CN101062088A - 一种治疗心脑血管疾病的药物、其制备方法、质量控制方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种含有丹参提取物、三七根提取物和天然左旋冰片(艾片，主要含有l－龙脑(l－Borneol))作为药效成分的复方药物、其制备方法及其在制备治疗心脑缺血疾病药物中的应用。该药物制剂含有丹参脂溶性和水溶性全部活性成分且含量高，三七根总皂苷是三七主要活血化瘀有效部位，l-龙脑来自天然、纯度高、活性强，药效学研究结果表明该复方药物具有显著的抗心脑缺血作用和活血化瘀功效，较之复方丹参方制剂药效强度为高。毒理学研究表明其安全性良好。本发明在制备中采取三级质控模式，对生药原料、提取物原料及终产品制定了全面、完善的以主要有效成分(部位)定量的质量标准，保证了产品的优质和均一。

Description

一种治疗心脑血管疾病的药物、其制备方法、质量控制方法及其用途

技术领域

本发明涉及一种中药复方及其制剂、其制备方法及应用；更具体地，本发明涉及一种含有丹参提取物、三七根提取物和天然左旋冰片(主要含有1-龙脑(Borneol)，又称艾片)作为药效成分的药物、其制备方法及其在制备治疗心脑缺血疾病药物中的应用。

背景技术

丹参，唇形科鼠尾草属植物Salviamiltiorrhiza Bge.的根，一种传统常用的中药材，收载于中华人民共和国历版药典中，有关中药大专院校教材、专著及辞典类中药书籍均作为重点药物收载介绍。长期以来，丹参广泛用作多种疾病的治疗药物，是活血化瘀中药的代表性药材。丹参主要含有二萜醌类、酚酸类化合物，另外还含有鞣质、多糖等。其中，丹参二萜醌主要包括丹参酮II A(Tanshinone II A)、隐丹参酮(Cryptotanshinone)、丹参酮I(Tanshinone I)、二氢丹参酮(Dihydrotanshinone)、甲基丹参酮(Methyltashinone)等；酚酸类化合物主要包括丹酚酸B(Salvianolic acid B)、丹酚酸A(Salvianolic acid A)、丹参素(Danshensu)、迷迭香酸(Rosmarinic acid)、原儿茶醛(Protocatechualdehyde)、原儿茶酸(Protocatechuic acid)、咖啡酸(Coffeic acid)以及丹酚酸C、D、E等。丹参的水溶性酚酸类化合物及脂溶性二萜醌类化合物这二类化合物均是丹参的主要有效成分，也是丹参治疗心血管疾病的主要有效成分，由于这两类成分性质均不甚稳定，提取工艺的不当可极大影响产品质量。在含有丹参的现有制剂中，常常使用水或不同浓度的乙醇作为溶剂来提取丹参，但是获得较低收率的水溶性酚酸类化合物及脂溶性二萜醌类化合物，而且含有较大量的杂质，不利于控制产品质量，并降低了生物利用度。

三七，五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根，分主根、支根及茎基，属贵重药材，也是一种传统常用的中药材，收载于中华人民共和国历版药典中。大量研究资料表明，三七主要有效成分是其所含的皂甙类成分，三七皂甙也是三七治疗心脑血管疾病的最主要有效成分。三七皂甙在水、醇中均易溶。但三七为根类药材，同时含有大量淀粉。由于三七生药质坚硬，常须碎为中、细粉方容易提出其有效成分，因而如溶媒选择不当，在提取皂甙类成分的同时随之而来的是三七中淀粉等成分将大量溶出，给提取、精制工艺带来一定困难。

天然左旋冰片又称艾片，是从菊科植物艾纳香Blumea balsamifera(Linn.)DC.的叶片蒸馏提取获得的结晶物。菊科植物艾纳香主产于贵州、广东、广西、云南等地，从艾纳香的叶提取升华加工而成的结晶体，又称艾片，主含左旋龙脑。归心、脾、肺经，具有开窍醒神，清热止痛，明目退翳的功效，可用于治疗热病神昏，痉厥，中风痰厥，气郁暴厥，中恶昏迷等症。现今在制药学上还常常使用合成冰片，合成冰片在制备过程中混入了多种杂质，并且很难纯化，使得合成冰片中龙脑的含量仅大于55％，而天然左旋冰片能达到大约85％，并且合成冰片中含有的多种反应杂质(例如异龙脑及未知异物)可能给制成的制剂带来安全性的问题，并在达到同样功效的情况下增加了服用量，不利于人体吸收。

丹参复方是我国应用最广、销售额最大、相关现代研究最多的中成药之一。其始于二十世纪七十年代，最早的制剂即为复方丹参片，收载于中华人民共和国药典2000版第一部518页。但由于该制剂在提取工艺、质量标准等方面存在某些严重的问题，一定程度甚或严重地影响了复方丹参片的质量。我们通过系统的研究，调整原配方并将传统以生药投料的方法改为有效部位(成分)投料，大幅度提高了复方丹参制剂的质量标准及产品的稳定性和均一性，大幅度提高了制剂中主要有效成分的含量，使其具有显著的抗心脑缺血作用和活血化淤功效，比复方丹参方制剂药效强度更高，并在确保其临床疗效的前提下，制剂服用量大为减少。。

发明内容

本发明目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的复方药物、其制备方法、质量控制方法及其用途。

本发明的一种治疗心脑血管疾病的药物，是含有丹参酯溶和水溶性两类有效成分的丹参提取物即以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物、三七根提取物三七总皂苷、天然左旋冰片的复合制剂及其药物。通过对组成药物及其有效成分的药效作用的了解，以及在有效成分—工艺—药效学相关研究的基础上，改进传统配方并将原来的生药投料改为有效部位(成分)投料，通过优化的工艺获得原生药的有效部位，保留原药材的活性成分和功效，以科学的质量标准保证产品的稳定、均一，该药物制剂具有显著的抗心肌缺血和活血化淤的作用，含丹参活性成分高、药效强度大幅度提高。药效学研究表明，本发明的药物具有显著的抗心肌缺血和活血化瘀功效，毒理学研究表明其安全性良好。

本发明在制备工艺中采取了三级质控模式，并制定了较全面的质量控制标准，对生药原料、提取物及终产品制定了较严格且相关的主要有效成分(部位)质量指标，这一遵循“从质量相对稳定的药材原料制备质量相对稳定的产品”原则的质控体系不仅可控制产品中已知可测成分(部位)的质量及其均一性，还可一定程度控制产品中未知成分的质量及其均一性，保证了产品的优质和均一。本发明是通过如下技术方案来实现的：

本发明公开了一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于该药物是由丹参提取物、三七根提取物和天然左旋冰片(艾片)为药效成分制成。

其中，丹参提取物由丹参提取水溶性有效成分丹参总酚酸或/及丹参脂溶性有效成分丹参总酮制备；三七根提取物由三七主根或/及剪口提取三七根总皂苷制备；天然左旋冰片(艾片)由艾纳香提取而得。

优选地，该药物的药效成分及用量以重量计是：

丹参提取物  50-95％、三七根提取物  20-50％、天然左旋冰片  2-25％，以上三种成分的总和为100％。

优选地，丹参提取物、三七根提取物以及天然左旋冰片的用量以重量计是61.3％∶22.7％∶16％，所述天然左旋冰片中l-龙脑≥85％，

其中，所述丹参提取物是这样制得的：取丹参药材，净制后碎为粗粉，在SFE装置中进行CO₂-SFE提取，提取条件为：压力：15MPa，温度40℃，以95％乙醇为夹带剂，夹带剂用量为8倍药量，提取时间10h；取上述丹参CO₂-SFE提取步骤后的残渣，采用常规用水煎煮工艺提取水溶性丹参酚酸类，加入的水量为药材量的10倍，提取2-3次，每次1小时，加水量为物料量的12倍；然后以乙酸乙酯纯化上述制备得到的丹参水提液，萃取条件为：pH值为2.5，加乙酸乙酯次数为4次，提取时间为20分钟，每次加入乙酸乙酯的量为浸膏量的2倍；最后取丹参SFE提取物采用真空低温干燥，取水-乙酸乙酯提取物采用喷雾干燥，获得两种固体粉末后，分别按照该提取物对等的丹参药材等量混合或按如下比例进行混合：丹参SFE提取物1-2份∶水-乙酸乙酯提取物4-8份，即为丹参提取物；

所述三七根提取物是这样制得的：取三七根药材，碎为粗粉，用10倍量药材的75％乙醇回流提取两次，每次1小时，提取液回收乙醇后用水溶解，过滤，用大孔树脂分离纯化，吸附后用10倍量生药的70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后干燥，即得三七根提取物；

所述天然左旋冰片，是以艾纳香为原料制备的以l-龙脑为有效成分的艾片，可从艾纳香叶蒸馏、升华提得或市售获得，

取以上制得的丹参提取物、三七根提取物、天然左旋冰片按比例混合均匀，按常规药物制剂方法制成可通过口服给药方式、腔肠给药方式、喷雾给药方式、注射给药方式、输液给药方式和透皮吸收给药方式适用的剂型的药物。

其中，在该药物中，所述丹参SFE提取物中含有40-51.34％丹参总酮，其中丹参酮IIA含量为10.39-16.22％；所述水-乙酸乙酯提取物含有62.32-82.28％丹参总酚，其中丹酚酸B含量为35.98-48.42％；所述三七根提取物含有65.76-82.95％三七总皂苷，其中Rg1含量为28.80-35.20％，Rb1含量为21.70-26.53％，R1含量为4.58-6.83％。

优选地，上述药物中，其中所述丹参SFE提取物中含有46.68％丹参总酮，其中丹参酮IIA含量为13.39％；所述水-乙酸乙酯提取物含有74.80％丹参总酚，其中丹酚酸B含量为42.20％；其中所述三七根提取物含有75.41％三七总皂苷；其中Rg1含量为32％，Rb1含量为24.12％，R1含量为6.21％。

本发明还公开一种制备该药物的方法：丹参提取物是由CO₂-SFE技术提取丹参总酮、由水煎、醋酸乙酯提取技术提取丹参总酚酸；三七根提取物是用极性溶剂水或40～95％的乙醇提取、大孔树脂吸附分离技术制备；天然左旋冰片从艾纳香叶蒸馏、升华提得或市售获得。

优选地，该方法包括如下步骤：

1)取丹参药材，净制后碎为粗粉，在SFE装置中进行CO₂-SFE提取，提取条件为：压力：15MPa，温度40℃，以95％乙醇为夹带剂，夹带剂用量为8倍药量，提取时间10h；取上述丹参CO₂-SFE提取步骤后的残渣，采用常规用水煎煮工艺提取水溶性丹参酚酸类，加入的水量为药材量的10倍，提取2-3次，每次1小时，加水量为物料量的12倍；然后以乙酸乙酯纯化上述制备得到的丹参水提液，萃取条件为：pH值为2.5，加乙酸乙酯次数为4次，提取时间为20分钟，每次加入乙酸乙酯的量为浸膏量的2倍；最后取丹参SFE提取物采用真空低温干燥，取水-乙酸乙酯提取物采用喷雾干燥，获得两种固体粉末后，分别按照该提取物对等的丹参药材等量混合或按如下比例进行混合：丹参SFE提取物1-2份∶水-乙酸乙酯提取物4-8份，即得丹参提取物；

2)取三七根药材，碎为粗粉，用10倍量药材的75％乙醇回流提取两次，每次1小时，提取液回收乙醇后用水溶解，过滤，用大孔树脂分离纯化，吸附后用10倍量生药的70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后干燥，即得三七根提取物；

3)取以艾纳香为原料从艾纳香叶蒸馏、升华制备或市售的以l-龙脑为有效成分的天然左旋冰片；

4)取以上制得的丹参提取物、三七根提取物、天然左旋冰片按比例混合均匀，按常规药物制剂方法制成临床上适合的剂型。

上述制备方法，其特征在于在第四个步骤中，取以上制得的丹参提取物、三七根提取物、天然左旋冰片按比例混合均匀，称取混合粉；取预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠，过60目筛后与上述混合粉混合至均匀；再加入无水乙醇制成适宜软材，过18目筛，制粒，干燥，整粒；取硬脂酸镁混合均匀，采用Φ9.0mm浅弧冲压片后包薄膜衣，包衣锅转速为20转/分钟，出风温度为35℃～40℃，片床温度为40℃～45℃，制成剂型为片剂的药物。

上述制备方法，其中第四个步骤中所述临床上适合的剂型是口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射制剂、输液制剂和透皮吸收的药物制剂的剂型。

上述制备方法，其中所述口服给药的剂型是片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、糖浆、酏剂、茶剂和咀嚼剂。

本发明提供了上述药物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。其中，所述心脑血管疾病是缺血性心脏病和缺血性脑中风。

本发明还提供了上述药物的质量控制方法，该方法包括：

1)丹参原料质量控制标准

在丹参中，丹参总酮的含量≥0.45％；丹参酮IIA≥0.2％；丹参总酚≥4.5％；丹酚酸≥3.0％；

2)三七原料的质量控制

储存期2年以内三七根；原色，不应经染色处理；80～120个头；生药三七皂甙含量符合标准，即人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1分别不低于3.0％、2.5％和0.6％；所含农药残留量及重金属含量符合GAP标准；

3)丹参提取物的质量控制

丹参总酚酸、丹酚酸B、丹参总酮、丹参酮IIA，分别应用分光光度法及HPLC法进行测定；选取丹酚酸B为对照品，其标准曲线方程为：C(μg/ml)＝27.26A-0.472(r＝0.9999，4.136～24.816)；丹参提取物中，丹参总酮≥8.0％，丹参酮IIA≥2.5％，丹参总酚≥50％；丹参酚酸B≥30％；

4)三七根提取物的质量控制

以人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1为对照品，应用HPLC法测得之三七各单体皂甙的含量分别为≥28％、22％及5％；

5)天然左旋冰片的质量控制

应用气相色谱进行l-龙脑测定。

6)本发明药物日服用量中各成分的标准为：

丹参总酮≥15mg/d，丹参酮IIA≥6mg/d，总酚≥120mg/d，丹酚B≥70mg/d，三七R₁≥5mg/d，三七Rg₁≥26mg/d，三七Rb₁≥20mg/d，冰片中左旋龙脑≥60mg/d。

本发明技术方案的优点主要表现在：

1.根据组成药物有效成分的理化性质，采取了有效成分提取纯化的“个体化”原则，即对组成各药分别采用最适合于该组分(成分)的提取纯化工艺，大幅度地提高了提取物有效部位(成分)的得率和纯度，是主要有效成分明确、量高、稳定，因而质量优秀且其可控性及均一性均大幅度提高的真正的“纯中药制剂”。

2.改丹参传统的乙醇-水回流为二氧化碳超临界萃取-水(SFE-H₂O)提取，与现有技术中市售的丹参制剂相比，本发明的药物比同量生药所含丹参总酚、丹参总酮、丹参酚酸B、丹参酮IIA等有效成分的含量更高，因此本发明的药物可在保持原丹参及丹参制剂日用量的范围内取得更显著的疗效。且这两类成分在制剂中的转移率较现行工艺大幅度提高，具有提取时间短、操作人员少、产品质量高的优点。

3.不同于传统三七以细粉入药，本发明药物将三七根以乙醇-大孔树脂提取纯化物入药，该提取物以三七心血管活性主要成分三七皂甙为主，三七总皂甙的转移率≥95％，不仅减少了服用量，且更有利于三七有效成分生物利用度的发挥。

4.通过较系统的药效学比较研究，以艾纳香为原料制备的主含l-龙脑的天然左旋冰片(艾片)入药，大幅度提高了龙脑的含量(≥85％)，且避免了合成品制备中合成反应杂质(如异龙脑及未知异物)可能带来的安全性问题。艾片药用历史久远，其作用相对为更明显，且符合天然化合物以左旋品为活性成分的一般规律。

5.药效研究表明，与现有技术中市售的丹参片、丹参制剂的人服生药日剂量折算值相比，本发明的药物具有明显的抗心肌缺血作用和活血化瘀作用，而毒理学研究表明本发明的药物的毒性非常小。

6.制备工艺中采取了三级质控模式，并制定了较全面的质量控制标准，这为保证产品的优质和均一迈进了一大步。在本发明的药物中，各可测定成分的总和≥60％，更能保证其临床的有效性及疗效的稳定性。通过大鼠、小鼠的急性毒性试验，表明其安全性良好，大鼠一次给药最大耐受量达8g/kg，6个月大鼠长毒试验达1.25g/kg剂量未见明显药物毒性，Beagle犬9月长毒中0.4g/kg剂量也仅引起肝脏酶学改变(ALP升高)。

下面将对本发明制剂以及制备工艺的实质性特点及有益效果作进一步说明。

1.对丹参提取工艺的改进

现有的药理学研究结果及长期的临床应用经验均表明丹参所含酚酸类化合物及二萜醌类化合物都是丹参心血管活性的主要有效成分，因而本发明制剂的提取纯化工艺研究的目标是尽可能提出并保留这二类成分于制剂中。丹参酚酸类及二萜醌类化合物均不甚稳定，特别是二萜醌类物质，在提取、精制及制剂过程中容易因条件的不当而大量破坏损失。在工艺研究中，我们根据这两类有效成分的理化性质，以丹参总酚及其主要成分丹酚酸B、和丹参总酮及其主要代表性成分丹参酮II A为指标，通过反复试验，选择了一条较为合理的工艺路线；通过多层次的条件优化试验，确定了较为合理的工艺条件；并通过多批中试，验证了工艺的合理性和可行性。本发明丹参提取工艺的要点是通过二氧化碳超临界萃取(CO₂-SFE)，在低温、隔氧条件下，充分提取和保留丹参二萜醌类化合物，其转移率在85％以上；提取酯溶性成分后的丹参残渣用热水提取水溶性丹参酚酸，再经酸化后用醋酸乙酯纯化获得丹参酚酸类化合物，其转移率在70％左右。上述两部分提取物充分混合均匀即得丹参提取物——以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物原料中间体。根据上述工艺5批中试的结果见表1。

表1 丹参提取物(以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物)5批中试结果及主要有效成分转移率

中试批次	原料量(kg)	丹参提取物粉(kg)	丹参提取物粉组分及百分含量(％)				组分转移率(％)
											总酚	丹B	总酮	IIA	总酚	丹B	总酮	IIA
			1	80.0	5.70	59.93	32.05	9.93	2.72	76.00									65.62	92.39	86.78
2	80.0	5.68									58.28	30.03	9.46	2.90	73.89	61.26	87.67	92.18
			3	80.0	5.30	57.83	33.42	10.56	2.85	68.41									63.62	91.32	84.66
4	80.0	5.53									59.73	31.95	9.19	2.73	73.73	63.47	83.00	84.56

5	80.0	5.71	60.91	31.44	9.31	2.77	77.63	64.47	86.75	88.70
											平均值	80.0	5.58	59.34	31.78	9.69	2.79	73.93	63.69	88.23	87.38

通过药效学研究表明，本发明以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物在犬和大鼠的试验中均表现有显著的抗心肌缺血、活血化瘀作用，其作用较市售丹参制剂明显为强，表明以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物可基本代表丹参心血管活性的主要有效部位。

此外，我们的研究发现用不同对照品(原儿茶醛、丹参素、丹酚酸B)作总酚酸测定时其斜率有大差别；其次，丹酚酸类成分多不稳定且可在溶液中因热而转化，即作为工艺优劣确定的评价指标尚待确定。为此，我们应用以丹酚酸B为对照品以总酚酸紫外测定及丹酚酸B本身的HPLC测定二者为指标进行了工艺的考察，得到了相对较为更合理的工艺路线和条件研究结果。

2.对三七提取工艺的改进

三七主含皂甙，三七皂甙为三七主要有效部位，大量研究均表明三七皂甙为三七心脑血管活性的主要有效成分。大孔吸附树脂吸附分离技术作为皂甙类成分的分离纯化是颇为有用的，通过系统地考查三七皂甙提取分离各操作单元的技术条件；并在此基础上进行了用两种品牌的大孔树脂对三七总皂甙提取分离工艺中试的研究，结果如表2。

        表2 三七根提取物中总皂甙中试收率及转移率(％)

树脂型号	三七投料量(kg)	三七总甙含量(％)	三七皂甙得量(g)	转移率(％)
					WLD	9.59.59.0	8.628.628.52	677.19736.14565.88	82.7689.8985.67
D101	101010	8.528.528.52	635.71625.17698.13	74.6173.3881.94

由表2可见，两种型号的大孔吸附树脂均有较高的转移率，且所得产品纯度均佳。

3.关于冰片

原丹参复方制剂多使用合成冰片，按2000版中国药典标准，其中龙脑含量仅≥55％，无论从其来源角度或从药物原料的质量控制以保证用药安全方面均存在一定问题，且因合成反应而带来的已知、未知杂质的安全性令人担忧。事实上，我国应用天然龙脑有悠久历史，目前我国国产天然冰片所含龙脑纯度甚高(≥85％)，远超过合成冰片，不含合成反应所带来的杂质，因此用天然冰片代替合成冰片更为合理。我们通过对合成冰片和两种天然冰片(从樟科植物龙脑樟制备的右旋龙脑和从艾纳香中制备的左旋龙脑)的药效毒性对比研究发现，三种冰片中抗急性心肌缺血天然左旋冰片作用较强，故本发明药物以天然左旋冰(艾片，l-龙脑)入药。

4.在制剂成型工艺方面

根据本发明复方药物组成原料物的理化性质，其中丹参提取物中丹参二萜醌类化合物应尽可能避光、避氧，丹参酚酸类化合物也应避氧，三七皂甙稳定，而冰片则因易于挥散而须密闭。为此，在制剂成型工艺中我们通过以保护丹参有效成分稳定、避免冰片挥散损失为重点，并以保证制剂质量均匀、崩解度等符合要求为目的进行了制剂处方筛选和工艺研究，制备了薄膜衣片。深色薄膜衣不仅便于服用，且可防止贮存中丹参酮IIA的变化及冰片的挥散损失。

5.本发明药物的成分测定和质量控制

丹参水溶性成分中，丹酚酸B、迷迭香酸、丹酚酸A、丹参素和原儿茶醛等，丹参酯溶性成分中丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参酮I等，三七中的三七皂苷R₁、人参皂苷R_g1、R_b1等和艾片都具有明显的药理活性，且都可能在心血管疾病的治疗中发挥作用，为有效地控制质量，对有效部位提取物和药物进行分析。主要质控指标是：丹参总酚酸、丹酚酸B、丹参总酮、丹参酮IIA，三七中Rg1、Rb1、R1三个主要的代表性皂甙，l-龙脑，对上述成分分别应用UV、HPLC及气相色谱方法进行测定。具体检测结果见下表。

    表3：主要有效成分(部位)含量测定结果(按日服量计算)

6.本发明的复方药物制剂与已有国家标准类的同类品种的比较

我们对可收集到的丹参复方制剂中有效成分(组分)的含量进行了平行测定，结果见下表。

表4.本发明复方药物与市售丹参复方制剂主要有效成分(部位)含量测定结果(按相同制剂量计算)

由表可见，不同厂家出品的丹参复方制剂质量有较大差异，而且明显可以看出，本发明制剂所含有有效成分(部位)的量是最多的，也验证出本发明制剂的制备工艺确实是有效的。

7.为良好地控制本发明药物的内在质量，我们遵循现代中药质量控制的三阶段模式，即在药材原料、提取物和成品三级均制定较严且相关的质量标准，以确保终产品的质量：

1)丹参原料质量控制

丹参原料质量参差不齐，多种原因可影响原料中丹参有效成分的含量。根据丹参酚酮生产的要求，结合丹参原料的实际情况，本发明在国家药典丹参标准的基础上制定了丹参药材质量标准，其主要标准如下：

表5 丹参酚酮生产用丹参药材主要标准

丹参总酮(％)丹参酮IIA(％)丹参总酚(％)丹酚酸B(％)

≥0.45≥0.2≥4.5≥3.0

2)三七原料质量控制

三七生药原料较为规范、整齐，为保证三七生药原料的质量稳定可控。通过研究，确定三七生药原料的质控标准是：储存期2年以内三七根；原色，不应经染色处理；80～120个头；生药三七皂甙含量符合标准，即人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1分别不低于3.0％、2.5％和0.6％；所含农药残留量及重金属含量符合GAP标准。

3)丹参提取物的质量控制

丹参提取物主要质控含测指标：丹参总酚酸、丹酚酸B、丹参总酮、丹参酮IIA，分别应用分光光度法及HPLC法进行测定。经方法学研究表明，以丹酚酸B为对照品，用分光光度法测定丹参总酚酸、丹参总酮和用HPLC法测定丹酚酸B、丹参酮IIA，对生药原料、提取物半成品及本发明药物进行质量检测，也作为工艺研究的导向指标。

丹参提取物(丹参酚酮)半成品的质量是制备本发明药物的最重要基础之一，为保证其质量可控和均匀符合要求，其含测质控标准的主要标准如下：

            表6 丹参提取物主要成分的指标(％)

项目	指标(％)	实测值(％)
					1批	2批	3批
		丹参总酮丹参酮IIA丹参总酚丹参酚酸B	≥8.0≥2.5≥50≥30	9.462.9058.2830.03				9.932.7259.9332.05	9.312.7760.9131.44

4)三七根提取物(三七总皂甙)的质量控制

关于三七总皂甙及三七各单体皂甙的含量测定方法已较为成熟，我们沿用国标、部标所载含三七品种的含测方法均可容易地对三七生药、提取物(总皂甙)及各主要单体皂甙进行含量测定。以人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1为对照品，应用HPLC法测得之三七各单体皂甙的含量分别为≥28％、22％及5％。

5)天然左旋冰片的质量控制

应用气相色谱进行l-龙脑测定，无论原料或成品均为可行，结果良好。

8.本发明药物的药效学实验

本发明药物在结扎冠状动脉前降支引起犬急性心肌缺血模型上，50、100、200mg/kg可明显改善心外膜电图标测的心肌缺血程度，其中中、高剂量组分别下降44.5±18％(P＜0.01)、45.9±18.7％(P＜0.01)；缺血范围也有不同程度缩小；小、中、大剂量心肌梗死范围则分别缩小了17.6％(P＞0.05)、27.2％(P＜0.01)、50.3％(P＜0.01)；高剂量还能明显抑制血清LDH、CK-MB心肌同功酶水平的升高；降低心肌耗氧量。

大鼠灌服精制本发明药物110、220、440mg/kg每天1次，连续5天，能不同程度抑制因冠状动脉前降支结扎引起II导联心电图ST段的抬高，5～30min起效，维持180min以上；能明显缩小心肌梗死范围，梗死区/危险区分别降低了34.9％(P＜0.05)、52.2％(P＜0.01)、57.8％(P＜0.01)；能明显抑制血清心肌酶水平的升高，AST分别抑制了17.5％(P＜0.05)、26.1％(P＜0.05)、39.8％(P＜0.01)；LDH分别抑制了12.1％(P＜0.05)、20.4％(P＜0.05)、32.0％(P＜0.01)；CK-MB分别抑制了19.8％(P＞0.05)、31.0％(P＜0.01)、44.3％(P＜0.01)。

大鼠每天1次，连续5天灌服本发明药物110、220、440mg/kg，能抑制多种诱导剂引起的血小板聚集，对二磷酸腺苷(ADP)诱导的聚集抑制率分别为21.9％(P＜0.05)、31.9％(P＜0.01)、53.5％(P＜0.01)，ED₅₀为404.8mg/kg；对花生四烯酸(AA)诱导的聚集抑制率分别为20.4％(P＜0.05)、50.5％(P＜0.01)、56.2％(P＜0.01)，ED₅₀为196.2mg/kg；对胶原(CG)诱导的聚集抑制率分别为13.1％(P＞0.05)、25.5％(P＜0.01)、45.6％(P＜0.01)，ED₅₀为481.7mg/kg。对电刺激颈动脉内膜损伤所致实验性动脉血栓形成时间分别延长3.5％(P＞0.05)、19.4％(P＜0.05)、38.6％(P＜0.01)。药效学研究的结论是：本发明药物具有明显的抗心肌缺血作用和活血化瘀作用。

9.本发明药物的毒理学实验

对本发明的药物采取了按“最大可容许剂量”和“最长给药时间”投药原则，给小白鼠一次性灌服的LD₅₀为6.84g/kg。大白鼠一次性灌服8g/kg，均未见引起明显中毒反应，观察2周无死亡发生，也未见对动物体重增长有明显影响，到期处死解剖主要脏器无异常。按最长期的长毒试验大剂量在大鼠高达1.25g/kg，Beagle达0.4g/kg进行了大鼠6月及恢复1月的长期毒性试验，未见对大鼠有确定的明显毒性；9月Beagle犬长毒确定大剂量对犬未未有确定的明显毒性。本发明药物的急、慢性毒性及一般药理试验结果未见明显毒性，具有可靠的安全性。

具体实施方式

下面的实施例仅为了说明本发明，而不是为了限制本发明的保护范围。

实施例1：从原料中提取有效活性部位的方法

本发明方法中所用的丹参、三七、艾片药材购于GAP生产基地，其他原料均可从市场上购得，所用设备均为中药制药领域常用的提取加工设备。

(1)丹参提取物(以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物)的获得

本发明的以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物提取方法为：用CO₂-SFE技术提取丹参酮类化合物，取丹参药材，净制后碎为粗粉，在SFE装置中进行CO₂-SFE提取，提取条件为：压力：15MPa，温度40℃，以95％乙醇为夹带剂，夹带剂用量为8倍药量，提取时间10h。取上述丹参脂溶性成分提取步骤后的残渣，采用常规用水煎煮工艺提取水溶性丹酚酸类，加入的水量为药材量的10倍，提取2-3次，每次1小时，加水量为物料量的12倍。最后以乙酸乙酯纯化上述制备得到的丹参水提液，萃取条件为：pH值为2.5，加酯次数为4次，提取时间为20分钟，每次加入乙酸乙酯的量为浸膏量的2倍。最后取丹参SFE提取物采用真空低温干燥，取水-乙酸乙酯提取物采用喷雾干燥，获得两种固体粉末后，分别按照该提取物对等的丹参药材等量混合或按如下比例进行混合：丹参SFE提取物1-2份∶水-乙酸乙酯提取物4-8份，即为丹参提取物——以丹参总酚和丹参总酮为主要成分的丹参提取物。该工艺使两类成分在制剂中的转移率比现行工艺大幅度提高，丹参总酮的得率为1.46％，含量为46.68％，其中丹参酮IIA含量为13.39％。丹参总酚的转移率为73.75％，含量为74.80％；丹酚酸B转移率66.90％，含量42.20％。

(2)三七根提取物的获得

将三七根碎为粗粉。每批投料10kg左右，用10倍量生药的75％乙醇回流提取两次，每次1小时，提取液回收乙醇后用水溶解，过滤，用WLD或D101树脂分离纯化，吸附后用10倍量生药的70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后干燥，即得。三七总皂甙及单体皂甙转移率均在80％以上，三七总皂苷得率8.34％，含量75.41％；其中Rg1含量为32％，Rb1含量为24.12％，R1含量为6.21％。

实施例2：本发明药物片剂的制备方法

取丹参提取物、三七根提取物、天然冰片按50-95％∶20-50％∶2-25％的比例混合均匀，称取混合粉；取预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠，过60目筛后与上述混合粉混合至均匀；再加入无水乙醇制成适宜软材，过18目筛，制粒，干燥，整粒；取硬脂酸镁混合均匀，采用Φ9.0mm浅弧冲压片后包薄膜衣，包衣锅转速为20转/分钟，出风温度为35℃～40℃，片床温度为40℃～45℃，制得本发明的药物。

实施例3：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成胶囊。

实施例4：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成粉末。

实施例5：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成颗粒。

实施例6：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成口服液。

实施例7：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成糖浆。

实施例8：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成腔肠给药的剂型。

实施例9：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成注射剂。

实施例10：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成透皮剂。

实施例11：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成咀嚼剂。

实施例12：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成茶剂。

实施例13：用本发明药物药效成分配以常规辅料根据常规药物制剂方法制成酏剂等。

Claims (11)

1、一种治疗心脑血管疾病的药物，其特征在于该药物是由丹参提取物、三七根提取物和天然左旋冰片(艾片)为药效成分制成。

2、权利要求1所述的药物，丹参提取物由丹参提取水溶性有效成分丹参总酚酸或/及丹参脂溶性有效成分丹参总酮制备；三七根提取物由三七主根或/及剪口提取三七根总皂苷制备；天然左旋冰片(艾片)由艾纳香提取而得。

3、如权利要求1所述的药物，其特征在于该药物的药效成分及用量以重量计是：

丹参提取物50-95％、三七根提取物20-50％、天然左旋冰片2-25％，以上三种成分的总和为100％。

4、如权利要求1或3所述的药物，其特征在于丹参提取物、三七根提取物以及天然左旋冰片的用量以重量计是61.3％∶22.7％∶16％，所述天然左旋冰片中1-龙脑≥85％，

其中，所述丹参提取物是这样制得的：取丹参药材，净制后碎为粗粉，在SFE装置中进行CO₂-SFE提取，提取条件为：压力：15MPa，温度40℃，以95％乙醇为夹带剂，夹带剂用量为8倍药量，提取时间10h；取上述丹参CO₂-SFE提取步骤后的残渣，采用常规用水煎煮工艺提取水溶性丹参酚酸类，加入的水量为药材量的10倍，提取2-3次，每次1小时，加水量为物料量的12倍；然后以乙酸乙酯纯化上述制备得到的丹参水提液，萃取条件为：pH值为2.5，加乙酸乙酯次数为4次，提取时间为20分钟，每次加入乙酸乙酯的量为浸膏量的2倍；最后取丹参SFE提取物采用真空低温干燥，取水-乙酸乙酯提取物采用喷雾干燥，获得两种固体粉末后，分别按照该提取物对等的丹参药材等量混合或按如下比例进行混合：丹参SFE提取物1-2份∶∶水-乙酸乙酯提取物4-8份，即为丹参提取物；

所述三七根提取物是这样制得的：取三七根药材，碎为粗粉，用10倍量药材的75％乙醇回流提取两次，每次1小时，提取液回收乙醇后用水溶解，过滤，用大孔树脂分离纯化，吸附后用10倍量生药的70％乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇后干燥，即得三七根提取物；

所述天然左旋冰片，是以艾纳香为原料制备的以1-龙脑为有效成分的艾片，可从艾纳香叶蒸馏、升华提得或市售获得，

取以上制得的丹参提取物、三七根提取物、天然左旋冰片按比例混合均匀，按常规药物制剂方法制成可通过口服给药方式、腔肠给药方式、喷雾给药方式、注射给药方式、输液给药方式和透皮吸收给药方式适用的剂型的药物。

5、如权利要求3或4所述的药物，其特征在于所述丹参SFE提取物中含有40-51.34％丹参总酮，其中丹参酮IIA含量为10.39-16.22％；所述水-乙酸乙酯提取物含有62.32-82.28％丹参总酚，其中丹酚酸B含量为35.98-48.42％；所述三七根提取物含有65.76-82.95％三七总皂苷，其中Rg1含量为28.80-35.20％，Rb1含量为21.70-26.53％，R1含量为4.58-6.83％。

6、如权利要求1、3、4任一项所述的药物，其特征在于该药物可为适合口服给药、腔肠给药、喷雾给药、注射给药、输液给药和透皮吸收给药的剂型的药物。

7、如权利要求7所述的药物，其特征在于所述口服给药方式适用的药物制剂的剂型可选自：片剂、胶囊、粉末、颗粒、晶体、溶液、悬液、糖浆、酏剂、茶剂和咀嚼剂。

8、一种制备权利要求1或3所述的药物的方法：丹参提取物是由二氧化碳超临界萃取技术提取丹参总酮、由水煎、醋酸乙酯提取技术提取丹参总酚酸；三七根提取物是用极性溶剂水或40～95％的乙醇提取、大孔树脂吸附分离技术制备；天然左旋冰片从艾纳香叶蒸馏、升华提得或市售获得。

9、如权利要求1-8任一项所述的药物在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用。

10、如权利要求9的应用，其特征是所述心脑血管疾病是缺血性心脏病和缺血性脑中风。

11、如权利要求1-5任一项所述的药物的质量控制方法，该方法包括如下步骤：

1)丹参原料质量控制标准

在丹参中，丹参总酮的含量≥0.45％；丹参酮IIA≥0.2％；丹参总酚≥4.5％；丹酚酸≥3.0％；

2)三七原料的质量控制

三七根，生药三七皂甙含量符合标准：人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1分别不低于3.0％、2.5％和0.6％；

3)丹参提取物的质量控制

丹参总酚酸、丹酚酸B、丹参总酮、丹参酮IIA，分别应用分光光度法及HPLC法进行测定；选取丹酚酸B为对照品，其标准曲线方程为：C(μg/ml)＝27.26A-0.472(r＝0.9999，4.136～24.816)；丹参提取物中，丹参总酮≥8.0％，丹参酮IIA≥2.5％，丹参总酚≥50％；丹参酚酸B≥30％；

4)三七根提取物的质量控制

以人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1为对照品，应用HPLC法测得三七中人参皂甙Rg1、Rb1及三七皂甙R1的含量分别为≥28％、22％及5％；

5)天然左旋冰片的质量控制

应用气相色谱进行1-龙脑测定。