CN100351264C

CN100351264C - 抗病毒核苷衍生物

Info

Publication number: CN100351264C
Application number: CNB2003801036570A
Authority: CN
Inventors: 约瑟夫·阿姆斯壮·马丁; 凯沙布·萨尔马; 大卫·伯纳德·史密斯; 马克·史密斯
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: Lieb Sainz LLC
Priority date: 2002-11-19
Filing date: 2003-11-14
Publication date: 2007-11-28
Anticipated expiration: 2023-11-14
Also published as: GT200300246A; CN1714099A; ZA200503936B

Abstract

本发明涉及一种用于治疗丙型肝炎病毒感染的核苷衍生物，包括式I(I)的化合物，并且涉及包含这些化合物的药物组合物，以及在单独治疗或组合治疗中采用所述的化合物治疗或预防丙型肝炎病毒介导的疾病的方法。本发明还提供一种由N，1’，3’，4’-四酰基嘧啶核苷制备1’，3’，4’-三酰基嘧啶核苷的方法。

Description

抗病毒核苷衍生物

本发明涉及抗病毒治疗领域，特别是涉及用于治疗丙型肝炎病毒(HCV)介导的疾病的核苷衍生物。本发明提供一种新的化合物，包含这些化合物的药物组合物，在单独治疗或组合治疗中采用所述的化合物治疗或预防丙型肝炎病毒介导的疾病的方法。

本发明涉及作为HCV复制子RNA复制的抑制剂的核苷衍生物。具体而言，本发明涉及嘧啶核苷化合物作为亚基因组的HCV RNA复制的抑制剂的用途，和含有这样的化合物的药物组合物。

丙型肝炎病毒是全世界慢性肝病的主要原因。感染HCV的患者处于发展为肝硬化，继而肝细胞癌的危险，因而HCV是肝移植的主要指征。目前对于治疗HCV感染只有两种被批准的疗法是可用的(R.G.Gish，Sem.Liver.Dis.，1999 19：5)。它们是干扰素-α单独疗法和最近的核苷类似物：三氮唑核苷(病毒唑)与干扰素-α的组合疗法。

许多被批准的用于治疗病毒感染的药物是核苷或核苷类似物，这些核苷类似物药物的大部分在体内转变为相应的三磷酸酯。这些三磷酸酯抑制病毒聚合酶，其阻止病毒复制。成为三磷酸酯的转变通常是由细胞激酶介导的，因而通常使用基于细胞的试验仅是方便地进行作为HCV复制抑制剂的核苷的直接评估。对于HCV，缺乏真实的基于细胞的病毒复制试验或动物感染模型的有效性。

丙型肝炎病毒属于黄病毒科。它是RNA病毒，RNA基因组编码多蛋白，在加工后产生必须的复制工具，以确保后代RNA的合成。认为在RNA复制中包括大部分由HCV RNA基因组编码的非结构蛋白。

Lohmann等[V.Lohmann等，Science，1999，285：110-113]描述了人肝细胞瘤(Huh7)细胞系的构建，其中已经引入了亚基因组的HCV RNA分子，并且显示高效地复制。认为在这些细胞系中的RNA复制机理与在感染的肝细胞中的全长HCV RNA基因组的复制是相同的。用于分离这些细胞系的亚基因组HCV cDNA克隆已形成开发用于识别HCV复制的核苷类似物抑制剂的基于细胞试验的基础。

于2002年6月11日提交的，标题为“4’-Substituted NucleosideDerivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication”的美国申请序列号10/167,106公开了本发明涉及的化合物。

核苷衍生物通常具有高水平的生物活性；但是，它们的实际效用通常受限于次优的物理性质和差的药物代谢动力学。本发明涉及具有改善的物理化学和药物代谢性质的4’-取代的核苷的化学衍生物。这些衍生物更有效地渗透肠粘膜，因而在细胞质，血液或血清中存在的各种酶将这些衍生物转变为非衍生的核苷。这些“原核苷(pronucleotides)”可以改善诸如亲代核苷的活性，生物可利用性或稳定性之类的性能。对受到HCV感染的哺乳动物给药式I的化合物抑制在肝细胞瘤细胞系中的亚基因组HCV的复制：

其中：

R¹和R²独立地选自氢，COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵，C(＝O)NHR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；

R³和R⁴独立地选自氢，COR⁵，CO₂R⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，或结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；

R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，C_1-18直链或支链链烯基，C_1-18直链或支链炔基，C_1-18低级卤代烷基，C_3-8环烷基，烷基取代的C_3-8环烷基，任选独立地被一至三个选自卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，硝基和氰基中的取代基取代的苯基，其中苯环如上所述被任选取代的CH₂Ph，和其中苯环如上所述被任选取代的CH₂OPh；

R⁶选自天然氨基酸的侧链和C_1-5直链或支链烷基；且

R⁷选自氢，R⁵OCO；及

其水合物，溶剂合物，包合物和酸加成盐；

前提条件是R¹，R²，R³或R⁴的至少一个不是氢。

本发明提供式I的化合物单独或与免疫系统调节剂，抗病毒剂或消炎剂组合用于治疗由丙型肝炎病毒介导的疾病的有用药剂。

本发明还提供通过给药式I的化合物而治疗由丙型肝炎病毒介导的疾病的方法。该化合物可以单独或与免疫系统调节剂，抗病毒剂或消炎剂组合给药。本发明还包括通过给药治疗有效量的式I化合物而治疗由丙型肝炎病毒介导的疾病的组合物。

本发明的化合物是前药或母体核苷的生物前体，并且在体内转变为式I的化合物，其中R¹，R²，R³和R⁴是氢。前药包括酰基衍生物，氨基酸酯，烷氧羰基，芳氧羰基，烷硫基羰基和芳硫基羰基核苷或其药用盐。

本发明的一个实施方案是根据式I的核苷衍生物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团，前提条件是R¹，R²，R³或R⁴中的至少一个不是氢。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³和R⁴各自独立地是COR⁵，C(＝O)OR⁵或C(＝O)SR⁵，且每个R⁵独立地选自C_1-18直链或支链低级烷基，苯基和CH₂OPh。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³和R⁴是COR⁵，且每个R⁵独立地选自C_1-18直链或支链低级烷基，苯基和CH₂OPh。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹是COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵或COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴是氢；并且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹是COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵或COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴是氢；R⁵选自C_1-18直链或支链低级烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和天然氨基酸的侧链，且R⁷如上所定义。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；R⁵选自C_1-18直链或支链烷基，C_3-8环烷基和苯基，或R⁶是C_1-5直链或支链烷基或天然氨基酸的侧链，且R⁷如上所定义。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R²是COCH(R⁶)NH₂，R¹，R³，R⁴和R⁷是氢；且R⁶选自C_1-5直链或支链烷基或CH₂Ph。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹和R²独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R³和R⁴是氢；且R⁵和/或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹是氢；R²，R³和R⁴选自COR⁵，C(＝O)OR⁵或C(＝O)SR⁵；且R⁵独立地选自如上所定义的基团。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹是氢；R²是COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵或COCH(R⁶)NHR⁷；结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；且R⁵或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹和R²是氢；R³和R⁴独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；且R⁵或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明的另一个实施方案中，提供根据式I的化合物，其中R¹和R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，且结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R⁷是氢或C(＝O)OR⁵；且R⁵和/或R⁶独立地选自如上所定义的基团。

本发明的另一个实施方案提供根据式I的化合物，其中R¹和R²选自氢，COR⁵，C(＝O)OR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R³和R⁴相互独立地选自氢，COR⁵，CO₂R⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，或结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R⁵独立地选自C_1-6直链或支链烷基，C_1-6直链或支链链烯基，C_1-6直链或支链炔基，C_1-6低级卤代烷基，C_3-8环烷基，烷基取代的C_3-8环烷基，任选独立地被一至三个选自卤素，低级烷基，低级烷氧基，低级烷硫基，低级烷基亚磺酰基，低级烷基磺酰基，硝基和氰基的取代基取代的苯基，其中苯环如上所述被任选取代的CH₂Ph，和其中苯环如上所述被任选取代的CH₂OPh；R⁶和R⁷如上所定义，前提条件是R¹，R²，R³或R⁴中的至少一个不是氢。

根据本发明，根据式I的核苷衍生物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³或R⁴各自独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵和C(＝O)SR⁵且R⁵独立地选自如上所定义的基团，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³或R⁴各自为COR⁵且各R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，苯基和CH₂OPh，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹选自COR⁵，CO₂R⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴各自为氢；且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴各自为氢；R⁵选自C_1-18直链或支链低级烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和天然氨基酸的侧链且R⁷是氢，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，CO₂R⁵，和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；R⁵选自C_1-18直链或支链烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶是C_1-5直链或支链烷基或天然氨基酸的侧链且R⁷是氢，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R²是COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和CH₂Ph且R⁷是氢，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R³和R⁴是氢；且R¹，R²，R⁵，R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹是氢；R²，R³和R⁴独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵和C(＝O)SR⁵且每个R⁵独立地选自如上所定义的基团，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹是氢；结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R²，R⁵或R⁶和R⁷如上所定义，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹和R²是氢；R³，R⁴，R⁵和/或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R¹，R²，R⁵和/或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹至R⁷如上所定义，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种免疫系统调节剂和/或抑制HCV复制的抗病毒剂结合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种免疫系统调节剂结合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子，集落刺激因子或消炎剂组合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素组合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素-α或化学衍生的干扰素组合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种抗病毒剂组合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

根据本发明，根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种HCV蛋白酶抑制剂，HCV聚合酶抑制剂，HCV解旋酶抑制剂，HCV引发酶抑制剂，HCV整合酶抑制剂或HCV融合抑制剂组合，在控制由HCV介导的疾病方面是有用的药剂。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的核苷衍生物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³或R⁴各自独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵和C(＝O)SR⁵且R⁵独立地选自如上所定义的基团。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³或R⁴各自为COR⁵且每个R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，苯基和CH₂OPh。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹选自COR⁵，CO₂R⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴各自为氢；且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R²，R³和R⁴各自为氢；R⁵选自C_1-8直链或支链低级烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和天然氨基酸的侧链且R⁷是氢。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；且R⁵或R⁶和R⁷如上所定义。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R²选自COR⁵，CO₂R⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；R⁵选自C_1-18直链或支链烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶是C_1-5直链或支链烷基或天然氨基酸的侧链且R⁷是氢。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R²是COCH(R⁶)NHR⁷；R¹，R³和R⁴是氢；R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和CH₂Ph且R⁷是氢。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R³和R⁴是氢；且R¹，R²，R⁵，R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹是氢；R²，R³和R⁴独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵和C(＝O)SR⁵且每个R⁵独立地选自如上所定义的基团。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹是氢；结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R²，R⁵或R⁶和R⁷如上所定义。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹和R²是氢；R³，R⁴，R⁵和/或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R¹，R²，R⁵和/或R⁶和R⁷独立地选自如上所定义的基团。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，剂量为1至100mg/kg体重/天。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的人给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹至R⁷如上所定义。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种免疫系统调节剂和/或抑制HCV复制的抗病毒剂结合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种免疫系统调节剂结合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子，集落刺激因子或消炎剂组合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素组合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与干扰素-α或化学衍生的干扰素组合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种抗病毒剂组合。

在本发明另一个实施方案中，提供治疗由HCV介导的疾病的方法，该方法包含对需要这种治疗的哺乳动物给药治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与至少一种HCV蛋白酶抑制剂，HCV聚合酶抑制剂，HCV解旋酶抑制剂，HCV引发酶抑制剂，HCV整合酶抑制剂或HCV融合抑制剂组合。

在本发明另一个实施方案中，提供一种药物组合物，其包含治疗有效量的根据式I的化合物，其中R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，R⁶和R⁷如上所定义，与一种或多种药用载体，稀释剂或赋形剂组合，前提条件是R¹，R²，R³或R⁴中的至少一个不是氢。

在本发明另一个实施方案中，提供一种将N-酰基胞嘧啶核苷化合物IVa通过从IVa选择性断裂N-酰基部分而转化为胞嘧啶核苷化合物IVb的方法，

其中R²，R³，R⁴和R⁵如上所定义，所述方法包含：使所述的N-酰基嘧啶核苷的溶液与在质子溶剂R^aOH中的ZnBr₂接触，其中R^a是氢或C_1-4烷基。

在本发明另一个实施方案中，提供一种将IVa转化为IVb的方法，其中R²，R³，R⁴和R⁵如上所定义，所述方法包含：使所述的N-酰基嘧啶核苷的溶液与在甲醇中的ZnBr₂以及与任选的非质子有机溶剂接触。

此处所用的措词“a”或“an”实体是指一种或多种该实体；例如，化合物是指一种或多种化合物或至少一种化合物。因而，术语“a”(或“an”)，“一个或多个”和“至少一个”在其中可以互换地使用。

短语“如上所定义”是指如在式I的定义中所提供的对每个基团的第一次定义。

此处所用的术语“任选”或“任选地”是指一种描述的活动或情形可以发生或可以不发生，并且说明书包括其中所述的活动或情形发生的情况和其中它不发生的情况。例如，“任选取代的苯基”是指苯基可以被或可以不被取代且说明书包括未取代的苯基和其中存在取代的苯基。

本发明的化合物可具有位于羧酸酯，酰胺或碳酸酯部分的侧链上的不对称中心，其当与核苷连接时产生非对映异构体。可预期本发明化合物的侧链上的所有立体异构体，或为混合物的形式或为纯的形式，或为基本上纯的形式。根据本发明的化合物的定义包括所有可能的立体异构体和它们的混合物。它还包括外消旋形式以及离析的光学异构体。外消旋形式可以通过物理方法例如非对映异构体衍生物的分步结晶，分离或结晶或者通过手性柱色谱的分离来解析。个别的光学异构体可以由外消旋化合物通过常规方法如与光学活性的酸成盐，接着结晶来获得。

可预期本发明的化合物的所有结构异构体，或以混合物的形式或以基本上纯的形式。本发明的化合物的定义包括环烷基环的顺式和反式异构体。

此处所用的术语“烷基”表示含有1至18个碳原子的直链或支链烃残基。优选的烷基是含有1至12个碳原子的直链或支链烃残基。术语“低级烷基”表示含有1至6个碳原子的直链或支链烃残基。代表性的低级烷基包括甲基，乙基，丙基，异丙基，正丁基，异丁基，叔丁基或戊基。

此处所用的术语“卤代烷基”表示其中1，2，3或更多个氢原子被卤素取代的如上所定义的直链或支链烷基。实例包括：1-氟甲基，1-氯甲基，1-溴甲基，1-碘甲基，三氟甲基，三氯甲基，三溴甲基，三碘甲基，1-氟乙基，1-氯乙基，1-溴乙基，1-碘乙基，2-氟乙基，2-氯乙基，2-溴乙基，2-碘乙基，2，2-二氯乙基，3-溴丙基或2，2，2-三氟乙基。

此处所用的术语“环烷基”表示含有3至8个碳原子的饱和碳环，即环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环庚基或环辛基。

此处所用的术语“链烯基”表示含有2至18个碳原子，优选2至7个碳原子且特别优选2至4个碳原子且含有1至2个烯式双键，优选1个烯式双键的未取代[或取代的]烃链自由基。实例是乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基(烯丙基)或2-丁烯基(巴豆基)。

此处所用的术语“炔基”表示含有2至18个碳原子，优选2至7个碳原子且特别优选2至4个碳原子且含有1个或可能时2个叁键[，优选1个叁键]的未取代烃链自由基。实例是乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基或3-丁炔基。

此处所用的术语“烷氧基”表示未取代的直链或支链的烷氧基，其中“烷基”部分如上所定义，如甲氧基，乙氧基，正丙氧基，异丙氧基，正丁氧基，异丁氧基，叔丁氧基，戊氧基，己氧基，庚氧基，包括它们的异构体。此处所用的“低级烷氧基”表示具有如上所定义的“低级烷基”的烷氧基。

此处所用的术语“烷硫基”表示直链或支链(烷基)S-基，其中“烷基”部分如上所定义。实例是甲硫基，乙硫基，正丙硫基，异丙硫基，正丁硫基，异丁硫基或叔丁硫基。

此处所用的术语“烷氧基烷基”表示与如上所定义的烷基连接的如上所定义的烷氧基。实例是甲氧基甲基，甲氧基乙基，甲氧基丙基，乙氧基甲基，乙氧基乙基，乙氧基丙基，丙氧基丙基，甲氧基丁基，乙氧基丁基，丙氧基丁基，丁氧基丁基，叔丁氧基丁基，甲氧基戊基，乙氧基戊基，和丙氧基戊基，包括它们的异构体。

此处所用的术语“羟烷基”表示其中1，2，3或更多个氢原子被羟基取代的如上所定义的直链或支链烷基。实例是羟甲基，1-羟乙基，2-羟乙基，1-羟丙基，2-羟丙基，3-羟丙基，羟基异丙基，羟丁基等。

此处所用的术语“芳基”表示任选取代的包括碳和氢原子的单环或多环芳族基。适宜的芳基实例包括但不限于苯基和萘基(如，1-萘基或2-萘基)。芳基的适宜取代基选自：烷基，链烯基，炔基，芳氧基，环烷基，酰基，酰氨基，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，卤素，卤代烷基，羟基，硝基和氰基。

此处所用的术语“酰基”(“烷基羰基”)表示式C(＝O)R的基团，其中R是氢，含有1至7个碳原子的直链或支链烷基或苯基。

此处所用的术语“烷氧基羰基”和“芳氧基羰基”表示式-C(＝O)OR的基团，其中R分别是烷基或芳基，且烷基或芳基如上所定义。

此处所用的术语“烷硫基羰基”和“芳硫基羰基”表示式-C(＝O)SR的基团，其中R分别是烷基或芳基，且烷基或芳基如上所定义。

术语卤素表示氟，氯，溴或碘，优选氟，氯，溴。

此处所用的术语“氨基酸”是指天然氨基酸，以及光学异构体(对映异构体和非对映异构体)，合成的同类物及其衍生物。α-氨基酸包括与羧基，氨基，氢原子和单一的“侧链”基团连接的碳原子。术语“天然氨基酸”是指天然氨基酸的L-异构体。天然氨基酸是甘氨酸，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，蛋氨酸，苏氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，色氨酸，半胱氨酸，脯氨酸，组氨酸，天冬氨酸，天冬酰胺，谷氨酸，谷氨酰胺，γ-羧基谷氨酸，精氨酸，鸟氨酸和赖氨酸。天然氨基酸的侧链包括：氢，甲基，异丙基，异丁基，仲丁基，-CH₂OH，-CH(OH)CH₃，-CH₂SH，-CH₂CH₂SMe，-(CH₂)_pCOR，其中R为-OH或-NH₂和p是1或2，-(CH₂)_q-NH₂，其中q是3或4，-(CH₂)₃-NHC(＝NH)NH₂，-CH₂C₆H₅，-CH₂-p-C₆H₄-OH，(3-二氢吲哚基)亚甲基，(4-咪唑基)亚甲基。

此处所用的术语“酰化剂”是指酸酐，酰卤或羧酸的基它活性衍生物。此处所用的术语“酸酐”是指通用结构RC(O)-O-C(O)R的化合物，其中R如上一段所定义。此处所用的术语“酰卤”是指基团RC(O)X，其中X是溴或氯。此处所用化合物的术语“活性衍生物”是指原始化合物的瞬间反应形式，其在所需要的化学反应中使化合物具有活性，其中原始化合物只具有适度的活性或没有活性。活化是通过在比原始化合物具有更高自由能含量的分子中形成衍生物或化学分组而实现的，其使活性形式与另一种试剂更容易反应。在本发明的范围内，羧基的活化特别重要。此处所用的术语酰化剂还包括生成下列物质的试剂：碳酸酯(-OC(＝O)OR⁵，氨基甲酸酯(-NHC(＝O)OR⁵)，硫代碳酸酯(-OC(＝O)SR⁵)，和硫代氨基甲酸酯(-NHC(＝O)SR⁵)，衍生物，如烷氧基氯代碳酸酯，R⁵OC(＝O)Cl，和烷硫基氯代碳酸酯，R⁵SC(＝O)Cl，其中R⁵如上所定义。

此处所用的术语“保护基”是指这样的化学基团：(a)保护活性基团不参与不期望的化学反应；和(b)在不需要对活性基团的保护后可以容易地除去。例如，三烷基甲硅烷基是伯羟基官能团的保护基，而丙酮基是邻二醇基的保护基。

在本申请从头到尾给出的化合物的图示中，增厚锥形线表示在不对称碳属于的环的平面之上的取代基，而虚线

表示在不对称碳属于的环的平面之下的取代基。

此处所用的术语“组合”是指在治疗方法中给药多种药物，通过同时或不同的时间同时地或相继地给药药物。

此处所用的术语“化学衍生的干扰素”是指与聚合物共价连接的干扰素分子，所述的聚合物改变干扰素的物理和/或药物代谢动力学性质。这种聚合物的非限制性实例包括：聚环氧烷均聚物，如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG)，聚氧乙烯化的多元醇，其共聚物或其嵌段共聚物，前提条件是保持嵌段共聚物的水溶性。本领域的技术人员知道将聚合物和干扰素连接的许多途径(例如，参见：A.Kozlowski和J.M.Harris J.Control.Release200172(1-3)：217-24)。本专利中可预期的化学衍生的IFNα的非限制性实例包括：peginterferon-α-2a(PEGASYS和peginterferon-α-2b(PEGINTRON)。

式I的化合物具有互变异构现象。互变异构化合物可以两种或多种相互可以转变的种类存在。在许多情况下，这些实体由在两个原子之间移动的共价键合的氢原子的移动而得到。互变异构化合物存在相互平衡，所以试图离析单个的互变异构体通常产生具有与化合物的混合物相一致的化学和物理性能的混合物。平衡的位置取决于在分子内的化学特征。例如，在许多的脂族醛和酮，如乙醛中，酮形式占优势；而在酚中，烯醇形式占优势。最常见类型的互变异构现象在于：包括羰基，(或酮)化合物和乙烯基醇(或烯醇)，其源自在碳和氧原子之间氢原子的移动和在双键位置中的伴随移动。本发明包括内酰胺，其可以作为酰胺或羟基取代的杂环形式存在。

作为基础的式I的化合物可以与下列酸形成为药用盐：无机酸如氢卤酸(如盐酸和氢溴酸)，硫酸，硝酸和磷酸等，有机酸(如乙酸，酒石酸，琥珀酸，富马酸，马来酸，苹果酸，水杨酸，柠檬酸，甲磺酸和对甲苯磺酸等)。可以根据本领域已知的方法进行这种盐的形成和离析。

此处所用的术语“溶剂合物”是指本发明的化合物或其盐，其还包括化学计量或非化学计量的通过非共价分子间力束缚的溶剂。优选的溶剂是挥发性的，无毒的，和/或以痕量给药于人是可以接受的。

此处所用的术语“水合物”是指本发明的化合物或其盐，其还包括化学计量或非化学计量的通过非共价分子间力束缚的水。

此处所用的术语“包合物”是指晶格形式的本发明的化合物或其盐，其含有空间(例如，轨道)，所述的空间在其中捕获有客体分子(例如，溶剂或水)。

通常，本申请中所使用的且在表1-A中所给出的命名是基于AUTONOM^TM v.4.0：用于产生IUPAC系统命名的Beilstein Institute计算机化的系统。

在本发明范围内的代表性化合物的实例提供在下面的表1和1-A中。提供的这些实例和制备方法可以使本领域的技术人员更加清楚地理解和实践本发明。

不应当认为它们限制是本发明范围的限制，而仅仅是其举例说明和代表。式I的化合物可以通过有机化学领域中已知的各种方法制备。

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
1	乙酸(2R，3S，4R，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-(4-乙酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-四氢-呋喃-2-基甲酯	化合物号	化学名
1		2	丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(2-氧代-4-丙酰氨基-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-丙酰氧基-四氢-呋喃-2-基甲酯
3	丁酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-(4-丁酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-丁酰氧基-四氢-呋喃-2-基甲酯	2
3		4	3-甲基-丁酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-[4-(3-甲基-丁酰氨基)-2-氧代-2H-嘧啶-1-基]-4-(3-甲基-丁酰氧基)-2-(3-甲基-丁酰氧基甲基)-四氢-呋喃-3-基酯
5	2，2-二甲基-丙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-[4-(2，2-二甲基-丙酰氨基)-2-氧代-2H-嘧啶-1-基]-3，4-二-(2，2-二甲基-丙酰氧基)-四氢-呋喃-2-基甲酯	4
5		6	苯甲酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-3，4-二苯甲酰氧基-5-(4-二苯甲酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲酯
7	苯氧基-乙酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-5-[2-氧代-4-(2-苯氧基-乙酰氨基)-2H-嘧啶-1-基]-3，4-二-(2-苯氧基-乙酰氧基)-四氢-呋喃-2-基甲酯	6
7		8	[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸叔丁酯
9	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-乙酰胺	8
9		10	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-丙酰胺
11	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-丁酰胺	10
11		12	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-异丁酰胺

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
13	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-2，2-二甲基-丙酰胺	化合物号	化学名
13		14	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-苯甲酰胺
15	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-2-苯基-乙酰胺	14
15		16	N-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-2-苯氧基-乙酰胺
17	[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸丁酯	16
17		18	1-[(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧羰基]-2-甲基-丙基-铵；氯化物
19	1-[(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧羰基]-2-苯基-乙基-铵；氯化物	18
19		20	1-[(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧羰基]-乙基-铵；氯化物
21	苯甲酸(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	20
21		22	乙酸(2R，3S，4R，5R)-4-乙酰氧基-2-乙酰氧基甲基-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-四氢-呋喃-3-基酯
23	丙酸(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-4-丙酰氧基-2-丙酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯	22
23		24	异丁酸(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-4-异丁酰氧基-2-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯
25	苯甲酸(2R，3S，4R，5R)-3，4-二苯甲酰氧基-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-四氢-呋喃-2-基甲酯	24

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
26	苯甲酸(2R，3S，4R，5R)-3-(3-氯-苯甲酰氧基)-4-苯甲酰氧基-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-四氢-呋喃-2-基甲酯	化合物号	化学名
26		27	苯甲酸(2R，3S，4R，5R)-3，4-二苯甲酰氧基-2-叠氮基-5-(4-丁氧羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲酯
28	异丁酸(2R，3S，4R，5R)-2-叠氮基-3，4-二羟基-5-[2-氧代-4-(2-苯氧基-乙酰氨基)-2H-嘧啶-1-基]-四氢-呋喃-2-基甲酯	27
28		29	丁酸(3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-叠氮基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯
30	苯甲酸(3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)4-叠氮基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯	29
30		31	2-叔-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酸(3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-2-氧代-2H嘧啶-1-基)-4-叠氮基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯
32	异丁酸(3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-叠氮基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯	31
32		33	4-氨基-1-((3aR4R，6R，6aS)-6-叠氮基-6-羟甲基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基)-1H-嘧啶-2-酮
34	异丁酸(3aS，4R，6R，6aR)-4-叠氮基-6-(4-异丁酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯	33
34		35	乙酸(3aS，4R，6R，6aR)-6-(4-乙酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-叠氮基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯
36	苯甲酸(3aS，4R，6R，6aR)-4-叠氮基-6-(4-苯甲酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯	35
36		37	碳酸(2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-2-(4-丁氧羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-丁氧羰基氧基-5-丁氧羰基氧基-甲基-四氢-呋喃-3-基酯丁酯

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
38¹	1-[1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基氨基甲酰基]-2-甲基-丙基-铵；氯化物	化合物号	化学名
38¹		39	异丁酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯
40²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	39
40²		41²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-异丁酰氧基-5-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
42	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸辛酯	41²
42		43²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-苯甲酰氧基甲基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
44	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸庚酯	43²
44		45²	(S)-1-[(3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-(3-甲基-丁酰氧基)-5-(3-甲基-丁酰氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
46²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-戊酰氧基-5-戊酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	45²
46²		47	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸己酯
48	异丁酸(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-2-羟甲基-4-异丁酰氧基-四氢-呋喃-3-基酯	47
48		49²	1-[(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲氧羰基]-2-甲基-丁基-铵；氯化物

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
50²	(S)-1-[(2R，3S，4R)-5-叠氮基-3，4-二-(2，2-二甲基-丙酰氧基)-5-(2，2-二甲基-丙酰氧甲基)-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	化合物号	化学名
50²		51	碳酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯丙酯
52	碳酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯戊酯	51
52		53	碳酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯异丁酯
54²	(S)-1-((3R，4S，5R)-3，4-二乙酰氧基-5-乙酰氧基甲基-5-叠氮基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	53
54²		55	异丁酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-异丁酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-异丁酰氧基-2-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯
56²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-异丁酰氧基-5-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	55
56²		57	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸甲酯
58	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸乙酯	57
58		59	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-丙酰氧基-5-丙酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
60	丙酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-二苯甲酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-4-丙酰氧基-2-丙酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯	59
60		61²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-丙氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
62	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-苯甲酰氧基-5-苯甲酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	化合物号	化学名
62		63	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-戊氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
64³	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-己氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐	63
64³		65³	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-庚氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐
66³	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-辛氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐	65³
66³		67²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-辛酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
68²	(S)-1-[(3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-((E)-十八碳-9-烯氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	67²
68²		69	[(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸异丙酯
70²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-庚酰氧基甲基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	69
70²		71²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-十二烷酰氧基甲基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
72	十一酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	71²
72		73²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-癸酰氧基甲基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
74	十四烷酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	73²

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
75	壬酸((2R，3S，4R)-5-((S)4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	化合物号	化学名
75		76	庚酸((2R，3S，4R)-5-((S)4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯
77	十六烷酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	76
77		78	Z-十八碳-9-烯酸(2R，3S，4R)-5-((S)4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯
79	3-甲基-丁酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-丁氧羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-(3-甲基-丁酰氧基)-四氢-呋喃-2-基甲酯	78
79		80	丙酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-丁氧羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-丙酰氧基-四氢-呋喃-2-基甲酯
81	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-己酰氧基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐	80
81		82³	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-羟甲基-3，4-二-戊酰氧基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐
83²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-羟甲基-3，4-二-戊酰氧基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	82³
83²		84²	(S)-1-[(3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-(4-甲基-苯甲酰氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
85²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-十三烷酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	84²
85²		86	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-癸氧羰基氧基甲基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐
87	正十二烷酸(2R，3S，4R)-5-((S)-4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	86

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
883	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-丁酰氧基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；三氟-乙酸盐	化合物号	化学名
883		89	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-丁酰氧基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
90	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-壬氧羰基氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	89
90		91²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-羟甲基-3，4-二-异丁酰氧基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
92²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-苯甲酰氧基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	91²
92²		93	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-羟甲基-3，4-二-丙酰氧基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物
94²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-丁酰氧基-5-丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	93
94²		95⁵	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-丙酰氧基-5-丙酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；甲磺酸盐
96	碳酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-3，4-二羟基-5-((S)-2-氧代-4-戊氧羰基氨基-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲酯戊酯	95⁵
96		97	碳酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-己氧羰基氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯己酯
98²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-辛基氨基甲酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	97
98²		99	苯甲酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-己酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯
100	苯甲酸(2R，3S，4R)-2-叠氮基-5-((S)-4-庚酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯	99

表1-A
表1-A		化合物号	化学名
101⁵	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-5-羟甲基-3，4-二-戊酰氧基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；甲磺酸盐	化合物号	化学名
101⁵		102²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二-己酰氧基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；甲磺酸盐
103²	(S)-1-((3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-戊酰氧基甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；氯化物	102²

一般而言，式I的化合物可以通过有机化学领域已知的各种方法制备，具体而言可以通过核苷类似物合成领域中已知的各种方法制备。制备本发明化合物的具体方法学举例说明于实施例1-6中。用于合成的原料可以容易地获自商业来源，或是已知的，或它们本身可以通过本领域中已知的技术制备。制备核苷类似物的概述包括在下面的出版物中，它们的全部内容结合在此：

A.M Michelson“The Chemistry of Nucleosides and Nucleotides”，Academic Press，New York 1963.

L.Goodman“Basic Principles in Nucleic Acid Chemistry”Ed P O P Ts’O，Academic Press，New York 1974，Vol.1，chapter 2.

“Synthetic Procedures in Nucleic acid Chemistry”Ed W W Zorbach和RS Tipson，Wiley，New York，1973，Vol.1和2.

H.Vorbrüggen和C.Ruh-Pohlenz(编辑)“Handbook of NucleosideSynthesis”Wiley，New York，2001.

本发明的化合物通过酰化适宜的核苷化合物来制备。醇的酰化(J.March，Advanced Organic Chemistry John Wiley & Sons，New York 1992392-398；J.Mulzer Synthesis of Esters，Activated Esters @ Lactones inComprehensive Organic Synthesis，E.Winterfeldt，ed.，vol.6，Pergamon Press，Oxford 1991，pp.324-340)和胺的酰化(J.March，supra pp.417-425；H.G.Benz，Synthesis of Amides and Related Compounds in Comprehensive OrganicSynthesis，E.Winterfeldt，ed.，vol.6，Pergamon Press，Oxford 1991 pp.381-411)可以通过包括酰卤和酸酐的各种酰化剂来进行。这些参考文献以它们的全部内容结合在此。已经将羧酸活化的其它方法开发和利用来制备本文描述的前药。酰化的程度和模型通过使用适宜的保护基或通过延迟向嘧啶碱基引入碱性胺而受到控制。

四酰基核苷容易通过酰化1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基-铵；硫酸氢盐(II)与至少4当量的酰化剂而制备(方法A；实施例1)。

胺典型地比羟基对酰化剂更具有活性。但是，为了保护胺取代基的选择性酰化，将羟基在酰化之前进行保护(方法B；实施例2)。可以将三甲代甲硅烷基醚用作这种转化的保护基。关于醇的保护和脱保护及备选的保护基的更详细的信息可以发现于：T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，3^rd edition，John Wiley & Sons，NewYork，1999，和Harrison和Harrison等，Compendium of Synthetic OrganicMethods，Vols.1-8John Wiley和Sons，1971-1996。上面所述的参考方面通过参考它们的全部内容而结合在此。

三个羟基取代基的选择性酰化通过如下来进行：对相应的尿嘧啶核苷II进行酰化，尿嘧啶核苷II在杂芳环上缺乏活性胺取代基，接着将尿嘧啶核苷转变为胞嘧啶核苷。通过利用由A.D.Borthwick等(J.Med.Chem.1990，33(1)：179；也参见K.J.Divakar和C.B.Reese J.Chem Soc，PerkinTrans.I1982 1171-1176和Maag等J.Med.Chem.199235：1440-1451)描述的方法，可以将酰化的尿嘧啶核苷转变为胞嘧啶核苷。本发明还提供一种通过使N-酰基化合物与在质子溶剂中的溴化锌接触而选择性地从N酰化的核苷断裂N-酰基部分的方法。

选择性酰化5-羟基和胺通过在酰化伯醇前，保护碳水化合物的相邻2’，3’-羟基而进行(方法E；实施例5)。用于相邻二醇的保护基通常将二醇转变成为二氧戊环或二噁烷环(参见：上面的Greene；上面的Harrison和Harrison)。最常见的是，这些保护基包括保护容易形成二氧戊环的醛或酮。发现特别用作二醇保护基的酮包括：丙酮和5-7环烷酮。二氧戊环或二噁烷断裂生或二醇通常是用酸水溶液和有机共溶剂来进行的。苯甲醛容易与相邻的二醇生成醛缩醇，其可以通过氢解或酸性水解而脱保护。对苯甲醛的甲氧基取代提高了酸性水解的速度，并且还可以在氧化条件，例如Ce(NH₄)₂(NO₃)₆下断裂二氧戊环。硝基苯甲醛提供可以光化学断裂的二氧戊环。环状原酸酯，例如乙氧基亚甲基缩醛已经被用作二醇保护基。这些化合物可以在适度酸性条件下断裂；但是，初始产物是酯，其必须水解以重新生成二醇。

环状类似物2-氧杂环亚环戊基原酸酯直接通过酸性水解提供二醇。发现某些环状碳酸酯和环状硼酸酯用作二醇保护基的用途。可以将这些二醇保护基的任何一种用于本发明的方法。

5’-单酰基衍生物可以通过尿嘧啶核苷衍生物的2’，3’相邻二醇的保护而获得。余下的活性羟基酰化后，接着将尿嘧啶核苷碱基转变为如上所述的相应的胞嘧啶核苷碱基，和脱保护相邻二醇(方法D；实施例4)。备选地，其中3’和4’醇被保护的N，1’-二酰基胞嘧啶核苷化合物的N-酰基可以用溴化锌选择性断裂，以生成保护的单酰基化合物，其可以再脱保护(R.Kierzek等Tetrahedron Lett.1981 22(38)：3762-64)。

本发明的化合物可以单独给药(即，单独治疗)或者与其它治疗药剂组合给药(即，“组合治疗”)。组合治疗可以由HCV聚合酶抑制剂和免疫调节剂组成，所述的免疫调节剂刺激对病毒和病毒感染细胞的自然免疫响应，免疫调节剂如干扰素，化学改性干扰素，白细胞介素，肿瘤坏死因子或集落刺激因子。本发明化合物还可以与具有作用类似或互补模式的其它抗病毒化合物组合。概述了抗病毒药物的潜在靶(参见，例如：E.DeClercq，Strategies in the Design of Antiviral Drugs，Nature Rev DrugDiscov.2002 1(1)：13-25；M.T.Reding，Recent Developments in hepatitis Cantiviral research 1999-2000，Exp Opin.Therap.Pat.2000.10(8)：1201-1220)。抗病毒化合物，包括但不限于：HCV蛋白酶抑制剂，其它HCV聚合酶抑制剂，HCV解旋酶抑制剂，HCV引发酶抑制剂，HCV整合酶抑制剂或HCV融合抑制剂，全部可以与本发明的化合物给合使用。

本发明的化合物可以和载体配制成各种各样的口服给药剂型。虽然本发明的核苷衍生物通过肠胃粘膜递药是最佳的，当由其它给药路径给药时，这些化合物也可以是有效的。药用载体可以是固体或液体。口服给药可以是片剂，包衣片，糖衣丸，硬和软明胶胶囊，溶液剂，乳剂，糖浆剂或混悬剂的形式。当由其它给药路径给药时，这些化合物也是有效的，其它给药路径包括：连续(静脉滴注)局部肠胃外，肌内，静脉内，皮下，经皮(其可以包括渗透增强剂)，口腔，鼻部，吸入和栓剂给药。优选的给药方式通常是使用合适的日剂量给药制度的口服，所述的剂量可以根据患病的程度和患者对活性成分的响应来调节。

本发明的一种或多种化合物，以及它们的药用盐，与一种或多种常规的赋形剂，载体或稀释剂一起，可以制成药物组合物和单位剂量的形式。该药物组合物和单位剂量形式可以包含常规比例的常规成分，有或没有另外的活性化合物或要素，且该单位剂型可以含有任何适宜有效量的活性成分，相当于所采用的需要的日剂量范围。

本发明的药物组合物可以以固体如片剂或填充胶囊，半固体，粉末，持续释放制剂，或液体，如溶液，悬浮液，乳液，酏剂，或填充胶囊形式用于口服；或为用于直肠或阴道给药的栓剂形式；或为用于肠胃外应用的可无菌注射的溶液形式。典型的制剂将包含约5％至约95％的一种或多种活性化合物(w/w)。

此处所用的术语“赋形剂”是指可以用于制备药物组合物，通常是安全，无毒并且既不是生物学上也不是其它方面不合需要的化合物，并且包括对于兽医应用以及人药物应用可接受的赋形剂。此处所用的术语“赋形剂”同时包括一种或多于一种的这类赋形剂。

固体形式的制剂包括粉剂，片剂，丸剂，胶囊，扁囊剂，栓剂和可分散的粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以充当稀释剂，芳香剂，增溶剂，润滑剂，悬浮剂，粘合剂，防腐剂，片剂崩解剂或封装材料。在粉剂中，载体通常是细碎的固体，其是与细碎的活性组分的混合物。在片剂中，活性组分通常以适宜的比例与具有必须粘合能力的载体混合，并且被压实成为所需要的形状和尺寸。适宜的载体包括但不限于，碳酸镁，硬脂酸镁，滑石，糖，乳糖，果胶，糊精，淀粉，明胶，黄蓍胶，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，低熔点蜡，可可脂等。固体形式的制剂包括溶液剂，悬浮剂和乳剂，并且除了活性组分外还可以含有着色剂，调味剂，稳定剂，缓冲剂，人工和天然甜味剂，分散剂，增稠剂，增溶剂等。

此处所用的术语“制剂”或“剂型”包括：活性化合物与包封材料如载体的制剂，其提供其中有或没有载体的活性组分被载体所包围的胶囊，载体与它相结合。类似地，包括扁囊剂和锭剂。片剂，粉剂，胶囊，丸剂，扁囊剂和锭剂可以是适宜于口服给药的固体形式。

也适宜于口服给药的液体制剂包括这样的液体制剂，其包括乳剂，糖浆剂，酏剂，水溶液剂，水悬浮剂，它们也是适宜于口服给药的形式。这些包括在使用前将立即转变为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可以在溶液，例如在聚丙二醇水溶液中制备，或可以含有乳化剂如卵磷脂，失水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液剂可以通过将活性组分溶解于水中，并且加入适宜的着色剂，调味剂，稳定剂和增稠剂来制备。水悬浮液可以通过用粘性物质将细碎的活性组分分散在水中来制备，所述的粘性物质如天然或合成的树胶，树脂，甲基纤维素，羧甲基纤维素钠和其它周知的悬浮剂。

可以配制本发明的化合物用于肠胃外给药(例如，通过注射，如快速浓注或连续注射)，并且可以以单位剂型存在于安瓿，预灌装注射器，小体积输注中或与所加的防腐剂一起在多次剂量容器中。该组合物可以采取这样的形式，如在油性或水性载体中的悬浮剂，溶液剂或乳剂，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液。油性或非水性载体，稀释剂，溶剂或载体的实例包括丙二醇，聚乙二醇，植物油(例如，橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)，并且可以含有配方制剂如防腐剂，湿润剂，乳化剂或悬浮剂，稳定剂和/或分散剂。备选地，活性成分可以为粉末形式，其是通过从使用前的具有适宜载体如无菌，无致热原的水的构成溶液无菌离析无菌固体或冻干而得到的。

可以配制本发明的化合物用于表皮的局部给药，如软膏，乳膏或洗剂，或作为透皮贴剂。软膏和乳膏可以例如用水性基质或油性基质来配制，其中加入适宜的增稠剂和/或凝胶剂。洗剂可以用水性基质或油性基质来配制，并且通常还含有一种或多种乳化剂，稳定剂，分散剂，悬浮剂，增稠剂或着色剂。

适宜在口腔中局部给药的制剂包括：包含在香味基质，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶中的活性剂的锭剂(lozenge)，包含在惰性基质如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶中的活性成分的锭剂(pastille)；和包含在适宜液体载体中的活性成分的漱口药。

可以配制本发明的化合物作为栓剂用于给药。首先熔化低熔点的蜡，如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物，并且通过例如搅拌将活性组分均匀地分散。然后将熔融的均匀混合物倾倒入合适尺寸的模具中，使其冷却和固化。

可以配制本发明的化合物用于阴道给药。除了活性成分还包含载体的阴道栓剂，棉塞，软膏，凝胶剂，膏剂，泡沫体或喷雾剂已知在本领域中是合适的。

可以配制本发明的化合物用于鼻内给药。通过合适的装置，例如用滴管，移液管或喷雾器，将溶液剂或悬浮剂直接施用至鼻腔。制剂可以以单次或多次剂量形式提供。在滴管或移液管的后一种情况下，这可以由患者给药适宜的预定体积的溶液剂或悬浮剂来实现。在喷雾器的情况下，这可以通过例如计量喷雾泵来实现。

可以配制本发明的化合物用于气雾剂给药，特别是对呼吸道给药，且包括鼻内给药。该化合物通常将具有小的颗粒大小，例如约五(5)微米或更小。这种颗粒大小可以通过本领域已知的手段，例如通过微粉化来获得。将活性成分提供在具有适宜推进剂的压力容器中，所述的推进剂如含氯氟烃(CFC)，例如二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，或二氧化碳或其它适宜的气体。气溶胶也可以合适地含有表面活性剂如卵磷脂。药物的剂量可以通过计量阀控制。备选地，活性组分可以以干粉的形式提供，例如在适宜粉末基质中的化合物的粉末混合物，粉末基质如乳糖，淀粉，淀粉衍生物如羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。粉末载体将在鼻腔内形成凝胶。粉末组合物可以以单位剂量的形式存在，例如明胶的胶囊或药筒，或泡眼包装，由此可以通过吸入器给药粉末。

需要时，可以用适宜于持续或受控释放给药活性组分的肠溶衣制备制剂。例如，可以将本发明的化合物配制在透皮或皮下给药装置中。这些给药系统在需要持续释放本发明的化合物时和在患者顺从治疗方案是决定性之时是有利的。在透皮给药系统中的化合物通常粘附于一种皮肤粘合剂固体载体。所关心的化合物也可以与渗透增强剂，例如月桂氮酮(1-十二烷基氮杂-2-环庚-2-酮)结合。将持续释放给药系统通过手术或注射皮下地插入至皮下层。皮下植入物将化合物封装在脂质溶性膜中，脂质溶性膜例如硅橡胶或可生物降解的聚合物，如polyactic acid。

与药物载体，稀释剂和赋形剂在一起的适宜制剂描述于Remington：The Science and Practice of Pharmacy 1995，由E.W.Martin编辑，MackPublishing Company，19th edition，Easton，Pennsylvania。有经验的制剂科学家可以在说明书的教导范围内修改制剂，以提供大量用于具体给药路径的制剂，而没有使得本发明的化合物不稳定或损害它们的治疗活性。

本发明化合物的修饰，使得它们更溶于水或其它载体，可以容易地通过小的修饰(成盐，酯化等)来完成，这在本领域普通技术人员范围内是适当的。在本领域普通技术人员范围内适当修饰还有：修改具体化合物的给药路径和给药方案，以控制本发明化合物的药物代谢动力学用于患者的最大有益效果。

此处所用的短语“治疗有效量”是指用来减轻个体中的疾病症状所需要的量。在每个具体的情况下，该剂量将根据个体的需要而进行调节。该剂量将在宽范围内变化，其取决于许多因素，如将治疗的疾病的严重程度，患者的年龄和大体的健康状况，患者用其治疗的其它药物，给药路径和形式，所涉及医师的偏好和经验。对于口服给药，对于单一治疗和/或组合治疗，约0.01至约100mg/kg体重/天的日剂量应当是适宜的。优选的日剂量为约0.1至约500mg/kg体重/天，更优选为约0.1至约100mg/kg体重/天，且最优选为约1.0至约10mg/kg体重/天。因此，对70kg的人给药，剂量范围为约0.7g至7.0g/天。

日剂量可以作为单次剂量或以分开的剂量给药，典型的是1至5次剂量/天。通常，治疗以更少的剂量开始，该剂量低于化合物的最佳剂量。然后，通过小增加量增加剂量，直到达到单个患者的最佳效果。治疗此处所述疾病领域中的普通技术人员将可以在没有过度的实验并且依靠个人知识，经验和本申请所公开的内容，对于给定的疾病和患者确定本发明化合物的治疗有效量。

优选药物制剂为单位剂量的形式。在这种形式中，将制剂再分成含有适宜量的活性组分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂，该包装含有不连续量的制剂，如在小瓶或安瓿中的小包片剂，胶囊剂和粉剂。此外，单位剂量形式可以是胶囊剂，片剂，扁囊剂或锭剂本身，或它可以为适宜量的这些包装形式中的任何之一。

给出实施例8中的药物组合物，使本领域的技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。不应当认为它们是对本发明范围的限制，而仅仅是其举例说明和代表。

给出下面的制备方法和实施例，使本领域的技术人员能够更清楚地理解和实践本发明。不应当认为它们是对本发明范围的限制，而仅仅是其举例说明和代表。

进行了努力，以确保所使用的数字(例如，数量，温度)的准确性，但对于某些实验误差和偏差，包括标定差，数字的舍入等是可以允许的。

实施例1

方法A：N，2’，3’，4’-四酰基核苷衍生物的制备

乙酸3，4-二乙酰氧基-5-(4-乙酰氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-四氢-呋喃-2-基甲酯

在惰性气氛下，将在二氯甲烷(5mL)中的4’-叠氮基胞嘧啶核苷半硫酸盐(0.30g)，二甲基氨基吡啶(催化量)和N，N-二异丙基乙基胺(3.69mL)的搅拌悬浮液在冰/水浴中冷却，并且滴加乙酰氯(0.452mL)和乙酸酐(0.60mL)处理。使混合物温热至环境温度，且放置2天后，未经处理经过快速色谱(在己烷中的50％乙酸乙酯，然后在己烷中的75％乙酸乙酯，然后100％乙酸乙酯，然后在乙酸乙酯中的5％甲醇)，提供0.335g的固体产物(化合物1；M+H＝453)。

实施例2

方法B：N-酰基核苷衍生物的制备

1-(5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-2-氧代-1，2-二氢-嘧啶-4-基]-氨基甲酸丁酯

在惰性气氛下，将在吡啶(8mL)中的4’-叠氮基胞嘧啶核苷半硫酸盐(0.50g)的搅拌悬浮液在冰/水浴中冷却，并且用氯化三甲代甲硅烷基(1mL)处理。使混合物温热至环境温度，1小时后，用氯代甲酸丁酯(0.2mL)处理。在该温度另外搅拌2小时后，将反应混合物在冰/水浴中冷却，且用5mL碳酸氢铵水溶液处理。用二氯甲烷萃取有机物二次，用硫酸镁干燥，并且过滤。向滤出液中，加入氟化四正丁基铵(0.25mL，1M于四氢呋喃中)。于环境温度搅拌反应混合物3天。在除去溶剂后，使剩余物经过快速色谱(在乙酸乙酯中的25％己烷，然后乙酸乙酯，然后在乙酸乙酯中的6.5％甲醇)，提供400mg固体产物(化合物17；mp 86.5-94℃)。

实施例3

方法C：2’，3’，5’-三酰基核苷衍生物的制备

乙酸3，4-二乙酰氧基-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲酯(22)

步骤1

向含有0.330g(1.15mmol)4’-叠氮基尿嘧啶核苷，2mL吡啶和2mL的乙酸酐的搅拌溶液中，加入0.010g(0.08mmol)的4-二甲基氨基吡啶。12小时后，在减压下蒸发反应混合物至干燥。将剩余物溶解于二氯甲烷中，并且用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥且蒸发至干燥，得到0.42g(88％)的2’，3’，5’-三-乙酰氧基-4’-叠氮基尿嘧啶核苷(IIIa：R⁵＝CH₃)。

步骤2

将POCl₃(0.31mL；3.304mmol)加入至冷却至5℃的在20mL乙腈中的含有0.340g(0.826mmol)的尿嘧啶核苷，0.913g(13.22mmol)的1，2，4-三唑和2.30mL(16.52mmol)的三乙胺的搅拌混合物中。使反应混合物温热至室温。12小时后，在减压下蒸发反应混合物至干燥。得到的剩余物用二氯甲烷稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，且蒸发至干燥，得到0.300g(78％)的(IIc：R⁵＝CH₃)

步骤3

向含有0.066g(1.254mmol)氯化铵和0.070g(1.254mmol)氢氧化钾的密封烧瓶中，加入10mL乙腈，20mL水，0.190mL(1.278mmol)三乙胺，接着加入在10mL乙腈中含有0.290g(0.627mmol)三唑的溶液。12小时后，在减压下蒸发反应混合物至干燥。将剩余物溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤，并且用硫酸镁干燥，且在减压下蒸发至干燥。经过色谱(在二氯甲烷中的10％甲醇)，提供0.060g(23％)的胞嘧啶核苷(IId；R⁵＝CH₃；化合物22；MH⁺＝411；MNa⁺＝433)。

用适宜的酰化剂以类似的方式进行，得到异丁酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-异丁酰氧基-四氢-呋喃-2-基甲酯(化合物24；MH⁺＝495；MNa⁺＝517)和苯甲酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二-苯甲酰氧基-四氢-呋喃-2-基甲酯(化合物25)。

实施例4

方法D：5’-酰基核苷衍生物的制备

2-氨基-3-苯基-丙酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯盐酸盐(Ie：R＝CH(NH₃ ⁺)CH₂C₆H₅Cl；化合物19)

步骤1

1-(6-羟甲基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基)-1H-嘧啶-2，4-二酮(IIIb；化合物33)

将在20mL丙酮中的含有3.0g(10.5mmol)的4’-叠氮基尿嘧啶核苷，0.05g(0.26mmol)对甲苯磺酸一水合物和6mL(48.8mmol)2，2-二甲氧基丙烷的混合物于室温搅拌12小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥，且在减压下蒸发至干燥，得到所需要的产物：2.20g(64％)，为白色固体。

步骤2

2-叔-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酸6-(2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基)-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯(IIIb：R’＝CH(NH-boc)CH₂C₆H₅)

向在20mL的N，N-二甲基甲酰胺中的含有1.00g(3.07mmol)的4’-叠氮基-2’，3’-O-异-丙基-尿嘧啶核苷，1.63g(6.14mmol)Boc-1-苯丙氨酸和1.18g(6.14mmol)的1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的搅拌溶液中，加入0.375g(3.07mmol)的4-二甲基氨基吡啶。在氮气气氛下和室温下，将得到的溶液搅拌放置。12小时后，将反应混合物在减压下蒸发至干燥。粗剩余物经过色谱(在己烷中的0至100％乙酸乙酯)，得到1.01g(57％)所需要的产物，为白色泡沫(MH⁺＝573；MNa⁺，＝595)。

步骤3

2-叔-丁氧羰基氨基-3-苯基-丙酸6-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基甲酯(IIe：R’＝CH(NH-boc)CH₂C₆H₅)

将POCl₃(0.651mL；6.98mmol)加入至在冷却至5℃的50mL乙腈中含有1.00g(1.746mmol)尿嘧啶核苷，1.93g(27.94mmol)的1，2，4-三唑和4.86mL(34.93mmol)的三乙胺的搅拌混合物中。将反应混合物温热至室温。12小时后，将反应混合物在减压下蒸发至干燥。用二氯甲烷稀释剩余物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，用硫酸镁干燥，且蒸发至干燥，得到1.0g(92％)的三唑。

将含有0.171g(3.207mmol)的氯化铵和0.180g(3.207mmol)的氢氧化钾的密封烧瓶中，加入10mL乙腈，20mL水，0.446mL(3.207mmol)三乙胺，接着加入在10mL乙腈中含有1.00g(1.603mmol)苯基丙氨酸尿嘧啶核苷的溶液。12小时后，将反应混合物在减压下蒸发至干燥。将剩余物溶解于乙酸乙酯中，用水洗涤，用硫酸镁干燥，且在减压下蒸发至干燥。经过色谱(在二氯甲烷中的10％甲醇)，提供0.48g(52％)的胞嘧啶核苷(MH⁺＝572；MNa⁺＝594)。

步骤4：

2-氨基-3-苯基-丙酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯盐酸盐(Ie：R’＝CH(NH₃ ⁺)CH₂C₆H₅Cl^-)

向在10mL甲醇中含0.23g(0.402mmol)的苯丙氨酸胞嘧啶核苷(IIe：R’＝CH(NHBoc)CH₂Ph)的溶液中，加入0.079mL(0.804mmol)浓盐酸溶液。12小时后，将反应混合物蒸发至干燥。将剩余物溶解于水中，并且用乙酸乙酯洗涤，在减压下蒸发至干燥，得到0.160g(94％)胞嘧啶核苷产物(化合物19)。

以类似的方式，取代boc-L-缬氨酸和boc-L-丙氨酸，分别得到2-氨基-3-甲基-丁酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯盐酸盐(化合物18；MH⁺＝384；MNa⁺＝406)和2-氨基-丙酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯盐酸盐(化合物20；MH⁺＝356；MNa⁺＝378)。

以类似的方式，利用苯甲酸酐，得到苯甲酸5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-3，4-二羟基-四氢-呋喃-2-基甲酯(化合物14；MH⁺＝389；MNa⁺＝411)。

实施例5

方法E

异丁酸2-叠氮基-3，4-二羟基-5-(2-氧代-4-苯基乙酰氨基-2H-嘧啶-1-基)-四氢-呋喃-2-基甲酯

步骤1

于室温搅拌在DMF(15mL)中的4-氨基-1-(6-叠氮基-6-羟甲基-2，2-二甲基-四氢-呋喃并[3，4-d][1，3]二氧戊环-4-基)-1H-嘧啶-2-酮(II，0.14g)，苯乙酸4-硝基苯酯(0.12g)和1-羟基苯并三唑(0.06g)的溶液过夜。加入水(15mL)并且用乙酸乙酯萃取混合物两次。用水和盐水洗涤合并的乙酸乙酯萃取液，且用无水硫酸镁干燥。真空中浓缩溶液，并且由快速柱色谱纯化，得到IIh(0.18g)，为无色油。

步骤2

将来自前一步骤的IIh(0.18g)，三乙胺(0.07ml)和二甲基氨基吡啶(0.01g)溶解于THF(15ml)中，并且在氮气气氛中于室温搅拌。慢慢地加入异丁酰氯(0.043mL)，且于室温搅拌反应混合物6小时。加入水(15mL)，并且用乙酸乙酯萃取混合物两次。用无水硫酸镁干燥合并的萃取液，过滤且真空浓缩溶液。通过快速柱色谱分离产物(IIi；0.18g)，为油。

步骤3

将IIi(0.18g)溶解于乙酸(60％)中，且于100℃搅拌过夜。将反应混合物冷却至室温，且在减压下蒸发溶液。通过制备薄层色谱纯化产物。将粗产物(69mg)溶解于THF(10ml)中，且在室温用苯乙酸4-硝基苯酯(55mg)和1-羟基苯并三唑(26mg)处理。于室温搅拌反应混合物过夜。蒸发溶剂，且将剩余物通过制备薄层色谱再次纯化，提供IIj(17mg)，为无色油。

实施例6

方法F

异丁酸(2R，3S，4R，5R)-5-(4-氨基-2-氧代-2H-嘧啶-1-基)-2-叠氮基-2-羟甲基-4-异丁酰氧基-四氢-呋喃-3-基酯

步骤1

烧瓶中装入II(0.610g；1.75mmol)，二甲基-叔-丁基硅烷(0.580g；3.84mmol)，咪唑(0.262g；3.842mmol)和DMF(12mL)，且将得到的均匀溶液于室温搅拌过夜。质谱显示粗产物是单和二甲硅烷基化的产物。真空除去溶剂，且将剩余物溶解于吡啶(12mL)和CH₂Cl₂(12mL)中，加入小催化量的DMAP和异丁酸酐(0.96mL；5.76mmol)，且于室温搅拌得到的混合物过夜。用水和饱和的NaHCO₃溶液的混合物萃取反应混合物，并且用CH₂Cl₂反萃水层。合并有机层，并且用1N HCl和水萃取，干燥(MgSO₄)，过滤且蒸发，得到1.3g粗的甲硅烷基化的核苷，为黄色油。

步骤2

将来自于前一步骤的粗产物(1.3g)溶解于THF(20mL)中，加入氟化四丁基铵(0.5mL；TBAF；1.0M在THF中的溶液)，且将反应混合物搅拌过夜。16小时后，加入另外的0.5mL等分的TBAF，旦继续搅拌另外的4小时，蒸发掉溶剂。将剩余物在CH₂Cl₂和H₂O与NaHCO₃的混合物之间分配。用CH₂Cl₂洗涤含水萃取液，且用H₂O和NaCl水溶液洗涤合并的有机萃取液，干燥，过滤且蒸发。由快速色谱纯化粗产物，且通过梯度(CH₂Cl₂ 4％MeOH/CH₂Cl₂)洗脱，得到无色白色固体：N，2’，3’-三-异丁酸盐(IIk；140mg)。

步骤3

将三-异丁酸盐(140mg；0.283mmol)溶解于2.5mL的CH₂Cl₂和0.8mL的MeOH中。向得到的溶液中，加入ZnBr₂(6mg；0.283mmol)，且将得到的溶液于65℃搅拌过夜。真空除去溶剂，得到150mg黄色泡沫，将其通过硅胶快速色谱纯化，通过梯度(CH₂Cl₂ 75％MeOH/CH₂Cl₂)洗脱，得到IIm(R＝i-Pr)，为白色固体(0.120g；98％理论上)。

实施例7

血浆药物代谢动力学

用药物代谢动力学程序来确定在单次口服5mg/kg剂量的II的前药后的4-氨基-1-((2R，3R，4S，5R)-5-叠氮基-3，4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮(II)的血浆浓度。制剂是在5mL的适宜载体中含有0.0176mmol前药的溶液剂/悬浮剂。

将三只未禁食的雄性猕猴(6-9kg)插入隐静脉导管或臂导管，以利于抽血。在整个研究过程中，允许自由进食和水。在研究的当天，从每只猴抽取前剂量的血液样品(2-3mL)。通过口管饲法，给猴子服药1mL/kg的剂量溶液。在服药后的下面的每个时间点(0.25，0.5，1，3，5，7，10，24，32和48小时)，在肝素锂涂覆的试管中收集约0.5mL的血液。离心血液，得到血浆，将其冷冻直到分析。

通过LC-MS试验，在每个血浆样品中确定其中R¹-R⁴为H的化合物I的浓度。由空白猴子血浆准备标准曲线。AUC表示浓度与时间总量的曲线下的面积，其描述在全身循环中前药的浓度为时间的函数(L.Z.Benet，D.L.Kroetz和L.B.Sheiner Pharmacokinetics in Goodman@Gihnan’s ThePharmacological Basis of Therapeutics，J.G.Hardman & L.E.Limbird Eds.，9^th Edition，McGraw Hill，New York，p 17-23)。Cmax是实测的峰值浓度。

化合物号	AUC_0-24h(μg·h/mL)	AUC倍数增加	Cmax(μg/mL)	Cmax倍数增加
化合物号	AUC_0-24h(μg·h/mL)	AUC倍数增加	Cmax(μg/mL)	Cmax倍数增加	II	2.85	1.00	0.312	1.00
22	3.34	1.22	0.378	1.21	II	2.85	1.00	0.312	1.00
22	3.34	1.22	0.378	1.21	49	2.38	0.87	0.217	0.70
18	2.37	0.86	0.284	0.91	49	2.38	0.87	0.217	0.70
18	2.37	0.86	0.284	0.91	50	1.64	0.60	0.171	0.55
23	9.50	3.47	2.09	6.70	50	1.64	0.60	0.171	0.55
23	9.50	3.47	2.09	6.70	51	0.89	0.32	0.081	0.26
52	1.40	0.51	0.308	0.99	51	0.89	0.32	0.081	0.26
52	1.40	0.51	0.308	0.99	42	0.65	0.24	0.074	0.24
53	0.58	0.21	0.058	0.19	42	0.65	0.24	0.074	0.24
53	0.58	0.21	0.058	0.19	47	0.83	0.30	0.103	0.33
46	6.99	2.55	1.11	3.56	47	0.83	0.30	0.103	0.33
46	6.99	2.55	1.11	3.56	44	5.21	1.90	0.827	2.65
24	10.5	3.83	1.42	4.55	44	5.21	1.90	0.827	2.65

实施例8

Renilla荧光素酶试验

本试验测量式I的化合物抑制HCV RNA复制的能力，因此测定它们用于治疗HCV感染的潜在效用。本试验利用指针作为细胞内HCV复制子RNA水平的简单读数。将Renilla.荧光素酶基因引入复制子构造NK5.1的第一开放解读码组(Krieger等，J.Virol.75：4614)，然后立即内核糖体进入部位(IRES)序列，且通过来自口蹄疫病毒的自分裂肽2A而与新霉素磷酸转移酶(NPTII)基因融合(Ryan & DreW，EMBO Vol 13：928-933)。在体外转录后，将RNA电穿孔进入至人肝细胞瘤Huh7细胞，并且离析和扩展抗G418-集落。稳定选择细胞系2209-23含有复制型HCV亚基因组RNA，且由复制子表示的Renilla荧光素酶的活性反映其细胞中的RNA水平。在复制板中进行该试验，一个是半透明的白色且另一个是透明的，以平行地测量化合物的抗病毒活性和细胞毒性，保证所观察到的活性不是由于减少的细胞增殖。

将在含有5％牛胎血清(FCS，GibcoBRL cat.no.10106-169)的Dulbecco’s MEM(GibcoBRL cat no.31966-021)中培养的Renilla荧光素酶HCV复制子细胞(2209-23)涂敷在96-孔板中，5000个细胞/孔，并且孵育过夜。24小时后，将在生长介质中的不同稀释量的化合物加入至细胞中，然后于37℃再孵育3天。在孵育时间的末期，采集在白色板中的细胞，并且通过使用双-荧光素酶指示系统(Promega cat no.E1960)测量荧光素酶的活性。在下一段中描述的所有试剂都包括在制造商的试剂盒中，且按照制造商的使用说明进行试剂的制备。将细胞用200μl的磷酸盐缓冲盐水(pH7.0)(PBS)/孔洗涤两次，并且在室温孵育20分钟之前，用25μl的1x不活泼的溶解缓冲液溶解。向每个孔中加入100微升的LAR II试剂。然后将该板插入至LB 96V微量培养板光度计(MicroLumatPlus，Berthold)中，并且向每个孔中注射100μl Stop & Glo试剂，并且使用2-秒延迟，10秒测量程度测量信号。IC₅₀：降低相对于未治疗细胞对照值的50％复制子水平的药物浓度，可以由绘制荧光素酶的活性相对于药物浓度的百分比减少进行计算。

将获自Roche Diagnostic(cat no.1644807)的WST-1试剂用于细胞毒性试验。将10微升的WST-1试剂加入至包括每个孔的孔中，所述的孔含有单独作为空白的介质。然后将细胞于37℃孵育1至1.5小时，且由450nm(于650nm的基准滤光器)的96-孔板读数器测量OD值。此外，CC₅₀：降低相对于未治疗细胞对照值的50％细胞增殖水平的药物浓度，可以由绘制WST-1值相对于药物浓度的百分比减少进行计算。

化合物号	荧光素酶活性IC50(μM)
化合物号	荧光素酶活性IC50(μM)	5	5.33
18	2.4	5	5.33
18	2.4	25	2.47

实施例9

如在此实施例中所述，制备通过数种途径给药的本发明化合物的药物组合物。

用于口服给药的组合物(A)

成分	％重量/重量
成分	％重量/重量	活性成分	20.0％
乳糖	79.5％	活性成分	20.0％
乳糖	79.5％	硬脂酸镁	0.5％

将上述成分混合并且分散在胶囊中，每个胶囊含约100mg；一个胶囊约为一整天的剂量。

用于口服给药的组合物(B)

成分	％重量/重量
成分	％重量/重量	活性成分	20.0％
硬脂酸镁	0.5％	活性成分	20.0％
硬脂酸镁	0.5％	交联羧甲基纤维素钠	2.0％
乳糖	76.5％	交联羧甲基纤维素钠	2.0％
乳糖	76.5％	PVP(聚乙烯吡咯烷酮)	1.0％

将上述成分混合，并且使用溶剂如甲醇粒化。然后将该制剂干燥，并且用适宜的压片机形成为片剂(含有约20mg的活性化合物)。

用于口服给药的组合物(C)

成分	％重量/重量
成分	％重量/重量	活性化合物	1.0g
富马酸	0.5g	活性化合物	1.0g
富马酸	0.5g	氯化钠	2.0g
羟苯甲酸甲酯	0.15g	氯化钠	2.0g
羟苯甲酸甲酯	0.15g	羟苯甲酸丙酯	0.05g
砂糖	25.5g	羟苯甲酸丙酯	0.05g

山梨糖醇(70％溶液)	12.85g
山梨糖醇(70％溶液)	12.85g	Veegum K(Vanderbilt Co.)	1.0g
香味剂	0.035ml	Veegum K(Vanderbilt Co.)	1.0g
香味剂	0.035ml	色料	0.5mg
蒸馏水	适量至100ml	色料	0.5mg

将上述成分混合，形成用于口服给药的悬浮剂。

肠胃外制剂(D)

成分	％重量/重量
成分	％重量/重量	活性成分	0.25g
氯化钠	适量，使等渗	活性成分	0.25g
氯化钠	适量，使等渗	注射用水至	100ml

将活性成分溶解于部分注射用的水中。然后搅拌加入足够量的氯化钠，使溶液等渗。用剩余量的注射用水补充溶液的重量，用0.2微米的膜过滤器过滤，在无菌条件下包装。

栓剂制剂(E)

成分	％重量/重量
成分	％重量/重量	活性成分	1.0％
聚乙二醇1000	74.5％	活性成分	1.0％
聚乙二醇1000	74.5％	聚乙二醇4000	24.5％

在蒸汽浴中将上述成分熔化在一起且混合，并且倾倒入模具中，使含有2.5g的总重量。

局部制剂(F)

成分	克
成分	克	活性化合物	0.2-2
司盘60	2	活性化合物	0.2-2
司盘60	2	吐温60	2

矿物油	5
矿物油	5	凡士林	10
羟苯甲酸甲酯	0.15	凡士林	10
羟苯甲酸甲酯	0.15	羟苯甲酸丙酯	0.05
BHA(丁基化的羟基苯甲醚)	0.01	羟苯甲酸丙酯	0.05
BHA(丁基化的羟基苯甲醚)	0.01	水	适量至100

将除水外的所有成分混合并且搅拌加热至约60℃。然后于约60℃加入足够量的水，强力搅拌，以乳化成分，然后加入水适量至约100g。

鼻内喷雾制剂(G)

制备含有约0.025-0.5百分比的活性化合物的几种含水悬浮剂作为鼻内喷雾制剂。制剂任选含有非活性成分，如微晶纤维素，羧甲基纤维素钠，葡萄糖等。可以加入盐酸以调节pH。鼻内喷雾制剂可以通过鼻内喷雾计量泵递药，典型地递药约50-100微升制剂/驱动。典型的剂量进度是每4-12小时喷2-4次。

在上面的说明书，或后附的权利要求书，或附图中公开的特征，是以它们的具体形式或按用于进行公开的功能的手段所表示的，或需要时，用于达到所公开的结果的方法或工艺，可以被单独或以这些特征的任何组合被以其不同的形式用于实现本发明。

上面的本发明通过举例说明和实施例，并且参考具体的实施方案进行了一些详细描述，目的是为了清楚和理解。对于本领域的技术人员而言，显而易见的是：在不脱离本发明的真实精神和范围内可以进行改变和修改，以及等价替换。因此，应当理解的是，上面的描述意味着是举例说明而不是限制性的。可以进行许多修改以使具体的情况，材料及物质的组成，工艺或工艺步骤或步骤适宜于本发明的目的精神和范围。所有这些修改将在后附的权利要求范围内。在本申请中引用的所有专利，专利申请和公开通过参考将它们的全部内容结合在此，全部目的在于达到如同每个单独的专利，专利出版物或公开单独表示时的相同程度。

Claims

1.一种式I的化合物：

其中：

R³和R⁴独立地选自氢，COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，或结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；

R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，C_1-18直链或支链链烯基，C_1-18直链或支链炔基，C_1-18卤代烷基，C_3-8环烷基，C_1-18烷基取代的C_3-8环烷基，任选独立地被一至三个选自卤素，C_1-6烷基，C_1-6烷氧基，C_1-6烷硫基，C_1-6烷基亚磺酰基，C_1-6烷基磺酰基，硝基和氰基中的取代基取代的苯基，其中苯环如上所述被任选取代的CH₂Ph，和其中苯环如上所述被任选取代的CH₂OPh；

R⁶独立地选自天然氨基酸的侧链和C_1-5直链或支链烷基；且

R⁷选自氢，R⁵OCO；或，

R⁶和R⁷一起为(CH₂)₃；及其水合物，溶剂合物，包合物和酸加成盐；前提条件是R¹，R²，R³或R⁴中的至少一个不是氢。

2.根据权利要求1的化合物，其中R¹，R²，R³和R⁴各自独立地是COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵，且每个R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，苯基和CH₂OPh。

3.根据权利要求1的化合物，其中R¹，R²，R³和R⁴是COR⁵，且每个R⁵独立地选自C_1-18直链或支链烷基，苯基和CH₂OPh。

4.根据权利要求1的化合物，其中R¹是COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵或COCH(R⁶)NHR⁷，且R²，R³和R⁴是氢。

5.根据权利要求4的化合物，其中R⁵选自C_1-18直链或支链烷基，C_3-8环烷基，苯基和CH₂OPh，或R⁶选自C_1-5直链或支链烷基和天然氨基酸的侧链。

6.根据权利要求1的化合物，其中R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，R¹，R³和R⁴是氢。

7.根据权利要求6的化合物，其中R⁵选自C_1-18直链或支链烷基，C_3-8环烷基和苯基，或R⁶是C_1-5直链或支链烷基或天然氨基酸的侧链。

8.根据权利要求6的化合物，其中R²是COCH(R⁶)NH₂，且R⁶选自C_1-5自链或支链烷基和CH₂Ph。

9.根据权利要求1的化合物，其中R³和R⁴都是氢。

10.根据权利要求1的化合物，其中R¹是氢，且R²，R³和R⁴独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵和C(＝O)SR⁵。

11.根据权利要求1的化合物，其中R¹是氢，R²选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，且结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh。

12.根据权利要求1的化合物，其中R¹和R²是氢，且R³和R⁴独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，其中R⁷是氢。

13.根据权利要求1的化合物，其中R¹和R²独立地选自COR⁵，C(＝O)OR⁵，C(＝O)SR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，且结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh。

14.根据权利要求1的化合物，其中R¹和R²选自氢，COR⁵，C(＝O)OR⁵和COCH(R⁶)NHR⁷；R³和R⁴彼此独立地选自氢，COR⁵，CO₂R⁵和COCH(R⁶)NHR⁷，或结合在一起的R³和R⁴选自CH₂，C(CH₃)₂和CHPh；R⁵独立地选自C_1-6直链或支链烷基，C_1-6直链或支链链烯基，C_1-6直链或支链炔基，C_1-6卤代烷基，C_3-8环烷基，C_1-18烷基取代的C_3-8环烷基，任选独立地被一至三个选自卤素，C_1-6烷基，C_1-6烷氧基，C_1-6烷硫基，C_1-6烷基亚磺酰基，C_1-6烷基磺酰基，硝基和氰基中的取代基取代的苯基，其中苯环如上所述被任选取代的CH₂Ph，和其中苯环如上所述被任选取代的CH₂OPh；R⁶和R⁷如权利要求1中所定义，前提条件是R¹，R²，R³或R⁴中的至少一个不是氢。

15.一种包含治疗有效量的根据权利要求1至14任何一项的化合物及药用赋形剂的药物组合物。

16.根据权利要求1至14任何一项的化合物在制备用于治疗由丙型肝炎病毒介导的疾病的药物中的应用。

17.一种通过从IVa选择性断裂N-酰基部分而将N-酰基胞嘧啶核苷化合物IVa转化为胞嘧啶核苷化合物IVb的方法，

其中：

R²，R³，R⁴和R⁵如权利要求1中所定义，且

R^a是氢或C_1-4烷基；

所述方法包含：使所述的N-酰基嘧啶核苷的溶液与在质子溶剂R^aOH中的ZnBr₂接触，其中R^a是氢或C_1-4烷基。

18.根据权利要求17的方法，其中所述的质子溶剂是甲醇。