CN109929851B

CN109929851B - 一种玉米籽粒淀粉合成调控基因ZmDof36及其应用

Info

Publication number: CN109929851B
Application number: CN201910084497.2A
Authority: CN
Inventors: 武健东; 陈龙; 董庆; 江海洋; 程备久
Original assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Current assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Priority date: 2019-01-29
Filing date: 2019-01-29
Publication date: 2020-08-14
Anticipated expiration: 2039-01-29
Also published as: CN109929851A

Abstract

本发明公开了一种玉米籽粒淀粉合成调控基因ZmDof36及其应用，属于基因工程技术领域。该基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，全长1056bp，共编码351个氨基酸。该基因属于DOF家族转录因子，可以通过调控淀粉合成途径基因的表达提高玉米籽粒淀粉的含量，同时该基因可以增加籽粒的大小从而增加玉米的千粒重；该基因的发现为玉米籽粒品质和产量的交叉代谢调控提供新途径，对作物遗传改良和培育优质高产的玉米材料具有重要的理论和实践指导意义；本发明产生的材料为优质高产的玉米育种提供新种质。

Description

一种玉米籽粒淀粉合成调控基因ZmDof36及其应用

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种玉米籽粒淀粉合成调控基因ZmDof36及其应用。

背景技术

玉米(Zea maysL.)是重要的粮食、饲料和工业原料兼用作物，是我国和世界主要的农作物之一。至2012年，玉米播种面积和总产量均超过水稻，成为第一大粮食作物。玉米淀粉占世界淀粉年产量的85％左右，而且玉米淀粉是各种植物淀粉中化学成分最佳的淀粉，有纯度高(达99.5％)、提取率高(达93％—96％)、营养成分丰富、经济效益佳等特点，因此提高玉米中淀粉含量具有重要的社会效益和经济效益。

淀粉约占玉米籽粒干重的70％，是籽粒的主要组成成份和重要品质性状。普通玉米中直链淀粉的含量一般约为25％，支链淀粉约为75％，如何调节和改善直链和支链淀粉含量的平衡度，需要深入开展对淀粉生物代谢途径的研究。另外，籽粒增重的过程主要是淀粉的合成和积累过程，不断改良玉米淀粉含量可以实现“以质增重”。因此，深入研究种子淀粉的合成机理对于玉米品质的改良和产量的提高至关重要，同时对作物的遗传改良，培育具有优质高产的玉米材料具有重要的理论和实践意义。

在玉米、小麦和水稻淀粉代谢途径中，控制淀粉合成的主要关键酶为ADP-葡萄糖焦磷酸化酶(AGPas)、颗粒结合型淀粉合成酶(GBSS)、可溶性淀粉合成酶(SSS)、淀粉分支酶(SBE)和淀粉去分支酶(SDBE)。目前这些关键酶的编码基因已被克隆且发现通过控制关键酶基因表达，能调控淀粉含量和籽粒的大小。玉米SH2(shrunken2)和BT2(brittle2)分别编码种子胚乳AGPase的大、小亚基，在过表达BT2或SH2玉米转基因植株中，其谷粒重量和淀粉的含量提高；玉米wx(waxy，编码GBSS酶)，缺少wx功能的胚乳淀粉主要由支链淀粉组成；wx突变体也被广泛用于产生高支链淀粉的分子育种中；RSRI(Rice Starch egulator1)基因的缺失突变体中，负责淀粉合成的基因表达量明显上升，种子中直链淀粉含量增加，支链淀粉结构出现变化，种子变大，产量增大；FLO2(Floury endosperm 2)基因可以调控水稻籽粒的大小和淀粉的含量；尽管对于主效基因在淀粉合成途径中的功能也有大量报道，那么这些主效基因是如何被调控表达？调控的分子机理又是怎么样的呢？这些问题都还不清楚。

发明内容

本发明的目的在于解决以上的技术问题，而提出一种玉米淀粉合成调控的ZmDof36基因及其应用，以提供一种新的能够调控玉米淀粉合成的关键基因，该基因可以改变籽粒淀粉含量、结构及籽粒产量。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供了一种玉米淀粉合成调控基因ZmDof36，所述基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，全长1056bp，共编码351个氨基酸。

本发明还提供了上述玉米淀粉合成调控基因ZmDof36的编码蛋白，所述编码蛋白具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

本发明还提供了上述所述的玉米淀粉合成调控基因ZmDof36，基因ZmDof36定位于细胞核中，进行转录调控基因表达。

本发明还提供了上述玉米淀粉合成调控基因ZmDof36在调节玉米籽粒淀粉含量和结构中的应用，具体为，该基因对淀粉的合成起正调控作用，其过量表达可提高总淀粉、直连淀粉的含量。

本发明还提供了上述玉米淀粉合成调控基因ZmDof36在调节玉米籽粒淀粉大小中的应用，具体为，该基因对淀粉的大小起正调控作用，其过量表达可提高籽粒的宽度，增加籽粒的千粒重。

本发明相比现有技术具有以下优点：ZmDof36基因通过调控淀粉合成途径基因的表达提高玉米籽粒总淀粉的含量，改变淀粉的结构，说明ZmDof36基因对淀粉表达起正调控作用。同时该基因可以增加籽粒的宽度从而增加玉米的千粒重；该基因的发现为玉米籽粒品质和产量的交叉代谢调控提供新途径，对作物的遗传改良和培育优质高产的玉米材料具有重要的理论和实践指导意义；本发明产生的材料为优质高产的玉米育种提供新种质。

附图说明

图1为ZmDof36基因组织表达模式结果柱状图。

图2为pCAMBIA1305载体图谱。

图3为pZZ00005载体图谱。

图4为本发明的ZmDof36基因的细胞定位图；其中图A为载体构建示意图，图B为细胞定位示意图。

图5为本发明的ZmDof36转基因玉米籽粒中总淀粉含量、直链淀粉含量及支链淀粉蓝值测定结果(WT：对照组材料ZZC01；L3，L11，L16，L17：四个转基因株系)。

图6为本发明的ZmDof36转基因玉米籽粒扫描电镜分析(WT：对照组材料ZZC01；L11，L16：玉米转基因材料)。

图7为本发明的ZmDof36转基因玉米大小(WT:对照组材料ZZC01；L3，L11，L16，L17:四个转基因玉米株的籽粒)。

图8为本发明的ZmDof36转基因玉米千粒重测定结果(WT:对照组材料ZZC01；L3，L11，L16，L17:四个转基因玉米株的籽粒)。

具体实施方式

下面结合附图对本发明作进一步详细描述：

1、材料

本实施例所用方法如无特别说明均为本领域的技术人员所知晓的常规方法，所用的试剂等材料，如无特别说明，均为市售购买产品。

2、方法与结果

2.1ZmDof36基因组织表达模式分析

分别采取玉米B73自交系三叶期的根(root)、茎(stem)、叶(leaf)以及成苗时期的雄穗(tassel)、花丝(filament)、果穗(cluster)和授粉后的12d、14d、16d、18d、20d的胚乳(endosperm)和胚(embryo)。提取RNA，RNA的提取步骤参考E.Z.N.A.TM MagSi植物RNA提取试剂盒和使用核酸自动提取仪。Zmdof36基因荧光定量PCR引物为F-CCCGACAACTGATCCAATGC；R-GCATAACCACCGTCGTCGTT，以ZmTubulin(F：AGGCTTGTCTCCCAGGTCATC；R：GTTGGTCTGGAACTCGTTCACA)作为内参基因，定量反应使用的是Roche定量试剂盒，反应体系为25μL，各组分为染料混合液9.5μL，cDNA模板为2μL，上下游引物各(10μmol/L)各0.5μL，最后补去离子水至25μL。PCR反应参数如下：95℃，10min；95℃，15s；60℃，1min，共40个循环。采用2–^ΔΔCT[ΔCT＝CT_目标基因–CT_内参基因.ΔΔCT＝ΔCT_处理后–ΔCT_对照]法进行数据处理。

测定三次生物学重复，至少三次实验操作重复，测定结果见图1所示，图中可以看出，Zmdof36基因主要在胚乳中表达，且表达量随授粉天数的增加而增加。

2.2ZmDof36基因的克隆

选取玉米B73授粉后12d的胚乳cDNA为模板根据玉米B73数据库公布的基因序列，并结合克隆载体的多克隆位点，上下游酶切位点：上游BamH I-GGATCC，下游Xba I-TCTAGA，设计如下引物：

Zmdof36-F：5’-CGGGATCCATGGACATGAACTCCAACGC-3'，

Zmdof36-R：5’-GCTCTAGACTACCCCTCTGCCCCGTCGC-3'；

PCR扩增反应以玉米B73授粉后12d的胚乳cDNA为模板，其反应体系如下：

PCR反应程序：98℃，预变性10min；98℃，变性10s；60℃，退火5s；72℃，延伸1min，30个循环；72℃，复性10min；10℃保存。

扩增得到的产物在0.5μg/mL溴化乙锭的2.0％琼脂糖凝胶跑胶检测条带大小，回收目的条带，回收步骤参考Axygen公司的胶回收试剂盒。将回收片段与pEASYT₁CloningVector(全式金生物技术有限公司)连接，连接体系如下：

连接产物命名为T-Zmdof36，然后将T-Zmdof36转化到大肠杆菌感受态Trans5α细胞中，以提取的质粒做模板PCR扩增验证，同时用质粒做酶切检测，以筛选阳性克隆；对检测结果初步判断正确的连接片段，送去进行测序(华大生物公司)。测序结果使用MEGA4.0软件比对，结果与预测一致(详见基因序列)。

2.3ZmDof36基因的亚细胞定位分析

为了进一步了解玉米Zmdof36基因亚细胞定位特征，我们构建了亚细胞融合载体，如图2，将Zmdof36基因连接到改造后的pCAMBIA1305载体的GFP上游，命名为p1305-35S-Zmdof36-GFP，在设计构建p1305-35S-Zmdof36-GFP载体上Zmdof36片段引物时，需要除去Zmdof36基因的终止密码子，上下游酶切位点：上游Xba I(TCTAGA),下游BamHI(GGATCC)设计引物如下：

ZmDof36-XbaI-F 5'-GCTCTAGAATGGACATGAACTCCAACGC-3'

ZmDof36-BamHI-R 5'-CGGGATCCCCCCTCTGCCCCGTCGCTGC-3'。

构建正确的亚细胞定位的融合表达载体的农杆菌转化烟草，转化的烟草需长至3-4片叶时，同时提前配制LB液体培养基以及处理液(0.5M MES 200μL；1M MgCl₂100μL；100mM乙酰丁香酮(AS)10μL，转化步骤具体如下：

(1)同时培养农杆菌与p19菌株，测OD₆₀₀值；

(2)计算公式：V_construct＝n×V_final×0.5/OD₆₀₀

V₁₉＝n×V_final×0.3/OD₆₀₀

n：注射叶片数；V_final：2mL

(3)5000rpm，室温离心5min，弃上清。最后用配制好的处理液悬浮菌体，避光静置3h；

(4)用注射器注射叶片的背面，注射后避光48h，最后用共聚焦显微镜拍照观察。

结果如图4所示，转化p1305-35S-Zmdof36-GFP载体菌液的烟草。荧光信号定位于细胞核中，这说明Zmdof36符合转录调控因子的特征。

2.4ZmDof36转基因玉米的产生

原位转化液的配制：1/4MS培养基中加2％质量浓度的蔗糖，0.05％质量浓度的表面活性剂silwet-77，2mg/L 6-BA，1ng/L 2，4-D以及10mg/L乙酰丁香酮。每100ml培养基中加4ml农杆菌AG10菌液，于28℃，250rpm培养24小时。

将玉米须剪去，用5ml的注射器将菌液从玉米的下部1/3处直接注入玉米棒(材料为ZZC01)中，注入的量以玉米须处有菌液渗出为宜。经过两个月的生长，收获玉米粒。

将玉米粒晒干，播种，待幼苗长到3-4叶期时用配制的0.01％(质量)除草剂basta和QuickStix PAT/bar蛋白检测试纸条(AS013LS)检测表达载体pZZ00005-ZmDof36上所含的BAR基因蛋白，筛选阳性转基因植株，获得20株独立转化事件的玉米苗。

具体方法如下：

1)目的基因扩增：根据玉米B73的cDNA的基因序列设计引物、PCR扩增、胶回收获得ZmDof36基因；

2)构建载体：将ZmDof36基因转入到pZZ00005质粒中，构建pZZ00005-ZmDof36过量表达载体；

3)载体导入细胞：采用冻融法将步骤2)中pZZ00005-ZmDof36过量表达载体导入农杆菌AG10感受态细胞中，形成农杆菌AG10菌液；

4)原位转化液配制：将农杆菌AG10菌液加入到培养基中，培养基为1/4MS培养基中加2％质量浓度的蔗糖、0.05％质量浓度的表面活性剂silwet-77、2mg/L 6-BA、1ng/L2，4-D以及10mg/L乙酰丁香酮，在28℃，250rpm培养24小时，得转化菌液；

5)转化：将玉米须剪去，用注射器将转化菌液从玉米的下部1/3处直接注入玉米棒中，注入的量以玉米须处有菌液渗出为宜，经过两个月的生长，收获玉米粒；

6)筛选：将玉米粒晒干，播种，检测玉米中表达载体AG10-Zmdof36上所含的BAR基因蛋白，然后筛选阳性转基因植株。

2.5ZmDof36转基因玉米淀粉含量与结构的分析

(1)ZmDof36转基因玉米籽粒淀含量的测定

如图5，实验以玉米ZZC01为空白对照，ZmDof36转基因玉米籽粒总淀粉含量，直链淀粉含量和支链淀粉蓝值测定。

从中随机选取了4个独立转化事件转基因株进行总淀粉含量，直链淀粉含量和支链淀粉蓝值测定，每次实验测定至少重复三次。测定方法如下：

总淀粉测定时，现将烘干的种子去硬壳和胚，再使用组织研磨仪将其研磨成粉末，40℃过夜烘干，过0.5mm筛(35目)。总淀粉测定方法参考Megazyme总淀粉测定试剂盒(K-TSTA)。将研磨后样品(准确称量约100mg)加入到试管中(16x120mm)，确保全部样品位于试管底部；加入0.2mL乙醇溶液(80％v/v)，用漩涡混合器混合；放入搅拌架子，加入2mL 2MKOH至每个试管中，冰水混合浴中搅拌20min左右，重悬粉末和溶解抗性淀粉(注意：不要使用涡旋仪混匀，会使淀粉乳化，确保加入KOH时，试管处于剧烈震荡状态。这是为了避免淀粉形成团块难以溶解)；当试管在磁力搅拌器上搅拌时，加入8mL 1.2M醋酸钠缓冲液(pH3.8)至每个试管。立即加入0.1mL耐热α-淀粉酶(试剂盒配置溶液)和0.1mL淀粉葡糖苷酶(试剂盒配置溶液)，充分混合，在50℃下孵育；孵育30min，间断混匀；样品淀粉含量>10％：将全部的溶液转移到100mL的容量瓶中，用洗瓶冲洗试管，并倒入容量瓶中,然后用蒸馏水调整溶液体积至100mL，充分混匀。取部分溶液离心(1800rpm，10min)；转移两份稀释的样品溶液(0.1mL)到园底试管中(16×100mm)；加入3.0mL GOPOD溶液(试剂盒配置溶液)到每一个试管中(包括葡萄糖对照和试剂空白对照)，然后在50℃下孵育20min；葡萄糖对照包括0.1mL葡萄糖标准溶液(1mg/mL)+3.0mLGOPOD溶液。试剂空白对照：0.1mL蒸馏水+3.0mLGOPOD溶液；相对于试剂空白在510nm下测定每一个样品和葡萄糖质控的吸光度。计算公式如下：

ΔA＝相对于试剂空白所读取的吸光度

FV＝总体积(例如100mL或10mL)；0.1＝样品分析体积；1/1000＝转化从μg至mg；100/w＝淀粉作为干粉重量的比例；W＝干粉重量；162/180＝D葡萄糖转化为脱氢葡萄糖；淀粉％(占干物质比重)＝淀粉％×100/100-水分含量(％)。

直链淀粉测定时，首先对籽粒中淀粉进行提纯，将烘干去硬壳和胚的玉米种子在室温下用0.4％(质量分数)的NaOH溶液浸泡48h，料液(样本比0.4％的NaOH溶液)比为1:3，洗涤后再用0.4％的NaOH溶液浸泡24h，反复水洗至种子表面不再黏滑为止，沥干水分，用胶体磨粉碎，淀粉乳过筛(200目)，离心(3000r/min，20min)，取下层白色沉淀即为淀粉，将淀粉反复漂洗离心，40℃鼓风干燥，粉碎，过筛(200目)，即得淀粉纯品，将得到的淀粉用于直链淀粉的测定，具体测定方法参考直链淀粉测定试剂盒(K-AMYL)。

支链淀粉蓝值测定时，首先称量淀粉粉末0.5g后用无水乙醇分散在50ml离心管中；然后用15ml 0.5M的NaOH使淀粉变性，在100℃沸水浴中边加热边搅拌15min后置于室温中冷却，4000rpm离心20min后取上清。再用2M HCL中和上清液，加入丁醇：异戊醇(V:V＝1：1)后在100℃沸水浴中边加热边搅拌10min后置于室温冷却，3500rpm离心30min，所得上清为粗支链淀粉。最后将上步所得的粗支链淀粉依次加入1ml辛醇和5ml丁醇：异戊醇(V:V＝1：1)后在100摄氏度沸水中边加热边搅拌，时间到达后室温静置3小时，乙醇多次清洗即为支链淀粉，此步重复三次。将提纯的支链淀粉取0.005g，溶于水后定容，取5ml，再加入5mlI2-KI，室温下反应10分钟后，使用紫外分光光度计扫描500～700nm峰值，680nm处值即为蓝值。

实验以玉米ZZC01材料为对照，测定三次生物学重复，至少三次实验操作重复，测定结果见图5所示，ZmDof36转基因玉米籽粒总淀粉含量，直链淀粉含量和支链淀粉蓝值都有所上升，其中总淀粉含量上升幅度为1.89％-2.25％，直链淀粉含量上升幅度在2.63％-3.09％，支链淀粉蓝值四株转基因株系L3，L11，L16和L17蓝值和最大吸收波长都大于WT，这表明转基因支链淀粉中长分链数量增多。ZmDof36基因过量表达，上升了玉米籽粒中总淀粉的含量，直链淀粉的含量和支链淀粉的蓝值，说明ZmDof36基因能直接或间接影响淀粉合成过程中淀粉相关基因的表达，对淀粉表达起正调控作用。

(2)ZmDof36转基因玉米籽粒淀颗粒扫描电镜观察

扫描电镜(图6)具体实验操作方法如下：①取晒干的种子，去壳；使用锋利的切割刀，将种子从中间纵切成两半，分别标号装到离心管中；②向离心管中加入2.5％的戊二醛溶液，4℃过夜固定，倒掉固定液后，用0.1M pH7.0的磷酸缓冲液漂洗种子3次，每次15min；再用1％的锇酸溶液固定，常温下，1～2h，倒掉固定液后，用0.1M pH7.0的磷酸缓冲液漂洗种子3次；③从离心管中吸去磷酸缓冲液，加入梯度浓度的乙醇溶液分别对种子进行脱水处理。乙醇梯度浓度分别为：30％，50％，70％，80％和90％，每种浓度处理20min，再用纯乙醇洗脱2次，每次20min；④吸去离心管中的纯乙醇，用乙醇和醋酸异戊酯混合液(v:v＝1:1)处理种子30min(间隔摇动溶液)，再用纯醋酸异戊酯溶液处理种子1～2h；⑤使用临街干燥法，将种子从醋酸异戊酯溶液中挑到样品笼中，用滤纸吸去样品笼外围的溶液后，移入到仪器的样品杯中，盖上盖子，拧紧(注：在装样前，先打开仪器的电源，将温度设定为0℃预处理10～15min)；⑥打开的CO₂排气阀和仪器的进气阀，向样品杯中注入液体CO₂，当CO₂的量到样品杯的50％时，关闭进气阀，静止15～20min；⑦再打开仪器排气流量计阀门和进气阀，10min后关闭排气阀；当充入的CO₂到样品杯的80％左右时，关闭进液阀；⑧加温置换：将仪器温度调至20℃，放置15～20min后，杯中的CO₂会逐渐气化，当杯中的气压升到约为7000Pa时，醋酸异戊酯会与CO₂充分置换；⑨气化：将温度调至35～40℃时，杯内的CO₂达到临界点；当压力达到7134Pa时，5min后，打开流量计的排气阀，以1.0～1.51/min的速度排气，45～60min后结束排气，样品杯的压力降为0，当温度降至室温后，即可取出样品；⑩镀膜：将种子非观察面，用导电胶粘贴到样品台上，胶风干后，进行镀膜，本实验采用离子溅射镀膜法：装置由真空泵和真空罩两部分组成，真空罩内有阴阳极，阴极面装黄金靶，种子装在阳极面的样品座上。当真空罩中的真空度抽到1～10Pa时，在阴阳极之间加上2000V的直流电压，此时会产生弧光放电电场(在电场的作用下，真空罩里的残余气体分子会被电离为正离子和电子，正离子被阳极吸引轰击黄金靶，激发出黄金颗粒和电子，并被阳极吸引附着在种子表面形成导电膜)；置于扫描电镜下观察，拍照。

扫描电镜中(图6)分析发现，两个转基因植株淀粉颗粒要比野生型致密且转基因淀粉颗粒为多边形，野生型为圆形。ZmDof36基因过量表达颗粒的致密度以及形状起到了重要的影响。

2.6ZmDof36转基因玉米籽粒的长，宽，厚和千粒重测定

我们选取四株独立转化事件的转基因株的T₃代籽粒进行玉米籽粒的长，宽，厚和千粒重测定。千粒重使用电子天平，每千粒计数称重，四个独立转化株其T₃代籽粒分别选取1000粒计重，每次三个重复。

实验结果见图7，转基因玉米籽粒大小明显大于对照组，实验结果见图8，宽度和千粒重明显高于对照组。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

本发明不限于以上对实施例的描述，本领域技术人员根据本发明揭示的内容，在本发明基础上不必经过创造性劳动所进行的改进和修改，都应该在本发明的保护范围之内。

SEQUENCE LISTING

<110> 安徽农业大学

<120> 一种玉米籽粒淀粉合成调控基因ZmDof36及其应用

<130> 2018/11/22

<160> 2

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 1056

<212> DNA

<213> Pabellonia incrassata

<400> 1

atggacatga actccaacgc caacaacagc actgccgcag cagcatcggc tcccatcaac 60

aaccagcagg aggctgtggt gtcatcccca accagaaagg agcaagccag gaaccccaag 120

aaggcgcggg cggcgccgca gcaggcgggc ggcagcgggg agcctaggcc gcggcctccg 180

ccggacgcgg cgcacagctg cccgcgctgc tcctccacca acacaaagtt ctgctactac 240

aacaactaca acctgacgca gccgcgctac ttctgcaaga cgtgccgccg ctactggaca 300

cacggcggca ccctccgcaa cgtccccgtc ggcggcggct gccgcaggaa caagcgcgcc 360

tccagctcct cgtccccgtt tccgggcccc tccagcaccg ccgccaccag cgccgcgatg 420

gagaagaccg tcagcacgcg gctgatgctg atggcgacca gcaccatggc gatgccctcc 480

ccgacggcag gcctgtttgt tcccgatgac atgtccccgg cattcacgcc gacgacgggc 540

ggtagcggct tcgacgacct cgccggcatg gacgagcagc accagcaggg cttcctgccc 600

ttctcgccgc tgtccctgtc cgaccaggcg ccggagctgg ctcctggagg agggggtgac 660

acgacgccgt ctttcctgga catgctgaca ggagggtatc tcgatggcgg cggctacggc 720

ggcatgagcg gtggcagcga tgcgatggac atgccgttct cgctgcctga gatggggccc 780

ccgacaactg atccaatgcc gtttcagctc cagtggacgt catcagagct tgacaactac 840

atcaacgacg acggtggtta tgcagcagga ccagccgccg gagtgcagca gcagcagcag 900

cagcagcagc agcagattaa tggtggtgat caccagaagc aggacgagaa caaagaggcg 960

gggaacggca aaggcaacga cgacggcggc ggcgggtcgt cgtcggtgta cagcttctgg 1020

atgaacacca gcggcagcga cggggcagag gggtag 1056

<210> 2

<211> 351

<212> PRT

<213> Pabellonia incrassata

<400> 2

Met Asp Met Asn Ser Asn Ala Asn Asn Ser Thr Ala Ala Ala Ala Ser

1 5 10 15

Ala Pro Ile Asn Asn Gln Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Thr Arg

20 25 30

Lys Glu Gln Ala Arg Asn Pro Lys Lys Ala Arg Ala Ala Pro Gln Gln

35 40 45

Ala Gly Gly Ser Gly Glu Pro Arg Pro Arg Pro Pro Pro Asp Ala Ala

50 55 60

His Ser Cys Pro Arg Cys Ser Ser Thr Asn Thr Lys Phe Cys Tyr Tyr

65 70 75 80

Asn Asn Tyr Asn Leu Thr Gln Pro Arg Tyr Phe Cys Lys Thr Cys Arg

85 90 95

Arg Tyr Trp Thr His Gly Gly Thr Leu Arg Asn Val Pro Val Gly Gly

100 105 110

Gly Cys Arg Arg Asn Lys Arg Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Phe Pro

115 120 125

Gly Pro Ser Ser Thr Ala Ala Thr Ser Ala Ala Met Glu Lys Thr Val

130 135 140

Ser Thr Arg Leu Met Leu Met Ala Thr Ser Thr Met Ala Met Pro Ser

145 150 155 160

Pro Thr Ala Gly Leu Phe Val Pro Asp Asp Met Ser Pro Ala Phe Thr

165 170 175

Pro Thr Thr Gly Gly Ser Gly Phe Asp Asp Leu Ala Gly Met Asp Glu

180 185 190

Gln His Gln Gln Gly Phe Leu Pro Phe Ser Pro Leu Ser Leu Ser Asp

195 200 205

Gln Ala Pro Glu Leu Ala Pro Gly Gly Gly Gly Asp Thr Thr Pro Ser

210 215 220

Phe Leu Asp Met Leu Thr Gly Gly Tyr Leu Asp Gly Gly Gly Tyr Gly

225 230 235 240

Gly Met Ser Gly Gly Ser Asp Ala Met Asp Met Pro Phe Ser Leu Pro

245 250 255

Glu Met Gly Pro Pro Thr Thr Asp Pro Met Pro Phe Gln Leu Gln Trp

260 265 270

Thr Ser Ser Glu Leu Asp Asn Tyr Ile Asn Asp Asp Gly Gly Tyr Ala

275 280 285

Ala Gly Pro Ala Ala Gly Val Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln

290 295 300

Gln Ile Asn Gly Gly Asp His Gln Lys Gln Asp Glu Asn Lys Glu Ala

305 310 315 320

Gly Asn Gly Lys Gly Asn Asp Asp Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Val

325 330 335

Tyr Ser Phe Trp Met Asn Thr Ser Gly Ser Asp Gly Ala Glu Gly

340 345 350

Claims

1.一种玉米淀粉合成调控基因ZmDof36在调节玉米籽粒大小和籽粒千粒重中的应用,所述ZmDof36基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种玉米淀粉合成调控基因ZmDof36在调节玉米籽粒中总淀粉含量、直链淀粉含量以及支链淀粉结构中的应用,所述ZmDof36基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1或2所述的一种玉米淀粉合成调控基因ZmDof36的应用，其特征在于：所述基因ZmDof36定位于细胞核中，进行转录调控基因表达。