CN101511867B - 细胞因子衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包括N-末端部分和C-末端部分的多肽及其应用，其中所述N-末端部分包括特征序列QGP[P或L]，且所述C-末端部分的氨基酸序列至少70％与SEQ ID NO：1一致。

Description

细胞因子衍生物

技术领域

本发明涉及具有抗-HIV、抗炎或其他活性的细胞因子衍生物。

发明背景

尚不知能够治愈人免疫缺陷病毒(HIV)感染和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物。至今为止，似乎尚未获得能够预防HIV感染的疫苗。

现今，在许多情形中，现有的HIV感染能够受到高活性抗反转录病毒治疗(HAART)的控制，所述HAART涉及三种或更多反转录病毒药物的组合。然而，在来自当前用在HAART中的反转录酶抑制剂和蛋白酶抑制剂(RTI和PI)的选择胁迫下，经常增多单、双或三-药物种类抗性的HIV毒株的出现。

因此，存在着对新型抗-HIV药物的迫切需要。优选地，所述新药应该靶向病毒这样的方面，所述方面比受到上述RTI和PI靶向的反转录和病毒成熟过程更不易受抗性发展的攻击。在不存在HIV疫苗的条件下，还存在对能够在性接触过程中预防HIV传播的试剂的需要。

该需要能够潜在地通过抑制HIV进入靶细胞的试剂，即来自“进入抑制剂”(EI)类的试剂来实现。所述试剂能够，例如，局限性(locally)和局部(topically)应用于人生殖器，从而在性接触过程中预防由HIV引起的细胞感染。能够在性接触过程中预防HIV传播的试剂通常(尽管不恰当地)称为“杀微生物剂”。

HIV进入人靶细胞依赖HIV病毒体对人细胞表面蛋白CD4和所谓的共同受体的附着。被HIV利用的主要共同受体包括与7个跨膜G-蛋白偶联的受体CXCR4和CCR5。发现CCR5的天然趋化因子配体，具体是RANTES(CCR5)，抑制R5-嗜性HIV毒株(使用CCR5作为共同受体的HIV毒株)进入人细胞[1]。RANTES是已知在慢性炎性疾病中促进细胞积聚和活化的促炎细胞因子。

某些在N末端具有修饰的RANTES衍生物显示出增强的抗-HIV活性，例如，AOP-RANTES，即[乙醛酰]¹RANTES(2-68)的氨基氧戊肟(aminooxypentane)[2]，其中″(2-68)″表示天然存在的RANTES肽的残基2-68。其他化学修饰的、具有抗-HIV活性的RANTES衍生物包括NNY-RANTES(正-壬酰-RANTES(2-68)[3，4])和PSC-RANTES[5]。

然而，上述化学修饰的RANTES衍生物不仅抑制HIV进入细胞，而且是相对强的CCR5激动剂：AOP-，NNY-和PSC-RANTES引起涉及胞质钙流入的促炎信号级联。使用具有这样的信号传导活性的试剂作为抗-HIV药物能够引起不希望的副作用，其包括，例如炎症。诱导炎症对于预防性抗-HIV试剂而言，是非常不理想的副作用，因为已经认识到在发炎的组织中事实上可以增加被HIV感染的风险。

试剂诸如RANTES衍生物还可以在靶细胞中诱导信号传导，这归因于该试剂缺乏对CCR5的选择性或特异性，即因为该试剂还与受体蛋白CCR1和CCR3结合。

化学修饰的多肽的缺点是它们不能通过直接的生物技术方法(表达和发酵)生成。还报道了完全-编码的抗-HIV RANTES衍生物，即仅由天然编码的氨基酸组成的衍生物[6，7]。然而，所有最初报道的完全-编码RANTES衍生物的抗-HIV潜能比化学修饰的变体PSC-RANTES的抗-HIV潜能低[5]。

发明内容

本发明的分子

现在已经鉴定了具有高抗-HIV潜能的完全-编码肽试剂。这些肽试剂可以容易地通过标准生物技术方法生成，从而避免化学合成或修饰所需的费用和努力。出乎预料地，发现在优选的实施方案中，本发明的肽试剂将高的抗-HIV潜能和仅引起低程度的促炎信号传导的能力结合在一起，由此避免炎性副作用。

在其他实施方案中，本发明的试剂导致CCR5在细胞中的内在化(internalisation)(受体隐蔽(receptor sequestration)，下调作用(down-regulation)或下调控作用(down-modulation))。这种意外的作用机制是有利的，因为(i)可以通过单一剂量药物获得相当长持续时间的保护，和(ii)如果CCR5和其药物结合形式在与病毒相互作用的靶细胞表面上均不易被接近，则不太可能进化耐受性R5-嗜性HIV毒株。

特别优选的肽试剂将高的抗-HIV潜能跟高的受体隐蔽活性和低信号传导活性组合。本发明进一步优选的肽试剂将选自由高抗-HIV潜能、高受体隐蔽活性和低信号传导活性组成的组的至少一种理想性质和高受体选择性相组合，所述高受体选择性即是与CCR1和/或CCR3相比优选地与CCR5结合。

本发明的肽试剂包括特征序列，其包括QGP[P或L]，即，该特征序列的第4位可以是P或L。优选地，将所述特征序列位于接近多肽的N末端。优选地，所述特征序列这样放置，以使该特征序列的开始位于多肽N末端的15个残基内，更优选地，在N末端的12，10，8，6，5，4，3，2，1个残基内。在本文中，表述″特征序列的开始″指所述特征序列的N末端。所述特征序列还可以位于多肽的最末N端，即，作为整体的多肽的N末端，且所述特征序列可以是一致的。

因此，本发明涉及一种多肽，其包括N-末端部分和C-末端部分，其中所述N-末端部分包括特征序列QGP[P或L]，且所述C-末端部分的氨基酸序列至少70％与SEQ ID NO：1一致。

优选地，所述特征序列是

QGP[P或L][L或G或S或M][M或D或S或Q或G]，或在其他优选的实施方案中，

QGP[P或L][L或G][M或D或S]。

更优选地，所述特征序列是

QGP[P或L][L或G或S或M][M或D或S或Q或G]XX[Q或G或L或A或T或S]X，或在其他优选的实施方案中，

QGP[P或L][L或G][M或D或S]XX[Q或L]X，其中X表示任何天然或修饰的氨基酸。

更优选地，所述特征序列是QGP[P或L]LM或QGPPG[D或S]。

更优选地，所述特征序列是QGPPLM或QGPPGD。

在一个实施方案中，所述特征序列是

QGP[P或L][L或M][M或Q][A或W或G或Q或N]X[Q或G或L][S或V或T或G]，或在其他优选的实施方案中，

QGP[P或L][L或M][M或Q][A或W或G或Q或N][L或T或M或S或G或Q或R或Y][Q或G或L][S或V或T或G]，或者

QGP[P或L]LM[A或W][L或T或M][[Q或G][S或V或T或G]。

优选地，所述特征序列是QGPPLM[A或W][L或T或M][[Q或G][S或V或T或G]。

在其他实施方案中，所述特征序列是

QGP[P或L][L或G或S][D或S或G或Q]XX[L或A或T或Q][W或A或V]，或在其他优选的实施方案中，

QGP[P或L][L或G或S][D或S或G或Q][T或I或S或W或Q][V或L或A或S或G][L或A或T或Q][W或A或V]，或

QGPPG[D或S][T或I]VL[W或A]。

优选地，所述特征序列是QGPPGD[T或I]VL[W或A]。

在其他实施方案中，所述特征序列是

QGPP[G或L][M或Q]XX[Q或S][S或V]，或在其他优选的实施方案中，

QGPP[G或L][M或Q][S或G或W或A或T][L或F或T或S或G或Y][Q或S][S或V]，或

QGPPLM[S或G][L或F或T]Q[S或V]。

按照优选的实施方案，本发明的多肽包括特征序列，其选自下组：

QGPPLMALQS，QGPPLMWMQV，QGPPLMWLQV，QGPPLMWTQS，

QGPPLMWLQT，QGPPLMWTQV，QGPPLMWMQS，QGPPLMATQS，

QGPPLMWLQS，QGPPLMALQV，QGPPLMWLGG，QGPPLMWRGS，

QGPLLMWLQV，QGPPLMQTTP，QGPPLSWLQV，QGPPLSWLQS，

QGPPGQWSQV，QGPPMMAGLS，QGPPLSWQQS，QGPPGMWSQS，

QGPPLQWRQS，QGPPLMGTQS，QGPPLMQLQV，QGPPLSWSQV，

QGPPMSWSQS，QGPPLMNLQV，QGPPMSAYQV和QGPPMQGGLS。

按照其他优选的实施方案，本发明的多肽包括特征序列，其选自下组：

QGPPGDTVLW，QGPPGDIVLA，QGPPGSYDYS，QGPPGDGGSV，

QGPLSGQSTP，QGPPGDWLQV，QGPPLMSLAV，QGPPLMSLTV，

QGPLSGWAQV，QGPLSQSSQV，QGPLSSQSQV和QGPLGQQGQV。

按照其他优选的实施方案，本发明的多肽包括特征序列，其选自下组：

QGPPLMSFQS，QGPPLMSTQS，QGPPLMSLQV，QGPPLMGLQV，

QGPLSGWLQV，QGPPLQWFQV，QGPPLQWTQV，QGPPLMALSV，

QGPPLMWSQV，QGPPGQWGQV，QGPPGSWSQV，QGPPLMSSQS，

QGPPLMGLSV，QGPPLMTLQV和QGPPGQ WYQS。

按照其他优选的实施方案，本发明的多肽包括特征序列，其选自下组：

QGPPLMSVLA，QGPPGSWSSV，QGPPLGSMGP，QGPPLQWMQA，

QGPPLQWMQV，QGPPLMSTQV，QGPPLMSLSV，QGPPLMSLQS，

QGPPLMSLQA，QGPPLMSVQS，QGPPLMSAQS，QGPPLMSGQS和

QGPPLMSGQV。

在其他实施方案中，所述N-末端部分由不多于15个氨基酸，优选地，不多于14，13，12，11，10个氨基酸组成。按照一个优选的实施方案，所述N-末端部分由10个氨基酸组成。

按照一个实施方案，所述C-末端部分的N-末端直接邻接所述N-末端部分的C-末端，即所述N-末端部分和所述C-末端部分直接相连。

在其他实施方案中，所述多肽链的C-末端部分与SEQ ID NO：1一致。

在其他实施方案中，所述特征序列位于最末N端。

本发明的RANTES衍生物的特征序列的优选实施方案显示在表1中：

表1

SEQ ID NO       特征序列

SEQ ID NO：2    QGPPLMALQS

SEQ ID NO：3    QGPPLMWMQV

SEQ ID NO：4    QGPPLMWLQV

SEQ ID NO：5    QGPPLMWTQS

SEQ ID NO：6    QGPPLMWLQT

SEQ ID NO：7    QGPPLMWTQV

SEQ ID NO：8    QGPPLMWMQS

SEQ ID NO：9    QGPPLMATQS

SEQ ID NO：10    QGPPLMWLQS

SEQ ID NO：11    QGPPLMALQV

SEQ ID NO：12    QGPPLMWLGG

SEQ ID NO：13    QGPPLMWRGS

SEQ ID NO：14    QGPLLMWLQV

SEQ ID NO：15    QGPPLMQTTP

SEQ ID NO：16    QGPPGDTVLW

SEQ ID NO：17    QGPPGDIVLA

SEQ ID NO：18    QGPPGSYDYS

SEQ ID NO：19    QGPPGDGGSV

SEQ ID NO：20    QGPLSGQSTP

SEQ ID NO：21    QGPPGDWLQV

SEQ ID NO：22    QGPPLMSFQS

SEQ ID NO：23    QGPPLMSTQS

SEQ ID NO：24    QGPPLMSLQV

SEQ ID NO：25    QGPPLMGLQV

SEQ ID NO：26    QGPLSGWLQV

SEQ ID NO：27    QGPPLMSVLA

SEQ ID NO：28    QGPPGSWSSV

SEQ ID NO：29    QGPPLGSMGP

SEQ ID NO：30    QGPPLSWLQV

SEQ ID NO：31    QGPPLSWLQS

SEQ ID NO：32    QGPPGQWSQV

SEQ ID NO：33    QGPPMMAGLS

SEQ ID NO：34    QGPPLSWQQS

SEQ ID NO：35    QGPPGMWSQS

SEQ ID NO：36    QGPPLQWRQS

SEQ ID NO：37    QGPPLMGTQS

SEQ ID NO：38    QGPPLMQLQV

SEQ ID NO：39    QGPPLSWSQV

SEQ ID NO：40    QGPPMSWSQS

SEQ ID NO：41    QGPPLMNLQV

SEQ ID NO：42    QGPPMSAYQV

SEQ ID NO：43    QGPPMQGGLS

SEQ ID NO：44    QGPPLMSLAV

SEQ ID NO：45    QGPPLMSLTV

SEQ ID NO：46    QGPLSGWAQV

SEQ ID NO：47    QGPLSQSSQV

SEQ ID NO：48    QGPLSSQSQV

SEQ ID NO：49    QGPLGQQGQV

SEQ ID NO：50    QGPPLQWFQV

SEQ ID NO：51    QGPPLQWTQV

SEQ ID NO：52    QGPPLMALSV

SEQ ID NO：53    QGPPLMWSQV

SEQ ID NO：54    QGPPGQWGQV

SEQ ID NO：55    QGPPGSWSQV

SEQ ID NO：56    QGPPLMSSQS

SEQ ID NO：57    QGPPLMGLSV

SEQ ID NO：58    QGPPLMTLQV

SEQ ID NO：59    QGPPGQWYQS

SEQ ID NO：60    QGPPLQWMQA

SEQ ID NO：61    QGPPLQWMQV

SEQ ID NO：62    QGPPLMSTQV

SEQ ID NO：63    QGPPLMSLSV

SEQ ID NO：64    QGPPLMSLQS

SEQ ID NO：65    QGPPLMSLQA

SEQ ID NO：66    QGPPLMSVQS

SEQ ID NO：67    QGPPLMSAQS

SEQ ID NO：68    QGPPLMSGQS

SEQ ID NO：69    QGPPLMSGQV

本发明提供如上所公开的肽试剂和，另外，编码所述肽试剂的核酸。所述核酸可以称为″按照本发明的核酸″。在下文中，术语″试剂″包括本发明的肽试剂和编码所述肽试剂的核酸。按照遗传密码，技术人员应该知道如何设计或识别编码所述肽试剂的核酸。

本发明由此公开了包括一个或多个编码一种或多种本发明所述的肽试剂的片段的核酸。所述核酸可以是RNA或DNA。此外，所述核酸可以是载体，即可以将编码本发明的肽的核酸引入到载体中。此外，可以将编码本发明的肽的核酸引入到病毒中。因此，本发明还提供一种病毒，所述病毒在其基因组中包含包括一个或多个编码一种或多种本发明所述的肽试剂的片段。

优选地，本发明的肽试剂是HIV进入细胞的高效抑制剂，即具有高抗-HIV效力。按照本发明，表述″高抗-HIV效力″、″高效力″或″高效″用于指这样的试剂或肽试剂，其如通过在材料和方法中所述的细胞融合和HIV复制测定测量地，具有1000pM(1nM)或更低，优选地小于900，800，700，600，500，400，300，200，150，140，130，120，110，100，90，80，70，60，50，40，30，或20pM的IC50值。

在文献中，有时根据获自竞争结合测定的″IC50″值表述试剂效力，所述竞争结合测定，典型地，关于与标记的示踪分子竞争结合目的受体。在那种情形中，将IC50定义为这样的试剂浓度，在该浓度时所述试剂从受体中取代50％的示踪物，且有时也称为″表观亲和性″。然而，关于本发明的试剂，已经发现，例如，关于天然RANTES或MIP-1β获得的所述表观亲和性IC50值，不总与分子的抗-HIV效力成比例。因此，优选地使用由在材料和方法中所述的测定所获得的IC50值。

在优选的实施方案中，所述肽试剂是与肽RANTES相关的肽或多肽。所述肽试剂可以包括序列SEQ ID NO：1、或其变体、同系物(直向同源物、等位基因变体、衍生物、功能突变体)或片段。优选地，所述序列或其变体、同系物、或片段组成或位于所述肽试剂除所述特征序列外的不同部分中。然而，所述特征序列也可以包含在变体或同系物SEQ ID NO：1中。

所述变体、同系物或片段可以包含序列取代、插入、缺失、添加或平截。

按照本发明，如果所述序列多于70％与SEQ ID NO：1一致，则认为该序列与SEQ ID NO：1具有相似性或是SEQ ID NO：1的同系物。优选地，所述序列具有与SEQ ID NO：1多于70％的序列同一性，更优选地，与SEQID NO：1多于75％，80％，85％，90％，95％，98％，99％或99.9％的序列同一性。

如果序列包含一个或多个关于SEQ ID NO：1的保守取代，则也认为它与SEQ ID NO：1具有相似性或是SEQ ID NO：1的同系物。保守取代是肽或多肽试剂序列中这样的取代，其不引起所述试剂功能的显著失去，或其仅引起小的功能失去。如果相对于具有未取代序列的试剂的功能而言，所述失去的量小于20％(优选地，小于15％，10％，6％或4％)，则可以认为所述由一个或多个保守取代引起的功能失去是不显著的。保守取代通常是这样的取代，其中氨基酸侧链被与被替代的残基相关、或物理化学性质相似的氨基酸侧链替代。例如，可以按照下表获得所述保守取代。在中间列的同一方框中和优选地在右侧列的同一行中的氨基酸可以相互取代。

表2

按照本发明，如果相对于SEQ ID NO：1，所述序列中多于30％的残基相同或被保守取代，则认为该序列与SEQ ID NO：1具有相似性或是SEQID NO：1的同系物。优选地，相对于SEQ ID NO：1，多于35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，90％，95％，98％或99％的所述序列是相同的或被保守取代。

本发明还提供包括SEQ ID NO：1或其所述同系物的片段的多肽。所述片段应该包括至少n个来自SEQ ID NO：1或其所述同系物的连续氨基酸，并且，根据具体的序列，n是5或更多(优选地，多于6，8，10，12，14，16，18，20，22，24，26，28，30，32，34，36，38，40，42，44，46，48，50，52，54，55，56，57)。

本发明的肽试剂优选地具有低信号传导活性，即，它们的施用和/或与CCR5的结合在靶细胞中仅引起低程度的促炎信号传导。当在钙流量信号传导测定中以300nM的浓度测试时，按照本发明具有″低信号传导活性″的肽试剂引起是由PSC-RANTES引起的最大响应(E_最大)的30％或更低的信号传导响应(见材料和方法中)。优选地，如在所述测定中测量地，本发明的肽试剂具有小于30％的信号传导活性，更优选地小于26％，22％，20％，18％，16％，14％，12％，10％，8％，6％，4％，2％或1％的信号传导活性。

本发明的肽试剂优选地选择CCR5，而非受体CCR1和CCR3。按照本发明，与CCR1和/或CCR3以及CCR5结合的试剂如果它不充分活化CCR1或CCR3，则仍认为它对CCR5具有超过对CCR1和CCR3的选择性。最优选地，本发明的试剂既不充分结合也不充分活化CCR1和CCR3。在本发明的上下文中，如利用CCR1区别结合测定和/或CCR3区别结合测定(见材料和方法)测量地，如果所述试剂关于CCR1和/或CCR3结合的IC50值大于50nM，更优选地大于60，70，80，90，100，110，120，130，140，150，200，300，400，500，600，700，800，900或1000nM，则认为该试剂不充分结合CCR1和/或CCR3。可以通过在材料和方法中所述的钙流量测定的方法评估对CCR5活化高于对CCR1和/或CCR3活化的选择性。在本发明的上下文中，如通过钙流量测定所测量地，如果试剂的信号传导活性小于由天然RANTES/CCL5在受体上引起的E_max的30％，更优选地小于26％，22％，20％，18％，16％，14％，12％，10％，8％，6％，4％，2％或1％，则认为该试剂不充分活化CCR1和/或CCR3。

本发明的肽试剂优选地具有高受体隐蔽活性，即施用和/或与CCR5的结合引起高度受体隐蔽。所述隐蔽优选地是受体内在化、下调作用(down-regulation)或下调控作用(down-modulation)。当在CCR5表面下调/受体隐蔽测定中测试时(见材料和方法)，按照本发明具有″高受体隐蔽活性″的肽试剂引起至少50％对照水平的表面CCR5分子的隐蔽。优选地，本发明的肽试剂具有多于50％的表面CCR5对照水平，例如至少55％，60％，65％，70％，80％，85％，90％，或95％的表面CCR5对照水平的受体隐蔽活性。

优选地，本发明的试剂组合高抗-HIV效力和低信号传导活性，或组合高抗-HIV效力和高受体隐蔽活性。更优选地，本发明的试剂使高抗-HIV效力与低信号传导和高受体隐蔽活性二者组合。而且，本发明的试剂优选地使选自由高抗-HIV效力、高受体隐蔽活性和低信号传导活性组成的组中至少一种性质和关于CCR5的选择性组合。按照本发明某些优选的实施方案，将本发明的试剂表征为中等水平的抗-HIV效力(如由细胞融合测定测量地，IC50水平为例如，0.15-1nM，0.15-0.7nM，0.3-1nM或0.5-1nM)跟中等水平信号传导活性(例如，如由钙流量测定测量地，30％-50％，或30％-45％)和中等水平受体隐蔽活性(例如，如由CCR5表面下调测定测量地，20％-60％，30％-50％，20％-50％，或30％-60％)的组合。在下文，在材料和方法中描述测定。

术语蛋白质、″肽″或″多肽″可交替使用，且意指任意长度的氨基酸聚合物。所述聚合物可以是线性的或分支的，它可以包括修饰的氨基酸，且它可以被非-氨基酸间断。该术语还包括已被天然或通过干扰来修饰的氨基酸多聚体；所述干扰例如，二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化、或任何其他操作或修饰，诸如与标记成分的缀合。该定义范围内还包括例如，包含氨基酸的一种或多种类似物(包括，例如，非天然氨基酸，等)的多肽，以及本领域中已知的其他修饰。多肽可以以单链或缔合链存在。本发明的多肽可以是天然或非-天然糖基化的(即，该多肽具有与在相应的天然存在多肽中存在的糖基化模式不同的糖基化模式)。

制备肽试剂

可以以许多方法，例如，利用分子生物学(即遗传工程和发酵----一般地，生物技术)或蛋白质化学(例如，化学肽合成)的已知技术制备本发明的肽试剂。

优选地，利用如例如，在[13]中所述的已知遗传工程技术制备所述肽和核酸试剂。因此，本发明提供生成本发明的肽试剂或多肽的方法，其包括在诱导多肽表达的条件下培养宿主细胞的步骤。

例如，可以通过在宿主细胞中表达，以重组形式制备本发明的肽试剂。所述表达方法是本领域技术人员所熟知的，且许多详细记述在[13]中。能够为选择的宿主选择合适的表达载体。所述载体可以包含编码肽试剂的重组DNA分子，所述重组DNA分子与由宿主转录系统识别的表达控制序列可操作性地连接。当由此通过重组表达生成本发明的肽试剂时，通过从宿主细胞培养物中纯化回收该试剂。

优选的方法涉及体外化学合成[8，9]。因此，本发明提供生成肽试剂的方法，其中所述肽试剂是部分或完全利用化学方法合成的。固相肽合成是特别优选的，诸如基于tBoc或Fmoc[10]化学的方法。也可以部分或完整地使用酶促合成[11]。

除通过在宿主细胞中表达以外，可以使用生物学合成，例如，可以通过从RNA体外翻译生成所述多肽。还能够例如，通过利用蛋白酶消化较长的多肽制备本发明的肽试剂。

生物学方法，包括遗传工程、发酵、和表达，通常局限于生成以L-氨基酸为基础的多肽，但是翻译系统的体内或体外(例如氨酰基tRNA分子的)操作能够用于容许引入D-氨基酸(或其他非天然氨基酸，诸如碘化酪氨酸或甲基苯丙氨酸，叠氮高丙氨酸，等)[12]。然而，在包括D-氨基酸时，优选使用化学合成。本发明的多肽可以在C-末端和/或N-末端具有共价修饰。

宿主细胞

本发明还提供包括按照本发明的核酸的宿主细胞。

按照本发明的一个方面，宿主细胞适合于通过生物技术生成本发明的试剂。适合于通过生物技术生成本发明的试剂的宿主包括普遍使用的原核物种，诸如大肠杆菌(E.coli)，或能够被制成表达高水平重组蛋白质并能够容易大量生长的真核酵母。体外生长的细胞系也是合适的，特别是在使用病毒-驱动的表达系统，诸如包括使用昆虫细胞作为宿主的杆状病毒表达系统时。还可以在体内表达肽试剂，例如在昆虫幼虫中或在哺乳动物组织中。优选地，在大肠杆菌中表达所述肽试剂；例如，菌株BLR(DE3)是合适的，尽管如有技术的阅读者应该意识到地，等价系统是同等适用的。

按照本发明的另一方面，提供这样的宿主细胞，所述宿主细胞能够在人或动物的肠(gut)或阴道内生存并繁殖，并优选地在其中表达由所述核酸编码的肽试剂。优选地，按照本发明这个方面的宿主细胞还将所述肽试剂分泌到周质或培养基中。在下文中，术语″试剂″而且包括在本文中所述的宿主细胞。

优选地，所述宿主细胞是高度群集和非病原性微生物。按照本发明的高度群集的微生物是能够与内在微生物竞争在内部粘膜表面延长群集的品系。所述宿主细胞优选地是属于人肠或阴道菌群的微生物，更优选地，是人肠或阴道菌群中普遍存在的微生物。更优选地，所述宿主细胞是益生和/或共生微生物，即，至少对人宿主有益的属、种或品系。优选地，按照本发明的宿主细胞是正常或健康人或动物肠或阴道菌群的一部分。按照一个实施方案，所述宿主细胞属于选自由下列各项组成的组的一个属：拟杆菌属(Bacteroides)、梭菌属(Clostridium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、真杆菌属(Eubacterium)、瘤胃球菌属(Ruminococcus)、消化球菌属(Peptococcus)、消化链球菌属(Peptostreptococcus)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、链球菌属(Streptococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)和乳杆菌属(Lactobacillus)。优选地，所述宿主细胞是选自由下列各项组成的组的一个种：大肠杆菌(Escherichia coli)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、卷曲乳杆菌(Lactobacillus crispatus)、加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、Lactobacillus iners、詹氏乳杆菌(Lactobacillusjensenii)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、乳杆菌GG(Lactobacillus GG)、双歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)和格氏链球菌(Streptococcus gordonii)。优选地，按照本发明的高度群集微生物是大肠杆菌Nissle 1917。然而，按照本发明，大肠杆菌或上述种中另一种的任何其他高度群集的品系也是优选的品系。在另一个实施方案中，所述宿主细胞是酵母。优选地，所述酵母是共生酵母，诸如季也蒙毕赤酵母(Pichia guelliermondii)或布拉酵母菌(Saccharomyces boulardii)。在又一个实施方案中，所述宿主细胞是人细胞。

技术人员熟悉利用外来核酸转化微生物和随后利用所转化的微生物以细胞内、周质或分泌形式表达由所述核酸编码的多肽的方法[见参考文献13，15，16，17]。

药物组合物

本发明提供包括按照本发明的试剂和药用载体的组合物。由此，提供本发明的试剂、或所述肽试剂的药用盐或相应的核酸，作为药物使用。按照本发明的组合物可以包括本发明的任何试剂，即，在下文中，肽试剂、其药用盐、核酸、其药用盐、或按照本发明的宿主细胞。药物组合物的制备是本领域技术人员所熟知的。

本发明的药物组合物可以，具体地，包括多于一种(多种)本发明的试剂，例如，两种或更多试剂。本发明还提供药物制剂或系统，其包括(a)第一试剂，所述第一试剂是本发明的试剂；和(b)第二药物试剂。按照某些实施方案，所述第二药物试剂可以包括反转录酶抑制剂(RTI)、蛋白酶抑制剂(PI)、整合酶抑制剂和病毒装配抑制剂。按照其他实施方案，所述第二药物试剂可以包括除本发明的那些以外的其他进入抑制剂，例如，聚阴离子物质(例如，硫酸纤维素)、聚糖结合试剂或凝集素、聚糖受体粘合剂(例如，可溶性甘露聚糖)、抗体、小分子进入抑制剂、肽进入抑制剂、或CXCR4-结合(CXCR4-封闭)试剂。按照其他实施方案，所述第二药物试剂可以包括去污剂、或调节pH的试剂，例如酸或pH缓冲剂。按照其它实施方案，所述第二药物试剂可以包括抑制剂性RNA(siRNA)，其中所述siRNA可以是被化学修饰的。

按照本发明的其他方面，所述第二试剂还可以是抗炎药或免疫抑制剂。将所述多种本发明的试剂或所述第一和第二试剂配制为混合物或作为单独的组合物，例如从而同时但分别的，或连续的施药(见下)。

当然，能够通过常规程序，诸如通过使所述试剂的自由碱和/或酸与至少化学计算量的形成所需要的盐的酸或碱反应，来制备本发明的试剂的药用盐。

本发明的试剂的药用盐包括具有无机阳离子，诸如钠、钾、钙、镁、锌、和铵的盐，和具有有机碱的盐。合适的有机碱包括N-甲基-D-葡糖胺、精氨酸、苄星、二乙醇胺、乙醇胺、普鲁卡因和丁三醇胺。本发明的试剂的药用盐还包括源自有机或无机酸的盐。合适的阴离子包括乙酸根、己二酸根、苯磺酸根(besylate)、溴离子、樟磺酸根(camsylate)、氯离子、柠檬酸根、乙二磺酸根(edisylate)、estolate、延胡索酸根、葡庚糖酸根(gluceptate)、葡糖酸根、葡糖醛酸根、马尿酸根、海克酸根(hyclate)、氢溴根、氢氯根、碘离子、羟乙磺酸根、乳酸根、乳糖酸根、马来酸根、甲磺酰酸根(mesylate)、甲基溴离子、甲基硫酸根、萘磺酸根(napsylate)、硝酸根、油酸根、双羟萘酸根(pamoate)、磷酸根、聚半乳糖醛酸根、硬脂酸根、琥珀酸根、硫酸根、碱式水杨酸根、丹宁酸根、酒石酸根、对苯二酸根、甲苯磺酰酸根(tosylate)和triethiodide。

可以将本发明试剂的药物剂型提供为立即释放、受控释放、持续释放或靶药物-递送系统。

普遍使用的剂型包括，例如，溶液和混悬液、(微-)乳剂、软膏剂、凝胶剂、乳膏剂、糊剂、泡沫剂、栓剂、胚珠(ovules)、植入物、贴剂、脂质体、片剂、糖锭剂、锭剂、软或硬壳胶囊剂、无定形或结晶粉末剂、泡腾粉末剂或片剂、气雾剂、和冻干制剂。根据所用的施药途径，为了应用或施用药物，可能需要特殊装置，诸如，例如，注射器和针头、吸入器、泵、注射笔、涂药器、特殊的长颈瓶、或其他用于施药的装置，还可以将所述装置植入体内。特别地，本发明的试剂可以，例如，还包含或结合在避孕装置或试剂，例如，子宫内或宫颈内装置，卷或隔膜中，或分布在避孕套上，例如，包含在涂层液体、溶液、凝胶或粉末的形式中。然而，按照本发明，本发明的试剂不必须与避孕装置或试剂结合。优选地，本发明的试剂包含在库(depot)递送系统中，并通过其施药。优选地，所述库递送系统包括阴道环或其他适合于插入和/或植入阴道或宫颈内，并提供本发明试剂的缓慢(受控的和/或持续的)释放的植入物。

药物剂型通常由药物、赋形剂、和容器/封闭系统组成。可以将一种或多种赋形剂，也称为非活性成分，加入到本发明的试剂中，从而提高或促进药物的制造、稳定性、施用、和安全性，并能够提供实现理想的药物释放特征的方法。因此，待加入药物的赋形剂类型可以依赖于不同的因素，诸如，例如，药物的物理和化学性质、施药途径、和制造程序。药用赋形剂是本领域中可获得的，且包括不同药典中列出的那些。(见，例如，[18，19])。

可以通过本领域中熟知的任何方法，诸如，例如，通过常规混合、过滤、溶解、融化、粒化、糖锭剂-制造、压片、混悬、挤压、喷雾-干燥、磨碎、乳化、(纳米/微米-)胶囊包封、陷夹，或冻干过程制造本发明试剂的药物剂型。如上文注意到地，本发明的组合物可以包括一种或多种生理学可用的非活性成分，所述非活性成分促进活性分子进入药物用途制剂的加工。

合适的制剂依赖于所需的施药途径。为了静脉内注射，例如，可将组合物配制在水溶液中，如必要的话，利用生理学相容的缓冲液，包括，例如，磷酸盐、组氨酸，或用于调节制剂pH柠檬酸盐，和张力试剂，诸如例如，氯化钠或葡萄糖。为了穿粘膜或鼻施药，半固体、液体制剂、或贴剂可以是优选的，可能包含渗透增强剂。所述渗透剂通常是本领域中已知的。为了口服施药，可将试剂配制为液体或固体剂剂型和立即或受控/持续释放制剂。适合于受试者口服摄取的剂型包括片剂、丸剂、糖锭剂、硬和软壳胶囊剂、液体、凝胶剂、糖浆剂、结晶浆液、混悬液、和乳剂。还可以将所述试剂配制为直肠组合物，诸如例如，包含常规栓剂基质诸如可可油或其他甘油酯的栓剂或停滞灌肠剂。关于阴道栓剂，可以使用技术人员已知的许多不同的栓剂基质，例如，含甘油的明胶、去极化的明胶、可可油、聚乙二醇、聚山梨酸酯、或其他。

为了口服施药，通常以固体剂型，例如，片剂或胶囊剂的形式，或作为水溶液或混悬液提供本发明的试剂。

能够利用赋形剂获得固体口服剂型，所述赋形剂可以包括惰性稀释剂、填充剂、崩解剂、粘合剂(干的和湿的)、溶解阻滞剂、润滑剂、助流剂、抗粘着剂(antiadherant)、阳离子交换树脂、润湿剂、抗氧化剂、防腐剂、着色剂、甜味剂和调味剂。这些赋形剂可以是合成的或天然来源的。所述赋形剂的实例包括纤维素衍生物、柠檬酸、磷酸二钙、明胶、碳酸镁、月桂基硫酸镁/钠、甘露醇、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸盐、二氧化硅、苯甲酸钠、山梨糖醇、淀粉、硬脂酸或其盐、糖(即葡萄糖、蔗糖、乳糖，等)、滑石、黄蓍粘胶、植物油(氢化的)、和蜡。乙醇和水可以起粒化辅助物的作用。在某些实例中，利用，例如，口味-掩饰膜、胃酸抗性膜、或释放-延迟膜包被片剂是理想的。天然和合成的聚合物，与着色剂、糖、和有机溶剂或水结合，通常用于包被片剂，由此生成糖锭剂。当胶囊剂比片剂优选时，可将药物粉末、混悬液、或其溶液递送到合适的硬或软壳胶囊中。

合适的惰性稀释液包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙和乳糖。玉米淀粉和褐藻酸是合适的崩解剂。结合试剂可以包括淀粉和明胶。润滑剂，如果存在，通常应是硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。如果需要，可以用材料诸如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯包被所述片剂，从而延迟在胃肠道中的吸收。

用于口服应用的胶囊剂包括硬明胶胶囊剂和软明胶胶囊剂，在硬明胶胶囊剂中所述活性成分与固体稀释剂相混合，在所述软明胶胶囊剂中活性成分与水或油诸如花生油、液体石蜡或橄榄油相混合。

在一个实施方案中，可以局部地，通过皮肤或粘膜，诸如经由皮肤贴剂、半-固体或液体制剂，例如凝胶剂、(微-)乳剂、软膏剂、溶液、(纳米/微米)-混悬液、或泡沫剂使用本发明的试剂。可以调节药物进入皮肤或粘膜和下面的组织的渗透，例如，利用渗透增强剂；亲脂性、亲水性、和两亲性赋形剂，包括水、有机溶剂、蜡、油、合成的和天然聚合物、表面活性剂、乳化剂的适当选择和组合；通过pH调节；和使用复合试剂。其他技术，诸如离子电渗疗法，可以用于调节本发明试剂的皮肤渗透。经皮或局部施药应该是优选的，例如，在需要具有最小系统暴露的局部递送的情形中。

为了通过吸入施药，或对鼻子施药，将按照本发明使用的试剂方便地从受压包装或喷雾器递送到溶液、混悬液、乳剂、或半固体气雾剂的形式中，通常使用压缩气体例如，源自甲烷和乙烷的卤化碳，二氧化碳，或任何其他合适气体进行。对于局部气雾剂，碳氢化合物，如丁烷、异丁烯和戊烷是有效的。在受压气雾剂的情形中，可以通过提供递送定量供应量的阀确定合适的剂量单位。可以配制在吸入器或吹入器中使用的胶囊剂和例如，明胶的药筒。这些典型地包含所述试剂和合适的粉末剂基质诸如乳糖或淀粉的粉末混合物。

为了通过注射进行肠胃外施药而配制的组合物通常是无菌的，并且，可以以单位剂量形式，例如，在安瓿、注射器、注射笔或多-剂量容器形式存在，后者通常包含防腐剂。所述组合物可以采用这样的形式，如处于油性或水性赋形剂中的混悬液、溶液、或乳剂，且可以包含调配剂，诸如缓冲剂、张力剂、粘性增强剂、表面活性剂、混悬和分散剂、抗氧化剂、生物相容聚合物、螯合剂、和防腐剂。根据注射位点，所述赋形剂可以包含水、合成的或植物油、和/或有机共溶剂。在某些实例中，诸如关于冻干的产物或浓缩物，在施药前，重构或稀释肠胃外制剂。库剂型，其提供本发明试剂的受控或持续释放，可以包括可注射的纳米/微米颗粒或纳米/微米或非-微粉化晶体的混悬液。除本领域中熟知的其他基质以外，聚合物，诸如聚(乳酸)，聚(乙醇酸)，或其共聚物，能够起受控/持续释放基质的作用。其他库递送系统可以以需要切口的植入物和泵的形式存在。

适合用于静脉内注射本发明分子的载体是本领域中熟知的，且包括基于水的溶液，所述溶液包含碱，诸如，例如，氢氧化钠，以形成离子化试剂，还包含例如蔗糖或氯化钠作为张力试剂。所述基于水的溶液可以包括缓冲剂，其包含磷酸盐或组氨酸。可以加入共溶剂，诸如，例如，聚乙二醇。这些基于水的系统有效溶解本发明的试剂并随着全身施药产生低毒性。在不破坏溶解性和毒性特征的条件下，溶液系统成分的比例可以明显不同。此外，所述成分的身份可以不同。例如，可以使用低-毒性表面活性剂，诸如聚山梨酸酯或泊洛沙姆，同样能够使用聚乙二醇或其他共溶剂，可以加入生物相容聚合物诸如聚乙烯吡咯烷酮，且其他糖和多元醇可以替代葡萄糖。

发明的其他方面

此外，本发明提供一种试剂盒，例如诊断试剂盒，其包括按照本发明的一种或多种肽试剂、核酸或宿主细胞。

本发明分子的应用

基于生物学功能的应用；疾病的治疗和预防

本发明提供本发明的肽试剂阻滞和/或导致CCR5隐蔽的应用。隐蔽可以处于CCR5进入靶细胞内的内在化和/或在靶细胞中下调CCR5(down-regulation)(下调控(down-modulation))的形式。本发明还提供编码所述肽试剂的核酸，或按照本发明包含本发明的核酸的宿主细胞(见上文)用于表达和任选分泌所述肽试剂的应用。

如上所述，关于本发明，术语″试剂″包括本发明所述的肽试剂、编码所述肽试剂的核酸和宿主细胞。本发明提供所述试剂治疗和/或预防(防止)疾病的应用，所述疾病可以通过阻滞和/或导致CCR5的隐蔽进行治疗。因此，提供本发明的试剂作为药物使用。

可以向受试者施用一种或多种本发明的试剂。当施用多于一种试剂时，可以共同(作为混合物或分别但基本同时地)或相继施用所述试剂。所述一种或多种本发明的试剂可以与一种或多种其他药物活性试剂联合施用，所述其他药物活性试剂不包括在本发明的试剂内。于是，本发明的一种或多种试剂也可以与所述一种或多种其他药物活性试剂共同(作为混合物或分别但基本同时地)，或相继施用。

按照优选的方面，本发明提供所述肽试剂或编码所述肽试剂的核酸在受试者中治疗和/或预防HIV感染和/或获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和/或与其相关的病症和疾病的发作的应用。

因此，本发明提供在受试者中治疗或预防HIV感染(HIV传播)的方法，所述方法包括施用包含本发明试剂的组合物。此外，提供了在受试者中治疗、或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)发作的方法，所述方法包括施用本发明的试剂。

例如，HIV的传播，即靶细胞被HIV感染，可以通过应用本发明所述的组合物(例如，包含本发明所述的试剂的栓剂、乳膏剂、凝胶剂、泡沫剂、糊剂、溶液、液体或粉末剂)而得到预防。在该实施方案中，优选地，在性接触之前或过程中或之后，将所述组合物应用于人的生殖器(阴道，直肠，肠)，从而预防性接触过程中的HIV传播。最优选地，在性接触前应用所述组合物。

本发明还提供本发明的试剂作为抗炎试剂的应用。因此，所述试剂有效地治疗和/或预防炎性疾病和自体免疫疾病。按照本发明的另一个方面，本发明的试剂有效地治疗和/或预防恶性疾病，并且还有效地治疗和/或预防细菌和病毒感染。在本文中，所述病毒可以是HIV或除HIV以外的病毒。

按照本发明的其他方面，还提供了治疗或预防炎症、炎性疾病、自体免疫疾病、或细菌和病毒感染的方法，所述方法包括施用包含本发明的试剂的组合物。具体地，例如，提供了治疗或预防炎性肠疾病，类风湿性关节炎，动脉粥样化或动脉硬化，哮喘，过敏性鼻炎或特应性皮炎，移植的器官、组织或细胞的排斥，多发性硬化并和/或其他脱髓鞘疾病，周围神经病，以及癌症包括转移癌的方法。

在本发明的一个优选实施方案中，为任何上述疾病和病症，提供了治疗或预防的方法，其中将以上公开的宿主细胞施用于受试者，所述宿主细胞表达和分泌按照本发明的肽试剂。

本发明还提供本发明的核酸关于基因治疗的应用，其中将所述核酸引入到向受试者施用的病毒中。

施药模式

如在本领域中熟知地，可以直接地或在包含赋形剂的药物组合物(见上)中递送本发明的组合物。本治疗方法包括向受试者施用治疗有效量的本发明的试剂。

术语″治疗有效量″用于本文时，意指治疗、改善、或预防靶疾病状况，或显示可检测的治疗或预防作用所需要的本发明所述的试剂的量。通常，最初能够在细胞培养测定中或在动物模型中，例如，在非-人灵长类、小鼠、兔、狗、或猪中估算治疗有效剂量。所述动物模型还可以用于确定合适的浓度范围和施药途径。然后可以使用所述信息确定在人中施药的有效剂量和途径。

用于人受试者精确的有效量应该依赖于疾病状态的严重性，受试者的一般健康状态，受试者的年龄、体重、和性别，饮食，施药的时间和频率，药物联合，反应灵敏度，和对治疗的耐受性/响应。该量能够通过常规实验确定，并且属于临床医生判断力的范围。一般地，试剂的有效量，即，剂量，应该是0.005mg/kg-50mg/kg，优选地，0.125mg/kg-20mg/kg。

关于本发明优选试剂的有效治疗方案包括每日施用1、2或3次，和/或每周施用1、2、3、4、5或6次。因此，这些方案对于本发明中的应用是特别优选的。

有效和适宜的施药途径以及本发明的试剂在药物组合物中的合适配制(见上)也可以容易地通过常规实验确定。在本领域中可以获得不同的配制和药物递送系统(见，例如，[20，21])。

合适的施药途径可以，例如，包括阴道、直肠、肠、口服、鼻(鼻内)、肺或其他粘膜、局部、经皮、眼、耳、和肠胃外施药。

肠胃外施药的主要途径包括静脉内、肌肉内、和皮下施药。次要的施药途径包括腹膜内、动脉内、关节内、心脏内、脑池内、皮内、病灶内、眼内、胸膜内、鞘内、子宫内、和心室内施药。待治疗的适应证，以及药物的物理、化学、和生物学性质，指示待使用的施药的制剂类型和途径，以及是局部还是全身递送应该是优选的。

关于对本治疗方法有效的组合物，最初能够利用多种本领域中熟知的技术估算治疗有效剂量。动物研究中使用的最初剂量可以基于细胞培养测定中确定的有效浓度。可以例如，利用从动物研究和细胞培养测定中获得数据，确定适合于人受试者的剂量范围。

本发明试剂、试剂、或药物的治疗有效剂量或治疗有效量指所述试剂、试剂、或药物在受试者中引起症状改善或生存延长的量或剂量。所述分子的毒性和治疗功效能够通过细胞培养或实验动物中的标准药物程序，例如，通过确定LD50(50％种群致死的剂量)和ED50(在50％种群中治疗有效的剂量)来确定。毒性与治疗效果的剂量比是治疗指数，可将其表示为LD50/ED50比。表现出高治疗指数的试剂是优选的。

有效量或治疗有效量是试剂或药物组合物引起研究者、兽医、医学博士、或其他临床医生探索的组织、系统、动物、或人的生物学或医学响应的量，所述生物学或医学响应例如，调节葡萄糖新陈代谢，提高的或增高的血糖水平的降低，治疗或预防与改变的葡萄糖新陈代谢相关的病症如糖尿病，等。

剂量优选地属于循环浓度的范围内，其包括具有很小或无毒性的ED50。根据使用的剂型和/或利用的施药途径，剂量可以在该范围内变化。考虑到受试者病症的特殊性，应该按照本领域中已知的方法选择准确的制剂、施药途径、剂量、和剂量时间间隔。

可以分别调节剂量的量和时间间隔，从而提供足以实现理想作用的活性部分的血浆水平，即，最小有效浓度(MEC)。MEC在各种试剂中应该不同，但是能够由，例如，体外数据和动物实验对其进行评估。获得MEC所需的剂量应该依赖于各自的特征和施药途径。在局部施用或选择吸收的情形中，有效的药物局部浓度可能与血浆浓度无关。

施用的试剂或组合物的量可以依赖于多种因素，包括接受治疗的受试者的性别、年龄、和体重、痛苦的严重性、施药方式、和处方医师的判断。

本组合物可以，如果需要，存在于包装或分配器装置中，其包含一种或多种包含活性成分的单位剂型。所述包装或装置可以，例如，包括金属或塑料薄片，诸如水泡眼包装、或玻璃和橡胶塞诸如在小瓶中。所述包装或分配器装置可以附有关于施药的指令。还可以制备包括在相容的药物载体中配制的本发明试剂的组合物，将其置于适当的容器中，并标记为治疗指定的病症。

因此，本发明提供按照本发明的肽试剂、核酸或宿主细胞，以用于治疗或预防HIV感染，治疗和/或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，治疗和/或预防HIV传播，和/或预防性接触过程中的HIV传播。

因此，本发明提供按照本发明的肽试剂、核酸或宿主细胞，以用于治疗或预防炎症，炎性疾病，自体免疫疾病，细菌和病毒感染，炎性肠疾病，类风湿性关节炎，动脉粥样化或动脉硬化，哮喘，过敏性鼻炎或特应性皮炎，移植的器官、组织或细胞的排斥，多发性硬化病和/或其他脱髓鞘疾病，周围神经病，恶性疾病，癌症或转移癌。

因此，本发明提供按照本发明的肽试剂、核酸或宿主细胞制备治疗和/或预防HIV感染，治疗和/或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，或其发作，和预防例如在性接触过程中HIV传播的药物的应用。

本发明提供提供按照本发明的肽试剂、核酸或宿主细胞制备治疗和/或预防炎症、炎性疾病、自体免疫疾病、或细菌和病毒感染、类风湿性关节炎、动脉粥样化或动脉硬化、哮喘、过敏性鼻炎或特应性皮炎、移植的器官、组织或细胞的排斥、多发性硬化病和/或其他脱髓鞘疾病、周围神经病、恶性疾病、癌症或转移癌的药物的应用。

附图简述

图1显示由与SEQ ID NO：1的N末端融合的SEQ ID NO：21组成的典型多肽细胞因子衍生物的表征详细信息。所述多肽是通过材料和方法中所述的完全化学合成制备的。AU：吸收单位。A图显示HF分裂后未加工材料的分析HPLC。B图显示从未加工制剂纯化的理想材料的分析HPLC。C图显示纯化和再折叠/二硫桥形成后反应混合物分析HPLC的踪迹。D图显示通过纯化的、再折叠的材料的分析HPLC获得的踪迹。

实施本发明的模式

材料和方法

通过化学合成制备多肽

在改良的ABI430肽合成器上实施通过完全化学合成制备趋化因子，所述合成器被定制为利用原位中和作用进行Boc化学[22]。该合成策略还具有这样的特征，即在每个周期中利用乙酰甘氨酸的化学封端(capping)步骤(从而在偶联步骤结束时终止任何具有自由胺基的链)。HF分裂后，通过分析HPLC和MALDI质谱法分析粗产物。制备级规模纯化理想的产物后，按照公开的程序[23]进行蛋白质的再折叠和二硫桥的形成，并通过分析HPLC(较短的保持时间)和电喷质谱法(由于在二硫桥形成过程中半胱氨酸硫醇基的氧化而失去质量单位)检验再折叠的材料。对最终产物进行制备级规模的纯化，并再冻干。图1中显示了通过HPLC对用于典型合成本发明蛋白质的中间和部分纯化的材料的表征详细信息，所述本发明的蛋白质由与SEQ ID NO：1的N末端融合的SEQ ID NO：21组成。在下表中提供了由质谱法获得的所述蛋白质纯化材料的表征结果：

表3由质谱法纯化的材料的表征

由与SEQ ID NO：1的N末端融合的SEQ IDNO：21组成的蛋白质	计算的质量	观察到的质量
			再折叠前的材料	7976.26	7976.76±0.24
再折叠后的材料	7922.26	7972.68±0.36

图1中显示了由分析HPLC获得的最终产物的分析。

通过在宿主生物体中的表达制备多肽

通过利用本领域中已知的常规技术在宿主生物体中表达来制备多肽试剂，其按照记述在，例如参考文献[13]和[14]中的程序进行。

细胞融合测定

如[5]中所述，利用HeLa-P5L[2]和HeLa-Env-ADA[26]细胞系执行该程序。将HeLa-P5L细胞接种在96-孔板中(10⁴个细胞/孔)。24小时后，除去培养基并替换为包含10⁴个HeLa-Env-ADA个细胞/孔和本发明的趋化因子肽试剂的培养基。另24小时后，在PBS中清洗细胞一次，对其进行裂解，并通过添加生色底物CPRG(氯酚红-[β]-D-吡喃半乳糖苷)测定β-半乳糖苷酶活性。按照下列公式表达结果：

100×(平均吸光率[处理的]-平均吸光率[无包膜细胞])/(平均吸光率[无趋化因子]-平均吸光率[无包膜细胞])。

对每个独立的实验进行一式三份的测量，并利用软件(GraphPad)从剂量-抑制曲线获得IC50值。IC50值代表这样的肽试剂浓度，即，处于该浓度时，与没有暴露于任何抑制试剂的对照相比，细胞融合受到50％的抑制。

病毒复制测定

如参考文献[24]和[25]所述地测定病毒复制，其具有这样的改进，即使用HeLa细胞作为起始材料，并仅在病毒表达后加入SX22-1报告基因细胞。

钙流量测定

分别利用被转染从而提供CCR5、CCR1或CCR3稳定表达的细胞(例如人胚肾(HEK)细胞)，测定试剂通过CCR5、CCR1或CCR3的钙信号传导刺激。基本如参考文献[6]中所述，利用96-孔板和FLEXstation荧光计(分子装置(Molecular Devices))执行该程序。按照制造商的建议，对负载Fluo-4(分子探针(Molecular Probes))的所述细胞进行荧光测量，并将其保持在37℃。以单试剂浓度(300nM；为PSC-RANTES和天然RANTES提供E_最大的浓度)，一式六份(n＝6)地进行测量。

CCR5表面下调测定

以80,000个细胞/ml，将CHO-CCR5细胞[5]接种在96-孔板中。次日，除去培养基，并替换成包含不同浓度趋化因子的培养基，并在37℃培养细胞1小时。在这段时期结束时，除去培养基，并用4％低聚甲醛固定细胞。用PBS清洗两次后，向细胞中加入处于PBS-1％BSA中的藻红蛋白-缀合抗CCR5抗体(克隆3A9，Pharmingen)或藻红蛋白-缀合抗CCR1抗体(作为阴性对照)溶液。将板保持在冰上1小时，然后在利用FLEXstation荧光计确定荧光值之前，用PBS-1％BSA清洗3次。将结果表达为％表面CCR5对照水平：

100×(平均荧光[加入趋化因子，抗CCR5]-平均阴性对照荧光[抗CCR1])/(平均阳性对照荧光[没加入趋化因子，抗CCR5]-平均荧光[抗CCR1])。

一式六份(n＝6)地进行每种测定，并在每个实验中，将PSC-RANTES作为参照趋化因子使用。

CCR1区别测定

利用放射标记的天然CCR1配体作为示踪物，在CCR1竞争结合测定中测量比对CCR1更高的对CCR5的选择性。MIP-RANTES/CCL5可以，例如，作为该CCR1区别测定的示踪物使用。如参考文献[27]所述地执行该测定。

CCR3区别测定

利用放射标记的天然CCR3配体作为示踪物，在CCR3竞争结合测定中测量比对CCR1更高的对CCR5的选择性。Eotaxin/CCL11或RANTES/CCL5可以，例如，作为该CCR3区别测定的示踪物使用。如参考文献[28]所述地执行该测定。

实施例

实施例1通过细胞融合测定进行的抗HIV效力测量

如在材料和方法中所述地，通过化学合成制备肽试剂。如在材料和方法中所述地，利用细胞融合测定分别评估所述试剂，并通过比较存在所述试剂条件下的测定结果和缺乏所述试剂条件下获得的测定结果，而获得IC50值。获得的IC50值列在表4中。

通常，发现充分符合N-末端共有特征序列QGP[P/L][L/G][M/D]XX[Q/L]X或QGP[P或L][L或G或S或M][M或D或S或Q或G]XX[Q或G或L或A或T或S]X的肽试剂具有低IC50值，即，高的抗-HIV效力值，其中X代表任何氨基酸，且″/″代表″或″。所述化合物的实例是那些由与天然RANTES序列(SEQ.ID.NO：1)位置10-68融合的N-末端特征序列SEQID NO：2-69组成的RANTES衍生物。

表4本发明肽试剂的表征

特征序列SEQ ID NO：	由细胞融合测定获得的抗-HIV效力(IC50，nM)	由病毒复制测定获得的抗-HIV效力(IC50，nM)	CCR5信号传导(％)(1)	CCR5隐蔽(％)(2)
					2	0.02	0.194	1.4	5
3	0.02		＜5	3
					4	0.02	0.380	4.6	3
5	0.02	0.576	5.3	0
					6	0.02	0289	1.4	3
7	0.02	0.179	0.7	10
					8	0.03	0.278	2.5	0
9	0.03	0.187	4.8	2
					10	0.03	0.403	2.3	0
11	0.03		1.6	9
					12	0.03	0.204	4.1	4
13	0.07		＜5	9
					14	0.13		1.4	8
15	0.65		2.4	2
					16	0.02	0.091	96.3	70
17	0.02	129	87.7	70
					18	0.08		90.1	69
19	0.28		85.1	66
					20	0.66		95.6	71
21	0.54		14.2	54
					22	0.02	0.470	2.4	12
23	0.03	0.625	5.3	35
					24	0.03	0.174	2.4	35
25	0.03		0.0	13
					26	0.58		9.4	41

27	0.03		14.6	40
					28	0.03	0.213	45.0	59
29	0.39		22.6	36
					30	0.01		4.1	4
31	0.02		3.6	6
					32	0.03		6.0	5
33	0.03		0.2	0
					34	0.03		5.1	8
35	0.05		4.9	5
					36	0.05		5.1	7
37	0.09		0.7	5
					38	0.10		0.3	3
39	0.10		1.7	5
					40	0.11		0	6
41	0.12		0	9
					42	0.16		0.2	0
43	0.29		0.3	4
					44	0.02		68.5	60
45	0.02		77.4	62
					46	0.40		97.6	72
47	0.44		96.9	78
					48	0.64		100.5	78
49	0.74		97.2	77
					50	0.02		7.6	11
51	0.02		5.0	12
					52	0.02		8.3	11
53	0.02		5.1	16
					54	0.06		2.1	12
55	0.07		7.3	33
					56	0.15		7.5	15
57	0.16		4.9	18
					58	0.23		0.7	25
59	0.23		6.0	15

60	0.02		11.8	8
					61	0.02		12.7	7
62	0.03		29.6	45
					63	0.03		42.7	50
64	0.04		17.2	28
					65	0.04		11.5	30
66	0.07		33.4	42
					67	0.12		10.3	15
68	0.17		10.6	24
					69	0.22		20.1	38

(1)当如在材料和方法中所述地，在钙流量信号传导测定中以浓度300nM测试时，将％信号传导表示为％由PSC-RANTES引起的最大响应(E_最大)。

(2)当如在材料和方法中所述地，在CCR5表面下调/受体隐蔽测定中测试时，将隐蔽％表达为相对于表面CCR5分子对照水平的隐蔽量。

实施例2通过病毒复制测定进行的抗-HIV效力测量

如在材料和方法中所述地，通过化学合成制备本发明的肽试剂。如在材料和方法中所述地，利用病毒复制测定分别评估所述试剂，并通过比较存在所述试剂条件下的测定结果和缺乏所述试剂条件下获得的测定结果，而获得IC50值。获得的IC50值列在表4中。

通常，发现充分符合N-末端共有特征序列QGP[P/L][L/G][M/D]XX[Q/L]X的肽试剂具有低IC50值，即，高的抗-HIV效力值，其中X代表任何氨基酸，且″/″代表″或″。所述化合物的实例是那些由与天然RANTES序列(SEQ.ID.NO：1)位置10-68融合的N-末端特征序列SEQ ID NO：2-29组成的RANTES衍生物。

实施例3通过钙流量测定测量细胞信号传导

利用如材料和方法中所述的钙流量测定评估通过如材料和方法中所述化学合成制备的肽试剂。利用所述测定对本发明各种肽试剂获得的″信号传导″值列在表4中。

通常，发现充分符合N-末端共有特征序列QGPPLM[S/G][L/F/T]Q[S/V]的肽试剂具有低信号传导值，例如，至多6％或10％，其中″/″代表″或″。所述化合物的实例是那些由与天然RANTES序列(SEQ.ID.NO：1)位置10-68融合的N-末端特征序列SEQ ID NO：22，SEQ ID NO：23，SEQ IDNO：24，或SEQ ID NO：25组成的RANTES衍生物。然而，具有其他特征序列诸如SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：21的本发明的RANTES衍生物也显示出20％或更低的低信号传导值，携带特征序列SEQ ID NO：29肽试剂获得30％或更低的低信号传导值，且携带特征序列SEQ ID NO：28的肽试剂获得低于46％的信号传导值。总的来说，对符合N-末端共有特征序列QGPP[G/L][M/Q]XX[Q/S][S/V]，或QGPP[G/L][M/Q][S/G/W/A/T][L/F/T/S/G/Y][Q/S][S/V]的肽试剂，例如，包括具有N-末端特征序列SEQID NO：50，SEQ ID NO：51，SEQ ID NO：52，SEQ ID NO：53，SEQ ID NO：54，或SEQ ID NO：55的RANTES衍生物观察到低信号传导值。

实施例4通过CCR5表面下调测定进行的受体隐蔽测定

利用如材料和方法中所述的CCR5表面下调测定评估通过如材料和方法中所述化学合成制备的肽试剂。利用所述测定对本发明各种肽试剂获得的″CCR5隐蔽″值列在表4中。在来自现有技术文献的等价测试中获得的CCR5隐蔽值列在表5中。

通常，发现充分符合N-末端共有特征序列QGPPGD[T/I]VL[W/A]的肽试剂具有高CCR5隐蔽值，例如，至少60％或65％或更高，其中″/″代表″或″。所述化合物的实例是那些由与天然RANTES序列(SEQ.ID.NO：1)位置10-68融合的N-末端特征序列SEQ ID NO：16或SEQ ID NO：17组成的RANTES衍生物。然而，具有其他特征序列，诸如SEQ ID NO：18，SEQID NO：19，SEQ ID NO：20的本发明的RANTES衍生物也特征在于高CCR5隐蔽值，例如，至少60％或65％或更高的CCR5隐蔽值。而且，具有特征序列SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：28的RANTES衍生物肽试剂也特征在于高CCR5隐蔽活性，即至少50％，或至少54，55或59％的CCR5隐蔽值。总的来说，对符合N-末端共有特征序列QGP[P/L][L/G/S][D/S/G/Q]XX[L/A/T/Q][W/A/V]，或QGP[P/L][L/G/S][D/S/G/Q][T/I/S/W/Q][V/L/A/S/G][L/A/T/Q][W/A/V]的肽试剂，例如，包括具有N-末端特征序列SEQ ID NO：44，SEQ ID NO：45，SEQ ID NO：46，SEQ IDNO：47，SEQ ID NO：48，SEQ ID NO：49的RANTES衍生物观察到高CCR5隐蔽值。

实施例5比较实施例

利用如实施例1-实施例4中所述的对本发明试剂的测定，评估如表5中列出的现有技术RANTES衍生物。在这些测定中对现有技术RANTES衍生物获得的结果列在表5中。

表5所选的现有技术细胞因子衍生物的表征

试剂名称	由细胞融合测定获得抗-HIV效力(IC50，nM)	由病毒复制测定获得的抗-HIV效力(IC50，nM)	CCR5信号传导(％)(1)	CCR5隐蔽(％)(2)
					Met-RANTES(3)	75.14		15.0	26
AOP-RANTES(4)	1.12		80.7	71
					NNY-RANTES(5)	0.29		84.5	77
PSC-RANTES(6)	0.02	0.281	100.0	75
					P1(7)	6.59		0.0	5
P2(7)	1.61		93.8	68

(1)当如在材料和方法中所述地，在钙流量信号传导测定中以浓度300nM测试时，将％信号传导表达为％由PSC-RANTES引起的最大响应(E_最大)。

(2)当如在材料和方法中所述地，在CCR5表面下调/受体隐蔽测定中测试时，将隐蔽％表达为相对于表面CCR5分子对照水平的隐蔽量。

(3)参考文献[13]中报告的化合物

(4)参考文献[2]中报告的化合物

(5)参考文献[3]中报告的化合物

(6)参考文献[5]中报告的化合物

(7)参考文献[6]中报告的化合物

实施例6测试新型分子针对全球HIV进化枝的体外功效

针对来自全世界的代表性R5品系测试所述分子。

简言之，测试了获自世界上不同地域位置并且可通过试剂库获得的的原代HIV分离株对在使用人原代细胞的复制测定中它们对抑制作用的灵敏性。

可以如参考文献[29]，或如下所述地执行该程序：

细胞培养。通过Ficoll-Paque梯度离心法，从来自不同HIV-阴性人捐赠者的血液中纯化PBMC。将纯化的PBMC重新混悬在增补了10％胎牛血清(FBS；生命技术公司(Life Technologies，Inc.)，Rockville，Md.)、100U青霉素和100μg链霉素(pen/strep；Mediatech，公司)/ml、1ng重组人白介素-2(IL-2；生命技术公司)/ml、和1U植物凝集素(PHA；生命技术公司(Life Technologies，Inc.))/ml的RPMI(Mediatech，公司，Herndon，Pa.)培养基中。

病毒。从AIDS研究和试剂课题(AIDS Research and Reagent Program)获得下列NSI R5 HIV-1品系：A-92RW009、A-92RW008、A-93UG075、B-92BR021、B-92TH026、B-BaL、C-92BR025、C-93IN101、D-94UG108、E/A-92TH022、E-92TH001、B/F-93BR019、F-93BR029、G-92NG083-JV1083，和G-92NG003-G3。还从AIDS试剂课题(AIDS Reagent Program)获得两种SI X4品系(HXB2和F-93BR020)，以用作对照。对于以上列出的大部分品系，破折号前面的字母表示病毒包膜的亚型，且随后是分离的年份、来源的国家、和品系号码，例如，A-92RW009是1992年在卢旺达分离的进化枝A HIV-1品系。在PBMC培养物中繁殖所有这些病毒直到在培养物上清液中获得高病毒滴度(如通过逆转录酶[RT]活性确定地)。然后，利用Reed-Muench技术[30]，计算每种病毒的50％组织培养感染剂量值。

复制测定。将PHA/IL-2-处理的PBMC加入到包含连续稀释的抑制剂的96-孔板(2×10⁵个细胞/孔)中。然后，向完全RPMI培养基(大约0.1的感染复数[MOI])中加入合适的HIV-1分离株。对全部NSI R5 HIV-1分离株进行了一式三份的实验。感染后的第3天，在翻斗离心机中，以1,200xg离心每个板5分钟。然后，从每个孔中去除无细胞的上清液等分试样(150μl)，并替换为150μl包含适当浓度抑制剂的完全RPMI培养基。在感染后的第5、10、和15天，再离心每个板5分钟，并去除无细胞的上清液样品(25μl)，并保存在-70℃，以用于后继的分析。在第15天丢弃培养物。

在无细胞的上清液中，利用如前所述的RT测定[31]，测量了存在抑制剂条件下的病毒产量。

实施例7在非-人灵长类阴道HIV传播模型中证明CCR5抑制剂的体内功效

下述猕猴HIV预防模型用于证明本发明分子的体内功效。

简言之，用4mL PBS或处于PBS中的抑制剂溶液预处理孕酮-处理的成年雌性猕猴(rhesus macaque)组。15分钟后，用300TCID₅₀的SHIV SF 162攻击动物，并监测血浆病毒血症的发展直到24周[32]。

可以如参考文献[33]，或如下所述地执行该程序：

正常循环，使用了年龄范围在5-12岁的成年雌性猕猴(白化猕猴(Macacca mulatto))。所有的研究都遵守由全国卫生研究所(NationalInstitutes of Health)，国家研究委员会(National Research Council)制订的实验室动物饲养和使用指南(Guide for the Care and Use of LaboratoryAnimals)，并遵守杜兰国家灵长类研究中心研究所动物饲养和使用委员会的指导方针(Guidelines of the Tulane National Primate Research CenterInstitutional Animal Care and Use Committee)。所有关键人员(从事制备病毒接种体和病毒学分析的动物操纵者、处理者和实验室技术员)均不知处理任务。

用单次30mg肌肉内注射醋酸狄波-甲羟孕酮(Depo-

)处理动物。30-33天后，用泰拉瑞(telazol)使它们镇静，使它们臀部提高地俯卧，并利用易弯曲的弗氏导管，在无外伤的条件下，将4ml处于PBS中的抑制剂溶液或单独的PBS引入阴道穹中。该体积在不引起不适当渗漏的条件下提供最有效的阴道穹覆盖。15分钟后，用处于1ml RPMI 1640培养基中的300 TCID₅₀的SHIV SF162攻击动物，所述SHIV SF162获自NIH艾滋研究和参照试剂课题(NIH AIDS Research and Reference Reagent Program)。攻击后每周，将血液收集在EDTA管中。如前所述[32]，通过利用实时RT-PCR测定量化SIV gag RNA，确定血浆病毒水平。该测定具有60个RNA拷贝/ml的灵敏性阈值，其具有＜25％的测定间变化系数。对所有分析，将无感染状态定义为始终不可检测的血浆病毒血症。通过利用ZeptometrixSIV蛋白质印迹试剂盒(Zeptometrix SIV Western Blot Kit)(Zeptometrix，布法罗，纽约)的蛋白质印迹监测血清转化。

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31.Coligan，J.E.，A.M.Kruisbeek，D.H.Margulies，E.M.Shevach，W.Strober，和R.Coico.1999.HIV的检测和分析；用于HIV蛋白质的检测测定，基础方案：测定HIV反转录酶活性(Detection and analysis of HIV；detectionassays for HIV proteins，basic protocol：assay for HIV reverse transcriptaseactivity)，p.12.5.8.在免疫性当前方案(Current protocols in immunology)中，CD-ROM版本.John Wiley & Sons，公司，纽约，N.Y.

32.Lifson JD，Rossio JL，Piatak M，Jr.，Parks T，Li L，Kiser R，Coalter V，Fisher B，Flynn BM，Czajak S，Hirsch VM，Reimann KA，Schmitz JE，Ghrayeb J，Bischofberger N，Nowak MA，Desrosiers RC，Wodarz D.2001.CD8(+)淋巴细胞在控制猿猴免疫缺陷病毒感染和抵抗瞬时早期抗反转录病毒处理后再攻击的作用(Role of CD8(+)lymphocytes in control of simianimmunodeficiency virus infection and resistance to rechallenge after transientearly antiretroviral treatment).病毒学杂志(J Virol)75：10187-99

33.Lederman MM，Veazey RS，Offord R，Mosier DE，Dufour J，Mefford M，Piatak M，Jr.，Lifson JD，Salkowitz JR，Rodriguez B，Blauvelt A，Hartley O.2004.在猕猴中通过抑制CCR5预防阴道SHIV传播(Prevention of vaginalSHIV transmission in rhesus macaques through inhibition of CCR5).科学(Science)306：485-7。

序列表

<110>明塔卡医学研究基金会

<120>细胞因子衍生物

<130>P043725WO

<150>GB0614755.7

<151>2006-06-25

<160>69

<170>SeqWin99，version 1.02

<210>1

<211>59

<212>PRT

<213>智人

<400>1

Cys Cys Phe Ala Tyr Ile Ala Arg Pro Leu Pro Arg Ala His Ile

Lys

1               5                   10                  15

Glu Tyr Phe Tyr Thr Ser Gly Lys Cys Ser Asn Pro Ala Val Val

Phe

            20                  25                  30

Val Thr Arg Lys Asn Arg Gln Val Cys Ala Asn Pro Glu Lys Lys

Trp

        35                  40                  45

Val Arg Glu Tyr Ile Asn Ser Leu Glu Met Ser

    50                  55

<210>2

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>2

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ala Leu Gln Ser

1               5                   10

<210>3

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>3

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Met Gln Val

1               5                   10

<210>4

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>4

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Leu Gln Val

1               5                   10

<210>5

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>5

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Thr Gln Ser

1               5                   10

<210>6

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>6

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Leu Gln Thr

1               5                   10

<210>7

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>7

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Thr Gln Val

1               5                   10

<210>8

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>8

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Met Gln Ser

1               5                   10

<210>9

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>9

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ala Thr Gln Ser

1               5                   10

<210>10

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>10

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Leu Gln Ser

1               5                   10

<210>11

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>11

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ala Leu Gln Val

1               5                   10

<210>12

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>12

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Leu Gly Gly

1               5                   10

<210>13

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>13

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Arg Gly Ser

1               5                   10

<210>14

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>14

Gln Gly Pro Leu Leu Met Trp Leu Gln Val

1               5                   10

<210>15

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>15

Gln Gly Pro Pro Leu Met Gln Thr Thr Pro

1               5                   10

<210>16

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>16

Gln Gly Pro Pro Gly Asp Thr Val Leu Trp

1               5                   10

<210>17

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>17

Gln Gly Pro Pro Gly Asp Ile Val Leu Ala

1               5                   10

<210>18

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>18

Gln Gly Pro Pro Gly Ser Tyr Asp Tyr Ser

1               5                   10

<210>19

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>19

Gln Gly Pro Pro Gly Asp Gly Gly Ser Val

1               5                   10

<210>20

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>20

Gln Gly Pro Leu Ser Gly Gln Ser Thr Pro

1               5                   10

<210>21

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>21

Gln Gly Pro Pro Gly Asp Trp Leu Gln Val

1               5                   10

<210>22

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>22

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Phe Gln Ser

1               5                   10

<210>23

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>23

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Thr Gln Ser

1               5                   10

<210>24

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>24

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Gln Val

1               5                   10

<210>25

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>25

Gly Gly Pro Pro Leu Met Gly Leu Gln Val

1               5                   10

<210>26

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>26

Gln Gly Pro Leu Ser Gly Trp Leu Gln Val

1               5                   10

<210>27

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>27

Gly Gly Pro Pro Leu Met Ser Val Leu Ala

1               5                   10

<210>28

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>28

Gln Gly Pro Pro Gly Ser Trp Ser Ser Val

1               5                   10

<210>29

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>29

Gln Gly Pro Pro Leu Gly Ser Met Gly Pro

1               5                   10

<210>30

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>30

Gln Gly Pro Pro Leu Ser Trp Leu Gln Val

1               5                   10

<210>31

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>31

Gln Gly Pro Pro Leu Ser Trp Leu Gln Ser

1               5                   10

<210>32

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>32

Gln Gly Pro Pro Gly Gln Trp Ser Gln Val

1               5                   10

<210>33

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>33

Gln Gly Pro Pro Met Met Ala Gly Leu Ser

1               5                   10

<210>34

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>34

Gln Gly Pro Pro Leu Ser Trp Gln Gln Ser

1               5                   10

<210>35

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>35

GLn Gly Pro Pro Gly Met Trp Ser Gln Ser

1               5                   10

<210>36

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>36

Gln Gly Pro Pro Leu Gln Trp Arg Gln Ser

1               5                   10

<210>37

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>37

Gln Gly Pro Pro Leu Met Gly Thr Gln Ser

1               5                   10

<210>38

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>38

Gln Gly Pro Pro Leu Met Gln Leu Gln Val

1               5                   10

<210>39

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>39

Gln Gly Pro Pro Leu Ser Trp Ser Gln Val

1               5                   10

<210>40

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>40

Gln Gly Pro Pro Met Ser Trp Ser Gln Ser

1               5                   10

<210>41

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>41

Gln Gly Pro Pro Leu Met Asn Leu Gln Val

1               5                   10

<210>42

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>42

Gln Gly Pro Pro Met Ser Ala Tyr Gln Val

1               5                   10

<210>43

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>43

Gln Gly Pro Pro Met Gln Gly Gly Leu Ser

1               5                   10

<210>44

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>44

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Ala Val

1               5                   10

<210>45

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>45

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Thr Val

1               5                   10

<210>46

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>46

Gln Gly Pro Leu Ser Gly Trp Ala Gln Val

1               5                   10

<210>47

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>47

Gln Gly Pro Leu Ser Gln Ser Ser Gln Val

1               5                   10

<210>48

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>48

Gln Gly Pro Leu Ser Ser Gln Ser Gln Val

1               5                   10

<210>49

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>49

Gln Gly Pro Leu Gly Gln Gln Gly Gln Val

1               5                   10

<210>50

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>50

Gln Gly Pro Pro Leu Gln Trp Phe Gln Val

1               5                   10

<210>51

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>51

Gln Gly Pro Pro Leu Gln Trp Thr Gln Val

1               5                   10

<210>52

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>52

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ala Leu Ser Val

1               5                   10

<210>53

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>53

Gln Gly Pro Pro Leu Met Trp Ser Gln Val

1               5                   10

<210>54

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>54

Gln Gly Pro Pro Gly Gln Trp Gly Gln Val

1               5                   10

<210>55

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>55

Gln Gly Pro Pro Gly Ser Trp Ser Gln Val

1               5                   10

<210>56

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>56

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Ser Gln Ser

1               5                   10

<210>57

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>57

Gln Gly Pro Pro Leu Met Gly Leu Ser Val

1               5                   10

<210>58

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>58

Gln Gly Pro Pro Leu Met Thr Leu Gln Val

1               5                   10

<210>59

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>59

Gln Gly Pro Pro Gly Gln Trp Tyr Gln Ser

1               5                   10

<210>60

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>60

Gln Gly Pro Pro Leu Gln Trp Met Gln Ala

1               5                   10

<210>61

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>61

Gln Gly Pro Pro Leu Gln Trp Met Gln Val

1               5                   10

<210>62

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>62

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Thr Gln Val

1               5                   10

<210>63

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>63

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Ser Val

1               5                   10

<210>64

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>64

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Gln Ser

1               5                   10

<210>65

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>65

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Leu Gln Ala

1               5                   10

<210>66

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>66

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Val Gln Ser

1               5                   10

<210>67

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>67

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Ala Gln Ser

1               5                   10

<210>68

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>68

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Gly Gln Ser

1               5                   10

<210>69

<211>10

<212>PRT

<213>人工序列

<220>

<223>合成的

<400>69

Gln Gly Pro Pro Leu Met Ser Gly Gln Val

1               5                   10

Claims (40)

1.由N-末端部分和C-末端部分组成的多肽，其中所述N-末端部分是包括QGP[P或L]的特征序列并且所述N-末端部分选自由SEQ ID NOs:2-69组成的组，且所述C-末端部分的氨基酸序列与SEQ ID NO:1一致。 

2.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPLMALQS,QGPPLMWMQV,QGPPLMWLQV,QGPPLMWTQS,QGPPLMWLQT,QGPPLMWTQV,QGPPLMWMQS,QGPPLMATQS,QGPPLMWLQS,QGPPLMALQV,QGPPLMWLGG,QGPPLMWRGS,QGPLLMWLQV,QGPPLMQTTP,QGPPLSWLQV,QGPPLSWLQS,QGPPGQWSQV,QGPPMMAGLS,QGPPLSWQQS,QGPPGMWSQS,QGPPLQWRQS,QGPPLMGTQS,QGPPLMQLQV,QGPPLSWSQV,QGPPMSWSQS,QGPPLMNLQV,QGPPMSAYQV和QGPPMQGGLS。 

3.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPLMALQS,QGPPLMWMQV,QGPPLMWLQV,QGPPLMWTQS,QGPPLMWLQT,QGPPLMWTQV,QGPPLMWMQS,QGPPLMATQS,QGPPLMWLQS,QGPPLMALQV,QGPPLMWLGG,QGPPLMWRGS,QGPLLMWLQV和QGPPLMQTTP。 

4.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPGDTVLW,QGPPGDIVLA,QGPPGSYDYS,QGPPGDGGSV,QGPLSGQSTP,QGPPGDWLQV,QGPPLMSLAV,QGPPLMSLTV,QGPLSGWAQV,QGPLSQSSQV,QGPLSSQSQV和QGPLGQQGQV。 

5.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPGDTVLW,QGPPGDIVLA,QGPPGSYDYS,QGPPGDGGSV,QGPLSGQSTP和QGPPGDWLQV。 

6.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPLMSFQS,QGPPLMSTQS,QGPPLMSLQV,QGPPLMGLQV,QGPLSGWLQV,QGPPLQWFQV,QGPPLQWTQV,QGPPLMALSV,QGPPLMWSQV,QGPPGQWGQV,QGPPGSWSQV,QGPPLMSSQS, QGPPLMGLSV,QGPPLMTLQV和QGPPGQWYQS。 

7.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPLMSFQS,QGPPLMSTQS,QGPPLMSLQV,QGPPLMGLQV,和QGPLSGWLQV。 

8.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组： 

QGPPLMSVLA,QGPPGSWSSV,QGPPLGSMGP,QGPPLQWMQA,QGPPLQWMQV,QGPPLMSTQV,QGPPLMSLSV,QGPPLMSLQS,QGPPLMSLQA,QGPPLMSVQS,QGPPLMSAQS,QGPPLMSGQS和QGPPLMSGQV。 

9.按照权利要求1的多肽，其中所述特征序列选自由下列各项组成的组：QGPPLMSVLA,QGPPGSWSSV和QGPPLGSMGP。 

10.按照前述权利要求中任一项的多肽,其中所述特征序列位于最末N端。 

11.一种核酸分子，所述核酸分子编码权利要求1-10中任一项的多肽。 

12.按照权利要求11的核酸，所述核酸是RNA或DNA。 

13.按照权利要求11的核酸，所述核酸是基因的片段。 

14.按照权利要求11的核酸，所述核酸是载体的片段。 

15.按照权利要求11的核酸，所述核酸被结合到病毒中。 

16.包括按照权利要求11-15中任一项的核酸的宿主细胞。 

17.权利要求16的宿主细胞,所述宿主细胞是微生物。 

18.权利要求17的宿主细胞,其中所述微生物属于人肠或阴道菌群。 

19.权利要求17或18的宿主细胞,其中所述微生物属于选自由下列各项组成的组中的一个属：拟杆菌属（Bacteroides）、梭菌属（Clostridium）、梭杆菌属（Fusobacterium）、真杆菌属（Eubacterium）、瘤胃球菌属（Ruminococcus）、消化球菌属（Peptococcus）、消化链球菌属（Peptostreptococcus）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、链球菌属（Streptococcus）、埃希氏菌属（Escherichia）和乳杆菌属（Lactobacillus）。 

20.按照权利要求17或18中任一项的宿主细胞，其中所述微生物是选自由下列各项组成的组中之一：嗜酸乳杆菌（Lactobacillus acidophilus）、 卷曲乳杆菌（Lactobacillus crispatus）、加氏乳杆菌（Lactobacillus gasseri）、Lactobacillus iners、詹氏乳杆菌（Lactobacillus jensenii）、干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、鼠李糖乳杆菌（Lactobacillus rhamnosus）、乳杆菌GG（Lactobacillus GG）、双歧双歧杆菌（Bifidobacterium bifidum）、短双歧杆菌（Bifidobacterium breve）、婴儿双歧杆菌（Bifidobacterium infantis）、长双歧杆菌（Bifidobacterium longum）和格氏链球菌（Streptococcus gordonii）。 

21.权利要求16的宿主细胞,所述宿主细胞是人细胞。 

22.按照权利要求16-18或21中任一项的宿主细胞，所述宿主细胞表达按照权利要求1-10的多肽。 

23.按照权利要求16-18或21中任一项的宿主细胞，从所述宿主细胞分泌按照权利要求1-10的多肽。 

24.一种用于治疗或预防HIV感染的药物组合物，所述药物组合物包括按照权利要求1-10中任一项的多肽或其药用盐，或包括按照权利要求11-15中任一项的核酸或其药用盐，或包括权利要求16-23中任一项的宿主细胞。 

25.一种用于治疗或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物组合物，所述药物组合物包括按照权利要求1-10中任一项的多肽或其药用盐，或包括按照权利要求11-15中任一项的核酸或其药用盐，或包括权利要求16-23中任一项的宿主细胞。 

26.一种用于治疗或预防HIV传播的药物组合物，所述药物组合物包括按照权利要求1-10中任一项的多肽或其药用盐，或包括按照权利要求11-15中任一项的核酸或其药用盐，或包括权利要求16-23中任一项的宿主细胞。 

27.一种用于预防性接触过程中的HIV传播的药物组合物，所述药物组合物包括按照权利要求1-10中任一项的多肽或其药用盐，或包括按照权利要求11-15中任一项的核酸或其药用盐，或包括权利要求16-23中任一项的宿主细胞。 

28.如权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐，或如权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐，或如权利要求16-23中任 一项定义的宿主细胞在制备用于治疗或预防HIV感染的药物中的应用。 

29.如权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐，或如权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐，或如权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞在制备用于治疗或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物中的应用。 

30.如权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐，或如权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐，或如权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞在制备用于治疗或预防HIV传播的药物中的应用。 

31.如权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐，或如权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐，或如权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞在制备用于预防性接触过程中的HIV传播的药物中的应用。 

32.包括权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐的组合物，或包括权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐的组合物，或包括权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞的组合物在制备用于在受试者中治疗或预防HIV感染的试剂盒中的应用。 

33.包括权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐的组合物，或包括一种或多种权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐的组合物，或包括权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞的组合物在制备用于在受试者中治疗、或预防获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的发作的试剂盒中的应用。 

34.包括权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐的组合物，或包括权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐的组合物，或包括权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞的组合物在制备用于在受试者中治疗或预防HIV传播的试剂盒中的应用。 

35.包括权利要求1-10中任一项定义的多肽或其药用盐的组合物，或包括权利要求11-15中任一项定义的核酸或其药用盐的组合物，或包括权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞的组合物在制备用于在受试者中预防性接触过程中的HIV传播的试剂盒中的应用。 

36.按照权利要求32-35中任一项的应用，其中所述组合物是栓剂、 乳膏剂、泡沫剂、凝胶剂或糊剂的形式。 

37.按照权利要求32-35中任一项的应用，其中第二种试剂包含在所述试剂盒中，用于与所述组合物同时或分开施用。 

38.按照权利要求32-35中任一项的应用，其中第二种试剂包含在所述试剂盒中，用于与所述组合物顺序施用。 

39.按照权利要求32-34中任一项的应用，其中所述治疗是基因治疗。 

40.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1-10中任一项定义的多肽、权利要求11-15中任一项定义的核酸、或权利要求16-23中任一项定义的宿主细胞。 

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