CN109799338A - 一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸及其应用，包括底板，所述底板上沿底板长度方向依次设有样品垫、封闭垫、反应垫和吸水垫；其特征在于：所述样品垫上包被有第一抗体，所述第一抗体上带有示踪标志物且能够识别待测目标物一抗原表位；所述封闭垫上包被有抗红细胞抗体，所述封闭垫与所述反应垫部分层叠。本发明还包括了上述试纸在免疫层析检测盒的制备或末梢血免疫层析定量检测中的应用。与现有技术相比，本发明方案的试纸具有灵敏度高、线性范围宽等优点。

Description

一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸及其应用

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体涉及一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸及其应用。

背景技术

免疫层析技术(immu-nochromatography assay，ICA)是出现于20世纪80年代初期的一种新型免疫分析方式，它是在免疫渗滤的基础上建立的一种简单快速的免疫学检测技术。免疫层析法的原理是将特异的抗体固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品后，由于毛细管的作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断，该方法能实现快速、准确地检测，具有广泛的应用前景，尤其是在重大疾病的早期诊断、治疗及预防中，具有巨大的社会效益和经济效益。

人体各项机能的健康状态均可通过特定标志物进行体现，定期监测这些特定标志物的含量对于判定人体的健康程度具有重要意义。尤其是有一些对于多种疾病诊断均具有重要意义的标志物如脑钠钛(Brain Natriuretic Peptide，BNP)和降钙素原(procalcitonin，PCT)等，若能这些标志物进行准确检测对于多种重大疾病的防治具有重要意义。BNP主要由心室分泌产生，心肌细胞首先合成108个氨基酸的BNP原，被称之为proBNP(BNP前体)。在受到心肌细胞的刺激后，proBNP在蛋白酶作用下裂解为由76个氨基酸组成的无活性的直线多肽N-末端脑钠肽(N terminal pro B type natriuretic peptide，NT-proBNP)和32个氨基酸组成的生物活性环状多肽BNP。由于NT-proBNP和BNP两种多肽生成后都会进入血循环，两者来源相同且等摩尔分泌，因此，理论上检测这两种多肽的临床应用结果是一致的。

然而，由于BNP的半衰期短且生物学活性较强，因此，其浓度水平会受多种因素影响且BNP检测时只能使用血浆样本，导致其临床应用效果不太理想。与BNP相比，NT-proBNP生物半衰期更长(为60-120分钟，BNP生物半衰期仅20分钟)，更稳定，由于NT-proBNP无生理活性，因而不受治疗用合成BNP的干扰，同时，NT-proBNP的检测基本不受体味改变和日常活动影响，且不存在日渐生理学波动，故无需固定体位和时间，既可以使用血清，也可以使用血浆。因此，检测NT-proBNP更有便于实验操作。

2006年9月美国McMaster大学的循环实践中心对BNP和NT-proBNP在临床应用方面的价值进行了评估：健康对照组与心衰患者的NT-proBNP和BNP对比，相比于BNP，NT-proBNP在不同分级中浓度差异最大，可以更加明显地区分心衰的严重程度，尤其在区分健康对照组与轻度心衰患者时，差异更加明显。在早期心衰检测中，NT-proBNP的检出准确度明显高于BNP检测。准确高效地检测NT-proBNP含量，在诊断、检测、预后等方面，能为临床医生提供极其重要的帮助。

PCT是降钙素的前肽，是一种由116氨基酸组成、分子量为13KD、无激素活性的糖蛋白。PCT由神经内分泌细胞(包括甲状腺、肺和胰腺组织细胞)表达，经酶切分解为降钙素(calcitonin，CT)、羧基端肽和氨基端肽。PCT在人体内半衰期为20～24h，稳定性好，在正常人血清中水平极低。但在全身性细菌感染或霉菌、寄生虫感染者血清中含量迅速升高，尤其是脓毒性休克时PCT时浓度成倍升高，感染后两个小时即可检测到，且持续时间长，其在血清中的水平与感染性疾病的严重程度呈正相关，经有效抗生素治疗后，PCT水平可迅速下降；而病毒感染、肿瘤、自身免疫性疾病、外伤(多创伤或手术创伤)、慢性炎症以及局部感染者，PCT水平维持在正常范围内或者有轻度升高。因此，PCT是细菌感染所致重症全身性炎症反应的良好指标，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察、等方面有很高的临床价值；利用它能有效地评估感染和炎症的严重程度及进展情况，还能监测药物疗效，指导外科围手术期的处理以及抗生素正确应用。目前检测PCT的常用方法有：酶联免疫法、金标法、免疫荧光法、化学荧光法。但是这些方法检测步骤比较麻烦，检测耗时较长，所采用的血样均为静脉血。

现有技术中，监测PCT和NT-proBNP等标志物的浓度通常采取的是采集患者的静脉血进行监测，这种方式不仅操作繁琐且需要特定的监测仪器，使得患者必须去医院才能监测，虽有部分技术中公开了可使用PCT或NT-proBNP水平检测试纸可以针对静脉血血清或者血浆中的PCT或NT-proBNP水平含量进行测定，然而对于需要经常监测PCT和NT-proBNP水平的患者而言，由于静脉取血操作较为复杂且抽取的量较大，不宜多次重复进行，尤其是对于难以采集静脉血的特殊病患群体。相比之下，末梢血采取方便，对人造成的伤口小，是更佳的血样来源。由于末梢血的采血量通常较少，较难满足现有技术中PCT或NT-proBNP水平测试试纸条所需要的最小样品量，此外，采集到的末梢血为全血，全血中红细胞对检测会存在较大的干扰，这些问题的存在导致使用现有技术中的检测试纸难以准确检测出末梢血液中的PCT或NT-proBNP等标志物的真实含量。基于此，对现有技术中的检测试纸及其应用进行改进使其在取用末梢血的前提下即可完成准确检测出PCT和NT-proBNP等标志物的具体含量具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种利用末梢血即可完成准确检测PCT或NT-proBNP等标志物水平的免疫层析体外诊断试纸及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，包括底板，所述底板上沿底板长度方向依次设有样品垫、封闭垫、反应垫和吸水垫；所述样品垫上包被有第一抗体，所述第一抗体上带有示踪标志物且能够识别待测目标物一抗原表位；所述封闭垫上包被有抗红细胞抗体(anti-red cell antibody，RBC)，所述封闭垫与所述反应垫部分层叠。

进一步地，所述封闭垫与所述反应垫重叠的区域长度为1～5mm；优选为3mm。

进一步地，所述封闭垫通过以下方法制备而得：将用于制备封闭垫的基质材料用封闭液浸泡后，再经干燥处理后制得，所述封闭液包括抗红细胞抗体、乙二胺四乙酸二钠(Ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt，EDTA₂Na)、牛血清白蛋白(bovineserum albumin，BSA)和三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris(hydroxymethyl)aminomethanehydrochloride，Tris-HCl)缓冲液。

优选地，所述抗红细胞抗体的浓度为0.02mg/ml～0.2mg/ml；所述乙二铵四乙酸二钠的浓度为0.05～0.5wt％；所述BSA的浓度为0.1～5wt％；所述Tris-HCl(Tris(hydroxymethyl)aminomethane hydrochloride，Tris-HCl)缓冲液的pH值为7.35～7.45。

更优选地，所述抗红细胞抗体的浓度为0.06mg/ml；所述乙二铵四乙酸二钠的浓度为0.12wt％；所述BSA的浓度为1wt％；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.4。

进一步地，所述第一抗体包被在样品垫的中部区域且靠近靠近外设的检测加样孔。

进一步地，所述样品垫上还固定有质控抗体。

进一步地，所述反应垫上还设有检测线和质控线，所述检测线位于靠近吸水垫的一侧，所述质控线位于靠近封闭垫的一侧。

进一步地，所述质控线上包被有能够捕获质控抗体的抗原，所述检测线上包被有第二抗体，所述第二抗体为能够识别待测目标物另一抗原表位的抗体。

进一步地，所述抗原的浓度为0.2～2.0mg/ml，所述第二抗体的浓度为0.5～3mg/ml。

进一步地，所述示踪标志物可以为胶体金、荧光微点或量子点等能起到标识作用的物质。

进一步地，所述待测目标物为PCT或NT-proBNP。

进一步地，所述封闭垫的基质材料为玻璃纤维素膜，所述样品垫的基质材料均为玻璃纤维素膜、滤血膜或无纺布，所述反应垫的基质材料为硝酸纤维素膜或其他材料。

进一步地，所述抗红细胞抗体为抗人红细胞抗体。

本发明还包括上述试纸在免疫层析检测盒的制备或末梢血免疫层析定量检测中的应用。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，该检测试纸可适用于末梢血即时检验(point-of-care testing，POCT)诊断检测，具有灵敏度高、检测稳定性强，特异性好，检测时间仅需约10～20分钟，大大提高了诊断效率；本发明方案利用红细胞的上膜属性，将包被有抗红细胞抗体的封闭垫与反应垫部分重叠，控制细胞在反应膜上的距离，由于红细胞上膜后会堵塞反应膜的前端孔径通道，适度延长了待检测物质与抗体结合的时间，提高了试纸的检测灵敏度，可以用于末梢血中多种疾病诊断标志物的检测；利用本发明方案制得的试纸，不仅检测灵敏度高，且线性检测范围宽(线性检测范围宽度可达3个数量级以上)；本发明方案制作方便，体积小巧，便于携带且检测成本低，可批量生产，适用于临床快速诊断检测及现场快速诊断；易于存放，便于基层单位推广，具有良好的工业应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例的试纸的结构示意图。

标号说明：

1、底板；2、样品垫；21、第一抗体包被位置；3、封闭垫；4、反应垫；41、质控线；42、检测线；5、吸水垫。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明实施例一为：一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，如图1所示，包括底板1和上盖(图中未出示)，所述上盖盖合在所述底板1上，所述底板1上沿底板1长度方向依次设有样品垫2、封闭垫3、反应垫4和吸水垫5；所述样品垫2上包被有第一抗体，所述第一抗体上带有示踪标志物且能够识别待测目标物一抗原表位；所述封闭垫3上包被有RBC，所述封闭垫3与所述反应垫4部分层叠。上盖上在样品垫2和反应垫4上方对应区域分别设有加样孔和观察窗，既便于操作，也便于分析仪器判定结果，提升了检测过程的操作便利性及方法的准确度。

所述封闭垫3与所述反应垫4重叠的区域长度为3mm。所述封闭垫3通过以下方法制备而得：将用于制备封闭垫3的基质材料用封闭液浸泡后，再经干燥处理后制得，所述封闭液包括抗红细胞抗体、乙二铵四乙酸二钠、BSA和Tris-HCl缓冲液。所述抗红细胞抗体的浓度为0.2mg/ml；所述乙二铵四乙酸二钠的浓度为0.5wt％；所述BSA的浓度为5wt％；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.45。牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)用于封闭掉非特异性蛋白结合位点，避免出现假阳性样本，Tris-HCl缓冲液是稳定缓冲液的pH值，乙二胺四乙酸二钠作为螯合剂。采用本发明方案配方的封闭液进行封闭，可使得检测灵敏度更高。所述第一抗体包被在样品垫2的中部区域上的第一抗体包被部21处，该位置靠近上盖的加样孔，将带有示踪标志物的第一抗体包被在加样孔位置附近，可使得样本中的待测物与抗体有更充足的接触时间，同时也更利于携带待测目标物的胶体金耦合物释放得更加完全，使得整体检测的灵敏度增加。

所述样品垫2上还固定有质控抗体，所述反应垫4的中部还设有检测线42和质控线41，所述检测线42位于靠近吸水垫5一侧，所述质控线41位于靠近封闭垫3一侧，检测线42靠近吸水垫5的一侧，以便于检测线上的抗体有更充裕的时间去接收来自样本垫上携带着待测目标物的胶体金偶合物，就能检测出更低浓度的待测目标物，从而进一步提升系统的检测灵敏度。所述质控线41上包被有能够捕获质控抗体的抗原，所述检测线42上包被有第二抗体，通过两种抗体，可进一步降低非特异性结合，提高检测灵敏度。使用单独质控区抗体，与现有技术中采用的羊抗鼠IgG相比，单独质控区抗体不受包被位置影响，亦可反应试剂卡的抗体包被总量，反映试剂卡的反应结果的真实性。

所述示踪标志物为胶体金(也可采用其他示踪标志物)，以胶体金作为标志物，标志物稳定性良好，价格低廉。使用胶体金作为示踪标志物，结合胶体金试纸仪对结果的判读，可简便实现自动化，减少主观因素的影响，降低判读误差，既使得操作更为便利，同时能快速得出可靠的诊断结果。

所述待测目标物为PCT或NT-proBNP，本发明方案尤其适用于PCT或NT-proBNP检测，采用本发明方案制得的试纸进行PCT或NT-proBNP检测，灵敏度高，且检测时间仅需15min，极大地提高了检测效率；此外，PCT的线性检测范围可达三个数量级(0.50ng/ml～100.00ng/ml)，NT-proBNP的检测限低至pg/ml级，线性范围为200pg/ml～30000pg/ml。

所述封闭垫3和样品垫2的基质材料均为玻璃纤维素膜，所述反应垫4的基质材料为硝酸纤维素膜，所述抗红细胞抗体为抗人红细胞抗体。本发明将抗人红细胞的抗体包被于单独玻璃纤维素膜上，方便工艺生产，方便储存运输，能有效提高试剂卡的稳定性。

本发明方案的试纸可广泛应用于免疫层析检测盒的制备或末梢血免疫层析定量检测中。

本发明实施例二为：一种PCT免疫层析定量检测试纸，包括底板1，底板1上从左至右依次设有样品垫2、封闭垫3(基质为玻璃纤维膜)、反应垫4(基质为硝酸纤维素膜)和吸水垫5。样品垫2上固定有胶体金标记的第一PCT单克隆抗体(浓度范围可以是0.3～1.5mg/mL)和胶体金标记的单独C带抗体；硝酸纤维素膜上固定有能够识别PCT另外一个表位的第二PCT单克隆抗体构成的检测线42(浓度范围可以是0.5～3mg/mL)和包被能够捕获单独C带抗体的抗原(DNP-BSA)的质控线41(浓度范围可以是0.2～2.0mg/mL)，质控线41用于检测试纸条的有效性。

试纸制备程序如下：

步骤1反应垫4的制备：

根据待检样本中的待检目标物确定包被抗体种类：本发明方案的抗体为第二PCT单克隆抗体及能够捕获单独C带抗体的C带抗原。将6.92mg/ml的第一降钙素原单克隆抗体和10.5mg/ml的C带抗原包被于硝酸纤维素膜上，干燥24h，温度为37℃，湿度≦40％RH。

步骤2样品垫2的制备

取40nm的胶体金溶液，加入0.2M的K₂CO₃(碳酸钾)调节pH值至7.5(pH值调节至7～8即可)，取两份调节好pH值的溶液，分别按15μg/ml比例加入第一PCT单克隆抗体和C带抗体(兔抗DNP抗体)，制成带有标志物的抗体组合物，室温搅拌15min，按0.8％比例加入BSA(牛血清白蛋白)稳定剂，室温搅拌30min。

12000rpm离心15min，去上清，取浓缩沉淀物；用0.1％硼酸/PEG20000重悬，重复离心2次，最后用少量(100～200μl均可)0.1％硼酸/PEG20000重悬，测定光密度(opticaldensity，OD)。

将回收的沉淀稀释液用硼酸稀释后包被于1.8cm×30cm的玻璃纤维素膜上，此玻纤事先用由浓度为5％酪蛋白，0.2％海藻糖、2mM硼酸/PEG20000缓冲液(2mM硼酸/PEG20000)(pH9.0)组成的工作液浸泡。在37℃下将所述玻纤干燥24h，包被位置于加样口附近位置，加液量120μl/张，干燥24h，温度37℃，湿度≦40％RH。

步骤3封闭垫3的制备：

将切割成1cm×30cm的玻璃纤维，用由浓度为0.06mg/ml抗人红细胞抗体，0.12％乙二铵四乙酸二钠、1％BSA(牛血清白蛋白)和Tris-HCl缓冲液(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)(pH7.4)组成的封闭液浸泡。在37℃下将其干燥24h，获得封闭垫3。

步骤4试纸组装

将底板1上的双面胶撕掉后，将制备好的反应垫4贴在底板1上，再将吸水垫5压反应垫4右侧的2mm贴上，吸水垫5的另一端与底板1对齐。将封闭垫3压在反应垫4左侧的3mm处贴上。将样本垫与底板的一端对齐，另一端部分压在封闭垫3上。

当待测样品加到样品垫2上后，通过层析作用向前移动，样品中PCT与样品垫2上结合胶体金标志物的第一PCT单克隆抗体反应形成复合物PCT-Mab-PCT，在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的第二PCT单克隆抗体(检测线42)时，反应复合物被包被的第二PCT单克隆抗体捕获形成复合物(Mab-PCT-PCT-Mab-PCT)(检测线42)，与此同时，单独标记的C带抗体与质控线41C抗原结合显现条带，通过胶体金试纸分析仪读取检测线42的反应信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值，计算出样本中PCT的浓度，得到降钙素原检测结果。实验发现线性检测范围为0.50ng/ml～100.00ng/ml，且线性关系良好，能够实现准确定量。

本发明实施例三为：一种NT-proBNP免疫层析定量检测试纸，包括底板1，底板1上从左至右依次设有样品垫2、封闭垫3(基质为玻璃纤维膜)、反应垫4(基质为硝酸纤维素膜)和吸水垫5。样品垫2上固定有胶体金标记的第一NT-proBNP单克隆抗体(浓度范围可以是0.3～1.5mg/mL)和胶体金标记的单独C带抗体；硝酸纤维素膜上固定有识别NT-proBNP另外一个表位的单克隆抗体(第二NT-proBNP单克隆抗体(浓度范围可以是0.5～3mg/mL))构成的检测线和捕获单独C抗体的抗原浓度范围可以是0.2～2.0mg/mL)构成的质控线，质控线用于检测试纸条的有效性。

试纸制备程序如下：

步骤1反应垫4的制备：

根据待检样本中的待检目标物确定包被抗体种类：第二N-末端脑钠肽(NT-proBNP)单克隆抗体和能够捕获单独C带抗体的C带抗原(DNP-BSA)。将15.42mg/ml的第二NT-proBNP单克隆抗体、8.02mg/ml的C带抗原包被于硝酸纤维素膜上，干燥24h，温度为37℃，湿度≦40％RH。

步骤2样品垫2的制备：

取40nm的胶体金溶液，加入0.2M的K₂CO₃(碳酸钾)调节pH值至8.0，取两份调节好pH值的溶液，分别按15μg/ml比例加入第一NT-proBNP单克隆抗体和C带抗体(兔抗DNP抗体)，制成标志物，室温搅拌15min，按0.8％比例加入BSA作为稳定剂，室温搅拌30min。

12000rpm离心15min，去上清，取浓缩沉淀物；用0.1％硼酸/PEG20000重悬，重复离心2次，最后用少量(100-200微升均可)0.1％硼酸/PEG20000重悬，测定OD。

将回收的沉淀稀释液用硼酸稀释后包被于1.8cm×30cm的玻璃纤维素膜上，包被位置于加样口附近位置，加液量120ul/张，干燥24h，温度37℃，湿度≦40％RH。

步骤3封闭垫3的制备

将切割成1cm×30cm的玻璃纤维包含浓度为0.06mg/ml抗人红细胞抗体，0.12％乙二铵四乙酸二钠、1％BSA(牛血清白蛋白)和Tris-HCl缓冲液(三羟甲基氨基甲烷-盐酸)(pH7.4)工作液浸泡。在37℃将其干燥24h，获得样本垫。

步骤4试纸组装

将底板1上的双面胶撕掉后，将制备好的反应垫4贴在底板1上，再将吸水垫5压反应垫4右侧的2mm贴上，吸水垫5的另一端与底板1对齐。将封闭垫3压在反应垫4左侧的3mm处贴上。将样本垫与底板的一端对齐，另一端部分压在封闭垫3上。

当待测样品加到样品垫2上后，通过层析作用向前移动，样品中NT-proBNP与样品垫2上结合胶体金标志物的NT-proBNP抗体反应形成复合物NT-proBNP-Mab-NT-proBNP，在层析作用下反应复合物继续向前移动经过硝酸纤维膜上包被的NT-proBNP抗体(检测线42)时，反应复合物被包被的NT-proBNP抗体捕获形成Mab-NT-proBNP-NT-proBNP-Mab-NT-proBNP(检测线)，与此同时，单独标记的C带抗体与质控线C抗原结合显现条带，通过胶体金试纸分析仪读取检测线42的反应信号，通过信号转化及设定的标准曲线自动转化为定量数值，计算出样本中NT-proBNP的浓度，得到N-末端脑钠肽(NT-proBNP)检测结果。实验发现NT-proBNP的检测线42性范围为200pg/ml～30000pg/ml。

本发明方案中的C带抗原及相应的抗体，也可以采用其他单独配对抗原抗体组合，如鼠抗DNP抗体等。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，包括底板，所述底板上沿底板长度方向依次设有样品垫、封闭垫、反应垫和吸水垫；其特征在于：所述样品垫上包被有第一抗体，所述第一抗体上带有示踪标志物且能够识别待测目标物一抗原表位；所述封闭垫上包被有抗红细胞抗体，所述封闭垫与所述反应垫部分层叠。

2.根据权利要求1所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述封闭垫与所述反应垫重叠的区域长度为1～5mm；优选为3mm。

3.根据权利要求1所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述封闭垫通过以下方法制备而得：将用于制备封闭垫的基质材料用封闭液浸泡后，再经干燥处理后制得，所述封闭液包括抗红细胞抗体、乙二铵四乙酸二钠、BSA和Tris-HCl缓冲液。

4.根据权利要求3所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述抗红细胞抗体的浓度为0.02mg/ml～0.2mg/ml；所述乙二铵四乙酸二钠的浓度为0.05～0.5wt％；所述BSA的浓度为0.1～5wt％；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.35～7.45。

5.根据权利要求1所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述第一抗体包被在样品垫的中部区域且靠近外设的检测加样孔。

6.根据权利要求1所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述样品垫上还固定有质控抗体，所述反应垫上还设有检测线和质控线，所述检测线位于靠近吸水垫的一侧，所述质控线位于靠近封闭垫的一侧。

7.根据权利要求6所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述质控线上包被有能够捕获质控抗体的抗原，所述检测线上包被有第二抗体，所述第二抗体为能够识别待测目标物另一抗原表位的抗体。

8.根据权利要求7所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述抗原为C带抗原，所述C带抗原的浓度为0.2～2.0mg/ml，所述第二抗体的浓度为0.5～3mg/ml。

9.根据权利要求1所述的适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸，其特征在于：所述示踪标志物为胶体金；所述待测目标物为PCT或NT-proBNP；所述抗红细胞抗体为抗人红细胞抗体。

10.一种如权利要求1-9任一项所述的试纸在免疫层析检测盒的制备或末梢血免疫层析定量检测中的应用。