CN109517037B - 具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明一方面提供一种具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，为Ser Ala Ile Leu Ala Ile Thr Ala Val Ile Ala Val Phe Ile Val Ile Phe Arg Tyr；其氨基酸序列或者是SEQ ID NO:1的功能等价物，所述功能等价物为SEQ ID NO:1的氨基端或羧基端修饰序列、D‑氨基酸取代L‑氨基酸的序列、氨基酸的缺失或增加的序列。本发明还提供上述多肽在制备抑制白斑综合征病毒药物方面的应用。本发明获得的多肽具有分子量小，易合成，结构简单，无残留，无副作用，对白斑综合征病毒入侵对虾具有抑制作用，尤其适用于病毒暴发早期对对虾的保护，在环境友好型白斑综合征病毒防治药物开发方面具有重要价值。
Description
技术领域
本发明涉及具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽，属于生物化学与生物技术领域。
背景技术
白斑综合征病毒(white spot syndrome virus，WSSV)是引起对虾大规模死亡的主要病原微生物，严重威胁对虾养殖业的发展。为预防和控制WSSV感染，科研人员付出了艰苦努力，迄今仍缺乏有效的防治方法，目前主要通过选育抗病对虾品种、加强疫病监测、控制放养密度及定期消毒等措施进行预防，白斑综合征防治依然任重道远。
近年来研究发现，对虾也存在类似脊椎动物的特异性免疫现象，人们开始了对虾白斑综合征的免疫预防研究。重组Vp28等包膜蛋白制成的疫苗口服或注射免疫，能表现出不同程度的保护作用。这是一种极有前景的WSSV防控技术，目前尚处于实验室研究阶段，如何进一步提高疫苗的效果，真正走向应用，还有赖于对虾类免疫机制的深入研究。
WSSV防治研究的另一个重要方向,是病毒致病机理的研究，其中入侵机制是研究的热点。入侵宿主细胞是病毒感染的第一步，如果能够阻止这一过程，病毒的感染就会被抑制或者终止。
病毒与宿主细胞表面受体的结合是其入侵的基本前提。包膜病毒的入侵主要依靠包膜与宿主细胞膜的融合。包膜蛋白在这一过程中发挥关键作用，通过识别和结合细胞膜上相应的受体促进融合。许多病毒依靠一种或两种蛋白就可进入宿主细胞，作为一种大型包膜病毒，WSSV有30多种包膜蛋白，其中VP28是主要的包膜蛋白之一。研究表明，对虾细胞膜上存在多种WSSV包膜蛋白受体，包膜蛋白与受体间存在着复杂的相互作用，表现在一种受体可与多种包膜蛋白相互作用，一种包膜蛋白可与多种受体相互作用，且包膜蛋白之间、包膜蛋白自身、包膜蛋白与非包膜蛋白之间、受体之间都可相互作用。
越来越多的证据表明，WSSV包膜蛋白可以通过不同的组合形成各种蛋白复合体，蛋白复合体是蛋白质执行功能的主要形式，因此推测，WSSV包膜蛋白可能通过形成复合体介导病毒的入侵。
鉴于包膜蛋白在病毒入侵过程中的关键作用，因此也成为病毒性疾病防控研究的常用靶点，通过抑制包膜蛋白的作用从而阻止病毒的入侵。研究表明，来自包膜蛋白跨膜区的多肽往往是天然的病毒入侵抑制剂。如HIV-1抑制药物恩夫韦肽Enfuvirtide，就是根据来自HIV-1包膜蛋白gb41的多肽开发的。此外，流感病毒、甲型流感病毒、登革热病毒、裂谷热病毒都从其包膜蛋白中筛选到了具有入侵抑制作用的多肽。这些多肽没有细胞毒性，作用方式表现出序列特异性，可作为先导物进行病毒抑制药物的设计。
由于目前缺乏有效的WSSV控制药物，化学消毒往往存在残留等问题，本发明提供的多肽可为WSSV防治药物的开发提供一种新的思路。
发明内容
本发明的目的在于解决ESSV控制药物缺乏，化学消毒存在残留的问题，提供一种具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽，这种多肽用于WSSV抑制药物的开发，具有无残留、无副作用的优点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
本发明一方面提供一种具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，为Ser Ala Ile Leu Ala Ile Thr Ala Val Ile Ala Val Phe Ile ValIle Phe Arg Tyr；其氨基酸序列或者是SEQ ID NO:1的功能等价物，所述功能等价物为SEQID NO:1的氨基端或羧基端修饰序列、D-氨基酸取代L-氨基酸的序列、氨基酸的缺失或增加的序列。
本发明还提供上述多肽在制备抑制白斑综合征病毒药物方面的应用。
进一步地，上述药物为作用于对虾的药物。
上述具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽的筛选方法为：
(1)根据包膜蛋白在病毒入侵中的作用，从WSSV的20多种包膜蛋白中，选择主要包膜蛋白VP28作为靶标进行多肽的筛选；
(2)提交VP28的氨基酸序列至MEPx服务器，利用Hydropathy功能模块筛选VP28中WWIHS值高的区域，即疏水性较高的区域，该区域多肽为候选多肽；
(3)化学合成候选多肽，合成后经HPLC纯化，及质谱分析鉴定；
(4)将多肽用DMSO溶解后注射对虾，同时注射WSSV病毒悬液，所用对虾为凡纳滨对虾，对照组只注射WSSV病毒悬液，比较两组对虾的存活情况，从而检测多肽对攻毒对虾的保护作用。
(5)最终筛选到的具有WSSV抑制作用的多肽序列为：Ser Ala Ile Leu Ala IleThr Ala Val Ile Ala Val Phe Ile Val Ile Phe Arg Tyr。
本发明获得的多肽具有分子量小，易合成，结构简单，无残留，无副作用，对白斑综合征病毒入侵对虾具有抑制作用，尤其适用于病毒暴发早期对对虾的保护，在环境友好型白斑综合征病毒防治药物开发方面具有重要价值。
附图说明
图1为实施例1合成多肽的质谱图
图2为两组凡纳滨对虾的存活数量和存活时间图。
具体实施方式
下面结合具体实施例及附图对本发明做进一步详细说明。
实施例1
(1)多肽合成：利用MPEx服务器提供的Hydropathy分析，获得一条具有潜在抑制作用的多肽：Ser Ala Ile Leu Ala Ile Thr Ala Val Ile Ala Val Phe Ile Val Ile PheArg Tyr；委托南京杰肽生物科技有限公司利用固相合成法进行化学合成。氨基、羧基两端没有进行修饰。合成后经HPLC纯化，纯度达95.86％，并经过质谱分析鉴定，结果如图1所示。
(2)对照实验：分别设攻毒对照组、攻毒实验组，每组10只成虾，对虾品种为凡纳滨对虾；将合成的多肽溶于二甲基亚砜(DMSO)，浓度为0.5mg/mL；攻毒对照组每只虾分别注射WSSV病毒悬液40微升，攻毒实验组在注射同样病毒量的同时，注射多肽40微升；每天统计对虾存活的数量。结果如图2所示。
多肽具有明显的保护作用，特别是在感染病毒(也就是注射病毒)的最初24小时内保护效果明显，对照组4天内对虾全部死亡，而实验组仍有对虾继续存活，说明多肽可以有效阻止病毒入侵细胞。一旦病毒入侵细胞，多肽无法发挥保护作用。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 青岛科技大学
<120> 具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽及其应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 19
<212> PRT
<213> 白斑综合征病毒(white spot syndrome virus)
<400> 1
Ser Ala Ile Leu Ala Ile Thr Ala Val Ile Ala Val Phe Ile Val Ile
1 5 10 15
Phe Arg Tyr
Claims (3)
1.一种具有白斑综合征病毒抑制作用的多肽，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。
2.根据权利要求1所述的多肽在制备抑制白斑综合征病毒药物方面的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：将所述的药物为作用于对虾的药物。
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Computational identification of self-inhibitory peptides from white spot syndrome virus envelope protein VP28;Yongzhong Lu et al.;《Aquaculture Reports》;20190415;第14卷;第1~7页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109517037A (zh) | 2019-03-26 |
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