CN101066260B

CN101066260B - 一种辅酶q10乳剂及其冻干乳剂及制备方法

Info

Publication number: CN101066260B
Application number: CN2006101367047A
Authority: CN
Inventors: 姚瑶; 陶昱斐
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2006-11-17
Filing date: 2006-11-17
Publication date: 2012-11-07
Anticipated expiration: 2026-11-17
Also published as: CN101066260A

Abstract

本发明公开了一种新的药物组合物——辅酶Q₁₀乳剂及冻干乳剂及相应的制备方法。其中乳剂的成分为药物和药用辅料，药物为辅酶Q₁₀0.25％，药用辅料为油相(注射用油)1～20％、乳化剂0.01～10％、辅助乳化剂0.001～5％、其它稳定剂0～2％、等渗调节剂1～10％；冻干乳剂中药物辅酶Q₁₀为0.25％～1.0％，另含有冻干保护剂，其余为注射用水。根据本发明提供的辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂的组方及其制备工艺，所制备的辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂粒径均小于500nm，属于亚纳米乳范畴，冻干乳剂在冻干前后粒径无显著变化，使用前加水重建可快速复溶恢复成亚纳米乳，且稀释不析出药物结晶；初步稳定性结果显示具有良好稳定性，光稳定性较普通溶液型制剂更好，安全性试验符合要求，可供临床静脉注射和口服给药。

Description

一种辅酶Q10乳剂及其冻干乳剂及制备方法

技术领域：

本发明涉及一种辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂及制备方法。

技术背景：

辅酶Q₁₀(Co Q₁₀)的化学结构为2、3-二甲氧基-5-甲基-6-十异戊二烯基苯醌(2，3-dimethoxy-5-methyl-6-decoprenyl benzoguinone)，它是一类与维生素有共同特征的脂溶性醌类化合物。

早在70年代，国外对辅酶Q₁₀就开始了大量临床应用研究，发现其对心脏病、恶性肿瘤、高血压、脑血管障碍、坏血病、急性肝炎等疾病有极好的疗效，可作为肌体非特异性免疫增强剂、细胞代谢及细胞呼吸激活剂。目前辅酶Q₁₀上市制剂有注射剂和口服剂型如片、胶囊、胶丸等，已在临床得到广泛应用。

研究表明，由于辅酶Q₁₀在水中的溶解度很低，药物口服吸收缓慢，健康人体口服辅酶Q₁₀后需要5～6hrs血浆中药物浓度才能达到峰值。同时由于辅酶Q₁₀具有高度亲脂性，经口服以后，药物10天内从粪便中排出的量约为口服剂量的62％，实际上口服吸收的药量仅占口服剂量的10～20％。(Lucker etal，Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q.V4；K.Folkers andY.Yamamura，eds.，Elsevier/North-Holland BiomedicalPress，Amsterdam，143-151，1984)

冠状动脉侧支移植手术后的病人应用辅酶Q₁₀改善其心肌缺血状况和保护心脏功能时，口服辅酶Q₁₀很难在组织中达到理想的药物浓度，从而无法达到理想的治疗效果。此外，很多情况下必须采用注射形式给予辅酶Q₁₀对患者进行治疗，例如：心血管疾病的患者在发生急性心肌缺血、急性心肌梗死或胸疼时需要快速有效的治疗，口服辅酶Q₁₀很难满足临床治疗的要求；心肌病患者口服辅酶Q₁₀，由于药物吸收缓慢且吸收量不确定使得很难达到理想的疗效；对于婴儿、儿童、昏迷或严重创伤的患者而言，他们不能够按常规方式进行口服给药治疗，只能采用注射给药；此外，静脉注射给药由于其方便、剂量准确、可控性强、可以避免口服给药带来的胃肠道刺激，容易满足连续和间断式的给药方案。

为实现辅酶Q₁₀临床注射给药的目的，现有技术中公开了一些技术方案。英国专利GB1112568报道将辅酶Q₁₀制备成混悬液；美国专利US4068003报道使用表面活性剂Nikkol HCO-60，芝麻油，聚乙二醇制备辅酶Q₁₀的乳剂；美国专利US4156718报道应用含有0.4％吐温20制备辅酶Q₁₀乳剂；美国专利US4824669报道将辅酶Q₁₀溶于油后再与上市的静脉注射用脂肪乳剂混合制备辅酶Q₁₀乳剂；中国专利CN1593392A报道了以表面活性剂吐温80来制备辅酶Q₁₀普通注射液的冻干粉针，以提高其稳定性，但表面活性剂用量仍然较大且冻干品重建时较难以复溶；中国专利CN1208052C报道将辅酶Q₁₀制备成固体形式的前体脂质体，以提高其稳定性。

辅酶Q₁₀在水中溶解度小，难以直接制成注射剂使用，目前临床应用的辅酶Q₁₀注射液一般采用非水溶剂及较大量表面活性剂增溶，给药后可能导致过敏、溶血等不良反应，稀释及注射速度过快可能产生药物沉淀影响用药安全性。此外，辅酶Q₁₀对光敏感，加工及贮存过程中制剂质量不够稳定，产品临床应用受到限制。

乳剂型注射剂由于其自身的诸多优点使其成为近年来药物制剂领域的新热点。将难溶性不稳定性药物包封于脂质载体中形成乳剂，可以有效减少药物在水、空气和光照等不利因素中的暴露，从而提高药物的稳定性。注射用乳剂粒径一般控制在100～1000nm范围内，可以安全有效的应用于人体注射给药。将乳剂制备成冻干乳，能进一步改善辅酶Q₁₀的物理化学稳定性，为临床应用提供一种新型药物组合物。

发明内容：

本发明的目的是提供一种新的药物组合物——辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂及相应的制备方法，其制备工艺简单可控，可以提高药物辅酶Q₁₀制剂的物理、化学和生物学稳定性，为临床提供更加安全、稳定、有效的制剂。

其主要技术方案是该乳剂的成分为药物和药用辅料，药物为2、3-二甲氧基-5-甲基-6-十异戊二烯基苯醌，药用辅料为油相(注射用油)、乳化剂、辅助乳化剂、其它稳定剂、等渗调节剂、pH调节剂，冻干乳剂中含有冻干保护剂，其余为注射用水；

1.辅酶Q₁₀乳剂注射液，各组分的重量体积(g/ml)百分如下：

辅酶Q₁₀ 0.25-1.0％

注射用油 1～20％

乳化剂 0.01～10％

辅助乳化剂 0.001～5％

其它稳定剂 0～2％

等渗调节剂 1～10％

其余为pH调节剂及注射用水。

所述的注射用油可为注射用大豆油和中链油(MCT)中的一种或其混合物；注射用油用量为1～20％(w/v)。

其优选用量为3％～10％(w/v)。

所述的乳化剂包括，但不限制于，磷脂，例如天然磷脂，如蛋黄卵磷脂、大豆磷脂；合成或半合成的磷脂，如磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油；胆甾醇和胆甾醇酯；非离子型表面活性剂，如HS15，吐温类，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物如泊洛沙姆和poloxamines；或其混合物；优选的表面活性剂是磷脂或磷脂与上述一种或多种表面活性剂的混合物。

其优选用量为0.05％～3％(w/v)。

所述的辅助乳化剂，包括直链或支链C6～18的饱和或不饱和脂肪酸，如油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸及其盐类；氨基酸如赖氨酸、组氨酸、精氨酸；固醇类如胆固醇、胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、去氧胆酸及其钠盐、甘氨胆酸及其钠盐；非离子型表面活性剂，如吐温和泊洛沙姆；磷脂酸和荷电脂质如PA、PG、DPPA、DPPG；多羟基类化合物如甘油、PVP。

其优选用量为0.005％～2％(w/v)。

其它稳定剂包括金属离子螯合剂如乙二胺四乙酸盐；抗氧化剂，如氮气、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、维生素C、α-生育酚。这些稳定剂均可加入适量pH调节剂可以为盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐的一种或几种混合物，调节pH为3.0～9.0。

优选调节pH值为5.0～7.0。

等渗调节剂为多羟基类化合物如甘油、PVP、PEG、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、木糖醇。

其优选用量为2％～5％(w/v)。

制备注射用乳剂方法包括如下步骤：

将注射用油预热至40～80℃，然后加入药物至溶解完全，再加入脂溶性乳化剂和脂溶性的辅料，在40～80℃时强烈搅拌使其溶解分散形成油相；在40～80℃时，将水溶性成份或表面活性剂加入注射用水中，搅拌溶解或分散后形成水相；在40～80℃时将水相加入油相，剪切使形成初乳，调节pH值5.0～7.0，过均质机，均质压力在500～15000psi，将乳液反复均质，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂。

将上述得到的乳剂经微孔滤膜过滤，充氮气，灌封，灭菌常规处理后，得辅酶Q₁₀乳剂产品。

本发明还提供一种辅酶Q₁₀注射用冻干乳剂，冻干乳剂冻干前的液态乳剂中各组分的重量体积百分含量如下：

辅酶Q10 0.25％～1.0％

注射用油 1～20％

乳化剂 0.01～10％

辅助乳化剂 0.001～5％

其它稳定剂 0～2％

冻干保护剂 1～40％

其余为pH调节剂及注射用水。所述的注射用油可为注射用大豆油和中链油(MCT)中的一种或其混合物；

其优选用量为1％～8％(w/v)。

所述的乳化剂包括，但不限制于，磷脂，例如天然磷脂，如蛋黄卵磷脂；合成或半合成的磷脂，如磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油；非离子型表面活性剂，如HS15，吐温类，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物如泊洛沙姆和poloxamines；或其混合物；优选的表面活性剂是磷脂或磷脂与上述一种或多种表面活性剂的混合物。

其优选用量为0.1％～3％(w/v)。

所述的辅助乳化剂，包括直链或支链C6～18的饱和或不饱和脂肪酸，如油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸及其盐类；氨基酸如赖氨酸、组氨酸、精氨酸；固醇类如胆固醇或其酯、胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、去氧胆酸及其钠盐、甘氨胆酸及其钠盐；非离子型表面活性剂，如吐温和泊洛沙姆；磷脂酸和荷电脂质如PA、PG、DPPA、DPPG；多羟基类化合物如甘油、PVP等。

其优选用量为0.005％～2％(w/v)。

其它稳定剂包括金属离子螯合剂，如乙二胺四乙酸盐；抗氧化剂，如氮气、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、维生素C、α-生育酚。这些稳定剂均可加入适量。

pH调节剂为盐酸、氢氧化钠、醋酸、醋酸钠、磷酸盐、柠檬酸、柠檬酸盐的一种或几种混合物，调节pH为3.0～9.0。

优选调节pH值为5.0～7.0。

冻干保护剂为糖类物质或多羟基类物质；糖类选自葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇的一种或几种。

其优选用量为2～30％，更优选用量为5～20％。

制备注射用冻干乳剂的方法包括如下步骤：

将制备注射用乳剂的步骤中得到的乳剂中加入适量冻干保护剂，溶解完全后无菌过滤，分装。将分装好的乳剂进行冷冻干燥，于-40℃预冻4～8h，升温至-30℃～-25℃维持至少20h，真空减压除去水分，升温至-10℃～0℃，维持10～12h继续真空减压除去水分，再升温至25℃～30℃，维持6～8h，继续真空减压除去水分，得干燥的冻干乳剂。

制得的冻干乳剂按需要量加水，重建后使其复原成乳剂，所制得乳剂的粒径范围是50nm～500nm，可供静脉注射。

辅酶Q₁₀的含量测定采用HPLC法。相关粒径测定采用Brookhaven 90plusparticle size analyzer激光粒度测定仪测定。

根据本发明提供的辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂的组方及其制备工艺，所制备的辅酶Q₁₀乳剂及其冻干乳剂在高温(40℃)及光照(4500LX±500)条件下均具有良好的稳定性；冻干乳剂在冻干前后粒径无显著变化，初步稳定性结果显示具有良好稳定性。

具体实施方式

实施例1：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，大豆油10g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

40℃下将辅酶Q₁₀加入豆油中至溶解完全，再加入纯化的蛋黄卵磷脂剪切搅拌均匀，制得油相；40℃下将甘油溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径389.5nm，pH 6.5，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.3％。

实施例2：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油10g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

40℃下将辅酶Q₁₀加入中链油中至溶解完全，再加入纯化的蛋黄卵磷脂剪切搅拌均匀，制得油相；40℃下将甘油溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径375.6nm，pH 6.3，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.5％。

实施例3：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油5g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，poloxamer1880.015g，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

60℃下将辅酶Q₁₀加入中链油中至溶解完全，再加入纯化的蛋黄卵磷脂剪切搅拌均匀，制得油相；60℃下将poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径235.6nm，pH 6.8，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.7％。

实施例4：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油10g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.025g，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

60℃下将辅酶Q₁₀加入中链油中至溶解完全，再加入纯化的蛋黄卵磷脂剪切搅拌均匀，制得油相；60℃下将poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径201.2nm，pH 6.4，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.1％。

实施例5：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，大豆油5g，中链油5g，纯化的蛋黄卵磷脂1.5g，poloxamer188 0.025g，甘油2.5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

50℃下将大豆油和中链油混合均匀，加入辅酶Q₁₀至溶解完全，制得油相；50℃下将纯化的蛋黄卵磷脂poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，加入纯化的蛋黄卵磷脂，剪切搅拌均匀，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi 反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径214.2nm，pH 6.6，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.3％。

实施例6：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油5g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.015g，VE 0.05g，葡萄糖5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

40℃下将VE和中链油混合均匀，加入辅酶Q₁₀至溶解完全，制得油相；40℃下将纯化的蛋黄卵磷脂poloxamer188、葡萄糖溶解于注射用水中，加入纯化的蛋黄卵磷脂，剪切搅拌均匀，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径231.1nm，pH 6.7，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.9％。

实施例7：

<1>辅酶Q₁₀乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油5g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，poloxamer1880.015g，油酸0.1g，甘油2.25g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀乳剂制备工艺如下：

60℃下将油酸加入中链油中混合均匀，加入辅酶Q₁₀至溶解完全，再加入纯化的蛋黄卵磷脂剪切搅拌均匀，制得油相；60℃下将poloxamer188和甘油溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌30min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂，0.22μm微孔滤膜过滤，分装，充氮，100℃灭菌30min，得辅酶Q₁₀乳剂产品。该乳剂平均粒径211.3nm，pH 6.5，辅酶Q₁₀含量为标示量的98.6％。

实施例8：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油10g，纯化的蛋黄卵磷脂1.2g，胆固醇0.2g，Tween-800.2g，EDTA-2Na0.01g，蔗糖8g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

40℃下将纯化的蛋黄卵磷脂和胆固醇剪切搅拌溶解于中链油中，再加入辅酶Q₁₀溶解完全制得油相；将EDTA-2Na和Tween-80溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌10min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂蔗糖至溶解混合混合均匀，以0.22μm微孔滤膜过滤，然后将所得乳剂分装，经冷冻干燥除去水分得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径50～400nm，可供注射使用。

实施例9：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油8g，注射用蛋黄卵磷脂2.0g，Poloxamer1.0g，油酸0.05g，EDTA-2Na 0.005g，蔗糖10g，甘露醇5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

50℃下将中链油、油酸混匀，再加入辅酶Q₁₀溶解完全制得油相；将注射用蛋黄卵磷脂分散于含有EDTA-2Na和Poloxamer的注射用水中，制得水相；40℃下将水相加入到油相中剪切10min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂蔗糖和甘露醇至溶解混合均匀，以0.22μm微孔滤膜过滤，然后将所得乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径100～350nm，可供注射使用。

实施例10：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，豆油15g，纯化的大豆卵磷脂2.4g，油酸0.05g，EDTA-2Na0.005g，乳糖10g，甘油2.25g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

40℃下将纯化的大豆卵磷脂分散于豆油中，再加入油酸、辅酶Q₁₀混合均匀制得油相；将甘油和EDTA-2Na溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中剪切10min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化2次，再调节均质机压力为10000～15000psi，反复均化3～5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂乳糖至溶解完全得均匀乳剂，过 0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径80～350nm可供注射使用。

实施例11：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 1g，豆油12g，注射用蛋黄卵磷脂0.6g，poloxamer 2g，甘油0.5g，海藻糖8g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

40℃下将豆油和辅酶Q₁₀混合均匀制得油相；将注射用蛋黄卵磷脂分散于含poloxamer的40℃注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌15min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化2次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3次得均匀乳剂。加入冻干保护剂海藻糖至溶解完全得均匀乳剂，过0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径100～400nm，可供注射使用。

实施例12：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，豆油2g，纯化的大豆卵磷脂2.0g，DPPG0.1g，poloxamer1.0g，HS-150.5g，α-生育酚0.02g，PVPC₃₀ 0.5g，蔗糖20g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

40℃下将纯化的大豆卵磷脂和DPPG分散于豆油中，加入α-生育酚，再加入辅酶Q₁₀混合均匀制得油相；将PVPC₃₀、poloxamer和HS-15溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌10min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化3次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化3～5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂蔗糖至溶解完全得均匀乳剂，过0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径50～300nm可供注射使用。

实施例13：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，大豆油6g，纯化的大豆卵磷脂1.8g，poloxamer0.5g，油酸0.03g，PVPC₃₀ 0.5g，EDTA-2Na0.01g，甘露醇5g，蔗糖5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

50℃下将纯化的大豆卵磷脂分散于豆油中，加入油酸，再加入辅酶Q₁₀混合均匀制得油相；将poloxamer、PVPC₃₀和EDTA-2Na溶解于40℃的注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌15min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压，首先调节均质机压力为5000psi反复均化2次，再调节均质机压力为10000～15000psi，反复均化4次得均匀乳剂。加入冻干保护剂甘露醇和蔗糖至溶解完全得均匀乳剂，过0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径70～360nm，可供注射使用。

实施例14：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.25g，中链油3g，tween-800.5g，胆酸钠0.005g，EDTA-2Na0.005g，甘油1.0g，蔗糖10g，甘露醇5g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

60℃下将辅酶Q₁₀加入中链油中混合均匀制得油相；将tween-80、胆酸钠、甘油和EDTA-2Na溶解于注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中搅拌15min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化2次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂蔗糖和甘露醇至溶解完全得均匀乳剂，过0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径100～240nm可供注射使用。

实施例15：

<1>辅酶Q₁₀冻干乳剂的成分为：辅酶Q₁₀ 0.5g，中链油8g，纯化的蛋黄卵磷脂1.8g，poloxamer1g，油酸0.05g，α-生育酚0.02g，EDTA-2Na0.005g，蔗糖10g，乳糖2g，其余为注射用水，共100ml。

<2>辅酶Q₁₀冻干乳剂制备工艺如下：

60℃下将中链油、油酸、α-生育酚混合均匀，再加入辅酶Q₁₀制得油相；将纯化的蛋黄卵磷脂分散于含poloxamer和EDTA-2Na的注射用水中，制得水相；将水相加入到油相中剪切10min得初乳，调节pH值5.5～7.0，将初乳过高压均质机，首先调节均质机压力为5000psi反复均化2次，再调节均质机压力为15000psi，反复均化5次得均匀乳剂。加入冻干保护剂蔗糖和乳糖至溶解完全后得均匀乳剂，过0.22μm微孔滤膜，然后将所得均匀乳剂分装，经冷冻干燥除去水分，充氮气，得辅酶Q₁₀冻干乳剂。

<3>制得的冻干乳按需要量加入灭菌注射用水，水合振荡后，复原成乳剂，粒径100～350nm可供注射使用。

实施例16：

依实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，模拟上市包装，置于盛有饱和氯化钠溶液(RH75％±5％)的干燥器内，再放置于温度为40℃±2℃的恒温箱中，分别于1、2、3、6月取样，考察样品的外观、pH值、有关物质、乳粒粒径及含量变化。结果见表1

表1辅酶Q₁₀乳剂加速留样测定结果

实施例17：

依实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，模拟上市包装条件下，与自制溶液型注射剂产品同时置温度25℃±2℃，相对湿度60％±10％，强光照射4500±500LX的条件下放置，分别于0、5和10天取样测定药物含量，结果见表2。

表2辅酶Q₁₀乳剂光照实验结果

实验结果表明，乳剂比溶液型注射液产品具有更好的光稳定性。

实施例18：

依实施例15制备辅酶Q₁₀冻干乳，模拟上市包装条件下，在温度25℃±2℃，相对湿度60％±10％的条件下放置，分别于0、1、2、3月取样，考察样品的外观、pH值、有关物质、乳粒粒径及含量变化。结果见表3。

表3辅酶Q₁₀冻干乳剂长期留样考察测定结果

实施例19：

依实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，规格：2ml:5mg。考察其血管刺激性。取健康家兔4只，雌雄兼用。用无菌操作方法于左耳注射氯化钠注射液1.0ml/kg，于右耳耳缘静脉注射供试品溶液1.0ml/kg，每天一次，连续五天。给药后肉眼观察给药部位的静脉血管及周围的红肿情况。于末次注射24小时后将动物放血处死，分别距注射部位进针点2cm处向心端剪下耳缘约2cm作为标本，标本福尔马林固定，常规组织切片，观察血管周围变化、血管壁是否损伤、内皮细胞有无脱落、有无血栓形成以及其他病理变化。

试验结果表明：家兔左右耳肉眼观察注射部位均无异常，血管无充血，周围组织无水肿等现象。病理切片观察结果表明，给予氯化钠注射液的4例耳缘和给予辅酶Q₁₀注射乳的4例耳缘均未见血管壁扩张和水肿，血管周围未见出血和炎细胞浸润，且两组未见明显差异。提示本品对家兔血管没有明显的刺激作用。

实施例20：

依实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，规格：2ml:5mg。考察其肌肉刺激。取健康家兔4只，雌雄兼用。以无菌操作方法分别在其左腿股四头肌肉内灭菌氯化钠注射液1.0ml/只；右腿股四头肌肉内注射供试品溶液1.0ml/只。注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应，按附表换算成相应的反应分值；同时标本用福尔马林固定，常规组织切片，观察注射部位肌肉组织的变化。

试验结果表明：两组家兔经肌肉注射后，家兔健康正常，腿部活动正常。家兔处死取出股四头肌后，肉眼观察给药部位，给予氯化钠注射液的4例股四头肌刺激反应级数分别为0、0、0、0级；给予辅酶Q₁₀注射乳的4例股四头肌刺激反应级数分别为0、1、1、0级。病理切片结果表明，其中给予辅酶Q₁₀注射乳的4例股四头肌有2例肌间质可见轻微充血，其余2例和给予氯化钠注射液的4 例股四头肌肌纤维均无水肿、坏死；肌间质无出血、无炎细胞浸润。提示本品对家兔股四头肌有轻微的刺激作用。

实施例21：

依实施例3制备辅酶Q₁₀乳剂，规格：2ml:5mg。考察其溶血性。取健康家兔一只，从动脉取血约20ml，放置于盛有玻璃珠的200ml的烧杯中，振摇5分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血。加约5倍量的氯化钠注射液洗涤，摇匀，每次2000r/min离心5分钟，除去上清液，如此反复，直至上清液不显红色透明为止。

取离心至上清液无色后的红细胞2ml，加氯化钠注射液至100ml，即得2％的兔红细胞混悬液。

取试管7支，按下表配比量依次加入2％兔红细胞混悬液和氯化钠注射液，混匀后，于37℃恒温30min，然后分别加入不同量的上述药液(第6管为阴性对照管，第7管为阳性对照管)，摇匀，置37℃恒温箱中。开始每隔15min观察一次，1h后，每隔1h观察一次，共4h。

结果判定：

全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血，红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集，虽无溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不分散。样品2000r/min离心5分钟，在波长为545nm处比色测定吸收度，计算得溶血率。

一般以0.3ml注射剂(第3管)，在2小时内不产生溶血作用者认为可供注射用。如有红细胞凝集现象，可按下法进一步判定是真凝集还是假凝集。若凝聚物在试管震荡后又能均匀分散，或凝聚物放在载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴氯化钠注射液，在显微镜下观察。凝集红细胞能被冲散者为假凝聚，供试品可供临床使用。若凝聚物不能摇散或有玻片上不被冲散者为真凝聚，供试品不宜供临床使用。

肉眼观察结果如下：

附：-表示无溶血或凝集，+表示有溶血或凝集反应

比色测定结果如下：本品离心后，仍为乳白色液体，样品管下面均少量红细胞残留，在545nm波长处测得上面乳白色的液体的各管的吸收值均大于2，且吸收值相差不大，即乳白色液体对测量结果有干扰。

上述结果表明，辅酶Q₁₀注射乳无溶血和凝集现象。

Claims

1.一种辅酶Q₁₀注射用冻干乳剂，冻干乳剂冻干前的液态乳剂中各组分的重量体积百分含量如下：

其余为pH调节剂及注射用水；其中

所述的注射用油可为注射用大豆油和中链油中的一种或其混合物；

所述的乳化剂包括蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、磷脂酰胆碱，磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、胆甾醇、胆甾醇酯、吐温类、泊洛沙姆，或其混合物；

所述的辅助乳化剂为油酸、棕榈酸、肉豆蔻酸及其盐类、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、胆固醇、胆酸及其钠盐、去氢胆酸及其钠盐、去氧胆酸及其钠盐、甘氨胆酸及其钠盐、吐温、泊洛沙姆、PA、PG、DPPA、DPPG；

其它稳定剂为乙二胺四乙酸盐、氮气、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、维生素C、α-生育酚；

冻干保护剂选自葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇的一种或几种。

2.制备权利要求1的注射用冻干乳剂的方法，包括如下步骤：

将注射用油预热至40～80℃，然后加入药物至溶解完全，再加入乳化剂中的脂溶性乳化剂，和辅料中的脂溶性的辅料，在40～80℃时强烈搅拌使其溶解分散形成油相；在40～80℃时，将水溶性成份或表面活性剂加入注射用水中，搅拌溶解或分散后形成水相；在40～80℃时将水相加入油相，剪切使形成初乳，调节pH值5.0～7.0，过均质机，均质压力在500～15000psi，将乳液反复均质，测定乳剂粒径，得到粒径＜500nm且分散均匀的乳剂；

将上述制备注射用乳剂的步骤中得到的乳剂中加入适量冻干保护剂，溶解完全后无菌过滤，分装；将分装好的乳剂进行冷冻干燥，于-40℃预冻4～8h，升温至-30℃～-25℃维持至少20h，真空减压除去水分，升温至-10℃～0℃，维持10～12h继续真空减压除去水分，升温至25℃～30℃，维持2～4h，继续真空减压除去水分，得干燥的冻干乳剂。