胞的基因表达综合谱(Lin YM，等，Oncogene.2002Jun 13；21：4120-8.；Kitahara O，等，Cancer Res.2001May1；61：3544-9.；Suzuki C，等，Cancer Res.2003Nov 1；63：7038-41.；Ashida S，Cancer Res.2004 Sep 1；64：5963-72.；Ochi K，等，Int J Oncol.2004Mar；24(3)：647-55.；Kaneta Y，等，Int J Oncol.2003Sep；23：681-91.；Obama K，Hepatology.2005 Jun；41：1339-48.；Kato T，等，Cancer Res.2005 Jul1；65：5638-46.；Kitahara  O，等，Neoplasia.2002 Jul-Aug；4：295-303.；Saito-Hisaminato A等，DNA Res 2002，9：35-45.)，并且可应用于鉴定潜在的TAA。在多种癌症中上调的转录物中，使用这些技术鉴定了两种分别称为MPHOSPH1和DEPDC1的新的人基因。
如上所述，MPHOSPH1和DEPDC1在多种癌症中过表达，但是在正常组织中显示的表达极低。此外，已经证明了这些基因具有与细胞增殖相关的重要功能(参见PCT/JP2006/302684)。因此，源自MPHOSPH1和DEPDC1的肽能够充当TAA表位，进而能够用于诱导显著且特异性的针对癌细胞的免疫应答。
因此，由于MPHOSPH1和DEPDC1是新的TAA，所以使用这些表位肽的疫苗可用作针对多种癌或表达这些分子的其它疾病的免疫治疗剂。
实施例2
材料和方法
肽和佐剂
合成的GMP级肽购自Neo Multi Peptide System(MPS)(San Diego，CA)。作为佐剂，使用不完全弗氏佐剂(IFA)(MONTANIDE*ISA51)。用1mg IFA乳化1mg适合的肽。
抗原表达
发明人进行了免疫组织化学分析。将获得自外科手术或活检的来自膀胱癌的肿瘤细胞或肿瘤组织用各种MPHOSPH1和DEPDC1特异性多克隆抗体染色。染色的方案在Human Genome Center，Institute for Medical Science，theUniversity of Tokyo(东京大学医学科学研究所人类基因组中心)建立，如先前所述(Kanehira M等Cancer Res.；67(7)：3276-3285，2007.，Kanehira M等Oncogene.2007Apr 23；[在印刷之前以电子形式公开])。HLA-A*2402表达的试验在SRL(Tachikawa，Japan)进行。
纳入试验的患者
纳入试验的标准如下；
1.不能手术治疗的复发性膀胱癌患者，先前经过标准化疗治疗并且失败。
2.按日本标准的表现状态(performance status)为0或1的患者。
3.20周岁至80周岁的患者
4.患有在治疗前能够由图像检查(CT/MRI)识别的原发性肿瘤或转移的患者，不考虑RECIST指标(RECIST guideline)
5.前次治疗(外科手术、化疗、放射治疗、热疗、其它免疫疗法等)过后超过4周的患者
6.预测超过3个月的预后的患者
7.具有骨髓功能(WBC大于2000，小于15000，血小板大于50000)、肝功能(GOT小于150，GPT小于150，T-bil小于3.0)、肾功能的患者(Cr小于3.0)
8.具有HLA-A*2402的患者
9.患者的肿瘤表达MPHOSPH1和/或DEPDC1
排除的标准如下：
1.妊娠中的患者
2.实施母乳喂养的患者
3.有妊娠意愿的患者
4.患有不可控制的感染的患者
5.在临床试验期间必需以下药物的患者
系统施用类固醇
系统施用免疫抑制剂
6.医生或首席研究者认为不应纳入在此项试验中的患者
方案
对纳入试验的具有HLA-A*2402且其肿瘤表达M期磷蛋白1(MPHOSPH1)和/或含DEP结构域的蛋白1(DEPDC1)的膀胱癌患者，用HLA-A*2402限定性表位肽MPHOSPH1-9-278(IYNEYIYDL(SEQ ID NO：7))和/或DEPDC1-9-294(EYYELFVNI(SEQ ID NO：12))进行免疫。将每种肽与1mL不完全弗氏佐剂(IFA，MONTANIDE*ISA51)混合，每周一次皮下注射至腋窝或腹股沟的病灶(axillary or inguinal lesion)。四次注射定义为一疗程，然后在1个疗程之后为了进行免疫学和临床评估，抽取血液并且进行CT/MRI。
安全性评估
根据National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria version 3(国立癌症研究所-普通毒性标准第3版)(NCI-CTC ver.3)进行不良作用评估。
免疫学评估
这是本研究中的次要终点之一，我们确认是否产生了肽特异性CTL应答。如下测量特异性CTL应答；收集外周血单个核细胞，并且用适当的肽再次刺激。在第14天通过IFN-g ELISPOT测定法检验CTL应答。
抗肿瘤效果评估
根据RECIST标准进行临床响应的评估。
结果
表7显示了此项临床试验的总结。不存在严重的不良作用，除了病例3的2级疹(Grade 2 of exanthema)。获得了一例轻微响应(病例3)和一例混合响应(病例4)。5例中的4例表达MPHOSPH1，而全部5例均表达DEPDC1。
[表7]
Figure G2007800467286D00491
NT：未测试
病例2
在病例2中，将标准化疗失败的患有极晚期膀胱癌的72周岁女性纳入此项临床试验中。在图18中，她的肿瘤的抗原表达情况显示MPHOSPH1和DEPDC1均强烈表达。因此，我们为其接种了两种源自MPHOSPH1和DEPDC1的表位肽。病例2存在膀胱癌的局部复发。根据RECIST标准评价为稳定疾病(stable disease；SD)(图19)。
病例3
在病例3中，将标准化疗失败的患有极晚期膀胱癌的49周岁男性纳入此项临床试验中。仅DEPDC1为强烈表达(图20)。因此，我们仅为其接种了源自DEPDC1的表位肽。病例3具有膀胱癌的多处肺部转移。在肺部转移的右叶(图21)和左叶(图22)中，发展速率在接种之后降低。特别是肿瘤大小在三个疗程之后减小。图23显示了按照RECIST标准的抗肿瘤效果。其清楚地表明转移肿瘤的进展速率在接种之后降低。这说明通过使用源自DEPDC1的表位肽的接种获得了轻微响应。病例3中的免疫学评估在接种之前和之后测量了特异性CTL应答。在接种之后特异性CTL应答显示强烈(图24)。这清楚地说明由源自DEPDC1的表位肽诱导的CTL可以显示抗肿瘤效果。
病例4
在病例4中，将标准化疗失败的患有极晚期膀胱癌的74周岁男性纳入此项临床试验中。他的肿瘤表达MPHOSPH1和DEPDC1(图25)。因此，我们为其接种了两种源自MPHOSPH1和DEPDC1的表位肽。病例4存在膀胱癌的局部复发。在1个疗程的接种之后，按照RECIST标准肿瘤大小降低了20％(图26)。然而，在肺部出现了新的转移灶。这说明通过使用两种源自MPHOSPH1和DEPDC1的表位肽的接种获得了混合响应。
讨论
该临床试验的原理如下所述；
1.由于MPHOSPH1和DEPDC1在除睾丸之外的正常组织中表达，两种抗原均有高度的肿瘤特异性。
2.认为这些肽具有强免疫原性，因为通过这些表位肽建立了强力且特异性的CTL。
3.60％的日本人群体具有HLA-A*2402。
4.这些肽在化学上足够稳定，可应用于临床试验。
此项研究的目的是获得其毒性、免疫应答和抗肿瘤活性的临床信息。
先前报导的使用肽的疫苗临床试验的副作用是fur样症状(fur-likesymptom)，诸如发热、头痛和不适。在极少的情况下，报导了带有水疱的激烈皮肤反应(radical skin reaction with blister)，其被认为是注射位点处的短暂交叉反应。在此项研究中，除了病例3的2级疹之外没有严重不良作用。该患者在化疗过程中有过出疹的临床史。说明这种不良作用并非该接种所致，因此本方案可能是安全的。
通过在接种后的特异性CTL诱导进行了免疫学分析。在病例1中，在接种后未获得特异性CTL应答(数据未显示)。在病例3中，在第一疗程和第二疗程的接种之后清楚地显示了针对源自DEPDC1的肽的特异性CTL应答。在病例3中，通过接种获得了抗肿瘤效果。清楚地表明这种源自DEPDC1的肽通过诱导特异性CTL显示了针对膀胱癌的抗肿瘤效果。
在病例4中，仅接种第一个疗程之后，就明显获得了针对膀胱癌局部复发的抗肿瘤效果。这项证据强烈地支持这一结论，即这些表位肽表现出针对膀胱癌的抗肿瘤效果。
总的来说，阐明了这种表位疗法是安全的，并显示强的抗肿瘤效果而无严重的不良作用。
[工业实用性]
本发明鉴定了新的TAA，具体而言鉴定了诱导强力且特异性的抗肿瘤免疫应答的那些TAA。这些TAA为针对与MPHOSPH1和/或DEPDC1相关的疾病例如癌症的肽疫苗的进一步开发提供了保证。
本文提及的所有专利、专利申请和出版物均通过提述并入。
尽管已经详细地并且参考本发明的具体实施方案描述了本发明，但应该理解前述内容本质上是示例性和解释性的，旨在说明本发明及其优选实施方案。通过常规实验，本领域技术人员将轻易地认识到可对本发明进行各种变化和修改而不背离本发明的精神和范围。因此，本发明并不意欲受到上述说明的限定，而由附加的权利要求及其等同物限定。
序列表
<110>肿瘤疗法科学股份有限公司(0NCOTHERAPY SCIENCE，INC.)
<120>用于表达MPHOSPH1或DEPDC1多肽的癌症的肽疫苗
<130>ONC-A0618P
<150>US 60/852,575
<151>2006-10-17
<160>255
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>6319
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>CDS
<222>(73)..(5415)
<400>1
attgtttgaa tttgaaaacg gtaacatcgc agtgctgctc gcgggtctgg ctagtcaggc    60
gaagtttgca ga atg gaa tct aat ttt aat caa gag gga gta cct cga cca   111
              Met Glu Ser Asn Phe Asn Gln Glu Gly Val Pro Arg Pro
              1               5                   10
tct tat gtt ttt agt gct gac cca att gca agg cct tca gaa ata aat     159
Ser Tyr Val Phe Ser Ala Asp Pro Ile Ala Arg Pro Ser Glu Ile Asn
    15                  20                  25
ttc gat ggc att aag ctt gat ctg tct cat gaa ttt tcc tta gtt gct    207
Phe Asp Gly Ile Lys Leu Asp Leu Ser His Glu Phe Ser Leu Val Ala
30                  35                  40                  45
cca aat act gag gca aac agt ttc gaa tct aaa gat tat ctc cag gtt    255
Pro Asn Thr Glu Ala Asn Ser Phe Glu Ser Lys Asp Tyr Leu Gln Val
                50                  55                  60
tgt ctt cga ata aga cca ttt aca cag tca gaa aaa gaa ctt gag tct    303
Cys Leu Arg Ile Arg Pro Phe Thr Gln Ser Glu Lys Glu Leu Glu Ser
            65                  70                  75
gag ggc tgt gtg cat att ctg gat tca cag act gtt gtg ctg aaa gag    351
Glu Gly Cys Val His Ile Leu Asp Ser Gln Thr Val Val Leu Lys Glu
        80                  85                  90
cct caa tgc atc ctt ggt cgg tta agt gaa aaa agc tca ggg cag atg    399
Pro Gln Cys Ile Leu Gly Arg Leu Ser Glu Lys Ser Ser Gly Gln Met
    95                  100                 105
gca cag aaa ttc agt ttt tcc aag gtt ttt ggc cca gca act aca cag    447
Ala Gln Lys Phe Ser Phe Ser Lys Val Phe Gly Pro Ala Thr Thr Gln
110                 115                 120                 125
aag gaa ttc ttt cag ggt tgc att atg caa cca gta aaa gac ctc ttg    495
Lys Glu Phe Phe Gln Gly Cys Ile Met Gln Pro Val Lys Asp Leu Leu
                130                 135                 140
aaa gga cag agt cgt ctg att ttt act tac ggg cta acc aat tca gga      543
Lys Gly Gln Ser Arg Leu Ile Phe Thr Tyr Gly Leu Thr Asn Ser Gly
            145                 150                 155
aaa aca tat aca ttt caa ggg aca gaa gaa aat att ggc att ctg cct      591
Lys Thr Tyr Thr Phe Gln Gly Thr Glu Glu Asn Ile Gly Ile Leu Pro
        160                 165                 170
cga act ttg aat gta tta ttt gat agt ctt caa gaa aga ctg tat aca      639
Arg Thr Leu Asn Val Leu Phe Asp Ser Leu Gln Glu Arg Leu Tyr Thr
    175                 180                 185
aag atg aac ctt aaa cca cat aga tcc aga gaa tac tta agg tta tca      687
Lys Met Asn Leu Lys Pro His Arg Ser Arg Glu Tyr Leu Arg Leu Ser
190                 195                 200                 205
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Ser Glu Gln Glu Lys Glu Glu Ile Ala Ser Lys Ser Ala Leu Leu Arg
                210                 215                 220
caa att aaa gag gtt act gtg cat aat gat agt gat gat act ctt tat      783
Gln Ile Lys Glu Val Thr Val His Asn Asp Ser Asp Asp Thr Leu Tyr
            225                 230                 235
gga agt tta act aac tct ttg aat atc tca gag ttt gaa gaa tcc ata      831
Gly Ser Leu Thr Asn Ser Leu Asn Ile Ser Glu Phe Glu Glu Ser Ile
       240                 245                 250
aaa gat tat gaa caa gcc aac ttg aat atg gct aat agt ata aaa ttt      879
Lys Asp Tyr Glu Gln Ala Asn Leu Asn Met Ala Asn Ser Ile Lys Phe
    255                 260                 265
tct gtg tgg gtt tct ttc ttt gaa att tac aat gaa tat att tat gac      927
Ser Val Trp Val Ser Phe Phe Glu Ile Tyr Asn Glu Tyr Ile Tyr Asp
270                 275                 280                 285
tta ttt gtt cct gta tca tct aaa ttc caa aag aga aag atg ctg cgc      975
Leu Phe Val Pro Val Ser Ser Lys Phe Gln Lys Arg Lys Met Leu Arg
                290                 295                 300
ctt tcc caa gac gta aag ggc tat tct ttt ata aaa gat cta caa tgg     1023
Leu Ser Gln Asp Val Lys Gly Tyr Ser Phe Ile Lys Asp Leu Gln Trp
            305                 310                 315
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Ile Gln Val Ser Asp Ser Lys Glu Ala Tyr Arg Leu Leu Lys Leu Gly
        320                 325                 330
ata aag cac cag agt gtt gcc ttc aca aaa ttg aat aat gct tcc agt     1119
Ile Lys His Gln Ser Val Ala Phe Thr Lys Leu Asn Asn Ala Ser Ser
    335                 340                 345
aga agt cac agc ata ttc act gtt aaa ata tta cag att gaa gat tct     1167
Arg Ser His Ser Ile Phe Thr Val Lys Ile Leu Gln Ile Glu Asp Ser
350                 355                 360                 365
gaa atg tct cgt gta att cga gtc agt gaa tta tct tta tgt gat ctt     1215
Glu Met Ser Arg Val Ile Arg Val Ser Glu Leu Ser Leu Cys Asp Leu
                370                 375                 380
gct ggt tca gaa cga act atg aag aca cag aat gaa ggt gaa agg tta     1263
Ala Gly Ser Glu Arg Thr Met Lys Thr Gln Asn Glu Gly Glu Arg Leu
            385                 390                 395
aga gag act ggg aat atc aac act tct tta ttg act ctg gga aag tgt     1311
Arg Glu Thr Gly Asn Ile Asn Thr Ser Leu Leu Thr Leu Gly Lys Cys
        400                 405                 410
att aac gtc ttg aag aat agt gaa aag tca aag ttt caa cag cat gtg     1359
Ile Asn Val Leu Lys Asn Ser Glu Lys Ser Lys Phe Gln Gln His Val
    415                 420                 425
cct ttc cgg gaa agt aaa ctg act cac tat ttt caa agt ttt ttt aat     1407
Pro Phe Arg Glu Ser Lys Leu Thr His Tyr Phe Gln Ser Phe Phe Asn
430                 435                 440                 445
ggt aaa ggg aaa att tgt atg att gtc aat atc agc caa tgt tat tta     1455
Gly Lys Gly Lys Ile Cys Met Ile Val Asn Ile Ser Gln Cys Tyr Leu
                450                 455                 460
gcc tat gat gaa aca ctc aat gta ttg aag ttc tcc gcc att gca caa     1503
Ala Tyr Asp Glu Thr Leu Asn Val Leu Lys Phe Ser Ala Ile Ala Gln
            465                 470                 475
aaa gtt tgt gtc cca gac act tta aat tcc tct caa gag aaa tta ttt     1551
Lys Val Cys Val Pro Asp Thr Leu Asn Ser Ser Gln Glu Lys Leu Phe
        480                 485                 490
gga cct gtc aaa tct tct caa gat gta tca cta gac agt aat tca aac     1599
Gly Pro Val Lys Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Asp Ser Asn Ser Asn
    495                 500                 505
agt aaa ata tta aat gta aaa aga gcc acc att tca tgg gaa aat agt     1647
Ser Lys Ile Leu Asn Val Lys Arg Ala Thr Ile Ser Trp Glu Asn Ser
510                 515                 520                 525
cta gaa gat ttg atg gaa gac gag gat ttg gtt gag gag cta gaa aac     1695
Leu Glu Asp Leu Met Glu Asp Glu Asp Leu Val Glu Glu Leu Glu Asn
                530                 535                 540
gct gaa gaa act caa aat gtg gaa act aaa ctt ctt gat gaa gat cta     1743
Ala Glu Glu Thr Gln Asn Val Glu Thr Lys Leu Leu Asp Glu Asp Leu
            545                 550                 555
gat aaa aca tta gag gaa aat aag gct ttc att agc cac gag gag aaa     1791
Asp Lys Thr Leu Glu Glu Asn Lys Ala Phe Ile Ser His Glu Glu Lys
        560                 565                 570
aga aaa ctg ttg gac tta ata gaa gac ttg aaa aaa aaa ctg ata aat     1839
Arg Lys Leu Leu Asp Leu Ile Glu Asp Leu Lys Lys Lys Leu Ile Asn
    575                 580                 585
gaa aaa aag gaa aaa tta acc ttg gaa ttt aaa att cga gaa gaa gtt     1887
Glu Lys Lys Glu Lys Leu Thr Leu Glu Phe Lys Ile Arg Glu Glu Val
590                 595                 600                 605
aca cag gag ttt act cag tat tgg gct caa cgg gaa gct gac ttt aag     1935
Thr Gln Glu Phe Thr Gln Tyr Trp Ala Gln Arg Glu Ala Asp Phe Lys
                610                 615                 620
gag act ctg ctt caa gaa cga gag ata tta gaa gaa aat gct gaa cgt     1983
Glu Thr Leu Leu Gln Glu Arg Glu Ile Leu Glu Glu Asn Ala Glu Arg
            625                 630                 635
cgt ttg gct atc ttc aag gat ttg gtt ggt aaa tgt gac act cga gaa     2031
Arg Leu Ala Ile Phe Lys Asp Leu Val Gly Lys Cys Asp Thr Arg Glu
        640                 645                 650
gaa gca gcg aaa gac att tgt gcc aca aaa gtt gaa act gaa gaa gct     2079
Glu Ala Ala Lys Asp Ile Cys Ala Thr Lys Val Glu Thr Glu Glu Ala
    655                 660                 665
act gct tgt tta gaa cta aag ttt aat caa att aaa gct gaa tta gct     2127
Thr Ala Cys Leu Glu Leu Lys Phe Asn Gln Ile Lys Ala Glu Leu Ala
670                 675                 680                 685
aaa acc aaa gga gaa tta atc aaa acc aaa gaa gag tta aaa aag aga     2175
Lys Thr Lys Gly Glu Leu Ile Lys Thr Lys Glu Glu Leu Lys Lys Arg
                690                 695                 700
gaa aat gaa tca gat tca ttg att caa gag ctt gag aca tct aat aag     2223
Glu Asn Glu Ser Asp Ser Leu Ile Gln Glu Leu Glu Thr Ser Asn Lys
            705                 710                 715
aaa ata att aca cag aat caa aga att aaa gaa ttg ata aat ata att     2271
Lys Ile Ile Thr Gln Asn Gln Arg Ile Lys Glu Leu Ile Asn Ile Ile
        720                 725                 730
gat caa aaa gaa gat act atc aac gaa ttt cag aac eta aag tct cat     2319
Asp Gln Lys Glu Asp Thr Ile Asn Glu Phe Gln Asn Leu Lys Ser His
    735                 740                 745
atg gaa aac aca ttt aaa tgc aat gac aag gct gat aca tct tct tta     2367
Met Glu Asn Thr Phe Lys Cys Asn Asp Lys Ala Asp Thr Ser Ser Leu
750                 755                 760                 765
ata ata aac aat aaa ttg att tgt aat gaa aca gtt gaa gta cct aag     2415
Ile Ile Asn Asn Lys Leu Ile Cys Asn Glu Thr Val Glu Val Pro Lys
                770                 775                 780
gac agc aaa tct aaa atc tgt tca gaa aga aaa aga gta aat gaa aat     2463
Asp Ser Lys Ser Lys Ile Cys Ser Glu Arg Lys Arg Val Asn Glu Asn
            785                 790                 795
gaa ctt cag caa gat gaa cca cca gca aag aaa ggg tct atc cat gtt     2511
Glu Leu Gln Gln Asp Glu Pro Pro Ala Lys Lys Gly Ser Ile His Val
        800                 805                 810
agt tca gct atc act gaa gac caa aag aaa agt gaa gaa gtg cga ccg     2559
Ser Ser Ala Ile Thr Glu Asp Gln Lys Lys Ser Glu Glu Val Arg Pro
    815                 820                 825
aac att gca gaa att gaa gac atc aga gtt tta caa gaa aat aat gaa     2607
Asn Ile Ala Glu Ile Glu Asp Ile Arg Val Leu Gln Glu Asn Asn Glu
830                 835                 840                 845
gga ctg aga gca ttt tta ctc act att gag aat gaa ctt aaa aat gaa     2655
Gly Leu Arg Ala Phe Leu Leu Thr Ile Glu Asn Glu Leu Lys Asn Glu
                850                 855                 860
aag gaa gaa aaa gca gaa tta aat aaa cag att gtt cat ttt cag cag     2703
Lys Glu Glu Lys Ala Glu Leu Asn Lys Gln Ile Val His Phe Gln Gln
            865                 870                 875
gaa ctt tct ctt tct gaa aaa aag aat tta act tta agt aaa gag gtc     2751
Glu Leu Ser Leu Ser Glu Lys Lys Asn Leu Thr Leu Ser Lys Glu Val
        880                 885                 890
caa caa att cag tca aat tat gat att gca att gct gaa tta cat gtg     2799
Gln Gln Ile Gln Ser Asn Tyr Asp Ile Ala Ile Ala Glu Leu His Val
    895                 900                 905
cag aaa agt aaa aat caa gaa cag gag gaa aag atc atg aaa ttg tca     2847
Gln Lys Ser Lys Asn Gln Glu Gln Glu Glu Lys Ile Met Lys Leu Ser
910                 915                 920                 925
aat gag ata gaa act gct aca aga agc att aca aat aat gtt tca caa     2895
Asn Glu Ile Glu Thr Ala Thr Arg Ser Ile Thr Asn Asn Val Ser Gln
                930                 935                 940
ata aaa tta atg cac acg aaa ata gac gaa cta cgt act ctt gat tca     2943
Ile Lys Leu Met His Thr Lys Ile Asp Glu Leu Arg Thr Leu Asp Ser
            945                 950                 955
gtt tct cag att tca aac ata gat ttg ctc aat ctc agg gat ctg tca     2991
Val Ser Gln Ile Ser Asn Ile Asp Leu Leu Asn Leu Arg Asp Leu Ser
        960                 965                 970
aat ggt tct gag gag gat aat ttg cca aat aca cag tta gac ctt tta     3039
Asn Gly Ser Glu Glu Asp Asn Leu Pro Asn Thr Gln Leu Asp Leu Leu
    975                 980                 985
ggt aat gat tat ttg gta agt aag caa gtt aaa gaa tat cga att caa     3087
Gly Asn Asp Tyr Leu Val Ser Lys Gln Val Lys Glu Tyr Arg Ile Gln
990                 995                 1000                1005
gaa ccc aat agg gaa aat tct ttc cac tct agt att gaa gct att        3132
Glu Pro Asn Arg Glu Asn Ser Phe His Ser Ser Ile Glu Ala Ile
                1010                1015                1020
tgg gaa gaa tgt aaa gag att gtg aag gcc tct tcc aaa aaa agt        3177
Trp Glu Glu Cys Lys Glu Ile Val Lys Ala Ser Ser Lys Lys Ser
                1025                1030                1035
cat cag att gag gaa ctg gaa caa caa att gaa aaa ttg cag gca       3222
His Gln Ile Glu Glu Leu Glu Gln Gln Ile Glu Lys Leu Gln Ala
                1040                1045                1050
gaa gta aaa ggc tat aag gat gaa aac aat aga cta aag gag aag        3267
Glu Val Lys Gly Tyr Lys Asp Glu Asn Asn Arg Leu Lys Glu Lys
                1055                1060                1065
gag cat aaa aac caa gat gac cta cta aaa gaa aaa gaa act ctt        3312
Glu His Lys Asn Gln Asp Asp Leu Leu Lys Glu Lys Glu Thr Leu
                1070                1075                1080
ata cag cag ctg aaa gaa gaa ttg caa gaa aaa aat gtt act ctt        3357
Ile Gln Gln Leu Lys Glu Glu Leu Gln Glu Lys Asn Val Thr Leu
                1085                1090                1095
gat gtt caa ata cag cat gta gtt gaa gga aag aga gcg ctt tca        3402
Asp Val Gln Ile Gln His Val Val Glu Gly Lys Arg Ala Leu Ser
                1100                1105                1110
gaa ctt aca caa ggt gtt act tgc tat aag gca aaa ata aag gaa       3447
Glu Leu Thr Gln Gly Val Thr Cys Tyr Lys Ala Lys Ile Lys Glu
                1115                1120                1125
ctt gaa aca att tta gag act cag aaa gtt gaa tgt agt cat tca       3492
Leu Glu Thr Ile Leu Glu Thr Gln Lys Val Glu Cys Ser His Ser
                1130                1135                1140
gcc aag tta gaa caa gac att ttg gaa aag gaa tct atc atc tta       3537
Ala Lys Leu Glu Gln Asp Ile Leu Glu Lys Glu Ser Ile Ile Leu
                1145                1150                1155
aag cta gaa aga aat ttg aag gaa ttt caa gaa cat ctt cag gat       3582
Lys Leu Glu Arg Asn Leu Lys Glu Phe Gln Glu His Leu Gln Asp
                1160                1165                1170
tct gtc aaa aac acc aaa gat tta aat gta aag gaa ctc aag ctg       3627
Ser Val Lys Asn Thr Lys Asp Leu Asn Val Lys Glu Leu Lys Leu
                1175                1180                1185
aaa gaa gaa atc aca cag tta aca aat aat ttg caa gat atg aaa       3672
Lys Glu Glu Ile Thr Gln Leu Thr Asn Asn Leu Gln Asp Met Lys
                1190                1195                1200
cat tta ctt caa tta aaa gaa gaa gaa gaa gaa acc aac agg caa       3717
His Leu Leu Gln Leu Lys Glu Glu Glu Glu Glu Thr Asn Arg Gln
                1205                1210                1215
gaa aca gaa aaa ttg aaa gag gaa ctc tct gca agc tct gct cgt       3762
Glu Thr Glu Lys Leu Lys Glu Glu Leu Ser Ala Ser Ser Ala Arg
                1220                1225                1230
acc cag aat ctg aaa gca gat ctt cag agg aag gaa gaa gat tat       3807
Thr Gln Asn Leu Lys Ala Asp Leu Gln Arg Lys Glu Glu Asp Tyr
                1235                1240                1245
gct gac ctg aaa gag aaa ctg act gat gcc aaa aag cag att aag       3852
Ala Asp Leu Lys Glu Lys Leu Thr Asp Ala Lys Lys Gln Ile Lys
                1250                1255                1260
caa gta cag aaa gag gta tct gta atg cgt gat gag gat aaa tta       3897
Gln Val Gln Lys Glu Val Ser Val Met Arg Asp Glu Asp Lys Leu
                1265                1270                1275
ctg agg att aaa att aat gaa ctg gag aaa aag aaa aac cag tgt       3942
Leu Arg Ile Lys Ile Asn Glu Leu Glu Lys Lys Lys Asn Gln Cys
                1280                1285                1290
tct cag gaa tta gat atg aaa cag cga acc att cag caa ctc aag       3987
Ser Gln Glu Leu Asp Met Lys Gln Arg Thr Ile Gln Gln Leu Lys
                1295                1300                1305
gag cag tta aat aat cag aaa gtg gaa gaa gct ata caa cag tat       4032
Glu Gln Leu Asn Asn Gln Lys Val Glu Glu Ala Ile Gln Gln Tyr
                1310                1315                1320
gag aga gca tgc aaa gat cta aat gtt aaa gag aaa ata att gaa       4077
Glu Arg Ala Cys Lys Asp Leu Asn Val Lys Glu Lys Ile Ile Glu
                1325                1330                1335
gac atg cga atg aca cta gaa gaa cag gaa caa act cag gta gaa       4122
Asp Met Arg Met Thr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Thr Gln Val Glu
                1340                1345                1350
cag gat caa gtg ctt gag gct aaa tta gag gaa gtt gaa agg ctg       4167
Gln Asp Gln Val Leu Glu Ala Lys Leu Glu Glu Val Glu Arg Leu
                1355                1360                1365
gcc aca gaa ttg gaa aaa tgg aag gaa aaa tgc aat gat ttg gaa       4212
Ala Thr Glu Leu Glu Lys Trp Lys Glu Lys Cys Asn Asp Leu Glu
                1370                1375                1380
acc aaa aac aat caa agg tca aat aaa gaa cat gag aac aac aca       4257
Thr Lys Asn Asn Gln Arg Ser Asn Lys Glu His Glu Asn Asn Thr
                1385                1390                1395
gat gtg ctt gga aag ctc act aat ctt caa gat gag tta cag gag       4302
Asp Val Leu Gly Lys Leu Thr Asn Leu Gln Asp Glu Leu Gln Glu
                1400                1405                1410
tct gaa cag aaa tat aat gct gat aga aag aaa tgg tta gaa gaa       4347
Ser Glu Gln Lys Tyr Asn Ala Asp Arg Lys Lys Trp Leu Glu Glu
                1415                1420                1425
aaa atg atg ctt atc act caa gcg aaa gaa gca gag aat ata cga       4392
Lys Met Met Leu Ile Thr Gln Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Arg
                1430                1435                1440
aat aaa gag atg aaa aaa tat gct gag gac agg gag cgt ttt ttt       4437
Asn Lys Glu Met Lys Lys Tyr Ala Glu Asp Arg Glu Arg Phe Phe
                1445                1450                1455
aag caa cag aat gaa atg gaa ata ctg aca gcc cag ctg aca gag       4482
Lys Gln Gln Asn Glu Met Glu Ile Leu Thr Ala Gln Leu Thr Glu
                1460                1465                1470
aaa gat agt gac ctt caa aag tgg cga gaa gaa cga gat caa ctg       4527
Lys Asp Ser Asp Leu Gln Lys Trp Arg Glu Glu Arg Asp Gln Leu
                1475                1480                1485
gtt gca gct tta gaa ata cag cta aaa gca ctg ata tcc agt aat       4572
Val Ala Ala Leu Glu Ile Gln Leu Lys Ala Leu Ile Ser Ser Asn
                1490                1495                1500
gta cag aaa gat aat gaa att gaa caa cta aaa agg atc ata tca       4617
Val Gln Lys Asp Asn Glu Ile Glu Gln Leu Lys Arg Ile Ile Ser
                1505                1510                1515
gag act tct aaa ata gaa aca caa atc atg gat atc aag ccc aaa       4662
Glu Thr Ser Lys Ile Glu Thr Gln Ile Met Asp Ile Lys Pro Lys
                1520                1525                1530
cgt att agt tca gca gat cct gac aaa ctt caa act gaa cct cta       4707
Arg Ile Ser Ser Ala Asp Pro Asp Lys Leu Gln Thr Glu Pro Leu
                1535                1540                1545
tcg aca agt ttt gaa att tcc aga aat aaa ata gag gat gga tct       4752
Ser Thr Ser Phe Glu Ile Ser Arg Asn Lys Ile Glu Asp Gly Ser
                1550                1555                1560
gta gtc ctt gac tct tgt gaa gtg tca aca gaa aat gat caa agc       4797
Val Val Leu Asp Ser Cys Glu Val Ser Thr Glu Asn Asp Gln Ser
                1565                1570                1575
act cga ttt cca aaa cct gag tta gag att caa ttt aca cct tta       4842
Thr Arg Phe Pro Lys Pro Glu Leu Glu Ile Gln Phe Thr Pro Leu
                1580                1585                1590
cag cca aac aaa atg gca gtg aaa cac cct ggt tgt acc aca cca       4887
Gln Pro Asn Lys Met Ala Val Lys His Pro Gly Cys Thr Thr Pro
                1595                1600                1605
gtg aca gtt aag att ccc aag gct cgg aag agg aag agt aat gaa        4932
Val Thr Val Lys Ile Pro Lys Ala Arg Lys Arg Lys Ser Asn Glu
                1610                1615                1620
atg gag gag gac ttg gtg aaa tgt gaa aat aag aag aat gct aca        4977
Met Glu Glu Asp Leu Val Lys Cys Glu Asn Lys Lys Asn Ala Thr
                1625                1630                1635
ccc aga act aat ttg aaa ttt cct att tca gat gat aga aat tct        5022
Pro Arg Thr Asn Leu Lys Phe Pro Ile Ser Asp Asp Arg Asn Ser
                1640                1645                1650
tct gtc aaa aag gaa caa aag gtt gcc ata cgt cca tca tct aag        5067
Ser Val Lys Lys Glu Gln Lys Val Ala Ile Arg Pro Ser Ser Lys
                1655                1660                1665
aaa aca tat tct tta cgg agt cag gca tcc ata att ggt gta aac        5112
Lys Thr Tyr Ser Leu Arg Ser Gln Ala Ser Ile Ile Gly Val Asn
                1670                1675                1680
ctg gcc act aag aaa aaa gaa gga aca cta cag aaa ttt gga gac        5157
Leu Ala Thr Lys Lys Lys Glu Gly Thr Leu Gln Lys Phe Gly Asp
                1685                1690                1695
ttc tta caa cat tct ccc tca att ctt caa tca aaa gca aag aag        5202
Phe Leu Gln His Ser Pro Ser Ile Leu Gln Ser Lys Ala Lys Lys
                1700                1705                1710
ata att gaa aca atg agc tct tca aag ctc tca aat gta gaa gca        5247
Ile Ile Glu Thr Met Ser Ser Ser Lys Leu Ser Asn Val Glu Ala
                1715                1720                1725
agt aaa gaa aat gtg tct caa cca aaa cga gcc aaa cgg aaa tta        5292
Ser Lys Glu Asn Val Ser Gln Pro Lys Arg Ala Lys Arg Lys Leu
                1730                1735                1740
tac aca agt gaa att tca tct cct att gat ata tca ggc caa gtg        5337
Tyr Thr Ser Glu Ile Ser Ser Pro Ile Asp Ile Ser Gly Gln Val
                1745                1750                1755
att tta atg gac cag aaa atg aag gag agt gat cac cag att atc        5382
Ile Leu Met Asp Gln Lys Met Lys Glu Ser Asp His Gln Ile Ile
                1760                1765                1770
aaa cga cga ctt cga aca aaa aca gcc aaa taa atcacttatg             5425
Lys Arg Arg Leu Arg Thr Lys Thr Ala Lys
                1775                1780
gaaatgttta atataaattt tatagtcata gtcattggaa cttgcatcct gtattgtaaa  5485
tataaatgta tatattatgc attaaatcac tctgcatata gattgctgtt ttatacatag  5545
tataatttta attcaataaa tgagtcaaaa tttgtatatt tttataaggc ttttttataa  5605
tagcttcttt caaactgtat ttccctatta tctcagacat tggatcagtg aagatcctag  5665
gaaagaggct gttattctca tttattttgc tatacaggat gtaataggtc aggtatttgg  5725
tttacttata tttaacaatg tcttatgaat tttttttact ttatctgtta tacaactgat  5785
tttacatatc tgtttggatt atagctagga tttggagaat aagtgtgtac agatcacaaa  5845
acatgtatat acattattta gaaaagatct caagtcttta attagaatgt ctcacttatt    5905
ttgtaaacat tttgtgggta catagtacat gtatatattt acggggtatg tgagatgttt    5965
tgacacaggc atgcaatgtg aaatacgtgt atcatggaga atgaggtatc catcccctca    6025
agcatttttc ctttgaatta cagataatcc aattacattc tttagatcat ttaaaaatat    6085
acaagtaagt tattattgat tatagtcact ctattgtgct atcagatagt agatcattct    6145
ttttatctta tttgtttttg tacccattaa ccatccccac ctccccctgc aaccgtcagt    6205
acccttacca gccactggta accattcttc tactctgtat gcccatgagg tcaattgatt    6265
ttatttttag atcccataaa taaatgagaa catgcagtct ttgtcaaaaa aaaa          6319
<210>2
<211>1780
<212>PRT
<213>人
<400>2
Met Glu Ser Asn Phe Asn Gln Glu Gly Val Pro Arg Pro Ser Tyr Val
1               5                   10                  15
Phe Ser Ala Asp Pro Ile Ala Arg Pro Ser Glu Ile Asn Phe Asp Gly
            20                  25                  30
Ile Lys Leu Asp Leu Ser His Glu Phe Ser Leu Val Ala Pro Asn Thr
        35                  40                  45
Glu Ala Asn Ser Phe Glu Ser Lys Asp Tyr Leu Gln Val Cys Leu Arg
    50                  55                  60
Ile Arg Pro Phe Thr Gln Ser Glu Lys Glu Leu Glu Ser Glu Gly Cys
65                  70                  75                  80
Val His Ile Leu Asp Ser Gln Thr Val Val Leu Lys Glu Pro Gln Cys
                85                  90                  95
Ile Leu Gly Arg Leu Ser Glu Lys Ser Ser Gly Gln Met Ala Gln Lys
            100                 105                 110
Phe Ser Phe Ser Lys Val Phe Gly Pro Ala Thr Thr Gln Lys Glu Phe
        115                 120                 125
Phe Gln Gly Cys Ile Met Gln Pro Val Lys Asp Leu Leu Lys Gly Gln
    130                 135                 140
Ser Arg Leu Ile Phe Thr Tyr Gly Leu Thr Asn Ser Gly Lys Thr Tyr
145                 150                 155                 160
Thr Phe Gln Gly Thr Glu Glu Asn Ile Gly Ile Leu Pro Arg Thr Leu
                165                 170                 175
Asn Val Leu Phe Asp Ser Leu Gln Glu Arg Leu Tyr Thr Lys Met Asn
            180                 185                 190
Leu Lys Pro His Arg Ser Arg Glu Tyr Leu Arg Leu Ser Ser Glu Gln
        195                 200                 205
Glu Lys Glu Glu Ile Ala Ser Lys Ser Ala Leu Leu Arg Gln Ile Lys
    210                 215                 220
Glu Val Thr Val His Asn Asp Ser Asp Asp Thr Leu Tyr Gly Ser Leu
225                 230                 235                 240
Thr Asn Ser Leu Asn Ile Ser Glu Phe Glu Glu Ser Ile Lys Asp Tyr
                245                 250                 255
Glu Gln Ala Asn Leu Asn Met Ala Asn Ser Ile Lys Phe Ser Val Trp
            260                 265                 270
Val Ser Phe Phe Glu Ile Tyr Asn Glu Tyr Ile Tyr Asp Leu Phe Val
        275                 280                 285
Pro Val Ser Ser Lys Phe Gln Lys Arg Lys Met Leu Arg Leu Ser Gln
    290                 295                 300
Asp Val Lys Gly Tyr Ser Phe Ile Lys Asp Leu Gln Trp Ile Gln Val
305                 310                 315                 320
Ser Asp Ser Lys Glu Ala Tyr Arg Leu Leu Lys Leu Gly Ile Lys His
                325                 330                 335
Gln Ser Val Ala Phe Thr Lys Leu Asn Asn Ala Ser Ser Arg Ser His
            340                 345                 350
Ser Ile Phe Thr Val Lys Ile Leu Gln Ile Glu Asp Ser Glu Met Ser
        355                 360                 365
Arg Val Ile Arg Val Ser Glu Leu Ser Leu Cys Asp Leu Ala Gly Ser
    370                 375                 380
Glu Arg Thr Met Lys Thr Gln Asn Glu Gly Glu Arg Leu Arg Glu Thr
385                 390                 395                 400
Gly Asn Ile Asn Thr Ser Leu Leu Thr Leu Gly Lys Cys Ile Asn Val
                405                 410                 415
Leu Lys Asn Ser Glu Lys Ser Lys Phe Gln Gln His Val Pro Phe Arg
            420                 425                 430
Glu Ser Lys Leu Thr His Tyr Phe Gln Ser Phe Phe Asn Gly Lys Gly
        435                 440                 445
Lys Ile Cys Met Ile Val Asn Ile Ser Gln Cys Tyr Leu Ala Tyr Asp
    450                 455                 460
Glu Thr Leu Asn Val Leu Lys Phe Ser Ala Ile Ala Gln Lys Val Cys
465                 470                 475                 480
Val Pro Asp Thr Leu Asn Ser Ser Gln Glu Lys Leu Phe Gly Pro Val
                485                 490                 495
Lys Ser Ser Gln Asp Val Ser Leu Asp Ser Asn Ser Asn Ser Lys Ile
            500                 505                 510
Leu Asn Val Lys Arg Ala Thr Ile Ser Trp Glu Asn Ser Leu Glu Asp
        515                 520                 525
Leu Met Glu Asp Glu Asp Leu Val Glu Glu Leu Glu Asn Ala Glu Glu
    530                 535                 540
Thr Gln Asn Val Glu Thr Lys Leu Leu Asp Glu Asp Leu Asp Lys Thr
545                 550                 555                 560
Leu Glu Glu Asn Lys Ala Phe Ile Ser His Glu Glu Lys Arg Lys Leu
                565                 570                 575
Leu Asp Leu Ile Glu Asp Leu Lys Lys Lys Leu Ile Asn Glu Lys Lys
            580                 585                 590
Glu Lys Leu Thr Leu Glu Phe Lys Ile Arg Glu Glu Val Thr Gln Glu
        595                 600                 605
Phe Thr Gln Tyr Trp Ala Gln Arg Glu Ala Asp Phe Lys Glu Thr Leu
    610                 615                 620
Leu Gln Glu Arg Glu Ile Leu Glu Glu Asn Ala Glu Arg Arg Leu Ala
625                 630                 635                 640
Ile Phe Lys Asp Leu Val Gly Lys Cys Asp Thr Arg GLu Glu Ala Ala
                645                 650                 655
Lys Asp Ile Cys Ala Thr Lys Val Glu Thr Glu Glu Ala Thr Ala Cys
            660                 66                 5670
Leu Glu Leu Lys Phe Asn Gln Ile Lys Ala Glu Leu Ala Lys Thr Lys
        675                 680                 685
Gly Glu Leu Ile Lys Thr Lys Glu Glu Leu Lys Lys Arg Glu Asn Glu
    690                 695                 700
Ser Asp Ser Leu Ile Gln Glu Leu Glu Thr Ser Asn Lys Lys Ile Ile
705                 710                 715                 720
Thr Gln Asn Gln Arg Ile Lys Glu Leu Ile Asn Ile Ile Asp Gln Lys
                725                 730                 735
Glu Asp Thr Ile Asn Glu Phe Gln Asn Leu Lys Ser His Met Glu Asn
            740                 745                 750
Thr Phe Lys Cys Asn Asp Lys Ala Asp Thr Ser Ser Leu Ile Ile Asn
        755                 760                 765
Asn Lys Leu Ile Cys Asn Glu Thr Val Glu Val Pro Lys Asp Ser Lys
    770                 775                 780
Ser Lys Ile Cys Ser Glu Arg Lys Arg Val Asn Glu Asn Glu Leu Gln
785                 790                 795                 800
Gln Asp Glu Pro Pro Ala Lys Lys Gly Ser Ile His Val Ser Ser Ala
                805                 810                 815
Ile Thr Glu Asp Gln Lys Lys Ser Glu Glu Val Arg Pro Asn Ile Ala
            820                 825                 830
Glu Ile Glu Asp Ile Arg Val Leu Gln Glu Asn Asn Glu Gly Leu Arg
        835                 840                 845
Ala Phe Leu Leu Thr Ile Glu Asn Glu Leu Lys Asn Glu Lys Glu Glu
    850                 855                 860
Lys Ala Glu Leu Asn Lys Gln Ile Val His Phe Gln Gln Glu Leu Ser
865                 870                 875                 880
Leu Ser Glu Lys Lys Asn Leu Thr Leu Ser Lys Glu Val Gln Gln Ile
                885                 890                 895
Gln Ser Asn Tyr Asp Ile Ala Ile Ala Glu Leu His Val Gln Lys Ser
            900                 905                 910
Lys Asn Gln Glu Gln Glu Glu Lys Ile Met Lys Leu Ser Asn Glu Ile
        915                 920                 925
Glu Thr Ala Thr Arg Ser Ile Thr Asn Asn Val Ser Gln Ile Lys Leu
    930                 935                 940
Met His Thr Lys Ile Asp Glu Leu Arg Thr Leu Asp Ser Val Ser Gln
945                 950                 955                 960
Ile Ser Asn Ile Asp Leu Leu Asn Leu Arg Asp Leu Ser Asn Gly Ser
                965                 970                 975
Glu Glu Asp Asn Leu Pro Asn Thr Gln Leu Asp Leu Leu Gly Asn Asp
            980                 985                 990
Tyr Leu Val Ser Lys Gln Val Lys Glu Tyr Arg Ile Gln Glu Pro Asn
        995                 1000                1005
Arg Glu Asn Ser Phe His Ser Ser Ile Glu Ala Ile Trp Glu Glu
    1010                1015                1020
Cys Lys Glu Ile Val Lys Ala Ser Ser Lys Lys Ser His Gln Ile
    1025                1030                1035
Glu Glu Leu Glu Gln Gln Ile Glu Lys Leu Gln Ala Glu Val Lys
    1040                1045                1050
Gly Tyr Lys Asp Glu Asn Asn Arg Leu Lys Glu Lys Glu His Lys
    1055                1060                1065
Asn Gln Asp Asp Leu Leu Lys Glu Lys Glu Thr Leu Ile Gln Gln
    1070                1075                1080
Leu Lys Glu Glu Leu Gln Glu Lys Asn Val Thr Leu Asp Val Gln
    1085                1090                1095
Ile Gln His Val Val Glu Gly Lys Arg Ala Leu Ser Glu Leu Thr
    1100                1105                1110
Gln Gly Val Thr Cys Tyr Lys Ala Lys Ile Lys Glu Leu Glu Thr
    1115                1120                1125
Ile Leu Glu Thr Gln Lys Val Glu Cys Ser His Ser Ala Lys Leu
    1130                1135                1140
Glu Gln Asp Ile Leu Glu Lys Glu Ser Ile Ile Leu Lys Leu Glu
    1145                1150                1155
Arg Asn Leu Lys Glu Phe Gln Glu His Leu Gln Asp Ser Val Lys
    1160                1165                1170
Asn Thr Lys Asp Leu Asn Val Lys Glu Leu Lys Leu Lys Glu Glu
    1175                1180                1185
Ile Thr Gln Leu Thr Asn Asn Leu Gln Asp Met Lys His Leu Leu
    1190                1195                1200
Gln Leu Lys Glu Glu Glu Glu Glu Thr Asn Arg Gln Glu Thr Glu
    1205                1210                1215
Lys Leu Lys Glu Glu Leu Ser Ala Ser Ser Ala Arg Thr Gln Asn
    1220                1225                1230
Leu Lys Ala Asp Leu Gln Arg Lys Glu Glu Asp Tyr Ala Asp Leu
    1235                1240                1245
Lys Glu Lys Leu Thr Asp Ala Lys Lys Gln Ile Lys Gln Val Gln
    1250                1255                1260
Lys Glu Val Ser Val Met Arg Asp Glu Asp Lys Leu Leu Arg Ile
    1265                1270                1275
Lys Ile Asn Glu Leu Glu Lys Lys Lys Asn Gln Cys Ser Gln Glu
    1280                1285                1290
Leu Asp Met Lys Gln Arg Thr Ile Gln Gln Leu Lys Glu Gln Leu
    1295                1300                1305
Asn Asn Gln Lys Val Glu Glu Ala Ile Gln Gln Tyr Glu Arg Ala
    1310                1315                1320
Cys Lys Asp Leu Asn Val Lys Glu Lys Ile Ile Glu Asp Met Arg
    1325                1330                1335
Met Thr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Thr Gln Val Glu Gln Asp Gln
    1340                1345                1350
Val Leu Glu Ala Lys Leu Glu Glu Val Glu Arg Leu Ala Thr Glu
    1355                1360                1365
Leu Glu Lys Trp Lys Glu Lys Cys Asn Asp Leu Glu Thr Lys Asn
    1370                1375                1380
Asn Gln Arg Ser Asn Lys Glu His Glu Asn Asn Thr Asp Val Leu
    1385                1390                1395
Gly Lys Leu Thr Asn Leu Gln Asp Glu Leu Gln Glu Ser Glu Gln
    1400                1405                1410
Lys Tyr Asn Ala Asp Arg Lys Lys Trp Leu Glu Glu Lys Met Met
    1415                1420                1425
Leu Ile Thr Gln Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Arg Asn Lys Glu
    1430                1435                1440
Met Lys Lys Tyr Ala Glu Asp Arg Glu Arg Phe Phe Lys Gln Gln
    1445                1450                1455
Asn Glu Met Glu Ile Leu Thr Ala Gln Leu Thr Glu Lys Asp Ser
    1460                1465                1470
Asp Leu Gln Lys Trp Arg Glu Glu Arg Asp Gln Leu Val Ala Ala
    1475                1480                1485
Leu Glu Ile Gln Leu Lys Ala Leu Ile Ser Ser Asn Val Gln Lys
    1490                1495                1500
Asp Asn Glu Ile Glu Gln Leu Lys Arg Ile Ile Ser Glu Thr Ser
    1505                1510                1515
Lys Ile Glu Thr Gln Ile Met Asp Ile Lys Pro Lys Arg Ile Ser
    1520                1525                1530
Ser Ala Asp Pro Asp Lys Leu Gln Thr Glu Pro Leu Ser Thr Ser
    1535                1540                1545
Phe Glu Ile Ser Arg Asn Lys Ile Glu Asp Gly Ser Val Val Leu
    1550                1555                1560
Asp Ser Cys Glu Val Ser Thr Glu Asn Asp Gln Ser Thr Arg Phe
    1565                1570                1575
Pro Lys Pro Glu Leu Glu Ile Gln Phe Thr Pro Leu Gln Pro Asn
    1580                1585                1590
Lys Met Ala Val Lys His Pro Gly Cys Thr Thr Pro Val Thr Val
    1595                1600                1605
Lys Ile Pro Lys Ala Arg Lys Arg Lys Ser Asn Glu Met Glu Glu
    1610                1615                1620
Asp Leu Val Lys Cys Glu Asn Lys Lys Asn Ala Thr Pro Arg Thr
    1625                1630                1635
Asn Leu Lys Phe Pro Ile Ser Asp Asp Arg Asn Ser Ser Val Lys
    1640                1645                1650
Lys Glu Gln Lys Val Ala Ile Arg Pro Ser Ser Lys Lys Thr Tyr
    1655                1660                1665
Ser Leu Arg Ser Gln Ala Ser Ile Ile Gly Val Asn Leu Ala Thr
    1670                1675                1680
Lys Lys Lys Glu Gly Thr Leu Gln Lys Phe Gly Asp Phe Leu Gln
    1685                1690                1695
His Ser Pro Ser Ile Leu Gln Ser Lys Ala Lys Lys Ile Ile Glu
    1700                1705                1710
Thr Met Ser Ser Ser Lys Leu Ser Asn Val Glu Ala Ser Lys Glu
    1715                1720                1725
Asn Val Ser Gln Pro Lys Arg Ala Lys Arg Lys Leu Tyr Thr Ser
    1730                1735                1740
Glu Ile Ser Ser Pro Ile Asp Ile Ser Gly Gln Val Ile Leu Met
    1745                1750                1755
Asp Gln Lys Met Lys Glu Ser Asp His Gln Ile Ile Lys Arg Arg
    1760                1765                1770
Leu Arg Thr Lys Thr Ala Lys
    1775                1780
<210>3
<211>5318
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(79)..(2511)
<400>3
gagactcgcc actgccgcgg ccgctgggcc tgagtgtcgc cttcgccgcc atggacgcca   60
ccgggcgctg acagacct atg gag agt cag ggt gtg cct ccc ggg cct tat    111
                    Met Glu Ser Gln Gly Val Pro Pro Gly Pro Tyr
                    1               5                   10
cgg gcc acc aag ctg tgg aat gaa gtt acc aca tct ttt cga gca gga    159
Arg Ala Thr Lys Leu Trp Asn Glu Val Thr Thr Ser Phe Arg Ala Gly
            15                  20                  25
atg cct cta aga aaa cac aga caa cac ttt aaa aaa tat ggc aat tgt    207
Met Pro Leu Arg Lys His Arg Gln His Phe Lys Lys Tyr Gly Asn Cys
        30                  35                  40
ttc aca gca gga gaa gca gtg gat tgg ctt tat gac cta tta aga aat    255
Phe Thr Ala Gly Glu Ala Val Asp Trp Leu Tyr Asp Leu Leu Arg Asn
    45                  50                  55
aat agc aat ttt ggt cct gaa gtt aca agg caa cag act atc caa ctg    303
Asn Ser Asn Phe Gly Pro Glu Val Thr Arg Gln Gln Thr Ile Gln Leu
60                  65                  70                  75
ttg agg aaa ttt ctt aag aat cat gta att gaa gat atc aaa ggg agg    351
Leu Arg Lys Phe Leu Lys Asn His Val Ile Glu Asp Ile Lys Gly Arg
                80                  85                  90
tgg gga tca gaa aat gtt gat gat aac aac cag ctc ttc aga ttt cct    399
Trp Gly Ser Glu Asn Val Asp Asp Asn Asn Gln Leu Phe Arg Phe Pro
            95                  100                 105
gca act tcg cca ctt aaa act cta cca cga agg tat cca gaa ttg aga    447
Ala Thr Ser Pro Leu Lys Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu Arg
        110                 115                 120
aaa aac aac ata gag aac ttt tcc aaa gat aaa gat agc att ttt aaa    495
Lys Asn Asn Ile Glu Asn Phe Ser Lys Asp Lys Asp Ser Ile Phe Lys
    125                 130                 135
tta cga aac tta tct cgt aga act cct aaa agg cat gga tta cat tta    543
Leu Arg Asn Leu Ser Arg Arg Thr Pro Lys Arg His Gly Leu His Leu
140                 145                 150                 155
tct cag gaa aat ggc gag aaa ata aag cat gaa ata atc aat gaa gat    591
Ser Gln Glu Asn Gly Glu Lys Ile Lys His Glu Ile Ile Asn Glu Asp
                160                 165                 170
caa gaa aat gca att gat aat aga gaa cta agc cag gaa gat gtt gaa    639
Gln Glu Asn Ala Ile Asp Asn Arg Glu Leu Ser Gln Glu Asp Val Glu
            175                 180                 185
gaa gtt tgg aga tat gtt att ctg atc tac ctg caa acc att tta ggt    687
Glu Val Trp Arg Tyr Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu Gly
        190                 195                 200
gtg cca tcc cta gaa gaa gtc ata aat cca aaa caa gta att ccc caa    735
Val Pro Ser Leu Glu Glu Val Ile Asn Pro Lys Gln Val Ile Pro Gln
    205                 210                 215
tat ata atg tac aac atg gcc aat aca agt aaa cgt gga gta gtt ata    783
Tyr Ile Met Tyr Asn Met Ala Asn Thr Ser Lys Arg Gly Val Val Ile
220                 225                 230                 235
cta caa aac aaa tca gat gac ctc cct cac tgg gta tta tct gcc atg    831
Leu Gln Asn Lys Ser Asp Asp Leu Pro His Trp Val Leu Ser Ala Met
                240                 245                 250
aag tgc cta gca aat tgg cca aga agc aat gat atg aat aat cca act    879
Lys Cys Leu Ala Asn Trp Pro Arg Ser Asn Asp Met Asn Asn Pro Thr
            255                 260                 265
tat gtt gga ttt gaa cga gat gta ttc aga aca atc gca gat tat ttt    927
Tyr Val Gly Phe Glu Arg Asp Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe
        270                 275                 280
cta gat ctc cct gaa cct cta ctt act ttt gaa tat tac gaa tta ttt     975
Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe
    285                 290                 295
gta aac att ttg gtt gtt tgt ggc tac atc aca gtt tca gat aga tcc    1023
Val Asn Ile Leu Val Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val Ser Asp Arg Ser
300                 305                 310                 315
agt ggg ata cat aaa att caa gat gat cca cag tct tca aaa ttc ctt    1071
Ser Gly Ile His Lys Ile Gln Asp Asp Pro Gln Ser Ser Lys Phe Leu
                320                 325                 330
cac tta aac aat ttg aat tcc ttc aaa tca act gag tgc ctt ctt ctc    1119
His Leu Asn Asn Leu Asn Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu
            335                 340                 345
agt ctg ctt cat aga gaa aaa aac aaa gaa gaa tca gat tct act gag    1167
Ser Leu Leu His Arg Glu Lys Asn Lys Glu Glu Ser Asp Ser Thr Glu
        350                 355                 360
aga cta cag ata agc aat cca gga ttt caa gaa aga tgt gct aag aaa    1215
Arg Leu Gln Ile Ser Asn Pro Gly Phe Gln Glu Arg Cys Ala Lys Lys
    365                 370                 375
atg cag cta gtt aat tta aga aac aga aga gtg agt gct aat gac ata    1263
Met Gln Leu Val Asn Leu Arg Asn Arg Arg Val Ser Ala Asn Asp Ile
380                 385                 390                 395
atg gga gga agt tgt cat aat tta ata ggg tta agt aat atg cat gat    1311
Met Gly Gly Ser Cys His Asn Leu Ile Gly Leu Ser Asn Met His Asp
                400                 405                 410
cta tcc tct aac agc aaa cca agg tgc tgt tct ttg gaa gga att gta    1359
Leu Ser Ser Asn Ser Lys Pro Arg Cys Cys Ser Leu Glu Gly Ile Val
            415                 420                 425
gat gtg cca ggg aat tca agt aaa gag gca tcc agt gtc ttt cat caa    1407
Asp Val Pro Gly Asn Ser Ser Lys Glu Ala Ser Ser Val Phe His Gln
        430                 435                 440
tct ttt ccg aac ata gaa gga caa aat aat aaa ctg ttt tta gag tct    1455
Ser Phe Pro Asn Ile Glu Gly Gln Asn Asn Lys Leu Phe Leu Glu Ser
    445                 450                 455
aag ccc aaa cag gaa ttc ctg ttg aat ctt cat tca gag gaa aat att    1503
Lys Pro Lys Gln Glu Phe Leu Leu Asn Leu His Ser Glu Glu Asn Ile
460                 465                 470                 475
caa aag cca ttc agt gct ggt ttt aag aga acc tct act ttg act gtt    1551
Gln Lys Pro Phe Ser Ala Gly Phe Lys Arg Thr Ser Thr Leu Thr Val
                480                 485                 490
caa gac caa gag gag ttg tgt aat ggg aaa tgc aag tca aaa cag ctt    1599
Gln Asp Gln Glu Glu Leu Cys Asn Gly Lys Cys Lys Ser Lys Gln Leu
            495                 500                 505
tgt agg tct cag agt ttg ctt tta aga agt agt aca aga agg aat agt    1647
Cys Arg Ser Gln Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Thr Arg Arg Asn Ser
        510                 515                 520
tat atc aat aca cca gtg gct gaa att atc atg aaa cca aat gtt gga    1695
Tyr Ile Asn Thr Pro Val Ala Glu Ile Ile Met Lys Pro Asn Val Gly
    525                 530                 535
caa ggc agc aca agt gtg caa aca gct atg gaa agt gaa ctc gga gag    1743
Gln Gly Ser Thr Ser Val Gln Thr Ala Met Glu Ser Glu Leu Gly Glu
540                 545                 550                 555
tct agt gcc aca atc aat aaa aga ctc tgc aaa agt aca ata gaa ctt    1791
Ser Ser Ala Thr Ile Asn Lys Arg Leu Cys Lys Ser Thr Ile Glu Leu
                560                 565                 570
tca gaa aat tct tta ctt cca gct tct tct atg ttg act ggc aca caa    1839
Ser Glu Asn Ser Leu Leu Pro Ala Ser Ser Met Leu Thr Gly Thr Gln
            575                 580                 585
agc ttg ctg caa cct cat tta gag agg gtt gcc atc gat gct cta cag    1887
Ser Leu Leu Gln Pro His Leu Glu Arg Val Ala Ile Asp Ala Leu Gln
        590                 595                 600
tta tgt tgt ttg tta ctt ccc cca cca aat cgt aga aag ctt caa ctt    1935
Leu Cys Cys Leu Leu Leu Pro Pro Pro Asn Arg Arg Lys Leu Gln Leu
    605                 610                 615
tta atg cgt atg att tcc cga atg agt caa aat gtt gat atg ccc aaa    1983
Leu Met Arg Met Ile Ser Arg Met Ser Gln Asn Val Asp Met Pro Lys
620                 625                 630                 635
ctt cat gat gca atg ggt acg agg tca ctg atg ata cat acc ttt tct    2031
Leu His Asp Ala Met Gly Thr Arg Ser Leu Met Ile His Thr Phe Ser
                640                 645                 650
cga tgt gtg tta tgc tgt gct gaa gaa gtg gat ctt gat gag ctt ctt    2079
Arg Cys Val Leu Cys Cys Ala Glu Glu Val Asp Leu Asp Glu Leu Leu
            655                 660                 665
gct gga aga tta gtt tct ttc tta atg gat cat cat cag gaa att ctt    2127
Ala Gly Arg Leu Val Ser Phe Leu Met Asp His His Gln Glu Ile Leu
        670                 675                 680
caa gta ccc tct tac tta cag act gca gtg gaa aaa cat ctt gac tac    2175
Gln Val Pro Ser Tyr Leu Gln Thr Ala Val Glu Lys His Leu Asp Tyr
    685                 690                 695
tta aaa aag gga cat att gaa aat cct gga gat gga cta ttt gct cct    2223
Leu Lys Lys Gly His Ile Glu Asn Pro Gly Asp Gly Leu Phe Ala Pro
700                 705                 710                 715
ttg cca act tac tca tac tgt aag cag att agt gct cag gag ttt gat    2271
Leu Pro Thr Tyr Ser Tyr Cys Lys Gln Ile Ser Ala Gln Glu Phe Asp
                720                 725                 730
gag caa aaa gtt tct acc tct caa gct gca att gca gaa ctt tta gaa    2319
Glu Gln Lys Val Ser Thr Ser Gln Ala Ala Ile Ala Glu Leu Leu Glu
            735                 740                 745
aat att att aaa aac agg agt tta cct cta aag gag aaa aga aaa aaa    2367
Asn Ile Ile Lys Asn Arg Ser Leu Pro Leu Lys Glu Lys Arg Lys Lys
        750                 755                 760
cta aaa cag ttt cag aag gaa tat cct ttg ata tat cag aaa aga ttt    2415
Leu Lys Gln Phe Gln Lys Glu Tyr Pro Leu Ile Tyr Gln Lys Arg Phe
    765                 770                 775
cca acc acg gag agt gaa gca gca ctt ttt ggt gac aaa cct aca atc    2463
Pro Thr Thr Glu Ser Glu Ala Ala Leu Phe Gly Asp Lys Pro Thr Ile
780                 785                 790                 795
aag caa cca atg ctg att tta aga aaa cca aag ttc cgt agt cta aga    2511
Lys Gln Pro Met Leu Ile Leu Arg Lys Pro Lys Phe Arg Ser Leu Arg
                800                 805                 810
taactaactg aattaaaaat tatgtaatac ttgtggaact ttgataaatg aagccatatc    2571
tgagaatgta gctactcaaa aggaagtctg tcattaataa ggtatttcta aataaacaca    2631
ttatgtaagg aagtgccaaa atagttatca atgtgagact cttaggaaac taactagatc    2691
tcaattgaga gcacataaca atagatgata ccaaatactt tttgttttta acacagctat    2751
ccagtaaggc tatcatgatg tgtgctaaaa ttttatttac ttgaattttg aaaactgagc    2811
tgtgttaggg attaaactat aattctgttc ttaaaagaaa atttatctgc aaatgtgcaa    2871
gttctgagat attagctaat gaattagttg tttggggtta cttctttgtt tctaagtata    2931
agaatgtgaa gaatatttga aaactcaatg aaataattct cagctgccaa atgttgcact    2991
cttttatata ttctttttcc acttttgatc tatttatata tatgtatgtg tttttaaaat    3051
atgtgtatat tttatcagat ttggttttgc cttaaatatt atccccaatt gcttcagtca    3111
ttcatttgtt cagtatatat attttgaatt ctagttttca taatctatta gaagatgggg    3171
atataaaaga agtataaggc aatcatatat tcattcaaaa gatatttatt tagcaactgc    3231
tatgtgcctt tcgttgttcc agatatgcag agacaatgat aaataaaaca tataatctct    3291
tccataaggt atttattttt taatcaaggg agatacacct atcagatgtt taaaataaca    3351
acactaccca ctgaaatcag ggcatataga atcattcagc taaagagtga cttctatgat    3411
gatggaacag gtctctaagc tagtggtttt caaactggta cacattagac tcacccgagg    3471
aattttaaaa cagcctatat gcccagggcc taacttacac taattaaatc tgaattttgg    3531
ggatgttgta tagggattag tatttttttt aatctaggtg attccaatat tcagccaact    3591
gtgagaatca atggcctaaa tgctttttat aaacattttt ataagtgtca agataatggc    3651
acattgactt tattttttca ttggaagaaa atgcctgcca agtataaatg actctcatct    3711
taaaacaagg ttcttcaggt ttctgcttga ttgacttggt acaaacttga agcaagttgc    3771
cttctaattt ttactccaag attgtttcat atctattcct taagtgtaaa gaaatatata    3831
atgcatggtt tgtaataaaa tcttaatgtt taatgactgt tctcatttct caatgtaatt    3891
tcatactgtt tctctataaa atgatagtat tccatttaac attactgatt tttattaaaa    3951
acctggacag aaaattataa attataaata tgactttatc ctggctataa aattattgaa    4011
ccaaaatgaa ttctttctaa ggcatttgaa tactaaaacg tttattgttt atagatatgt    4071
aaaatgtgga ttatgttgca aattgagatt aaaattattt ggggttttgt aacaatataa    4131
ttttgctttt gtattataga caaatatata aataataaag gcaggcaact ttcatttgca    4191
ctaatgtaca tgcaattgag attacaaaat acatggtaca atgctttaat aacaaactct    4251
gccagtcagg tttgaatcct actgtgctat taactagcta gtaaactcag acaagttact    4311
taacttctct aagccccagt tttgttatct ataaaatgaa tattataata gtacctcttt    4371
ttaggattgc gaggattaag caggataatg catgtaaagt gttagcacag tgtctcacat    4431
agaataagca ctctataaat attttactag aatcacctag gattatagca ctagaagaga    4491
tcttagcaaa aatgtggtcc tttctgttgc tttggacaga catgaaccaa aacaaaatta    4551
cggacaattg atgagcctta ttaactatct tttcattatg agacaaaggt tctgattatg    4611
cctactggtt gaaatttttt aatctagtca agaaggaaaa tttgatgagg aaggaaggaa    4671
tggatatctt cagaagggct tcgcctaagc tggaacatgg atagattcca ttctaacata    4731
aagatcttta agttcaaata tagatgagtt gactggtaga tttggtggta gttgctttct    4791
cgggatataa gaagcaaaat caactgctac aagtaaagag gggatgggga aggtgttgca    4851
catttaaaga gagaaagtgt gaaaaagcct aattgtggga atgcacaggt ttcaccagat    4911
cagatgatgt ctggttattc tgtaaattat agttcttatc ccagaaatta ctgcctccac    4971
catccctaat atcttctaat tggtatcata taatgaccca ctcttcttat gttatccaaa    5031
cagttatgtg gcatttagta atggaatgta catggaattt cccactgact tacctttctg    5091
tccttgggaa gcttaaactc tgaatcttct catctgtaaa atgtgaatta aagtatctac    5151
ctaactgagt tgtgattgta gtgaaagaaa ggcaatatat ttaaatcttg aatttagcaa    5211
gcccacgctc gatttttatg tcctttcctc ttgccttgta ttgagtttaa gatctctact    5271
gattaaaact cttttgctat caaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa                  5318
<210>4
<211>811
<212>PRT
<213>人
<400>4
Met Glu Ser Gln Gly Val Pro Pro Gly Pro Tyr Arg Ala Thr Lys Leu
1               5                   10                  15
Trp Asn Glu Val Thr Thr Ser Phe Arg Ala Gly Met Pro Leu Arg Lys
            20                  25                  30
His Arg Gln His Phe Lys Lys Tyr Gly Asn Cys Phe Thr Ala Gly Glu
        35                  40                  45
Ala Val Asp Trp Leu Tyr Asp Leu Leu Arg Asn Asn Ser Asn Phe Gly
    50                  55                  60
Pro Glu Val Thr Arg Gln Gln Thr Ile Gln Leu Leu Arg Lys Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Asn His Val Ile Glu Asp Ile Lys Gly Arg Trp Gly Ser Glu Asn
                85                  90                  95
Val Asp Asp Asn Asn Gln Leu Phe Arg Phe Pro Ala Thr Ser Pro Leu
            100                 105                 110
Lys Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu Arg Lys Asn Asn Ile Glu
        115                 120                 125
Asn Phe Ser Lys Asp Lys Asp Ser Ile Phe Lys Leu Arg Asn Leu Ser
    130                 135                 140
Arg Arg Thr Pro Lys Arg His Gly Leu His Leu Ser Gln Glu Asn Gly
145                 150                 155                 160
Glu Lys Ile Lys His Glu Ile Ile Asn Glu Asp Gln Glu Asn Ala Ile
                165                 170                 175
Asp Asn Arg Glu Leu Ser Gln Glu Asp Val Glu Glu Val Trp Arg Tyr
            180                 185                 190
Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu Gly Val Pro Ser Leu Glu
        195                 200                 205
Glu Val Ile Asn Pro Lys Gln Val Ile Pro Gln Tyr Ile Met Tyr Asn
    210                 215                 220
Met Ala Asn Thr Ser Lys Arg Gly Val Val Ile Leu Gln Asn Lys Ser
225                 230                 235                 240
Asp Asp Leu Pro His Trp Val Leu Ser Ala Met Lys Cys Leu Ala Asn
                245                 250                 255
Trp Pro Arg Ser Asn Asp Met Asn Asn Pro Thr Tyr Val Gly Phe Glu
            260                 265                 270
Arg Asp Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe Leu Asp Leu Pro Glu
        275                 280                 285
Pro Leu Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val
    290                 295                 300
Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val Ser Asp Arg Ser Ser Gly Ile His Lys
305                 310                 315                 320
Ile Gln Asp Asp Pro Gln Ser Ser Lys Phe Leu His Leu Asn Asn Leu
                325                 330                 335
Asn Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu Ser Leu Leu His Arg
            340                 345                 350
Glu Lys Asn Lys Glu Glu Ser Asp Ser Thr Glu Arg Leu Gln Ile Ser
        355                 360                 365
Asn Pro Gly Phe Gln Glu Arg Cys Ala Lys Lys Met Gln Leu Val Asn
    370                 375                 380
Leu Arg Asn Arg Arg Val Ser Ala Asn Asp Ile Met Gly Gly Ser Cys
385                 390                 395                 400
His Asn Leu Ile Gly Leu Ser Asn Met His Asp Leu Ser Ser Asn Ser
                405                 410                 415
Lys Pro Arg Cys Cys Ser Leu Glu Gly Ile Val Asp Val Pro Gly Asn
            420                 425                 430
Ser Ser Lys Glu Ala Ser Ser Val Phe His Gln Ser Phe Pro Asn Ile
        435                 440                 445
Glu Gly Gln Asn Asn Lys Leu Phe Leu Glu Ser Lys Pro Lys Gln Glu
    450                 455                 460
Phe Leu Leu Asn Leu His Ser Glu Glu Asn Ile Gln Lys Pro Phe Ser
465                 470                 475                 480
Ala Gly Phe Lys Arg Thr Ser Thr Leu Thr Val Gln Asp Gln Glu Glu
                485                 490                 495
Leu Cys Asn Gly Lys Cys Lys Ser Lys Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser
            500                 505                 510
Leu Leu Leu Arg Ser Ser Thr Arg Arg Asn Ser Tyr Ile Asn Thr Pro
        515                 520                 525
Val Ala Glu Ile Ile Met Lys Pro Asn Val Gly Gln Gly Ser Thr Ser
    530                 535                 540
Val Gln Thr Ala Met Glu Ser Glu Leu Gly Glu Ser Ser Ala Thr Ile
545                 550                 555                 560
Asn Lys Arg Leu Cys Lys Ser Thr Ile Glu Leu Ser Glu Asn Ser Leu
                565                 570                 575
Leu Pro Ala Ser Ser Met Leu Thr Gly Thr Gln Ser Leu Leu Gln Pro
            580                 585                 590
His Leu Glu Arg Val Ala Ile Asp Ala Leu Gln Leu Cys Cys Leu Leu
        595                 600                 605
Leu Pro Pro Pro Asn Arg Arg Lys Leu Gln Leu Leu Met Arg Met Ile
    610                 615                 620
Ser Arg Met Ser Gln Asn Val Asp Met Pro Lys Leu His Asp Ala Met
625                 630                 635                 640
Gly Thr Arg Ser Leu Met Ile His Thr Phe Ser Arg Cys Val Leu Cys
                645                 650                 655
Cys Ala Glu Glu Val Asp Leu Asp Glu Leu Leu Ala Gly Arg Leu Val
            660                 665                 670
Ser Phe Leu Met Asp His His Gln Glu Ile Leu Gln Val Pro Ser Tyr
        675                 680                 685
Leu Gln Thr Ala Val Glu Lys His Leu Asp Tyr Leu Lys Lys Gly His
    690                 695                 700
Ile Glu Asn Pro Gly Asp Gly Leu Phe Ala Pro Leu Pro Thr Tyr Ser
705                 710                 715                 720
Tyr Cys Lys Gln Ile Ser Ala Gln Glu Phe Asp Glu Gln Lys Val Ser
                725                 730                 735
Thr Ser Gln Ala Ala Ile Ala Glu Leu Leu Glu Asn Ile Ile Lys Asn
            740                 745                 750
Arg Ser Leu Pro Leu Lys Glu Lys Arg Lys Lys Leu Lys Gln Phe Gln
        755                 760                 765
Lys Glu Tyr Pro Leu Ile Tyr Gln Lys Arg Phe Pro Thr Thr Glu Ser
    770                 775                 780
Glu Ala Ala Leu Phe Gly Asp Lys Pro ThrIle Lys Gln Pro Met Leu
785                 790                 795                 800
Ile Leu Arg Lys Pro Lys Phe Arg Ser Leu Arg
                805                 810
<210>5
<211>8666
<212>DNA
<213>人
<220>
<221>CDS
<222>(79)..(1659)
<400>5
gagactcgcc actgccgcgg ccgctgggcc tgagtgtcgc cttcgccgcc atggacgcca   60
ccgggcgctg acagacct atg gag agt cag ggt gtg cct ccc ggg cct tat    111
                    Met Glu Ser Gln Gly Val Pro Pro Gly Pro Tyr
                     1              5                   10
cgg gcc acc aag ctg tgg aat gaa gtt acc aca tct ttt cga gca gga    159
Arg Ala Thr Lys Leu Trp Asn Glu Val Thr Thr Ser Phe Arg Ala Gly
            15                  20                  25
atg cct cta aga aaa cac aga caa cac ttt aaa aaa tat ggc aat tgt    207
Met Pro Leu Arg Lys His Arg Gln His Phe Lys Lys Tyr Gly Asn Cys
        30                  35                  40
ttc aca gca gga gaa gca gtg gat tgg ctt tat gac cta tta aga aat    255
Phe Thr Ala Gly Glu Ala Val Asp Trp Leu Tyr Asp Leu Leu Arg Asn
    45                  50                  55
aat agc aat ttt ggt cct gaa gtt aca agg caa cag act atc caa ctg    303
Asn Ser Asn Phe Gly Pro Glu Val Thr Arg Gln Gln Thr Ile Gln Leu
60                  65                  70                  75
ttg agg aaa ttt ctt aag aat cat gta att gaa gat atc aaa ggg agg    351
Leu Arg Lys Phe Leu Lys Asn His Val Ile Glu Asp Ile Lys Gly Arg
                80                  85                  90
tgg gga tca gaa aat gtt gat gat aac aac cag ctc ttc aga ttt cct    399
Trp Gly Ser Glu Asn Val Asp Asp Asn Asn Gln Leu Phe Arg Phe Pro
            95                  100                 105
gca act tcg cca ctt aaa act cta cca cga agg tat cca gaa ttg aga    447
Ala Thr Ser Pro Leu Lys Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu Arg
        110                 115                 120
aaa aac aac ata gag aac ttt tcc aaa gat aaa gat agc att ttt aaa    495
Lys Asn Asn Ile Glu Asn Phe Ser Lys Asp Lys Asp Ser Ile Phe Lys
    125                 130                 135
tta cga aac tta tct cgt aga act cct aaa agg cat gga tta cat tta    543
Leu Arg Asn Leu Ser Arg Arg Thr Pro Lys Arg His Gly Leu His Leu
140                 145                 150                 155
tct cag gaa aat ggc gag aaa ata aag cat gaa ata atc aat gaa gat    591
Ser Gln Glu Asn Gly Glu Lys Ile Lys His Glu Ile Ile Asn Glu Asp
                160                 165                 170
caa gaa aat gca att gat aat aga gaa cta agc cag gaa gat gtt gaa    639
Gln Glu Asn Ala Ile Asp Asn Arg Glu Leu Ser Gln Glu Asp Val Glu
            175                 180                 185
gaa gtt tgg aga tat gtt att ctg atc tac ctg caa acc att tta ggt    687
Glu Val Trp Arg Tyr Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu Gly
        190                 195                 200
gtg cca tcc cta gaa gaa gtc ata aat cca aaa caa gta att ccc caa    735
Val Pro Ser Leu Glu Glu Val Ile Asn Pro Lys Gln Val Ile Pro Gln
    205                 210                 215
tat ata atg tac aac atg gcc aat aca agt aaa cgt gga gta gtt ata     783
Tyr Ile Met Tyr Asn Met Ala Asn Thr Ser Lys Arg Gly Val Val Ile
220                 225                 230                 235
cta caa aac aaa tca gat gac ctc cct cac tgg gta tta tct gcc atg     831
Leu Gln Asn Lys Ser Asp Asp Leu Pro His Trp Val Leu Ser Ala Met
                240                 245                 250
aag tgc cta gca aat tgg cca aga agc aat gat atg aat aat cca act     879
Lys Cys Leu Ala Asn Trp Pro Arg Ser Asn Asp Met Asn Asn Pro Thr
            255                 260                 265
tat gtt gga ttt gaa cga gat gta ttc aga aca atc gca gat tat ttt     927
Tyr Val Gly Phe Glu Arg Asp Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe
        270                 275                 280
cta gat ctc cct gaa cct cta ctt act ttt gaa tat tac gaa tta ttt     975
Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe
    285                 290                 295
gta aac att ttg gtt gtt tgt ggc tac atc aca gtt tca gat aga tcc    1023
Val Asn Ile Leu Val Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val Ser Asp Arg Ser
300                 305                 310                 315
agt ggg ata cat aaa att caa gat gat cca cag tct tca aaa ttc ctt    1071
Ser Gly Ile His Lys Ile Gln Asp Asp Pro Gln Ser Ser Lys Phe Leu
                320                 325                 330
cac tta aac aat ttg aat tcc ttc aaa tca act gag tgc ctt ctt ctc    1119
His Leu Asn Asn Leu Asn Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu
            335                 340                 345
agt ctg ctt cat aga gaa aaa aac aaa gaa gaa tca gat tct act gag    1167
Ser Leu Leu His Arg Glu Lys Asn Lys Glu Glu Ser Asp Ser Thr Glu
        350                 355                 360
aga cta cag ata agc aat cca gga ttt caa gaa aga tgt gct aag aaa    1215
Arg Leu Gln Ile Ser Asn Pro Gly Phe Gln Glu Arg Cys Ala Lys Lys
    365                 370                 375
atg cag cta gtt aat tta aga aac aga aga gtg agt gct aat gac ata    1263
Met Gln Leu Val Asn Leu Arg Asn Arg Arg Val Ser Ala Asn Asp Ile
380                 385                 390                 395
atg gga gga agt tgt cat aat tta ata ggg tta agt aat atg cat gat    1311
Met Gly Gly Ser Cys His Asn Leu Ile Gly Leu Ser Asn Met His Asp
                400                 405                 410
cta tcc tct aac agc aaa cca agg tgc tgt tct ttg gaa gga att gta    1359
Leu Ser Ser Asn Ser Lys Pro Arg Cys Cys Ser Leu Glu Gly Ile Val
            415                 420                 425
gat gtg cca ggg aat tca agt aaa gag gca tcc agt gtc ttt cat caa    1407
Asp Val Pro Gly Asn Ser Ser Lys Glu Ala Ser Ser Val Phe His Gln
        430                 435                 440
tct ttt ccg aac ata gaa gga caa aat aat aaa ctg ttt tta gag tct    1455
Ser Phe Pro Asn Ile Glu Gly Gln Asn Asn Lys Leu Phe Leu Glu Ser
    445                 450                 455
aag ccc aaa cag gaa ttc ctg ttg aat ctt cat tca gag gaa aat att      1503
Lys Pro Lys Gln Glu Phe Leu Leu Asn Leu His Ser Glu Glu Asn Ile
460                 465                 470                 475
caa aag cca ttc agt gct ggt ttt aag aga acc tct act ttg act gtt      1551
Gln Lys Pro Phe Ser Ala Gly Phe Lys Arg Thr Ser Thr Leu Thr Val
                480                 485                 490
caa gac caa gag gag ttg tgt aat ggg aaa tgc aag tca aaa cag ctt      1599
Gln Asp Gln Glu Glu Leu Cys Asn Gly Lys Cys Lys Ser Lys Gln Leu
            495                 500                 505
tgt agg tct cag agt ttg ctt tta aga agt agt aca aga agg aat agt      1647
Cys Arg Ser Gln Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Thr Arg Arg Asn Ser
        510                 515                 520
tat atc aat aca ccagtggctg aaattatcat gaaaccaaat gttggacaag          1699
Tyr Ile Asn Thr
    525
gcagcacaag tgtgcaaaca gctatggaaa gtgaactcgg agagtctagt gccacaatca    1759
ataaaagact ctgcaaaagt acaatagaac tttcagaaaa ttctttactt ccagcttctt    1819
ctatgttgac tggcacacaa agcttgctgc aacctcattt agagagggtt gccatcgatg    1879
ctctacagtt atgttgtttg ttacttcccc caccaaatcg tagaaagctt caacttttaa    1939
tgcgtatgat ttcccgaatg agtcaaaatg ttgatatgcc caaacttcat gatgcaatgg    1999
gtacgaggtc actgatgata catacctttt ctcgatgtgt gttatgctgt gctgaagaag    2059
tggatcttga tgagcttctt gctggaagat tagtttcttt cttaatggat catcatcagg    2119
aaattcttca agtaccctct tacttacaga ctgcagtgga aaaacatctt gactacttaa    2179
aaaagggaca tattgaaaat cctggagatg gactatttgc tcctttgcca acttactcat    2239
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gaaaaaaact aaaacagttt cagaaggaat atcctttgat atatcagaaa agatttccaa    2419
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caatgtgaga ctcttaggaa actaactaga tctcaattga gagcacataa caatagatga    2719
taccaaatac tttttgtttt taacacagct atccagtaag gctatcatga tgtgtgctaa    2779
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tcttaaaaga aaatttatct gcaaatgtgc aagttctgag atattagcta atgaattagt    2899
tgtttggggt tacttctttg tttctaagta taagaatgtg aagaatattt gaaaactcaa    2959
tgaaataatt ctcagctgcc aaatgttgca ctcttttata tattcttttt ccacttttga    3019
tctatttata tatatgtatg tgtttttaaa atatgtgtat attttatcag atttggtttt    3079
gccttaaata ttatccccaa ttgcttcagt cattcatttg ttcagtatat atattttgaa    3139
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gaatcattca gctaaagagt gacttctatg atgatggaac aggtctctaa gctagtggtt    3439
ttcaaactgg tacacattag actcacccga ggaattttaa aacagcctat atgcccaggg    3499
cctaacttac actaattaaa tctgaatttt ggggatgttg tatagggatt agtatttttt    3559
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ataaacattt ttataagtgt caagataatg gcacattgac tttatttttt cattggaaga    3679
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attccattta acattactga tttttattaa aaacctggac agaaaattat aaattataaa    3979
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ttaaaattat ttggggtttt gtaacaatat aattttgctt ttgtattata gacaaatata    4159
taaataataa aggcaggcaa ctttcatttg cactaatgta cgagactcgc cactgccgcg    4219
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tggagagtca gggtgtgcct cccgggcctt atcgggccac caagctgtgg aatgaagtta    4339
ccacatcttt tcgagcagga atgcctctaa gaaaacacag acaacacttt aaaaaatatg    4399
gcaattgttt cacagcagga gaagcagtgg attggcttta tgacctatta agaaataata    4459
gcaattttgg tcctgaagtt acaaggcaac agactatcca actgttgagg aaatttctta    4519
agaatcatgt aattgaagat atcaaaggga ggtggggatc agaaaatgtt gatgataaca    4579
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aattgagaaa aaacaacata gagaactttt ccaaagataa agatagcatt tttaaattac    4699
gaaacttatc tcgtagaact cctaaaaggc atggattaca tttatctcag gaaaatggcg    4759
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taagccagga agatgttgaa gaagtttgga gatatgttat tctgatctac ctgcaaacca    4879
ttttaggtgt gccatcccta gaagaagtca taaatccaaa acaagtaatt ccccaatata    4939
taatgtacaa catggccaat acaagtaaac gtggagtagt tatactacaa aacaaatcag    4999
atgacctccc tcactgggta ttatctgcca tgaagtgcct agcaaattgg ccaagaagca    5059
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attattttct agatctccct gaacctctac ttacttttga atattacgaa ttatttgtaa    5179
acattttggg cttgctgcaa cctcatttag agagggttgc catcgatgct ctacagttat    5239
gttgtttgtt acttccccca ccaaatcgta gaaagcttca acttttaatg cgtatgattt    5299
cccgaatgag tcaaaatgtt gatatgccca aacttcatga tgcaatgggt acgaggtcac    5359
tgatgataca taccttttct cgatgtgtgt tatgctgtgc tgaagaagtg gatcttgatg    5419
agcttcttgc tggaagatta gtttctttct taatggatca tcatcaggaa attcttcaag    5479
taccctctta cttacagact gcagtggaaa aacatcttga ctacttaaaa aagggacata    5539
ttgaaaatcc tggagatgga ctatttgctc ctttgccaac ttactcatac tgtaagcaga    5599
ttagtgctca ggagtttgat gagcaaaaag tttctacctc tcaagctgca attgcagaac    5659
ttttagaaaa tattattaaa aacaggagtt tacctctaaa ggagaaaaga aaaaaactaa    5719
aacagtttca gaaggaatat cctttgatat atcagaaaag atttccaacc acggagagtg    5779
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ggtatttcta aataaacaca ttatgtaagg aagtgccaaa atagttatca atgtgagact    6019
cttaggaaac taactagatc tcaattgaga gcacataaca atagatgata ccaaatactt    6079
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taaagagtga cttctatgat gatggaacag gtctctaagc tagtggtttt caaactggta    6799
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taattaaatc tgaattttgg ggatgttgta tagggattag tatttttttt aatctaggtg    6919
attccaatat tcagccaact gtgagaatca atggcctaaa tgctttttat aaacattttt    6979
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<210>6
<211>527
<212>PRT
<213>人
<400>6
Met Glu Ser Gln Gly Val Pro Pro Gly Pro Tyr Arg Ala Thr Lys Leu
1               5                   10                  15
Trp Asn Glu Val Thr Thr Ser Phe Arg Ala Gly Met Pro Leu Arg Lys
            20                  25                  30
His Arg Gln His Phe Lys Lys Tyr Gly Asn Cys Phe Thr Ala Gly Glu
        35                  40                  45
Ala Val Asp Trp Leu Tyr Asp Leu Leu Arg Asn Asn Ser Asn Phe Gly
    50                  55                  60
Pro Glu Val Thr Arg Gln Gln Thr Ile Gln Leu Leu Arg Lys Phe Leu
65                  70                  75                  80
Lys Asn His Val Ile Glu Asp Ile Lys Gly Arg Trp Gly Ser Glu Asn
                85                  90                  95
Val Asp Asp Asn Asn Gln Leu Phe Arg Phe Pro Ala Thr Ser Pro Leu
            100                 105                 110
Lys Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu Arg Lys Asn Asn Ile Glu
        115                 120                 125
Asn Phe Ser Lys Asp Lys Asp Ser Ile Phe Lys Leu Arg Asn Leu Ser
    130                 135                 140
Arg Arg Thr Pro Lys Arg His Gly Leu His Leu Ser Gln Glu Asn Gly
145                 150                 155                 160
Glu Lys Ile Lys His Glu Ile Ile Asn Glu Asp Gln Glu Asn Ala Ile
                165                 170                 175
Asp Asn Arg Glu Leu Ser Gln Glu Asp Val Glu Glu Val Trp Arg Tyr
            180                 185                 190
Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu Gly Val Pro Ser Leu Glu
        195                 200                 205
Glu Val Ile Asn Pro Lys Gln Val Ile Pro Gln Tyr Ile Met Tyr Asn
    210                 215                 220
Met Ala Asn Thr Ser Lys Arg Gly Val Val Ile Leu Gln Asn Lys Ser
225                 230                 235                 240
Asp Asp Leu Pro His Trp Val Leu Ser Ala Met Lys Cys Leu Ala Asn
                245                 250                 255
Trp Pro Arg Ser Asn Asp Met Asn Asn Pro Thr Tyr Val Gly Phe Glu
            260                 265                 270
Arg Asp Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe Leu Asp Leu Pro Glu
        275                 280                 285
Pro Leu Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val
    290                 295                 300
Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val Ser Asp Arg Ser Ser Gly Ile His Lys
305                 310                 315                 320
Ile Gln Asp Asp Pro Gln Ser Ser Lys Phe Leu His Leu Asn Asn Leu
                325                 330                 335
Asn Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu Ser Leu Leu His Arg
            340                 345                 350
Glu Lys Asn Lys Glu Glu Ser Asp Ser Thr Glu Arg Leu Gln Ile Ser
        355                 360                 365
Asn Pro Gly Phe Gln Glu Arg Cys Ala Lys Lys Met Gln Leu Val Asn
    370                 375                 380
Leu Arg Asn Arg Arg Val Ser Ala Asn Asp Ile Met Gly Gly Ser Cys
385                 390                 395                 400
His Asn Leu Ile Gly Leu Ser Asn Met His Asp Leu Ser Ser Asn Ser
                405                 410                 415
Lys Pro Arg Cys Cys Ser Leu Glu Gly Ile Val Asp Val Pro Gly Asn
            420                 425                 430
Ser Ser Lys Glu Ala Ser Ser Val Phe His Gln Ser Phe Pro Asn Ile
        435                 440                 445
Glu Gly Gln Asn Asn Lys Leu Phe Leu Glu Ser Lys Pro Lys Gln Glu
    450                 455                 460
Phe Leu Leu Asn Leu His Ser Glu Glu Asn Ile Gln Lys Pro Phe Ser
465                 470                 475                 480
Ala Gly Phe Lys Arg Thr Ser Thr Leu Thr Val Gln Asp Gln Glu Glu
                485                 490                 495
Leu Cys Asn Gly Lys Cys Lys Ser Lys Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser
            500                 505                 510
Leu Leu Leu Arg Ser Ser Thr Arg Arg Asn Ser Tyr Ile Asn Thr
        515                 520                 525
<210>7
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>7
Ile Tyr Asn Glu Tyr Ile Tyr Asp Leu
1               5
<210>8
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>8
Ile Tyr Asn Glu Tyr Ile Tyr Asp Leu Phe
1               5                   10
<210>9
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>9
Tyr Ile Tyr Asp Leu Phe Val Pro Val
1               5
<210>10
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>10
Arg Leu Ala Ile Phe Lys Asp Leu Val
1               5
<210>11
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>11
Thr Met Ser Ser Ser Lys Leu Ser Asn Val
1               5                   10
<210>12
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>12
Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile
1               5
<210>13
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>13
Asp Tyr Ala Asp Leu Lys Glu Lys Leu
1               5
<210>14
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>14
Gln Tyr Glu Arg Ala Cys Lys Asp Leu
1               5
<210>15
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>15
Cys Tyr Leu Ala Tyr Asp Glu Thr Leu
1               5
<210>16
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>16
Ala Tyr Asp Glu Thr Leu Asn Val Leu
1               5
<210>17
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>17
Gly Tyr Lys Asp Glu Asn Asn Arg Leu
1               5
<210>18
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>18
Leu Tyr Gly Ser Leu Thr Asn Ser Leu
1               5
<210>19
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>19
Lys Tyr Ala Glu Asp Arg Glu Arg Phe
1               5
<210>20
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>20
Asn Tyr Asp Ile Ala Ile Ala Glu Leu
1               5
<210>21
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>21
Cys Tyr Lys Ala Lys Ile Lys Glu Leu
1               5
<210>22
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>22
Asp Tyr Leu Gln Val Cys Leu Arg Ile
1               5
<210>23
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>23
Lys Phe Asn Gln Ile Lys Ala Glu Leu
1               5
<210>24
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>24
Ser Tyr Val Phe Ser Ala Asp Pro Ile
1               5
<210>25
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>25
Ala Tyr Arg Leu Leu Lys Leu Gly Ile
1               5
<210>26
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>26
Asp Tyr Glu Gln Ala Asn Leu Asn Met
1               5
<210>27
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>27
Asn Phe Asp Gly Ile Lys Leu Asp Leu
1               5
<210>28
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>28
Leu Phe Val Pro Val Ser Ser Lys Phe
1               5
<210>29
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>29
Leu Phe Asp Ser Leu Gln Glu Arg Leu
1               5
<210>30
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>30
Lys Phe Ser Val Trp Val Ser Phe Phe
1               5
<210>31
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>31
Lys Leu Leu Asp Leu Ile Glu Asp Leu
1               5
<210>32
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>32
Arg Phe Pro Lys Pro Glu Leu Glu Ile
1               5
<210>33
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>33
Lys Tyr Asn Ala Asp Arg Lys Lys Trp
1               5
<210>34
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>34
Arg Thr Gln Asn Leu Lys Ala Asp Leu
1               5
<210>35
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>35
Lys Trp Leu Glu Glu Lys Met Met Leu
1               5
<210>36
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>36
Lys Ser Asn Glu Met Glu Glu Asp Leu
1               5
<210>37
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>37
Lys Ile Glu Asp Gly Ser Val Val Leu
1               5
<210>38
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>38
Lys Gln Gln Asn Glu Met Glu Ile Leu
1               5
<210>39
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>39
Lys Thr Gln Asn Glu Gly Glu Arg Leu
1               5
<210>40
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>40
Lys Trp Lys Glu Lys Cys Asn Asp Leu
1               5
<210>41
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>41
Lys Ile Lys Glu Leu Glu Thr Ile Leu
1               5
<210>42
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>42
Phe Leu Leu Thr Ile Glu Asn Glu Leu
1               5
<210>43
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>43
Ser Ser Leu Ile Ile Asn Asn Lys Leu
1               5
<210>44
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>44
Lys Leu Thr Asn Leu Gln Asp Glu Leu
1               5
<210>45
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>45
Ile Met Gln Pro Val Lys Asp Leu Leu
1               5
<210>46
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>46
Lys Tyr Asn Ala Asp Arg Lys Lys Trp Leu
1               5                   10
<210>47
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>47
Lys Tyr Ala Glu Asp Arg Glu Arg Phe Phe
1               5                   10
<210>48
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>48
Gln Tyr Trp Ala Gln Arg Glu Ala Asp Phe
1               5                   10
<210>49
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>49
Leu Tyr Thr Ser Glu Ile Ser Ser Pro Ile
1               5                   10
<210>50
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>50
Lys Phe Gln Lys Arg Lys Met Leu Arg Leu
1               5                   10
<210>51
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>51
Ala Phe Leu Leu Thr Ile Glu Asn Glu Leu
1               5                   10
<210>52
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>52
Thr Tyr Ser Leu Arg Ser Gln Ala Ser Ile
1               5                   10
<210>53
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>53
Asp Phe Leu Gln His Ser Pro Ser Ile Leu
1               5                   10
<210>54
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>54
Arg Thr Leu Asn Val Leu Phe Asp Ser Leu
1               5                   10
<210>55
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>55
Lys Gln Ile Val His Phe Gln Gln Glu Leu
1               5                   10
<210>56
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>56
Lys Leu Leu Arg Ile Lys Ile Asn Glu Leu
1               5                   10
<210>57
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>57
Lys Ile Ile Glu Asp Met Arg Met Thr Leu
1               5                   10
<210>58
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>58
Arg Thr Ile Gln Gln Leu Lys Glu Gln Leu
1               5                   10
<210>59
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>59
Lys Val Glu Cys Ser His Ser Ala Lys Leu
1               5                   10
<210>60
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>60
Lys Asn Glu Lys Glu Glu Lys Ala Glu Leu
1               5                   10
<210>61
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>61
Lys Leu Ile Asn Glu Lys Lys Glu Lys Leu
1               5                   10
<210>62
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>62
Lys Leu Met His Thr Lys Ile Asp Glu Leu
1               5                   10
<210>63
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>63
Arg Val Leu Gln Glu Asn Asn Glu Gly Leu
1               5                   10
<210>64
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>64
Arg Val Ile Arg Val Ser Glu Leu Ser Leu
1               5                   10
<210>65
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>65
Arg Asn Leu Lys Glu Phe Gln Glu His Leu
1               5                   10
<210>66
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>66
Glu Tyr Ile Tyr Asp Leu Phe Val Pro Val
1               5                   10
<210>67
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>67
Lys Met Leu Arg Leu Ser Gln Asp Val
1               5
<210>68
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>68
Ala Leu Leu Arg Gln Ile Lys Glu Val
1               5
<210>69
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>69
Ala Leu Ser Glu Leu Thr Gln Gly Val
1               5
<210>70
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>70
Lys Leu Gly Ile Lys His Gln Ser Val
1               5
<210>71
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>71
Thr Leu Gln Lys Phe Gly Asp Phe Leu
1               5
<210>72
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>72
Lys Leu Thr Asp Ala Lys Lys Gln Ile
1               5
<210>73
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>73
Gln Leu Thr Glu Lys Asp Ser Asp Leu
1               5
<210>74
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>74
Asn Leu Gln Asp Met Lys His Leu Leu
1               5
<210>75
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>75
Ser Val Trp Val Ser Phe Phe Glu Ile
1               5
<210>76
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>76
Phe Gln Gly Cys Ile Met Gln Pro Val
1               5
<210>77
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>77
Val Leu Gln Glu Asn Asn Glu Gly Leu
1               5
<210>78
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>78
Thr Leu Asp Val Gln Ile Gln His Val
1               5
<210>79
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>79
Ala Ile Trp Glu Glu Cys Lys Glu Ile
1               5
<210>80
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>80
Phe Leu Gln His Ser Pro Ser Ile Leu
1               5
<210>81
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>81
Asp Leu Met Glu Asp Glu Asp Leu Val
1               5
<210>82
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>82
Ser Leu Leu Thr Leu Gly Lys Cys Ile
1               5
<210>83
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>83
Gly Ile Leu Pro Arg Thr Leu Asn Val
1               5
<210>84
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>84
Ile Leu Pro Arg Thr Leu Asn Val Leu
1               5
<210>85
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>85
Lys Ile Cys Ser Glu Arg Lys Arg Val
1               5
<210>86
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>86
Ser Leu Ser Glu Lys Lys Asn Leu Thr
1               5
<210>87
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>87
Leu Met His Thr Lys Ile Asp Glu Leu
1               5
<210>88
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>88
Trp Leu Glu Glu Lys Met Met Leu Ile
1               5
<210>89
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>89
Thr Leu Asn Val Leu Lys Phe Ser Ala
1               5
<210>90
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>90
Lys Leu Gln Thr Glu Pro Leu Ser Thr
1               5
<210>91
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>91
Cys Ile Met Gln Pro Val Lys Asp Leu
1               5
<210>92
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>92
Lys Gln Val Gln Lys Glu Val Ser Val
1               5
<210>93
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>93
Lys Leu Lys Glu Glu Ile Thr Gln Leu
1               5
<210>94
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>94
Thr Leu Ser Lys Glu Val Gln Gln Ile
1               5
<210>95
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>95
Asn Glu Tyr Ile Tyr Asp Leu Phe Val
1               5
<210>96
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>96
Leu Leu Asp Glu Asp Leu Asp Lys Thr
1               5
<210>97
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>97
Leu Ala Tyr Asp Glu Thr Leu Asn Val
1               5
<210>98
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>98
Asn Leu Pro Asn Thr Gln Leu Asp Leu
1               5
<210>99
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>99
Thr Leu Gly Lys Cys Ile Asn Val Leu
1               5
<210>100
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>100
Thr Leu Asn Val Leu Phe Asp Ser Leu
1               5
<210>101
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>101
Lys Leu Ser Asn Glu Ile Glu Thr Ala
1               5
<210>102
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>102
Lys Glu His Glu Asn Asn Thr Asp Val
1               5
<210>103
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>103
Asp Leu Leu Gly Asn Asp Tyr Leu Val
1               5
<210>104
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>104
Lys Ile Met Lys Leu Ser Asn Glu Ile
1               5
<210>105
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>105
Ile Leu Gln Ser Lys Ala Lys Lys Ile
1               5
<210>106
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>106
Ile Leu Asn Val Lys Arg Ala Thr Ile
1               5
<210>107
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>107
Lys Glu Leu Glu Thr Ile Leu Glu Thr
1               5
<210>108
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>108
Ile Val Asn Ile Ser Gln Cys Tyr Leu
1               5
<210>109
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>109
Leu Ile Cys Asn Glu Thr Val Glu Val
1               5
<210>110
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>110
Thr Leu Leu Gln Glu Arg Glu Ile Leu
1               5
<210>111
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>111
Thr Leu Glu Glu Asn Lys Ala Phe Ile
1               5
<210>112
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>112
Tyr Asn Ala Asp Arg Lys Lys Trp Leu
1               5
<210>113
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>113
Lys Gly Tyr Ser Phe Ile Lys Asp Leu
1               5
<210>114
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>114
Lys Met Ala Val Lys His Pro Gly Cys
1               5
<210>115
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>115
Ser Glu Met Ser Arg Val Ile Arg Val
1               5
<210>116
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>116
Gln Leu Thr Asn Asn Leu Gln Asp Met
1               5
<210>117
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>117
Gln Ile Val His Phe Gln Gln Glu Leu
1               5
<210>118
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>118
Asn Ile Ser Glu Phe Glu Glu Ser Ile
1               5
<210>119
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>119
Thr Leu Asn Ser Ser Gln Glu Lys Leu
1               5
<210>120
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>120
Ser Leu Ile Ile Asn Asn Lys Leu Ile
1               5
<210>121
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>121
Leu Ile Asn Glu Lys Lys Glu Lys Leu
1               5
<210>122
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>122
Lys Leu Leu Asp Glu Asp Leu Asp Lys Thr
1               5                   10
<210>123
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>123
Tyr Leu Ala Tyr Asp Glu Thr Leu Asn Val
1               5                   10
<210>124
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>124
Asn Met Ala Asn Ser Ile Lys Phe Ser Val
1               5                   10
<210>125
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>125
Val Leu Phe Asp Ser Leu Gln Glu Arg Leu
1               5                   10
<210>126
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>126
Lys Leu Ile Cys Asn Glu Thr Val Glu Val
1               5                   10
<210>127
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>127
Lys Leu Asp Leu Ser His Glu Phe Ser Leu
1               5                   10
<210>128
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>128
Leu Leu Thr Leu Gly Lys Cys Ile Asn Val
1               5                   10
<210>129
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>129
Gln Val Leu Glu Ala Lys Leu Glu Glu Val
1               5                   10
<210>130
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>130
Ser Leu Ser Glu Lys Lys Asn Leu Thr Leu
1               5                   10
<210>131
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>131
Thr Leu Tyr Gly Ser Leu Thr Asn Ser Leu
1               5                   10
<210>132
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>132
Ala Ile Trp Glu Glu Cys Lys Glu Ile Val
1               5                   10
<210>133
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>133
Leu Leu Asp Glu Asp Leu Asp Lys Thr Leu
1               5                   10
<210>134
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>134
Val Thr Leu Asp Val Gln Ile Gln His Val
1               5                   10
<210>135
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>135
Lys Thr Leu Glu Glu Asn Lys Ala Phe Ile
1               5                   10
<210>136
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>136
Gly Leu Thr Asn Ser Gly Lys Thr Tyr Thr
1               5                   10
<210>137
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>137
Asn Ile Ala Glu Ile Glu Asp Ile Arg Val
1               5                   10
<210>138
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>138
Ser Leu Gln Glu Arg Leu Tyr Thr Lys Met
1               5                   10
<210>139
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>139
Gln Gln Ile Glu Lys Leu Gln Ala Glu Val
1               5                   10
<210>140
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>140
Gln Gln Tyr Glu Arg Ala Cys Lys Asp Leu
1               5                   10
<210>141
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>141
Met Ile Val Asn Ile Ser Gln Cys Tyr Leu
1               5                   10
<210>142
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>142
Lys Leu Ser Asn Glu Ile Glu Thr Ala Thr
1               5                   10
<210>143
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>143
Lys Gln Ile Lys Gln Val Gln Lys Glu Val
1               5                   10
<210>144
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>144
Asn Leu Pro Asn Thr Gln Leu Asp Leu Leu
1               5                   10
<210>145
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>145
Gln Leu Asp Leu Leu Gly Asn Asp Tyr Leu
1               5                   10
<210>146
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>146
Met Met Leu Ile Thr Gln Ala Lys Glu Ala
1               5                   10
<210>147
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>147
Gln Ile Met Asp Ile Lys Pro Lys Arg Ile
1               5                   10
<210>148
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>148
Gln Leu Val Ala Ala Leu Glu Ile Gln Leu
1               5                   10
<210>149
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>149
Thr Leu Asn Val Leu Lys Phe Ser Ala Ile
1               5                   10
<210>150
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>150
Lys Ile Leu Asn Val Lys Arg Ala Thr Ile
1               5                   10
<210>151
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>151
Thr Leu Glu Glu Gln Glu Gln Thr Gln Val
1               5                   10
<210>152
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>152
Arg Val Ser Glu Leu Ser Leu Cys Asp Leu
1               5                   10
<210>153
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>153
Val Val Leu Asp Ser Cys Glu Val Ser Thr
1               5                   10
<210>154
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>154
Tyr Ser Phe Ile Lys Asp Leu Gln Trp Ile
1               5                   10
<210>155
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>155
Ser Ile Phe Thr Val Lys Ile Leu Gln Ile
1               5                   10
<210>156
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>156
Thr Leu Asp Val Gln Ile Gln His Val Val
1               5                   10
<210>157
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>157
Gly Thr Leu Gln Lys Phe Gly Asp Phe Leu
1               5                   10
<210>158
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>158
Phe Ile Lys Asp Leu Gln Trp Ile Gln Val
1               5                   10
<210>159
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>159
Thr Leu Ile Gln Gln Leu Lys Glu Glu Leu
1               5                   10
<210>160
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>160
Thr Ile Leu Glu Thr Gln Lys Val Glu Cys
1               5                   10
<210>161
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>161
Ala Ala Leu Glu Ile Gln Leu Lys Ala Leu
1               5                   10
<210>162
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>162
Gly Ile Leu Pro Arg Thr Leu Asn Val Leu
1               5                   10
<210>163
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>163
Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu
1               5
<210>164
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>164
Tyr Phe Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu
1               5
<210>165
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>165
Arg Tyr Pro Glu Leu Arg Lys Asn Asn
1               5
<210>166
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>166
Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu
1               5
<210>167
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>167
Lys Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser Leu
1               5
<210>168
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>168
Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe
1               5
<210>169
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>169
His Phe Lys Lys Tyr Gly Asn Cys Phe
1               5
<210>170
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>170
Gly Tyr Ile Thr Val Ser Asp Arg Ser
1               5
<210>171
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>171
Leu Phe Val Asn Ile Leu Gly Leu Leu
1               5
<210>172
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>172
Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu
1               5                   10
<210>173
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>173
Asp Tyr Phe Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu
1               5                   10
<210>174
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>174
Arg Tyr Pro Glu Leu Arg Lys Asn Asn Ile
1               5                   10
<210>175
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>175
Glu Tyr Pro Leu Ile Tyr Gln Lys Arg Phe
1               5                   10
<210>176
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>176
Thr Tyr Val Gly Phe Glu Arg Asp Val Phe
1               5                   10
<210>177
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>177
Ser Tyr Ile Asn Thr Pro Val Ala Glu Ile
1               5                   10
<210>178
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>178
Tyr Phe Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu Leu
1               5                   10
<210>179
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>179
Arg Tyr Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr
1               5                   10
<210>180
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>180
Ser Phe Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu
1               5                   10
<210>181
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>181
Leu Phe Arg Phe Pro Ala Thr Ser Pro Leu
1               5                   10
<210>182
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>182
Val Phe Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe Leu
1               5                   10
<210>183
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>183
Lys Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu
1               5                   10
<210>184
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>184
Arg Thr Ile Ala Asp Tyr Phe Leu Asp Leu
1               5                   10
<210>185
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>185
Gly Phe Glu Arg Asp Val Phe Arg Thr Ile
1               5                   10
<210>186
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>186
Arg Thr Pro Lys Arg His Gly Leu His Leu
1               5                   10
<210>187
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>187
Lys Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser Leu Leu
1               5                   10
<210>188
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>188
Lys Ser Thr Glu Cys Leu Leu Leu Ser Leu
1               5                   10
<210>189
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>189
Tyr Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val
1               5                   10
<210>190
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>190
Asn Phe Ser Lys Asp Lys Asp Ser Ile Phe
1               5                   10
<210>191
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>191
Phe Leu Met Asp His His Gln Glu Ile
1               5
<210>192
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>192
Leu Leu Gln Pro His Leu Glu Arg Val
1               5
<210>193
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>193
Ser Leu Leu Pro Ala Ser Ser Met Leu
1               5
<210>194
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>194
Trp Val Leu Ser Ala Met Lys Cys Leu
1               5
<210>195
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>195
Leu Leu Met Arg Met Ile Ser Arg Met
1               5
<210>196
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>196
Ser Met Leu Thr Gly Thr Gln Ser Leu
1               5
<210>197
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>197
Leu Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu
1               5
<210>198
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>198
Tyr Ile Met Tyr Asn Met Ala Asn Thr
1               5
<210>199
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>199
Phe Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu Leu
1               5
<210>200
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>200
Ala Leu Phe Gly Asp Lys Pro Thr Ile
1               5
<210>201
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>201
Met Leu Thr Gly Thr Gln Ser Leu Leu
1               5
<210>202
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>202
Leu Ile Tyr Gln Lys Arg Phe Pro Thr
1               5
<210>203
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>203
Thr Leu Pro Arg Arg Tyr Pro Glu Leu
1               5
<210>204
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>204
Lys Gln Phe Gln Lys Glu Tyr Pro Leu
1               5
<210>205
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>205
Ile Met Gly Gly Ser Cys His Asn Leu
1               5
<210>206
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>206
Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val
1               5
<210>207
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>207
Thr Ile Ala Asp Tyr Phe Leu Asp Leu
1               5
<210>208
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>208
Ala Leu Gln Leu Cys Cys Leu Leu Leu
1               5
<210>209
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>209
Arg Leu Cys Lys Ser Thr Ile Glu Leu
1               5
<210>210
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>210
Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser Leu Leu
1               5
<210>211
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>211
Val Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile
1               5
<210>212
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>212
Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val Val
1               5
<210>213
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>213
Ile Leu Gln Asn Lys Ser Asp Asp Leu
1               5
<210>214
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>214
Lys Leu Gln Leu Leu Met Arg Met Ile
1               5
<210>215
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>215
Met Ile Ser Arg Met Ser Gln Asn Val
1               5
<210>216
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>216
Thr Ile Gln Leu Leu Arg Lys Phe Leu
1               5
<210>217
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>217
Cys Ser Leu Glu Gly Ile Val Asp Val
1               5
<210>218
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>218
Leu Val Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val
1               5
<210>219
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>219
Tyr Ile Asn Thr Pro Val Ala Glu Ile
1               5
<210>220
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>220
Ile Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu
1               5
<210>221
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>221
Lys Ser Asp Asp Leu Pro His Trp Val
1               5
<210>222
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>222
Leu Leu Pro Ala Ser Ser Met Leu Thr
1               5
<210>223
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>223
Met Ile His Thr Phe Ser Arg Cys Val
1               5
<210>224
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>224
Leu Met Ile His Thr Phe Ser Arg Cys
1               5
<210>225
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>225
Cys Val Leu Cys Cys Ala Glu Glu Val
1               5
<210>226
<211>9
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>226
Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Gly Leu
1               5
<210>227
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>227
Leu Leu Ala Gly Arg Leu Val Ser Phe Leu
1               5                   10
<210>228
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>228
Phe Leu Met Asp His His Gln Glu Ile Leu
1               5                   10
<210>229
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>229
Ser Leu Leu Gln Pro His Leu Glu Arg Val
1               5                   10
<210>230
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>230
Ile Leu Val Val Cys Gly Tyr Ile Thr Val
1               5                   10
<210>231
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>231
Leu Thr Phe Glu Tyr Tyr Glu Leu Phe Val
1               5                   10
<210>232
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>232
Ile Leu Gly Val Pro Ser Leu Glu Glu Val
1               5                   10
<210>233
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>233
Leu Ile Tyr Leu Gln Thr Ile Leu Gly Val
1               5                   10
<210>234
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>234
Tyr Leu Gln Thr Ala Val Glu Lys His Leu
1               5                   10
<210>235
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>235
Leu Met Ile His Thr Phe Ser Arg Cys Val
1               5                   10
<210>236
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>236
Ser Met Leu Thr Gly Thr Gln Ser Leu Leu
1               5                   10
<210>237
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>237
Arg Met Ile Ser Arg Met Ser Gln Asn Val
1               5                   10
<210>238
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>238
Gln Leu Leu Met Arg Met Ile Ser Arg Met
1               5                   10
<210>239
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>239
Val Leu Cys Cys Ala Glu Glu Val Asp Leu
1               5                   10
<210>240
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>240
Ser Leu Met Ile His Thr Phe Ser Arg Cys
1               5                   10
<210>241
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>241
Ser Leu Leu Pro Ala Ser Ser Met Leu Thr
1               5                   10
<210>242
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>242
Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Val Val
1               5                   10
<210>243
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>243
Gln Leu Cys Arg Ser Gln Ser Leu Leu Leu
1               5                   10
<210>244
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>244
Lys Gln Phe Gln Lys Glu Tyr Pro Leu Ile
1               5                   10
<210>245
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>245
Ile Leu Gln Val Pro Ser Tyr Leu Gln Thr
1               5                   10
<210>246
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>246
Val Gly Phe Glu Arg Asp Val Phe Arg Thr
1               5                   10
<210>247
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>247
Gln Leu Val Asn Leu Arg Asn Arg Arg Val
1               5                   10
<210>248
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>248
Phe Leu Asp Leu Pro Glu Pro Leu Leu Thr
1               5                   10
<210>249
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>249
Ile Met Gly Gly Ser Cys His Asn Leu Ile
1               5                   10
<210>250
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>250
Leu Ile Gly Leu Ser Asn Met His Asp Leu
1               5                   10
<210>251
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>251
Leu Ile Tyr Gln Lys Arg Phe Pro Thr Thr
1               5                   10
<210>252
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>252
Thr Leu Thr Val Gln Asp Gln Glu Glu Leu
1               5                   10
<210>253
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>253
Asn Met Ala Asn Thr Ser Lys Arg Gly Val
1               5                   10
<210>254
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>254
Tyr Glu Leu Phe Val Asn Ile Leu Gly Leu
1               5                   10
<210>255
<211>10
<212>PRT
<213>人工的
<220>
<223>人工合成的肽序列
<400>255
Asn Ile Leu Gly Leu Leu Gln Pro His Leu
1               5                   10

Claims (20)

1.由选自SEQ ID NO：7和8的氨基酸序列组成的分离的肽；或一种具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中所述肽由选自SEQ ID NO：7和8的氨基酸序列组成，在所述氨基酸序列中取代、缺失或添加了1个或2个氨基酸。
2.权利要求1的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中自N-末端起的第二个氨基酸是苯丙氨酸、酪氨酸、甲硫氨酸或色氨酸。
3.权利要求1的具有细胞毒性T细胞诱导能力的肽，其中C-末端氨基酸是苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、色氨酸或甲硫氨酸。
4.一种载体，其中的DNA编码权利要求1-3中任一项的肽。
5.一种用于治疗或预防与SEQ ID NO：1的基因过表达相关的癌症的药物组合物，所述组合物包含一种或多种权利要求1的肽。
6.权利要求5的药物组合物，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
7.一种外来体，所述外来体在其表面上呈现包含权利要求1的肽以及HLA抗原的复合物。
8.权利要求7的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A24。
9.权利要求8的外来体，其中所述HLA抗原是HLA-A2402。
10.一种诱导具有高的细胞毒性T细胞诱导能力的抗原呈递细胞的体外方法，包括将抗原呈递细胞与权利要求1的肽接触的步骤。
11.一种诱导细胞毒性T细胞的体外方法，所述方法是通过将T细胞与权利要求1的肽接触。
12.一种诱导具有高的细胞毒性T细胞诱导能力的抗原呈递细胞的体外方法，所述方法包括将包含编码权利要求1的肽的多核苷酸的基因转移至抗原呈递细胞的步骤。
13.一种分离的细胞毒性T细胞，所述细胞是通过将T细胞与权利要求1-3中任一项的肽接触来诱导的，或者所述细胞是被如下所述的核酸转导的，该核酸编码在HLA-A24的背景下与权利要求1-3中任一项的肽结合的TCR亚基多肽。
14.一种抗原呈递细胞，所述细胞包含HLA抗原与权利要求1的肽形成的复合物。
15.权利要求14的抗原呈递细胞，所述细胞是通过权利要求10的方法诱导的。
16.一种用于抑制表达SEQ ID NO：1的基因的癌细胞增殖的疫苗，其中所述疫苗包含权利要求1的肽作为活性成分。
17.权利要求16的疫苗，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
18.权利要求16的疫苗，配制成用于向HLA抗原是HLA-A24的受试者施用。
19.一种或多种权利要求1的肽在制备用于治疗或预防与SEQ ID NO：1的基因过表达相关的癌症的药用疫苗组合物中的用途。
20.权利要求19的用途，其中所述癌症选自下组：膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、胆管细胞癌、CML、结肠直肠癌、胃癌、NSCLC、淋巴瘤、骨肉瘤、前列腺癌、肾癌、SCLC和软组织肿瘤。
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