CN100456948C - 一种燕麦肽及其提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种燕麦肽及其提取方法。本发明所提供的燕麦肽，分子量为1000-3000Da，是从燕麦麸皮中采用酶法降解提取得到的。本发明所提供的提取燕麦肽的方法，包括如下步骤：1)预处理；2)酶处理；3)过滤与膜处理，得到燕麦肽。本发明应用酶法降解燕麦蛋白成为燕麦肽，通过过滤、超滤等手段将其分离，所得燕麦肽分子量在1000-3000Da，更加利于吸收；所得燕麦肽具有抑制皮肤胶原蛋白分解酶的活性，并能提升皮肤胶原蛋白含量，可以广泛应用于食品、化妆品等领域。本发明方法操作简单，提取率高，能达到75%；产物纯度高达90%。
Description
技术领域
本发明涉及一种生物活性肽及其提取方法，特别是涉及燕麦肽及其提取方法。
背景技术
生物活性肽(Bioactive peptides)是指对生物机体的生命活动有裨益或具有特殊生理活性的一大类肽。由生物体自身的组织或器官产生的，对其本身有生理调节作用的肽类称内源性生物活性肽；而非机体自身产生的，以肽的形式被吸收后具有生物活性的肽类物质则称为外源性生物活性肽(Exogenous Origin BiologicalActivePeptides)。
植物蛋白以其不可替代的优点成为人们研究活性肽的主要来源。燕麦，禾本科燕麦族燕麦属，一年生或多年生草本植物。燕麦营养价值丰富而全面，其蛋白质、脂肪、维生素E、膳食纤维以及钙、镁、铁、磷等矿物元素含量均高于其它谷类作物，具有降血脂、降低胆固醇、降血压、降血糖和抗氧化性等多种生功能。
发明内容
本发明的目的是提供一种燕麦肽及其提取方法。
本发明所提供的燕麦肽，分子量为1000-3000Da，是从燕麦麸皮中采用酶法降解提取得到的。
本发明所提供的提取燕麦肽的方法，包括如下步骤：
1)预处理：将燕麦麸皮加水，调节pH到8-10，在45-55℃加热处理；
2)酶处理：在经过预处理后的液体中加入碱性蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；然后，加入木瓜蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；
3)过滤与膜处理：将经过酶处理的液体过滤，然后，以截留分子量为30000-50000Da的超滤膜超滤，然后以600-800Da的纳滤膜纳滤去除所含盐并浓缩，得到燕麦肽。
其中，步骤1)燕麦麸皮∶水的重量比为1∶10-20。步骤1)处理时间为2-4小时。
步骤2)所述碱性蛋白酶活力单位为50-200万U/g，用量为3-5g碱性蛋白酶/100g燕麦麸皮。步骤2)所述木瓜蛋白酶的活力单位为50-200万U/克，用量为1-3g木瓜蛋白酶/100g燕麦麸皮。
步骤3)所述过滤采用板框过滤机过滤。板框过滤机过滤中还加有硅藻土作为助滤剂。
本发明应用酶法降解燕麦蛋白成为燕麦肽，通过过滤、超滤等手段将其分离，所得燕麦肽分子量在1000-3000Da，更加利于吸收；所得燕麦肽具有抑制皮肤胶原蛋白分解酶的活性，并能提升皮肤胶原蛋白含量，可以广泛应用于食品、化妆品等领域。本发明方法操作简单，提取率高，能达到75％；产物纯度高达90％。
附图说明
图1为本发明提取燕麦肽的工艺流程图；
图2为燕麦肽对MMP-1的抑制作用；
图3A、图3B分别为大鼠皮肤中胶原I和胶原III含量图。
具体实施方式
实施例1、燕麦肽的制备
提取燕麦肽的工艺流程图如图1所示，具体步骤如下：
1、燕麦麸皮处理：
为了更多获得燕麦肽，燕麦麸皮选用20目到60目之间的成分，凯氏定氮法测定其中蛋白含量可达20％。
2、预处理：
将燕麦麸皮与去离子水按重量比1∶10混合，调pH值到8-10左右，加热到45-55℃，均匀搅拌2-4小时。
3、酶处理：
预处理后测定液体pH值，约8.0-8.5，加入碱性蛋白酶，其活力单位为100万U/g，用量为5g碱性蛋白酶/100g燕麦麸皮，在45-55℃温度下继续搅拌加温2小时；然后加入木瓜蛋白酶，其活力单位100万U/克，用量1g木瓜蛋白酶/100g燕麦麸皮，55℃继续搅拌加温1小时。
4、利用板框过滤机过滤，加入硅藻土助滤，得到棕色澄清液体。
5、以截留分子量为50000Da的超滤膜超滤，去除大分子糖类，取滤出液体。
6、截留分子量为800Da的纳滤膜纳滤去除所含盐并浓缩，得到燕麦肽。
所得燕麦肽是一种混合肽，其分子量为1000-3000Da，产品纯度为90％，提取率为75％。
实施例2、燕麦肽的功能性实验
1、对于MMP-1(Matrix Metalloproteinase)的活性抑制作用
在试管内，测试实施例1所制备的燕麦肽对皮肤胶原蛋白分解酶MMP-1(MatrixMetalloproteinase)的活性抑制作用，结果如图2所示。结果表明，燕麦肽具有皮肤胶原蛋白分解酶的抑制活性，并且，这种抑制活性与浓度相关。
2、燕麦肽可增加大鼠皮肤胶原蛋白的含量
2.1实验动物
清洁级Wistar大鼠40只，雄性，体重220～240g，购自北京维通利华实验动物中心。
2.2仪器与试剂
北京市新技术应用研究所MB-酶标仪；胶原I、胶原III检测试剂盒购自北京环亚泰克生物医学技术有限公司。
2.3造模及给药方法
将大鼠随机分为正常组和燕麦肽组，每组8只，用宠物推分别在实验动物大鼠的脊背部两侧脱毛，脱毛范围3cm×3cm。
实验开始时，在背部两侧无毛区先用清水清洗，然后选取每只大鼠脊背两侧无毛区中间的皮肤，实验点约2cm×2cm，正常组除清水清洗外不做任何处理，燕麦肽组涂以等剂量的燕麦肽制剂，每日一次。涂药后7天取材。
2.4指标检测
处死大鼠后立即取实验动物涂抹部位皮肤，标记右侧2cm×2cm环行取皮，去掉脂肪后，精密秤取湿重，将皮肤用眼科小剪剪碎，按1∶10(1g皮肤组织加入10mL生理盐水)，移入玻璃匀浆器中，匀浆，匀浆过程中不断冷却，在4℃下10000rpm离心10min，取100μL匀浆上清液-20℃保存用于指标的测定。
胶原I含量测定：采用ELASA法测定皮肤中胶原I含量。
胶原III含量测定：采用ELASA法测定皮肤中胶原III含量。
结果如表1和表2以及图3A和图3B所示。
表1大鼠皮肤中胶原I含量的变化(x±s)
与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01
表2大鼠皮肤中胶原III含量的变化(x±s)
与正常组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01
结果表明，燕麦肽组大鼠皮肤的胶原I和胶原III含量明显高于正常组，并且差异显著，表明燕麦肽能提高皮肤表面胶原蛋白含量，可用于食品、化妆品等领域。
Claims (7)
1、一种提取燕麦肽的方法，包括如下步骤：
1)预处理：将燕麦麸皮加水，调节pH到8-10，在45-55℃加热处理；
2)酶处理：在经过预处理后的液体中加入碱性蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；然后，加入木瓜蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；
3)过滤与膜处理：将经过酶处理的液体过滤，然后，以截留分子量为30000-50000Da的超滤膜超滤，再以截留分子量为600-800Da的纳滤膜纳滤去除所含盐并浓缩，得到燕麦肽。
2、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)燕麦麸皮：水的重量比为1∶10-20。
3、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)处理时间为2-4小时。
4、根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：步骤2)所述碱性蛋白酶活力单位为50-200万U/g，用量为3-5g碱性蛋白酶/100g燕麦麸皮。
5、根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：步骤2)所述木瓜蛋白酶的活力单位为50-200万U/克，用量为1-3g木瓜蛋白酶/100g燕麦麸皮。
6、根据权利要求1或2或3所述的方法，其特征在于：步骤3)所述过滤采用板框过滤机过滤。
7、根据权利要求6所述的方法，其特征在于：板框过滤机过滤中还加有硅藻土作为助滤剂。
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