[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN109705213B - 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途 - Google Patents

抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN109705213B
CN109705213B CN201811471780.2A CN201811471780A CN109705213B CN 109705213 B CN109705213 B CN 109705213B CN 201811471780 A CN201811471780 A CN 201811471780A CN 109705213 B CN109705213 B CN 109705213B
Authority
CN
China
Prior art keywords
ala
thr
cys
gly
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811471780.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109705213A (zh
Inventor
邹最
侯炜彤
郭诗雨
陈思敏
田复波
邹泽强
安毛毛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Changzheng Hospital
Original Assignee
Shanghai Changzheng Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Changzheng Hospital filed Critical Shanghai Changzheng Hospital
Priority to CN201811471780.2A priority Critical patent/CN109705213B/zh
Publication of CN109705213A publication Critical patent/CN109705213A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109705213B publication Critical patent/CN109705213B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Landscapes

  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途,涉及抗体技术领域。一种特异性结合金黄色葡萄球菌毒素抗体或其片段,所述抗体或其片段能够特异性的结合金黄色葡萄球菌γ‑溶血素H1gB组分,并能与该溶血素其它溶血素组分产生交叉反应;所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH‑CDR1、VH‑CDR2和VH‑CDR3;所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL‑CDR1、VL‑CDR2和VL‑CDR3。本发明可以发挥中和至少包含中和H1gB双组分毒素的作用,进而实现单独或联合抗金黄色葡萄球菌化学药物联合治疗金黄色葡萄球菌感染。

Description

抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途
技术领域
本发明涉及抗体技术领域,具体涉及一种特异性结合金黄色葡萄球菌毒素抗体。
背景技术
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)属于葡萄球菌属,是一种重要的革兰阳性致病菌,可引起化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等局部感染,以及败血症、脓毒血症等全身感染。金黄色葡萄球菌主要通过产生毒素和侵袭性酶类而致病,这些致病因子包括溶血素、杀白细胞素、肠毒素、凝固酶等。溶血素是金黄色葡萄球菌分泌的最重要的毒力因子之一。溶血素可以根据抗原的不同分为α-溶血素、β-溶血素、γ-溶血素及δ-溶血素四种类型,其中α-溶血素在金黄色葡萄球菌的定植和致病过程中的作用最为重要。
在金黄色葡萄球菌感染过程中,金黄色葡萄球菌能够释放细胞毒素攻击宿主中性粒细胞。γ溶血素(Hlg)在所有金黄色葡萄球菌中普遍表达。其基因产物可以产生两类毒素:HlgAB和HlgCB,γ-溶素成孔的过程可分为以下几步:(1)细菌分泌的水溶性F、S单体到达靶细胞;(2)单体结合于细胞膜形成异二聚体;(3)寡聚化为环状结构的prepore;(4)形成跨膜的β桶状孔洞。γ-溶素类能高效杀死人类免疫细胞包括:中性粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞。并且HlgAB能够高效破坏人体红细胞。
杀白细胞素(PVL)是金黄色葡萄球菌产生的一种重要外毒素,近年来产(PVL)的金黄色葡萄球菌所致感染患者的病死率有增加的驱势。PVL是金黄色葡萄球菌产生的一种细胞外毒素,属于膜钻孔毒素家族,由S和F蛋白组成。这2种蛋白由Luks-PV基因和LukF-PV基因编码,其相对分子量分别为33×103和34×103。S蛋白和F蛋白的生物活性和功能各不相同,对人体的多形核白细胞(PMN)和巨噬细胞具有高度的特异性首先Lusk-PV与PMNs细胞膜上的受体结合,此受体与Luks-PV具有高度特异性和亲和力。LukF-PV与Luks-PV结合形成二聚体,然后LukF-PV和Luks-PV再依次结合形成杂聚体。此杂聚体垂直于PMNs细胞膜平面,形成一个穿膜孔,只允许二价阳离子如Ca2+等通过。PMNs细胞死亡依赖于PVL的浓度,在低浓度时,PVL与尚未明确的细胞表面受体特异性结合,产生较多的杂聚体,有利于更多的PVL分子进入细胞,在线粒体外膜上形成孔道,破坏线粒体的内环境,激活Caspase-9和Caspase-3,释放杀白细胞素C,诱导细胞凋亡。而在高浓度时,PVL可能非特异性地吸附到脂质双层上,形成较大的八聚体孔道,当Luks-PV与PMNs结合时,蛋白激酶A或C磷酸化Luks-PV激活Ca2+通道,Ca2+内流而产生白细胞介素和炎症介质,使PMNs溶解,释放出氧化代谢产物和炎症介质,引发一系列炎症反应,严重者造成组织坏死。
现有技术尚未有针对金黄色葡萄球菌γ-溶血素HlgB抗原生产的抗体。
发明内容
本发明的目的在于:克服现有技术的不足,提供一种特异性结合黄色葡萄球菌γ-溶血素HlgB并能交叉结合黄色葡萄球菌其它毒素组分的蛋白抗体或其功能片段,并基于该抗体或其它功能片段提供其用途。
为实现上述目标,本发明提供了如下技术方案:
一种特异性结合金黄色葡萄球菌毒素抗体或其片段,所述抗体或其片段能够特异性的结合金黄色葡萄球菌γ-溶血素HlgB组分,并能与该溶血素其它溶血素组分产生交叉反应;
所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);
其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3;
所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3;
所述重链可变区为:
Figure BDA0001891127140000021
VH-CDR1氨基酸:GYTFTDYN,
VH-CDR2氨基酸:INPNYDST,
VH-CDR3氨基酸:ARDGSSAMDY,
所述轻链可变区为:
Figure BDA0001891127140000031
VL-CDR1氨基酸:QSLLNSGNQKNY,
VL-CDR2氨基酸:GAS,
VL-CDR3氨基酸:QNDHRYPLT。
进一步,所述重链可变区(VH)包含选自以下的序列:与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。优选地,所述至少75%同一性为例如至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、进一步优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性等≥75%的任何百分比的同一性。
和/或,所述轻链可变区(VL)包含选自以下的序列:与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列。优选地,所述至少75%同一性为例如至少80%、优选至少85%、更优选至少90%、进一步优选至少91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或甚至99%同一性等≥75%的任何百分比的同一性。
进一步,包含选自以下的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)的组合:
如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列的重链可变区;
和与SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列具有至少75%同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
进一步,所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、完全或部分人源化抗体或者嵌合抗体中的任意一种;优选地,所述抗体为IgA、IgD、IgE、IgG或IgM,更优选为IgG1;
所述片段选自所述抗体的scFv、Fab、F(ab′)2或Fv片段。
进一步,所述抗体的重链恒定区为IgG1亚型,轻链恒定区为κ型。优选地,所述抗体或其片段包含如SEQ ID NO:1所示的重链恒定区和/或如SEQ ID NO:2所示的轻链恒定区。
另一方面,本发明还提供了一种缀合物,所述缀合物包含前述的抗体或其片段。
另一方面,本发明还提供了一种核酸分子,其编码如前述抗体或其片段中的重链CDR、轻链CDR、重链可变区、轻链可变区、重链或轻链。
另一方面,本发明还提供了一种载体,其包含如前述的核酸分子。
所述载体为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体或噬菌体载体。
另一方面,本发明还提供了一种药物组合物,其包含如前述的抗体或其片段,或者前述的缀合物,或者前述的核酸分子,或者前述的载体;
以及任选的药学上可接受的辅料。
另一方面,本发明还提供了前述的抗体或其片段,或者前述的缀合物,或者前述的核酸分子,或者前述的载体,或者前述的药物组合物在制备用于预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的用途。
所述药物可以与其它任选的抗金黄色葡萄球菌药物结合使用,以治疗金黄色葡萄球菌引起的化脓性感染、肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等局部感染,以及败血症、脓毒血症等全身感染。
优选地,所述金黄色葡萄球菌为能够引起哺乳动物如人类感染的病原金黄色葡萄球菌。所述其它抗金黄色葡萄球菌药物可以为万古霉素和利奈唑胺注射液。
本发明由于采用以上技术方案,与现有技术相比,作为举例,具有以下的优点和积极效果:抗体能够特异性的结合金黄色葡萄球菌γ-溶血素HlgB组分,还能进一步的能够和溶血素的其它毒力因子产生交叉活性,包括HlgA,LukD,LukF。该抗体能够最大限度的中和金黄色葡萄球菌溶血素毒力因子,进而实现单独或联合抗金黄色葡萄球菌化学药物联合治疗金黄色葡萄球菌感染。
附图说明
图1为本发明实施例提供的融合His标签的白念珠菌HlgB蛋白重组表达。
图2为本发明实施例提供的融合His标签的白念珠菌、HlgA蛋白重组表达。
图3为本发明实施例提供的融合His标签的白念珠菌、HlgC蛋白重组表达。
图4为本发明实施例提供的融合His标签的LukD蛋白重组表达。
图5为本发明实施例提供的融合His标签的LukF蛋白重组表达。
图6为本发明实施例提供的重组蛋白的纯化。
图7为本发明实施例提供的通过ELISA方法检测抗体与金黄色葡萄球菌毒力蛋白分子的结合的结果分析图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明公开的抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途作进一步详细说明。应当注意的是,下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的,它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。在下述实施例的附图中,各附图所出现的相同标号代表相同的特征或者部件,可应用于不同实施例中。因此,一旦某一项在一个附图中被定义,则在随后的附图中不需要对其进行进一步讨论。
需说明的是,对于相关领域普通技术人员已知的技术、方法和设备可能不作详细讨论,但在适当情况下,所述技术、方法和设备应当被视为授权说明书的一部分。在这里示出和讨论的所有示例中,任何具体值应被解释为仅仅是示例性的,而不是作为限制。因此,示例性实施例的其它示例可以具有不同的值。
实施例1:融合His标签的白念珠菌HlgB蛋白重组表达
以金黄色葡萄球菌HlgB、HlgA蛋白氨基酸为目的序列,人工合成相应的碱基序列,并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。过夜培养菌液按1∶100接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6-0.8,向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM,于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液,8,000rpm离心3min收集菌体,-80℃保存。
HlgB蛋白全长氨基酸序列:
Figure BDA0001891127140000061
表达HlgB蛋白全长的碱基序列:
Figure BDA0001891127140000062
实施例2:融合His标签的HlgA蛋白重组表达
以金黄色葡萄球菌HlgA蛋白氨基酸为目的序列,人工合成相应的碱基序列,并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。过夜培养菌液按1∶100接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6-0.8,向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM,于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液,8,000rpm离心3min收集菌体,-80℃保存。
金黄色葡萄球菌HlgA蛋白全长氨基酸序列:
Figure BDA0001891127140000071
表达金黄色葡萄球菌HlgA蛋白全长的碱基序列:
Figure BDA0001891127140000072
实施例3:融合His标签的HlgC蛋白重组表达
以金黄色葡萄球菌HlgC蛋白氨基酸为目的序列,人工合成相应的碱基序列,并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。过夜培养菌液按1∶100接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6-0.8,向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM,于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液,8,000rpm离心3min收集菌体,-80℃保存。
金黄色葡萄球菌蛋白全长氨基酸序列:
Figure BDA0001891127140000081
表达金黄色葡萄球菌HlgC蛋白全长的碱基序列:
Figure BDA0001891127140000082
实施例4:融合His标签的LukD蛋白重组表达
以金黄色葡萄球菌LukD蛋白氨基酸为目的序列,人工合成相应的碱基序列,并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。过夜培养菌液按1∶100接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,200rpm于37℃振荡培养OD600约为0.6-0.8,向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM,于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液,8,000rpm离心3min收集菌体,-80℃保存。
金黄色葡萄球菌蛋白LukD全长氨基酸序列:
Figure BDA0001891127140000091
表达金黄色葡萄球菌LukD蛋白全长的碱基序列:
Figure BDA0001891127140000092
实施例5:融合His标签的LukF蛋白重组表达
以金黄色葡萄球菌LukF蛋白氨基酸为目的序列,人工合成相应的碱基序列,并利用酶切位点NdeI和XhoI将其克隆至含His标签的Pet-21a质粒中。将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)pLysS中,于次日挑取单菌落接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,37℃振荡培养过夜。过夜培养菌液按1∶100接种至含100μg/ml氨苄西林的LB液体培养基中,200rpm于37℃振荡培养至OD600约为0.6-0.8,向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5mM,于37℃诱导4.5h。取诱导后菌液,8,000rpm离心3min收集菌体,-80℃保存。
金黄色葡萄球菌蛋白LukF全长氨基酸序列:
Figure BDA0001891127140000101
表达金黄色葡萄球菌LukF蛋白全长的碱基序列:
Figure BDA0001891127140000102
实施例6:重组金黄色葡萄球菌HlgB、HlgA、HlgC、LukD、LukF蛋白的纯化
将诱导表达重组金黄色葡萄球菌HlgB蛋白的大肠杆菌用超声破碎仪破碎,180W工作3s间歇3s,时间7-9min;13,000rpm离心30min,收集上清液,用0.22μmL滤器过滤除菌;室温下将Ni柱与上清液于旋转混合仪上混合1h,将Ni柱装载到填料柱中;用5倍柱床体积的BD液洗脱(含咪唑浓度30mM)与Ni柱非特异性结合蛋白,洗至蛋白显色液不变色,然后用5倍柱床体积的BB液(含咪唑浓度300mM)洗脱目的蛋白;将含目的蛋白的洗脱液使用10KD的浓缩管浓缩置换溶剂为PBS缓冲液。
电泳图参见图6所示。
实施例7:重组金黄色葡萄球菌HlgB蛋白免疫Balb/c小鼠
参考Antibodies a Laboratory Manual,Second Edition(Edward A.Greenfield2012),以14天为间隔共计42天的过程免疫8周龄Balb/c小鼠。将免疫原白念珠菌Eno1蛋白乳化在完全或不完全弗氏佐剂中,并且将其以单侧的方式注射于小鼠颈背部、尾根部、腹股沟3处皮下组织和腹膜腔内。在免疫第35天尾静脉采血,用ELISA方法检测抗体滴度后,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合。
实施例8:抗HlgB蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选、鉴定及抗体序列测定
取重组金黄色葡萄球菌HlgB蛋白免疫Balb/c小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞P3X63Ag8.653使用PEG或者电融合方法进行融合,将融合后的杂交瘤细胞接种于96孔板中,24小时后加入含HAT培养基和HT的培养基,筛选杂交瘤细胞;于96孔板中培养10-14天后,取细胞上清进行ELISA实验,筛选能够分泌抗Eno1抗体的杂交瘤母克隆。
将分泌抗HlgB抗体的杂交瘤母克隆采用有限稀释法加入铺有饲养细胞的96孔板中,第2-3天后显微镜下观察并标记单克隆细胞,第7天后通过ELISA实验筛选能够分泌抗HlgB单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞。
将分泌抗HlgB单克隆抗体的单克隆杂交瘤细胞扩大培养后,按照RNAfast200试剂盒(上海飞捷生物技术有限公司)说明书步骤提取细胞总RNA;利用5×PrimeScript RTMaster Mix(Takara)将杂交瘤细胞总RNA反转录成cDNA;使用简并引物(AnkeKrebber.1997)和Extaq PCR试剂(Takara)扩增抗体轻链可变区IgVL(κ)和重链可变区VH序列;利用PCR clean-up Gel extraction试剂盒(Macherey-Nagel公司)纯化PCR扩增产物;按照pClone007 Simple Vector Kit试剂盒(擎科生物科技有限公司)说明书将扩增PCR产物连接至T载体并转化大肠杆菌感受态细胞,菌株扩增、抽提质粒后进行DNA测序获得单克隆抗体可变区序列。
实施例9:ELISA方法检测抗体与HlgB蛋白的结合
将真菌HlgB蛋白用PBS缓冲液稀释至1μg/ml,每孔100μl包被于96孔板(Microwell96F 167008,Thermo)4℃孵育过夜;次日取出96孔板,用PBST(含0.5%PBS)洗板,每次浸润1min后彻底甩干残余水分。样品孔中分别加入200μl的含5%BSA PBST,置于37℃封闭1h;然后用PBST洗板,并甩干孔中水分。分别向96孔板中加入待测样品100μl 4℃孵育过夜。取出96孔板后用PBST洗板后每孔加入二抗100μl,并置于37℃孵育1h。再用PBST洗5次,每孔加入100μl Substrate Solution(Invitrogen),于37℃孵育10min;每孔加入2N硫酸50μl终止反应后于酶标仪(Multiskcin FC,Thermo)450nm波长处检测吸光度。
实施例10:ELISA方法检测抗体抑制双组分毒素HlgAB蛋白溶血实验
将HlgB、HlgA蛋白混合调节浓度至2μg/ml。至于37度孵育10min对蛋白进行组装形成HlgAB蛋白,加入HlgB抗体与HlgAB蛋白孵育10min。加入5%兔血75μl,并加入PBS使得终体积为150μl。吹打混匀至于37度孵育60min,将样品用离心机离芯3000rpm,3min。用酶标仪检测(Multiskcin FC,Thermo)OD405的吸光光度值。
检测结果参见图7所示。
实施例11:小鼠体内γ溶血素脓毒症症动物模型复制及单克隆抗体治疗作用检测
将HlgB、HlgA蛋白混合调节浓度至50μg/ml,至于37度孵育10min。蛋白进行组装形成HlgAB蛋白。尾静脉注射抗HlgB抗体50μg,30min后尾静脉注射HlgAB蛋白20μg。观察小鼠生存时间。
其他实施方案
在上面的描述中,本发明的公开内容并不旨在将其自身限于这些方面。而是,在本公开内容的目标保护范围内,各组件可以以任意数目选择性地且操作性地进行合并。另外,像“包括”以及“具有”的术语应当默认被解释为包括性的或开放性的,而不是排他性的或封闭性,除非其被明确限定为相反的含义。所有技术、科技或其他方面的术语都符合本领域技术人员所理解的含义,除非其被限定为相反的含义。在词典里找到的公共术语应当在相关技术文档的背景下不被太理想化或太不实际地解释,除非本公开内容明确将其限定成那样。本发明领域的普通技术人员根据上述揭示内容做的任何变更、修饰,均属于权利要求书的保护范围。
序列表
<110> 上海嘉霈医药科技有限公司
<120> 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途
<130> 20181204
<160> 12
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工合成(VH-序列)
<400> 1
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
            20                  25                  30
Asn Met Asp Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Pro Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Asp Ile Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Thr Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Ser Ser Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 2
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工合成(VL-序列)
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Ala Gly
1               5                   10                  15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
            20                  25                  30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
        35                  40                  45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
    50                  55                  60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65                  70                  75                  80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
                85                  90                  95
Asp His Arg Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
            100                 105                 110
Lys
<210> 3
<211> 302
<212> PRT
<213> 人工合成(HlgB蛋白)
<400> 3
Met Glu Gly Lys Ile Thr Pro Val Ser Val Lys Lys Val Asp Asp Lys
1               5                   10                  15
Val Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ala Asp Ser Asp Lys Phe Lys
            20                  25                  30
Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp
        35                  40                  45
Lys Asp Thr Leu Val Leu Lys Ala Thr Gly Asn Ile Asn Ser Gly Phe
    50                  55                  60
Val Lys Pro Asn Pro Asn Asp Tyr Asp Phe Ser Lys Leu Tyr Trp Gly
65                  70                  75                  80
Ala Lys Tyr Asn Val Ser Ile Ser Ser Gln Ser Asn Asp Ser Val Asn
                85                  90                  95
Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln
            100                 105                 110
Asn Thr Leu Gly Tyr Thr Phe Gly Gly Asp Ile Ser Ile Ser Asn Gly
        115                 120                 125
Leu Ser Gly Gly Leu Asn Gly Asn Thr Ala Phe Ser Glu Thr Ile Asn
    130                 135                 140
Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Thr Leu Ser Arg Asn Thr Asn Tyr
145                 150                 155                 160
Lys Asn Val Gly Trp Gly Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly
                165                 170                 175
Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Phe His Pro Thr Tyr Gly Asn Glu
            180                 185                 190
Leu Phe Leu Ala Gly Arg Gln Ser Ser Ala Tyr Ala Gly Gln Asn Phe
        195                 200                 205
Ile Ala Gln His Gln Met Pro Leu Leu Ser Arg Ser Asn Phe Asn Pro
    210                 215                 220
Glu Phe Leu Ser Val Leu Ser His Arg Gln Asp Gly Ala Lys Lys Ser
225                 230                 235                 240
Lys Ile Thr Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Leu Tyr Gln Ile Arg
                245                 250                 255
Trp Asn Gly Phe Tyr Trp Ala Gly Ala Asn Tyr Lys Asn Phe Lys Thr
            260                 265                 270
Arg Thr Phe Lys Ser Thr Tyr Glu Ile Asp Trp Glu Asn His Lys Val
        275                 280                 285
Lys Leu Leu Asp Thr Lys Glu Thr Glu Asn Asn Lys Leu Glu
    290                 295                 300
<210> 4
<211> 909
<212> PRT
<213> 人工合成(融合His标签的白念珠菌HlgB蛋白)
<400> 4
Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Thr Ala Ala Ala Ala
1               5                   10                  15
Thr Cys Ala Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr
            20                  25                  30
Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys
        35                  40                  45
Ala Ala Ala Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys Ala
    50                  55                  60
Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Thr Ala Cys Cys Gly Cys
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Thr Thr Cys
                85                  90                  95
Ala Ala Ala Ala Thr Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys
            100                 105                 110
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Thr
        115                 120                 125
Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Thr Ala Cys
    130                 135                 140
Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly
145                 150                 155                 160
Thr Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys Gly Gly
                165                 170                 175
Thr Ala Ala Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Thr
            180                 185                 190
Thr Thr Cys Gly Thr Thr Ala Ala Ala Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys
        195                 200                 205
Cys Gly Ala Ala Cys Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly Ala Cys Thr Thr
    210                 215                 220
Cys Thr Cys Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Thr Ala Cys Thr Gly Gly
225                 230                 235                 240
Gly Gly Thr Gly Cys Thr Ala Ala Ala Thr Ala Cys Ala Ala Cys Gly
                245                 250                 255
Thr Thr Thr Cys Thr Ala Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Ala
            260                 265                 270
Gly Thr Cys Thr Ala Ala Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr
        275                 280                 285
Ala Ala Cys Gly Thr Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly
    290                 295                 300
Cys Thr Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala
305                 310                 315                 320
Cys Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Ala Gly Gly Thr Thr
                325                 330                 335
Cys Ala Gly Ala Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr
            340                 345                 350
Ala Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Ala
        355                 360                 365
Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Ala Thr Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys
    370                 375                 380
Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys
385                 390                 395                 400
Thr Gly Ala Ala Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Gly Cys
                405                 410                 415
Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys
            420                 425                 430
Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr
        435                 440                 445
Cys Thr Thr Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr
    450                 455                 460
Gly Thr Cys Thr Cys Gly Thr Ala Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys
465                 470                 475                 480
Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Gly Thr Thr Gly Gly Thr Thr
                485                 490                 495
Gly Gly Gly Gly Thr Gly Thr Thr Gly Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala
            500                 505                 510
Cys Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys
        515                 520                 525
Gly Gly Thr Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys Gly
    530                 535                 540
Gly Thr Cys Gly Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Thr Thr Cys Cys Ala
545                 550                 555                 560
Cys Cys Cys Gly Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys
                565                 570                 575
Gly Ala Ala Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly
            580                 585                 590
Gly Thr Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys
        595                 600                 605
Thr Thr Ala Cys Gly Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys
    610                 615                 620
Thr Thr Cys Ala Thr Cys Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys
625                 630                 635                 640
Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Thr Cys
                645                 650                 655
Thr Cys Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys
            660                 665                 670
Cys Cys Gly Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Gly
        675                 680                 685
Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Cys Ala
    690                 695                 700
Gly Gly Ala Cys Gly Gly Thr Gly Cys Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala
705                 710                 715                 720
Thr Cys Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Thr Ala
                725                 730                 735
Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala Thr
            740                 745                 750
Gly Gly Ala Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys
        755                 760                 765
Cys Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr
    770                 775                 780
Ala Cys Thr Gly Gly Gly Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Thr Ala Ala
785                 790                 795                 800
Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Ala
                805                 810                 815
Ala Cys Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Ala Ala Thr
            820                 825                 830
Cys Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Ala Ala Ala Thr Cys Gly Ala
        835                 840                 845
Cys Thr Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Ala Ala
    850                 855                 860
Gly Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Ala Cys Ala
865                 870                 875                 880
Cys Cys Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala
                885                 890                 895
Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Cys Thr Cys Gly Ala Gly
            900                 905
<210> 5
<211> 283
<212> PRT
<213> 人工合成(HlgA蛋白)
<400> 5
Met Glu Asn Lys Ile Glu Asp Ile Gly Gln Gly Ala Glu Ile Ile Lys
1               5                   10                  15
Arg Thr Gln Asp Ile Thr Ser Lys Arg Leu Ala Ile Thr Gln Asn Ile
            20                  25                  30
Gln Phe Asp Phe Val Lys Asp Lys Lys Tyr Asn Lys Asp Ala Leu Val
        35                  40                  45
Val Lys Met Gln Gly Phe Ile Ser Ser Arg Thr Thr Tyr Ser Asp Leu
    50                  55                  60
Lys Lys Tyr Pro Tyr Ile Lys Arg Met Ile Trp Pro Phe Gln Tyr Asn
65                  70                  75                  80
Ile Ser Leu Lys Thr Lys Asp Ser Asn Val Asp Leu Ile Asn Tyr Leu
                85                  90                  95
Pro Lys Asn Lys Ile Asp Ser Ala Asp Val Ser Gln Lys Leu Gly Tyr
            100                 105                 110
Asn Ile Gly Gly Asn Phe Gln Ser Ala Pro Ser Ile Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Ser Phe Asn Tyr Ser Lys Thr Ile Ser Tyr Asn Gln Lys Asn Tyr Val
    130                 135                 140
Thr Glu Val Glu Ser Gln Asn Ser Lys Gly Val Lys Trp Gly Val Lys
145                 150                 155                 160
Ala Asn Ser Phe Val Thr Pro Asn Gly Gln Val Ser Ala Tyr Asp Gln
                165                 170                 175
Tyr Leu Phe Ala Gln Asp Pro Thr Gly Pro Ala Ala Arg Asp Tyr Phe
            180                 185                 190
Val Pro Asp Asn Gln Leu Pro Pro Leu Ile Gln Ser Gly Phe Asn Pro
        195                 200                 205
Ser Phe Ile Thr Thr Leu Ser His Glu Arg Gly Lys Gly Asp Lys Ser
    210                 215                 220
Glu Phe Glu Ile Thr Tyr Gly Arg Asn Met Asp Ala Thr Tyr Ala Tyr
225                 230                 235                 240
Val Thr Arg His Arg Leu Ala Val Asp Arg Lys His Asp Ala Phe Lys
                245                 250                 255
Asn Arg Asn Val Thr Val Lys Tyr Glu Val Asn Trp Lys Thr His Glu
            260                 265                 270
Val Lys Ile Lys Ser Ile Thr Pro Lys Leu Glu
        275                 280
<210> 6
<211> 852
<212> PRT
<213> 人工合成(融合His标签的HlgA蛋白)
<400> 6
Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Ala
1               5                   10                  15
Thr Cys Gly Ala Ala Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Cys Ala
            20                  25                  30
Gly Gly Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Cys
        35                  40                  45
Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Cys Ala Gly Gly Ala Cys Ala
    50                  55                  60
Thr Cys Ala Cys Cys Thr Cys Thr Ala Ala Ala Cys Gly Thr Cys Thr
65                  70                  75                  80
Gly Gly Cys Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys
                85                  90                  95
Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Thr Cys Gly Ala Cys Thr Thr Cys Gly
            100                 105                 110
Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala
        115                 120                 125
Cys Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Gly Cys Thr Cys Thr Gly
    130                 135                 140
Gly Thr Thr Gly Thr Thr Ala Ala Ala Ala Thr Gly Cys Ala Gly Gly
145                 150                 155                 160
Gly Thr Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Thr Cys Thr Cys Gly
                165                 170                 175
Thr Ala Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Cys
            180                 185                 190
Cys Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala Cys Cys Cys Gly Thr
        195                 200                 205
Ala Cys Ala Thr Cys Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Thr Gly Ala Thr
    210                 215                 220
Cys Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Thr Cys Cys Ala Gly Thr Ala Cys
225                 230                 235                 240
Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Ala
                245                 250                 255
Cys Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys Gly Thr
            260                 265                 270
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Gly Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys
        275                 280                 285
Cys Thr Gly Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Ala
    290                 295                 300
Thr Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Thr
305                 310                 315                 320
Thr Thr Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr
                325                 330                 335
Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala
            340                 345                 350
Ala Cys Thr Thr Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Cys Cys
        355                 360                 365
Gly Thr Cys Thr Ala Thr Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Thr Cys Thr
    370                 375                 380
Gly Gly Thr Thr Cys Thr Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr
385                 390                 395                 400
Cys Thr Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Thr Ala
                405                 410                 415
Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Thr Ala Cys
            420                 425                 430
Gly Thr Thr Ala Cys Cys Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Ala Thr
        435                 440                 445
Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Ala Gly Gly
    450                 455                 460
Thr Gly Thr Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Gly Thr Gly Thr Thr
465                 470                 475                 480
Ala Ala Ala Gly Cys Thr Ala Ala Cys Thr Cys Thr Thr Thr Cys Gly
                485                 490                 495
Thr Thr Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Cys Gly Gly Thr Cys Ala
            500                 505                 510
Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Thr Ala Cys Gly Ala Cys
        515                 520                 525
Cys Ala Gly Thr Ala Cys Cys Thr Gly Thr Thr Cys Gly Cys Thr Cys
    530                 535                 540
Ala Gly Gly Ala Cys Cys Cys Gly Ala Cys Cys Gly Gly Thr Cys Cys
545                 550                 555                 560
Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Cys Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys
                565                 570                 575
Thr Thr Cys Gly Thr Thr Cys Cys Gly Gly Ala Cys Ala Ala Cys Cys
            580                 585                 590
Ala Gly Cys Thr Gly Cys Cys Gly Cys Cys Gly Cys Thr Gly Ala Thr
        595                 600                 605
Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Thr Cys Ala Ala Cys
    610                 615                 620
Cys Cys Gly Thr Cys Thr Thr Thr Cys Ala Thr Cys Ala Cys Cys Ala
625                 630                 635                 640
Cys Cys Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Ala Cys Gly Ala Ala Cys Gly
                645                 650                 655
Thr Gly Gly Thr Ala Ala Ala Gly Gly Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala
            660                 665                 670
Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr Thr Cys Gly Ala Ala Ala Thr Cys Ala
        675                 680                 685
Cys Cys Thr Ala Cys Gly Gly Thr Cys Gly Thr Ala Ala Cys Ala Thr
    690                 695                 700
Gly Gly Ala Cys Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Cys Thr
705                 710                 715                 720
Thr Ala Cys Gly Thr Thr Ala Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Cys Cys
                725                 730                 735
Gly Thr Cys Thr Gly Gly Cys Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Cys Gly
            740                 745                 750
Thr Ala Ala Ala Cys Ala Cys Gly Ala Cys Gly Cys Thr Thr Thr Cys
        755                 760                 765
Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Gly Thr Ala Ala Cys Gly Thr Thr Ala
    770                 775                 780
Cys Cys Gly Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr
785                 790                 795                 800
Thr Ala Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Cys
                805                 810                 815
Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala Ala Thr
            820                 825                 830
Cys Thr Ala Thr Cys Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Ala Ala Cys Thr
        835                 840                 845
Cys Gly Ala Gly
    850
<210> 7
<211> 287
<212> PRT
<213> 人工合成(HlgC蛋白)
<400> 7
Met Ala Asn Asp Thr Glu Asp Ile Gly Lys Gly Ser Asp Ile Glu Ile
1               5                   10                  15
Ile Lys Arg Thr Glu Asp Lys Thr Ser Asn Lys Trp Gly Val Thr Gln
            20                  25                  30
Asn Ile Gln Phe Asp Phe Val Lys Asp Lys Lys Tyr Asn Lys Asp Ala
        35                  40                  45
Leu Ile Leu Lys Met Gln Gly Phe Ile Ser Ser Arg Thr Thr Tyr Tyr
    50                  55                  60
Asn Tyr Lys Lys Thr Asn His Val Lys Ala Met Arg Trp Pro Phe Gln
65                  70                  75                  80
Tyr Asn Ile Gly Leu Lys Thr Asn Asp Lys Tyr Val Ser Leu Ile Asn
                85                  90                  95
Tyr Leu Pro Lys Asn Lys Ile Glu Ser Thr Asn Val Ser Gln Thr Leu
            100                 105                 110
Gly Tyr Asn Ile Gly Gly Asn Phe Gln Ser Ala Pro Ser Leu Gly Gly
        115                 120                 125
Asn Gly Ser Phe Asn Tyr Ser Lys Ser Ile Ser Tyr Thr Gln Gln Asn
    130                 135                 140
Tyr Val Ser Glu Val Glu Gln Gln Asn Ser Lys Ser Val Leu Trp Gly
145                 150                 155                 160
Val Lys Ala Asn Ser Phe Ala Thr Glu Ser Gly Gln Lys Ser Ala Phe
                165                 170                 175
Asp Ser Asp Leu Phe Val Gly Tyr Lys Pro His Ser Lys Asp Pro Arg
            180                 185                 190
Asp Tyr Phe Val Pro Asp Ser Glu Leu Pro Pro Leu Val Gln Ser Gly
        195                 200                 205
Phe Asn Pro Ser Phe Ile Ala Thr Val Ser His Glu Lys Gly Ser Ser
    210                 215                 220
Asp Thr Ser Glu Phe Glu Ile Thr Tyr Gly Arg Asn Met Asp Val Thr
225                 230                 235                 240
His Ala Ile Lys Arg Ser Thr His Tyr Gly Asn Ser Tyr Leu Asp Gly
                245                 250                 255
His Arg Val His Asn Ala Phe Val Asn Arg Asn Tyr Thr Val Lys Tyr
            260                 265                 270
Glu Val Asn Trp Lys Thr His Glu Ile Lys Val Lys Gly Gln Asn
        275                 280                 285
<210> 8
<211> 870
<212> PRT
<213> 人工合成(融合His标签的HlgC蛋白)
<400> 8
Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Thr Ala
1               5                   10                  15
Cys Cys Gly Ala Ala Gly Ala Thr Ala Thr Ala Gly Gly Thr Ala Ala
            20                  25                  30
Ala Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gly Ala Thr Ala Thr Ala Gly Ala Ala
        35                  40                  45
Ala Thr Cys Ala Thr Cys Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Cys Ala Gly
    50                  55                  60
Ala Ala Gly Ala Thr Ala Ala Gly Ala Cys Cys Ala Gly Thr Ala Ala
65                  70                  75                  80
Thr Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Gly Ala Gly Thr Gly Ala Cys Ala
                85                  90                  95
Cys Ala Gly Ala Ala Thr Ala Thr Thr Cys Ala Ala Thr Thr Thr Gly
            100                 105                 110
Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Ala
        115                 120                 125
Gly Ala Ala Gly Thr Ala Thr Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys
    130                 135                 140
Gly Cys Ala Cys Thr Gly Ala Thr Ala Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala
145                 150                 155                 160
Thr Gly Cys Ala Gly Gly Gly Cys Thr Thr Thr Ala Thr Cys Ala Gly
                165                 170                 175
Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala Thr
            180                 185                 190
Thr Ala Thr Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala
        195                 200                 205
Cys Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys
    210                 215                 220
Ala Ala Thr Gly Ala Gly Ala Thr Gly Gly Cys Cys Gly Thr Thr Cys
225                 230                 235                 240
Cys Ala Gly Thr Ala Thr Ala Ala Thr Ala Thr Thr Gly Gly Cys Cys
                245                 250                 255
Thr Gly Ala Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Thr Gly Ala Cys Ala Ala
            260                 265                 270
Gly Thr Ala Thr Gly Thr Thr Ala Gly Cys Thr Thr Ala Ala Thr Cys
        275                 280                 285
Ala Ala Cys Thr Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala
    290                 295                 300
Ala Cys Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Cys
305                 310                 315                 320
Cys Ala Ala Cys Gly Thr Cys Ala Gly Cys Cys Ala Ala Ala Cys Cys
                325                 330                 335
Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly
            340                 345                 350
Gly Thr Gly Gly Gly Ala Ala Thr Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr Cys
        355                 360                 365
Gly Gly Cys Ala Cys Cys Thr Ala Gly Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr
    370                 375                 380
Gly Gly Thr Ala Ala Thr Gly Gly Thr Thr Cys Ala Thr Thr Thr Ala
385                 390                 395                 400
Ala Thr Thr Ala Cys Ala Gly Cys Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala Thr
                405                 410                 415
Cys Ala Gly Cys Thr Ala Cys Ala Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Ala
            420                 425                 430
Ala Ala Thr Thr Ala Thr Gly Thr Gly Ala Gly Thr Gly Ala Ala Gly
        435                 440                 445
Thr Cys Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys Ala Gly Ala Ala Thr Ala Gly
    450                 455                 460
Cys Ala Ala Ala Ala Gly Thr Gly Thr Thr Cys Thr Gly Thr Gly Gly
465                 470                 475                 480
Gly Gly Thr Gly Thr Thr Ala Ala Ala Gly Cys Thr Ala Ala Thr Ala
                485                 490                 495
Gly Cys Thr Thr Thr Gly Cys Ala Ala Cys Gly Gly Ala Gly Thr Cys
            500                 505                 510
Cys Gly Gly Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Ala Gly Cys Gly Cys Ala
        515                 520                 525
Thr Thr Thr Gly Ala Cys Ala Gly Cys Gly Ala Thr Cys Thr Gly Thr
    530                 535                 540
Thr Thr Gly Thr Thr Gly Gly Cys Thr Ala Thr Ala Ala Ala Cys Cys
545                 550                 555                 560
Gly Cys Ala Thr Ala Gly Thr Ala Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Gly
                565                 570                 575
Cys Gly Gly Gly Ala Thr Thr Ala Thr Thr Thr Thr Gly Thr Thr Cys
            580                 585                 590
Cys Thr Gly Ala Thr Ala Gly Thr Gly Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys
        595                 600                 605
Gly Cys Cys Gly Thr Thr Ala Gly Thr Thr Cys Ala Gly Ala Gly Cys
    610                 615                 620
Gly Gly Ala Thr Thr Thr Ala Ala Thr Cys Cys Cys Thr Cys Ala Thr
625                 630                 635                 640
Thr Thr Ala Thr Thr Gly Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys
                645                 650                 655
Ala Cys Ala Thr Gly Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ala Gly Cys
            660                 665                 670
Ala Gly Cys Gly Ala Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys Gly Ala Ala Thr
        675                 680                 685
Thr Thr Gly Ala Ala Ala Thr Ala Ala Cys Cys Thr Ala Thr Gly Gly
    690                 695                 700
Thr Cys Gly Thr Ala Ala Cys Ala Thr Gly Gly Ala Thr Gly Thr Gly
705                 710                 715                 720
Ala Cys Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Ala Thr Thr Ala Ala Ala Cys
                725                 730                 735
Gly Thr Ala Gly Cys Ala Cys Ala Cys Ala Thr Thr Ala Thr Gly Gly
            740                 745                 750
Thr Ala Ala Thr Ala Gly Cys Thr Ala Cys Thr Thr Ala Gly Ala Cys
        755                 760                 765
Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Thr Gly Thr Gly Cys Ala Thr Ala
    770                 775                 780
Ala Thr Gly Cys Ala Thr Thr Thr Gly Thr Thr Ala Ala Thr Ala Gly
785                 790                 795                 800
Ala Ala Ala Thr Thr Ala Cys Ala Cys Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala
                805                 810                 815
Thr Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Thr Ala Ala Thr Thr Gly Gly Ala
            820                 825                 830
Ala Ala Ala Cys Cys Cys Ala Thr Gly Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala
        835                 840                 845
Gly Gly Thr Gly Ala Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala Cys
    850                 855                 860
Cys Thr Cys Gly Ala Gly
865                 870
<210> 9
<211> 302
<212> PRT
<213> 人工合成(LukD蛋白)
<400> 9
Met Ala Gln His Ile Thr Pro Val Ser Glu Lys Lys Val Asp Asp Lys
1               5                   10                  15
Ile Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ser Asp Asn Asp Lys Leu Asn
            20                  25                  30
Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp
        35                  40                  45
Lys Asp Thr Leu Val Leu Lys Ala Ala Gly Asn Ile Asn Ser Gly Tyr
    50                  55                  60
Lys Lys Pro Asn Pro Lys Asp Tyr Asn Tyr Ser Gln Phe Tyr Trp Gly
65                  70                  75                  80
Gly Lys Tyr Asn Val Ser Val Ser Ser Glu Ser Asn Asp Ala Val Asn
                85                  90                  95
Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln
            100                 105                 110
Gln Thr Leu Gly Tyr Ser Tyr Gly Gly Asp Ile Asn Ile Ser Asn Gly
        115                 120                 125
Leu Ser Gly Gly Leu Asn Gly Ser Lys Ser Phe Ser Glu Thr Ile Asn
    130                 135                 140
Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Thr Ile Asp Arg Lys Thr Asn His
145                 150                 155                 160
Lys Ser Ile Gly Trp Gly Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly
                165                 170                 175
Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Tyr Asp Pro Thr Tyr Gly Asn Glu
            180                 185                 190
Leu Phe Leu Gly Gly Arg Gln Ser Ser Ser Asn Ala Gly Gln Asn Phe
        195                 200                 205
Leu Pro Thr His Gln Met Pro Leu Leu Ala Arg Gly Asn Phe Asn Pro
    210                 215                 220
Glu Phe Ile Ser Val Leu Ser His Lys Gln Asn Asp Thr Lys Lys Ser
225                 230                 235                 240
Lys Ile Lys Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Arg Tyr Thr Asn Gln
                245                 250                 255
Trp Asn Arg Leu His Trp Val Gly Asn Asn Tyr Lys Asn Gln Asn Thr
            260                 265                 270
Val Thr Phe Thr Ser Thr Tyr Glu Val Asp Trp Gln Asn His Thr Val
        275                 280                 285
Lys Leu Ile Gly Thr Asp Ser Lys Glu Thr Asn Pro Gly Val
    290                 295                 300
<210> 10
<211> 915
<212> PRT
<213> 人工合成(融合His标签的LukD蛋白)
<400> 10
Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala
1               5                   10                  15
Thr Cys Ala Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala
            20                  25                  30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys
        35                  40                  45
Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys Ala
    50                  55                  60
Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Cys
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ala Cys Ala Ala Cys Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys Thr Gly
                85                  90                  95
Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys
            100                 105                 110
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Thr
        115                 120                 125
Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Thr Ala Cys
    130                 135                 140
Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly
145                 150                 155                 160
Thr Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly
                165                 170                 175
Thr Ala Ala Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Thr
            180                 185                 190
Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys
        195                 200                 205
Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala
    210                 215                 220
Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly
225                 230                 235                 240
Gly Gly Thr Gly Gly Thr Ala Ala Ala Thr Ala Cys Ala Ala Cys Gly
                245                 250                 255
Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Thr Thr Cys Thr Thr Cys Thr Gly Ala
            260                 265                 270
Ala Thr Cys Thr Ala Ala Cys Gly Ala Cys Gly Cys Thr Gly Thr Thr
        275                 280                 285
Ala Ala Cys Gly Thr Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly
    290                 295                 300
Cys Thr Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala
305                 310                 315                 320
Cys Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Ala Gly Gly Thr Thr
                325                 330                 335
Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr
            340                 345                 350
Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Ala
        355                 360                 365
Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys
    370                 375                 380
Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys
385                 390                 395                 400
Thr Gly Ala Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Cys
                405                 410                 415
Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys
            420                 425                 430
Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr
        435                 440                 445
Cys Thr Thr Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Thr
    450                 455                 460
Cys Gly Ala Cys Cys Gly Thr Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Ala Cys
465                 470                 475                 480
Cys Ala Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Ala Thr Cys Gly Gly Thr Thr
                485                 490                 495
Gly Gly Gly Gly Thr Gly Thr Thr Gly Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala
            500                 505                 510
Cys Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys
        515                 520                 525
Gly Gly Thr Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys Gly
    530                 535                 540
Gly Thr Cys Gly Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Cys Gly Ala
545                 550                 555                 560
Cys Cys Cys Gly Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys
                565                 570                 575
Gly Ala Ala Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Gly
            580                 585                 590
Gly Thr Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys
        595                 600                 605
Thr Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys
    610                 615                 620
Thr Thr Cys Cys Thr Gly Cys Cys Gly Ala Cys Cys Cys Ala Cys Cys
625                 630                 635                 640
Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Cys
                645                 650                 655
Thr Cys Gly Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys
            660                 665                 670
Cys Cys Gly Gly Ala Ala Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Gly
        675                 680                 685
Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Ala Cys Ala Ala Ala Cys Ala
    690                 695                 700
Gly Ala Ala Cys Gly Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala
705                 710                 715                 720
Thr Cys Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala Ala Gly Thr Thr Ala
                725                 730                 735
Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala Thr
            740                 745                 750
Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Thr Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys
        755                 760                 765
Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys Gly Thr Cys Thr Gly Cys
    770                 775                 780
Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Ala Ala
785                 790                 795                 800
Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys
                805                 810                 815
Ala Cys Cys Gly Thr Thr Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys Thr
            820                 825                 830
Cys Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala
        835                 840                 845
Cys Thr Gly Gly Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Cys Cys
    850                 855                 860
Gly Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Gly Gly Thr Ala
865                 870                 875                 880
Cys Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Cys
                885                 890                 895
Cys Ala Ala Cys Cys Cys Gly Gly Gly Thr Gly Thr Thr Cys Thr Cys
            900                 905                 910
Gly Ala Gly
        915
<210> 11
<211> 302
<212> PRT
<213> 人工合成(LukF蛋白)
<400> 11
Met Ala Gln His Ile Thr Pro Val Ser Glu Lys Lys Val Asp Asp Lys
1               5                   10                  15
Ile Thr Leu Tyr Lys Thr Thr Ala Thr Ser Asp Ser Asp Lys Leu Lys
            20                  25                  30
Ile Ser Gln Ile Leu Thr Phe Asn Phe Ile Lys Asp Lys Ser Tyr Asp
        35                  40                  45
Lys Asp Thr Leu Ile Leu Lys Ala Ala Gly Asn Ile Tyr Ser Gly Tyr
    50                  55                  60
Thr Lys Pro Asn Pro Lys Asp Thr Ile Ser Ser Gln Phe Tyr Trp Gly
65                  70                  75                  80
Ser Lys Tyr Asn Ile Ser Ile Asn Ser Asp Ser Asn Asp Ser Val Asn
                85                  90                  95
Val Val Asp Tyr Ala Pro Lys Asn Gln Asn Glu Glu Phe Gln Val Gln
            100                 105                 110
Gln Thr Val Gly Tyr Ser Tyr Gly Gly Asp Ile Asn Ile Ser Asn Gly
        115                 120                 125
Leu Ser Gly Gly Gly Asn Gly Ser Lys Ser Phe Ser Glu Thr Ile Asn
    130                 135                 140
Tyr Lys Gln Glu Ser Tyr Arg Thr Ser Leu Asp Lys Arg Thr Asn Phe
145                 150                 155                 160
Lys Lys Ile Gly Trp Asp Val Glu Ala His Lys Ile Met Asn Asn Gly
                165                 170                 175
Trp Gly Pro Tyr Gly Arg Asp Ser Tyr His Ser Thr Tyr Gly Asn Glu
            180                 185                 190
Met Phe Leu Gly Ser Arg Gln Ser Asn Leu Asn Ala Gly Gln Asn Phe
        195                 200                 205
Leu Glu Tyr His Lys Met Pro Val Leu Ser Arg Gly Asn Phe Asn Pro
    210                 215                 220
Glu Phe Ile Gly Val Leu Ser Arg Lys Gln Asn Ala Ala Lys Lys Ser
225                 230                 235                 240
Lys Ile Thr Val Thr Tyr Gln Arg Glu Met Asp Arg Tyr Thr Asn Phe
                245                 250                 255
Trp Asn Gln Leu His Trp Ile Gly Asn Asn Tyr Lys Asp Glu Asn Arg
            260                 265                 270
Ala Thr His Thr Ser Ile Tyr Glu Val Asp Trp Glu Asn His Thr Val
        275                 280                 285
Lys Leu Ile Asp Thr Gln Ser Lys Glu Lys Asn Pro Met Ser
    290                 295                 300
<210> 12
<211> 915
<212> PRT
<213> 人工合成(融合His标签的LukF蛋白)
<400> 12
Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Cys Thr Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala
1               5                   10                  15
Thr Cys Ala Cys Cys Cys Cys Gly Gly Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala
            20                  25                  30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Cys Gly Ala Cys
        35                  40                  45
Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Thr Ala Cys Ala
    50                  55                  60
Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Thr Ala Cys Cys Thr Cys
65                  70                  75                  80
Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys Thr Gly
                85                  90                  95
Ala Ala Ala Ala Thr Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys
            100                 105                 110
Thr Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Thr
        115                 120                 125
Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Ala Ala Thr Cys Thr Thr Ala Cys
    130                 135                 140
Gly Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala
145                 150                 155                 160
Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly
                165                 170                 175
Thr Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Thr Cys Thr Gly Gly Thr
            180                 185                 190
Thr Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Ala Cys Cys Gly Ala Ala Cys Cys
        195                 200                 205
Cys Gly Ala Ala Ala Gly Ala Cys Ala Cys Cys Ala Thr Cys Thr Cys
    210                 215                 220
Thr Thr Cys Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Thr Ala Cys Thr Gly Gly
225                 230                 235                 240
Gly Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Ala Cys Ala Ala Cys Ala
                245                 250                 255
Thr Cys Thr Cys Thr Ala Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Thr Gly Ala
            260                 265                 270
Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr Gly Thr Thr
        275                 280                 285
Ala Ala Cys Gly Thr Thr Gly Thr Thr Gly Ala Cys Thr Ala Cys Gly
    290                 295                 300
Cys Thr Cys Cys Gly Ala Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Ala
305                 310                 315                 320
Cys Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Ala Gly Gly Thr Thr
                325                 330                 335
Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Cys Cys Gly Thr Thr Gly Gly Thr Thr
            340                 345                 350
Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Cys Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly Ala
        355                 360                 365
Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Cys Thr Ala Ala Cys
    370                 375                 380
Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Gly Thr Gly
385                 390                 395                 400
Gly Thr Ala Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Ala Thr Cys
                405                 410                 415
Thr Thr Thr Cys Thr Cys Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Ala Thr Cys
            420                 425                 430
Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr
        435                 440                 445
Cys Thr Thr Ala Cys Cys Gly Thr Ala Cys Cys Thr Cys Thr Cys Thr
    450                 455                 460
Gly Gly Ala Cys Ala Ala Ala Cys Gly Thr Ala Cys Cys Ala Ala Cys
465                 470                 475                 480
Thr Thr Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Thr Cys Gly Gly Thr Thr
                485                 490                 495
Gly Gly Gly Ala Cys Gly Thr Thr Gly Ala Ala Gly Cys Thr Cys Ala
            500                 505                 510
Cys Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Ala Cys
        515                 520                 525
Gly Gly Thr Thr Gly Gly Gly Gly Thr Cys Cys Gly Thr Ala Cys Gly
    530                 535                 540
Gly Thr Cys Gly Thr Gly Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Cys Cys Ala
545                 550                 555                 560
Cys Thr Cys Thr Ala Cys Cys Thr Ala Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys
                565                 570                 575
Gly Ala Ala Ala Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Gly Thr Thr
            580                 585                 590
Cys Thr Cys Gly Thr Cys Ala Gly Thr Cys Thr Ala Ala Cys Cys Thr
        595                 600                 605
Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Ala Cys
    610                 615                 620
Thr Thr Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Thr Ala Cys Cys Ala Cys Ala
625                 630                 635                 640
Ala Ala Ala Thr Gly Cys Cys Gly Gly Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys
                645                 650                 655
Thr Cys Gly Thr Gly Gly Thr Ala Ala Cys Thr Thr Cys Ala Ala Cys
            660                 665                 670
Cys Cys Gly Gly Ala Ala Thr Thr Cys Ala Thr Cys Gly Gly Thr Gly
        675                 680                 685
Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Cys Gly Thr Ala Ala Ala Cys Ala
    690                 695                 700
Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Cys Thr Ala Ala Ala Ala Ala Ala
705                 710                 715                 720
Thr Cys Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Cys Cys Gly Thr Thr Ala
                725                 730                 735
Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Cys Gly Thr Gly Ala Ala Ala Thr
            740                 745                 750
Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Thr Ala Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys
        755                 760                 765
Thr Thr Cys Thr Gly Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Cys
    770                 775                 780
Ala Cys Thr Gly Gly Ala Thr Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys Ala Ala
785                 790                 795                 800
Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Gly Ala Cys Gly Ala Ala Ala Ala Cys
                805                 810                 815
Cys Gly Thr Gly Cys Thr Ala Cys Cys Cys Ala Cys Ala Cys Cys Thr
            820                 825                 830
Cys Thr Ala Thr Cys Thr Ala Cys Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala
        835                 840                 845
Cys Thr Gly Gly Gly Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala Cys Cys
    850                 855                 860
Gly Thr Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Thr Cys Gly Ala Cys Ala
865                 870                 875                 880
Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala
                885                 890                 895
Ala Ala Ala Cys Cys Cys Gly Ala Thr Gly Thr Cys Thr Cys Thr Cys
            900                 905                 910
Gly Ala Gly
        915

Claims (8)

1.一种特异性结合金黄色葡萄球菌毒素抗体,所述抗体能够特异性的结合金黄色葡萄球菌γ-溶血素HlgB组分,并能与该溶血素其它溶血素组分产生交叉反应;
所述抗体包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL);
其中,所述重链可变区(VH)包含以下的CDR组合:VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3;
所述轻链可变区(VL)包含以下的CDR组合:VL-CDR1、VL-CDR2和VL-CDR3;
所述重链可变区为:
EVQLQQSGAELVKPGASVKISCKASGYTFTDYNMDWVKQSHGKSPEWIGDINPNYDSTRYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDTAVYYCARDGSSAMDYWGQGTSVTVSS(SEQ ID NO: 1),
VH-CDR1氨基酸:GYTFTDYN,
VH-CDR2氨基酸:INPNYDST,
VH-CDR3氨基酸:ARDGSSAMDY,
所述轻链可变区为:
DIVMTQSPSSLSVSAGEKVTMTCKSSQSLLNSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDHRYPLTFGAGTKLELK(SEQ ID NO: 2),
VL-CDR1氨基酸:QSLLNSGNQKNY,
VL-CDR2氨基酸:GAS,
VL-CDR3氨基酸:QNDHRYPLT。
2.根据权利要求1所述的抗体,其特征在于:所述抗体为单克隆抗体、单链抗体、单域抗体、完全或部分人源化抗体或者嵌合抗体中的任意一种。
3.根据权利要求1所述的抗体,其特征在于:所述抗体的重链恒定区为IgG1亚型,轻链恒定区为κ型。
4.一种缀合物,所述缀合物包含权利要求1至3中任一项所述的抗体。
5.一种核酸分子,其编码如权利要求1至3中任一项所述抗体。
6.一种载体,其包含如权利要求5所述的核酸分子;
所述载体为真核表达载体、原核表达载体、人工染色体或噬菌体载体。
7.一种药物组合物,其包含如权利要求1至3中任一项所述的抗体,或者包含如权利要求4所述的缀合物,或者包含如权利要求5所述的核酸分子,或者包含如权利要求6所述的载体;
以及任选的药学上可接受的辅料。
8.权利要求1至3中任一项所述的抗体,或者权利要求4所述的缀合物,或者权利要求5所述的核酸分子,或者权利要求6所述的载体,或者权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防或治疗金黄色葡萄球菌感染的药物中的用途。
CN201811471780.2A 2018-12-04 2018-12-04 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途 Active CN109705213B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811471780.2A CN109705213B (zh) 2018-12-04 2018-12-04 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811471780.2A CN109705213B (zh) 2018-12-04 2018-12-04 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109705213A CN109705213A (zh) 2019-05-03
CN109705213B true CN109705213B (zh) 2023-04-18

Family

ID=66254576

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811471780.2A Active CN109705213B (zh) 2018-12-04 2018-12-04 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109705213B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110437334B (zh) * 2019-07-26 2020-12-01 西南医科大学 全人源抗金黄色葡萄球菌α-溶血素重组抗体
CN112538112B (zh) * 2019-09-20 2023-10-27 迈威(上海)生物科技股份有限公司 抗α-溶血素的抗体及其应用
CN110498854B (zh) * 2019-09-28 2021-01-29 中国人民解放军陆军军医大学 一种抗金黄色葡萄球菌肠毒素b的抗体及其应用
WO2022148480A1 (zh) * 2021-01-11 2022-07-14 星济生物(苏州)有限公司 靶向金黄色葡萄球菌α-毒素的抗原结合蛋白及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015109012A1 (en) * 2014-01-14 2015-07-23 Integrated Biotherapeutics, Inc. Targeting immunological functions to the site of bacterial infections using cell wall targeting domains of bacteriolysins
CN106456763A (zh) * 2014-06-03 2017-02-22 埃克斯生物科技公司 用于治疗和预防金黄色葡萄球菌感染的组合物和方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015109012A1 (en) * 2014-01-14 2015-07-23 Integrated Biotherapeutics, Inc. Targeting immunological functions to the site of bacterial infections using cell wall targeting domains of bacteriolysins
CN106456763A (zh) * 2014-06-03 2017-02-22 埃克斯生物科技公司 用于治疗和预防金黄色葡萄球菌感染的组合物和方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
陈海珍 ; 胡忠义 ; 李连青 ; 杨华 ; .噬菌体展示技术在病原体血清学检测中的应用研究进展.中国预防医学杂志.2013,(02),全文. *
陈艳,郝飞,郭庆,谭国珍,贾虹,杨雪源,毕志刚,杨波,刁庆春,易东,赵辨.特应性皮炎和湿疹患者血清金黄色葡萄球菌肠毒素B特异性抗体的检测及其意义.中华皮肤科杂志.2005,(06),全文. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN109705213A (zh) 2019-05-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109705213B (zh) 抗金黄色葡萄球菌毒素抗体及其用途
US10087243B2 (en) Compositions and methods for phagocyte delivery of anti-staphylococcal agents
CN103906535B (zh) 与葡萄球菌蛋白a的抗体相关的组合物和方法
CN109384844B (zh) 一种抗金黄色葡萄球菌α溶血素单克隆抗体及应用
CN114729033B (zh) 抗α-溶血素的抗体及其应用
Hussack et al. Neutralization of Clostridium difficile toxin B with VHH-Fc fusions targeting the delivery and CROPs domains
Darvish et al. Development of protective agent against Hottentotta saulcyi venom using camelid single-domain antibody
WO2013087874A1 (de) Antikörper gegen das cdt-toxin von c. difficile
CN109651510B (zh) 抗Eno1抗体及其用途
CN113248610B (zh) 白细胞介素2结合分子、其衍生物、试剂盒及其生产方法和用途
WO2014061783A1 (ja) クロストリジウム・ディフィシルの毒素に特異的なヒト抗体もしくはその抗原結合性断片
Moricoli et al. Blocking monocyte transmigration in in vitro system by a human antibody scFv anti-CD99. Efficient large scale purification from periplasmic inclusion bodies in E. coli expression system
Stone et al. A novel pentamer versus pentamer approach to generating neutralizers of verotoxin 1
US10981979B2 (en) Human monoclonal antibodies to Staphylococcus aureus lukab toxin
CN113698487B (zh) 抗人ace2单克隆抗体及其应用
CN114853896B (zh) 一种抗糖基转移酶a亚单位的纳米抗体及其应用
CN114591423B (zh) 新冠病毒n蛋白的特异性抗体及其制备方法与应用
CN115960217A (zh) 一种新型冠状病毒中和活性纳米抗体
CN113698478A (zh) 抗α-溶血素的抗体及其稳定制剂
CA3076254A1 (en) Clostridium difficile-specific antibodies and uses thereof
TW202436360A (zh) 抗ang2抗體及其製備方法和應用
KR20240048555A (ko) 항 ang2 항체 및 그 제조방법과 응용
WO2023134716A1 (zh) 一种结合b7h3和nkp30的双特异性抗体及其应用
CN114621354A (zh) Fab-白蛋白结合肽融合蛋白及其制备方法和应用
CN116102659A (zh) 一种抗il-17/vegf双功能融合蛋白及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20191014

Address after: 201203 P.O. Box 203-32, No. 470, Chunxiao Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone

Applicant after: Zou Zui

Address before: 201203 Shanghai City, Pudong New Area China (Shanghai) free trade zone fanchun Road No. 400 Building 1 layer 3

Applicant before: SHANGHAI JIAPEI PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.

SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20230303

Address after: 6th Floor, Emergency Department, Changzheng Hospital, No. 415, Fengyang Road, Huangpu District, Shanghai, 200003

Applicant after: SHANGHAI CHANGZHENG Hospital

Address before: Box 203-32, 470 Chunxiao Road, China (Shanghai) Pilot Free Trade Zone, March 2012

Applicant before: Zou Zui

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant