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CN109863160B - 核苷磷酸类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

核苷磷酸类化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

Description

核苷磷酸类化合物及其制备方法和用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年12月23日提交的中国专利申请201611204909.4、2017年1月24日提交的中国专利申请201710059345.8以及2017年10月23日提交的中国专利申请201710991293.8的优先权，所述申请的公开内容以其整体援引加入本文。
发明领域
本发明涉及一种核苷磷酸类化合物、包含其的药物组合物、其制备方法及其作为NS5B聚合酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂或逆转录酶抑制剂在预防或治疗病毒性疾病或癌症中的用途。
发明背景
病毒由一种核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质构成或仅由蛋白质构成(如朊病毒)。病毒可引起多种传染性疾病，常见的由病毒引起的疾病包括但不限于甲型病毒性肝炎、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、流行性感冒、疱疹和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。
目前临床使用的抗病毒药物通过抑制病毒的附着、脱壳、病毒基因复制、成熟或释放，或者通过影响宿主的免疫系统来发挥作用，其主要包括RNA、DNA聚合酶抑制剂，逆转录酶抑制剂和干扰素等。
丙型肝炎病毒(HCV)是一种单链、正链RNA病毒，属于肝炎病毒属黄病毒科。根据编码NS5B核糖核酸依赖型核糖核酸聚合酶的基因不同，丙型肝炎病毒分为6个基因型，50个亚型。不同基因型在全球的分布都不一样。在北美和欧洲，发现了基因型1、2、3，其中基因型1占大多数。非洲几乎只存在基因4型、5型感染的病人。中国常见的基因型为1b和2a，其中以1b为主，6型主要见于港澳地区(Simmonds，P.Journal of General Virology，2004，85，3173-3188)。其中，肝硬化及肝癌患者基因型1b明显高于慢性肝炎患者。基因1b型复发丙型肝炎，其肝病较其他基因型要严重。基因型1a，2a合并乙肝感染的发生率较高，大部分(74％)急性肝炎患者为基因型1a。基因型4感染易引起失代偿性肝脏并发症。基因型3a感染与脂肪肝的关系较为密切。
现有技术中，标准的治疗方案是聚乙二醇干扰素联合利巴韦林。然而该疗法仅对40-50％的基因型1病人和75％的基因型2、3病人有效(Zeuzem，S.，et al.Journal ofViral Hepatitis，2009，16，75-90)。对某些亚人群，聚乙二醇干扰素联合利巴韦林的疗效不佳。因此，迫切需要发展安全有效的“直接作用抗病毒药物”。第一代丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂特拉匹韦和波西普韦相继面世。这两种药物与聚乙二醇干扰素/利巴韦林联用，可以提高基因1型病人的病毒清除率，缩短疗程。但是这种新的三联组合疗法带来新的问题，例如更多的副作用，给药方案复杂，易发生耐药，并且仅对感染基因型1病毒的病人有效(Kwong，A.D.et al.Current Opinion in Pharmacology，2008，8，522-531)。新的“直接作用抗病毒药物”需要满足以下三点要求：1)可以口服给药；2)对所有基因型均有效；3)无需和聚乙二醇干扰素联合利巴韦林联用。
HCV病毒体为呈球形的单股正链RNA病毒，约含9600个编码并由3010个氨基酸组成的多聚蛋白，其基因组排列顺序为：CE1E2/NS1NS2NS3NS4ANS4BNS5ANS5B。HCV病毒多聚蛋白经宿主细胞和病毒自身蛋白酶作用，裂解成各自独立的病毒蛋白，包括三种结构蛋白(即结构蛋白C、结构蛋白El和结构蛋白E2/NS1)和四种非结构蛋白(即非结构蛋白NS2、非结构蛋白NS3、非结构蛋白NS4和非结构蛋白NS5)。其中，结构蛋白El和结构蛋白E2/NS1为糖蛋白，能产生抗HCV的中和作用。非结构蛋白NS为病毒复制提供催化结构。目前，还不清楚非结构蛋白NS2和非结构蛋白NS4的功能。非结构蛋白NS3具有螺旋酶活性，并参与解旋HCV-RNA分子，进而释放NS5B，而NS5B为依赖于RNA的RNA聚合酶(即HCV NS5B聚合酶)，该聚合酶参与HCV复制周期中由用作模板的单链病毒RNA合成双链RNA的反应。因此，若化合物可有效地抑制HCV NS5B聚合酶就能阻断双链HCV RNA合成，则可有效地控制HCV病毒感染。
核苷类似物必须能够转化为三磷酸核苷，才能起到抑制病毒聚合酶的作用。这一过程需要三种不同激酶的参与。磷酸化的效率决定了核苷类似物作为病毒聚合酶抑制剂的活性。另外，抑制剂的活性也取决于三磷酸核苷的存在时间。三磷酸核苷的存在时间越长，抑制剂的活性也越高。在磷酸化的过程中，核苷类似物及其单磷酸，二磷酸代谢物可能并不是相应激酶的良好底物。研究表明在磷酸化过程中，第一个激酶对底物的选择性最强。因此第一步磷酸化通常是最困难的步骤。为了克服这一困难，将单磷酸输送到细胞内是必要的手段。但是，单磷酸核苷带负电荷，很难通过细胞膜，而且容易被磷酸酯酶降解。
索菲布韦(sofosbuvir)是一种丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶抑制剂。它是尿嘧啶核苷酸类似物，具有核苷磷酰胺酯结构。这种结构赋予该类型药物具有良好的细胞通透性和血浆稳定性。索菲布韦可经肝细胞代谢为尿苷三磷酸类似物活性成分，并与胞内的尿苷三磷酸竞争，插入到新产生的核苷酸链中，使RNA链的延伸提前终止，达到抑制RNA聚合酶的作用(Journal of Medicinal Chemistry 2010，53，7202-7218)。
核苷三磷酸在肝脏中的生成量和存在时间直接影响病毒聚合酶NS5B的抑制效果。索菲布韦对丙肝的基因3型感染者的药效较差，疗程24周；而对于基因1、2和4型感染者的疗程仍然需要12周。因此，发明更有效的新型核苷磷酸类衍生物具有显著意义和应用价值。
乙型肝炎病毒，是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科，其DNA的合成依赖于乙肝病毒DNA聚合酶。利用DNA聚合酶抑制剂作为抗乙肝病毒药物已经成为一个极具竞争力的选择。替诺福韦(tenofovir，PMPA)，是一种核苷酸类DNA聚合酶和逆转录酶抑制剂，具有抗HBV和HIV的活性。其磷酰胺酯类衍生物替诺福韦艾拉酚胺(TAF)已被FDA批准用于治疗人类免疫缺陷综合征和乙型病毒肝炎。TAF在肝细胞内通过酯酶水解、磷酸化等作用生成腺苷三磷酸类似物，后者插入新产生的DNA链，从而阻断DNA聚合酶催化的DNA合成，抑制病毒复制(WO2013025788A1；Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids，2001，20，1085-1090)。核苷类抗癌药物，在体内通过磷酸化代谢过程生成核苷三磷酸，后者插入DNA链，抑制DNA的合成，阻止细胞由G1期向S期的进展，造成肿瘤细胞G1期周期阻滞，从而抑制肿瘤细胞的恶性增殖(Oncology.2002，62(4)，354-362)。
综上所述，许多核苷类药物在抗病毒和抗癌等领域发挥积极作用，关键之处在于这些药物是作为核苷类似物被体内细胞吸收代谢，并阻止病毒、肿瘤细胞的RNA或DNA合成。其中，核苷三磷酸类似物作为体内代谢物是重要的活性成分，其生成速率、浓度和存留时间决定了药效。
发明概述
本发明的一方面提供一种核苷磷酸类化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物。所述化合物经肝组织代谢后产生的三磷酸核苷代谢物质的量多，并且被代谢转化为三磷酸核苷代谢物质的速度快。因此，本发明的核苷磷酸类化合物(下文中也称为“本发明的化合物”)可作为NS5B聚合酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂或逆转录酶抑制剂，用于诸如丙型病毒性肝炎(HCV)、乙型病毒性肝炎(HBV)、甲型病毒性肝炎(HAV)、流行性感冒、疱疹和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病毒性疾病或癌症等疾病的治疗。本发明的化合物可以在体内进行有效地代谢，从而转化为具有活性的三磷酸核苷代谢物质。与现有的(HCV)NS5B聚合酶抑制剂、乙型肝炎病毒DNA聚合酶抑制剂、逆转录病毒逆转录酶抑制剂相比，本发明的化合物可以更有效地转化为三磷酸核苷代谢物质，因而具有更为优异的活性。
具体而言，本发明的化合物具有以下式(I)所示的结构：
Figure GPA0000265569080000041
其中，L选自取代或未取代的C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选地被一个或多个-O-、-NR8-或-S-间断；或者
L表示式(c)、式(d)或式(e)所示的基团，其中
Figure GPA0000265569080000051
表示单键或双键，并且1位置处与Base连接，2位置处与磷原子(P)连接：
Figure GPA0000265569080000052
Base表示式(a)或式(b)所示的基团：
Figure GPA0000265569080000053
Figure GPA0000265569080000054
表示单键或双键；
M表示N或NR8；
W表示H、NR8R9、NR8、CH2、O或S；
Q表示O、S、NR8或CH2；
Z在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个Z，则其各自可以相同也可以不同；
p表示0、1、2、3、4或5；
条件是，当M被双键连接时，则W被单键连接；当M被单键连接时，则W被双键连接；
U表示O、S、NR8或CR10R11；
E表示CR10、CR10R11或S，条件是，当E被双键连接时，其为CR10；
G在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个G，则其各自可以相同也可以不同；
q表示0-5的整数；
Ar1表示C6-14芳基或5-14元杂芳基；
R1在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C1-6卤代烷基、取代或未取代的C1-6烷硫基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C2-10烯基、或者取代或未取代的C2-10炔基，如果存在多个R1，则其各自可以相同也可以不同；
m表示0-7的整数；
X表示CH2、-S-、-O-或-NR8-；
R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基；或者R2和R3与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；
R4和R5在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基；或者R4和R5与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；或者
R3和R4彼此连接、与它们各自所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；
R6表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基或者取代或未取代的C1-6烷氧基；
R7在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6卤代烷基、取代或未取代的C1-6烷硫基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C2-10炔基、或者取代或未取代的C1-6烷氧基，如果存在多个R7，则其各自可以相同也可以不同；或者
R6和R7彼此连接、与它们之间间隔的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8碳环基或3-10元杂环基；
n表示0-7的整数；
Ar2表示C6-14芳基或5-14元杂芳基；
r和s各自独立地表示1、2或3；
R8和R9在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个R8、R9，则其各自可以相同，也可以不同；并且
R10和R11在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，或者R10和R11一起形成C1-6亚烷基，如果存在多个R10、R11，则其各自可以相同，也可以不同。
本发明的另一方面提供一种药物组合物，其包含本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，其中所述药物组合物是固体制剂、半固体制剂、液体制剂、气态制剂的形式。
本发明的另一方面提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病的药物中的用途。
本发明的另一方面提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物在制备用于预防或治疗病毒性疾病或癌症的药物中的用途。
本发明的另一方面提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物，其用于预防或治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病。
本发明提供的另一方面上述本发明的式(I)所示的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物，其用于预防或治疗病毒性疾病或癌症。
本发明的另一方面提供预防或治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
本发明的另一方面预防或治疗病毒性疾病或癌症的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
本发明的另一方面提供制备本发明的化合物的方法，其包括以下步骤：
路线1
Figure GPA0000265569080000071
步骤一：使式2所示的三卤氧磷与式1所示的化合物反应，得到式3所示的化合物；
步骤二：使式3所示的化合物与式4所示的化合物反应，得到式5所示的化合物；
步骤三：使式5所示的化合物与式6所示的五氟苯酚反应，得到式7所示的化合物；和
步骤四：使式7所示的化合物与式8所示的化合物反应，得到式(I)所示的化合物；
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L和Base如上文所定义；并且
Y彼此相同或不同，且各自独立地选自卤素；
或者
路线2
Figure GPA0000265569080000072
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L和Base如上文所定义；
或者：
路线3
Figure GPA0000265569080000081
所述路线3是磷手性纯化合物(I″)的合成方法，
其中，
Figure GPA0000265569080000082
表示实楔形
Figure GPA0000265569080000083
或虚楔形
Figure GPA0000265569080000084
化学键中的任意一种；且
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L和Base如上文所定义。
发明详述
定义
除非在下文中另有定义，本文中所用的所有技术术语和科学术语的含义意图与本领域技术人员通常所理解的相同。提及本文中使用的技术意图指在本领域中通常所理解的技术，包括那些对本领域技术人员显而易见的技术的变化或等效技术的替换。虽然相信以下术语对于本领域技术人员很好理解，但仍然阐述以下定义以更好地解释本发明。
在本发明中，取代基以及变量的组合只在这种组合可以带来化学上稳定的化合物的情况下才被允许。在取代基自身被2个以上基团取代的情况下，只要可以产生稳定的结构，那么这些复数个基团可以存在于相同的碳或者不同的碳。
如本文中所使用，术语“包括”、“包含”、“具有”、“含有”或“涉及”及其在本文中的其它变体形式为包含性的(inclusive)或开放式的，且不排除其它未列举的元素或方法步骤。
在本发明中，碳原子“C”的下标数字表示碳原子的数目，例如，C1表示1个碳原子，C2表示2个碳原子，Cp-q表示p-q(0＜p＜q)个碳原子。碳原子“C”后所附基团名称表明该基团的种类，例如，C1烷基表示甲基，C2烯基表示乙烯基，Cp-q烷基表示碳原子数为p-q的烷基。
如本文中所使用，术语“卤代”或“卤素”意指氟、氯、溴或碘。
如本文中所使用，术语“C1-6烷基”是指碳原子数为1～6个的直链状或支链状的脂肪族饱和烃基，例如可以列举甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基等。优选碳原子数为1～4的烷基(即C1-4烷基)，可以列举例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基等。
如本文中所使用，术语“C1-6烷氧基”是指烷基部分为上述“C1-6烷基”的直链、或者支链的脂肪族饱和烃氧基，例如可以列举甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、戊氧基、异戊氧基、己氧基等。优选的是C1-4烷氧基。
如本文中所使用，术语“C1-6烷撑基”是指从直链状或支链状的“C1-6烷烃”的两个不同碳原子上各失去一个氢原子而形成的二价基团。例如可以列举甲撑基(-CH2-)、乙撑基(二亚甲基，-CH2CH2-)、丙撑基(三亚甲基，-CH2CH2CH2-)、丁撑基(四亚甲基，-CH2CH2CH2CH2-)、异丁撑基(-CH2CH(CH3)CH2-)等。其中优选C1-4烷撑基，更优选C1-3烷撑基。
如本文中所使用，术语“C1-6亚烷基”是指从直链状或支链状的“C1-6烷烃”的相同碳原子上失去两个氢原子而形成的二价基团。例如可以列举亚甲基(CH2＝)、亚乙基(CH3CH＝)、亚丙基(CH3CH2CH＝)、亚丁基(CH3CH2CH2CH＝)等。其中优选C1-4亚甲基，更优选C1-3亚甲基。
如本文中所使用，术语“C2-10烯基”是指具有1个以上不饱和双键的碳原子数为2～10个的直链或者支链状的脂肪族烃基，例如可以列举乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、2-丁烯-1-基、3-丁烯-1-基、2-戊烯-1-基、3-戊烯-1-基、4-戊烯-1-基、5-己烯-1-基、4-己烯-1-基、3-己烯-1-基、2-己烯-1-基、3-甲基-2-丁烯-1-基、3-甲基-3-戊烯-1-基、3-甲基-2-戊烯-1-基、4-甲基-3-戊烯-1-基、4-甲基-2-戊烯-1-基和2-甲基-2-戊烯-1-基等。优选的是具有一个双键。优选的是C2-6烯基。
如本文中所使用，术语“C2-10炔基”是指具有1个以上不饱和三键的碳原子数为2～10个的直链或者支链状的脂肪族烃基，例如可以列举乙炔基、1-丙炔-1-基、2-丙炔-1-基、2-丁炔-1-基、3-丁炔-1-基、2-戊炔-1-基、3-戊炔-1-基、4-戊炔-1-基、5-己炔-1-基、4-己炔-1-基、3-己炔-1-基和2-己炔-1-基等。优选的是具有一个三键。优选的是C2-6炔基。
如本文中所使用，术语“C3-8环烷基”是指碳原子数为3～8个的环状脂肪族烃基，例如可以列举环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。优选的是C3-4环烷基，可以列举例如环丙基或环丁基。与此相应地，“C4-8环烷基”是指碳原子数为4～8个的环烷基。在某些情况下，所述环烷基可以与芳基或杂芳基稠合。
如本文中所使用，术语“C3-8杂环烷基”是指在上述“C3-8环烷基”的环上进一步包含至少一个选自N、O和S的杂原子的基团，例如可以列举氧杂环丁烷基、氮杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、四氢呋喃基、吡咯烷基、咪唑烷基、二噁烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基等。优选的是在C3-8环烷基中具有一个选自N、O和S的杂原子。优选的是C3-6杂环烷基。与此相应地，“C4-8杂环烷基”是指碳原子数为4～8个的杂环烷基。术语“3-10元杂环烷基”是指具有3至10个环原子(其中包括至少一个选自N、O和S的杂原子)的杂环烷基；术语“4-10元杂环烷基”是指具有4至10个环原子(其中包括至少一个选自N、O和S的杂原子)的杂环烷基。在某些情况下，所述杂环烷基与芳基或杂芳基稠合。
如本文中所使用，术语“芳烷基”表示芳基取代的烷基，其中所述芳基和所述烷基如本文中所定义。通常，所述芳基可具有6-14个碳原子，并且所述烷基可具有1-6个碳原子。示例性芳烷基包括但不限于苄基、苯基乙基、苯基丙基、苯基丁基等。
如本文中所使用，术语“烷硫基”意指通过硫原子连接至母体分子部分的如上文所定义的烷基。C1-6烷硫基的代表性实例包括但不限于甲硫基、乙硫基、叔丁硫基、己硫基等。
如本文中所使用，术语“C4-8碳环基”是指碳原子数为4～8个的环状基团，其可以是饱和环，也可以是不饱和环。饱和环的情况即相当于碳原子数为4～8个的环烷基。不饱和环的情况可以包括C4-8环烯基，其是在环上具有至少一个不饱和双键的碳原子数为4～8个的环状烃基，例如可以列举环戊烯基、环己烯基、环庚烯基、环辛烯基等；C4-8环炔基，其是在环上具有至少一个不饱和三键的碳原子数为4～8个的环状烃基，例如可以列举环己炔基、环庚炔基等；还可以是具有芳香性的C4-8碳环基，例如苯基。
如本文中所使用，术语“C4-8杂环基”是指在上述C4-8碳环基的环上进一步包含至少一个选自N、O和S的杂原子的基团，其可以是饱和环，也可以是不饱和环。饱和环的情况即相当于碳原子数为4～8个的杂环烷基。不饱和环的情况是指在上述碳原子数为4～8个的杂环烷基的任意位置具有至少一个不饱和双键和/或不饱和三键而成的基团，例如可以列举咪唑啉基、异噁唑啉基、吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等。
如本文中所使用，术语“C6-10芳基”是指具有6～8个碳原子的单环或双环芳烃基，如苯基、1-萘基、2-萘基等。
如本文中所使用，术语“C3-10杂芳基”是指在至少一个环中含有至少一个选自N、O和S的杂原子的碳原子数为3-10的芳族5-或6-元单环基团或者9-或10-元双环基团，所述含杂原子的环优选具有1、2或3个选自O、S和N的杂原子。含杂原子的杂芳基的各环可含有1个或2个氧或硫原子和/或1至4个氮原子，条件是各环中的杂原子总数为4个或更少且各环具有至少一个碳原子。氮和硫原子可任选被氧化，且氮原子可任选被季铵化。作为单环杂芳基，例如可以列举吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等。作为双环杂芳基，例如可以列举吲哚基、苯并噻唑基、苯并间二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃并吡啶基、二氢异吲哚基、四氢喹啉基等。术语“5-6元杂芳基”是指具有5或6个环原子(其中包括至少一个选自N、O和S的杂原子)的杂芳基，例如可以列举吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等；术语“5-14元杂芳基”是指具有5至14个环原子(其中包括至少一个选自N、O和S的杂原子)的杂芳基。
在本发明中，上述“C1-6烷基”、“C1-6烷氧基”、“C1-6烷撑基”、“C1-6亚烷基”、“C2-10烯基”、“C2-10炔基”、“C3-8环烷基”、“C3-8杂环烷基”、“C4-8碳环基”、“C4-8杂环基”、“C6-10芳基”和“C3-10杂芳基”的取代基例如可以列举一种或多种选自以下的相同或不同的基团：氰基、羟基、羧基、卤素(F、Cl、Br、I)、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基(例如CF3O)、C3-6环烷基(例如环丙基)、C1-6烷氧基(例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等)、C2-10烯基氧基(例如乙烯基氧基、烯丙基氧基等)、C1-6烷氧羰基(例如甲氧羰基、乙氧羰基、叔丁氧羰基等)、硝基、亚硝基、叠氮基、氨基、氨基羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基氨基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷基氨基羰基C1-6烷基、氨基羰基氧基、氨基C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基氨基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基、C2-10烯基、C2-10炔基、C1-6烷基氨基(例如甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基等)、酰基氨基(例如乙酰氨基、苯甲酰氨基等)、C6-10芳基烷基氨基(例如苄基氨基、三苯甲基氨基)、羟基氨基、C1-6烷基磺酰基氨基(例如甲基磺酰基氨基)、C1-6烷基亚磺酰基氨基(例如甲基亚磺酰基氨基)、亚氨基、羟基亚氨基、C1-6烷基亚氨基(例如甲基亚氨基、乙基亚氨基、二甲基亚氨基等)、C1-6烷氧基亚氨基(例如甲氧基亚氨基、乙氧基亚氨基等)、酰基亚氨基(例如乙酰基亚氨基、苯甲酰基亚氨基等)、叠氮基、C6-10芳基(例如苯基等)、C6-10芳基C1-6烷基(例如苄基、苯基乙基等)、C6-10芳基C1-6烷氧基(例如苄基氧基)、C1-6烷基羰基氧基、C4-8杂环基(包含脂族杂环基和杂芳基)、非芳族C4-8杂环基(例如吡咯啉基、哌啶基、哌嗪基、吡咯烷基、吗啉基、吗啉代等)、C3-10杂芳基(例如呋喃基、噻吩基、吡啶基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噁唑基、噁二唑基、四唑基、吲哚基、苯并呋喃基等)、C3-10杂芳基C1-6烷基(吡啶基甲基、吡啶基乙基等)、氰基、异氰基、异氰酸根合、硫代氰酸根合、异硫代氰酸根合、巯基、C1-6烷硫基(例如甲硫基等)、C1-6烷基磺酰基(例如甲基磺酰基、乙基磺酰基)、C1-6烷基亚磺酰基、氨基羰基、C1-6烷基氨基羰基、(例如甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、二甲基氨基羰基等)、氨磺酰基、烷基氨基羰基烷基氨磺酰基、酰基(例如甲酰基、乙酰基等)、甲酰氧基、硫代甲酰基、硫代羧基、二硫代羧基、硫代氨基甲酰基、亚磺基、磺基、肼基、叠氮基、脲基、脒基、胍基、苯二甲酰亚胺基、三C1-6烷基甲硅烷基(三甲基甲硅烷基等)、氧代基等。上述取代基优选地选自：卤素、氰基、硝基、羧基、羟基、氨基、氨基羰基、叠氮基、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧羰基、C1-6烷硫基、C1-6烷基亚磺酰基、C1-6烷基磺酰基、C1-6烷基氨基磺酰基、C1-6烷基磺酰胺基、C1-6烷基氨基、C1-6烷基羰基氧基、C1-6烷基氨基羰基、氨基羰基氨基、C1-6烷基氨基羰基氨基、氨基羰基C1-6烷基、C1-6烷基氨基羰基C1-6烷基、氨基羰基氧基、氨基C1-6烷氧羰基、C1-6烷氧羰基氨基、C1-6烷氧基C1-6烷基氨基、C2-10烯基、C2-10炔基、C6-10芳基和C4-8杂环基(包含脂族杂环基和杂芳基)；特别优选地选自：羟基、卤素、叠氮基、甲基、乙基、丙基、丁基、卤代甲基、卤代乙基、卤代丙基、卤代丁基、羧基、氰基和硝基。
除非另外指明，否则如本文中所使用，取代基的连接点可来自取代基的任意适宜位置。
当取代基的键显示为穿过环中连接两个原子的键时，则这样的取代基可键连至该可取代的环中的任一成环原子。
本发明还包括所有药学上可接受的同位素标记的化合物，其与本发明的化合物相同，除了一个或多个原子被具有相同原子序数但原子质量或质量数不同于在自然界中占优势的原子质量或质量数的原子替代。适合包含入本发明的化合物中的同位素的实例包括(但不限于)氢的同位素(例如2H、3H，优选2H)；碳的同位素(例如11C、13C及14C)；氯的同位素(例如36Cl)；氟的同位素(例如18F)；碘的同位素(例如123I及125I)；氮的同位素(例如13N及15N)；氧的同位素(例如15O、17O及18O)；磷的同位素(例如32P)；及硫的同位素(例如35S)。某些同位素标记的本发明的化合物(例如掺入放射性同位素的那些)可用于药物和/或底物组织分布研究(例如分析)中。放射性同位素氚(即3H)及碳-14(即14C)因易于掺入且容易检测而特别可用于该目的。用正电子发射同位素(例如11C、18F、15O及13N)进行取代可在正电子发射断层显像术(PET)研究中用于检验底物受体占据情况。被同位素标记的本发明的化合物可通过与描述于随附路线和/或实施例及制备中的那些类似的方法通过使用适当的被同位素标记的试剂代替之前采用的非标记的试剂来制备。本发明的药学上可接受的溶剂合物包括其中结晶溶剂可被同位素取代的那些，例如，D2O、丙酮-d6或DMSO-d6。
本文中可使用实线
Figure GPA0000265569080000111
波浪线
Figure GPA0000265569080000112
实楔形
Figure GPA0000265569080000113
或虚楔形
Figure GPA0000265569080000114
描绘本发明的化合物的化学键。使用实线以描绘键连至不对称原子的键欲表明，包括该原子处的所有可能的立体异构体(例如，特定的对映异构体、外消旋混合物等)。使用波浪线以描绘键连至不对称原子的键欲表明，该键为实楔形
Figure GPA0000265569080000115
或虚楔形
Figure GPA0000265569080000116
键中的任意一种。使用实或虚楔形以描绘键连至不对称原子的键欲表明，存在所示的立体异构体。当存在于外消旋混合物中时，使用实及虚楔形以定义相对立体化学，而非绝对立体化学。除非另外指明，否则本发明的化合物意欲可以立体异构体(其包括顺式及反式异构体、光学异构体(例如R及S对映异构体)、非对映异构体、几何异构体、旋转异构体、构象异构体、阻转异构体及其混合物)的形式存在。本发明的化合物可表现一种以上类型的异构现象，且由其混合物(例如外消旋混合物及非对映异构体对)组成。
本发明的化合物含有一个或多个不对称中心，由此能够以外消旋物、外消旋混合物、单一对映异构体、非对映异构体混合物和单一非对映异构体等的形式存在。
本发明涵盖本发明的化合物的所有可能的结晶形式或多晶型物，其可为单一多晶型物或多于一种多晶型物的任意比例的混合物。
还应当理解，本发明的某些化合物可以游离形式存在用于治疗，或适当时，以其药学上可接受的衍生物形式存在。在本发明中，药学上可接受的衍生物包括但不限于：药学上可接受的盐、酯、溶剂合物、代谢物或前药，在将它们向需要其的患者给药后，能够直接或间接提供本发明的化合物或其代谢物或残余物。因此，当在本文中提及“本发明的化合物”时，也意在涵盖化合物的上述各种衍生物形式。
本发明的化合物的“药物上可接受的盐”包含与硫酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、或硝酸等无机酸形成的盐，或者与乙酸、苯甲酸、草酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、富马酸、马来酸、柠檬酸、丙二酸、扁桃酸、葡萄糖酸、半乳糖二酸、葡庚糖酸、乙醇酸、谷氨酸、三氟醋酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、樟脑磺酸、或萘-2-磺酸等有机酸形成的盐，或者与锂离子、钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、锌离子、铝离子等1种或多种金属离子形成的盐，或者与氨、精氨酸、赖氨酸、哌嗪、胆碱、二乙基胺、4-苯基环己基胺、2-氨基乙醇、苄星青霉素等胺形成的盐。只要是药学上可接受的盐即可，没有特别限定。由游离体向该盐的转换可以用现有的方法来进行
如本文中所使用，术语“酯”意指衍生自本申请中各个通式化合物的酯，其包括生理上可水解的酯(可在生理条件下水解以释放游离酸或醇形式的本发明的化合物)。本发明的化合物本身也可以是酯。
本发明的化合物可以溶剂合物(优选水合物)的形式存在，其中本发明的化合物包含作为所述化合物晶格的结构要素的极性溶剂，特别是例如水、甲醇或乙醇。极性溶剂特别是水的量可以化学计量比或非化学计量比存在。
在本发明的范围内还包括本发明的化合物的代谢物，即在给药本发明的化合物时体内形成的物质。这样的产物可由例如被给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱脂化、酶解等产生。因此，本发明包括本发明的化合物的代谢物，包括通过使本发明的化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的时间的方法制得的化合物。
本发明在其范围内进一步包括本发明的化合物的前药，其为自身可具有较小药理学活性或无药理学活性的本发明的化合物的某些衍生物当被给药至身体中或其上时可通过例如水解裂解转化成具有期望活性的本发明的化合物。通常这样的前药会是所述化合物的官能团衍生物，其易于在体内转化成期望的治疗活性化合物。关于前药的使用的其他信息可参见“Pro-drugs as Novel Delivery Systems”，第14卷，ACS Symposium Series(T.Higuchi及V.Stella)及“Bioreversible Carriers in Drug Design，”PergamonPress，1987(E.B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association)。本发明的前药可例如通过用本领域技术人员已知作为“前-部分(pro-moiety)(例如“Design ofProdrugs”，H.Bundgaard(Elsevier，1985)中所述)”的某些部分替代本发明的化合物中存在的适当官能团来制备。
本发明还涵盖含有保护基的本发明的化合物。在制备本发明的化合物的任何过程中，保护在任何有关分子上的敏感基团或反应基团可能是必需的和/或期望的，由此形成本发明的化合物的化学保护的形式。这可以通过常规的保护基实现，例如，在ProtectiveGroups in Organic Chemistry，ed.J.F.W.McOmie，Plenum Press，1973；和T.W.Greene&P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，1991中所述的那些保护基，这些参考文献通过援引加入本文。使用本领域已知的方法，在适当的后续阶段可以移除保护基。
术语“约”是指在所述数值的±10％范围内，优选±5％范围内，更优选±2％范围内。
化合物
本发明的一个目的在于提供式(I)所示的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，
Figure GPA0000265569080000121
其中，L选自取代或未取代的C1-12亚烷基、C2-12亚烯基、C2-12亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选地被一个或多个-O-、-NR8-或-S-间断；或者
L表示式(c)、式(d)或式(e)所示的基团，其中
Figure GPA0000265569080000122
表示单键或双键，并且1位置处与Base连接，2位置处与磷原子(P)连接：
Figure GPA0000265569080000123
Base表示式(a)或式(b)所示的基团：
Figure GPA0000265569080000124
Figure GPA0000265569080000125
表示单键或双键；
M表示N或NR8；
W表示H、NR8R9、NR8、CH2、O或S；
Q表示O、S、NR8或CH2；
Z在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个Z，则其各自可以相同也可以不同；
p表示0、1、2、3、4或5；
条件是，当M被双键连接时，则W被单键连接；当M被单键连接时，则W被双键连接；
U表示O、S、NR8或CR10R11；
E表示CR10、CR10R11或S，条件是，当E被双键连接时，其为CR10；
G在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、羟基、氰基、硝基、叠氮基、NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个G，则其各自可以相同也可以不同；
q表示0-5的整数；
Ar1表示C6-14芳基或5-14元杂芳基；
R1在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、-OH、-CN、-NO2、-N R8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C1-6卤代烷基、取代或未取代的C1-6烷硫基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C2-10烯基、或者取代或未取代的C2-10炔基，如果存在多个R1，则其各自可以相同也可以不同；
m表示0-7的整数；
X表示CH2、-S-、-O-或-NR8-；
R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基；或者R2和R3与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；
R4和R5在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基；或者R4和R5与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；或者
R3和R4彼此连接、与它们各自所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的3-10元杂环烷基；
R6表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的C6-14芳基、取代或未取代的C7-20芳烷基或者取代或未取代的C1-6烷氧基；
R7在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6卤代烷基、取代或未取代的C1-6烷硫基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的3-10元杂环烷基、取代或未取代的C2-10炔基、或者取代或未取代的C1-6烷氧基，如果存在多个R7，则其各自可以相同也可以不同；或者
R6和R7彼此连接、与它们之间间隔的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8碳环基或3-10元杂环基；
n表示0-7的整数；
Ar2表示C6-14芳基或5-14元杂芳基；
r和s各自独立地表示1、2或3；
R8和R9在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个R8、R9，则其各自可以相同，也可以不同；并且
R10和R11在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，或者R10和R11一起形成C1-6亚烷基，如果存在多个R10、R11，则其各自可以相同，也可以不同。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式(Ia)的化合物：
Figure GPA0000265569080000131
其中，
L-Base表示下式(f)或式(g)所示的基团：
Figure GPA0000265569080000141
Base表示下式(a)或式(b)所示的基团：
Figure GPA0000265569080000142
其中，
Figure GPA0000265569080000143
表示单键或双键，
M表示N或NR8；
W表示NR8R9或O；
Q表示O或S；
Z在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、NR8R9、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个Z，则其各自可以相同也可以不同；
p表示0～2的整数；
条件是，当M被双键连接时，则W被单键连接，M表示N，W表示NR8R9；当M被单键连接时，则W被双键连接，M表示NR8，W表示O；
U表示O、S或CR10R11；
E表示CR10、CR10R11或S，条件是，当E被双键连接时，则其为CR10；
G在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、羟基、叠氮基、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个G，则其各自可以相同也可以不同；
q表示0～4的整数；
A表示取代或未取代的C1-6烷撑基；
B表示取代或未取代的C1-6烷撑基；
D表示O、S或NR8；
Ar1表示C6-10芳基或C3-10杂芳基；
R1在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C1-6烷氧基、取代或未取代的C3-8环烷基、取代或未取代的C3-8杂环烷基、取代或未取代的C2-10烯基、或者取代或未取代的C2-10炔基如果存在多个R1，则其各自可以相同也可以不同；
m表示0～7的整数；
X表示-O-或-NR8-；
R2和R3各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基；或者R2和R3与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或取代或未取代的C3-8杂环烷基；
R4和R5各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基；或者R4和R5与所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C3-8环烷基或者取代或未取代的C3-8杂环烷基；或者
R3和R4彼此连接、与它们各自所连接的碳原子一起形成取代或未取代的C4-8环烷基或者取代或未取代的C4-8杂环烷基；
R6表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、或者取代或未取代的C1-6烷氧基；
R7在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、取代或未取代的C1-6烷基、取代或未取代的C3-8环烷基、或者取代或未取代的C1-6烷氧基，如果存在多个R7，则其各自可以相同也可以不同；或者
R6和R7彼此连接、与它们之间间隔的碳原子一起形成取代或未取代的C4-8碳环基或C4-8杂环基；
n表示0～7的整数；
Ar2表示C6-10芳基或C3-10杂芳基；
R8和R9在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，如果存在多个R8、R9，则其各自可以相同，也可以不同，
R10和R11在每次出现时各自独立地表示氢、取代或未取代的C1-6烷基、或者取代或未取代的C3-8环烷基，或者R10和R11一起形成C1-6亚烷基，如果存在多个R10、R11，则其各自可以相同，也可以不同。
根据本发明的一些实施方案，本发明提供上述式(I)所示的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，
其中，
r、s均为1；
Base选自：
Figure GPA0000265569080000151
L选自任选地被一个或多个G取代的C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基，所述亚烷基、亚烯基或亚炔基任选地被一个或多个-O-、-NR8-或-S-间断；
或者L选自下列基团：
Figure GPA0000265569080000152
其中
Figure GPA0000265569080000153
表示单键或双键，并且1位置处与Base连接，2位置处与磷原子(P)连接；
X、U、W、Q在每次出现时各自独立地选自CH2、O、S和NR8；
G和Z在每次出现时各自独立地选自卤素、-OH、-CN、-NO2、-NR8R9、-N3、C1-6烷基和C3-6环烷基；
p、q在每次出现时各自独立地为0、1、2、3、4或5，条件是p不大于对应基团上可被取代的位置的数目且不大于对应基团上可被取代的位置的数目；当p大于1时，每个Z可以相同或不同；当q大于1时，每个G可以相同或不同；
Ar1和Ar2各自独立地选自C6-14芳基和5-14元杂芳基；
m、n各自独立地选自1、2、3、4或5，优选1或2；
R1、R7各自独立地选自氢、卤素、-OH、-CN、-NO2、-NR8R9、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷硫基、C3-6环烷基、3-10元杂环烷基和C2-6炔基；
R8、R9在每次出现时各自独立地表示氢、C1-6烷基和C3-6环烷基；
R2、R3各自独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C6-14芳基和C7-20芳烷基，所述烷基、环烷基、烷氧基、芳基和芳烷基各自任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-CN和-NO2的取代基取代；
或者R2和R3连同其所连接的碳原子共同形成C3-6环烷基或3-10元杂环烷基；
R4、R5各自独立地选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C6-14芳基和C7-20芳烷基，所述烷基、环烷基、烷氧基、芳基和芳烷基各自任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-CN和-NO2的取代基取代；
或者R4和R5连同其所连接的碳原子共同形成C3-6环烷基或3-10元杂环烷基；
或者R3和R4连同其所连接的碳原子共同形成C3-6环烷基或3-10元杂环烷基；且
R6选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C1-6烷氧基、C6-14芳基和C7-20芳烷基，所述烷基、环烷基、烷氧基、芳基和芳烷基各自任选地被一个或多个选自卤素、-OH、-CN和-NO2的取代基取代；
或者R6和R7连同其所连接的碳原子共同形成与Ar2稠合的C3-6环烷基或3-10元杂环烷基；优选地，R6和R7连同其所连接的碳原子共同形成与Ar2稠合的C4-6环烷基或4-10元杂环烷基。
根据本发明的一些实施方案，R8为氢、C1-6烷基或C3-8环烷基。在一些优选的实施方案中，R8为氢、甲基、乙基、丙基或环丙基。
根据本发明的一些实施方案，R9为氢、C1-6烷基或C3-8环烷基。在一些优选的实施方案中，R9为氢、甲基、乙基、丙基或环丙基。在一些特别优选的实施方案中，R9为氢。
根据本发明的一些实施方案，Z在每次出现时各自独立地为氢、卤素、NR8R9或C1-6烷基。在一些优选的实施方案中，Z在每次出现时各自独立地为氢、氟、氯、甲基、乙基或丙基。
根据本发明的一些实施方案，p为0、1、2、3或4。
根据本发明的一些实施方案，R10和R11在每次出现时各自独立地为氢、C1-6烷基或C3-8环烷基，或者R10和R11一起形成C1-6亚烷基。在一些优选的实施方案中，R10和R11在每次出现时各自独立地为氢、甲基、乙基、丙基、环丙基、环丁基、环戊基，或者R10和R11一起形成亚甲基或亚乙基。
根据本发明的一些实施方案，U为O或S。在一些优选的实施方案中，U为O。
根据本发明的一些实施方案，E为CH2。
根据本发明的一些实施方案，G在每次出现时各自独立地为氢、卤素、羟基、叠氮基或C1-6烷基。在一些优选的实施方案中，G在每次出现时各自独立地为氢、氟、氯、羟基、甲基、乙基、丙基、丁基或叠氮基。
根据本发明的一些实施方案，q为0、1、2、3或4。
根据本发明的一些实施方案，A为未取代的或被C1-3烷基取代的C1-3烷撑基。在一些优选的实施方案中，A为甲撑基、乙撑基或异丙撑基。
根据本发明的一些实施方案，B为未取代的或被C1-3烷基取代的C1-3烷撑基。在一些优选的实施方案中，B为乙撑基或异丙撑基。
根据本发明的一些实施方案，D为O。
根据本发明的一些实施方案，Base为下式所示的基团：
Figure GPA0000265569080000161
根据本发明的一个实施方案，L选自：
Figure GPA0000265569080000171
其中1位置处与B连接，2位置处与磷原子(P)连接。
根据本发明的一些实施方案，L-Base为下式所示的基团：
Figure GPA0000265569080000172
根据本发明的一些实施方案，X为NH、N-C1-6烷基(例如N-甲基)或O。在一些优选的实施方案中，X为NH。
根据本发明的一些实施方案，Ar1为苯基、1-萘基、2-萘基或5-6元杂芳基(例如噻吩基、吡啶基或吡唑基)。
根据本发明的一些实施方案，Ar2为苯基、1-萘基、2-萘基或5-6元杂芳基(例如噻吩基、吡啶基或吡唑基)。
根据本发明的一些实施方案，R1在每次出现时各自独立地为氢、卤素、C1-6烷基或C1-6烷氧基。在一些优选的实施方案中，R1在每次出现时各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基或丙基。
根据本发明的一些实施方案，m为0、1、2、3或4。
根据本发明的一些实施方案，R2和R3在每次出现时各自独立地为氢或C1-6烷基。在一些优选的实施方案中，R2和R3在每次出现时各自独立地为氢、甲基、乙基或丙基。
根据本发明的一些实施方案，R2和R3与所连接的碳原子一起形成C3-8环烷基。在一些优选的实施方案中，R2和R3与所连接的碳原子一起形成环丙基、环丁基、环戊基或环己基。
根据本发明的一些实施方案，R4和R5在每次出现时各自独立地为氢或C1-6烷基。在一些优选的实施方案中，R4和R5在每次出现时各自独立地为氢、甲基、乙基或丙基。
根据本发明的一些实施方案，R6为氢、C1-6烷基或C3-8环烷基。在一些优选的实施方案中，R6为氢、甲基、乙基、丙基、环丙基或环丁基。
根据本发明的一些实施方案，R7在每次出现时各自独立地为氢、C1-6烷基、C3-8环烷基或C1-6烷氧基。在一些优选的实施方案中，R7在每次出现时各自独立地为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基、叔丁基、甲氧基、环丙基或环丁基。
根据本发明的一些实施方案，n为0、1、2、3或4。
在本发明中，如果在同一化学式中存在多个G、Z、R1、R2、R3、R4、R5、R7、R8、R9、R10，则各个基团的选择是独立的。即，在同一化学式中，相同符号表示的基团可以相同，也可以不同。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式(II)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000181
其中，R1、R2、R3、R6、R7、m、n、Ar1和Ar2如上文所定义。
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为式(IIa)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000182
其中，R1、R2、R3、R6和R7以及m和n如上文所定义。
在一些特别优选的实施方案中，本发明的化合物为式(IIb)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000191
其中，R2、R3、R7和n如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式(III)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000192
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、n、s、r、Ar1和Ar2如上文所定义。
在一些优选的实施方案中，本发明的化合物为式(IIIa)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000193
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如上文所定义。
在一些特别优选的实施方案中，本发明的化合物为式(IIIb)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000194
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如上文所定义。
在一些特别优选的实施方案中，本发明的化合物为式(IIIc-1)或式(IIIc-2)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000201
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为式(IV)所示的化合物，
Figure GPA0000265569080000202
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、Ar1和Ar2如上文所定义。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物为以下所示的化合物：
Figure GPA0000265569080000203
Figure GPA0000265569080000211
Figure GPA0000265569080000221
药物组合物
本发明的另一目的在于提供一种药物组合物，其包含本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，所述药物组合物是固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂的形式。
根据本发明的一些实施方案，本发明的药物组合物进一步包含药学上可接受的辅料，用来形成药物制剂。所述辅料可以为载体、赋形剂、稀释剂或其组合。所述载体、赋形剂和稀释剂指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给药化合物的生物活性的性质的药物组合物中的非活性成分。所述载体、赋形剂和稀释剂包括水、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、聚乙二醇、丙二醇、淀粉、凝胶、藻酸盐、硅酸钙、磷酸钙、纤维素、水性糖浆、甲基纤维素、聚乙烯基吡咯烷酮、对羟基苯并山梨酸烷基酯、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸、甘油、以及包括芝麻油、橄榄油、大豆油等在内的各种油等。另外，根据需要可在上述载体、赋形剂或稀释剂中混合一般使用的增量剂、粘合剂、崩解剂、pH调节剂、溶解剂等添加剂。
根据本发明的一些实施方案，本发明的药物组合物可以利用常用的制剂技术制备成片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、溶液剂、乳剂、悬浮剂、软膏剂、乳膏剂、注射剂、皮肤贴剂等口服或非口服制剂形式。
根据本发明的一些实施方案，本发明的药物组合物包含0.01-1000mg，适宜地0.5-800mg，优选1-400mg，更优选为5-200mg，特别优选10-100mg，最优选15-50mg，例如20mg、25mg、30mg的量的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物。本发明药物组合物可以是单位剂量形式，所述单位剂量可含有0.01-1000mg，适宜地0.5-800mg，优选1-400mg，更优选5-200mg，特别优选10-100mg，最优选15-50mg，例如20mg、25mg、30mg的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物。
根据本发明的一些实施方案，本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物可以与一种或多种其它活性成分联合用于治疗、预防、抑制或者改善疾病或者病状，其中药物的联合使用比任何一种药物的单独使用更为安全或者更为有效。这种其它药物可以以对此通常使用的途径和量与本发明的化合物同时或者依次给药。当本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物与一种或者多种其它药物同时使用时，在单位剂型中含有该其它药物和本发明的化合物的药物组合物是优选的，特别是与药学可接受的载体联合。然而，联合治疗还可以包括在不同重叠日程中给药本发明的化合物其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物和一种或者多种其它药物的治疗。还可以预期，当与一种或者多种其它活性成分联合使用时，本发明化合物和其它活性成分可以以比各自单独使用时更低的剂量使用。因此，除了本发明的化合物外，本发明药物组合物还可以包含一种或者多种其它活性成分。
在一些优选的实施方案中，所述其它活性成分包括但不限于干扰素、病毒唑或其类似物、HCV NS3蛋白酶抑制剂、α-葡糖苷酶1抑制剂、肝保护剂、HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂、HCV NS5A抑制剂、TLR-7激动剂、亲环素抑制剂、HCV IRES抑制剂、药物动力学增加剂和用于治疗HCV的其它药物或治疗剂，或其组合。
所述干扰素选自PEG化的
Figure GPA0000265569080000231
PEG化的
Figure GPA0000265569080000232
Figure GPA0000265569080000233
干扰素α(MOR-22、OPC-18、Alfaferone、Alfanative、Multiferon、subalin)、干扰素
Figure GPA0000265569080000234
干扰素α-n1(Wellferon)、干扰素
Figure GPA0000265569080000235
干扰素β(Avonex DL-8234)、干扰素-ω(ω
Figure GPA0000265569080000236
Biomed510)、
Figure GPA0000265569080000237
IFNα-2bXL、
Figure GPA0000265569080000238
DA-3021、糖基化的干扰素α2b(AVI-005)、PEG-Infergen、PEG化的干扰素λ-1(PEG化的IL-29)和
Figure GPA0000265569080000239
所述病毒唑及其类似物选自病毒唑
Figure GPA00002655690800002310
和塔利韦林(taribavirin)(盐酸塔利
Figure GPA00002655690800002311
)。
所述HCV NS3蛋白酶抑制剂选自波普瑞韦(SCH-503034、SCH-7)、替拉瑞韦(telaprevir)(VX-950)、TMC435350、BI-1335、BI-1230、MK-7009、VBY-376、VX-500、GS-9256、GS-9451、BMS-605339、PHX-1766、AS-101、YH-5258、YH5530、YH5531、ABT-450、ACH-1625、ITMN-191、MK5172、MK6325和MK2748。
所述α-葡糖苷酶1抑制剂选自西戈韦(celgosivir)(MX-3253)、米格列醇和UT-231B。
所述肝保护剂选自emericasan(IDN-6556)、ME-3738、GS-9450(LB-84451)、silibilin和MitoQ。
所述HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂选自PF-868554、VCH-759、VCH-916、JTK-652、MK-3281、GS-9190、VBY-708、VCH-222、A848837、ANA-598、GL60667、GL59728、A-63890、A-48773、A-48547、BC-2329、VCH-796(nesbuvir)、GSK625433、BILN-1941、XTL-2125、ABT-072、ABT-333、GS-9669、PSI-7792和GS-9190。
所述HCV NS5A抑制剂选自ABT-267(ombitasvir)、AZD-2836(A-831)、BMS-790052、ACH-3102、ACH-2928、GS-5885、GS-5816、MK8325、MK4882、MK8742、PSI-461、IDX719和A-689。
所述TLR-7激动剂选自咪喹莫特、852A、GS-9620、ANA-773、ANA-975、AZD-8848(DSP-3025)和SM-360320。
所述亲环素抑制剂选自DEBIO-025、SCY-635和NIM811。
所述HCV IRES抑制剂选自MCI-067。
所述药物动力学增强剂选自BAS-100、SPI-452、PF-4194477、TMC-41629、GS-9350、GS-9585和罗红霉素。
所述用于治疗HCV的其他药物选自胸腺肽α1(日达仙(Zadaxin))、硝唑尼特(nitazoxanide)(Alinea、NTZ)、BIVN-401(virostat)、PYN-17(altirex)、KPE02003002、actilon(CPG-10101)、GS-9525、KRN-7000、civacir、GI-5005、XTL-6865、BIT225、PTX-111、TX2865、TT-033i、ANA971、NOV-205、tarvacin、EHC-18、VGX-410C、EMZ-702、AVI4065、BMS-650032、BMS-791325、Bavituximab、MDX-1106(ONO-4538)、Oglufanide和VX-497(merimepodib)。
治疗方法和用途
本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物可以抑制NS5B聚合酶、DNA聚合酶或逆转录酶。因此，本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物可以用作NS5B聚合酶抑制剂、DNA聚合酶抑制剂或逆转录酶抑制剂。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物在制备用于治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病的药物中的用途。
本发明的另一目的在于提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物在制备用于治疗病毒性疾病或癌症的药物中的用途。
本发明另一目的在于提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物，其用于治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病。
本发明另一目的在于提供本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物，其用于治疗病毒性疾病或癌症。
本发明另一目的在于提供治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
本发明另一目的在于提供治疗病毒性疾病或癌症的方法，其包括向有此需要的个体给药有效量的本发明的化合物、其药学可接受的盐、酯、溶剂合物、异构体、它们的任意晶型或消旋物、它们的代谢物形式、或它们的混合物，或者本发明的药物组合物。
根据本发明的一些实施方案，可使用本发明的化合物进行预防或治疗的病毒性疾病包括但不限于甲型病毒性肝炎、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、流行性感冒、疱疹和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，以及由上述疾病引发的相关症状或疾病(例如炎症、肝纤维化、肝硬化和肝癌等)。
一般对于成人患者而言，本发明的化合物可以以口服或非口服形式来进行给药，1天1次或分为数次来给药总剂量0.001～1500mg/天，优选0.01-1000mg/天，更优选0.1-800mg/天，特别优选1-600mg/天，例如250mg/天、400mg/天、500mg/天或600mg/天。应予说明，本发明的化合物的给药量可根据作为治疗对象的疾病的种类、患者的年龄、体重、症状等而适当增减。
制备方法
本发明的另一目的在于提供上述式(I)的化合物的制备方法，所述方法可以按照以下路线1来进行：
路线1
Figure GPA0000265569080000241
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L-Base和Base如上文所定义；并且
Y彼此相同或不同，且各自独立地选自卤素，优选为氯。
步骤一：使式2所示的三卤氧磷与式1所示的化合物反应，得到式3所示的化合物。
根据本发明的一些实施方案，步骤一是在有机碱的存在下进行的。
根据本发明的一些实施方案，步骤一包括：将三卤氧磷溶于有机溶剂，冷却至-80℃～-20℃，加入式1所示的化合物和有机碱。将反应液升温至15～40℃，优选20℃～35℃，更优选25～30℃，并搅拌1-8小时，优选2-6小时，得到式3所示的化合物粗品。
根据本发明的一些实施方案，式1所示的化合物、三卤氧磷和有机碱的摩尔比为1∶(0.5～2)∶(0.5～2)，优选1∶(0.8～2)∶(0.8～2)，更优选1∶(1～1.5)∶(1～1.5)。
根据本发明的一些实施方案，式1所示的化合物与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶5～30，优选1∶10～25，更优选1∶15～20。
根据本发明的一些实施方案，三卤氧磷与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶5-30，优选1∶10-25，更优选1∶10-20。
根据本发明的一些实施方案，有机碱与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶15-30，优选1∶20-25。
步骤二：使式3所示的化合物与式4所示的化合物反应，得到式5所示的化合物。
根据本发明的一些实施方案，步骤二包括：将步骤一所得的式3所示的化合物溶于有机溶剂中，将反应液冷却到-80℃--20℃，加入式4所示的化合物和有机碱。将反应液升温至15-40℃，优选20℃-35℃，更优选25-30℃，并搅拌1-8小时，优选2-6小时。得到式5所示的化合物粗品。
根据本发明的一些实施方案，式3所示的化合物、式4所示的化合物和有机碱的摩尔比为1∶(0.5-1.5)∶(1.0-3.5)，优选1∶(0.9-1.1)∶(1.4-3)。
根据本发明的一些实施方案，式4所示的化合物与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(5-30)，优选1∶(10-25)。
根据本发明的一些实施方案，有机碱与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(3-25)，优选1∶(5-20)。
步骤三：使式5所示的化合物与式6所示的五氟苯酚反应，得到式7所示的化合物。
根据本发明的一些实施方案，步骤三包括：将步骤二所得的式5所示的化合物溶于有机溶剂中，将反应液冷却到-80℃--20℃，依次向其中加入式6所示的化合物和有机碱。将反应液升温至15-40℃，优选20℃-35℃，更优选25-30℃，并搅拌1-8小时，优选2-6小时，得到得到式7所示的化合物。
根据本发明的一些实施方案，式5所示的化合物、式6所示的化合物和有机碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-2.5)，优选1∶(0.7-1.5)∶(1.0-2.0)。
根据本发明的一些实施方案，式6所示的化合物与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(5-30)，优选1∶(10-25)。
根据本发明的一些实施方案，有机碱与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(10-30)，优选1∶(15-25)。
步骤四：使式7所示的化合物与式8所示的化合物反应，得到式(I)所示的化合物。
根据本发明的一些实施方案，步骤四包括：将式8所示的化合物溶于有机溶剂中，在惰性气体置换保护下，在0℃-25℃温度下向反应液中加入格式试剂，适当搅拌1-3小时后，降温至-20℃--10℃，加入步骤三得到的式7所示的化合物。将反应液升温至1℃-40℃，优选10℃-30℃，并搅拌5-20小时，优选10-15小时，得到式I所示化合物。
根据本发明的一些实施方案，式7所示的化合物、式8所示的化合物和格氏试剂的摩尔比为1∶(0.8-2)∶(1.5-4)，优选1∶(1-1.5)∶(2-3.5)。
根据本发明的一些实施方案，式7所示的化合物与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(30-70)。
根据本发明的一些实施方案，式8所示的化合物与有机溶剂的重量体积比(克/毫升)为1∶(90-120)。
在上述步骤一、二、三中所使用的有机碱包括但不限于叔丁醇钠、三乙胺、DIPEA、吡啶或DMAP。
在上述步骤一、二、三、四中所使用的有机溶剂是本领域常用的溶剂，例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷等)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷等)、腈类(例如乙腈等)和它们的混合溶剂等。
或者，所述方法可以按照以下路线2来进行：
路线2
Figure GPA0000265569080000261
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L和Base如上文所定义。
步骤一’：
根据本发明的一些实施方案，步骤一’是在有机碱或无机碱和/或缩合试剂的存在下进行的。所述有机碱包括但不限于叔丁醇钠、三乙胺、DIPEA、吡啶或DMAP。所述无机碱包括但不限于NaH、NaOH、Na2CO3或K2CO3。所述缩合试剂包括但不限于DCC、DIC、EDC、BOP、PyAOP和PyBOP。
根据本发明的一些实施方案，式1的化合物为苯酚或萘酚。
根据本发明的一些实施方案，步骤一’是在60℃-150℃，优选70℃-130℃，更优选80℃-110℃的温度下进行的。
根据本发明的一些实施方案，式8的化合物与式1的化合物的摩尔比为1∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)。
根据本发明的一些实施方案，式8的化合物、式1的化合物与有机碱或无机碱的摩尔比为1∶(0.5-2)∶(0.5-2)，优选1∶(0.8-2)∶(0.8-2)，更优选1∶(1-1.5)∶(1-1.5)。
根据本发明的一些实施方案，式8的化合物与缩合剂的摩尔比为1∶(1.5-3)，优选1∶(1.8-2.5)。
步骤二’：
根据本发明的一些实施方案，所述卤化剂为氯化剂或溴化剂，优选为氯化剂，更优选为SOCl2。
根据本发明的一些实施方案，步骤二’是在-20℃-150℃，优选50℃-110℃，进一步优选50℃-90℃，更优选60-80℃的温度下进行的。
根据本发明的一些实施方案，式9的化合物与卤化剂的摩尔比为1∶(2-10)，优选1∶(3-10)，更优选1∶(4-8)。
步骤三’：
根据本发明的一些实施方案，步骤三’是在有机碱或无机碱的存在下进行的。所述有机碱包括但不限于叔丁醇钠、三乙胺、DIPEA、吡啶或DMAP。所述无机碱包括但不限于NaH、NaOH、Na2CO3或K2CO3。
根据本发明的一些实施方案，步骤三’是在-78℃-25℃，优选-40℃-0℃，更优选-30℃-10℃的温度下进行的。
根据本发明的一些实施方案，式10的化合物与式4的化合物的摩尔比为1∶(1-10)，优选1∶(1-3)，更优选1∶(1.5-2.5)。
根据本发明的一些实施方案，式10的化合物、式4的化合物与有机碱或无机碱的摩尔比为1∶(1-10)∶(5-20)，优选1∶(1-3)∶(5-20)，更优选1∶(1.5-2.5)∶(8-15)。
以上步骤一’、二’和三’均可在有机溶剂中进行。所述有机溶剂可以是本领域常用的反应溶剂，例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、饱和烃类(例如环己烷、己烷等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷等)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷等)、腈类(例如乙腈等)和它们的混合溶剂等。
本发明还提供了式(I″)的磷手性纯化合物的合成方法，所述方法可以按照以下路线3来进行：
路线3
Figure GPA0000265569080000271
其中，
Figure GPA0000265569080000272
表示实楔形
Figure GPA0000265569080000273
或虚楔形
Figure GPA0000265569080000274
化学键中的任意一种；且
R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、m、n、s、r、X、Ar1、Ar2、L和Base如上文所定义。
步骤一”：使式9的化合物发生卤化反应生成式11的化合物。
根据本发明的一些实施方案，所述卤化剂为氯化亚砜、草酰氯、三氯化磷、氯三苯基膦盐、溴化亚砜、草酰溴、三溴化磷或溴三苯基膦盐，优选为氯化亚砜。
根据本发明的一些实施方案，步骤一”是在-20℃-150℃，优选25℃-120℃，更优选50-110℃的温度下进行的。
根据本发明的一些实施方案，步骤一”的反应时间为12h-96h，优选36h-72h。
根据本发明的一些实施方案，式9的化合物与卤化剂的摩尔比为1∶(2-10)，优选1∶(3-6)。
步骤二”：使式11的化合物与式4的化合物反应生成式(I”)的化合物。
根据本发明的一些实施方案，步骤二”是在-78℃-25℃，优选-40℃-0℃的温度下进行的。
根据本发明的一些实施方案，式12的化合物与式4的化合物的摩尔比为1∶(1-10)，优选1∶(1-5)。
以上步骤一”和二”均可在有机溶剂中进行。所述有机溶剂可以是本领域常用的反应溶剂，例如但不限于N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、N-甲基吡咯烷酮、酯类(例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等)、饱和烃类(例如环己烷、己烷等)、卤代烃类(例如二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷等)、醚类(例如四氢呋喃、乙醚、异丙醚、二噁烷、1，2-二甲氧基乙烷等)、苯类(例如甲苯、二甲苯)和腈类(例如乙腈等)和它们的混合溶剂等。
如上所得的式(I)化合物可以通过制备高效液相色谱进行分离，得到异构体。所得到的异构体可以是对映异构体，非对映异构体等形式。
Figure GPA0000265569080000281
实施例
为了使本发明的目的和技术方案更加清楚，以下结合具体实施例进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。并且，下列实施例中未提及的具体实验方法，均按照常规实验方法进行。在本发明中用于合成的起始物质和反应试剂均可以在商业上得到。
本文中的缩写具有以下含义：
表1.英文缩写含义
Figure GPA0000265569080000282
Figure GPA0000265569080000291
以下的实施例中记载的化合物的结构通过1H NMR或MS来确定。1H NMR的测定仪器使用JEOL Eclipse 400核磁仪；测定溶剂为CD3OD、CDCl3或DMSO-d6；内标物质为TMS。全部δ值用ppm值表示。质谱(MS)的测定仪器使用Agilent(ESI)质谱仪，型号为Agilent 6120B。
实施例中制备的非对映异构体混合物可以通过制备高效液相色谱进行分离，从而得到纯的异构体。所述制备高效液相色谱分离可以按照本领域已知的方法来进行。例如在以下分离条件下进行：以十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温30℃-50℃，流速5.0-20.0mL/min，检测波长200-400nm，使用流动相A(例如可以为水)，流动相B(例如可以为甲醇或乙腈)，进行线性梯度洗脱。
实施例1.((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-((S)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物2-1)
Figure GPA0000265569080000301
步骤一至步骤三：(S)-五氟苯基-苯基-(1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物f-1)
将三氯氧磷(1.53g，10mmol)溶于二氯甲烷(10mL)，冷却到-70℃，滴加苯酚(化合物a，0.94g，10mmol)和三乙胺(1.01g，10mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。滴加完毕后，撤去冷浴，将温度升至室温，并搅拌2小时得到备用反应液。向(S)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2基胺盐酸盐(化合物c-1，2.16g，10mmol)中加入二氯甲烷(40mL)，在氮气保护下降温至-70℃。向反应体系中滴加三乙胺(1.01g，10mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，滴加完毕后，将上述备用反应液滴加到上述反应体系中。滴加完毕后，在-70℃下搅拌90分钟，撤去冷浴，升温至20℃，并搅拌3小时。进一步将反应体系冷却到-70℃，滴加五氟苯酚(化合物e，1.66g，9mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)，再滴加三乙胺(1.52g，15mmol)的二氯甲烷溶液(10mL)。滴加完毕后，撤去冷浴，升温至25℃，搅拌过夜。反应完全后，将反应体系倒入冰水中，用二氯甲烷萃取。合并有机相，并用饱和食盐水溶液洗涤，干燥，过滤浓缩，得到(S)-五氟苯基-苯基-(1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物f-1)。
步骤四：((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-((S)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯
在氩气保护下，将1-((2R，3R，4R，5R)-3-氟-4-羟基-5-羟甲基-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2，4-(1H，3H)-二酮(化合物g，260mg，1mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)中。于0℃滴加叔丁基氯化镁(1.0mol/L，2.5mL，2.5mmol)，升温至30℃，反应1小时。降温至0℃，滴加化合物f-1(502mg，1mmol)的无水四氢呋喃(10mL)溶液。滴加完毕后，升温至25℃，反应10小时。将反应体系降温至-5℃，用2M盐酸调至pH 4-5，再倒入冰水中。将反应体系用乙酸乙酯萃取，合并有机相，并分别用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥，过滤浓缩，经纯化得标题化合物2-1(440mg，收率76％)。
其结构表征如下：
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ9.06(s，1H)，7.42-7.12(m，10H)，6.15(d，J＝18.8Hz，1H)，5.52(dd，J＝8.3，3.3Hz，1H)，4.58-4.29(m，4H)，4.04(d，J＝9.4Hz，1H)，3.53-3.47(m，2H)，3.45-3.35(m，2H)，2.31(s，3H)，1.38(d，J＝3.6Hz，3H)，1.29-1.10(d，J＝3.2Hz，3H)。
31P NMR(CDCl3，162MHz)δ4.36。
ESI-MS：m/z 578.2[M+H]+。
实施例2.((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-((R)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物2-2)
Figure GPA0000265569080000311
步骤一至步骤三：(R)-五氟苯基-苯基-(1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物f-2)
将三氯氧磷(475mg，3.1mmol)加入到二氯甲烷(10mL)中，在氮气保护下降温至-70℃，滴加苯酚(化合物a，292mg，3.1mmol)和三乙胺(314mg，3.1mmol)的二氯甲烷溶液。滴加完毕后，在-70℃下反应5分钟，然后升温至室温，搅拌2小时得到备用反应液。在(R)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2基胺盐酸盐(化合物c-2，500mg，2.79mmol)中加入二氯甲烷(20mL)，在氮气保护下降温至-70℃。向反应体系中滴加三乙胺(314mg，3.1mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液，滴加完毕后搅拌5分钟得到反应体系。将上述备用反应液滴加到上述反应体系中，滴加完毕后，在-70℃搅拌90分钟。然后升温至0℃，并搅拌2小时，最后再将反应体系降温至-70℃。向反应体系中滴加五氟苯酚(化合物e，514mg，2.79mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，滴加完毕后，搅拌5分钟。滴加三乙胺(374mg，3.7mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，滴加完毕后搅拌5分钟。升温至室温，搅拌过夜。将水(30mL)加入反应液中，分层。将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗两次，干燥，过滤浓缩，得到(R)-五氟苯基-苯基-(1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物f-2)。
步骤四：((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-((R)-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯
将1-((2R，3R，4R，5R)-3-氟-4-羟基-5-羟甲基-3-甲基四氢呋喃-2-基)嘧啶-2，4-(1H，3H)-二酮(化合物g，605mg，2.3mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，在氮气保护下降温至-20℃。在-20℃下滴加叔丁基氯化镁(4.9mL，4.9mmol)，滴加完毕后，在-20℃搅拌30分钟。移除冷浴，将反应体系自然升温至室温，搅拌2小时，然后降温至-5℃。向反应体系中滴加化合物f-2(671mg，3.1mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，滴加完毕后在-5℃搅拌1小时。移除冷浴，升温至室温，并搅拌过夜。将反应体系降温至-5℃，用2M盐酸调节至PH＝4-5，再倒入冰水中，加入乙酸乙酯，搅拌，分液。将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，并分别用饱和碳酸氢钠水溶液和饱和食盐水洗涤，干燥，浓缩，纯化得标题化合物2-2(460mg，收率28.5％)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.63(s，1H)，7.54-7.29(m，3H)，7.24-7.11(m，6H)，6.13(d，J＝18.77Hz，1H)，5.59(d，J＝8.10Hz，1H)，4.45(dd，J＝16.62，10.12Hz，4H)，4.18-3.17(m，6H)，2.31(d，J＝10.07Hz，3H)，1.52-1.09(m，6H)。
ESI-MS(m/z)：578.2[M+H]+
实施例3.((2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-(2-甲基-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物3)
Figure GPA0000265569080000321
步骤一：N-Boc-2-氨基-2-甲基-1-丙醇(化合物b-3)的合成
将碳酸钾(31.5g，225mmol)加入到水(150mL)中，经搅拌后溶解，得到反应液。将2-氨基-2-甲基-1-丙醇(化合物a-3，13.35g，150mmol)溶于四氢呋喃(50mL)中，并将所得溶液加入到上述反应液中。然后滴加二碳酸二叔丁酯(32.7g，150mmol)的四氢呋喃溶液，在室温下搅拌过夜。加入乙酸乙酯(50mL)，分层，将水相用乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，干燥，浓缩得到化合物b-3(28g，收率99％)。
步骤二：N-Boc-(2-甲基-1-((2-甲基苄氧基)丙-2-基))胺(化合物c-3)的合成
将化合物b-3(5.67g，30mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(60mL)中，在氮气保护下降温至5℃。加入氢化钠(1.8g，45mmol)，在5℃下搅拌30分钟。在保持5℃温度的情况下，向反应体系中滴加邻甲基苄溴(5.83g，31.5mmol)。滴加完毕后，在5℃下搅拌30分钟。移除冷浴，缓慢升温至室温，搅拌过夜。将反应体系倒入冰水中，用甲基叔丁基醚萃取2次，将有机相用饱和食盐水洗涤，干燥浓缩，纯化得化合物c-3(2g，收率23％)。
步骤三：2-甲基-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基胺(化合物d-3)的合成
将化合物c-3(2g，6.8mmol)加入到三口瓶中，加入二氯甲烷(30mL)，降温至0℃。滴加三氟乙酸(4.9g，34mmol)，滴加完毕后自然升温至室温，搅拌过夜。停止反应，将反应液倒入冰的饱和碳酸氢钠溶液中，用固体氯化钠饱和，分液，用DCM萃取，干燥浓缩，得到化合物d-3(1.2g，收率76％)。
步骤四：五氟苯基-苯基-(2-甲基-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯(化合物f-3)的合成
将三氯氧磷(459mg)加入到二氯甲烷(10mL)中，在氮气保护下降温至-70℃。滴加苯酚(282mg，3mmol)和三乙胺(303mg，3mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液，滴加完毕后，在-70℃下反应5分钟。然后升温至室温，搅拌2小时，得到备用反应液。在2-甲基-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基胺(化合物d-3，588mg，3.03mmol)中加入二氯甲烷(20mL)，在氮气保护下降温至-70℃。向其中滴加三乙胺(318mg，3.15mmol)的二氯甲烷(3mL)溶液，滴加完毕后搅拌5分钟得到反应体系。将上述备用反应液滴加到上述反应体系中，滴加完毕后，在-70℃下搅拌90分钟。然后升温至0℃，搅拌2小时。最后再将反应体系降温至-70℃，在-70℃下向反应体系中滴加五氟苯酚(496mg，2.7mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。滴加完毕后，搅拌5分钟，滴加三乙胺(363mg，3.6mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液。滴加完毕后，搅拌5分钟，自然升温至室温，搅拌过夜。将水(30mL)加入反应液中，分层，将水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液清洗，干燥，浓缩得到化合物f-3，将其直接用于下一步反应。
步骤五：(2R，3R，4R，5R)-5-(2，4-二氧代-3，4-二氢嘧啶-1(2H)-基)-4-氟-3-羟基-4-甲基四氢呋喃-2-基)甲基-苯基-(2-甲基-1-(2-甲基苄氧基)丙-2-基)氨基磷酸酯的合成
将1-((2R，3R，4R，5R)-3-氟-4-羟基-5-羟甲基-3-甲基四氢呋喃-2基)嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮(化合物g，650mg，2.5mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，在氮气保护下降温至-20℃。在-20℃下滴加叔丁基氯化镁(5.25mL 5.25mmol)，滴加完毕后，在-20℃下搅拌30分钟。将移除冷浴，反应体系自然升温至室温，搅拌2小时。然后降温至-5℃，向反应体系中缓慢滴加化合物f-3(1.5g，3.0mmol)的四氢呋喃(20mL)溶液，滴加完毕后在-5℃下搅拌1小时。移除冷浴，缓慢升温至室温，搅拌过夜。将反应体系降温至-5℃，用2M盐酸调节至PH＝4-5，再倒入冰水中，加入乙酸乙酯搅拌5分钟，分液，将水相用乙酸乙酯萃取，合并有机相，先后用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤，干燥浓缩，纯化得到标题化合物3(100mg，收率5.5％)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，Chloroform-d)δ8.80(s，1H)，7.44(d，J＝8.2Hz，1H)，7.32(dd，J＝8.6，7.2Hz，2H)，7.20(m，7H)，6.15(d，J＝18.8Hz，1H)，5.59(dd，J＝8.1，1.9Hz，1H)，4.60-4.35(m，4H)，4.07(d，J＝9.3Hz，1H)，3.90(dd，J＝23.1，9.4Hz，1H)，3.65(d，J＝9.4Hz，1H)，3.32-3.18(m，2H)，2.31(s，3H)，1.43-1.24(m，9H).
ESI-MS(m/z)：592.2[M+H]+
参照实施例1-3的合成方法，可得如下化合物：
Figure GPA0000265569080000331
Figure GPA0000265569080000341
实施例11.(2S)-((((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基)甲基-苯氧基-磷酰基)氨基)-3-(2-甲基苄氧基)-丙烷(化合物10)的制备
Figure GPA0000265569080000342
步骤一：(((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)磷酸单苯酯的制备
室温下，将[(1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基]甲基磷酸(PMPA，3.1g，10.8mmol)和苯酚(1.0g，10.8mmol)溶于N-甲基吡咯烷酮(20mL)中，升温至85℃，滴加三乙胺(1.1g，10.8mmol)使反应液由白色浑浊变为澄清。滴加完毕后继续升温至100℃，滴加DCC(4.8g，23.1mmol)的N-甲基吡咯烷酮(10mL)溶液。滴加完毕后在100℃下保温反应过夜后，将反应液降温至室温，放置2h。过滤，将滤液浓缩，用二氯甲烷溶解，观察到有少量白色不溶物析出。再次过滤，将滤液浓缩，将残余物经制备液相色谱纯化得到标题化合物(1.0g)。
ESI-MS(m/z)：364.2[M+H]+。
步骤二：((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)苯氧基磷酰氯的制备
室温下，将(((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)磷酸单苯酯(100mg，0.28mmol)溶于乙腈(0.5mL)中，加入二氯亚砜(1.0mL)。滴加完毕后将反应液升温至70℃，反应3h后，将反应液浓缩，得到标题化合物(110mg)，未经进一步纯化直接用于下一步反应。
ESI-MS(m/z)：378.1[M+H]+。
步骤三：(2S)-((((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基-苯氧基-磷酰基)氨基)-3-(2-甲基苄氧基)-丙烷的制备
室温下，将((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)苯氧基磷酰氯(110mg，0.28mmol)溶于干燥二氯甲烷(2mL)中。将反应液降温至-20℃，加入(S)-1-((2-甲基苯基)氧基)-2-氨基-丙烷(99mg，0.55mmol)，并滴加三乙胺(0.5mL)。滴加完毕后在-20℃下反应1h后，将反应液倒入水中终止反应。用二氯甲烷萃取，合并有机相并用水洗涤，干燥，浓缩得到粗品化合物。经制备高效液相色谱纯化得到标题化合物(39mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.20-8.04(m，2H)，7.38-7.00(m，11H)，5.08-4.81(m，1H)，4.44-4.31(m，2H)，4.24(dt，J＝14.4，4.0Hz，1H)，4.13(dt，J＝14.1，6.8Hz，1H)，3.97-3.77(m，2H)，3.70(ddd，J＝13.3，9.3，6.8Hz，1H)，3.43-3.37(m，1H)，3.29-3.08(m，2H)，2.23(d，J＝5.8Hz，3H)，1.03(dd，J＝22.8，6.2Hz，3H)，0.95(t，J＝6.8Hz，3H)。
ESI-MS(m/z)：525.2[M+H]+。
实施例12.(2R)-((((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基-苯氧基-磷酰基)氨基)-3-(2-甲基苄氧基)-丙烷(化合物11)的制备
Figure GPA0000265569080000351
室温下，将((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)苯氧基磷酰氯(110mg，0.28mmol)溶于干燥二氯甲烷(2mL)中。将反应液降温至-20℃，加入(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷(99mg，0.55mmol)。滴加三乙胺(0.5mL)，滴加完毕后在-20℃下反应1h后，将反应液倒入水中终止反应。用二氯甲烷萃取，合并有机相并用水洗涤，干燥，浓缩得到粗品化合物。经制备液相色谱纯化得到标题化合物(56mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.11(dd，J＝16.3，1.3Hz，2H)，7.35-7.22(m，3H)，7.22-7.09(m，7H)，7.09-6.99(m，1H)，4.99(td，J＝11.9，11.3，6.3Hz，1H)，4.38(d，J＝13.0Hz，2H)，4.31-4.09(m，2H)，3.93-3.89(m，1H)，3.85-3.69(m，2H)，3.42-3.39(m，1H)，3.23(dd，J＝9.2，5.5Hz，1H)，3.11(ddd，J＝30.2，9.2，6.8Hz，1H)，2.23(d，J＝2.4Hz，3H)，1.03(t，J＝6.8Hz，3H)，0.95(dd，J＝10.4，6.6Hz，3H).
ESI-MS(m/z)：525.2[M+H]+。
实施例13. 1-((((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基-苯氧基-磷酰基)氨基)-2-(2-甲基苄氧基)-乙烷(化合物12)的制备
Figure GPA0000265569080000352
室温下，将((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)苯氧基磷酰氯(110mg，0.28mmol)溶于干燥二氯甲烷(2mL)中。将反应液降温至-20℃，加入1-(2-甲基苄氧基)-2-乙胺(100mg，0.56mmol)。滴加三乙胺(0.5mL)，滴加完毕后在-20℃下反应1h后，将反应液倒入水中终止反应。用二氯甲烷萃取，合并有机相并用水洗涤，干燥，浓缩得到粗品化合物。经制备液相色谱纯化得到标题化合物(34mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)8.14(s，1H)，8.10(d，J＝5.0Hz，1H)，7.37-7.24(m，3H)，7.20(s，2H)，7.18-7.09(m，5H)，7.05(d，J＝8.0Hz，1H)，5.22-5.06(m，1H)，4.45-4.33(m，2H)，4.25(dd，J＝14.4，3.8Hz，1H)，4.15(ddd，J＝14.5，8.5，6.4Hz，1H)，3.97-3.69(m，3H)，3.32-3.23(m，2H)，3.01(dd，J＝11.2，6.1Hz，2H)，2.23(d，J＝3.1Hz，3H)，1.04(dd，J＝13.7，6.2Hz，3H).
ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例14. 2-甲基-2-((((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基-苯氧基-磷酰基)氨基)-3-(2-甲基苄氧基)-丙烷(化合物13)的制备
Figure GPA0000265569080000361
室温下，将((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)苯氧基磷酰氯(110mg，0.28mmol)溶于干燥二氯甲烷(2mL)中。将反应液降温至-20℃，加入1-(2-甲基苄氧基)-2，2-二甲基乙胺(108mg，0.56mmol)。滴加三乙胺(0.5mL)，滴加完毕后在-20℃下反应1h后，将反应液倒入水中终止反应。用二氯甲烷萃取，合并有机相并用水洗涤，干燥，浓缩得到粗品化合物。经制备液相色谱纯化得到标题化合物(18mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.19-8.01(m，2H)，7.37-7.24(m，3H)，7.24-7.02(m，8H)，4.74(dd，J＝16.2，9.7Hz，1H)，4.42(d，J＝8.3Hz，2H)，4.23(dd，J＝14.4，4.0Hz，1H)，4.14(dd，J＝14.4，6.2Hz，1H)，3.95-3.89(m，1H)，3.85-3.63(m，2H)，3.31-3.19(m，2H)，2.24(d，J＝3.4Hz，3H)，1.16(d，J＝10.2Hz，6H)，1.03(t，J＝6.0Hz，3H).
ESI-MS(m/z)：539.3[M+H]+。
实施例15.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(2-(苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物22)的制备
Figure GPA0000265569080000362
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(苄氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得作为白色固体的标题化合物(1.4g)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.15-8.12(m，2H)，7.34-7.26(m，8H)，7.14-7.03(m，3H)，5.22-5.12(m，1H)，4.39-4.24(m，3H)，3.95-3.68(m，3H)，3.36-3.28(m，1H)，3.05-2.95(m，1H)，1.29-1.16(m，2H)，1.05-0.95(m，3H).ESI-MS(m/z)：497.2[M+H]+。
实施例16.化合物22异构体A和化合物22异构体B的制备
化合物22异构体A和化合物22异构体B的制备方法一：
将实施例15的化合物(400mg)通过手性色谱法分离，分离条件如下：分离柱CHIRALPAK OD-H 0.46cm I.D.×15cm L，流动相：己烷/IPA/TEA＝70/30/0.1(V/V/V)，流速1.0ml/min，波长UV 254nm，温度35℃，分离得到标题两种立体异构体化合物。
化合物22异构体A：Rt＝5.846min，198mg，ee％＝98.5％，其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(s，1H)，7.37-7.18(m，9H)，7.17-7.10(m，1H)，7.05(dt，J＝8.5，1.2Hz，2H)，5.16(dt，J＝11.9，6.9Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.26(dd，J＝14.4，3.7Hz，1H)，4.14(dd，J＝14.4，6.6Hz，1H)，4.02-3.81(m，2H)，3.75(dd，J＝13.5，9.2Hz，1H)，3.28(d，J＝5.7Hz，2H)，3.05-2.93(m，2H)，1.06(d，J＝6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：497.2[M+H]+。
化合物22异构体B：Rt＝7.345min，166mg，ee％＝98.3％，其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(s，1H)，7.35-7.21(m，9H)，7.13(t，J＝7.3Hz，1H)，7.05(dt，J＝8.5，1.2Hz，2H)，5.16(dt，J＝11.8，6.9Hz，1H)，4.40(s，2H)，4.26(dd，J＝14.4，3.7Hz，1H)，4.14(dd，J＝14.4，6.6Hz，1H)，3.97-3.81(m，2H)，3.75(dd，J＝13.5，9.2Hz，1H)，3.30(d，J＝11.1Hz，2H)，3.00(dq，J＝12.5，6.2Hz，2H)，1.06(d，J＝6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：497.2[M+H]+。
化合物22异构体A的制备方法二，其中，
Figure GPA0000265569080000363
表示实楔形
Figure GPA0000265569080000364
或虚楔形
Figure GPA0000265569080000365
化学键中的任意一种：
Figure GPA0000265569080000371
步骤一：中间体22-A-1的合成
室温下，将(((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基乙氧基)甲基)磷酸单苯酯(25g，68.81mmol)溶于甲苯(250mL)中，加入二氯亚砜(28.65g，240.84mmol)。加毕，将反应液升温至95℃，反应48h。将反应液减压蒸馏，得到标题化合物(30g)。所得产物未经进一步纯化而直接用于下一步反应。
步骤二：化合物22异构体A的合成
室温下，将2-(苄氧基)乙胺(46.82g，309.65mmol)溶于干燥的二氯甲烷(200mL)，在氮气保护下降温至-35℃，加入22-A-1(30g，粗品)的甲苯(200mL)溶液，控制温度小于-10℃。加毕，保持温度在-10℃，反应1h。加入15％的磷酸氢钾水溶液(400mL)，充分搅拌，静置，分层。将有机相依次用15％的磷酸氢钾(200mL×2)、去离子水(200mL×2)洗涤，干燥。滤除不溶物，将滤液浓缩得标题化合物(30g)。经手性HPLC检测，所得产物的保留时间(Rt)与本实施例制备方法一获得的化合物22异构体A一致，非对映异构体纯度：94.6％。
实施例17.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(2-(4-甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物23)的制备
Figure GPA0000265569080000372
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(4-甲基苄氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(65mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(d，J＝5.0Hz，1H)，7.37-7.24(m，2H)，7.20-7.11(m，8H)，7.03(d，J＝8.0Hz，1H)，5.17-5.08(m，1H)，4.45-4.33(m，2H)，4.34(s，1H)，4.32(s，1H)，4.27-4.22(m，1H)，4.18-4.11(m，1H)，3.93-3.71(m，3H)，3.33-3.24(m，2H)，3.02-2.91(m，2H)，2.24(d，J＝3.1Hz，3H)，1.04(dd，J＝13.7，6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例18.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(2-(2，4-二甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物26)的制备
Figure GPA0000265569080000373
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(2，4-二甲基苄氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备液相纯化得标题化合物(58mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，7.34-7.28(m，2H)，7.22(s，2H)，7.15-7.03(m，4H)，6.95-6.93(m，2H)，5.26-5.13(m，1H)，4.31-4.11(m，5H)，3.88-3.75(m，3H)，2.92-2.76(m，2H)，2.22(s，3H)，2.19(s，3H)，1.56-1.53(m，2H)，1.04(dd，J＝13.7，6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：525.2[M+H]+。
实施例19.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-甲基-N-(2-(2-甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物30)的制备
Figure GPA0000265569080000381
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为N-甲基-2-(2-甲基苄氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(7mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.06(s，1H)，7.32-7.10(m，10H)，7.04-7.02(m，1H)，4.38-4.36(m，2H)，4.25-4.15(m，2H)，3.95-3.68(m，3H)，3.39-3.34(m，2H)，3.15-3.00(m，2H)，2.54-2.48(m，3H)，2.22(s，3H)，1.08-1.01(m，3H).ESI-MS(m/z)：525.2[M+H]+。
实施例20.实施例20-异构体A和实施例20-异构体B的制备
Figure GPA0000265569080000382
步骤一：(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸单-1-萘酯的合成
除了将苯酚替换为1-萘酚外，参照实施例11中步骤一的合成方法制备，并经制备液相纯化得到标题化合物(1.2g)。ESI-MS(m/z)：414.1[M+H]+。
步骤二：(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-1-萘氧基-磷酰氯的合成
除了将(((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)磷酸单苯酯替换为(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸单-1-萘酯外，参照实施例11中步骤二的合成方法制备得标题化合物(200mg)，将其直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：432.0[M+H]+。
步骤三：(R)-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-萘-1-氧基-N-(2-(2-甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺的合成
将(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-1-萘氧基-磷酰氯(200mg，0.46mmol)溶于干燥二氯甲烷(2mL)中。在氮气保护下，将反应液降温至-20℃，加入2-(2-甲基苄氧基)乙胺(153mg，0.92mmol)，滴加三乙胺(1.0mL)，在-20℃下反应1h。将反应液倒入水(20mL)中淬灭，用二氯甲烷萃取(30mL x 3)，合并有机相，水洗，干燥，浓缩得粗品，经制备高效液相色谱纯化分离，得到上述两种标题立体异构体化合物。
实施例20-异构体A：Rt＝2.549min，9mg。其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13-8.10(m，3H)，7.95-7.92(m，1H)，7.73-7.71(m，1H)，7.54-7.52(m，2H)，7.43-7.38(m，2H)，7.20-7.13(m，6H)，5.30-5.27(m，1H)，4.31-4.16(m，4H)，4.05-3.91(m，3H)，3.33-3.25(m，2H)，3.05-2.95(m，2H)，2.19(s，3H)，1.0-0.98(m，3H).ESI-MS(m/z)：561.2[M+H]+。
实施例20-异构体B，Rt＝2.486min，35mg。其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.22-8.14(m，3H)，8.06-8.04(m，1H)，7.73-7.71(m，1H)，7.54-7.52(m，2H)，7.40-7.36(m，2H)，7.19-7.13(m，6H)，5.33-5.27(m，1H)，4.31-4.18(m，4H)，4.05-3.91(m，3H)，3.33-3.25(m，2H)，3.05-2.95(m，2H)，2.19(s，3H)，1.00-0.98(m，3H).ESI-MS(m/z)：561.2[M+H]+。
实施例21.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-萘-2-氧基-N-(2-(2-甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物31)的制备
Figure GPA0000265569080000391
除了将1-萘酚替换为2-萘酚外，参照实施例20的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(58mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.17(s，1H)，7.92-7.84(m，2H)，7.83-7.76(m，1H)，7.61(d，J＝15.8Hz，1H)，7.49-7.45(m，2H)，7.33(d，J＝2.2Hz，1H)，7.31-7.22(m，3H)，7.18-7.07(m，3H)，5.26-5.18(m，1H)，4.33(t，J＝3.2Hz，1H)，4.29-4.20(m，1H)，4.18-3.13(m，1H)，3.96-3.77(m，3H)，3.33-3.25(m，2H)，3.07-2.98(m，2H)，2.19(s，3H)，1.13-1.02(m，3H).ESI-MS(m/z)：561.2[M+H]+。
实施例22.(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-((R)-1-(苄氧基)丙-2-基)-磷酰胺(化合物37)的制备
Figure GPA0000265569080000392
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为(R)-1-(苄氧基)-2-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(370mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(s，1H)，7.33-7.20(m，9H)，7.13(t，J＝7.4Hz，1H)，7.05(dt，J＝8.3，1.3Hz，2H)，4.99(dd，J＝12.4，10.2Hz，1H)，4.41(s，2H)，4.24(dd，J＝14.4，3.8Hz，1H)，4.14(dd，J＝14.4，6.4Hz，1H)，3.91(td，J＝6.3，3.8Hz，1H)，3.86-3.67(m，2H)，3.21(dd，J＝9.3，5.8Hz，1H)，3.13(dd，J＝9.3，6.7Hz，1H)，1.04(d，J＝6.2Hz，3H)，0.96(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例23.实施例23-异构体A、实施例23-异构体B的制备
Figure GPA0000265569080000393
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为(S)-1-(苄氧基)-2-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化分离，得到上述两种标题立体异构体化合物。
实施例23-异构体A：Rt＝2.486min，106mg。其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(d，J＝2.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.38-7.16(m，10H)，7.14-7.08(m，1H)，7.08-7.01(m，1H)，4.46(d，J＝12.9Hz，2H)，4.30-4.11(m，4H)，4.11-4.01(m，1H)，4.01-3.89(m，2H)，3.57(ddd，J＝19.5，6.0，3.3Hz，2H)，1.07(t，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例23-异构体B：Rt＝2.536min，75mg。其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.12(s，1H)，7.36-7.22(m，9H)，7.17-7.10(m，3H)，4.84(dd，J＝12.4，10.2Hz，1H)，4.36(d，J＝4.3Hz，2H)，4.29-4.09(m，2H)，3.91-3.77(m，2H)，3.70(dd，J＝13.3，9.4Hz，1H)，3.19-3.07(m，2H)，1.00(d，J＝6.2Hz，3H)，0.94(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例24.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-((S)-2-(苄氧基)丙基)-磷酰胺(化合物40)的制备
Figure GPA0000265569080000401
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为(S)-2-(苄氧基)-1-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(205mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(s，1H)，8.09(s，1H)，7.35-7.19(m，9H)，7.12(t，J＝7.4Hz，1H)，7.05(dd，J＝7.5，1.3Hz，2H)，5.06(dd，J＝11.8，10.1Hz，1H)，4.39(s，2H)，4.25(dd，J＝14.4，3.7Hz，1H)，4.13(dd，J＝14.4，6.6Hz，1H)，3.96-3.79(m，2H)，3.71(dd，J＝13.5，9.2Hz，1H)，3.26(dd，J＝9.1，5.2Hz，1H)，3.09(dd，J＝9.1，7.0Hz，1H)，1.05(d，J＝6.2Hz，3H)，0.96(d，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例25.(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-((R)-2-(苄氧基)丙基)-磷酰胺(化合物41)的制备
Figure GPA0000265569080000402
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为(R)-2-(苄氧基)-1-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(260mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(s，1H)，7.36-7.21(m，9H)，7.12(t，J＝7.3Hz，1H)，7.06(dt，J＝8.4，1.2Hz，2H)，5.08(dt，J＝11.8，7.1Hz，1H)，4.44(d，J＝12.0Hz，1H)，4.36(d，J＝11.9Hz，1H)，4.25(dd，J＝14.4，3.7Hz，1H)，4.15(dd，J＝14.4，6.5Hz，1H)，3.92-3.72(m，3H)，3.33(d，J＝5.9Hz，1H)，2.90-2.76(m，2H)，1.05(d，J＝6.2Hz，3H)，1.02(d，J＝6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例26.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(1-(苄氧基)-2-甲基丙-2-基)-磷酰胺(化合物42)的制备
Figure GPA0000265569080000403
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为1-(苄氧基)-2-甲基-2-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(30mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(s，1H)，8.10(s，1H)，7.31-7.22(m，9H)，7.14-7.11(m，1H)，7.06-7.04(m，2H)，5.11-5.05(m，1H)，4.46-4.43(m，2H)，4.37-4.34(m，1H)，4.28-4.23(m，1H)，3.93-3.90(m，1H)，3.75-3.65(m，2H)，3.39-3.35(m，1H)，1.17-1.15(m，6H)，1.05-1.02(m，3H).ESI-MS(m/z)：525.2[M+H]+。
实施例27.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-氟苯氧基-N-(2-(苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物43)的制备
Figure GPA0000265569080000411
步骤一：((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸单对氟苯酯的合成
除了将苯酚替换为4-氟苯酚外，参照实施例11中步骤一的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(400mg)。ESI-MS(m/z)：382.1[M+H]+。
步骤二：4-氟苯氧基-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酰氯的合成
除了将(((1R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-1-甲基-乙氧基)甲基)磷酸单苯酯替换为4-氟苯基-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸酯外，参照实施例11中步骤二的合成方法制备得到标题化合物(500mg)，将其直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)：396.1[M+H]+。
步骤三：((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-4-氟苯氧基-N-(2-(苄氧基)乙基)-磷酰胺的合成
除了将(S)-1-((2-甲基苯基)氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(苄氧基)乙胺外，参照实施例11中步骤三的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(206mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.11(d，J＝4.9Hz，1H)，7.39-7.19(m，8H)，7.13(d，J＝6.7Hz，3H)，5.16(dt，J＝12.9，6.9Hz，1H)，4.38(d，J＝1.5Hz，2H)，4.25(dd，J＝14.4，3.9Hz，1H)，4.16(dd，J＝14.4，6.2Hz，1H)，3.99-3.70(m，3H)，3.29-3.18(m，2H)，2.98(tq，J＝12.6，6.8Hz，2H)，1.03(d，J＝6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：515.2[M+H]+。
实施例28. 2-(苄氧基)乙基-苯基-(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸酯(化合物44)的制备
Figure GPA0000265569080000412
室温下，将((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸单苯酯(200mg，0.55mmol)、2-(苄氧基)乙醇(167mg，1.1mmol)溶于干燥N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中。将反应液降温至0℃，加入PyBOP(573mg)，滴加N，N-二异丙基乙胺(285mg)。加毕，升温至室温，反应过夜。经制备高效液相色谱纯化，得标题化合物(245mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(d，J＝2.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，7.38-7.16(m，10H)，7.14-7.08(m，1H)，7.08-7.01(m，1H)，4.46(d，J＝12.9Hz，2H)，4.30-4.11(m，4H)，4.11-4.01(m，1H)，4.01-3.89(m，2H)，3.57(ddd，J＝19.5，6.0，3.3Hz，2H)，1.07(t，J＝6.6Hz，3H).ESI-MS(m/z)：498.2[M+H]+。
实施例29. 3-(苄氧基)丙基-苯基-((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)磷酸酯(化合物45)的制备
Figure GPA0000265569080000421
除了将2-(苄氧基)乙醇替换为3-(苄氧基)-1-丙醇外，参照实施例28的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得到标题化合物(160mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(d，J＝1.9Hz，1H)，8.03(d，J＝1.9Hz，1H)，7.37-7.16(m，10H)，7.10(dt，J＝8.5，1.3Hz，1H)，7.04(dt，J＝8.4，1.3Hz，1H)，4.41(d，J＝6.5Hz，2H)，4.31-3.89(m，8H)，3.42(dt，J＝14.4，6.2Hz，2H)，1.88-1.72(m，2H)，1.09(t，J＝6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：512.2[M+H]+。
实施例30.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(3-(苄氧基)丙基)-磷酰胺(化合物46)的制备
Figure GPA0000265569080000422
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为(S)-2-(苄氧基)-1-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(173mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.10(d，J＝6.1Hz，1H)，7.36-7.20(m，9H)，7.17-7.09(m，2H)，5.06(td，J＝11.4，5.9Hz，1H)，4.37(d，J＝2.2Hz，2H)，4.32-4.11(m，2H)，4.00-3.70(m，3H)，3.36(dd，J＝6.3，2.3Hz，2H)，2.87(ddd，J＝10.4，6.3，2.6Hz，2H)，1.55(p，J＝6.7Hz，2H)，1.07(dd，J＝16.9，6.2Hz，3H).ESI-MS(m/z)：511.2[M+H]+。
实施例31.(((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(2-(萘-1-基甲氧基)乙基)-磷酰胺(化合物47)的制备
Figure GPA0000265569080000423
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(1-萘甲氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备液相色谱法纯化得标题化合物(33mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.19(s，1H)，8.18-8.05(m，2H)，7.85-7.79(m，2H)，7.49-7.39(m，4H)，7.27-7.22(m，2H)，7.09-7.06(m，2H)，6.96(d，J＝8.0Hz，1H)，4.87-4.85(m，1H)，4.22-4.20(m，1H)，4.10-4.02(m，1H)，3.82-3.53(m，3H)，3.46-3.43(m，2H)，3.22-3.03(m，2H)，1.03(dd，J＝16.0，8.0Hz，3H).ESI-MS(m/z)：547.2[M+H]+.
实施例32.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(2-(2，6-二甲基苄氧基)乙基)-磷酰胺(化合物48)的制备
Figure GPA0000265569080000431
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为2-(2，6-二甲基苄氧基)乙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备高效液相色谱纯化得标题化合物(21mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.14(s，1H)，8.08(s，1H)，7.32-6.97(m，10H)，5.19-5.13(m，1H)，4.40(s，2H)，4.28-4.23(m，1H)，4.17-4.12(m，1H)，3.94-3.83(m，2H)，3.78-3.72(m，1H)，3.31-2.96(m，2H)，3.04-2.96(m，2H)，2.28(s，6H)，1.06-1.01(m，3H).ESI-MS(m/z)：497.2[M+H]+。
实施例33.((((R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧基)甲基)-苯氧基-N-(3-(2，4-二甲基苄氧基)丙基)-磷酰胺(化合物49)的制备
Figure GPA0000265569080000432
除了将(R)-1-((2-甲基苄氧基)-2-氨基-丙烷替换为3-(2，4-二甲基苄氧基)-1-丙胺外，参照实施例12的合成方法制备，并经制备液相纯化得标题化合物(53mg)。
其结构表征如下：
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.13(s，1H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，7.32-7.26(m，2H)，7.21(s，2H)，7.15-7.11(m，3H)，7.05-6.91(m，3H)，5.26-5.13(m，1H)，4.34-4.32(m，2H)，4.24-4.15(m，2H)，3.87-3.63(m，3H)，3.31-3.19(m，2H)，3.08-2.95(m，2H)，2.22(s，3H)，2.19(s，3H)，1.06(dd，J＝16.0，8.0Hz，3H).ESI-MS(m/z)：539.3[M+H]+.
参照实施例11-33的合成方法，可得如下化合物：
Figure GPA0000265569080000433
Figure GPA0000265569080000441
生物试验
1.核苷类药物在人原代肝细胞中的三磷酸核苷代谢产物(3P)生成量的体外筛选评价
1.1.测试系统
人原代肝细胞(批号MMN，10个供体混合性别)购买自美国体外技术公司BioreclamationIVT。
1.2.测试方法
配制浓度为6×105个细胞/mL的人原代肝细胞溶液和浓度为50μM的待测化合物溶液。将250μL的人原代肝细胞溶液和250μL的待测化合物溶液混合，并加入24-孔板，使得待测化合物的最终浓度为25μM。在37℃下水浴孵育6小时后，将样品转移到试管中，除去培养基。加入磷酸盐缓冲液清洗细胞后，去除上清液。加入180μL 70％甲醇，漩涡混匀，于-20℃下静置过夜。在15000rpm及4℃下离心10min后，取150μL上清液转移到上样管，经LC-MS/MS检测3P产物生成量，计算3P生成速率。
3P生成速率＝(3P生成量*150μL)/(6×105个细胞/mL*250μL*6h)。
1.3.实验结果
测试物的3P化合物生成量和生成速率见下表。
表2：测试物的3P化合物生成量和生成速率
Figure GPA0000265569080000442
可见，本发明的化合物可以在肝细胞内顺利代谢，生成具有活性的三磷酸核苷代谢物质，并且三磷酸核苷代谢产物的生成量大，生成速率快。因此，本发明的化合物对丙型肝炎、乙型肝炎、人类免疫缺陷综合征等具有很好的抑制效果。
2、CYP抑制实验
2.1.测试方法
2.1.1.待测化合物储备液和工作液的配制
将化合物溶解于DMSO中，将其配制成10mM的储备液。将储备液用DMSO∶甲醇＝1∶1的混合溶剂进一步稀释成5、1.5、0.5、0.15、0.05、0.015和0.005mM的系列工作溶液。
2.1.2.底物及其配制
将底物分别溶解于DMSO中，配制成相应浓度的储备液。具体浓度见下表：
表3.CYP抑制实验中不同组别底物储备液和孵化体系中的浓度
底物 储备液浓度(mM) 孵化体系中的浓度(μM)
非那西汀(1A2) 20 10
双氯芬酸(2C9) 10 5
美芬妥英(2C19) 20 30
右美沙芬(2D6) 20 5
米达唑仑(3A4) 10 2
睾酮(3A4) 40 50
阿莫地喹(2C8) 10 10
安非他酮(2B6) 80 80
2.1.3.阳性对照品溶液配制
将阳性对照品分别溶解于DMSO中，配制成相应浓度的储备液。再将其用甲醇稀释成相应浓度的工作液。具体储备液浓度见下表：
表4.CYP抑制实验中不同组别阳性对照品储备液和工作液的浓度
抑制剂 储备液浓度(mM) 工作液浓度(μM)
萘黄酮(1A2) 3 300
磺胺苯吡唑(2C9) 10 300
苯环丙胺(2C19) 10 300
奎尼丁(2D6) 3 300
酮康唑(3A4) 3 300
槲皮素(2C8) 3 300
噻氯匹定(2B6) 3 300
2.1.4.肝微粒体孵育
反应体系中肝微粒体的蛋白浓度为0.2mg/mL，辅酶NADPH为1.0mM。在37℃水浴中进行孵育反应。终止反应，经常规步骤处理，对产品进行LC-MS/MS分析。
2.2.实验结果
表5.CYP抑制实验结果
Figure GPA0000265569080000451
通常认为，IC50＞10μL即说明药物对CYP450酶无抑制作用或抑制作用低。由以上数据看出，本发明中的实施例15化合物对八种CYP450酶均无抑制作用，产生药物相互作用的风险很小，因而具有更高的安全性。本发明的其他化合物均具有类似的安全性。
3、体外药效实验
测试本发明的化合物对乙型肝炎病毒(HBV)的抑制作用。在病毒-细胞水平测试本发明的化合物的细胞毒性以及对病毒(HBV)核酸(DNA)复制水平的影响。
3.1.测试方法
将对数生长期的HepG2.2.15细胞接种于96孔板中，细胞浓度为40个/μL。于37℃、5％CO2培养箱中培养3天。加入化合物前用新培养基(200μL/孔)更换。各实施例化合物的母液浓度为200μM。以200μM为最高浓度，用DMSO稀释为多个不同浓度。取1μL待测化合物置于相应培养基孔，化合物的最终测试浓度为0.06、0.24、0.98、3.9、15.6、62.5、250、1000nM(用于计算半数有效浓度(EC50))。
3.2.实验结果
由表6可见，所测试的化合物对乙型肝炎病毒(HBV)具有较强的抑制活性。
表6
化合物编号 EC<sub>50</sub>(nM)
实施例15 54.7±26.4
4、小鼠体内的药物代谢动力学(PK)研究
核苷类似物通过病毒产生的胸腺嘧啶核苷激酶磷酸化，代谢为具有药效的单磷酸，进而代谢为二磷酸、三磷酸活性形式，从而达到抗病毒作用。因此，单磷酸活性代谢物的生成是核苷类似物发挥药效的根本。
以下结构为实施例16-化合物22异构体B代谢物1：
Figure GPA0000265569080000461
测定方法：通过灌胃给予雄性ICR小鼠实施例16-化合物22异构体B，测定小鼠体内实施例16-化合物22异构体B及代谢产物(实施例16-化合物异构体B代谢物1)的血药和肝药浓度，考察化合物的药代动力学特性。灌胃给药剂量为10mg/kg，溶媒系统为0.5％MC。灌胃给药后在不同时间点收集血液与肝组织，用于PK研究。血浆样品和肝组织匀浆液经沉淀蛋白处理后进行LC-MS/MS分析。
LC-MS/MS：质谱为API 5500，液相为ShimadzμLC-30AD系统。待测物色谱柱为Hypersil GOLD C18，3μm粒径，100×4.6mm，美国Thermo公司；流动相：A相为5mA甲酸铵+0.5％甲酸，B相为甲醇；流速为0.8mL/min；柱温为40℃。采用离子源为ESI源正离子模式，扫描方式为多重反应监测(MRM)。
表7.小鼠体内PK实验结果
Figure GPA0000265569080000462
由以上数据看出，本发明中的实施例16-化合物22异构体B在血浆和肝脏中可快速代谢生成实施例16-化合物22异构体B代谢物1。肝脏中代谢物1的浓度是血浆浓度的21倍，即实施例16-化合物22异构体B具有明显的肝靶向性。
5、小鼠体内药效实验
5.1.测试方法
将动物经尾静脉高压注射HBV质粒DNA当天定为第0天。往后一天为第1天，以此类推。第0天，所有小鼠在5秒内从尾静脉注射(HDI)小鼠体重8％的质粒DNA溶液(注射体积(ml)＝小鼠体重(g)×8％))，每只小鼠注射质粒的质量为10μg。
测试化合物：实施例16-异构体B；给药剂量：10mg/kg、30mg/kg；给药方式：灌胃；给药频率：每天一次；总时长：第1天到第7天。
5.2.实验结果小鼠血浆中以及肝脏中的HBV DNA含量测定结果见下表8及表9。
表8.小鼠血浆中HBV DNA含量测定结果
Figure GPA0000265569080000471
表9.小鼠血浆中HBV DNA含量测定结果(第七天)
Figure GPA0000265569080000472
由以上数据看出，本发明中的实施例16-化合物22异构体B对小鼠血浆、肝脏HBVDNA有显著的抑制作用并呈剂量依赖关系。可以预见，实施例16-化合物22异构体B对乙肝具有明显的治疗作用。因此，本发明的化合物可以作为有效的乙型肝炎病毒逆转录酶抑制剂。
产业实用性
本发明的化合物作为丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶的抑制剂、乙型肝炎病毒DNA聚合酶抑制剂、逆转录病毒逆转录酶抑制剂，可以在体内进行有效地代谢，转化为高含量的三磷酸核苷代谢物质。由此，本发明的化合物具有更为优异的病毒抑制活性。

Claims (39)

1.式(IIIb)所示的化合物或其药学可接受的盐，
Figure FDA0003598942040000011
其中，
Ar1表示苯基、1-萘基或2-萘基；
R1在每次出现时各自独立地表示氢或卤素，如果存在多个R1，则其各自可以相同也可以不同；
m表示0-7的整数；
R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢或者C1-6烷基；
R6表示氢；
R7在每次出现时各自独立地表示氢、卤素、C1-6烷基或者C1-6烷氧基，如果存在多个R7，则其各自可以相同也可以不同；
n表示0-7的整数；
Ar2表示苯基、1-萘基或2-萘基；
并且
R8表示氢或C1-6烷基。
2.权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中m、n各自独立地表示1或2。
3.权利要求1至2任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar1表示苯基。
4.权利要求1至2任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R1在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯或溴。
5.权利要求3所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R1在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯或溴。
6.权利要求1-2或5任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R8表示H。
7.权利要求3所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R8表示H。
8.权利要求4所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R8表示H。
9.权利要求1-2、5或7-8任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢或甲基。
10.权利要求3所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢或甲基。
11.权利要求4所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢或甲基。
12.权利要求6所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R2和R3在每次出现时各自独立地表示氢或甲基。
13.权利要求1-2、5、7、8或10-12任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R7在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯、甲基、叔丁基或甲氧基。
14.权利要求3所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R7在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯、甲基、叔丁基或甲氧基。
15.权利要求4所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R7在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯、甲基、叔丁基或甲氧基。
16.权利要求6所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R7在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯、甲基、叔丁基或甲氧基。
17.权利要求9所述的化合物或其药学可接受的盐，其中R7在每次出现时各自独立地表示氢、氟、氯、甲基、叔丁基或甲氧基。
18.权利要求1-2、5、7-8、10-12或14-17任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
19.权利要求3所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
20.权利要求4所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
21.权利要求6所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
22.权利要求9所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
23.权利要求13所述的化合物或其药学可接受的盐，其中Ar2表示苯基。
24.权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中所述化合物为式(IIIc-1)或式(IIIc-2)所示的化合物，
Figure FDA0003598942040000031
其中，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如权利要求1-23任一项所定义。
25.权利要求1所述的化合物或其药学可接受的盐，其中，所述化合物为
Figure FDA0003598942040000032
Figure FDA0003598942040000041
Figure FDA0003598942040000051
Figure FDA0003598942040000061
Figure FDA0003598942040000071
26.药物组合物，其包含权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，所述药物组合物是固体制剂、半固体制剂、液体制剂或气态制剂的形式。
27.权利要求26所述的药物组合物，其进一步包含药学上可以接受的辅料。
28.权利要求26所述的药物组合物，其进一步包含可与权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐联用的其它活性成分。
29.权利要求28所述的药物组合物，其中所述其它活性成分选自干扰素、病毒唑或其类似物、HCV NS3蛋白酶抑制剂、α-葡糖苷酶1抑制剂、肝保护剂、HCV NS5B聚合酶的非核苷抑制剂、HCV NS5A抑制剂、TLR-7激动剂、亲环素抑制剂、HCVIRES抑制剂、药物动力学增加剂和用于治疗HCV的其它药物或治疗剂，或其组合。
30.权利要求26-29中任一项所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为0.01-1000mg。
31.权利要求30所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为0.5-800mg。
32.权利要求31所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为1-400mg。
33.权利要求32所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为5-200mg。
34.权利要求33所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为10-100mg。
35.权利要求34所述的组合物，其中所述组合物所包含的权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的量为15-50mg。
36.权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，或者权利要求26-35中任一项所述的药物组合物在制备用于预防或治疗NS5B聚合酶介导的疾病、DNA聚合酶介导的疾病或逆转录酶介导的疾病的药物中的用途。
37.权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐，或者权利要求26-35中任一项所述的药物组合物在制备用于预防或治疗病毒性疾病或癌症的药物中的用途。
38.权利要求37所述的用途，其中所述病毒性疾病选自甲型病毒性肝炎、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、流行性感冒、疱疹和获得性免疫缺陷综合征。
39.制备权利要求1-25中任一项所述的化合物或其药学可接受的盐的制备方法，其包括以下步骤：
路线1
Figure FDA0003598942040000081
步骤一：使式2所示的三卤氧磷与式1所示的化合物反应，得到式3所示的化合物；
步骤二：使式3所示的化合物与式4所示的化合物反应，得到式5所示的化合物；
步骤三：使式5所示的化合物与式6所示的五氟苯酚反应，得到式7所示的化合物；和
步骤四：使式7所示的化合物与式8所示的化合物反应，得到式(I)所示的化合物；
其中，R4、R5表示H，s表示1，r表示1，-L-Base表示
Figure FDA0003598942040000082
X表示NR8，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如权利要求1-23中任一项所定义；并且
Y彼此相同或不同，且各自独立地选自卤素；
或者
路线2
Figure FDA0003598942040000091
其中，R4、R5表示H，s表示1，r表示1，L-Base表示
Figure FDA0003598942040000092
X表示NR8，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如权利要求1-23中任一项所定义；
或者
路线3
Figure FDA0003598942040000093
其中，
Figure FDA0003598942040000094
表示实楔形
Figure FDA0003598942040000095
或虚楔形
Figure FDA0003598942040000096
化学键中的任意一种；且
R4、R5表示H，s表示1，r表示1，L-Base表示
Figure FDA0003598942040000097
X表示NR8，R1、R2、R3、R6、R7、R8、m、n、Ar1和Ar2如权利要求1-23中任一项所定义。
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