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CN109810182B - BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用 - Google Patents

BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用 Download PDF

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CN109810182B
CN109810182B CN201910092178.6A CN201910092178A CN109810182B CN 109810182 B CN109810182 B CN 109810182B CN 201910092178 A CN201910092178 A CN 201910092178A CN 109810182 B CN109810182 B CN 109810182B
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CN
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gene
bnlax1
cabbage type
type rape
protein
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耿玉璐
王幼平
张盼
张帅
赵璇
吴健
蒋金金
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Abstract

本发明涉及BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用,本发明分离和应用一种包含BnLAX1.c基因的DNA片段,该片段赋予甘蓝型油菜主茎数目增多的能力。其中,所述的含有BnLAX1.c基因编码区的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,序列长度为534 bp,它编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其氨基酸数目为177个。本发明从甘蓝型油菜中分离BnLAX1.c基因,并鉴定其在甘蓝型油菜株型改良方面的生物学功能,对于培育高产甘蓝型油菜新品种具有十分重要的意义。

Description

BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用
技术领域
本发明涉及甘蓝型油菜基因工程领域。具体涉及分离、克隆和通过功能验证得到一种能够增加主茎数目的甘蓝型油菜BnLAX1.c基因在甘蓝型油菜株型遗传改良中的应用。本发明采用RT-PCR的方法,分离到控制甘蓝型油菜主茎数目的基因BnLAX1.c,过量表达BnLAX1.c基因能够加甘蓝型油菜主茎数目,证实了该基因的功能及其应用途径。
背景技术
甘蓝型油菜(Brassica napus L.)是我国主要的油菜栽培种类,具有高产、抗逆性强、适应性广等特点。甘蓝型油菜甘蓝型油菜产量的构成因子中,一次有效分枝及其角果数的贡献最大。甘蓝型油菜的主茎对于油菜的整个生长发育过程至关重要,主茎不仅起到支撑和输导作用,而且能够通过影响一次有效分枝数、主花序角果数等因素直接影响甘蓝型油菜的产量;甘蓝型油菜通常只有一个主茎,多主茎性状能够提高甘蓝型油菜的增产潜力,因此成为了甘蓝型油菜遗传改良的目标性状之一(Zhang Y, Li Q, Cui Y, et al.Genetic characterization and fine mapping for multi-inflorescence in Brassica napus L. Theoretical and Applied Genetics, 2018, 131(11):2311-2319)。Pradhan等在芥菜型油菜中发现一次分枝数、二次分枝数、单株角果总数、角果密度等对产量性状杂种优势贡献最大(Pradhan A K, Sodhi Y S, Mukhopadhyay A, et al. Heterosisbreeding in Indian mustard (Brassica juncea, L. Czern & Coss): Analysis ofcomponent characters contributing to heterosis for yield. Euphytica, 1993, 69(3):219-229)。利用杂种优势获得性状良好的杂交后代是提高油菜产量的有效途径之一,但是耗时太长。利用转基因技术获得主茎数目明显增多的甘蓝型油菜目前尚未见报道。
发明内容
为了克服上述缺陷,本发明提供一种BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用。根据RNA-seq结果挑选到一个在分生组织中特异表达的候选基因,申请人将该基因命名为BnLAX1.c。本发明分离和应用一种包含BnLAX1.c基因的DNA片段,该片段赋予甘蓝型油菜主茎数目增多的能力。其中,所述的含有BnLAX1.c基因编码区的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示,序列长度为534 bp,它编码蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,其氨基酸数目为177个。
为了实现上述发明目的,本发明所采用的技术方案为:一种甘蓝型油菜株型调控蛋白,其特征在于,所述的蛋白为如下(a)或(b):
(a)由SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的蛋白质;
(b)将SEQ ID NO:2的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与甘蓝型油菜株型调控相关的由SEQ ID NO:2衍生的蛋白质。
本发明的另一个目的是提供编码前述蛋白的基因。
所述基因是如下(a1)-(a3)中任何一种的DNA分子;
(a1)SEQ ID NO:1所示的DNA分子;
(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA序列杂交且编码甘蓝型油菜株型调控相关蛋白的DNA分子;
(a3)与(a1)限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或者至少具有99%同源性且编码甘蓝型油菜株型调控相关蛋白的DNA分子。
本发明的另一个目的是提供含有前述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系。
本发明的又一个目的是提供(b1)或(b2)或(b3)或(b4)的应用:
(b1)前述蛋白,或,所述基因,或,含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系,在调控甘蓝型油菜株型中的应用;
(b2)所述蛋白,或,所述基因,或,含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系,在培育甘蓝型油菜新品种中的应用;
(b3)所述蛋白,或,所述基因,或,含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系,在调控甘蓝型油菜主茎数目中的应用;
(b4)所述蛋白,或,所述基因,或,含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系,在调控植物主茎数目中的应用。
本发明还提供一种培育增加植物主茎数目的转基因植物的方法,为提高目的植物中所述蛋白的含量或活性,得到转基因植物;所述转基因植物的植物主茎数目高于所述目的植物。
一种培育增加植物主茎数目的转基因植物的方法,采用前述方法培育得到转基因植物;所述的转基因植物表达甘蓝型油菜株型调控蛋白,或者含有前述基因。
携带有本发明BnLAX1.c基因的表达载体可通过使用Ti质粒、植物病毒载体,直接DNA转化、微注射、电击转化等常规生物技术方法导入植物细胞(Weissbach, 1998, Methodfor Plant Molecular Biology VIII, Academy Press, New York, pp.411-463;Geiserson and Corey, 1998, Plant Molecular Biology (2nd Edition))。
可使用包括本发明的BnLAX1.c基因的表达载体转化宿主(包括甘蓝型油菜在内的多种植物),培育株型改良的植物品种。植物宿主还可以为水稻、烟草、大豆、番茄、小麦等。
本发明基因在植物顶端分生组织表达水平较高,因此可将本发明的基因与任何分生组织特异表达的启动子结合后连入合适的表达载体,并转化植物宿主,增加植物分生组织的数量,进而改变植物的株型。
利用DNA回收试剂盒回收包含BnLAX1.c基因编码区的DNA片段,利用酶切连接的方法将此片段连入pMDC83骨架载体,构建该基因的过量表达载体,命名为pMDC83-BnLAX1.c
利用电转法将pMDC83-BnLAX1.c载体导入根癌农杆菌中,根癌农杆菌菌株为GV3101。通过农杆菌侵染介导的遗传转化方法将pMDC83-BnLAX1.c转化甘蓝型油菜受体材料J9712,成功获得了BnLAX1.c基因表达量相对于野生型显著提高的转基因植株,观察发现,与野生型植株相比,过表达BnLAX1.c的转基因甘蓝型油菜主茎数目增多,说明BnLAX1.c能够调控植物株型。
综上所述,本发明以甘蓝型油菜为研究材料,通过分析甘蓝型油菜品种“甲9712”各个组织器官RNA-seq结果,发现了一个在分生组织中特异表达的候选基因,该基因可能在顶端分生组织的形成分化过程中起重要作用,将该基因命名为BnLAX1.c
甘蓝型油菜为食用油重要原料,提高其产量和改良其品质一直是人们努力的目标。本发明中,过表达BnLAX1.c基因增加了甘蓝型油菜的主茎数目,说明BnLAX1.c基因参与了甘蓝型油菜的株型调控。因此,从甘蓝型油菜中分离BnLAX1.c基因,并鉴定其在甘蓝型油菜株型改良方面的生物学功能,对于培育高产甘蓝型油菜新品种具有十分重要的意义。
附图说明
序列表SEQ ID NO:1是本发明分离克隆的包含有BnLAX1.c基因编码区的核苷酸序列,序列长度为534 bp,第1-534位是其编码区,编码177个氨基酸;
序列表SEQ ID NO:2是BnLAX1.c基因编码蛋白质的氨基酸序列;
图1 BnLAX1.c基因在甘蓝型油菜各个组织器官中的表达情况;
图2 BnLAX1.c过量表达载体构建示意图;
图3 BnLAX1.c过量表达植株中BnLAX1.c基因的表达情况,CK1和CK2为转基因阴性苗;BnLAX1-2、BnLAX1-4、BnLAX1-10、BnLAX1-11、BnLAX1-12、BnLAX1-18为BnLAX1.c转基因阳性甘蓝型油菜;
图4 BnLAX1.c过量表达转基因甘蓝型油菜的株型表现,图中:WT为野生型对照植株;BnLAX1.c-OE为过表达BnLAX1.c的转基因甘蓝型油菜。
具体实施方式
以下实施例定义了本发明,并描述了本发明在克隆包含有BnLAX1.c基因完整编码区段的DNA片段,以及验证BnLAX1.c基因功能的方法。根据以下描述和这些实施例,本领域技术人员可以确定本发明的基本特征,并在不偏离本发明精神和范围的情况下,可以对本发明做出各种改变和修改,以使其适用于不同的用途和条件。
实施例1:RNA-seq分析甘蓝型油菜内源BnLAX1.c基因在各组织器官中的表达情况
取甘蓝型油菜品系“甲9712”各个时期的组织器官样品,迅速置于液氮中速冻,并转移到70℃冰箱保存,直至RNA抽提。总RNA抽提采用大连TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂盒提取,送至上海美吉生物医药科技有限公司进行RNA-Seq分析,根据高通量测序结果分析基因的FPKM值,以Bnubi(BnaA10g06670D)作为内参基因计算BnLAX1.c在各组织中的相对表达量,如图1所示。
实施例2:甘蓝型油菜BnLAX1.c基因的分子克隆
取甘蓝型油菜品种“Darmor-bzh”三叶一心期幼苗,液氮速冻,放置-70℃冰箱中保存以备提取总RNA。总RNA抽提采用大连TaKaRa公司的RNAiso Plus试剂盒提取。甘蓝型油菜cDNA的合成按南京诺唯赞生物科技有限公司的HiScript 1st Strand cDNA SynthesisKit说明书操作进行第一链合成。
以上述试剂盒合成的cDNA第一链为扩增模板,以设计的F:5'-ACACAGACACCACGTAACAATAC-3'(SEQ ID NO:3)和R: 5'-GGGGACACTAACAAACTAAGAT-3'(SEQID NO:4)为引物,利用RT-PCR 进行cDNA扩增,扩增条件为:94℃ 3 min,94℃ 15 s,59℃15 s,72℃ 30 s,共35个循环;72℃ 10 min。PCR结束后进行电泳分析,采用康为世纪生物科技有限公司的DNA回收试剂盒回收目的扩增片段。将扩增片段连接北京全式金生物技术有限公司的pEASY-Blunt T载体,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取白色菌落进行菌落PCR鉴定阳性克隆,将阳性克隆送到扬州擎科生物科技有限公司测序,经测序验证无误的质粒命名为BnLAX1.c-T。
实施例3:BnLAX1.c基因过量表达载体的构建
为了更好地分析BnLAX1.c基因的功能,申请人将其在甘蓝型油菜中过量表达,通过观察转基因植株的表型来研究该基因的功能。
过量表达载体构建方法如下:以上述经测序验证无误的BnLAX1.c基因克隆载体质粒BnLAX1.c-T为模板,使用引物LAX1F(5'-gACTAGTcATGGACCAGTCCACTCTTCA-3')(SEQ IDNO:5),序列特异引物外加接头SpeI位点)和LAX1 R(5'-atGGCGCGCCatAGACAAACCACGTCTATGCA-3')(SEQ ID NO:6),序列特异引物外加接头AscI位点)利用RT-PCR进行cDNA扩增,扩增条件为:94℃ 3 min,94℃ 15 s,58℃ 15 s,72℃ 30 s,共35个循环;72℃ 10 min。PCR结束后进行电泳分析,采用康为世纪生物科技有限公司的DNA回收试剂盒回收目的扩增片段。将扩增片段连接到北京全式金生物技术有限公司的pEASY-Blunt T载体中,转化大肠杆菌感受态细胞,挑取白色菌落进行菌落PCR以鉴定阳性克隆,将阳性克隆送到扬州擎科生物科技有限公司测序。
包含BnLAX1.c基因片段的克隆载体质粒经SpeI+AscI双酶切后,利用DNA回收试剂盒回收目的DNA片段,将此片段与相应酶切的pMDC83骨架载体相连构建成BnLAX1.c基因的过量表达载体,命名为pMDC83-BnLAX1.c(图2)。
实施例4:pMDC83-BnLAX1.c过量表达载体的甘蓝型油菜遗传转化
利用电击转化法将pMDC83-BnLAX1.c质粒导入根癌农杆菌GV3101菌株感受态细胞中。挑取单菌落接种于25 mL YEB培养基(含50 mg/L 利福平)中培养过夜,取5 mL菌液转接到100 mL YEB培养基(含50 mg/L 利福平)中,培养至OD600= 0.7-0.8,将菌液在冰上放置10min,5000 rpm 4℃离心10 min收集菌体,加入100 mL无菌双蒸水清洗两次。加入4 mL 10%甘油悬浮菌体,转移到50 mL离心管中。5500 rpm 4℃离心10 min收集菌体,加入500 µL10%甘油重悬菌体,转移到1.5 mL离心管中。
取50 µL感受态细胞,加入5 µL pMDC83-BnLAX1.c重组质粒,用枪头混匀后转移到0.1 cm电转化杯中。电转化参数:200 Ω,1.7 KV,2.5 F,电击后立即加入500 µL LB培养液。37℃ 220 rpm培养1 h后,取100 µL菌液涂布含有卡那霉素Kanamycin抗性的LA培养基筛选转化子,28℃培养16 h。
转化甘蓝型油菜的遗传转化方法为借鉴华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室的转化方法改进之后的方法,以甘蓝型油菜无菌幼苗的下胚轴作为外植体,利用农杆菌介导法实现外源片段在甘蓝型油菜中的遗传转化。
所用培养基配方如下:
接种培养基(M0):MURASHIGE & SKOOG MEDIUM(Duchefa Biochemie公司)+30.0g/L 蔗糖Sucrose+8 g/L 琼脂Agar(pH 5.8-pH 6.0)。
共培养培养基(M1):M0+ 18.0 g/L甘露醇Mannitol+ 1.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D+0.3 mg/L激动素Kinetin+100 μM 乙酰丁香酮AS(pH 5.8)。
愈伤分化培养基(M2):M1+300.0 mg/L 特美汀Timentin+25 mg/L 潮霉素Hygromycin B。
生苗培养基(M3):MURASHIGE & SKOOG MEDIUM(Duchefa Biochemie公司)+10.0g/L 葡萄糖Glucose+0.25 g/L木糖Xylose+0.6 g/L 吗啉乙磺酸MES+2.0 mg/L 玉米素Zeatin+0.1 mg/L 吲哚乙酸IAA+300.0 mg/L 特美汀Timentin+25 mg/L 潮霉素Hygromycin B。
壮苗生根培养基(M4):M0+300.0 mg/L 特美汀Timentin。
MURASHIGE & SKOOG MEDIUM简称为MS培养基。
具体操作步骤如下:
(1)灭菌:
a. 首先用75%酒精浸泡甘蓝型油菜种子1 min,注意时间不能过长;
b. 接着用2%的次氯酸钠消毒20 min;
c. 最后用无菌水冲洗种子4-5遍,尽量将其清洗干净。
(2)播种:
a. 用无菌镊子将灭过菌的种子播到M0培养基上,每皿30粒;
b. 将接种的培养罐放置到培养箱中,24℃下暗培养6-7 d。
(3)摇菌:
待播种5-6 d后,将农杆菌接种于含有LB液体培养基的无菌三角瓶或离心管中,置于28℃ 180-220 rpm摇床中进行培养。
(4)制备外植体并且侵染:
a. 用无菌镊子和解剖刀切取播种后生长6-7 d的幼苗,将其下胚轴切成长度为0.8-1.0 cm的外植体段。切苗时将其下胚轴置于M1液体培养基中切取,这样切取效果更佳。切的时候要快、准,不拖拉;
b. 测量农杆菌的OD600值(LB培养基中OD600=0.3左右较好),将预先培养好的菌液以6000 rpm离心10 min,弃上清,用与菌液等体积的含有100 μM乙酰丁香酮AS的MS液体培养基将菌重悬,之后再重复一次。最终取2 mL菌液,用20 mL含有100 μM乙酰丁香酮AS的MS液体培养基稀释;
c. 将切好的外植体置于已经调整好浓度的菌液重悬液中,浸染10 min,注意侵染时间不要过长,否则会导致外植体死亡。每20 mL的菌液中浸染150-200个外植体较合适;
(5)将侵染好的外植体转移至M1培养基上,以每皿20-25个外植体为宜,置于24℃暗光下培养36-48 h;
(6)将外植体从M1转到M2培养基上,并转移至光照培养箱中培养(24℃ 光16 h/暗8h)3周;
(7)将外植体转移到M3培养基上,每2-3周继代一次,直至出现绿芽;
(8)最后将外植体转移到M4培养基中生根,生根时间需2-4周。
实施例5:转基因甘蓝型油菜阳性植株的鉴定
采用快速法提取甘蓝型油菜基因组DNA,其步骤如下:
(1)取两片幼嫩叶片(约0.2 g),剪碎装入2 mL的离心管中,加入250 µL DNAbuffer和两个钢珠(直径6.7 mm),打样机50 Hz,180 s打碎叶片样品;
(2)将打碎的样品置于95℃孵育10 min;
(3)将样品取出冷却至室温,12000 rpm离心5 min;
(4)吸取50 µL上清转移至新的1.5 mL离心管中,稀释5倍后备用。
DNA buffer配方:
Tris-HCl (pH=7.5) 500 mM
NaCl 300 mM
蔗糖Sucrose 300 mM
取1 µL DNA作为模板,以引物35S(5'-TCCCACTATCCTTCGCAAG-3')(SEQ ID NO:7)和R(5'-atGGCGCGCCatAGACAAACCACGTCTATGCA-3')(SEQ ID NO:8)、R(5'-gACTAGTcATGGACCAGTCCACTCTTCA-3')(SEQ ID NO:9)和GFP(5'-TCCCACTATCCTTCGCAAG-3')(SEQ ID NO:10)进行PCR扩增,扩增条件为:94℃ 5 min;94℃ 30 s,58℃ 30 s,72℃ 30s,共30个循环;72℃ 10 min。以转基因甘蓝型油菜DNA为模板,能扩增出特异性目的片段,证明目的载体35S::BnLAX1.c已经整合到甘蓝型油菜基因组中。
实施例6:过表达BnLAX1.c基因使转基因甘蓝型油菜主茎数目增多
本发明采用荧光检测实时定量的方法对部分转基因甘蓝型油菜植株中BnLAX1.c基因的表达进行检测,RNA的提取和反转录见实施例3。在ABI公司的7500定量PCR仪上进行荧光定量PCR,以设计的qG1 F(5'-CATCTTCTTCTTTACACAGCCG-3')(SEQ ID NO:11)和qG1 R(5'-ACCAGATCTGAGCTTTCAAGAA-3')(SEQ ID NO:12)为引物进行荧光定量PCR,反应条件为:95℃ 1 min,95℃ 15 s,60℃ 20 s,72℃ 31 s,采集荧光信号,共40个循环;60℃ to 95℃,每1℃采集一次荧光信号,持续1 s。反应结束后,用ABI7500自带的软件(7500 Softwarev2.0.1)进行分析及绘图。结果显示,成功获得了BnLAX1.c基因的表达量相对于野生型BnLAX1.c基因表达量显著提高的转基因植株(图3)。
对过表达BnLAX1.c的转基因植株进行表型分析,发现与野生型对照植株相比,过表达BnLAX1.c的转基因植株主茎数目增多(图4)。
本发明分离得到与株型相关的甘蓝型油菜基因,能够针对性获得调控植物株型的候选基因,对研究植物分枝机理和分离与植物株型相关基因具有一定的理论指导作用。本发明分离得到的株型相关基因来自植物本身,对环境影响较小。利用分离的基因进行油菜株型改良分子育种,对于培育株型改良的甘蓝型油菜新品种、提高甘蓝型油菜产量和收获指数具有非常重要的意义。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
<110> 扬州大学
<120> BnLAX1.c基因、蛋白及其在控制甘蓝型油菜株型中的应用
<130> xhx2019013001
<141> 2019-01-30
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 534
<212> DNA
<213> Brassica napus L.
<400> 1
atggaccagt ccactcttca tagcctaaac ccatattcat cttccaccac ttcctcatca 60
tcttcttctt tacacagccg caagggcaga ataaagggca acaaaaatca gtcaatgtcc 120
acgttatcga cggatccaca gagcgtggct gcccgtgaga gacgccaccg aatcagcgac 180
cgtttgaaga ttctacagag catggttcct ggtggtgcga agttggacac cgtctctatg 240
ctcgacgaag ccattagcta cgtcaagttc ttgaaagctc agatctggtt tcaccacaat 300
atgcttcttt tcttcaacga ctacgaaact acgtcgcctt gtacttattc cccagtcggc 360
gtcagtgaat ttgaatcaag actctttggt tgtgatgaag attatacccc tgtaccgaag 420
acgtattcac aagggacgcc actatatatg gttgctgacc cgaataatcc gatgtggtat 480
agttcggttg atgatgagca acaagaaacc atgcatagac gtggtttgtc ttag 534
<210> 2
<211> 177
<212> PRT
<213> Brassica napus L.
<400> 2
Met Asp Gln Ser Thr Leu His Ser Leu Asn Pro Tyr Ser Ser Ser Thr
1 5 10 15
Thr Ser Ser Ser Ser Ser Ser Leu His Ser Arg Lys Gly Arg Ile Lys
20 25 30
Gly Asn Lys Asn Gln Ser Met Ser Thr Leu Ser Thr Asp Pro Gln Ser
35 40 45
Val Ala Ala Arg Glu Arg Arg His Arg Ile Ser Asp Arg Leu Lys Ile
50 55 60
Leu Gln Ser Met Val Pro Gly Gly Ala Lys Leu Asp Thr Val Ser Met
65 70 75 80
Leu Asp Glu Ala Ile Ser Tyr Val Lys Phe Leu Lys Ala Gln Ile Trp
85 90 95
Phe His His Asn Met Leu Leu Phe Phe Asn Asp Tyr Glu Thr Thr Ser
100 105 110
Pro Cys Thr Tyr Ser Pro Val Gly Val Ser Glu Phe Glu Ser Arg Leu
115 120 125
Phe Gly Cys Asp Glu Asp Tyr Thr Pro Val Pro Lys Thr Tyr Ser Gln
130 135 140
Gly Thr Pro Leu Tyr Met Val Ala Asp Pro Asn Asn Pro Met Trp Tyr
145 150 155 160
Ser Ser Val Asp Asp Glu Gln Gln Glu Thr Met His Arg Arg Gly Leu
165 170 175
Ser
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
acacagacac cacgtaacaa tac 23
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggggacacta acaaactaag at 22
<210> 5
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gactagtcat ggaccagtcc actcttca 28
<210> 6
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<400> 6
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<210> 7
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
tcccactatc cttcgcaag 19
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<211> 32
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
atggcgcgcc atagacaaac cacgtctatg ca 32
<210> 9
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
gactagtcat ggaccagtcc actcttca 28
<210> 10
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
tcccactatc cttcgcaag 19
<210> 11
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
catcttcttc tttacacagc cg 22
<210> 12
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
accagatctg agctttcaag aa 22

Claims (1)

1.如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列组成的甘蓝型油菜株型调控蛋白或SEQ ID NO:1所示的编码所述蛋白的基因或含有所述基因的表达盒、重组载体、重组微生物或转基因细胞系在调控甘蓝型油菜主茎数目中的应用,所述调控甘蓝型油菜主茎数目为使甘蓝型油菜主茎数目增多。
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