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CN100493614C - 形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法 - Google Patents

形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法 Download PDF

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CN100493614C CNB02808392XA CN02808392A CN100493614C CN 100493614 C CN100493614 C CN 100493614C CN B02808392X A CNB02808392X A CN B02808392XA CN 02808392 A CN02808392 A CN 02808392A CN 100493614 C CN100493614 C CN 100493614C
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Abstract

本发明涉及一种形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法。更精确地，本发明涉及在水性介质中形成自聚集体的、由一种疏水的抗癌试剂和一种亲水的脱乙酰壳多糖组成的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法。本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体不仅选择性地对靶肿瘤组织起作用，而且持续长时间地释放药物。此外，抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体通过将抗癌药加入到自聚集体之中可以携带更多数量的药物，这通常被化学键所限制。因此，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体可以有效地用于癌症的化学疗法。

Description

形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法
发明领域
本发明涉及一种形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法。更精确地，本发明涉及在水性介质中形成自聚集体的、由一种疏水的抗癌试剂和一种亲水的脱乙酰壳多糖组成的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体以及其制备方法。本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体不仅选择性地对靶肿瘤组织起作用，而且持续长时间地释放药物。此外，抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体可以用作一种物理装载疏水抗癌药物的药物载体。因此，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体可以有效地用于癌症的化学疗法。
背景
当通过使用氨甲蝶呤完全治愈绒毛膜癌时癌症的化学疗法开始发展。到今天为止，已经使用大约50种不同种类的抗癌药，并且尤其是使用那些抗癌药已经满意地治疗了绒毛膜癌，白血病，维尔姆斯瘤，尤因瘤，横纹肌瘤，成视网膜细胞瘤，淋巴瘤，蕈样肉芽肿，睾丸瘤等。
最近，已经公开了很多关于癌症发展和肿瘤细胞特征的知识，并且已经进行了关于新抗癌药开发的研究。大多数抗癌药通过抑制肿瘤细胞核酸的合成或通过直接与核酸结合使其失去功能来显示抗癌作用。然而，由于这些抗癌药不仅对肿瘤细胞起作用而且对正常细胞起作用，它们经常导致严重的副效应如骨髓抑制(bone marrow depression)，胃肠损伤和脱发。
使用抗癌药的最大问题是那些药物不选择性地只对肿瘤细胞起作用。就是说；抗癌药对每个显示快速分化或增殖的细胞(骨髓细胞，胃肠的表皮细胞，毛发滤泡细胞等)起作用，导致大多数患者将遭受副作用如骨髓抑制，胃肠疾病和脱发等。然而，抗癌药具有抗癌的治疗作用是因为肿瘤细胞比正常细胞反应更敏感，使得比正常细胞更多的肿瘤细胞被杀死，另外，正常细胞比肿瘤细胞再生更快。同时，除了抗癌作用，那些抗癌药还有抗免疫作用。因此，将其提供给需要器官移植的患者是抗癌药的另一个应用，其目的是为了在移植后消除排斥症状。但是因为那些药物降低免疫性对于癌症患者而言必须考虑到感染的危险。
到目前为止已经广泛使用了大约50种抗癌药。按照它们的反应机理和成分将这些药物分类。在它们之中，已知亚德里亚霉素，通常称为阿霉素，对于恶性淋巴瘤，急性骨髓性白血病，软组织骨肉瘤，乳腺癌，卵巢癌，肺癌，支气管癌，膀胱癌，消化系统癌症等的治疗高度有效。尽管它是一种非常有效的抗癌药，它还是表现出这样的副作用，如严重的骨髓抑制，心脏和肾机能减退和从血管至组织中的血液外流(N.Eng.J.Med.，1981，305，139)。
由于抗癌药物的毒副作用导致癌症化学治疗是非常受限制的。如上述解释，副作用产生于在化学治疗中抗癌药缺乏针对肿瘤细胞的有效选择性的事实。为了抑制抗癌药对正常细胞的毒副作用并提高它们对恶性肿瘤细胞的功效，已经进行了许多研究。优选的方法是使用胶束或微球作为抗癌药的载体并且将抗癌药物与聚合物载体偶联。
已经使用胶束或微球作为抗癌药的载体以减小癌症治疗的副作用。通过将抗癌药物理装载于胶束或微球之中，可以控制药物的释放速率，其取决于药物载体的物理化学性质。当抗癌药是单独给药时，它在一个短时期内以一个很大的量起作用，这导致副作用。通过在密封于胶束或微球之中的条件下使得抗癌药缓慢释放，可能减小那些副作用(Pharm.Res.，1983，15，1844)。
可生物降解的聚合物载体与抗癌药的化学偶联是另一种有前途的用于癌症治疗的策略。如先前讨论，副作用产生于在目前的癌症化学治疗中使用的抗癌药缺乏针对肿瘤细胞的有效选择性的事实。因此，作为一种有前途的、抑制抗癌药对正常细胞的副作用并提高它们对肿瘤细胞的功效的方法，已经进行了将抗癌药与聚合物载体偶联的研究。这种方法预期的有利特征是由聚合物载体的特性赋予的优选的药物组织分布，在血浆中延长的药物半衰期，以及通过调节药物和载体之间的键的化学性质而控制药物从聚合物载体的释放。
已经研究了作为抗癌药物载体的几种类型的聚合物，天然存在的和合成的聚合物。在天然存在的聚合物中，将免疫球蛋白最广泛地作为药物载体使用，这是因为它们对多种类型肿瘤细胞的高度特异性和广泛的适用性。然而，免疫球蛋白作为聚合物载体的用途受它的化学和物理性质所限制。例如，由于药物的疏水性，抗癌药对免疫球蛋白的修饰经常导致在生理条件下的沉淀。另外，为了避免免疫球蛋白的变性，将修饰方法限制于在温和条件下进行的几种。
最近，使用如今可利用的多种类型的合成聚合物可以设计药物的聚合物载体，并且可以利用多种有机反应将药物引入到合成聚合物载体。从这个观点，已经研究了几种类型的合成聚合物，如聚(N-2-(羟丙基)甲基丙烯酰胺)，聚(二乙烯基醚-共-马来酐)，聚(苯乙烯-共-马来酐)，葡聚糖，聚(乙二醇)，聚(L-谷氨酸)，聚(天冬氨酸)和聚(L-赖氨酸)。
基于肿瘤组织的病理生理学特征，抗癌药-聚合物复合体赋予了一种治疗癌症的潜能。已知在肿瘤组织中，为了为肿瘤细胞的分化和增殖获得足够的营养，产生比在正常细胞中更多的血管。那些在肿瘤中的血管被认为具有带有大孔的缺损结构，其允许聚合物载体容易地穿过。另外，通过围绕癌症组织的淋巴导管的排泄也被认为与通过正常组织相比是受限制的。因此，聚合物容易地渗透于肿瘤组织之中但几乎不从肿瘤组织中排出。将这种在肿瘤组织中显示的特殊现象称为增强的通透和滞留(EPR)效应(Adv.Drug Deliv.Rev.，2000，65，271)。作为使用抗癌药-聚合物复合体治疗的其中之一，使用N-(羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)-抗癌药复合体的尝试处于II期临床试验之中(美国专利5,037,883(1991))。
未结合的药物是一种小分子，与其相比，预计形成自聚集体的抗癌药-聚合物复合体具有一个大的直径。具有理想直径的聚合物药物预期能够在血流中循环而不会在毛细血管中形成栓塞，以避免在肾中的分泌，并通过血管渗透于靶细胞之中。并且期望该自聚集体形式通过利用聚合物隐蔽偶联的药物保护偶联药物在血浆中不受酶的攻击。
壳多糖，脱乙酰壳多糖的一种前体，是一种含有(1→4)-β-糖苷键的天然聚合物，其中N-乙酰基-D-葡萄糖胺单元是重复的，其通常在包括无脊椎动物甲壳纲(Crustacea)的昆虫的外壳中和真菌的细胞壁中被发现。脱乙酰壳多糖是一种通过使用高浓度的碱处理壳多糖的N-脱乙酰作用产生的碱性多糖。已经知道脱乙酰壳多糖在细胞吸附力，生物适合性，生物降解力和可塑性方面优于其它合成的聚合物。
因此，本发明人已经合成了一种新型抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体，其形成自聚集体并允许抗癌药物的物理装载。通过证实抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体能够缓慢而持续的释放药物而完成本发明。另外，通过改变复合体中的药物含量可以控制药物的释放模式，导致对肿瘤组织的高选择性。
发明概述
本发明的一个目标是提供一种形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体及其制备方法，该复合体通过长时间持续地释放药物，增强对肿瘤组织的特异性和提高抗癌药的含量，可以有效地应用于癌症的化学治疗。
附图简述
参考附图可最好地理解本发明的优选实施方案的应用，其中：
图1是显示通过光散射测量在水溶液中本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的平均直径和大小分布的图表；
图2是一组本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的透射电子显微镜相片；
A：5 X 104放大倍数(条：200nm)，
B：1 X 106放大倍数(条：50nm)
图3是一张显示按照pH从本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体中阿霉素的不同释放水平的图表。
○：pH4，  ●：pH7
优选实施方案详细描述
本发明提供一种形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体。
本发明还提供一种上述抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法。
以下，详细描述本发明。
本发明提供一种形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体。
在本发明优选的实施方案中，每一种具有103-106MW的脱乙酰壳多糖都能够作为一种抗癌药物的载体使用，并且优选具有高生物降解力和生物适合性的可溶的脱乙酰壳多糖。尤其更优选通过引入乙二醇基团而具有增强的溶解度的乙二醇脱乙酰壳多糖。而且，大多数疏水的抗癌药可以用于本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体，并且特别优选阿霉素。本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的优选尺寸为1nm-2,000nm。尤其更优选10nm-80nm。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体可能包括在酸性条件下可断开的接头。作为一种接头，可使用顺乌头酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐，寡肽和苯甲酰腙，并且尤其优选pH-敏感的顺乌头酸酐(Biochem.Biophys.Res.Comm.，1981，102，1048)。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体在水性介质中形成类似胶束的，圆形的自聚集体，这是由于由抗癌药物的疏水性和脱乙酰壳多糖的亲水性导致的复合体的两亲性的原因。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的大小按照包含的抗癌药的数量而变化，其中包含的抗癌药的可能数量为1-70重量％。
本发明人将上述抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体作为一种抗癌药物载体使用，其里面有效地包含药物。在本发明优选的实施方案中，每种类型的疏水抗癌药都可以作为一种抗癌药使用。尤其更优选阿霉素，紫杉醇，顺铂，丝裂霉素-C，道诺霉素和5-氟尿嘧啶。内部含有抗癌药物的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的优选直径为1nm-2,000nm，并且更优选10nm-800nm。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的内部是由疏水的抗癌药组成的，并且尤其是抗癌药的一些亲水部分与脱乙酰壳多糖结合，这导致复合体内部强烈的疏水性。因此，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体提供将疏水抗癌药装载至复合体内部的容易路径，并且能够增加装载药物的数量。任一种相同的抗癌药既可以用于组成抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体，又可以将其插入复合体内部。同样，可以将多种不同种类的抗癌药一起插入到抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体之中。由于在抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体组成材料和其中插入的抗癌药的性质之间的相似性，该复合体作为一个载体具有比其它任何载体更大的作用。
由于增强的通透和滞留(EPR)效应，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体具有对肿瘤组织的高度选择性，所以与小分子量抗癌药物相比较，它可以在肿瘤组织中更大数量地积累以有效地对靶细胞起作用。同样，复合体在水性介质中还形成类似胶束的、圆形的自聚集体，这是由与亲水的脱乙酰壳多糖，主链，结合的疏水抗癌药引起的。通常，胶束是一种圆形的聚集体，其是由既具有疏水基团又具有亲水基团的分子在水性介质中形成。在这个时候，亲水基团在形成的聚集体外表聚集，疏水基团在内部聚集(Adv.Drug Deliv.Rev.，1996，21，107)。作为一种多种疏水抗癌药物的载体已经广泛使用该聚集体。这种类型的药物传递系统使用形成自聚集体的两性聚合物，显示出对靶细胞的高度选择性和显著减小的对正常细胞的细胞毒性。另外，该系统使得药物保持足够长的时间并且缓慢地和连续地释放药物，导致有效用于严重疾病如癌症的治疗。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体是一种抗癌药物载体，其具有对肿瘤组织的高度选择性，胶束的多种优点和连续释放药物的能力。因此，可以将本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体用作具有强抗癌作用的抗癌药。
本发明还提供上述抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的一种制备方法。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法包括下列步骤：
(1)将疏水抗癌药物与以在酸性条件下断开为特征的接头连接；以及
(2)将抗癌药和接头的复合体与亲水的脱乙酰壳多糖结合。
在本发明的优选实施方案中，将阿霉素作为疏水抗癌药使用。作为一种接头，可以使用顺乌头酸酐，戊二酸酐，琥珀酸酐，寡肽和苯甲酰腙，并且尤其优选pH-敏感的顺乌头酸酐(Biochem.Biophys.Res.Comm.，1981，102，1048)。
顺乌头酸酐是一种用于结合抗癌药和脱乙酰壳多糖的接头，其在酸性pH条件下断开并释放抗癌药。肿瘤组织显示比正常组织更低的pH值。因此，该pH-敏感的顺乌头酸酐可以提高抗癌药对肿瘤组织的选择性，并且减轻已经是抗癌药物最大问题的对正常组织的细胞毒性。
作为一种疏水的脱乙酰壳多糖，优选乙二醇脱乙酰壳多糖，其中引入了乙二醇基团。
可以通过直接将抗癌药与脱乙酰壳多糖结合或使用一种接头将抗癌药与脱乙酰壳多糖连接来制备本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体；优选后者。
本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法包括将抗癌药装载至形成自聚集体的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体内部的方法。
阿霉素，紫杉醇，顺铂，丝裂霉素-C，道诺霉素和5-氟尿嘧啶是装载于抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体内部的抗癌药的实例。通过化学成键的装载被限制在10％(基于抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体的总重量)；然而，通过物理装载，抗癌药物的装载量可以提高到60％，导致超过化学成键的界限的抗癌药含量的增加。
实施例
如在下列实施例中所示，本发明实用的和目前优选的实施方案是例证性的。
然而，应当理解那些本领域的技术人员，考虑到这个公开内容，可以在本发明的精神和范围内进行修改和改进。
实施例1：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体1
<1-1>制备顺乌头阿霉素
为了制备顺乌头阿霉素，本发明人将13.46mg顺乌头酸酐(化学式1)溶解于0.5ml二噁烷中，然后将10mg阿霉素(化学式2)溶解于350μl吡啶中。在那以后，本发明人将顺乌头溶液加入阿霉素溶液之中并让其于4℃反应24小时。
<化学式1>
<化学式2>
Figure C02808392D00111
将上述反应混合物分散至5ml氯仿和5％的NaHCO3溶液中，并剧烈搅拌。然后，去除底部的氯仿层并用乙酸乙酯萃取剩下的溶液，之后将溶剂蒸发，产生顺乌头阿霉素制剂。反应过程在<反应式1>中总结。
<反应式1>
Figure C02808392D00112
<1-2>脱乙酰壳多糖复合体的制备
将乙二醇脱乙酰壳多糖以1重量％的浓度溶解在10ml水中，然后向其中加入10ml甲醇。将3mg顺乌头阿霉素溶解在1ml DMF中，将其缓慢加载至乙二醇脱乙酰壳多糖溶液之中。将7mg1-乙基-3-(3-二甲基-氨丙基)碳二亚胺(EDC)和5mg N-氢琥珀酰亚胺(NHS)溶解在1ml的甲醇中，将其加至反应混合物之中并室温搅拌24小时。将反应混合物透析2天以除去未反应的顺乌头阿霉素，然后将其冷冻干燥，产生本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体制剂(图1和图2)。上面的反应过程在<反应式2>中总结。
<反应式2>
Figure C02808392D00113
实施例2：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体2
在顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖的反应过程中，将2mg顺乌头阿霉素溶解于1ml的DMF中，将其缓慢加载至乙二醇脱乙酰壳多糖溶液之中。在那以后，将4.6mg EDC和3.3mg NHS溶解于1ml甲醇之中，将其加入上述反应混合物之中。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例3：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体3
在顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖的反应过程中，将1mg顺乌头阿霉素溶解于1ml的DMF中，将其缓慢加载至乙二醇脱乙酰壳多糖溶液之中。在那以后，将2.3mg EDC和1.7mg NHS溶解于1ml甲醇之中，将其加入上述反应混合物之中。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例4：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体4
在顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖的反应过程中，将4mg顺乌头阿霉素溶解于1ml的DMF中，将其缓慢加载至乙二醇脱乙酰壳多糖溶液之中。在那以后，将9.3mg EDC和6.7mg NHS溶解于1ml甲醇之中，将其加入上述反应混合物之中。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例5：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体5
在顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖的反应过程中，将5mg顺乌头阿霉素溶解于1ml的DMF中，将其缓慢加载至乙二醇脱乙酰壳多糖溶液之中。在那以后，将11.7mg EDC和8.3mg NHS溶解于1ml甲醇之中，将其加入上面的反应混合物之中。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
如在上面实施例1-实施例5中所示，包含在阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体中的阿霉素的数量取决于顺乌头阿霉素的数量。
实施例6：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体6
让顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖反应6小时。同样，剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例7：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体7
让顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖反应12小时。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例8：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体8
让顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖反应18小时。同样，剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例9：制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体9
让顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖反应48小时。剩余的过程实施与上面<1-2>相同的方法以制备本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
如在上面实施例6-实施例9中所示，包含在阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体之中的阿霉素的数量取决于顺乌头阿霉素与乙二醇脱乙酰壳多糖的反应时间。
实施例10：制备形成其中含有阿霉素的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体1
为了制备形成内部包含阿霉素的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，本发明人将1mg阿霉素溶解于1ml氯仿溶液中，然后向其中加入三乙胺。将5mg本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体溶解于10ml水中，然后将上述阿霉素溶液缓慢装载至其中，接着搅拌24小时。在此时，将容器打开并接触空气以蒸发加入的氯仿。24小时后，用分子量截止(MWCO)1000的过滤器对每种溶液进行超滤，以消除没有渗透进入阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体内部的剩余的阿霉素。将在过滤器上收集的材料再次溶解于需要量的水中，然后冷冻干燥，产生内部含有阿霉素的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体(表1)。在表1中，装载效果用％表示阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体之中装载的阿霉素的实际数量。
<表1>
 
阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体/水(mg/ml) 阿霉素(mg) 装载量(重量/重量％) 装载效果(％)
5mg/10ml 1mg 18.9重量％ 94.33％
5mg/10ml 2mg 38.9重量％ 97.23％
实施例11：制备形成其中含有阿霉素的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体2
本发明人将1mg阿霉素溶解于1ml氯仿溶液中。并且，剩余的过程实施与上述实施例10相同的方法以制备形成其中含有阿霉素的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体(表1)。
实施例12：制备形成其中含有紫杉醇的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体1
将1mg紫杉醇溶解于1ml DMF中以制备内部包含紫杉醇的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。将5mg本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体溶解于10ml水中，然后将上述紫杉醇溶液缓慢加载于其中，接着搅拌24小时。24小时后，用MWCO 3500的膜对每种溶液进行2天的透析，以消除没有渗透入阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体内部的剩余的紫杉醇。在透析后，将溶液冷冻干燥，产生内部含有紫杉醇的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实施例13：制备形成其中含有紫杉醇的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体2
本发明人将2mg紫衫醇溶解于1ml DMF中。并且，剩余的过程实施与上述实施例12相同的方法以制备形成其中含有紫杉醇的自聚集体的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体。
实验实施例1：按照pH值从阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体释放的阿霉素的测量
本发明人已经观察到按照pH值从本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体释放的阿霉素水平。具体地，将阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体分散于水中直至浓度达到2mg/ml，然后将500μl阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体溶液包裹于纤维素透析膜(MWCO 12,000-14,000)中。分别在pH4的水和pH7的水中将它浸泡之后，本发明人在37℃下将其150rpm搅拌，按照时间表获得释放溶液以利用分光光度计测量释放的阿霉素的量。
结果，如图3所示，在pH4和pH7的两种情形下释放的阿霉素的数量都随时间进行逐渐增大。但是当浸泡在pH4的水溶液中时，相比较而言本发明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体释放多得多的阿霉素，暗示通过对通常显示酸性条件的肿瘤生长区域适当地释放阿霉素，阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体可以有效地用于癌症治疗。
工业实用性
如上所示，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体通过形成自聚集体具有延长的药物释放时间，增强的对肿瘤组织的选择性，并且通过将抗癌药物理加入到自聚集体内部增加药量。因此，本发明的抗癌药-脱乙酰壳多糖复合体可以有效地用于癌症化学疗法。
那些本领域的技术人员将认识到可以容易地利用在前述中公开的概念和具体的实施方案作为一个基础来修饰或设计其它实现本发明相同目的的实施方案。那些本领域的技术人员还将认识到，这样同等的实施方案不脱离在后附的权利要求中阐明的本发明的精神和范围。

Claims (17)

1.一种阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其包含一种与一种亲水脱乙酰壳多糖化学键合的阿霉素，并且在水性介质中形成自聚集体。
2.如权利要求1所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述阿霉素的含量为1-70重量％。
3.如权利要求1所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述的亲水脱乙酰壳多糖为乙二醇脱乙酰壳多糖。
4.如权利要求1所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述脱乙酰壳多糖的平均分子量为103-106。
5.如权利要求1所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述复合体另外包括一种在酸性条件中分解的接头。
6.如权利要求5所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述接头选自顺乌头酸酐，苯甲酰腙，戊二酸酐，琥珀酸酐和寡肽。
7.如权利要求1所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中所述复合体的直径为10-800nm。
8.如权利要求1，2-7中任何一项所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中进一步将疏水抗癌药通过物理装载包含于复合体内部。
9.如权利要求8所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体，其中通过物理装载进一步包含于所述复合体内部的疏水抗癌药选自阿霉素，紫杉醇，顺铂，道诺霉素和5-氟尿嘧啶。
10.一种阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，包括下列步骤：
(1)将阿霉素与以在酸性条件下断开为特征的接头化学结合；以及
(2)将阿霉素和接头的复合体与亲水脱乙酰壳多糖化学结合。
11.如权利要求10所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中所述阿霉素的含量是1-70重量％。
12.如权利要求10所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中所述疏水脱乙酰壳多糖是乙二醇脱乙酰壳多糖。
13.如权利要求10所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中所述脱乙酰壳多糖的平均分子量为103-106。
14.如权利要求10所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中所述接头选自顺乌头酸酐，苯甲酰腙，戊二酸酐，琥珀酸酐和寡肽。
15.如权利要求10所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中所述复合体的直径为10-800nm。
16.如在权利要求10，11-15中任何一项所阐明的制备阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的方法，其中进一步包括将疏水抗癌药物理装载于所述复合体内部的步骤。
17.如权利要求16所阐明的阿霉素-脱乙酰壳多糖复合体的制备方法，其中通过物理装载进一步包含于所述复合体内部的所述疏水抗癌药选自阿霉素，紫杉醇，顺铂，道诺霉素和5-氟尿嘧啶。
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