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CN109833298A - 以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用 - Google Patents

以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用 Download PDF

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CN109833298A CN201811447245.3A CN201811447245A CN109833298A CN 109833298 A CN109833298 A CN 109833298A CN 201811447245 A CN201811447245 A CN 201811447245A CN 109833298 A CN109833298 A CN 109833298A
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Abstract

本发明公开了一种以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用。本发明的人参皂苷衍生物，活性好，溶血性低，能够作为脂质体膜材，制备空白脂质体，同时部分化合物结构新颖。且用其制备得到的脂质体溶血性符合要求，安全性更高、成膜性更好、稳定性更优，具有重要的应用价值。

Description

以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及 应用
技术领域
本发明涉及一种以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用。
背景技术
人参皂苷具有复杂多样的药理活性，为突出各个单体皂苷的药理作用，目前对人参皂苷的研究主要集中在单体皂苷的开发和利用方面。溶血是部分皂苷的特性之一，成为单体皂苷作为注射剂使用的最大障碍。人参总皂苷并没有明显的溶血作用，将经分离纯化后的单体皂苷却具有截然相反的溶血或抗溶血作用，而且其溶血和抗溶血作用的强弱和浓度之间存在着近似的曲线关系。有关人参皂苷溶血和抗溶血的作用研究较少，中国现代中药2007年4月第9卷第4期程大任等《人参皂苷溶血及抗溶血作用研究》研究认为，原人参皂苷三醇型人参皂苷Re、Rg1、20(R)-Rg2、20(S)-Rg2和Rh1都具有抗溶血作用，其中20(R)-Rg2、20(S)-Rg2和Rhl在较高浓度时还表现出溶血作用；原人参皂苷二醇型人参皂苷Rb1、Rb2、Rc和Rd均表现出抗溶血作用，其中Rd在浓度较高时表现出了溶血作用。齐墩果酸型人参皂苷Ro在较低浓度便表现出抗溶血作用，未见溶血作用。对于一些活性较强的皂苷，如Rg3、Rh2、C-K、原人参二醇、原人参三醇等，因溶血性太强，不能作为注射剂使用。这些人参皂苷的溶血性实验结果见表1。
表1
/表示无此作用。
因此，研究一种活性较好，溶血性符合注射剂要求的单体皂苷，一直是人参皂苷类药物研究的技术难题。
根据中国发明专利CN201610693884.2中公开的方法，以人参皂苷Rg5或Rk1等为代表的两亲性皂苷能作为脂质体膜材。但是这类皂苷应具有亲油端和亲水端，而且亲油端须有两个以上的双健。而以Rg3和Rh2等皂苷作为脂质体膜材包封紫杉醇时，得到的脂质体外观、包封率、粒径和稳定性均较差，尤其是粒径和稳定性，粒径在1μm以上，放置7天有沉淀，包封率≤80％。
因此，开发一种活性好、溶血性符合要求、安全性更高、成膜性更好、稳定性更优的皂苷类新型脂质体具有重要的应用价值。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中Rg3和Rh2等亲油端仅有一个双键或无双键的皂苷作为脂质体膜材时得到的脂质体外观、包封率、粒径和稳定性均差、或部分人参皂苷溶血性高，不能作为脂质体膜材的缺陷，而提供了一种以人参皂苷衍生物为膜材的新型空白脂质体、其制备方法及应用。本发明的人参皂苷衍生物亲油端仅有一个双键或无双键，其活性好，溶血性低，同时部分化合物结构新颖。且用其制备得到的脂质体溶血性符合要求，安全性更高、成膜性更好、稳定性更优，具有重要的应用价值。
本发明通过下述技术方案来解决上述技术问题。
本发明提供了一种以如式I所示的人参皂苷衍生物为膜材的空白脂质体，其中所述的空白脂质体具有膜，所述的膜包含脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物：
其中，R1和R2各自独立地为H、-OH、R10、R11、R12或R13，但R1和R2不同时为H或-OH；
R3为
R4为H、-OH、酮(＝O)、甲氧基(-OCH3)、乙氧基(-OEt)、乙酰氧基(-OAc)、正丙氧基(n-propoxy)、异丙氧基(iso-propoxy)、正丙酰氧基(n-propionyloxy)、异丙酰氧基(iso-propionyloxy)、正丁氧基(n-butoxy)、异丁氧基(iso-butoxy)、正丁酰基(n-butyryl)、异丁酰基(iso-butyryl)、苯甲酰基(-OBz)、氟(-F)、氯(-Cl)、溴(-Br)、碘(-I)、氨基(-NH2)或硫基(-SH)；
R5为H、-OH、酮(＝O)、甲氧基(-OCH3)或乙酰氧基(-OAc)；
每个R6独立地为-OH、甲氧基(-OCH3)、过氧化羟基(-OOH)、乙酰氧基(-OAc)或苯甲酰基(-OBz)；
R7、R9和R8独立地为H、-OH、甲氧基(-OCH3)、甲酰氧基(-OCHO)、乙酰氧基(-OAc)或苯甲酰基(-OBz)；
R10为下述基团中的任一种：-O-Glc、-O-Rha、-O-Lyx、-O-Xyl、-O-Ara(p)、-O-Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(数字表示碳位，→表示连接关系，下同)、-O-Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(4→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(f)或-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(p)；
R11为R10中的一个以上的羟基被R10所取代，每个R10(当存在两个以上时)各自独立地相同或不同；
R12为下述基团中的任一种；
I)-mPEG、-Z-mPEG、-mPEO、-Z-PEO、-mPVP、-Z-PVP、-mEPEG或-Z-EPEG；其中，m为H、烷基或酰基，Z为-CO(CH2)aCO-、-NH(CH2)aCO-、-NH(CH2)bX-或-CO-Ar-CH2-；其中，X为O、S或NH，Ar为芳基，a为1、2、3、4、5、6、7或8，b为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
II)C4-C22的脂肪酰基、磷酸酯基、丁二酸酯基、正丁酸酯基、磺酸酯基、苹果酸酯基、
III)Boc-甘氨酸、Boc-丙氨酸、Boc-精氨酸、Boc-赖氨酸、Boc-丝氨酸、乙酰苯丙氨酸、乙酰脯氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸中的羧基去氢后所形成的基团；
IV)-O-PEO、-O-PVP、-O-PEG、-O-MPEG、-O-EPEG、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Mal或-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ac；
R13为下述基团中的任一种：(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基，简称DC，结构为(N,N-二甲基氨基丙基)-氨基甲酰基，简称DMAPA，结构为N-(N’,N’-二甲基)乙基丁二酸单酰胺基，结构为N-(N’,N’-二甲基)丙基丁二酸单酰胺基，结构为
在本发明一优选实施方式中，R1优选为-OH、
在本发明一优选实施方案中，R2优选为H或
在本发明一优选实施方案中，R3优选为 更优选为
在本发明一优选实施方案中，R4优选为-OH、-OAc或＝O。
在本发明一优选实施方案中，R5优选为H或-OH。
在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物中的一个以上羟基可选地被R11所取代，每个R11(当存在两个以上时)各自独立地相同或不同。
在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物中的一个以上羟基可选地被R12所取代；每个R12(当存在两个以上时)各自独立地相同或不同。
其中，Glc为吡喃葡萄糖基，Xyl为吡喃木糖基，Rha为吡喃鼠李糖基，Ara(p)为吡喃阿拉伯糖基，Ara(f)为呋喃阿拉伯糖基，Lyx为来苏糖基。
其中，Mal为丙二酰基，Ac为乙酰基，PEG为聚乙二醇，PEO为聚氧乙烯，MPEG为单甲氧基封端的聚乙二醇，EPEG为环氧封端的聚乙二醇，PVP为聚维酮。
其中，在-O-Glc中，Glc的结构式为：在-O-Ara(p)中，Ara(p)的结构式为：在-O-Lyx中，Lyx的结构式为：在-O-Ara(f)中，Ara(f)的结构式为在-O-Rha中，Rha的结构式为在-O-Xyl中，Xyl的结构式为Mal的结构式为
其中，所述PEG、PEO、PVP或EPEG的分子量各自独立地优选为200～20000。
其中，所述的脂肪酰基可为天然存在的饱和或不饱和脂肪酸的酰基、及人工合成的饱和或不饱和的脂肪酸的酰基，较佳地为硬脂酰基或棕榈酰基。
在本发明一优选实施方案中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物为表2化合物中的一种或多种：
表2
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的HPLC纯度优选≥90％，更优选≥95％，所述的百分比是指所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的质量在所述的空白脂质体总质量中的占比百分数。
所述的空白脂质体中，所述的脂类物质和所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的质量比通常为0.5:1-100:1，优选0.5:1-20:1，更优选0.5:1-4:1(例如0.5:1-2:1)。
所述的空白脂质体中，所述的膜优选还可进一步包含胆固醇。
当所述的空白脂质体中还包含胆固醇时，其中，所述的脂类物质和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比优选为1:0.01-1:3(例如1:0.03-1:1)，更优选为1:0.05-1:0.9(例如1:0.3-1:0.75)，进一步优选为1:0.1-1:0.9(例如1:0.1-1:0.5)；所述的胆固醇与所述的如式I所示的人参皂苷的质量比优选为1:0.1-1:100，更优选为1:0.5-1:50，进一步优选为1:0.5-1:10(例如1:1.5-1:6，或1:5)。
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物在所述的膜中的含量优选为0.01％-80％(例如0.03％、37.5％、10％、5％、15.4％、20.5％、19.9％、18.0％、6.25％、13.6％、33.3％或17.4％)；所述的磷脂在所述的膜中的含量优选为5％-99.9％(例如37.5％、40％、35％、34.6％、25.6％、34.8％、36.0％、21.875％、36.3％、66.7％、39.1％或34.8％)；所述的胆固醇在所述的膜中的含量优选为0％-50％；以上百分比(％)均是指各组分的质量占所述的膜的总质量的百分比。
所述的空白脂质体中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物在所述的膜中的含量优选为10％-80％，更优选为10％-40％，进一步优选为20％-40％(例如25％-40％，如37.5％；优选25％-35％)。所述的脂类物质在所述的膜中的含量优选为10％-70％，更优选为30％-70％，进一步优选为30％-60％。所述的胆固醇在所述的膜中的含量优选为0％-50％，更优选为0％-20％，进一步优选为0％-20％(例如0％-10％)。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体还可进一步包含抗氧化剂并包封于所述的膜中。所述的抗氧化剂在所述的空白脂质体中的含量一般小于等于25％，优选为0.001％-15％，更优选为0.01％-10％，进一步优选为0.01％-5％(例如0.1％-1％)；所述的百分比(％)是指所述的抗氧化剂的质量与所述的空白脂质体的总质量的百分比。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体还可进一步包含冻干保护剂并包封于膜中。所述的冻干保护剂在空白脂质体中的含量可为本领域空白脂质体中空白脂质体常规的含量，例如≤95％或≤80％，较佳地为0.5％-70％，更佳地为5％-60％，最佳地为30％-60％；所述的百分比(％)是指冻干保护剂的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体还可进一步包含大豆油和/或油酸钠并封装在膜中。所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％(例如3％-5％、25％-62.5％，20％-30％，或60％-70％)；所述的百分比是指大豆油和/或油酸钠的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比。所述“大豆油和/或油酸钠”和所述的磷脂的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:0.5-1:5，最佳地为1:0.5-1:4(例如1:9、或1:1-1:2)。
在本发明另一优选实施方案中，所述的空白脂质体包含下列组分：脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、“大豆油和/或油酸钠”和磷脂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、抗氧化剂和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和胆固醇，或者如式如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和胆固醇，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇、抗氧化剂和冻干保护剂。
在本发明另一优选实施方案中，所述的空白脂质体由上述组分组成。
在本发明另一优选实施方案中，所述的空白脂质体包含下列组分：如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇、大豆油和/或油酸钠、抗氧化剂和冻干保护剂。所述“大豆油和/或油酸钠”和所述的“胆固醇”的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:0.5-1:5，最佳地为1:0.5-1:1。所述的胆固醇的含量较佳地为1％-20％，更佳地为10％-20％；所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％(例如25％-62.5％,20％-30％，或60％-70％)。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体由下列组分组成：脂类物质、和如式I所示的人参皂苷衍生物。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和胆固醇。
在本发明另一优选实施方案中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇、抗氧化剂和冻干保护剂。
在本发明一优选实施方案中，所述的空白脂质体由下列组分组成：如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇、大豆油和/或油酸钠、抗氧化剂和冻干保护剂。
本发明中，所述的脂类物质可为本领域常规的脂类物质，通常是指磷脂，较佳地为天然磷脂、半合成磷脂和全合成磷脂中的一种或多种。
本发明中，所述的天然磷脂一般是来源于大豆、蛋黄、动物脑或脏器中的天然磷脂，较佳地为天然卵磷脂、鞘磷脂、甘油磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和脑磷脂中的一种或多种。
本发明中，所述的半合成或全合成磷脂可为本领域常规的半合成或全合成磷脂，较佳地为磷脂酰胆碱类的磷脂、磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺类的磷脂、磷脂酰甘油(DSPG)、二鲸蜡磷酸酯(DCP)、PEG修饰的磷脂、琥珀酸胆固醇酯(CHS)和2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱(16:0-18:1PC，其中16:0-18:1是指PC的碳链)中的一种或多种。由于二棕榈酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱等半合成或全合成的磷脂本身具有热敏性，可同时作为热敏性辅料使用。
本发明中，所述的磷脂酰胆碱类的磷脂可为本领域常规的磷脂酰胆碱类的磷脂，较佳地为氢化大豆卵磷脂(HSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二月桂酰磷脂酰胆碱(DLPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、磷脂酰胆碱(SPC)、单棕榈酰磷脂酰胆碱(MPPC)和甘油磷脂酰胆碱(GPC)中的一种或多种。
本发明中，所述的磷脂酰乙醇胺类的磷脂可为本领常规的磷脂酰乙醇胺类的磷脂，较佳地为1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺(DLPE)、二芥酰基磷脂酰乙醇胺(DEPE)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)和二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE)中的一种或多种。
本发明中，所述的PEG修饰的磷脂可为本领域常规的PEG修饰的磷脂，较佳地为磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DMPE-PEG)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DPPE-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)、二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DOPE-PEG)、C8神经酰胺-聚乙二醇(C8Ceramide-PEG)、C16神经酰胺-聚乙二醇(C16Ceramide-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-琥珀酰(DSPE-PEG Succinyl)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG)Carboxylic Acid)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DSPE-PEG Maleimide)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-丙酰胺双巯基吡啶(DSPE-PEGPDP)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-三聚氯氰(DSPE-PEGCyanur)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEGAmine)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(DSPE-PEGBiotin)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸(DSPE-PEGFolate)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸(DSPE-PEGFolate)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DLPE-PEG)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DSPE-PEG-NHS)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DMPE-PEG-NHS)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DPPE-PEG-NHS)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯(DLPE-PEG-NHS)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DSPE-PEG-Maleimide)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DMPE-PEG-Maleimide)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DPPE-PEG-Maleimide)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基(DLPE-PEG-Maleimide)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素(DSPE-PEG-Biotin)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-荧光素(DSPE-PEG-FITC)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羟基(DSPE-PEG-OH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG-NH2)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DMPE-PEG-NH2)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DPPE-PEG-NH2)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DLPE-PEG-NH2)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DSPE-PEG-COOH)、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DMPE-PEG-COOH)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DPPE-PEG-COOH)、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基(DLPE-PEG-COOH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硫基(DSPE-PEG-SH)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硅烷(DSPE-PEG-Silane)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叠氮(DSPE-PEG-N3)、胆固醇-聚乙二醇(CholesterolPEG)、甲氧基-聚乙二醇-胆固醇(mPEG-CLS)、胆固醇-聚乙二醇-活性酯(Cholesterol PEGNHS ester)、胆固醇-聚乙二醇-马来酰亚胺(CLS-PEG-Mal)、胆固醇-聚乙二醇-生物素(Cholesterol PEG Biotin)、胆固醇-聚乙二醇-荧光素(Cholesterol PEG fluorescein)、胆固醇-聚乙二醇-羧基(Cholesterol PEG COOH)、胆固醇-聚乙二醇-氨基(CholesterolPEG NH2)和胆固醇-聚乙二醇-硫基(Cholesterol PEG SH)中的一种或多种。其中，所述的聚乙二醇的相对分子量优选300-50000，更佳地为500-10000，例如300、350、500、550、1000、2000、3400、5000、10000、20000、30000、40000或50000。
本发明中，所述的DMPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的DPPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的DSPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000、5000、10000、20000、30000或40000。所述的DOPE-PEG的数均分子量较佳地为350、550、750、1000、2000、3000或5000。所述的C8Ceramide-PEG的数均分子量较佳地为750、2000或5000。所述的C16Ceramide-PEG的数均分子量较佳地为750、2000或5000。所述的DLPE-PEG的数均分子量较佳地为2000或5000。所述的DSPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为1000、2000、5000、10000、20000、30000或40000。所述的DMPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DPPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DLPE-PEG-NHS的数均分子量较佳地为3400或5000。所述的DSPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DMPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。、所述的DPPE-PEG-Maleimide的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DLPE-PEG-Maleimid的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-Biotin的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-FITC的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的DSPE-PEG-OH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DMPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DPPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DLPE-PEG-NH2的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DMPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DPPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DLPE-PEG-COOH的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的DSPE-PEG-SH的数均分子量较佳地为5000。所述的DSPE-PEG-Silane的数均分子量较佳地为3400。所述的DSPE-PEG-N3的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的mPEG-CLS的数均分子量较佳地为1000、2000、5000、10000或20000。所述的Cholesterol PEG NHS ester的数均分子量较佳地为1000、2000、3400、5000或10000。所述的CLS-PEG-Mal的数均分子量较佳地为2000、3400、5000或10000。所述的CLS-PEG-Biotin的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的CLS-PEG-FITC的数均分子量较佳地为2000、3400或5000。所述的Cholesterol PEG COOH的数均分子量较佳地为3400。所述的Cholesterol PEG amine的数均分子量较佳地为3400。所述的Cholesterol PEG Thiol/Sulfhydril的数均分子量较佳地为3400。
在本发明一优选实施方案中，所述的脂类物质为蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、HSPC、DSPE-PEG(2000)、DMPC、POPE、HSPC、DPPC、大豆卵磷脂S100、mPEG2000-DSPE或DOPE-PEG。
本发明中，所述的抗氧化剂可为本领域常规的抗氧化剂，较佳地为焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、α-生育酚、α-羟基酸、黄酮类化合物、苯丙素酚类化合物、维生素E、维生素C、反丁烯二酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丁羟基茴香醚(BHA)、二丁羟基甲苯(BHT)、硫代二丙酸、亚硫酸盐(如亚硫酸钠)、亚硫酸氢盐(如亚硫酸氢钠)、二硫代氨基苯甲酸类化合物、枸橼酸、苹果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、磷酸和亚磷酸中的一种或多种。
在本发明一优选实施方案中，所述的抗氧化剂为维生素E、维生素C、硫代硫酸钠或亚硫酸钠。
本发明中，所述的冻干保护剂可为本领域常规的冻干保护剂，一般为糖、多元醇、氨基酸和缓冲剂中的一种或多种。其中，所述的糖较佳地为单糖、双糖和多糖中的一种或多种。所述的单糖较佳地为葡萄糖、甘露醇、木糖醇和山梨醇中的一种或多种。所述的双糖较佳地为蔗糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖中的一种或多种。所述的多糖较佳地为海藻糖。所述的多元醇较佳地为丙二醇和/或丙三醇。所述的氨基酸较佳地为α-氨基酸，例如苏氨酸、甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和组氨酸中的一种或多种。所述的缓冲剂一般是指缓冲溶液。所述的缓冲溶液可为本领域常规的缓冲溶液，较佳地其pH值在3-10之间，更佳地在5-7之间。所述的缓冲溶液较佳地为乙醇-醋酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、巴比妥缓冲溶液、甲酸钠缓冲溶液、邻苯二甲酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液、氨-氯化铵缓冲溶液、硼砂-氯化钙缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、醋酸-锂盐缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、醋酸-醋酸铵缓冲溶液、磷酸-三乙胺缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液(PBS)。
在本发明一优选实施方案中，所述的冻干保护剂为葡萄糖、蔗糖、甘露醇、丙二醇、丙三醇、半乳糖、海藻糖、乳糖、木糖醇或磷酸盐缓冲溶液。
较佳地，所述的空白脂质体中还可进一步包括其他辅料并包封于膜中。所述的其他辅料可为本领域制备脂质体时常规添加的除抗氧化剂和冻干保护剂以外的其他辅料，例如表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种。
本发明中，所述的表面活性剂较佳地为聚乙二醇和/或聚山梨醇酯。其中，所述的聚乙二醇的数均分子量较佳地为200-8000。所述的聚山梨醇酯较佳地为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚乳酸、聚赖氨酸-聚丙交酯乙交酯、聚醚酰亚胺-聚乳酸、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、泊洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚中的一种或多种。
本发明中，所述的热敏性辅料一般是指可使脂质体具有热敏性的聚合物和/或表面活性剂中的一种或多种。其中，所述的聚合物较佳地为聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚磷酸酯和聚磷脂酰胺共聚物中的一种或多种。所述的表面活性剂较佳地为吐温类表面活性剂(例如吐温80)和/或苄泽类表面活性剂。
本发明中，所述的离子添加剂较佳地为阳离子添加剂(例如十八胺)和/或阴离子添加剂(例如磷脂酸和/或磷脂酰丝氨酸)。
本发明中，上述各其他辅料的用量可按照本领域含有该类辅料的普通脂质体中的用量进行选择。例如，当所述的空白脂质体中包含表面活性剂时，其含量为0％-50％，但不为0％；当所述的空白脂质体中包含离子添加剂时，其含量为0％-10％，但不为0％。
本发明中，所述的空白脂质体可采用本领域常规的脂质体制备方法制备得到，一般地，可采用注入法、逆向蒸发法、冻融法、复乳法、主动包封法、前体脂质体制备法、薄膜分散法、冷冻干燥法、硫酸铵梯度法或pH梯度法以及以上任意两种方法结合使用的方法。本发明较佳地采用下列方法一或方法二，其中方法一制得的空白脂质体中不包含冻干保护剂，方法二制得的空白脂质体中包含冻干保护剂：
方法一包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体；
方法二包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体。
方法一或方法二中，所述的脂类物质、所述的如式I所示的人参皂苷衍生物、所述的胆固醇、所述的抗氧化剂、所述的大豆油和/或油酸钠、所述的冻干保护剂、所述的表面活性剂、所述的热敏性辅料、所述的pH敏感物质和所述的离子添加剂的定义均同前所述。
方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的有机溶剂可为本领域脂质体制备方法中常规的有机溶剂，较佳地为腈类溶剂、C1-C4的醇类溶剂、酮类溶剂、烷烃类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种，更佳地为C1-C4的醇类溶剂、腈类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种。所述的腈类溶剂较佳地为乙腈。所述的C1-C4醇类溶剂较佳地为甲醇、乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种。所述的醚类溶剂较佳地为四氢呋喃。所述的卤代烃类溶剂较佳地为氯仿和/或二氯甲烷。所述的酮类溶剂较佳地为丙酮和/或丁酮。所述的烷烃类溶剂较佳地为石油醚。所述的有机溶剂的用量可为本领域脂质体制备方法中常规的用量，可不作具体限定，一般要求有机溶剂和所有组分混合后能够得到澄清溶液即可，较佳地，所述的有机溶剂与方法一或方法二步骤(1)中的所有组分的体积质量比为5-20mL/g。
方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的混合的温度可为本领域常规的温度，一般为0-80℃，较佳地为10-80℃，更佳地为10-65℃。根据本领域常识，在一些情况下，为使混合温度达到80℃，需要在加热条件下进行；又或者当除冻干保护剂的所有原料组分中有对温度敏感的物质例如蛋白质类物质，一般选择在0℃下混合。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的除去步骤(1)中澄清溶液的有机溶剂的操作可为本领域常规操作，一般使用旋转蒸发器或者膜蒸发器除去有机溶剂。其中，所述的除去有机溶剂的温度根据需要除去的有机溶剂进行常规选择，一般为25-80℃。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的超声、高压均质或挤推过膜的操作可为本领域常规的操作。所述的超声、高压均质或挤推过膜的操作结束后，脂质体颗粒粒径一般在0.05-0.3微米。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的过滤的操作可为本领域脂质体制备方法中常规的操作，其目的是除去细菌、固体颗粒、特别大的脂质体(在负载活性物质的脂质体的制备方法中，也可除去未包封的游离药物)等。本发明中，所述的过滤较佳地为微孔滤膜过滤。所述的微孔滤膜的孔径较佳地为0.22微米。
方法二中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂的水溶液是指所述的冻干保护剂与水混合形成的水溶液。其中，所述的冻干保护剂的水溶液较佳地为5％-10％的冻干保护剂的水溶液，所述的百分比是指冻干保护剂的质量占冻干保护剂水溶液总质量的百分比。所述的冻干保护剂的水溶液的用量可不作具体限定，只要不影响空白脂质体的形成即可，较佳地与步骤(1)有机溶剂的用量相同。
在本发明一优选实施方案中，方法二中，当所述的冻干保护剂为缓冲剂时，步骤(2)中成膜的操作结束后，直接与所述的冻干保护剂混合即可。
方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的干燥的操作可为本领域常规的操作，较佳地为冷冻干燥，一般采用冷冻干燥机进行冷冻干燥。所述的冷冻干燥的温度和时间为本领域常规的温度和时间，可不作具体限定。
方法一或方法二中，为方便贮存，步骤(2)得到的含有空白脂质体的水溶液分装于西林瓶中，干燥，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封保存即可。
所述的空白脂质体可通过将活性物质包裹于所述的膜中用于制备负载活性物质的脂质体，以组合物的形式存在，所述的活性物质为药物的活性物质中的一种或多种。因此，本发明还提供了一种负载活性物质的脂质体。所述的负载活性物质的脂质体通常是指将药物中的活性物质中的一种或多种(活性物质)包裹于所述的空白脂质体中。
所述的负载活性物质的脂质体中，所述的活性物质与所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的质量比较佳地为1:0.1-1:10(例如1:0.67)，更佳地为1:1-1:6(例如1:1，1:2、1:3或1:4)。
所述的活性物质中，所述的药物可为本领域常规的药物，较佳地为抗肿瘤药物、抗真菌药物、抗病毒药物、抗生素、非甾体抗炎药物、钙离子拮抗剂、免疫抑制剂、麻醉剂、心脑血管及血管扩张药物、肠胃药物、抗抑郁症药物、生物制剂、多聚核苷酸和寡核苷酸(包括核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸)中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗肿瘤药物可为本领域常规的抗恶性肿瘤的药物，较佳地为紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、盐酸伊立替康、羟基喜树碱、氨基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、盐酸拓扑替康、勒托替康(Lurtotecan)、托泊替康、贝洛替康、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂(Nedaplatin)、络铂(Lobaplatin)、赛特铂(Satraplatin)、米铂、戊铂、Aroplatin(L-NDDP)、卡氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱、雷公藤甲素、他克莫司、柔红霉素、平阳霉素、盐酸多柔比星、伊达比星、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、磷酸依托泊甙、去氧鬼臼毒素、石杉碱甲、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春新碱、硫酸长春碱、异长春花碱、硫酸长春地辛、替莫唑胺、替加氟、环磷酰胺、异环磷酰胺、达卡巴嗪、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、硼替佐米、盐酸吉西他滨、磷酸氟达拉滨、卡培他滨、地西他滨、培美曲塞二钠、索拉菲尼、重组人干扰素a2b、阿拉伯糖苷胞嘧啶、全反式维甲酸、白介素-2、足叶乙苷、胸核苷酸合酶抑制剂、米托蒽醌、米诺地尔、阿奇霉素、盐酸表柔比星、盐酸多柔比星(阿霉素)、盐酸氨柔比星、5-氨基酮戊酸(5-ALA)、吉非替尼、伊马替尼、厄罗替尼、苏尼替尼、达沙替尼、拉帕替尼、阿西替尼、阿帕替尼、尼罗替尼、伯舒替尼、凡德他尼、替拉替尼、来那替尼、卡奈替尼、塞卡替尼、奥替尼啶、索拉菲尼、埃克替尼、木利替尼、来他替尼、坦度替尼、多韦替尼、3’,5’-环胞苷二棕榈酸酯和莪术醇中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗真菌药物较佳地为两性霉素B、庆大霉素、吲哚美辛、青霉素G、硝酸益康唑、氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑、卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净、头孢匹胺钠、头孢噻肟钠、头孢曲松、头孢哌酮、头孢妥仑匹酯、头孢西丁钠、头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢克肟、头孢泊肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢磺啶、头孢唑南、头孢唑肟、头孢他美酯、头孢特仑酯、头孢布坦、头孢地尼、头孢孟多、头孢替安、头孢雷特、头孢尼西、头孢他啶、头孢拉定、头孢丙烯、头孢唑林钠、头孢羟氨苄、头孢噻吩、头孢硫脒、头孢噻啶、头孢乙氰、头孢替唑、头孢匹林、头孢匹罗、头孢克定、头孢吡肟、夫西地酸钠、氟苯尼考和替加环素中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗病毒药物较佳地为利巴韦林、阿昔洛韦、阿糖胞苷、碘苷、无环鸟苷月桂酸酯、无环鸟苷棕榈酸酯、碘脱氧尿苷、环胞苷、环胞苷二棕榈酸酯、磷酸甲酸盐、磷酸醋酸盐、西米替丁、双嘧哒莫、利福平、异烟肼、吡喹酮、强力霉素、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、安普那韦、替普那韦、BMS232632、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷(didanosine，ddi)、扎西他滨(zalcitabine，ddc)、司他夫定(stavudine，d4t)、阿巴卡韦(abacavir)、阿迪佛韦(adefovirdipivoail，pmea)、替诺佛韦(tenofovir，pmpa)、氟代拉米夫定(ftc)、奈韦拉平(nevirapine)、地拉韦啶(delavirdine)、依法韦司(efavirens)、白细胞介素2(il－2)、替米考星和地克珠利中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗生素较佳地为青霉素、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、哌拉西林、美洛西林、替卡西林、阿洛西林、美西林、羧苄西林、磺苄西林、呋布西林、萘夫西林、双氯西林、匹氨西林、阿帕西林、阿扑西林、匹美西林、甲氧西林、仑氨西林、福米西林、氟氯西林、卡那霉素、那他霉素、丝裂霉素、丁胺卡那霉素、泰乐菌素、维替泊芬(Verteporfin)、头孢匹胺钠、硫酸奈替米星、阿奇霉素、氧氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、芦氟沙星、司氟沙星、氟罗沙星、莫西沙星、格帕沙星、曲伐沙星、淋沙星、吉米沙星、加替沙星、妥舒沙星、帕珠沙星、司帕沙星、克拉霉素、克林霉素、多粘菌素、妥布霉素、万古霉素、阿奇霉素、多西环素、四环素、土霉素、米诺环素、金霉素、胍甲环素、地美环素、美他环素、依替米星、奈替米星、西索米星、阿米卡星、阿贝卡星、地贝卡星、氨曲南、美罗培南、亚胺培南、硫霉素、帕尼培南、厄他培南、新霉素、巴龙霉素和大观霉素中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的钙离子拮抗剂较佳地为尼莫地平、硝苯地平、尼卡地平、尼群地平、维拉帕米、氨氯地平、地尔硫卓、氟桂利嗪、普尼拉明、加洛帕米和噻帕米中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的非甾体抗炎药较佳地为吲哚美辛、阿司匹林、对乙酰氨基酚、萘普生、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布和塞来昔布中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的免疫抑制剂较佳地为环孢素、前列地尔(又称前列腺E-1)、环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯和咪唑立宾中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的麻醉剂较佳地为地氟烷、七氟烷、异氟烷、恩氟烷、丙泊酚、芬太尼、乌拉坦、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因、戊巴比妥钠、水合氯醛、氯胺酮、氯醛糖和吗啡中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的心脑血管及血管扩张药物较佳地为达比加群酯、阿格列汀、藻酸双酯钠、银杏内酯、银杏黄酮、银杏提取物、细辛脑、奥美沙坦酯、瑞格列奈、硫辛酸、灯盏花素、乌拉地尔、烟酸、卡托普利、氯沙坦、葛根素、丹参酮IIA、盐酸沙格雷酯、氟伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他丁、辛伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、罗伐他汀、阿托伐他汀钙和瑞苏伐他汀钙中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的肠胃药物较佳地为奥美拉唑、兰索拉唑、艾普拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、特拉唑嗪、埃索美拉唑、泰妥拉唑、莱米诺拉唑、替那拉唑、二硫拉唑和拉呋替丁中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的抗抑郁药物较佳地为阿戈美拉汀、氟西汀、帕罗西汀、度洛西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰、艾司西酞普兰、文拉法辛、米氮平、丙咪嗪、阿米替林、氯丙咪嗪、多虑平、瑞美隆、万拉法新、苯乙肼、异卡波肼和反苯环丙胺中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的多聚核苷酸或寡核苷酸较佳地是指由碱基A、T、C、G和U中的几种组成的具有遗传等功能的片段，例如SiRNA、反义核酸或小胶质细胞NLRP3基因的RNAi序列。
所述的活性物质中，所述的生物制剂较佳地为本领域常规的单抗类药物、胰岛素、丙种球蛋白、抗毒血清、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、皮肤活性因子、表皮生长因子、流感疫苗、甲肝疫苗、抗癌疫苗、重组人酸性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子2单克隆抗体(VEGFR-2单克隆抗体)中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的化妆品中的活性物质一般是指化妆品中具有营养、改善皮肤状况和预防皮肤疾病的功效的活性物质，较佳地为熊果酸、超氧化物歧化酶(SOD)、生物蛋白T4N5、维生素D2、烟酸甲酯、精制蛇油、透明质酸、精油和神经酰胺中的一种或多种。
所述的活性物质中，所述的具有保健作用的物质可为本领域常规的具有保健作用的物质，较佳地为甘草甜素、甘草酸、甘草酸二钠盐、甘草酸甲酯、甘草酸二铵、维生素E、白藜芦醇、辅酶Q10、水飞蓟素、花青素、原花青素、叶黄素、叶酸、亚叶酸、姜黄素、大黄素、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、儿茶素、蓝莓提取物、谷胱甘肽和氧化苦参碱中的一种或多种。
在本发明一优选实施方案中，所述的活性物质为紫杉醇、多西他赛、伊立替康、利巴韦林、阿糖胞苷、硫酸长春新碱、表皮生长因子抗体、吲哚美辛、全反式维甲酸、顺铂、盐酸多柔比星、克拉霉素、环孢菌素、siRNA、两性霉素B、尼莫地平、卡巴他赛或埃伯霉素A。
本发明还提供了一种所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，
当所述的脂质体中包含冻干保护剂，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为包括下列任一方法：
方法A包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷衍生物和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质、冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
当所述的脂质体中不包含冻干保护剂时，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为包括下列任一方法：
方法A1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷衍生物和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质的混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与硫酸铵水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体。
方法A、B、C、D、A1、B1、C1或D1中，各条件和参数参照所述的空白脂质体的制备方法中的方法一或方法二。
方法A、B、C或D中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂还可在得一含负载活性物质的脂质体的水溶液之后干燥之前加入。
方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作可为本领域脂质体制备方法中常规的操作，本发明较佳地为将所述的空白脂质体溶液或所述的负载活性物质的脂质体溶液置于葡萄糖水溶液(例如0.15mol/L)中或纯水中透析。所述的透析的时间可为本领域脂质体制备方法中常规的时间，较佳地为5-20小时，更佳地为12小时。方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作还可在超声、高压均质或挤推过膜的操作之前进行。
方法C或C1中，所述的含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液或所述的硫酸铵水溶液中硫酸铵的用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体硫酸铵梯度法常规的用量。所述的含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液中或所述的硫酸铵水溶液中，硫酸铵的质量分数较佳地为1％-15％，更佳地为6.6％，所述的百分比是指硫酸铵的质量占上述水溶液总质量的百分比。
方法C或C1中，在进行过滤操作之前，较佳地还可进一步包含保温的操作。所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃(例如37℃)保温5分钟-1小时(例如30分钟)。
方法D或D1中，所述的柠檬酸水溶液的浓度和用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体pH梯度法常规的浓度和用量。本发明中，所述的柠檬酸水溶液的质量分数较佳地为1％-15％，更佳地为5.76％，所述的百分比是指柠檬酸的质量占柠檬酸水溶液总质量的百分比。所述的磷酸氢二钠水溶液的浓度和用量可不作具体限定，为本领域制备脂质体pH梯度法常规的浓度和用量。本发明中，所述的磷酸氢二钠水溶液的质量分数较佳地为5％-20％，更佳地为7.1％。所述的磷酸氢二钠水溶液的用量一般使含负载活性物质的脂质体水溶液中(外水相)的pH值在6.5-7.5之间(例如7.3)即可。为快速达到所需pH值，在进行过滤的操作之前，加入纯水以使负载活性物质的脂质体水溶液的pH值在6.5-7.5之间(例如7.3)。
方法D或D1中，在进行过滤的操作之前，还可进一步包含保温的操作。所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃(例如60℃)保温5分钟-1小时(例如30分钟)。
上述各方法中，根据所述的活性物质的脂溶性或水溶性，所述的活性物质较佳地还可以所述活性物质的水溶液或者所述活性物质的有机溶液的形式使用。所述的活性物质的水溶液或所述的活性物质的有机溶液的质量分数可不作具体限定，较佳地为质量体积分数为1％-20％的水溶液或有机溶液，所述的百分比是指所述活性物质的质量(g)，占所述活性物质水溶液或者所述活性物质有机溶液总体积(mL)的百分比。所述的活性物质有机溶液中的有机溶剂可为本领域中常规的有机溶剂，只要能够很好的溶解所述的活性物质，即可。本发明中，所述的有机溶剂较佳地为亚砜类溶剂，例如二甲基亚砜(DMSO)。
所述的负载活性物质的脂质体的制备方法中，所述的活性物质的用量可为本领域常规的用量，较佳地，所述的活性物质与所述的如式I所示的人参皂苷衍生物和的质量比为1:0.1-1:10，更佳地为1:2-1:6(例如1:3，1:4)。
所述的空白脂质体或所述的负载活性物质的脂质体的粒径可为本领域常规的粒径，较佳地为30-2000nm，更佳地为30-300nm，最佳地为50-300nm。所述的负载活性物质的脂质体中，包封率较佳地为80％以上，更佳地为90％以上，最佳地为95％以上。
当所述的负载活性物质的脂质体中所述的活性物质为药物时，所述的负载活性物质的脂质体的给药途径可为本领域常规的给药途径，较佳地为注射给药、口服给药或透皮给药，用于疾病的治疗和/或医疗保健。因此，所述的负载活性物质的脂质体通常制备成注射剂、冻干注射剂、口服固体制剂、口服液、搽剂、膏剂、酊剂或气雾剂的形式。其中所述的注射给药的方式较佳地为静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射。一般地，将所述的负载活性物质的脂质体加入到生理盐水、磷酸盐缓冲溶液或5％的葡萄糖水溶液配置成注射液，用于注射给药。
所述的负载活性物质的脂质体中，当所述的活性物质为抗肿瘤药物时，所述的负载活性物质的脂质体一般都具有对肿瘤细胞的靶向作用。本发明还提供了一种如式I所示的人参皂苷衍生物：
其中，R1、R2、R4和R5的定义均同前所述；R3为 R7和R8的定义均同前所述；
其中，如式I所示的化合物不为下列任一化合物：
在本发明一优选实施方式中，R3优选
更优选
所述如式I所示的人参皂苷衍生物，其为下表3中任一化合物：
表3
本发明还提供了一种如式I所示的人参皂苷衍生物的制备方法，其包含下列步骤：有机溶剂中，将如式I所示的化合物的乙酰化产物进行脱保护反应，得到如式I所示的化合物。
如式I所示的化合物的乙酰化产物是指：当如式I所示的化合物20位有羟基时，除20位羟基外，其余位置的羟基均与醋酸酐发生酯化反应，得到的产物；当如式I所示的化合物20位无羟基时，其所有位置的羟基均与醋酸酐发生酯化反应，得到的产物。
所述的乙酰化产物中的乙酰基还可替换为本领域常规的羟基保护基团。
所述的脱保护反应中，所述的有机溶剂可为脱保护反应常规的有机溶剂，优选醇类溶剂和/或醚类溶剂，更优选醇类溶剂和醚类溶剂的混合溶剂。所述的混合溶剂中，所述的醇类溶剂和所述的醚类溶剂的体积比优选1:1。所述的醇类溶剂优选甲醇。所述的醚类溶剂优选二氧六环。所述的溶剂的用量可不作具体限定，只要不影响反应的进行即可。
所述的脱保护反应优选在碱的作用下进行。所述的碱优选碱金属氢氧化物，例如氢氧化钾。所述的碱的用量可不作具体限定，其能够提供碱性环境，使羟基保护基(乙酰基)脱除即可。
所述的脱保护反应的温度优选常压下溶剂回流温度，例如60-110℃。
所述的脱保护反应的进程可根据本领域常规的检测方法进行监测，优选以如式I所示的化合物的乙酰化产物消失时作为反应的终点。所述的脱保护反应的时间优选8-15小时，例如10-12小时。
所述的脱保护反应结束后，优选包括后处理的操作。所述的后处理优选包括下列步骤：将反应液的pH值调至中性，有萃取用有机溶剂(例如酯类溶剂，如乙酸乙酯)萃取(优选萃取3次)，合并有机层，干燥(例如无水硫酸钠)，除去有机溶剂，在经高压层析分离，即可。
在本发明一优选实施方案中，人参皂苷Rg5H的制备方法包括下列步骤：有机溶剂中，将人参皂苷Rg5H乙酰化产物进行如下所示的脱保护反应即可，
其中，所述的脱保护反应的条件均同前所述。
所述的人参皂苷Rg5H乙酰化产物的制备方法优选包括下列步骤：有机溶剂中，将人参皂苷Rg3乙酰化产物进行脱20位羟基反应，制得人参皂苷Rg5H乙酰化产物；
所述的脱20位羟基反应可为本领域此类脱羟基反应常规的方法和条件。本发明优选下列条件：所述的有机溶剂优选卤代烃类溶剂，例如二氯甲烷。所述的有机溶剂的用量可不作具体限定，只要不影响反应进行即可。所述的脱20位羟基反应优选在三氟化硼乙醚和三乙基硅烷的作用下进行。所述的三氟化硼乙醚和三乙基硅烷的质量比优选1:0.5-1:5，例如1:1。所述的三乙基硅烷与Rg3乙酰化产物的质量比优选1:5-1:20，例如1:10。所述的脱20位羟基反应的温度优选室温。所述的脱20位羟基反应的进程可根据本领域常规的检测方法进行监测，优选以人参皂苷Rg3乙酰化产物消失时作为反应的终点。所述的脱20位羟基反应的时间优选5-10分钟。
所述的脱20位羟基反应结束后，优选包括后处理的操作。所述的后处理优选包括下列步骤：将反应液与冰水混合，淬灭反应，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(洗涤三次)，干燥(例如无水硫酸钠)，除去有机溶剂，即可。
同理，采用上述方法，还可制备得到人参皂苷Rh3H、人参皂苷Rh4H、人参皂苷Rk4H，替换相应原料即可。
在本发明一优选实施方案中，所述的人参皂苷Rg5H乙酰化产物的制备方法，其包括下列步骤：有机溶剂中，在催化剂的作用下，将人参皂苷Rg3(消旋体、R或S型)和醋酸酐进行如下所示的酰化反应，制得人参皂苷Rg3乙酰化产物；
所述的乙酰化反应可为本领域此类乙酰化反应常规的方法和条件。本发明优选下列条件：所述的有机溶剂优选碱性有机溶剂，例如吡啶。该碱性有机溶剂即作为有机溶剂，优作为缚酸剂。在本发明一优选实施方案中，也可使用常规非碱性有机溶剂，在另外加缚酸剂。所述的有机溶剂的用量可不作具体限定，只要不影响反应进行即可。所述的乙酰化反应优选在催化剂DMAP的作用下进行。所述的催化剂的用量一般为催化量。所述的人参皂苷Rg3与醋酸酐的质量体积比优选0.1g/mL-5g/mL，例如1g/mL。所述的乙酰化反应的温度优选室温。所述的乙酰化反应的进程可根据本领域常规的检测方法进行监测，优选以人参皂苷Rg3消失时作为反应的终点。所述的乙酰化反应的时间优选8-15小时，例如10小时。
所述的乙酰化反应结束后，优选包括后处理的操作。所述的后处理优选包括下列步骤：将反应液减压浓缩，除去溶剂，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤(洗涤三次)，干燥(例如无水硫酸钠)，浓缩至干，即可。
同理，采用上述方法，还可制备得到人参皂苷Rh3H乙酰化产物、人参皂苷Rh4H乙酰化产物、人参皂苷Rk4H乙酰化产物，替换相应原料即可。
在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明中，室温是指10-30℃。
本发明中，所述的冻干保护剂的水溶液或者所述的活性物质的水溶液的密度按照1g/mL计算(即水的密度)，因此，所述的冻干保护剂的水溶液或者所述的活性物质的水溶液的总质量m＝ρ*V。
本发明中，所述的活性物质的有机溶液的密度按照有机溶剂的种类计算，例如当有机溶剂为DMSO时，所述的活性物质的有机溶液的密度为1.1g/mL。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
本发明的人参皂苷衍生物，活性好，溶血性低，能够作为脂质体膜材，制备空白脂质体，同时部分化合物结构新颖。且用其制备得到的脂质体溶血性符合要求，安全性更高、成膜性更好、稳定性更优，具有重要的应用价值。本发明的空白脂质体具有高效、安全、稳定、靶向性强、均一性好、质量稳定和可靠、制备工艺简便的优点。本发明的空白脂质体可通过将活性物质包裹于所述的膜中用于制备负载活性物质的脂质体。当所述的活性物质为抗肿瘤药物时，所述的负载活性物质的脂质体一般都具有对肿瘤细胞的靶向作用、抗多药耐药作用、增效减毒和药物协同作用。
附图说明
图1为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图。
图2为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图
图3为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图
图4为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图。
图5为对照组、人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ脂质体于2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；图5-A、图5-B和图5-C分别为对照组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；图5-S是指荧光标尺，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光。图5-D至图5-R为实验组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图。其中，图5-D、图5-E和图5-F分别为人参皂苷Rg5H实验组；图5-G、图5-H和图5-I分别为人参皂苷Rg5实验组；图5-G、图5-K和图5-L分别为人参皂苷Rp1实验组；图5-M、图5-N和图5-O分别为人参皂苷Rg3H实验组；图5-P、图5-Q和图5-R分别为伪人参皂苷GQ实验组。
图6为各脂质体在注射入小鼠12h后的离体器官荧光分布图；A、B、C、D、E和F分别为对照组、人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ脂质体。
图7为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人肺癌细胞A549的抑瘤曲线图。
图8为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的抑瘤曲线图。
图9为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图。
图10为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图。
图11为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
图12为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
图13为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤曲线图。
图14为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
具体实施方式
1、实验药物：20(S)-人参二醇PD、20(R)-人参二醇PD、20(S)-原人参二醇PPD、20(R)-原人参二醇PPD、伪原人参二醇PPD、20(S)-人参三醇PT、20(R)-人参三醇PT、20(S)-原人参三醇PPT、20(R)-原人参三醇PPT、20(S)-人参皂苷Rg3、20(R)-人参皂苷Rg3、异人参皂苷Rg3、20(S)-人参皂苷Rh2、人参皂苷Rg5、20(S)-人参皂苷Rg2、伪人参皂苷PF11为本领域常规市售可得，例如上海本素医药科技有限公司、苏州星海金森生物医药有限公司、上海源叶生物科技有限公司等，或者根据本领域已知方法制备得到。
下述实施例中涉及的一些人参皂苷类衍生物，也可根据本领域已知方法制备得到，例如25-羟基-人参皂苷Rg3(25-OH-Rg3)的制备方法，可参照吉林大学硕士论文《西洋参茎叶二醇组皂苷酸降解产物的成份研究》，2009年，于志博中的方法；20(S)-甲基-原人参二醇和12,20-二甲氧基-原人参二醇(12,20-DiMe-PPD)的制备方法，可参照CN2010107476.7实施例5的方法；20-甲基-人参皂苷Rg3(20-Me-Rg3)、12-乙酰基-20-甲基-人参皂苷Rg3(12-Ac-20-Me-Rg3)、12-乙酰基-20-甲基-人参皂苷Rh2的制备方法可参照2015年中国科学技术大学余军博士论文《金催化糖苷化方法应用于肟的糖苷化及人参皂苷Rb2的合成》中的方法。
表4中，用*标注的碳为手性碳，其为S构型或R构型。此外，当R3中有双键时，存在E型或Z型。
表4
2、下述实施例中所使用的仪器为上海本素医药科技有限公司自有仪器设备，其设备型号和来源信息如下：
制备色谱：HB-DAC-100分离系统，NP7060×2台，NP7010×1台，NU3000×1台，DAC-100mm柱一支，奥泰3300ELSD检测器，江苏汉邦科技有限公司；
安捷伦液相色谱：安捷伦1100一套，奥泰3300ELSD，安捷伦科技(中国)有限公司；
旋蒸蒸发仪：ZX98-1 5L，上海鲁伊工贸有限公司；
20L旋转蒸发仪：R5002K，上海夏丰实业有限公司；
冷冻干燥机：FD-1D-80，上海比朗仪器制造有限公司；
冷冻干燥机：PDFD GLZ-1B，上海浦东冷冻干燥设备有限公司；
电子天平：CPA2250(精度0.00001g)，赛多利斯(上海)贸易有限公司；
电子天平：JY3003(精度0.001g)，上海舜宇恒平科学仪器有限公司。
3、下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。对于操作温度和压力，如未作特别说明，一般是指室温和常压。其中，室温是指10-30℃；常压是指一个标准大气压。回流温度，如未作特别说明，是指溶剂回流问题。
4、下列实施例中的高压层析分离的设备为上述所列汉邦DAC-100制备色谱系统；填料为日本富士(Fuji)的10um-120A的C18填料；检测器为蒸发光散射器(ELSD)；流速为400ml/min；工作压力为8MPa；紫外203nm；流动相2个梯度，75％甲醇水和95％以上甲醇水。
具体操作：将待分离样品溶解于适量的75％甲醇水中，先用75％的甲醇水平衡20分钟，上样，再用75％的甲醇水洗脱约100分钟，分段收集，然后用95％以上的甲醇水冲洗柱子约20分钟至TLC点板没有黑点。
其中，X％甲醇水是指甲醇体积占甲醇水总体积的体积百分比。例如75％的甲醇水是指甲醇体积占甲醇水体积的体积百分比为75％。
2、下述实施例中所使用的仪器为上海本素医药科技有限公司自有仪器设备，其设备型号和来源信息如下：
制备色谱：HB-DAC-100分离系统，NP7060×2台，NP7010×1台，NU3000×1台，DAC-100mm柱一支，奥泰3300ELSD检测器，江苏汉邦科技有限公司；
安捷伦液相色谱：安捷伦1100一套，奥泰3300ELSD，安捷伦科技(中国)有限公司；
旋蒸蒸发仪：ZX98-1 5L，上海鲁伊工贸有限公司；
20L旋转蒸发仪：R5002K，上海夏丰实业有限公司；
冷冻干燥机：FD-1D-80，上海比朗仪器制造有限公司；
冷冻干燥机：PDFD GLZ-1B，上海浦东冷冻干燥设备有限公司；
电子天平：CPA2250(精度0.00001g)，赛多利斯(上海)贸易有限公司；
电子天平：JY3003(精度0.001g)，上海舜宇恒平科学仪器有限公司。
3、下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。对于操作温度和压力，如未作特别说明，一般是指室温和常压。其中，室温是指10-30℃；常压是指一个标准大气压。回流温度，如未作特别说明，是指溶剂回流问题。
4、下列实施例中的高压层析分离的设备为上述所列汉邦DAC-100制备色谱系统；填料为日本富士(Fuji)的10um-120A的C18填料；检测器为蒸发光散射器(ELSD)；流速为400ml/min；工作压力为8MPa；紫外203nm；流动相2个梯度，75％甲醇水和95％以上甲醇水。
具体操作：将待分离样品溶解于适量的75％甲醇水中，先用75％的甲醇水平衡20分钟，上样，再用75％的甲醇水洗脱约100分钟，分段收集，然后用95％以上的甲醇水冲洗柱子约20分钟至TLC点板没有黑点。
其中，X％甲醇水是指甲醇体积占甲醇水总体积的体积百分比。例如75％的甲醇水是指甲醇体积占甲醇水体积的体积百分比为75％。
一、人参皂苷衍生物的制备
制备实施例1异人参皂苷Rg3(O)的制备
将10g异人参皂苷Rg3(E型)溶于20mL吡啶中，冰水浴下滴加醋酸酐，控制反应温度不超过5℃，反应10小时，TLC检测原料点消失，然后将反应液倒入冰水中，200mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，200mL/次饱和NaCl洗涤3次，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到异Rg3(E型)乙酰化产物。
取5g异Rg3(E型)乙酰化产物溶于50mL(THF：水1:1)中，加入3mL 33％过氧化氢，2mL 2M的氢氧化钠，室温反应过夜，TLC检测至原料点消失，冷却，用100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到过氧化异Rg3(E型)乙酰化产物。
取1g的过氧化异Rg3(E型)乙酰化产物，溶解于10mL甲醇中，加入0.5g甲醇钠，搅拌溶解，室温下反应10小时，TLC检测至原料点消失，用50mL/次正丁醇萃取3次，合并有机相，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，适量甲醇结晶2次，烘干得到0.3g98％以上的过氧化异人参皂苷Rg3(E型)。
1H NMR(δ,500M):5.35(1H,d,J＝7.5Hz)，5.08(1H,t,J＝7.0Hz),4.88(1H,d,J＝7.5Hz),4.52(1H,m),4.44-4.48(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.11-4.13(2H,m),3.90-3.91(3H,m),3.26(1H,m)，2.27-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.57(3H,s),1.56(3H,s),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,m),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,m,0.78(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):138.7,126.4,106.2,105.2,89.1,83.5,81.3,78.5,78.3,78.1,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,30.0,29.8,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.1,16.8.
ESI:802.31(M+H)+,HR-ESI-MS:802.3112.07219(M+H)+,(C42H73O14),Cal802.3120.
制备实施例2伪人参皂苷GQ、伪人参皂苷HQ和伪人参皂苷DQ的制备(参照CN201010204031.0实施例1)
取10g的20(S)-人参皂苷Rg3，溶于500mL的1,4-二氧六环中，加浓硫酸(H2SO4)调节pH＝3，搅拌下滴加间氯过苯甲酸50mL，于75℃加热回流90分钟，TLC控制至原料点消失。反应结束后，冷却至室温，用0.1M NaOH水溶液调节pH＝7.0，过滤，滤液浓缩至干，得8.5g伪人参皂苷GQ粗品。再以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)检测，高压层析分离后，产品段浓缩至干，得到4.2g HPLC纯度在98％以上的(20S,24S)-人参皂苷GQ和0.2g(20S,24R)-人参皂苷GQ。
将20(S)-人参皂苷Rg3原料分别换为20(S)-人参皂苷Rh2、20(S)-原人参二醇PPD，采用上述相同方法，分别制得(20S,24S)-伪人参皂苷HQ和(20S,24R)-伪人参皂苷HQ、(20S,24S)-伪人参皂苷DQ和(20S,24R)-伪人参皂苷DQ。
制备实施例3人参皂苷Rp1的制备
取1.5g的人参皂苷Rg5，溶解于150mL的乙醇中，加入300mg的5％的钯碳，搅拌，于40℃条件下通入氢气，反应6小时。反应结束后，过滤除去钯碳，滤液用乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干得到粗品人参皂苷Rp1。再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)检测，产品段浓缩至干，得到0.36g+0.55g HPLC纯度在98％以上的人参皂苷Rp1。
人参皂苷Rp1，
1H NMR(δ,500M):5.38(1H,d,J＝7.5Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m)，2.28-2.59(4H,m),2.17(2H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(6H,d,J＝2.8Hz),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,d,J＝2.8Hz),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):106.3,105.3,89.2,83.6,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,28.4,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2,16.8,16.6,16.3.
ESI:772.03(M+H)+,HR-ESI-MS:772.0312(M+H)+(C42H75O12),Cal 772.0315.
制备实施例4异人参皂苷Rg3H的制备
依制备实施例3同样方法，取异人参皂苷Rg3乙酰化产物作为起始原料，氢化，后处理、高压层析分离后，得到异人参皂苷Rg3H精品。
异人参皂苷Rg3H，
1H NMR(δ,500M):5.37(1H,d,J＝7.5Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m),2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.67-1.71(3H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(6H,s),1.35-1.50(10H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,m),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,m),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):106.3,105.3,89.2,83.6,82.3,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,30.0,29.8,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2,16.8.
ESI:788.05(M+H)+,HR-ESI-MS:788.0721(M+H)+,(C42H73O13),Cal 788.0728.
制备实施例5伪人参皂苷GD的制备
称取10g 20(S)-人参皂苷Rg3，溶解于100mL二氯甲烷和100mL的三氟乙酸混合溶液中，加入20mL 30％H2O2溶液，常温下反应1小时，TLC检测至原料点消失。反应结束后，加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH＝7.0，乙酸乙酯萃取3次(500mL/次)，合并有机相，减压浓缩至干。再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，得到2.7g 98％以上的20(S)-伪人参皂苷GD。
依同样方法，将原料换为20(R)-人参皂苷Rg3，得到20(R)-伪人参皂苷GD。
20(S)-伪人参皂苷GD，
1H NMR(δ,500M)5.25(1H,d,J＝7.8Hz),4.81(1H,m),4.45(1H,m),4.36(2H,m),4.20(1H,m),4.13(1H,m),4.12(1H,m),4.11(1H,m),4.10(1H,m),4.09(1H,m),3.81(2H,m),3.63(1H,m),3.17(1H,m),2.10(1H,m),2.05(1H,m),2.03(2H,m),1.92(1H,m),1.81(3H,m),1.70(2H,m),1.56(3H,s),1.46(1H,m),1.41(3H,s),1.34(5H,m),1.27(4H,m),1.23(4H,m),1.17(3H,s),1.10(1H,m),0.99(3H,s),0.86(4H,m),0.82(3H,s),0.69(3H,s),0.64(1H,m).
13C NMR:106.2,105.2,89.0,83.6,78.6,78.4,78.2,78.1,78.0,77.3,74.5,71.8,71.7,70.6,62.9,62.8,56.5,52.3,52.2,50.5,49.3,39.8,40.2,39.3,37.0,35.2,32.3,33.2,32.0,30.2,28.2,27.8,26.8,26.5,26.0,23.3,18.6,16.7,16.6,15.8.
ESI-MS:m/z 786.03[M+1]+
20(R)-伪人参皂苷GD，
1H NMR(δ,500M)5.25(1H,d,J＝7.8Hz),4.81(1H,m),4.45(1H,m),4.36(2H,m),4.20(1H,m),4.13(1H,m),4.12(1H,m),4.11(1H,m),4.10(1H,m),4.09(1H,m),3.81(2H,m),3.63(1H,m),3.17(1H,m),2.10(1H,m),2.05(1H,m),2.03(2H,m),1.92(1H,m),1.81(3H,m),1.70(2H,m),1.56(3H,s),1.46(1H,m),1.41(3H,s),1.34(5H,m),1.27(4H,m),1.23(4H,m),1.17(3H,s),1.10(1H,m),0.99(3H,s),0.86(4H,m),0.82(3H,s),0.69(3H,s),0.64(1H,m).
13C NMR:106.2,105.2,89.0,83.6,78.6,78.4,78.2,78.1,78.0,77.3,74.5,71.8,71.7,70.6,62.9,62.8,56.5,52.3,52.2,50.5,49.3,39.8,40.2,39.3,37.0,35.2,32.3,33.2,32.0,30.2,28.2,27.8,26.8,26.5,26.0,23.3,18.6,16.7,16.6,15.8.
ESI-MS:m/z 786.03[M+1]+.
制备实施例6伪人参皂苷GHD的制备
将实施例5的原料换成20(S)-人参皂苷Rh2，即获得20(S)-伪人参皂苷GHD。
1H NMR(δ,500M)5.25(1H,d,J＝7.8Hz),4.81(1H,m),4.45(1H,m),4.36(2H,m),4.20(1H,m),4.13(1H,m),4.12(1H,m),4.11(1H,m),4.10(1H,m),4.09(1H,m),3.81(2H,m),3.63(1H,m),3.17(1H,m),2.10(1H,m),2.05(1H,m),2.03(2H,m),1.92(1H,m),1.81(3H,m),1.70(2H,m),1.56(3H,s),1.46(1H,m),1.41(3H,s),1.34(5H,m),1.27(4H,m),1.23(4H,m),1.17(3H,s),1.10(1H,m),0.99(3H,s),0.86(4H,m),0.82(3H,s),0.69(3H,s),0.64(1H,m).
13C NMR:106.2,105.2,89.0,83.6,78.6,78.4,78.2,78.1,78.0,77.3,74.5,71.8,71.7,70.6,62.9,62.8,56.5,52.3,52.2,50.5,49.3,39.8,40.2,39.3,37.0,35.2,32.3,33.2,32.0,30.2,28.2,27.8,26.8,26.5,26.0,23.3,18.6,16.7,16.6,15.8.
ESI-MS:m/z 786.03[M+1]+.
制备实施例7 25-甲氧基-异人参皂苷Rg3的制备(参照CN201010107476.7实施例5)
称取10g异人参皂苷Rg3(E型)乙酰化产物，溶解于500mL的THF中，加入6g NaH，待NaH完全溶解后，加入18mL的碘甲烷，加热至70℃反应4小时，TLC监控至原料消失，反应结束后，过滤，滤液减压浓缩至干得25-甲氧基-异人参皂苷Rg3乙酰化产物。
取5g25-甲氧基-异人参皂苷Rg3乙酰化产物，溶于50ml二氧六环和25ml乙醇溶液中，加入10ml 50％氢氧化钠水溶液，于80℃恒温水浴中加热反应2小时，TLC控制至原料点消失，100ml/次正丁醇萃取3次，合并有机相，100ml/次饱和NaCl水溶液洗涤3次，适量无水硫酸钠干燥后，降压浓缩至干，烘干后，得25-甲氧基-异人参皂苷Rg3粗品。过柱纯化后，得到25-甲氧基-异人参皂苷Rg3(E型)。
1H NMR(δ,500M):5.37(1H,d,J＝7.5Hz),5.11(1H,t,J＝7.0Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m)，3.21(3H,s),2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.57(3H,s),1.56(3H,s),1.41(6H,s),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,m),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,m),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):138.8,126.5,106.3,105.3,89.2,83.6,82.1,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,48.0,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,30.0,29.8,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2.
ESI:800.07(M+H)+,HR-ESI-MS:800.0707(M+H)+,(C43H75O13),Cal 800.0712.
制备实施例8伪人参皂苷GP的制备
取10g人参皂苷GQ乙酰化产物溶于200mL甲苯中，加入1.5g三氟化硼乙醚，加热至90℃回流4小时，TLC检测至原料点消失，冷却，用100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到GP乙酰化产物。
取10g的GP乙酰化产物，溶解于50mL甲醇中，加入2g甲醇钠，搅拌溶解，室温下反应10小时，TLC检测至原料点消失，用100mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，适量甲醇结晶2次，烘干得到2.2g HPLC纯度在98％以上的伪人参皂苷GP。
1H NMR(δ,500M):5.25(1H,d,J＝7.8Hz),4.81(1H,d,J＝7.8Hz),4.45(1H,d,J＝10.2Hz),4.36(2H,m),4.21–4.24(3H,m),4.09–4.14(2H,dd,J＝19.2,9.6Hz),3.99–4.05(2H,m),3.79–3.83(3H,m),3.59(1H,td,J＝10.2,4.8Hz),3.16(1H,dd,J＝12.0,4.2Hz),1.33(3H,d,J＝6.5Hz),1.15(s,6H),1.13(3H,d,J＝6.5Hz)1.08(s,3H),0.96(s,3H),0.84(s,3H),0.78(s,3H),0.64(s,3H).
13C NMR(C5D5N,150MHz)d:106.2,105.2,88.9,86.8,85.7,83.6,78.4,78.3,78.2,78.1,77.3,71.8,71.7,71.2,70.4,62.9,62.8,56.5,52.2,50.8,49.8,48.5,40.0,39.8,39.3,37.0,35.2,32.9,32.5,31.7,28.9,28.1,27.7,27.3,27.0,26.8,25.5,18.5,18.4,16.6,16.6,15.6.
ESI-MS:m/z 786.03[M+1]+.
制备实施例9人参皂苷Rg5H的制备
将10g 20(R)-人参皂苷Rg3溶于20mL吡啶中，冰水浴下滴加10mL醋酸酐，然后再加入适量(一般为催化量，例如1g)催化剂DMAP，缓慢升温至室温，反应10小时，TLC检测至原料点消失，减压浓缩除去有机溶剂，200mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，2M盐酸洗涤3次，饱和碳酸氢钠洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到Rg3乙酰化产物。
取10g Rg3乙酰化产物溶于50mL二氯甲烷中，在冰水浴下，依次加入1g三氟化硼乙醚和1g三乙基硅烷，缓慢升温至室温，在室温下继续反应5-10min，再降温至0℃，加入冰水粹灭反应，用100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到Rg5H乙酰化产物。
取10g的Rg5H乙酰化产物，溶解于50mL甲醇和二氧六环1：1的混合溶液中，加入2g氢氧化钾，搅拌溶解，加热回流反应10小时，TLC检测至原料点消失，用饱和柠檬酸水溶液中和至pH＝7，用100mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，适量无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，在经高压层析分离，以C18层析分离，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)检测，产品段浓缩至干，得到人参皂苷Rg5H。
人参皂苷Rg5H：
1H NMR(δ,500M):5.37(1H,d,J＝7.5Hz),5.30(1H,t,J＝6.0Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m)，2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(3H,d,J＝2.8),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,s),1.03(1H,m),0.94(3H,s),0.95(3H,s),0.78(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):130.8,126.4,106.1,105.1,89.0,83.4,78.4,78.2,78.3,78.0,71.7,71.0,62.9,62.8,77.2,56.4,54.8,51.7,50.4,49.2,48.6,40.0,39.7,39.2,36.9,9,35.2,32.1,31.4,28.2,27.1,26.9,26.8,25.8,23.0,18.5,17.7,17.0,16.6,16.4,15.9.
ESI:770.13(M+H)+,HR-ESI-MS:792.0215(C42H72NaO12),Cal 792.0230.
制备实施例10人参皂苷Rg5H的制备
将10g 20(S)-人参皂苷Rg3溶于20mL THF中，冰水浴下滴加10mL醋酸酐，然后再加入适量(催化量，例如1g)催化剂DMAP，缓慢升温至室温，反应10小时，TLC检测至原料点消失，减压浓缩除去有机溶剂，200mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，2M盐酸洗涤3次，饱和碳酸氢钠洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到Rg3乙酰化产物。
取10g Rg3乙酰化产物溶于50mL二氯甲烷中，在冰水浴下，依次加入1g三氟化硼乙醚和1g三乙基硅烷，撤出冰浴，缓慢升温至室温，在室温下继续反应5-10min，再降温至0℃，加入冰水粹灭反应，用100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到Rg5H乙酰化产物。
取10g的Rg5H乙酰化产物，溶解于50mL甲醇和二氧六环1：1的混合溶液中，加入2g氢氧化钾，搅拌溶解，加热回流反应10小时，TLC检测至原料点消失，用饱和柠檬酸水溶液中和至pH＝7，用100mL/次乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，得到人参皂苷Rg5H。
制备实施例11人参皂苷Rg5H1(E)、Rg5H1(Z)、Rk1H的制备
称取10g 20(R)-Rg3乙酰化产物，溶解于50mL甲醇中，加入1g钯碳，常温常压下，通入氢气，搅拌4-6小时至反应液不吸氢，TLC检测至原料点消失，过滤掉钯碳，降压浓缩除去甲醇，烘干，得到20(R)-Rg3乙酰化氢化产物。
称取10g 20(R)-Rg3乙酰化氢化产物，溶解于50mL甲苯中，加入10g对甲苯磺酸，慢慢升温至90℃回流，反应4小时，TLC检测至原料点消失，冷却，100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到乙酰化产物粗品混合物(Rg5H1(E型)、Rg5H1(Z型)和Rk1H的乙酰化产物混合物)。
称取5g乙酰化产物粗品混合物，溶于20mL甲醇中，加入5g甲醇钠，室温下反应10小时，TLC检测至原料点消失，减压浓缩至干，用乙酸乙酯重新溶解，100mL/次水洗3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到产品的粗品混合物(Rg5H1(E型)、Rg5H1(Z型)和Rk1H的混合物)。
称取5g的产品的粗品混合物，再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，分别得到1.8g HPLC纯度在98％以上的Rg5H1(E型)、0.2g HPLC纯度在98％以上的Rg5H1(Z型)和0.8g HPLC纯度在98％以上的Rk1H。
人参皂苷Rg5H1(Z)
1H NMR(δ,500M):5.38(1H,d,J＝7.5Hz),5.10(1H,t,J＝6.6Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m)，2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(3H,s),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,d,J＝2.8Hz),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,d,J＝2.8Hz),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):138.79,125.86,106.3,105.3,89.2,83.6,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,28.4,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2,16.8,16.6,16.3.
ESI:770.13(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0321(C42H73O12),Cal 770.0315.
人参皂苷Rg5H1(E)
1H NMR(δ,500M):5.37(1H,d,J＝7.5Hz),5.11(1H,t,J＝7.0Hz),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m)，2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(3H,s),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,d,J＝2.8Hz),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,d,J＝2.8Hz),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):138.81,126.55,106.3,105.3,89.2,83.6,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,28.4,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2,16.8,16.6,16.3.
ESI:770.13(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0321(C42H73O12),Cal 770.0315.
人参皂苷Rk1H
1H NMR(δ,500M):5.37(1H,d,J＝7.5Hz),5.04(1H,br.s),4.91(1H,d,J＝7.5Hz),4.80(1H,m),4.55(1H,m),4.45-4.49(2H,m),4.23-4.33(5H,m),4.12-4.14(2H,m),3.90-3.92(3H,m),3.27(1H,m),2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,d,J＝2.8Hz),1.02(1H,m),0.97(3H,s),0.96(3H,d,J＝2.8Hz),0.79(3H,s),0.74(1H,m).
13C NMR(δ,125M):155.6,108.2,106.3,105.3,89.2,83.6,78.6,78.4,78.2,78.0,71.9,71.2,63.1,63.0,77.4,56.6,55.0,51.9,50.6,49.4,48.8,40.2,39.9,39.4,37.1,35.4,32.3,31.6,28.4,27.3,26.9,26.9,25.9,23.2,18.7,17.9,17.2,16.8,16.6,16.3.
ESI:770.13(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0321(C42H73O12),Cal 770.0315.
制备实施例12人参皂苷Rg5H1(E)、Rg5H1(Z)、Rk1H的制备
称取10g 20(S)-Rg3乙酰化产物，溶解于50mL甲醇中，加入1g钯碳，常温常压下，通入氢气，搅拌4-6小时至反应液不吸氢，TLC检测至原料点消失，过滤掉钯碳，减压浓缩除去甲醇，烘干，得到20(S)-Rg3乙酰化氢化产物。
称取10g 20(S)-Rg3乙酰化氢化产物，溶解于50mL甲苯中，加入10g对甲苯磺酸，慢慢升温至90℃回流，反应4小时，TLC检测至原料点消失，冷却，100mL/次饱和碳酸氢钠溶液洗涤3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到乙酰化产物粗品混合物。
称取5g乙酰化产物粗品混合物，溶于20mL甲醇中，加入5g甲醇钠，室温下反应10小时，TLC检测至原料点消失，减压浓缩至干，用乙酸乙酯重新溶解，100mL/次水洗3次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩至干，得到产品的粗品混合物。
称取5g的产品的粗品混合物，再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，分别1.6g HPLC纯度在98％以上的Rg5H1(E)、0.3gHPLC纯度在98％以上的Rg5H1(Z)和0.9g HPLC纯度在98％以上的Rk1H。
制备实施例13人参皂苷Rh3H的制备
采用制备实施例9和10相同方法，原料分别为20(R)-Rh2和20(S)-Rh2，得到人参皂苷Rh3H。
人参皂苷Rh3H，
1H NMR(δ,500M):5.11(1H,t,J＝7.0Hz),4.95(1H,d,J＝8.0Hz),4.40(1H,d,J＝11.5Hz),4.40(1H,m),4.24(1H,m),4.21(1H,m),4.05(1H,m),4.02(1H,m),3.93(1H,m),3.38(1H,dd,J＝11.5,4.5Hz),2.46-2.53(2H,m),2.40(1H,dd,J＝21.5,10.5Hz),2.21(1H,m),1.95(1H,m),2.03(2H,m),1.82(1H,m),1.72(2H,m),1.71(3H,s),1.69(3H,s),1.65(3H,s),1.59(1H,m),1.52(2H,m),1.49(2H,m),1.43(2H,m),1.36(1H,m),1.32(3H,s),1.24(1H,m),1.06(1H,m),1.01(3H,s),1.00(H,s),0.99(3H,s),0.81(3H,s),0.76(1,m),0.74(1H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):131.7,127.0,107.9,89.7,79.7,79.3,76.8,72.8,71.8,64.0,57.3,52.7,51.6,51.3,50.1,44.2,41.0,40.6,40.1,37.9,36.1,33.1,32.4,29.1,27.7,27.6,26.8,23.7,23.6,19.4,18.7,18.3,17.7,17.4,16.8,
ESI:607.83(M+H)+,HR-ESI-MS:607.8921(C36H67O7),[M+H]+,Cal 607.8915.
制备实施例14人参皂苷Rh3H1(E)、人参皂苷Rh3H1(Z)和人参皂苷Rk2H的制备
采用制备实施例11和12相同方法，原料为20(R)-Rh2乙酰化产物或20(S)-Rh2乙酰化产物，分别得到HPLC纯度在98％以上的人参皂苷Rh3H1(E)、人参皂苷Rh3H1(Z)和人参皂苷Rk2H。
人参皂苷Rh3H1(E)，
1H NMR(δ,500M):5.04(1H,br.s),4.95(1H,d,J＝8.0Hz),4.80(1H,m),4.40(1H,d,J＝11.5Hz),4.40(1H,m),4.24(1H,m),4.21(1H,m),4.05(1H,m),4.02(1H,m),3.93(1H,m),3.38(1H,dd,J＝11.5,4.5Hz),2.46-2.53(2H,m),2.40(1H,dd,J＝21.5,10.5Hz),2.21(1H,m),1.95(1H,m),2.03(2H,m),1.82(1H,m),1.72(2H,m),1.69(3H,s),1.65(3H,s),1.59(1H,m),1.52(2H,m),1.49(2H,m),1.43(2H,m),1.39(3H,m),1.36(1H,m),1.32(3H,s),1.24(1H,m),1.06(1H,m),1.01(3H,d,J＝2.8Hz),1.00(H,s),0.99(3H,d,J＝2.8Hz),0.81(3H,s),0.76(1,m),0.74(1H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):138.7,125.9,107.9,89.7,79.7,79.3,76.8,72.8,71.8,64.0,57.3,52.7,51.6,51.3,50.1,44.2,41.0,40.6,40.1,37.9,36.1,33.1,32.4,29.1,27.7,27.6,26.8,23.7,23.6,19.4,18.7,18.3,17.7,17.4,16.8,
ESI:607.83(M+H)+,HR-ESI-MS:607.8921(C36H67O7),[M+H]+,Cal 607.8915.
人参皂苷Rh3H1(Z)，
1H NMR(δ,500M):5.32(1H,t,J＝7.0Hz),4.95(1H,d,J＝8.0Hz),4.40(1H,d,J＝11.5Hz),4.40(1H,m),4.24(1H,m),4.21(1H,m),4.05(1H,m),4.02(1H,m),3.93(1H,m),3.38(1H,dd,J＝11.5,4.5Hz),2.46-2.53(2H,m),2.40(1H,dd,J＝21.5,10.5Hz),2.21(1H,m),1.95(1H,m),2.03(2H,m),1.82(1H,m),1.72(2H,m),1.70(3H,s),1.69(3H,s),1.59(1H,m),1.52(2H,m),1.49(2H,m),1.43(2H,m),1.39(3H,m),1.36(1H,m),1.32(3H,s),1.24(1H,m),1.06(1H,m),1.01(3H,d,J＝2.8Hz),1.00(H,s),0.99(3H,d,J＝2.8Hz),0.81(3H,s),0.76(1,m),0.74(1H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):138.7,125.9,107.9,89.7,79.7,79.3,76.8,72.8,71.8,64.0,57.3,52.7,51.6,51.3,50.1,44.2,41.0,40.6,40.1,37.9,36.1,33.1,32.4,29.1,27.7,27.6,26.8,23.7,23.6,19.4,18.7,18.3,17.7,17.4,16.8,
ESI:607.83(M+H)+,HR-ESI-MS:607.8921(C36H67O7),[M+H]+,Cal 607.8915.
人参皂苷Rk2H
1H NMR(δ,500M):4.95(1H,d,J＝8.0Hz),4.40(1H,d,J＝11.5Hz),4.40(1H,m),4.24(1H,m),4.21(1H,m),4.05(1H,m),4.02(1H,m),3.93(1H,m),3.38(1H,dd,J＝11.5,4.5Hz),2.46-2.53(2H,m),2.40(1H,dd,J＝21.5,10.5Hz),2.21(1H,m),1.95(1H,m),2.03(2H,m),1.82(1H,m),1.72(2H,m),1.70(3H,s),1.69(3H,s),1.59(1H,m),1.52(2H,m),1.49(2H,m),1.43(2H,m),1.39(3H,m),1.36(1H,m),1.32(3H,s),1.24(1H,m),1.06(1H,m),1.01(3H,d,J＝2.8Hz),1.00(H,s),0.99(3H,d,J＝2.8Hz),0.81(3H,s),0.76(1,m),0.74(1H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):155.6,108.2,107.9,89.7,79.7,79.3,76.8,72.8,71.8,64.0,57.3,52.7,51.6,51.3,50.1,44.2,41.0,40.6,40.1,37.9,36.1,33.1,32.4,29.1,27.7,27.6,26.8,23.7,23.6,19.4,18.7,18.3,17.7,17.4,16.8,
ESI:607.83(M+H)+,HR-ESI-MS:607.8921(C36H67O7),[M+H]+,Cal 607.8915.
制备实施例15人参皂苷Rh4H的制备
采用制备实施例9和10相同方法，原料分别为20(R)-Rh1和20(S)-Rh1，得到人参皂苷Rh4H。
人参皂苷Rh4H，
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.33(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.67(3H,s),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,m),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.35(3H,s),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.96(3H,m).
13C NMR(δ,125M):130.8,126.4,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
制备实施例16人参皂苷Rh4H1(E)、人参皂苷Rh4H1(Z)、人参皂苷Rk3H的制备
采用实施例11和12相同方法，原料为20(R)-Rh1乙酰化产物、20(S)-Rh1乙酰化产物，分别得到HPLC纯度在98％以上的人参皂苷Rh4H1E、人参皂苷Rh4H1Z、人参皂苷Rk3H。
人参皂苷Rh4H1(E)
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.40(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.71(3H,s),1.67(3H,s),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.83(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):140.2,123.6,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
人参皂苷Rh4H1(Z),
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.42(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.67(3H,s),1.65(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.8(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):140.2,120.4,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
人参皂苷Rk3H,
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.25(1H,d,J＝7.2),5.04(1H,br.s),4.92(1H,m),4.80(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.35(3H,s),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.83(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):155.6,108.2,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
制备实施例17人参皂苷Rk4H的制备
采用实施例9和10相同方法，原料分别为20(R)-Rg2和20(S)-Rg2，得到人参皂苷Rk4H。
人参皂苷Rk4H，
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.33(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.67(3H,s),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,m),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.35(3H,s),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.96(3H,m).
13C NMR(δ,125M):130.8,126.4,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
制备实施例18人参皂苷Rk4H1(E)、人参皂苷Rk4H1(Z)和人参皂苷Rg6H的制备
采用实施例11和12相同方法，原料为20(R)-Rg2乙酰化产物、20(S)-Rg2乙酰化产物，分别得到HPLC纯度在98％以上的人参皂苷Rk4H1(E)，人参皂苷Rk4H1(Z)，人参皂苷Rg6H。
人参皂苷Rh4H1E
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.40(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.71(3H,s),1.67(3H,s),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.83(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):140.2,123.6,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
人参皂苷Rh4H1Z,
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.42(1H,t,J＝8.3),5.25(1H,d,J＝7.2),4.92(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.59(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.67(3H,s),1.65(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.83(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):140.2,120.4,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
人参皂苷Rk3H
1H NMR(δ,500M):6.46(1H,brs),5.25(1H,d,J＝7.2),5.04(1H,br.s),4.92(1H,m),4.80(1H,m),4.77(1H,m),4.66(1H,m),4.52(1H,d,J＝9.8),4.69(1H,m),4.34(1H,m),4.37(1H,m),4.28(1H,m),4.20(1H,m),3.96(1H,m),3.90(1H,m),3.47(1H,dd,J＝4.1,11.6),2.5(1H,m),2.30(1H,m),2.26(1H,m),2.26(3H,m),2.10(3H,s),2.01(1H,m),1.98(2H,m),1.86(1H,m),1.79(3H,m),1.78(3H,d,J＝5.7),1.63(3H,s),1.64(2H,m),1.53(3H,d,J＝10.5Hz),1.41(3H,d,J＝2.8Hz),1.39(1H,m),1.35(3H,s),1.29(2H,m),1.20(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.83(3H,d,J＝10.5Hz).
13C NMR(δ,125M):155.6,108.2,102.0,101.9,79.5,78.7,78.4,75.9,78.9,71.3,67.3,74.4,73.1,71.1,63.0,60.9,54.7,51.8,49.7,39.7,48.3,46.1,41.2,40.1,39.4,32.1,35.9,32.2,31.4,27.1,26.7,27.8,25.9,23.0,17.7,17.0,17.2.
ESI:770.23(M+H)+,HR-ESI-MS:770.0341(C36H67O7),[M+H]+,Cal 770.0328.
制备实施例19 (20S,24S)-3-硫酸钠-伪人参皂苷DQ(SC-DQ)的制备
称取10g(20S,24S)-伪人参皂苷DQ，溶解于100mL吡啶中，将反应瓶置于盐水-冰浴中，冷却至0℃，缓慢滴加氯磺酸30mL，然后在室温下反应2小时后，TLC检测至原料点消失。反应结束后，加入0.1M NaOH调节pH＝7.0，正丁醇萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干。再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，得到11.4g HPLC纯度在98％以上的(20S,24S)-3-硫酸钠-伪人参皂苷DQ。
1H NMR(δ,500M):6.76(1H,s),5.48(1H,t,J＝7.0Hz),3.96(1H,m),3.80(1H,m),2.69(1H,m),2.25(2H,m),1.89(3H,m),1.88(1H,m),1.78(2H,m),1.72(3H,s),1.61(4H,m),1.38(2H,m),1.37(2H,m),1.35(1H,m),1.24(6H,s),1.12(2H,m),1.11(3H,s),0.95(1H,m),0.95(3H,s),0.93(3H,s),0.84(3H,s),0.79(3H,s),0.72(1H,m).
13C NMR(δ,125M):139.7,125.7,78.1,72.8,69.7,56.6,51.7,51.1,51.0,44.4,40.4,39.7,37.6,35.6,32.8,32.4,30.2,29.0,28.9,28.4,23.8,18.9,17.2,16.7,16.5,16.0,13.2.
LRMS(ESI):539.7966[C30H51O6S])；HRMS(ESI):found 539.7958,[C30H51O6S]).
制备实施例20 3-硫酸钠-人参皂苷Rg5H(SC-Rg5H)的制备
取10g人参皂苷Rg5H，溶解于50mL乙醇中，加入1g NaOH，加热至80℃回流，通入空气，反应5天，TLC检测至原料点消失。反应结束后，100mL/次正丁醇萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干，乙醇结晶3次，烘干，得到2.6g HPLC纯度在98％以上人参皂苷Rg5H。
采用实施例19相同方法，原料为Rg5H，即得3-硫酸钠-人参皂苷Rg5H。
1H NMR(δ,500M):5.30(1H,t,J＝6.0Hz),3.96(1H,m),3.80(1H,m),2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.64(3H,s),1.61(3H,s),1.41(3H,d,J＝2.8),1.35-1.50(8H,m),1.28(3H,s),1.20(1H,m),1.09(3H,s),1.03(1H,m),0.94(3H,s),0.95(3H,s),0.78(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):139.7,125.7,78.2,78.3,72.8,69.7,56.6,51.7,51.1,51.0,44.4,40.4,39.7,37.6,35.6,32.8,32.4,30.2,29.0,28.9,28.4,23.8,18.9,17.2,16.7,16.5,16.0,13.2.
LRMS(ESI):523.7916[C30H51O6S])；HRMS(ESI):found 523.7923,[C30H51O6S]).
制备实施例21 3-硫酸钠-异原人参二醇PPD(SC-Iso-PPD)的制备
称取10g异原人参二醇PPD(E型)，溶解于100mL吡啶中，将反应瓶置于盐水-冰浴中，冷却至0℃，缓慢滴加氯磺酸30mL，然后撤去冰浴，在室温下反应2小时后，TLC检测至原料点消失。反应结束后，加入0.1M NaOH调节pH＝7.0，正丁醇萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干。再经高压层析分离，以C18为填料，甲醇水梯度洗脱，蒸发光散射器(ELSD)，产品段浓缩至干，得到11.4g HPLC纯度在98％以上的3-硫酸钠-异原人参二醇PPD(E型)。
1H NMR(δ,500M):5.40(1H,t,J＝6.0Hz),3.96(1H,m),3.80(1H,m),2.28-2.59(2H,m),2.17(1H,m),1.99-2.02(3H,m),1.80-1.89(2H,m),1.71(3H,s),1.57(3H,s),1.51(3H,s),1.35-1.50(8H,m),1.20(1H,m),1.09(3H,s),1.03(1H,m),0.94(3H,s),0.95(3H,s),0.78(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):123.8,123.6,78.2,72.8,70.7,56.6,51.7,51.1,51.0,44.4,40.4,39.7,37.6,35.6,32.8,32.4,30.2,29.0,28.9,28.4,23.8,18.9,17.2,16.7,16.5,16.0,13.2.
ESI-MS:539.79[M-Na]-.
制备实施例22 3,6-二硫酸钠-伪人参皂苷TQ(SC-TQ)(20S,24S)的制备
采用制备实施例19相同方法，原料为20(S)-伪人参皂苷TQ，得到3,6-二硫酸钠-伪人参皂苷TQ(SC-TQ)。
1H NMR(δ,500M):3.87(1H,m),3.83(1H,m),3.51(1H,m),2.24(1H,m),1.92(2H,m),1.73(1H,m),1.68(1H,m),1.62(2H,m),1.55(1H,m),1.51(1H,m),1.46(2H,m),1.43(1H,m),1.29(1H,m),1.26(3H,s),1.22(1H,m),1.15(1H,m),1.09(3H,s),1.08(1H,m),1.00(4H,m),0.97(3H,s),0.90(3H,s),0.88(3H,s),0.77(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):87.5,87.2,78.9,78.7,70.6,70.1,56.1,52.2,50.3,49.0,48.9,39.8,39.0,37.3,34.9,32.3,31.7,28.9,28.6,28.0,27.5,25.1,24.3,18.4,17.3,16.3,15.5,15.3.
ESI-Ms:650.84(M-2Na)-.
制备实施例23 3-(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基-伪人参皂苷DQ(DC-DQ)的制备
称取10g伪人参皂苷DQ，溶解于200mL干燥的二氯甲烷，加入10g DMAP，至于冰浴中冷却至0℃，滴加50mL溶解于二氯甲烷中的三光气(10g)，控制反应温度0～5℃，反应2小时，TLC检测至原料点消失。加入纯化水终止反应，乙酸乙酯萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干，乙醇结晶2次，烘干，得到6.5g 3-氯甲酰-伪人参皂苷DQ。
称取5g 3-氯甲酰-伪人参皂苷DQ，溶解于50mL二氯甲烷中，冰浴中冷却至0℃，缓慢滴加含有5mL N,N-二甲基乙二胺的氯仿溶液15mL，控制反应温度在0～5℃，反应4小时，TLC检测至原料点消失。加入纯化水终止反应，氯仿萃取3次，合并有机相，减压浓缩至干，乙醇结晶3次，烘干，得到3.6g 3-(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基-伪人参皂苷DQ。
1H NMR(δ,500M):3.82(1H,m),3.81(1H,m),3.36(2H,t,J＝7.2Hz),2.70(1H,m),2.44(2H,t,J＝7.2Hz),2.26(6H,s),2.24(1H,m),1.92(2H,m),1.73(1H,m),1.68(1H,m),1.62(2H,m),1.55(1H,m),1.51(1H,m),1.46(2H,m),1.43(1H,m),1.29(2H,m),1.26(3H,s),1.22(1H,m),1.15(1H,m),1.09(3H,s),1.08(1H,m),1.00(4H,m),0.97(3H,s),0.90(3H,s),0.88(3H,s),0.77(3H,s),0.73(1H,m).
13C NMR(δ,125M):156.1,87.5,87.2,78.9,70.6,70.1,56.1,52.2,50.3,49.0,48.9,46.7,39.8,39.0,37.3,34.9,32.3,31.7,28.9,28.6,28.0,27.5,25.1,24.3,18.4,17.3,16.3,15.5,15.3.
ESI-Ms:591.90(M+H)+.
制备实施例24 3-(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基-人参皂苷Rg5H的制备
采用实施例23相同方法，原料为Rg5H，即得DC-人参皂苷Rg5H。
1H NMR(δ,500M):5.20(1H,t,J＝6.9Hz),3.80(1H,m),3.75(4H,m),3.42(6H,s),2.70(1H,m),2.20-2.28(4H,m),2.08(1H,m),1.98(2H,m),1.95(1H,m),1.72(1H,m),1.60(1H,m),1.57(3H,s),1.51(3H,s),1.45(3H,m),1.38(1H,m),1.32(3H,m),1.19(1H,m),0.98(1H,m),0.92(3H,s),0.92(3H,d,J＝6.5Hz),0.72(3H,s),0.68(1H,m),0.63(1H,m).
13C NMR(δ,125M):156.1,131.2,125.3,89.0,72.5,60.3,56.5,52.5,51.2,50.8,48.2,46.1,40.2,39.8,39.3,37.1,35.4,33.9,32.6,30.7,28.1,27.1,26.7,25.7,18.5,17.7,17.0,16.6,16.4,15.8.
ESI:559.90(M+H)+,HR-ESI-MS:559.9011(C35H63N2O3),Cal 559.9020.
二、脂质体的制备
实施例1人参皂苷Rg5H空白脂质体的制备
将0.9g蛋黄卵磷脂、0.4g人参皂苷Rg5H、0.1g维生素E、加入20mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5H的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5H空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为71nm，D50为104nm，D90为156nmnm。
实施例2伪人参皂苷GQ空白脂质体的制备
将0.9g蛋黄卵磷脂、0.4g伪人参皂苷GQ、0.1g维生素E、加入20mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含伪人参皂苷GQ的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷GQ空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为71nm，D50为100nm，D90为151nmnm。
实施例3异人参皂苷Rg3H空白脂质体的制备
将0.8g大豆卵磷脂、0.2g异人参皂苷Rg3H、加入20mL的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％蔗糖水溶液(所述的百分比是指蔗糖的质量占蔗糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含异人参皂苷Rg3H的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rg3H空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为69nm，D50为99nm，D90为149nm。
实施例4伪人参皂苷HQ空白脂质体的制备
将0.7g氢化大豆卵磷脂(HSPC)、0.1g伪人参皂苷HQ、0.2g胆固醇、加入20mL的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-65℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％甘露醇水溶液(所述的百分比是指甘露醇的质量占甘露醇水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含伪人参皂苷HQ的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷HQ空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为68nm，D50为139nm，D90为292nm。
实施例5伪人参皂苷GD空白脂质体的制备
将0.9g蛋黄卵磷脂、0.4g伪人参皂苷GD、0.2g大豆油、0.1g维生素C、加入20mL的异丙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-65℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％丙二醇水溶液(所述的百分比是指丙二醇的质量占丙二醇水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含伪人参皂苷GD的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷GD空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为62nm，D50为94nm，D90为141nm。
实施例6人参皂苷Rh3H1(E型)空白脂质体的制备
将0.5g蛋黄卵磷脂、0.4g人参皂苷Rh3H1(E)、0.05g抗坏血酸、加入20mL的正丁醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在65-75℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％丙三醇水溶液(所述的百分比是指丙三醇的质量占丙三醇水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.45微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rh3H1的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rh3H1空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为76nm，D50为138nm，D90为234nm。
实施例7伪人参皂苷PF11空白脂质体的制备
将0.7g蛋黄卵磷脂、0.4g人参皂苷PF11、0.01g硫代硫酸钠、加入20mL的四氢呋喃(THF)中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-65℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％半乳糖水溶液(所述的百分比是指半乳糖的质量占半乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过1微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷PF11的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷PF11空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为66nm，D50为130nm，D90为251nm。
实施例8人参皂苷Rp1空白脂质体的制备
将0.7g蛋黄卵磷脂、0.4g人参皂苷Rp1、0.01g硫代硫酸钠、加入20mL的乙醚中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在30-35℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％半乳糖水溶液(所述的百分比是指半乳糖的质量占半乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rp1的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rp1空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为72nm，D50为131nm，D90为225nm。
实施例9 25-甲基-异人参皂苷Rg3(异Rg3Me)空白脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂S100、0.4g 25-甲基-异人参皂苷Rg3、0.01g亚硫酸钠，加入20mL的乙醚中，在40-45℃下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜。加入20mL磷酸缓冲盐溶液(PBS)，旋转水化，完全溶解后，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含25-甲基-异人参皂苷Rg3的空白脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含脂质体180mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述25-甲基-异人参皂苷Rg3空白脂质体。经检测，该脂质体的D10为64nm，D50为123nm，D90为223nm。
实施例10伪人参皂苷GQ紫杉醇脂质体的制备
将0.8g蛋黄卵磷脂、0.4g伪人参皂苷GQ、0.1g紫杉醇、0.1g维生素E、0.1g大豆油、加入20mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含伪人参皂苷GQ紫杉醇脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含紫杉醇30mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷GQ紫杉醇脂质体。经检测，该脂质体的D10为72nm，D50为134nm，D90为246nm，包封率≥95％。
实施例11人参皂苷Rk1H多西他赛脂质体的制备
将0.7g大豆卵磷脂、0.2g人参皂苷Rk1H、0.1g多西他赛、0.1g胆固醇、0.1g油酸钠、0.1g维生素C、加入20mL的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含人参皂苷Rk1H多西他赛脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含多西他赛20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rk1H多西他赛脂质体。经检测，该脂质体的D10为75nm，D50为125nm，D90为264nm，包封率≥95％。
实施例12人参皂苷Rg5H1伊立替康脂质体的制备
将0.9g二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG(2000))、0.3g人参皂苷Rg5H1、0.1g维生素C，加入20mL的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜。加入20mL6.6％硫酸铵水溶液(所述的百分比是指硫酸铵的质量占硫酸铵水溶液总质量的百分比)，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液，然后将空白脂质体溶液在0.15M(0.15mol/L)的葡萄糖溶液中透析12h后，根据透析后空白脂质体溶液的体积加入相应质量的海藻糖，使得海藻糖在所述的空白脂质体溶液的质量分数达到10％，所述的百分比是指海藻糖的质量占空白脂质体溶液总质量的质量百分比。加入1mL质量分数为20％盐酸伊立替康水溶液(盐酸伊立替康0.2g)，在37℃水浴保温30min，得一含人参皂苷Rg5H1盐酸伊立替康脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸伊立替康40mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5H1盐酸伊立替康脂质体。经检测，该脂质体的D10为77nm，D50为117nm，D90为193nm，包封率≥95％。
实施例13异人参皂苷Rg3(E)利巴韦林脂质体的制备
将0.8g二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、0.3g异人参皂苷Rg3(E)、0.1g利巴韦林、0.1g抗坏血酸，加入20mL的乙醇中，在40-50℃下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL为5％的木糖醇水溶液(所述的百分比是指木糖醇的质量占木糖醇水溶液总质量的百分比)，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含异人参皂苷Rg3(E)利巴韦林脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含利巴韦林100mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rg3(E)利巴韦林脂质体。经检测，该脂质体的D10为72nm，D50为129nm，D90为217nm，包封率≥95％。
实施例14异人参皂苷Rg3(O)阿糖胞苷脂质体的制备
将0.7g蛋黄卵磷脂、0.3g异人参皂苷Rg3(O)、0.5g维生素C，加入20mL的乙醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜。加入20mL 6.6％硫酸铵水溶液(所述的百分比是指硫酸铵的质量占硫酸铵水溶液总质量的百分比)，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液，然后将空白脂质体溶液在0.15M(0.15mol/L)的葡萄糖溶液中透析12h后，根据透析后空白脂质体溶液的体积加入相应质量的海藻糖，使得海藻糖在所述的空白脂质体溶液的质量分数达到10％，所述的百分比是指海藻糖的质量占空白脂质体溶液总质量的质量百分比。加入1mL质量分数为20％阿糖胞苷水溶液(阿糖胞苷0.2g)，在37℃水浴保温30min，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含异人参皂苷Rg3(O)阿糖胞苷脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含阿糖胞苷100mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rg3(O)阿糖胞苷脂质体。经检测，该脂质体的D10为72nm，D50为130nm，D90为222nm，包封率≥95％。
实施例15异人参皂苷Rg3(Z)硫酸长春新碱脂质体的制备
将0.6g 1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、0.3g异人参皂苷Rg3(Z)，加入20mL的乙醇和氯仿体积比＝1：1的混合溶液中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-55℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜。加入20mL 6.6％硫酸铵水溶液(所述的百分比是指硫酸铵的质量占硫酸铵水溶液总质量的百分比)，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液，然后将空白脂质体溶液在0.15M(0.15mol/L)的葡萄糖溶液中透析12h后，根据透析后空白脂质体溶液的体积加入相应质量的海藻糖，使得海藻糖在所述的空白脂质体溶液的质量分数达到10％，所述的百分比是指海藻糖的质量占空白脂质体溶液总质量的质量百分比。加入1mL质量分数为20％硫酸长春新碱水溶液(硫酸长春新碱0.2g)，在37℃水浴保温30min，得一含异人参皂苷Rg3(Z)硫酸长春新碱脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含硫酸长春新碱1mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rg3(Z)硫酸长春新碱脂质体。经检测，该脂质体的D10为73nm，D50为121nm，D90为245nm，包封率≥95％。
实施例16人参皂苷Rh3H表皮生长因子抗体脂质体的制备
将0.6g氢化大豆卵磷脂(HSPC)、0.3g人参皂苷Rh3H，加入20mL的乙醇溶液中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃温度下，使用旋转蒸发器除去有机溶剂，成膜。加入20mL纯化水，超声至空白脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一空白脂质体溶液。加入10mL的表皮生长因子抗体(10mg)和水的混合液，在37℃水浴保温30min，超声，得一含人参皂苷Rh3H表皮生长因子抗体脂质体的水溶液，然后分装于西林瓶中，使每瓶含表皮生长因子抗体1mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rh3H表皮生长因子抗体脂质体。经检测，该脂质体的D10为70nm，D50为147nm，D90为330nm，包封率≥95％。
实施例17伪人参皂苷GP吲哚美辛脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂、0.2g伪人参皂苷GP、0.1g吲哚美辛、0.1g油酸钠，加入20mL的乙腈中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在50-60℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的10％海藻糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过1微米的微孔滤膜，得一含伪人参皂苷GP吲哚美辛脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含吲哚美辛10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷GP吲哚美辛脂质体。经检测，该脂质体的D10为66nm，D50为128nm，D90为247nm，包封率≥95％。
实施例18人参皂苷Rg5H全反式维甲酸脂质体的制备
将0.9g二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、0.4g人参皂苷Rg5H、0.1g全反式维甲酸，加入20mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷Rg5H全反式维甲酸脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含全反式维甲酸10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rg5H全反式维甲酸脂质体。经检测，该脂质体的D10为76nm，D50为137nm，D90为232nm，包封率≥95％。
实施例19异人参皂苷Rh2(E)顺铂脂质体的制备
将0.8g蛋黄卵磷脂、0.4g异人参皂苷Rh2(E)、0.1g顺铂、0.1g维生素E、加入20mL的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过1微米的微孔滤膜，得一含异人参皂苷Rh2(E)顺铂脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含顺铂10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rh2(E)顺铂脂质体。经检测，该脂质体的D10为70nm，D50为144nm，D90为315nm，包封率≥95％。
实施例20人参皂苷Rk4H1(E型)盐酸多柔比星脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂S100、0.3g人参皂苷Rk4H1、0.1g维生素E，加入20mL的乙醇中，在40-50℃下，搅拌形成澄清溶液，在50-55℃下，使用膜蒸发器蒸发除去有机溶剂，成膜。加入20mL为磷酸缓冲盐溶液(PBS)，旋转水化，完全溶解后，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含人参皂苷Rk4H1的空白脂质体的水溶液，加入1mL质量分数为20％的盐酸多柔比星水溶液(盐酸多柔比星0.2g)及6mL质量分数为7.1％磷酸氢二钠水溶液，加纯水使外水相pH值为7.30，在60℃水浴保温30min，得一含人参皂苷Rk4H1盐酸多柔比星脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含盐酸多柔比星20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rk4H1盐酸多柔比星脂质体。经检测，该脂质体的D10为66nm，D50为129nm，D90为255nm，包封率≥95％。
实施例21异人参皂苷Rg2克拉霉素脂质体的制备
将0.8g蛋黄卵磷脂、0.4g异人参皂苷Rg2、0.1g克拉霉素、0.1g维生素E、加入20mL的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含异人参皂苷Rg2克拉霉素脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含克拉霉素100mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rg2克拉霉素脂质体。经检测，该脂质体的D10为73nm，D50为121nm，D90为256nm，包封率≥95％。
实施例22人参皂苷Rk4H环孢菌素脂质体的制备
将0.8g蛋黄卵磷脂、0.4g人参皂苷Rk4H、0.1g环孢菌素、0.1g维生素E、加入20mL的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含人参皂苷Rk4H环孢菌素脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含环孢菌素50mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷Rk4H环孢菌素脂质体。经检测，该脂质体的D10为67nm，D50为134nm，D90为277nm，包封率≥95％。
实施例23 3-(N,N-二甲基氨基乙基)-氨基甲酰基-伪人参二醇DQ(DC-DQ)siRNA脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂S100、0.3g人参皂苷DC-DQ、0.1g维生素E，加入20mL的氯仿中，在40-50℃下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃下，使用旋转蒸发仪减压浓缩除去有机溶剂，成膜，继续抽真空保持过夜以彻底除去微量氯仿。加入20mL磷酸缓冲盐溶液(PBS)，旋转水化，完全溶解后，高压均质机均质至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷DC-DQ的空白脂质体的水溶液，加入1mL质量分数为20％的siRNA水溶液，在60℃水浴搅拌保温30min。通过0.22微米的微孔滤膜，得一含人参皂苷DC-DQ siRNA的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含siRNA 2mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷DC-DQ siRNA脂质体。经检测，该脂质体的D10为72nm，D50为130nm，D90为223nm，包封率≥95％。
实施例24伪人参皂苷DQ硫酸钠酯(SC-DQ)两性霉素B脂质体的制备
将0.4g人参皂苷SC-DQ溶解于20mL的氯仿中，于45℃水浴保温，不断搅拌溶解至完全溶清。再将0.5g mPEG2000-DSPE溶于10mL乙醇中，缓慢加入到上述药物溶液中，搅拌混合均匀。在60～65℃下，减压浓缩除去有机溶剂，真空干燥24小时，加入100mL海藻糖(100mg/mL)、pH＝7.4的三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液和溶解有0.6g两性霉素B的5mL二甲基亚砜(DMSO)溶液，旋转水化，完全溶解后，于室温对水透析24h。过高压均质机，然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含两性霉素B 10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷SC-DQ两性霉素B脂质体。经检测，该脂质体的D10为67nm，D50为132nm，D90为266nm，包封率≥95％。
实施例25人参皂苷SC-TQ尼莫地平脂质体的制备
将0.9g二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DOPE-PEG)、0.4g人参皂苷SC-TQ、0.1g尼莫地平，加入20mL的氯仿中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在40-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％乳糖水溶液(所述的百分比是指乳糖的质量占乳糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，得一含人参皂苷SC-TQ尼莫地平脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含尼莫地平2mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述人参皂苷SC-TQ尼莫地平脂质体。经检测，该脂质体的D10为75nm，D50为124nm，D90为253nm，包封率≥95％。
实施例26 3-硫酸钠-异原人参二醇PPD(E型)(SC-Iso-PPD(E))卡巴他赛脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂、0.3g SC-Iso-PPD(E)、0.1g卡巴他赛、加入50mL的DMF中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在60-70℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过1微米的微孔滤膜，得一含伪人参皂苷SC-Iso-PPD(E)卡巴他赛脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含卡巴他赛20mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述伪人参皂苷SC-Iso-PPD(E)卡巴他赛脂质体。经检测，该脂质体的D10为69nm，D50为134nm，D90为257nm，包封率≥95％。
实施例27异人参皂苷Rh2(Z)埃伯霉素A脂质体的制备
将0.9g大豆卵磷脂、0.3g异人参皂苷Rh2(Z)、0.1g埃伯霉素A、0.1g油酸钠，加入20mL的甲醇中，在室温下，搅拌形成澄清溶液，在45-50℃的恒温水浴中，旋转蒸发除去有机溶剂，成膜，加入20mL的5％葡萄糖水溶液(所述的百分比是指葡萄糖的质量占葡萄糖水溶液总质量的百分比)，超声至脂质体颗粒在0.1-0.3微米，通过1微米的微孔滤膜，得一含异人参皂苷Rh2(Z)埃伯霉素A脂质体的水溶液。然后将溶液分装于西林瓶中，使每瓶含埃伯霉素A 10mg。将上述水溶液放入冷冻干燥机中冷冻干燥72小时，通入保护性气体(氩气或氮气)，密封，即得所述异人参皂苷Rh2(Z)埃伯霉素A脂质体。经检测，该脂质体的D10为97nm，D50为237nm，D90为482nm，包封率≥95％。
三、应用实施例
1、实验药物：
人参皂苷Rg3(简称Rg3)、异Rg3(E)、异Rg3(Z)、异Rg3(O)、异Rg3H、25-OH-Rg3、20-Me-Rg3、12-Ac-20-Me-Rg3、伪人参皂苷GQ(简称伪GQ)、伪人参皂苷GD(简称伪GD)、伪人参皂苷GP(简称伪GP)、人参皂苷Rg5(简称Rg5)、Rg5H、Rg5H1(E)、Rk1H、Rp1、人参皂苷Rh2(简称Rh2)、异Rh2(E)、异Rh2(Z)、12-Ac-20-Me-Rh2、伪人参皂苷GHD(简称伪GHD)、伪人参皂苷HQ(简称伪HQ)、Rh3H、Rh3H1(E)、Rh3H1(Z)、原人参二醇PPD(简称PPD)(E型)、异原人参二醇PPD(简称异PPD)、人参二醇PD(简称PD)、伪人参皂苷DQ(简称伪DQ)、12,20-DiMe-PPD、人参皂苷Rk4(简称Rk4)、异人参皂苷Rg2(简称异Rg2(E型)、Rk4H、人参皂苷Rk4H1(E型)、人参皂苷Rh4(简称Rh4)、人参皂苷Rh4H(Rh4H)、人参皂苷Rh4H1(Rh4H1(E)、SC-PPD、SC-DQ、SC-TQ、DC-DQ、伪人参皂苷PF11(简称伪PF11)、紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、盐酸伊立替康、喜树碱、阿糖胞苷、硫酸长春新碱、全反式维甲酸、顺铂、盐酸多柔比星、吲哚美辛、利巴韦林、表皮生长因子抗体、克拉霉素、尼莫地平、环孢菌素、siRNA、两性霉素B、埃伯霉素A为本领域常规市售可得或依据本发明实施例合成。
如未作特别说明，各人参皂苷空白脂质体的制备方法见“脂质体的制备”部分，或者参照脂质体的制备中的实施例1，将相应人参皂苷替换为目标人参皂苷即可。
2、下述应用实施例中所使用的仪器为西南大学药学院自有仪器设备，其设备型号和来源信息如下：
高效液相色谱仪(Agilent 1100)；
电子天平(TB-215，美国Denver Instrument)；
超声波清洗机(SB3200DT，宁波新芝生物科技股份有限公司)；
氮吹仪(HGC-12A，天津市恒奥科技发展有限公司)；
旋转蒸发器(RE-2000A，上海亚荣生化仪器厂)；
超纯水制造系统(ULUP-IV-10T，四川优普超纯科技有限公司)；
恒温振荡器(SHA-C，常州澳华仪器有限公司)；
超声波细胞粉碎机(JY92-II，宁波新芝生物科技股份有限公司)；
高压均质机(B15，加拿大AVESTIN)；
激光粒度分析仪(Nano ZS,英国马尔文仪器公司)；
微型挤出器(Mini-extruder，Avanti Polar Lipids Inc)；
光电显微镜(XDS-1B，重庆光电仪器有限公司)；
洁净工作台(SW-CJ-1FD，苏州安泰空气技术有限公司)；
细胞培养箱(CCL-170B-8，新加坡ESCO)；
荧光倒置显微镜(IX-73，日本奥林巴斯)；
小动物活体成像系统(FX PRO，美国Bruker公司)；
3、实验细胞株：
A549人肺癌细胞(南京凯基生物)；
A549/T人肺癌紫杉醇耐药株(南京凯基生物)；
MCF-7人乳腺癌细胞(南京凯基生物)；
MCF-7/T人乳腺癌紫杉醇耐药株建立方法；
BGC-823人胃癌细胞(南京凯基生物)；
BGC-823/T人胃癌紫杉醇耐药株建立方法；
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本BGC-823细胞建立人胃癌耐药细胞系BGC-823/Taxol。将新复苏的BGC-823细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本BGC-823IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含2.5mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十二个月。
MCF-7/T人乳腺癌紫杉醇耐药株建立方法：
采用低浓度加量持续诱导法诱导亲本MCF7细胞建立人乳腺癌耐药细胞系MCF7/Taxol。将新复苏的MCF7细胞常规条件下培养2代或3代，使细胞生长稳定。待细胞消化传代第二天更新培养基时，以Taxol对亲本MCF7IC50的1/10为起始浓度加入紫杉醇。加药第二天更新培养基，并维持紫杉醇的浓度常规传代培养。待每个紫杉醇浓度时细胞稳定生长后再提高药物浓度继续培养，直到细胞可在含2.5mg/L紫杉醇的培养基中稳定生长，历时十二个月。
4、溶血检测：
2％红细胞混悬液的制备：取健康家兔血液，放入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，以除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9％氯化钠溶液约10倍量，摇匀，每分钟1000～1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9％氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9％氯化钠溶液制成2％的混悬液，供试验用。
检查法：取洁净玻璃试管5只，编号1、2号管为供试品管，3号管为阴性对照管，4号管为阳性对照管，5号管为供试品对照管。按下表所示依次加入2％红细胞悬液、0.9％氯化钠溶液、纯化水，混匀后，立即置37±0.5℃的恒温箱中进行温育。3小时后观察溶血和凝聚反应。
表5
试管编号 1 2 3 4 5
2％红细胞悬液/mL 2.5 2.5 2.5 2.5 /
0.9％氯化钠溶液/mL 2.2 2.2 2.5 / 4.7
纯化水/mL / / / 2.5 /
供试品溶液/mL 0.3 0.3 / / 0.3
如试管中的溶液呈澄明红色，管底无细胞残留，表明有溶血发生；如红细胞全部下沉，上清液无色透明，或上清液虽有色澄明，但1、2号管和5号管肉眼观察无明显差异，则表明无溶血发生。
若溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，轻轻倒转3次扔不分散，表明可能有红细胞凝聚发生，应进一步置显微镜下观察，如可见红细胞聚集为凝聚。
结果判断：当阴性对照管无溶血或凝聚发生，阳性对照管有溶血发生，若2支供试品管中的溶液在3小时内均不发生溶血和凝聚，判定供试品符合规定；若有1支供试品管的溶液在3小时内发生溶血和(或)凝聚，应设4支供试品管进行复试，其供试品管的溶液在3小时内均不得发生溶血和(或)凝聚，否则判定供试品不符合规定。
具体实验中，供试品(人参皂苷)浓度可根据实际调节。
5、实验动物：昆明小鼠(或称正常小鼠)，购自第三军医大学动物中心；
BALB/C-nu/nu小鼠(或称裸小鼠)，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。
6、细胞培养方法：将涉及的细胞株置于含5％CO2的37℃培养箱中，用DMEM或RPMI1640完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)培养，0.25％胰酶-EDTA消化传代，每周传代2-3次。
7、给药：对于每次实验，设置空白对照组(生理盐水组)、阳性对照组、载药人参皂苷脂质体组。设置3-6个以上浓度梯度、倍半或五倍稀释，每个浓度三复孔。
8、肿瘤细胞抑制浓度IC50实验方法：将对数生长期的肿瘤细胞用胰酶消化后配制成一定浓度的细胞液，按5000个/孔接种于96孔板，每孔加100μL。次日加入含不同浓度样品及相应溶剂对照的新鲜培养基，每孔加100μL(DMSO终浓度<0.5％)，每样品设10个剂量组，每组设三个平行孔，于37℃培养箱继续培养72h后，弃上清液，每孔加100μL的PBS及10μL的CCK-8，用微型振荡器震荡混匀，继续培养3h，用酶标仪在参考波长630nm，检测波长450nm条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，按中效方程计算IC50。
9、体外细胞实验方法：收集对数生长期的肿瘤细胞，将细胞重悬至DMEM完全培养基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素)中，终浓度为4×104个/mL。在96孔细胞培养板中，每孔加入200μL上述细胞悬液(8×103个细胞/孔)，置于37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养48h，将DMEM完全培养基分别换成200μL含不同浓度的抗肿瘤药物，使药物的最终浓度设置为6组以上，以DMEM完全培养基为阴性对照组，每个浓度设4个复孔，实验重复3次。细胞在37℃、5％CO2的细胞培养箱内培养72h后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μl，置细胞培养箱内继续培养4h后，弃上清液，每孔加入150μl DMSO，震荡10min后，用连续光谱多功能酶标仪(Tecan infinite M 200,TECAN，瑞士)测定在490nm处的OD值，按下式计算细胞存活率：(细胞存活率(％)＝OD药物/OD对照×100％)。
细胞存活率(％)＝OD490(样品)/OD490(对照)×100％；
其中，OD490(样品)为实验组的OD值，OD490(对照)为空白对照组的OD值。
10、体内药效实验方法：取1×107-10×107个/mL对数生长期的肿瘤细胞，用1mL注射器缓慢注射至18-20g的裸小鼠右侧腋下皮下，每只裸小鼠注射100μL，观察瘤块生长，直至瘤块体积长至约100mm3。将动物随机分组开始给药。每隔两天称重并测定肿瘤体积，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，处死裸小鼠，测定瘤块体积，计算相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增殖率(T/C)和肿瘤抑制百分率，做统计学分析。
肿瘤体积计算公式：V＝abh/2。其中，a为肿瘤直径，b为肿瘤横径，h为肿瘤高度。
相对肿瘤体积RTV计算公式：RTV＝Vt/V0。其中Vt为某一时间的肿瘤体积，V0为开始给药时的肿瘤体积。
相对肿瘤增殖率的计算公式：T/C(％)＝TRTV/CRTV×100％。其中TRTV为治疗组RTV，CRTV为溶剂对照组RTV。
肿瘤抑制百分率的计算公式：肿瘤抑制百分率＝(溶剂对照组瘤重-给药组瘤重)/溶剂对照组瘤重×100％。
疗效评价标准：T/C(％)>60为无效；T/C(％)≦60，并且与溶剂对照组比较，瘤体积经统计学处理P<0.05为有效。
下述应用实施例中C(μM)是指浓度，其中，Taxol+Rg5的浓度是指Taxol+Rg5是指人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体中，紫杉醇的浓度和人参皂苷Rg5的浓度，例如5+30是指人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体中紫杉醇的浓度为5μM，人参皂苷Rg5的浓度为30μM；Time(d)是指时间(天)。
应用实施例1溶血性研究
实验结果见表6。
表6
由上表中的数据可知，(1)12位和20位酯化对Rg3和Rh2的溶血性没有改变。(2)异Rg3的溶血性比Rg3降低了50倍以上。(3)伪GQ、伪GD和伪GP的溶血性都比Rg3降低了50倍以上。(4)相比人参皂苷Rg5，人参皂苷Rp1的溶血性更高。(5)相比人参皂苷Rg5，人参皂苷Rg5H、Rg5H1E、Rk1H、异Rg3(O)和异Rg3(H)等溶血性大幅度降低。(6)Rg3空白脂质体溶血严重。(7)GQ、Rg5H、异Rg3等空白脂质体比Rg5空白脂质体溶血性更低。(8)人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体的HD50在450-500μg/mL之间。HD5的安全剂量在400μg/mL左右。(9)人参皂苷Rg5H紫杉醇脂质体的溶血安全浓度达到了皂苷浓度1600μg/mL(紫杉醇浓度为400μg/mL)左右，溶血性比Rg5降低了3倍以上。
应用例2体外细胞实验与体内动物实验
1、体外细胞实验
根据体外细胞实验方法，测定人参皂苷Rg5H空白脂质体(Rg5H空)、人参皂苷Rg5空白脂质体(Rg5空)、人参皂苷Rp1空白脂质体(Rp1空)、异人参皂苷Rg3H空白脂质体(Rg3H空)、伪人参皂苷GQ空白脂质体(GQ空)、人参皂苷Rg5H紫杉醇脂质体(Taxol+Rg5H)、人参皂苷Rg5紫杉醇脂质体(Taxol+Rg5)、人参皂苷Rp1紫杉醇脂质体(Taxol+Rp1)、异人参皂苷Rg3H紫杉醇脂质体(Taxol+Rg3H)、伪人参皂苷GQ紫杉醇脂质体(Taxol+GQ)分别对人肺癌细胞(A549)和人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)细胞的存活率，设置表7和表9中的7个药物浓度，具体实验数据见表8和表10以及图1-4：图1为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图，图2为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人肺癌细胞(A549)的细胞存活率曲线图；图3为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图，图4为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的细胞存活率的曲线图。
表7脂质体对人肺癌细胞(A549)的浓度
表8脂质体对人肺癌细胞(A549)的存活率
由表8和图1-2可知：人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ空白脂质体对人肺癌细胞(A549)的活性较弱，Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ对人肺癌细胞(A549)的活性基本一致。
表9脂质体对耐紫杉醇人肺癌细胞(A549/T)的浓度
表10脂质体对耐紫杉醇人肺癌细胞(A549/T)的存活率
由表10和图3-4可知：Taxol+Rg5H和Taxol+Rg5比Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)具有更强活性。
2、脂质体对人肺癌细胞(A549)和人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的IC50值
根据IC50实验方法，测定Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空、GQ空、Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ分别对人肺癌细胞(A549)、人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的IC50值，实验结果见表11。
表11(单位μM)
备注：Taxol+Rg5H对应的IC50值0.07(0.42μM)中，0.07μM是指Taxol+Rg5H中Taxol的IC50值，而0.42μM是指Taxol+Rg5H中Rg5H的IC50值。
3、动物活体成像
取右前肢皮下肿瘤大小为100mm3左右，大小均一，无出血坏死的BALB/C-nu/nu小鼠，分别尾静脉注射含10％载近红外荧光探针(IR783)的Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H和GQ脂质体(以下简称实验组，即用人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ空白脂质体包封近红外荧光探针(IR783)和载近红外荧光探针(IR783)Rg5H脂质体(以下简称对照组，即用Rg5H空白脂质体包封近红外荧光探针(IR783)，制备方法为本领域常规的载近红外荧光探针(IR783)脂质体的制备方法)，然后于2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布，具体见图5和图6。
其中，图5-A、图5-B和图5-C分别为对照组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图；图5-S是指荧光标尺，按荧光强弱，依次是红黄绿蓝，红色表示荧光最强，蓝色表示微弱荧光。图5-D至图5-R为实验组在2、6和10h用活体成像仪记录IR783荧光的体内分布图。其中，图5-D、图5-E和图5-F分别为人参皂苷Rg5H实验组；图5-G、图5-H和图5-I分别为人参皂苷Rg5实验组；图5-G、图5-K和图5-L分别为人参皂苷R-Rp1实验组；图5-M、图5-N和图5-O分别为人参皂苷Rg3H实验组；图5-P、图5-Q和图5-R分别为伪人参皂苷GQ实验组。
由图5可知，对照组小鼠右前肢无荧光，而实验组小鼠右前肢荧光很强，说明人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ空白脂质体对肿瘤细胞的靶向性都很强。
图6-A-图6-F分别为对照组、人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ脂质体在注射入小鼠12h后的离体器官荧光分布图，其中最上方为肿瘤组织。
由图6可知，对照组小鼠肿瘤组织明显无荧光，而实验组小鼠肿瘤组织荧光很强，说明人参皂苷Rg5H、Rg5、Rp1、Rg3H、GQ空白脂质体对肿瘤细胞的靶向性都很强。
4、体内药效实验
根据体内药效实验方法，将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组。将相应制剂经尾静脉注射(按照25mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
4.1、对照组和实验组对人肺癌细胞A549抑瘤作用的比较
具体实验数据和结果见表12和图7，其中，图7为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人肺癌细胞A549的抑瘤曲线图。
表12各组对人肺癌细胞A549抑瘤作用
由表12和图7可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5H组最小，其次为Taxol+Rg5组，剩余其他组相对肿瘤体积也较小，最终数值都小于3。
4.2、对照组和实验组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)抑瘤作用的比较
具体实验数据和结果见表13和图8，其中，图8为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人肺癌紫杉醇耐药株(A549/T)的抑瘤曲线图。
表13各组对人肺紫杉醇耐药株A549/T抑瘤作用
由表13和图8可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，其他组对肿瘤抑制都显示出较明显的效果。
应用实施例3体外细胞实验与体内动物实验
1、体外药效实验方法
根据体外细胞实验方法，设置表14和16中的7个浓度，具体存活率数据和曲线图见表15和17和图9-12：图9为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图；图10为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ对人乳腺癌细胞(MCF-7)的细胞存活率的曲线图；图11为Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空和GQ空对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图；图12为Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H和Taxol+GQ对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的细胞存活率的曲线图。
表14脂质体对人乳腺癌细胞(MCF-7)的浓度
表15脂质体对人乳腺癌细胞(MCF-7)的存活率
由表15和图9-图10可知：Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ对MCF-7的活性比Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空、GQ空对MCF-7表现出的活性较强。
表16脂质体对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的浓度
表16脂质体对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的存活率
由表16和图11-12可知：Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H与Taxol+GQ对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)具有更高的细胞毒性。
2、脂质体对人乳腺癌细胞(MCF-7)和人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的IC50值
根据IC50实验方法，测定Rg5H空、Rg5空、Rp1空、Rg3H空、GQ空、Taxol+Rg5H、Taxol+Rg5、Taxol+Rp1、Taxol+Rg3H、Taxol+GQ分别对人乳腺癌细胞(MCF-7)、人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的IC50值，实验结果见表17。
表17
项目 MCF-7细胞株 MCF-7/T细胞株
Rg5H空 7.51μM 80.94μM
Rg5空 16.22μM 169.40μM
Rp1空 37.13μM 338.70μM
Rg3H空 39.14μM 328.60μM
GQ空 35.71μM 315.60μM
Taxol+Rg5H 0.07μM+0.42μm 0.70μM+4.20μM
Taxol+Rg5 0.13μM+0.76μm 1.31μM+7.86μM
Taxol+Rp1 0.28μM+1.70μm 2.77μM+16.59μM
Taxol+Rg3H 0.28μM+1.67μm 2.80μM+16.81μM
Taxol+GQ 0.31μM+1.83μm 2.71μM+16.25μM
3、体内药效实验
将27只皮下荷瘤裸鼠随机分为3组(每组9只)，分别设为空白对照组(Control组，0.9％NaCl)、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rp1H组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ、Taxol+Rg5组。将相应制剂经尾静脉注射(按照25mg·kg-1的剂量给药)。每隔两天记录每组小鼠的体重变化，并用游标卡尺测量肿瘤最长直径和最短直径，瘤体积由以下公式计算得到：V＝(dmax×dmin2)/2，其中dmin和dmax分别为肿瘤的短径和长径(mm)；根据测量的结果计算相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为给药时测量的肿瘤体积，Vt为每隔两天测量的肿瘤体积。
3.1、对照组和实验组对人乳腺癌细胞(MCF-7)抑瘤作用的比较
具体实验数据和结果见表18和图13，其中，图13为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤曲线图。
表18各组对人乳腺癌细胞(MCF-7)的抑瘤作用
由表18和图13可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5H组最小，且随着时间延长，到第21天时，Control组的相对肿瘤体积到达了11.238；而其他组最终的相对体积都较小。
3.2、对照组和实验组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用的比较
具体实验数据和结果见表19和图14。其中，图14为Control组、Taxol+Rg5H组、Taxol+Rg5组、Taxol+Rp1组、Taxol+Rg3H组、Taxol+GQ组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤曲线图。
表19各组对人乳腺耐紫杉醇耐药株(MCF-7/T)的抑瘤作用
由表19和图14可知：相同时间下，Control组的肿瘤体积最大，而Taxol+Rg5H组最小，且随着时间延长，到第21天时，Control组的相对肿瘤体积到达了11.438；而其他组表现出的抑瘤效果都非常显著。

Claims (25)

1.一种以如式I所示的人参皂苷衍生物为膜材的空白脂质体，其中所述的空白脂质体具有膜，所述的膜包含脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物：
其中，R1和R2各自独立地为H、-OH、R10、R11、R12或R13，但R1和R2不同时为H或-OH；
R3为
R4为H、-OH、＝O、-OCH3、-OEt、-OAc、正丙氧基、异丙氧基、正丙酰基、异丙酰基、正丁氧基、异丁氧基、正丁酰基、异丁酰基、-OBz、-F、-Cl、-Br、-I、-NH2或-SH；
R5为H、-OH、＝O、-OCH3或-OAc；
R6为-OH、-OCH3、-OOH、-OAc或-OBz；
R7、R9和R8独立地为H、-OH、-OCH3、-OCHO、-OAc或-OBz；
R10为下述基团中的任一种：-O-Glc、-O-Rha、-O-Lyx、-O-Xyl、-O-Ara(p)、-O-Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(数字表示碳位，→表示连接关系，下同)、-O-Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(4→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Xyl、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(f)、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Xyl、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(f)、-O-Glc(6→1)Glc(2→1)Ara(p)、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Glc、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Rha、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Lyx、-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(f)或-O-Glc(6→1)Glc(6→1)Ara(p)；
R11为R10中的一个以上的羟基被R10所取代，每个R10(当存在两个以上时)各自独立地相同或不同；
R12为下述基团中的任一种；
I)-mPEG、-Z-mPEG、-mPEO、-Z-PEO、-mPVP、-Z-PVP、-mEPEG或-Z-EPEG；其中，m为H、烷基或酰基，Z为-CO(CH2)aCO-、-NH(CH2)aCO-、-NH(CH2)bX-或-CO-Ar-CH2-；其中，X为O、S或NH，Ar为芳基，a为1、2、3、4、5、6、7或8，b为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；
II)C4-C22的脂肪酰基、磷酸酯基、丁二酸酯基、正丁酸酯基、磺酸酯基、苹果酸酯基、
III)Boc-甘氨酸、Boc-丙氨酸、Boc-精氨酸、Boc-赖氨酸、Boc-丝氨酸、乙酰苯丙氨酸、乙酰脯氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸或缬氨酸中的羧基去氢后所形成的基团；
IV)-O-PEO、-O-PVP、-O-PEG、-O-MPEG、-O-EPEG、-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Mal或-O-Glc(2→1)Glc(6→1)Ac；
R13为下述基团中的任一种：
2.如权利要求1所述的空白脂质体，其中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物中：
R1为-OH、和/或，R2为H或
和/或，R3为 优选为
和/或，R4为-OH、-OAc或＝O；
和/或，R5为H或-OH；
和/或，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物中的一个以上羟基可选地被R11所取代，每个R11各自独立地相同或不同；
和/或，如式I所示的人参皂苷衍生物中的一个以上羟基可选地被R12所取代；每个R12各自独立地相同或不同；
和/或，所述PEG、PEO、PVP或EPEG的分子量各自独立地为200～20000；
和/或，所述的脂肪酰基为天然存在的饱和或不饱和脂肪酸的酰基、及人工合成的饱和或不饱和的脂肪酸的酰基，较佳地为硬脂酰基或棕榈酰基。
3.如权利要求1所述的空白脂质体，其中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物为下列化合物中的一种或多种：
4.如权利要求1所述的空白脂质体，其中，所述的空白脂质体中，所述的脂类物质和所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的质量比为0.5:1-100:1，优选0.5:1-20:1，更优选0.5:1-4:1。
5.如权利要求1所述的空白脂质体，其中，所述的空白脂质体中，所述的膜还可进一步包含胆固醇；当所述的空白脂质体中还包含胆固醇时，所述的脂类物质和所述的如式I所示的人参皂苷的质量比优选为1:0.01-1:3，更优选为1:0.05-1:0.9，进一步优选为1:0.1-1:0.9；所述的胆固醇与所述的如式I所示的人参皂苷的质量比优选为1:0.1-1:100，更优选为1:0.5-1:50，进一步优选为1:0.5-1:10。
6.如权利要求5所述的空白脂质体，其中，所述的如式I所示的人参皂苷衍生物在所述的膜中的含量为0.01％-80％；所述的脂类物质在所述的膜中的含量为5％-99.9％；所述的胆固醇在所述的膜中的含量为0％-50％；以上百分比均是指各组分的质量占所述的膜的总质量的百分比。
7.如权利要求6所述的空白脂质体，其中，
所述的如式I所示的人参皂苷衍生物在所述的膜中的含量为10％-80％，优选为10％-40％，进一步优选为20％-40％；
和/或，所述的脂类物质在所述的膜中的含量为10％-70％，优选为30％-70％，进一步优选为30％-60％；
和/或，所述的胆固醇在所述的膜中的含量为0％-50％，优选为0％-20％，进一步优选为0％-20％。
8.如权利要求1-7任一项所述的空白脂质体，其中，
所述的空白脂质体还可进一步包含抗氧化剂并包封于所述的膜中；所述的抗氧化剂在所述的空白脂质体中的含量小于等于25％，优选为0.001％-15％，更优选为0.01％-10％，进一步优选为0.01％-5％(例如0.1％-1％)；所述的百分比是指所述的抗氧化剂的质量与所述的空白脂质体的总质量的百分比；
和/或，所述的空白脂质体还进一步包含冻干保护剂并包封于膜中；所述的冻干保护剂在空白脂质体中的含量≤95％或≤80％，较佳地为0.5％-70％，更佳地为5％-60％，最佳地为30％-60％；所述的百分比是指冻干保护剂的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比；
和/或，所述的空白脂质体还可进一步包含大豆油和/或油酸钠并封装在膜中；所述的大豆油和/或油酸钠的含量较佳地为1％-90％，更佳地为15％-80％，最佳地为20％-70％(例如3％-5％、25％-62.5％，20％-30％，或60％-70％)；所述的百分比是指大豆油和/或油酸钠的质量占所述的空白脂质体总质量的百分比；所述“大豆油和/或油酸钠”和所述的磷脂的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:0.5-1:5，最佳地为1:0.5-1:4(例如1:9、或1:1-1:2)；
和/或，所述的空白脂质体中还进一步包括其他辅料并包封于膜中；所述的其他辅料为表面活性剂、热敏性辅料、pH敏感物质和离子添加剂中的一种或多种。
9.如权利要求1-8任一项所述的空白脂质体，其中，所述的空白脂质体包含下列组分：脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、“大豆油和/或油酸钠”和磷脂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、抗氧化剂和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、磷脂和胆固醇，或者如式如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、脂类物质、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质和胆固醇，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇和抗氧化剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇和冻干保护剂，或者如式I所示的人参皂苷衍生物、大豆油和/或油酸钠、脂类物质、胆固醇、抗氧化剂和冻干保护剂。
10.如权利要求9所述的空白脂质体，其中，所述的脂类物质为磷脂，较佳地为天然磷脂、半合成磷脂和全合成磷脂中的一种或多种；所述的天然磷脂较佳地为天然卵磷脂、鞘磷脂、甘油磷脂、大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂和脑磷脂中的一种或多种；所述的半合成或全合成磷脂较佳地为磷脂酰胆碱类的磷脂、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺类的磷脂、磷脂酰甘油、二鲸蜡磷酸酯、PEG修饰的磷脂、琥珀酸胆固醇酯和2-油酰-1-棕榈锡甘油-3-磷酸胆碱中的一种或多种；所述的磷脂酰胆碱类的磷脂较佳地为氢化大豆卵磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、磷脂酰胆碱、单棕榈酰磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰胆碱中的一种或多种；所述的磷脂酰乙醇胺类的磷脂较佳地为1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰乙醇胺、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺、二芥酰基磷脂酰乙醇胺、二油酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺和二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；所述的PEG修饰的磷脂较佳地为磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二油酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、C8神经酰胺-聚乙二醇、C16神经酰胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-琥珀酰、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-丙酰胺双巯基吡啶、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-三聚氯氰、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叶酸、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-活性酯、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-马来酰亚胺基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-生物素、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-荧光素、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羟基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基、磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基、二月桂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-羧基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硫基、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-硅烷、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-叠氮、胆固醇-聚乙二醇、甲氧基-聚乙二醇-胆固醇、胆固醇-聚乙二醇-活性酯、胆固醇-聚乙二醇-马来酰亚胺、胆固醇-聚乙二醇-生物素、胆固醇-聚乙二醇-荧光素、胆固醇-聚乙二醇-羧基、胆固醇-聚乙二醇-氨基和胆固醇-聚乙二醇-硫基中的一种或多种；
和/或，所述的抗氧化剂为焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、α-生育酚、α-羟基酸、黄酮类化合物、苯丙素酚类化合物、维生素E、维生素C、反丁烯二酸、半胱氨酸、蛋氨酸、丁羟基茴香醚、二丁羟基甲苯、硫代二丙酸、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、二硫代氨基苯甲酸类化合物、枸橼酸、苹果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、氢醌、羟基香豆素、乙醇胺、磷酸和亚磷酸中的一种或多种；
和/或，所述的冻干保护剂为糖、多元醇、氨基酸和缓冲剂中的一种或多种；其中，所述的糖较佳地为单糖、双糖和多糖中的一种或多种；所述的单糖较佳地为葡萄糖、甘露醇、木糖醇和山梨醇中的一种或多种；所述的双糖较佳地为蔗糖、乳糖、半乳糖和麦芽糖中的一种或多种；所述的多糖较佳地为海藻糖；所述的多元醇较佳地为丙二醇和/或丙三醇；所述的氨基酸较佳地为α-氨基酸，选自苏氨酸、甘氨酸、谷氨酸、精氨酸和组氨酸中的一种或多种；所述的缓冲剂是指缓冲溶液；所述的缓冲溶液的pH值较佳地在3-10之间，更佳地在5-7之间；所述的缓冲溶液较佳地为乙醇-醋酸缓冲溶液、三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液、巴比妥缓冲溶液、甲酸钠缓冲溶液、邻苯二甲酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲溶液、氨-氯化铵缓冲溶液、硼砂-氯化钙缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液、醋酸-锂盐缓冲溶液、醋酸-醋酸钠缓冲溶液、醋酸-醋酸铵缓冲溶液、磷酸-三乙胺缓冲溶液或磷酸盐缓冲溶液；
和/或，所述的表面活性剂为聚乙二醇和/或聚山梨醇酯；其中，所述的聚乙二醇的数均分子量较佳地为200-8000；所述的聚山梨醇酯较佳地为聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单棕榈酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇单硬脂酸酯、聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-聚乳酸、聚赖氨酸-聚丙交酯乙交酯、聚醚酰亚胺-聚乳酸、聚乙二醇-聚己内酯、聚乙二醇-聚乙交酯丙交酯、泊洛沙姆188、聚氧乙烯脂肪酸酯类、聚氧乙烯脂肪酸醚和聚氧乙烯甲基蓖麻油醚中的一种或多种；
所述的热敏性辅料较佳地是指使脂质体具有热敏性的聚合物和/或表面活性剂中的一种或多种；其中，所述的聚合物较佳地为聚丙烯酰胺、聚丙烯酸、聚磷酸酯和聚磷脂酰胺共聚物中的一种或多种；所述的表面活性剂较佳地为吐温类表面活性剂和/或苄泽类表面活性剂；
所述的离子添加剂较佳地为阳离子添加剂和/或阴离子添加剂；所述的阳离子添加剂较佳地为十八胺，所述的阴离子添加剂较佳地为磷脂酸和/或磷酯酰丝氨酸。
11.一种如权利要求1-10任一项所述的空白脂质体的制备方法，其中，其包括下列方法一或方法二，其中方法一制得的空白脂质体中不包含冻干保护剂，方法二制得的空白脂质体中包含冻干保护剂：
方法一包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体；
方法二包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷衍生物混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有空白脂质体的水溶液，干燥，即得所述的空白脂质体；
方法一或方法二中，所述的脂类物质、所述的如式I所示的人参皂苷衍生物、所述的胆固醇、所述的抗氧化剂、所述的大豆油和/或油酸钠、所述的冻干保护剂、所述的表面活性剂、所述的热敏性辅料、所述的pH敏感物质和所述的离子添加剂的定义均同权利要求1-10任一项所述。
12.如权利要求11所述的制备方法，其中，
方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的有机溶剂为腈类溶剂、C1～C4的醇类溶剂、酮类溶剂、烷烃类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种，较佳地为C1～C4的醇类溶剂、腈类溶剂、醚类溶剂和卤代烃类溶剂中的一种或多种；所述的腈类溶剂较佳地为乙腈；所述的C1～C4醇类溶剂较佳地为甲醇、乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种；所述的醚类溶剂较佳地为四氢呋喃和/或乙醚；所述的卤代烃类溶剂较佳地为氯仿和/或二氯甲烷；所述的酮类溶剂较佳地为丙酮和/或丁酮；所述的烷烃类溶剂较佳地为石油醚；所述的有机溶剂与方法一或方法二步骤(1)中的所有组分的体积质量比为5-20mL/g；
和/或，方法一或方法二中，步骤(1)中，所述的混合的温度为0-80℃，较佳地为10-80℃，更佳地为10-65℃；
和/或，方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的除去步骤(1)中澄清溶液的有机溶剂的操作为使用旋转蒸发器或者膜蒸发器除去有机溶剂；所述的除去有机溶剂的温度较佳地为25-80℃；
和/或，方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的过滤为微孔滤膜过滤；所述的微孔滤膜的孔径较佳地为0.22微米；
和/或，方法二中，步骤(2)中，所述的冻干保护剂的水溶液是指5％-10％的冻干保护剂的水溶液；所述的百分比是指冻干保护剂的质量占冻干保护剂水溶液总质量的百分比；
和/或，方法一或方法二中，步骤(2)中，所述的干燥为采用冷冻干燥机冷冻干燥。
13.一种如权利要求1-3中任一项所述的如式I所示的人参皂苷衍生物作为脂质体膜材中的应用。
14.一种负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的负载活性物质的脂质体是指将药物、化妆品中的活性物质和具有保健作用的物质中的一种或多种包封于如权利要求1-10任一项所述的空白脂质体中。
15.如权利要求13所述的应用或如权利要求14所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，所述的药物为抗肿瘤药物、抗真菌药物、抗病毒药物、抗生素、非甾体抗炎药物、钙离子拮抗剂、免疫抑制剂、麻醉剂、心脑血管及血管扩张药物、肠胃药物、抗抑郁症药物药物、生物制剂、多聚核苷酸和寡核苷酸中的一种或多种；
所述的抗肿瘤药物较佳地为紫杉醇、多西他赛、卡巴他赛、盐酸伊立替康、羟基喜树碱、氨基喜树碱、7-乙基-10-羟基喜树碱、盐酸拓扑替康、勒托替康、托泊替康、贝洛替康、顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂、络铂、赛特铂)、米铂、戊铂、Aroplatin、卡氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、三尖杉酯碱、高三尖杉酯碱、雷公藤甲素、他克莫司、柔红霉素、平阳霉素、盐酸多柔比星、伊达比星、氟尿嘧啶、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、磷酸依托泊甙、去氧鬼臼毒素、石杉碱甲、酒石酸长春瑞滨、硫酸长春新碱、硫酸长春碱、异长春花碱、硫酸长春地辛、替莫唑胺、替加氟、环磷酰胺、异环磷酰胺、达卡巴嗪、埃博霉素A、埃博霉素B、埃博霉素C、埃博霉素D、埃博霉素E、埃博霉素F、硼替佐米、盐酸吉西他滨、磷酸氟达拉滨、卡培他滨、地西他滨、培美曲塞二钠、索拉菲尼、重组人干扰素a2b、阿拉伯糖苷胞嘧啶、全反式维甲酸、白介素-2、足叶乙苷、胸核苷酸合酶抑制剂、米托蒽醌、米诺地尔、阿奇霉素、盐酸表柔比星、盐酸多柔比星、盐酸氨柔比星、5-氨基酮戊酸、吉非替尼、伊马替尼、厄罗替尼、苏尼替尼、达沙替尼、拉帕替尼、阿西替尼、阿帕替尼、尼罗替尼、伯舒替尼、凡德他尼、替拉替尼、来那替尼、卡纽替尼、卡奈替尼、塞卡替尼、奥替尼啶、索拉菲尼、埃克替尼、木利替尼、来他替尼、坦度替尼、多韦替尼、3’,5’-环胞苷二棕榈酸酯和莪术醇中的一种或多种；
所述的抗真菌药物较佳地为两性霉素B、庆大霉素、吲哚美辛、青霉素G、硝酸益康唑、氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、雷夫康唑、卡泊芬净、米卡芬净、阿尼芬净、头孢匹胺钠、头孢噻肟钠、头孢曲松、头孢哌酮、头孢妥仑匹酯、头孢西丁钠、头孢氨苄、头孢呋辛钠、头孢克肟、头孢泊肟、头孢甲肟、头孢地嗪、头孢磺啶、头孢唑南、头孢唑肟、头孢他美酯、头孢特仑酯、头孢布坦、头孢地尼、头孢孟多、头孢替安、头孢雷特、头孢尼西、头孢他啶、头孢拉定、头孢丙烯、头孢唑林钠、头孢羟氨苄、头孢噻吩、头孢硫脒、头孢噻啶、头孢乙氰、头孢替唑、头孢匹林、头孢匹罗、头孢克定、头孢吡肟、夫西地酸钠、氟苯尼考和替加环素中的一种或多种；
所述的抗病毒药物较佳地为利巴韦林、阿昔洛韦、阿糖胞苷、碘苷、无环鸟苷月桂酸酯、无环鸟苷棕榈酸酯、碘脱氧尿苷、环胞苷、环胞苷二棕榈酸酯、磷酸甲酸盐、磷酸醋酸盐、西米替丁、双嘧哒莫、利福平、异烟肼、吡喹酮、强力霉素、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、安普那韦、替普那韦、BMS232632、拉米夫定、齐多夫定、去羟肌苷、扎西他滨、司他夫定、阿巴卡韦、阿迪佛韦、替诺佛韦、氟代拉米夫定、奈韦拉平、地拉韦啶、依法韦司、白细胞介素2、替米考星和地克珠利中的一种或多种；
所述的抗生素较佳地为青霉素、青霉素V、阿莫西林、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、普鲁卡因青霉素、苄星青霉素、哌拉西林、美洛西林、替卡西林、阿洛西林、美西林、羧苄西林、磺苄西林、呋布西林、萘夫西林、双氯西林、匹氨西林、阿帕西林、阿扑西林、匹美西林、甲氧西林、仑氨西林、福米西林、氟氯西林、卡那霉素、那他霉素、丝裂霉素、丁胺卡那霉素、泰乐菌素、维替泊芬、头孢匹胺钠、硫酸奈替米星、阿奇霉素、氧氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、芦氟沙星、司氟沙星、氟罗沙星、莫西沙星、格帕沙星、曲伐沙星、淋沙星、吉米沙星、加替沙星、妥舒沙星、帕珠沙星、司帕沙星、克拉霉素、克林霉素、多粘菌素、妥布霉素、万古霉素、阿奇霉素、多西环素、四环素、土霉素、米诺环素、金霉素、胍甲环素、地美环素、美他环素、依替米星、奈替米星、西索米星、阿米卡星、阿贝卡星、地贝卡星、氨曲南、美罗培南、亚胺培南、硫霉素、帕尼培南、厄他培南、新霉素、巴龙霉素和大观霉素中的一种或多种；
所述的钙离子拮抗剂较佳地为尼莫地平、硝苯地平、尼卡地平、尼群地平、维拉帕米、氨氯地平、地尔硫卓、氟桂利嗪、普尼拉明、加洛帕米和噻帕米中的一种或多种；
所述的非甾体抗炎药较佳地为吲哚美辛、阿司匹林、对乙酰氨基酚、萘普生、双氯芬酸、布洛芬、尼美舒利、罗非昔布和塞来昔布中的一种或多种；
所述的免疫抑制剂较佳地为环孢素、前列地尔、环孢菌素、他克莫司、雷帕霉素、霉酚酸酯和咪唑立宾中的一种或多种；
所述的麻醉剂较佳地为地氟烷、七氟烷、异氟烷、恩氟烷、丙泊酚、芬太尼、乌拉坦、利多卡因、普鲁卡因、丁卡因、布比卡因、戊巴比妥钠、水合氯醛、氯胺酮、氯醛糖和吗啡中的一种或多种；
所述的心脑血管及血管扩张药物较佳地为达比加群酯、阿格列汀、藻酸双酯钠、银杏内酯、银杏黄酮、银杏提取物、细辛脑、奥美沙坦酯、瑞格列奈、硫辛酸、灯盏花素、乌拉地尔、烟酸、卡托普利、氯沙坦、葛根素、丹参酮IIA、盐酸沙格雷酯、氟伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、洛伐他丁、辛伐他汀、美伐他汀、西立伐他汀、罗伐他汀、阿托伐他汀钙和瑞苏伐他汀钙中的一种或多种；
所述的肠胃药物较佳地为奥美拉唑、兰索拉唑、艾普拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、特拉唑嗪、埃索美拉唑、泰妥拉唑、莱米诺拉唑、替那拉唑、二硫拉唑和拉呋替丁中的一种或多种；
所述的抗抑郁药物较佳地为阿戈美拉汀、氟西汀、帕罗西汀、度洛西汀、舍曲林、氟伏沙明、西酞普兰、艾司西酞普兰、文拉法辛、米氮平、丙咪嗪、阿米替林、氯丙咪嗪、多虑平、瑞美隆、万拉法新、苯乙肼、异卡波肼和反苯环丙胺中的一种或多种；
所述的多聚核苷酸或寡核苷酸较佳地是指由A、T、C、G、U等碱基组成的具有遗传功能的片段；
所述的生物制剂较佳地为单抗类药物、胰岛素、丙种球蛋白、抗毒血清、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、皮肤活性因子、表皮生长因子、流感疫苗、甲肝疫苗、抗癌疫苗、重组人酸性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子2单克隆抗体中的一种或多种；
所述的化妆品中的活性物质较佳地为熊果酸、超氧化物歧化酶、生物蛋白T4N5、维生素D2、烟酸甲酯、精制蛇油、透明质酸、精油和神经酰胺中的一种或多种；
所述的具有保健作用的物质较佳地为甘草甜素、甘草酸、甘草酸二钠盐、甘草酸甲酯、甘草酸二铵、维生素E、白藜芦醇、辅酶Q10、水飞蓟素、花青素、原花青素、叶黄素、叶酸、亚叶酸、姜黄素、大黄素、茶多酚、表没食子儿茶素没食子酸酯、儿茶素、蓝莓提取物、谷胱甘肽和氧化苦参碱中的一种或多种。
16.如权利要求14或15所述的负载活性物质的脂质体，其特征在于，当所述的负载活性物质的脂质体中所述的活性物质为药物和/或具有保健功能的物质时，所述的负载活性物质的脂质体制备成注射剂、冻干注射剂、口服固体制剂、口服液、搽剂、膏剂、酊剂或气雾剂的形式使用。
17.一种如权利要求14或15所述的负载活性物质的脂质体的制备方法，其特征在于，
当所述的脂质体中包含冻干保护剂，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法为下列任一方法：
方法A包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质、冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸和冻干保护剂的水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
当所述的脂质体中不包含冻干保护剂时，所述的负载活性物质的脂质体的制备方法较佳地为包括下列任一方法：
方法A1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质、如式I所示的人参皂苷和所述的活性物质混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与水混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法B1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与所述的活性物质的混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一负载活性物质的脂质体溶液，透析，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法C1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与硫酸铵水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，透析，然后与所述的活性物质混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法D1包括下列步骤：
(1)有机溶剂中，将脂类物质和如式I所示的人参皂苷混合，可选地加入胆固醇、脂溶性抗氧化剂、大豆油和/或油酸钠、脂溶性表面活性剂、脂溶性热敏性辅料、脂溶性pH敏感物质和脂溶性离子添加剂中的一种或多种，得到一澄清溶液；
(2)除去步骤(1)中所得澄清溶液的有机溶剂，成膜，然后与柠檬酸水溶液混合，可选地加入水溶性抗氧化剂、水溶性表面活性剂、水溶性热敏性辅料、水溶性pH敏感物质和水溶性离子添加剂中的一种或多种，超声、高压均质或挤推过膜后，得一空白脂质体溶液，然后与所述的活性物质、和磷酸氢二钠水溶液混合，过滤，得一含有负载活性物质的脂质体的水溶液，干燥，即得所述的负载活性物质的脂质体；
方法A、B、C、D、A1、B1、C1或D1中，各条件和参数参照权利要求9或10中的方法一或方法二；
所述的活性物质与所述的如式I所示人参皂苷的质量比较佳地为1:0.1-1:10，更佳地为1:2-1:6。
18.根据权利要求17所述的制备方法，其特征在于，
方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作包括下列步骤：将所述的空白脂质体溶液或所述的负载活性物质的脂质体溶液置于葡萄糖水溶液中或纯水中透析；所述的透析的时间优选5-20小时，更佳地为12小时；
和/或，方法B、C、B1或C1中，所述的透析的操作在超声、高压均质或挤推过膜的操作之前进行；
和/或，方法C或C1中，所述的含硫酸铵和冻干保护剂的水溶液中或所述的硫酸铵水溶液中，硫酸铵的质量分数为1％-15％，较佳地为6.6％，所述的百分比是指硫酸铵的质量占所述的水溶液总质量的百分比；
和/或，方法C或C1中，在过滤的操作之前，还进一步包含在保温的操作；所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃保温5分钟-1小时；
和/或，方法D或D1中，所述的柠檬酸水溶液的质量分数为1％-15％，较佳地为5.76％，所述的百分比是指柠檬酸的质量占柠檬酸总质量的百分比；所述的磷酸氢二钠水溶液的质量分数较佳地为5％-20％，更佳地为7.1％；
和/或，方法D或D1中，在进行过滤的操作之前，还进一步包含保温的操作；所述的保温的操作较佳地为在30℃-80℃保温5分钟-1小时；
和/或，方法A、B、C、D、A1、B1、C1或D1中，根据所述活性物质的脂溶性或水溶性，所述的活性物质以所述活性物质的水溶液或者所述活性物质的有机溶液的形式使用；所述的活性物质的水溶液或所述的活性物质的有机溶液优选质量体积分数为1％-20％的水溶液或有机溶液，所述的百分比是指所述活性物质的质量占所述活性物质水溶液或者所述活性物质有机溶液总体积的百分比。
19.一种如式I所示的人参皂苷衍生物：
其中，R1、R2、R4和R5的定义均如权利要求1或2所述；R3为 R7和R8的定义均同权利要求1或2所述；
其中，如式I所示的化合物不为下列任一化合物：
20.如权利要求19所述的如式I所示的人参皂苷衍生物，其中，R3为 优选
21.如权利要求19或20所述的如式I所示的人参皂苷衍生物，其中，所述如式I所示的人参皂苷衍生物，其为下列任一化合物：
22.一种如权利要求19-21任一项所述的如式I所示的人参皂苷衍生物的制备方法，其包含下列步骤：有机溶剂中，将如式I所示的化合物的乙酰化产物进行脱保护反应，得到如式I所示的化合物；
如式I所示的化合物的乙酰化产物是指：当如式I所示的化合物20位有羟基时，除20位羟基外，其余位置的羟基均与醋酸酐发生酯化反应，得到的产物；当如式I所示的化合物20位无羟基时，其所有位置的羟基均与醋酸酐发生酯化反应，得到的产物；
所述的乙酰化产物中的乙酰基还可替换为本领域常规的羟基保护基团；
所述的脱保护反应中，所述的有机溶剂优选醇类溶剂和/或醚类溶剂，更优选醇类溶剂和醚类溶剂的混合溶剂；所述的混合溶剂中，所述的醇类溶剂和所述的醚类溶剂的体积比优选1:1；所述的醇类溶剂优选甲醇；所述的醚类溶剂优选二氧六环；
所述的脱保护反应优选在碱的作用下进行；所述的碱优选碱金属氢氧化物，例如氢氧化钾；
所述的脱保护反应的温度优选常压下溶剂回流温度，例如60-110℃；
所述的脱保护反应的时间优选8-15小时，例如10-12小时。
23.一种人参皂苷Rg5H的制备方法，其包括下列步骤：有机溶剂中，将人参皂苷Rg5H乙酰化产物进行如下所示的脱保护反应即可，
所述的脱保护反应的条件同权利要求22所述。
24.如权利要求23所述的制备方法，其中，所述的人参皂苷Rg5H乙酰化产物的制备方法优选包括下列步骤：有机溶剂中，将人参皂苷Rg3乙酰化产物进行脱20位羟基反应，制得人参皂苷Rg5H乙酰化产物；
所述的脱20位羟基反应中，所述的有机溶剂优选卤代烃类溶剂，例如二氯甲烷；所述的脱20位羟基反应优选在三氟化硼乙醚和三乙基硅烷的作用下进行；所述的三氟化硼乙醚和三乙基硅烷的质量比优选1:0.5-1:5；所述的三乙基硅烷与Rg3乙酰化产物的质量比优选1:5-1:20；所述的脱20位羟基反应的温度优选室温；所述的脱20位羟基反应的时间优选5-10分钟。
25.如权利要求24所述的制备方法，其中，所述的人参皂苷Rg5H乙酰化产物的制备方法，其包括下列步骤：有机溶剂中，在催化剂的作用下，将人参皂苷Rg3和醋酸酐进行如下所示的酰化反应，制得人参皂苷Rg3乙酰化产物；
所述的乙酰化反应中：所述的有机溶剂优选碱性有机溶剂，例如吡啶；所述的乙酰化反应优选在催化剂DMAP的作用下进行；所述的人参皂苷Rg3与醋酸酐的质量体积比优选0.1g/mL-5g/mL；所述的乙酰化反应的温度优选室温；所述的乙酰化反应的时间优选8-15小时。
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