CN109485595B

CN109485595B - 亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

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Publication number: CN109485595B
Application number: CN201811055424.2A
Authority: CN
Inventors: 陆标; 刘�东; 沈晓冬; 陈磊; 刘苏星; 张儒民; 贺峰; 陶维康
Original assignee: Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shandong Shengdi Pharmaceutical Co ltd; Jiangsu Hengrui Medicine Co Ltd; Shanghai Hengrui Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-09-12
Filing date: 2018-09-11
Publication date: 2022-05-27
Anticipated expiration: 2038-09-11
Also published as: CN109485595A

Abstract

本发明涉及亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。特别地，本发明涉及通式(I)所示的亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，本发明还涉及其作为ROR激动剂的用途以及其用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的用途，其中通式(I)中的各取代基与说明书中的定义相同。

Description

亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用

技术领域

本发明属于医药领域，涉及亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用。特别地，本发明涉及通式(I)所示的亲水性基团取代的吲哚甲酰胺类衍生物、其制备方法及含有该衍生物的药物组合物，本发明还涉及其作为ROR激动剂以及其用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。

背景技术

维甲酸相关孤儿核受体(Retinoid-related orphan receptors,ROR)是核受体家族的成员之一，也是一类配体依赖的转录因子，它能够调控多种生理和生化过程，包括生殖发育、新陈代谢、免疫系统调节等(Mech Dev.1998Jan,70(1-2:147-53； EMBO J.1998Jul15,17(14):3867-77)。ROR家族包括三种类型RORα、RORβ和 RORγ(Curr Drug TargetsInflamm Allergy.2004Dec,3(4):395-412),其中RORγ可以在许多组织中表达，包括胸腺、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌等(Immunity.1998Dec, 9(6):797-806.)。

RORγ有两种亚型：RORγ1和RORγt(RORγ2)，其中RORγ1在许多组织中表达，如：胸腺、肌肉、肾脏和肝脏中表达，而RORγt则只在免疫细胞内表达(Eur JImmunol.1999Dec,29(12):4072-80)。已有文献报道，RORγt能够调节在免疫细胞分化的过程中T细胞的存活，并能激活和促进CD4+、CD8+的细胞分化成辅助 T细胞17(Th17)和细胞毒性T细胞(Tc17)(J Immunol.2014Mar 15, 192(6):2564-75)，其中TH17和Tc17细胞是一类效应细胞，通过分泌白介素17 (IL-17)和其他炎症因子(如IL-21)促进炎症反应、增强获得性免疫反应和自身免疫应答。此外，现有研究证明，通过将Th17和Tc17细胞移植到荷瘤小鼠中，可以明显抑制移植瘤的生长(J Immunol.2010Apr 15,184(8):4215-27)。Th17还可以招募细胞毒性CD8+T细胞和自然杀伤细胞进入肿瘤微环境，从而杀死肿瘤细胞，达到抗肿瘤的目的(Blood.2009Aug 6,114(6):1141-9；Clin Cancer Res.2008Jun 1,14(11):3254-61)。因此，激活RORγt，有可能成为新的抗肿瘤疗法。

目前，已有医药公司开发出RORγt的激动剂，比如Lycera Corp.公司开发的小分子药物LYC-54143。临床前研究表明，LYC-54143可通过两条不同的通路抑制肿瘤生长，表现出优越的抗癌活性。首先，LYC-54143激活RORγt后可通过传统途径调节Th17和Tc17细胞的分化，促进IL-17等其他细胞因子的表达，提高T细胞活性。另外，激活的RORγt可以调节免疫系统中的多种基因表达，抑制细胞检查受体 PD-1的表达，从而降低免疫抑制，提高抗癌活性(Oncoimmunology.2016Nov 4, 5(12):e1254854；ACS Chem Biol.2016 Apr 15,11(4):1012-8)。虽然该小分子激动目前已经进入临床II期，但是有关该靶点激动剂的药物仍然非常少，并且无上市药物出现，已公开的专利有如WO2015171558、WO2008152260、WO2007068580、 WO2007068579、WO2005056516、WO2005056510、WO2005066116、WO00228810，仍需要继续开发更高效的新的RORγt激动剂，以期为患者提供新的有效的抗癌药物。

本发明人设计具有通式(I)所示结构的吲哚甲酰胺类化合物，吲哚环氮原子上的取代基为亲水性基团，具有较好的溶剂度，同时在环A的邻位有较大的取代基 (例如：三氟甲基)，表现出显著的激动ROR的作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通式(I)所示的化合物：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐，

其中：

为双键或单键；

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自C、CH、CH₂和N；

环A选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基；

环B为芳基或杂芳基；

L¹为亚烷基；

R¹相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基；

R²为卤代烷基；

R³选自氢原子、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、羟烷基、卤素、氰基、氨基、硝基、羟基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述的烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选被选自羟基、卤素、烷基和氨基中的一个或多个取代基所取代；

R⁴相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁵选自氢原子、烷基、卤代烷基、氨基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁶相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基、羟烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；

R⁷选自羟基、氨基、氰基、烷氧基、卤代烷氧基、-OR¹⁰、-NR¹¹R¹²和 -C(O)NR¹¹R¹²；

R⁸和R⁹相同或不同，且各自独立地选自氢原子、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、氰基、氨基、硝基、羟基和羟烷基；

R¹⁰选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟烷基、环烷基和杂环基；

R¹¹和R¹²相同或不同，且各自独立地选自氢原子、烷基、卤代烷基、羟基和羟烷基；

n为0、1、2、3或4；

s为0、1、2或3；且

t为0、1、2或3。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中环A选自苯基、吡啶基、咪唑基、吡唑基、哌啶基和吗啉基；且环B为苯基或吡啶基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中

选自：

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(II)所示的化合物：

其中：

W和G相同或不同，各自独立的为CH或N；

R¹、R³、R⁵～R⁷、L¹、n和t如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(III) 所示的化合物：

其中：

W和G相同或不同，各自独立的为CH或N；

p为1至6的整数；

R¹、R³、R⁵、R⁶、R¹⁰、n和t如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物为通式(IV) 所示的化合物：

其中：

p为1至6的整数；

R¹、R³、R⁵、R⁶、R¹⁰、n和t如通式(I)中所定义。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R¹为氢原子、卤素和烷基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R³为氢原子、烷基或羟烷基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R⁵为烷基，优选为乙基。

在本发明一个优选的实施方案中，所述的通式(I)所示的化合物，其中R⁶为氢原子或卤素。

典型的通式(I)的化合物，包括但不限于：

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐。

本发明的另一方面涉及一种通式(V)所示化合物，其为制备通式(I)化合物的中间体，

或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，

其中：

为双键或单键；

G¹、G²和G³相同或不同，且各自独立地选自C、CH、CH₂和N；

环A选自芳基、杂芳基、环烷基和杂环基；

L¹为亚烷基；

R²为卤代烷基；

n为0、1、2、3或4；且

t为0、1、2或3。

典型的通式(V)的化合物，包括但不限于：

本发明的另一方面涉及一种制备通式(I)化合物的方法，该方法包括：

通式(V)化合物与通式(VI)化合物发生缩合反应，得到通式(I)化合物；

其中：

环A、环B、G¹～G³、R¹～R⁹、L¹、n、s和t如通式(I)中所定义。

本发明的另一方面涉及一种药物组合物，其含有治疗有效剂量的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或可药用的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。本发明还涉及一种制备所述药物组合物的方法，其包括将通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体、或其混合物形式、或其可药用的盐与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂相混合。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备ROR激动剂中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途，特别是作为 ROR激动剂在制备用于预防和/或治疗肿瘤或癌症的药物中的用途。

本发明进一步涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用作药物。

本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其作为ROR激动剂。

本发明还涉及通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式、或其可药用盐，或包含其的药物组合物，其用于预防和/或治疗肿瘤或癌症，特别是作为ROR激动剂用于预防和/或治疗肿瘤或癌症。

本发明所述的肿瘤或癌症为实体瘤和血液瘤，优选选自非霍奇金淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、滑膜肉瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、肺癌、胃癌、直肠癌、胰腺癌、脑癌、皮肤癌、口腔癌、前列腺癌、骨癌、肾癌、卵巢癌、膀胱癌、肝癌、输卵管肿瘤、卵巢瘤、腹膜肿瘤、IV期黑色素瘤、神经胶质瘤、神经胶母细胞瘤、肝细胞癌、乳突肾性瘤、头颈部肿瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和非小细胞肺癌。

本发明还涉及一种治疗预防和/或治疗肿瘤或癌症的方法，其包括向需要其的患者施用治疗有效剂量的作为ROR激动剂的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用盐，或包含其的药物组合物。

含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，造粒剂、崩解剂，粘合剂，和润滑剂，。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。

也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂或其中活性成分与水溶性载体或油溶媒混合的软明胶胶囊提供口服制剂。

水悬浮液含有活性物质和用于混合的适宜制备水悬浮液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，分散剂或湿润剂。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂。

油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油，或矿物油配制而成。油悬浮液可含有增稠剂。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂保存这些组合物。

本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油，或矿物油或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。

本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒或溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。这种装置的实例是Deltec CADD-PLUS.TM.5400型静脉注射泵。

本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在肠胃外可接受的无毒稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用任何调和固定油。此外，脂肪酸也可以制备注射剂。

可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。

如本领域技术人员所熟知的，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用具体化合物的活性、患者的年龄、患者的体重、患者的健康状况、患者的行为、患者的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等；另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物(I)的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。

发明的详细说明

除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、 3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4- 甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3- 二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、 2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、 3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。

术语“亚烷基”指饱和的直链或支链脂肪族烃基，其具有2个从母体烷的相同碳原子或两个不同的碳原子上除去两个氢原子所衍生的残基，其为包含1至20 个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子，更优选含有1至6个碳原子的亚烷基。亚烷基的非限制性实例包括但不限于亚甲基(-CH₂-)、1,1-亚乙基 (-CH(CH₃)-)、1,2-亚乙基(-CH₂CH₂)-、1,1-亚丙基(-CH(CH₂CH₃)-)、1,2-亚丙基 (-CH₂CH(CH₃)-)、1,3-亚丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、1,4-亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)和1,5- 亚丁基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。亚烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。

术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基和环烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基和羧酸酯基。

术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3 至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。

术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：

术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：

术语“桥环烷基”指5至20元，任意两个环共用两个不直接连接的碳原子的全碳多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥环烷基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥环烷基的非限制性实例包括：

所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。

术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20 个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3 至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3 是杂原子；最优选包含3至6个环原子，其中1～2是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选哌啶基、哌嗪基或吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。

术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为3元/6元、4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5 元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：

术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7 至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：

术语“桥杂环基”指5至14元，任意两个环共用两个不直接连接的原子的多环杂环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)_m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环桥杂环基，优选为双环、三环或四环，更有选为双环或三环。桥杂环基的非限制性实例包括：

所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：

等。

杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基和羧酸酯基。

术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：

芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。

术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为 5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、四唑基、吡啶基、噻吩基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更有选吡啶基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：

杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基和羧酸酯基。

术语“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。

术语“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。

术语“羟烷基”指被羟基取代的烷基，其中烷基如上所定义。

术语“羟基”指-OH基团。

术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。

术语“氨基”指-NH₂。

术语“氰基”指-CN。

术语“硝基”指-NO₂。

术语“氧代基”指＝O。

术语“羰基”指C＝O。

术语“羧基”指-C(O)OH。

术语“羧酸酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基、环烷基如上所定义。

术语“酰卤”指含有-C(O)-卤素的基团的化合物。

术语“亲水性基团”指可以溶解或电离到水中的基团，优选为羟基(-OH)、烷氧基、卤代烷氧基、氰基、羧基(-COOH)、酰胺基、氨基(-NH₂)、-OR¹⁰、-NR¹¹R¹²和-C(O)NR¹¹R¹²。

“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。

“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属) 键的碳原子结合时可能是不稳定的。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。

其中R¹⁰～R¹²如通式(I)中所定义。

本发明化合物的合成方法

为了完成本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

方法一

本发明通式(I)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第一步，通式(I-A)化合物、通式(I-B)化合物和双环[2.2.1]-2-庚烯，在催化剂存在下，碱性条件下，发生偶联反应，得到通式(I-C)化合物；

第二步，通式(I-C)化合物和通式(I-E)的化合物在碱性条件下，发生亲核取代反应得到通式(I-D)化合物；

第三步，通式(I-D)化合物在碱性条件下，发生水解反应得到通式(V)的化合物；

第四步，通式(V)化合物和通式(VI)化合物在碱性条件下，在缩合剂存在下，发生缩合反应得到通式(I)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^x为烷基；优选为甲基或乙基；

提供碱性条件的试剂包括有机碱和无机碱类，所述的有机碱类包括但不限于三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、正丁基锂、二异丙基氨基锂、醋酸钾、叔丁醇钠或叔丁醇钾，所述的无机碱类包括但不限于氢化钠、氢氧化钠、磷酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾或碳酸铯。

催化剂包括但不限于二(乙腈)二氯化钯、四-三苯基膦钯、二氯化钯、醋酸钯、 [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、1,1’-双(二苄基磷)二氯二戊铁钯或三(二亚苄基丙酮)二钯，优选为二(乙腈)二氯化钯。

缩合剂包括但不限于1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N,N'-二环己基碳化二亚胺、N,N'-二异丙基碳二酰亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯、1-羟基苯并三唑、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'- 四甲脲六氟磷酸酯、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、2-(7- 氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸盐或六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，优选为1-(3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐。

上述反应优选在溶剂中进行，所用溶剂包括但不限于：醋酸、甲醇、乙醇、甲苯、四氢呋喃、二氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、二甲基亚砜、1,4-二氧六环、水、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。

方法二

本发明通式(II)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第一步，通式(I-A)化合物、通式(II-1)化合物和双环[2.2.1]-2-庚烯，在催化剂存在下，碱性条件下，发生偶联反应，得到通式(II-2)化合物；

第二步，通式(II-2)化合物和通式(I-E)的化合物在碱性条件下，发生亲核取代反应得到通式(II-3)化合物；

第三步，通式(II-3)化合物在碱性条件下，发生水解反应得到通式(II-4)的化合物；

第四步，通式(II-4)化合物和通式(II-5)化合物在碱性条件下，在缩合剂存在下，发生缩合反应得到通式(II)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^x为烷基；优选为甲基或乙基；

G、W、R¹、R³、R⁵～R⁷、L¹、n和t如通式(II)中所定义。

方法三

本发明通式(III)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第二步，通式(II-2)化合物和通式(III-1)的化合物在碱性条件下，发生亲核取代反应得到通式(III-2)化合物；

第三步，通式(III-2)化合物在碱性条件下，发生水解反应得到通式(III-3)的化合物；

第四步，通式(III-3)化合物和通式(II-5)化合物在碱性条件下，在缩合剂存在下，发生缩合反应得到通式(III)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^x为烷基；优选为甲基或乙基；

G、W、R¹、R³、R⁵、R⁶、R¹⁰、p、n和t如通式(III)中所定义。

方法四

本发明通式(IV)所示的化合物或其互变异构体、内消旋体、外消旋体、对映异构体、非对映异构体或其混合物形式，或其可药用的盐的制备方法，包括以下步骤：

第一步，通式(I-A)化合物、通式(IV-1)化合物和双环[2.2.1]-2-庚烯，在催化剂存在下，碱性条件下，发生偶联反应，得到通式(IV-2)化合物；

第二步，通式(IV-2)化合物和通式(III-1)的化合物在碱性条件下，发生亲核取代反应得到通式(IV-3)化合物；

第三步，通式(IV-3)化合物在碱性条件下，发生水解反应得到通式(IV-4)的化合物；

第四步，通式(IV-4)化合物和通式(IV-5)化合物在碱性条件下，在缩合剂存在下，发生缩合反应得到通式(IV)的化合物，

其中：

X为卤素；

R^x为烷基；优选为甲基或乙基；

R¹、R³、R⁵、R⁶、R¹⁰、p、n和t如通式(IV)中所定义。

具体实施方式

以下结合实施例进一步描述本发明，但这些实施例并非限制着本发明的范围。

实施例

化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ) 以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d₆)，氘代氯仿(CDCl₃)，氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定用FINNIGAN LCQAd(ESI)质谱仪(生产商:Thermo,型号：Finnigan LCQadvantage MAX)。

高效液相色谱法(HPLC)分析使用Agilent HPLC 1200DAD、Agilent HPLC 1200VWD和Waters HPLC e2695-2489高压液相色谱仪。

手性HPLC分析测定使用Agilent 1260DAD高效液相色谱仪。

高效液相制备使用Waters 2767、Waters 2767-SQ Detecor2、Shimadzu LC-20AP和Gilson-281制备型色谱仪。

手性制备使用Shimadzu LC-20AP制备型色谱仪。

CombiFlash快速制备仪使用Combiflash Rf200(TELEDYNE ISCO)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法 (TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

硅胶柱色谱法一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

激酶平均抑制率及IC₅₀值的测定用NovoStar酶标仪(德国BMG公司)。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自ABCR GmbH & Co.KG，Acros Organics，Aldrich Chemical Company，韶远化学科技(Accela ChemBio Inc)、达瑞化学品等公司。

实施例中无特殊说明，反应能够均在氩气氛或氮气氛下进行。

氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。

加压氢化反应使用Parr 3916EKX型氢化仪和清蓝QL-500型氢气发生器或 HC2-SS型氢化仪。

氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。

微波反应使用CEM Discover-S 908860型微波反应器。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。

实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。

纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括： A：二氯甲烷和甲醇体系，B：正己烷和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和醋酸等碱性或酸性试剂进行调节。

实施例1

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺1

第一步

(4-氯-2-(三氟甲基)苯基)甲醇1b

将4-氯-2-(三氟甲基)苯甲醛1a(10g，48mmol，采用专利申请“WO2011021492” 公开的方法制备而得)溶于100mL乙醇中，分批加入硼氢化钠(1.83g，48mmol)，搅拌反应2小时。反应液减压浓缩，所得残余物中加入水，用乙酸乙酯萃取，有机相用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物1b(9.5g，产率：95％)。

第二步

1-(溴甲基)-4-氯-2-(三氟甲基)苯1c

将化合物1b(9.5g，45.2mmol)溶于100mL二氯甲烷中，滴加入三溴化磷(24.5 g，90.5mmol)，搅拌反应2小时。反应液中加入水，分离有机相，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，依次用水、饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物1c(10.5g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第三步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯1e

将1H-吲哚-5-甲酸甲酯1d(4.4g，25.8mmol，采用公知的方法“Huaxue Shiji,2015,37(7),585-589,594”制备而得)溶于40mL N,N-二甲基乙酰胺中，加入二(乙腈) 二氯化钯(1.34g，5.16mmol)、双环[2.2.1]-2-庚烯(4.85g，51.6mmol)和碳酸氢钠(4.25 g，51mmol)，再加入粗品化合物1c(7.4g，27mmol)，升温至70℃搅拌反应12 小时。反应液冷却至室温，加入200mL水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，依次用水、饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物1e(8.1g，产率： 87％)。

MS m/z(ESI):368.1[M+1]。

第四步

1-(2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯1g

将化合物1e(3g，1.36mmol)，(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅1f(1.3g，5.4 mmol，采用专利申请“WO2011053821”公开的方法制备而得)和碳酸铯(886mg，2.72 mmol)加入到5mL N,N-二甲基甲酰胺中，升温至100℃微波搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物1g(4.4g，产率：100％)。

MS m/z(ESI):526.1[M+1]。

第五步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯1h

将化合物1g(4.4g，8.4mmol)溶于40mL四氢呋喃中，滴加入1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(9.2mL，9.2mmol)，搅拌反应1小时。反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物1h(2.3g，产率：67％)。

第六步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-羧酸1i

将化合物1h(2g，4.85mmol)溶于14mL甲醇和四氢呋喃(V/V＝5:2)的混合溶剂中，加入5mL 4M的氢氧化钠溶液，升温至60℃搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物中加入水，滴加浓盐酸至pH为4，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物1i(1.8g)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):398.0[M+1]。

第七步

将粗品化合物1i(1.8g，4.5mmol)和(4-(乙磺酰基)苯基)甲胺1j(1.35g，6.8mmol，采用专利申请“WO2015017335”公开的方法制备而得)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.3g，6.8mmol)， 1-羟基苯并三唑(920mg，6.8mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.9g，22.6mmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入水中，用二氯甲烷和甲醇的混合溶剂(V/V＝10:1)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题化合物 1(2.2g，产率：84％)。

MS m/z(ESI):579.8[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(t,1H),8.06(s,1H),7.86-7.83(m,3H), 7.68-7.67(m,2H),7.58-7.56(d,2H),7.51-7.49(d,1H),7.27-7.29(d,1H),5.99(s,1H), 4.95(t,1H),4.58(d,2H),4.39(s,2H),4.18(t,2H),3.63(q,2H),3.25(q,2H),1.08(t, 3H)。

实施例2

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-6-氟-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺2

第一步

6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2b

将6-氟-1-(三异丙基硅基)-1H-吲哚-5-羧酸2a(300mg，0.89mmol，采用公知的方法“European Journal of Organic Chemistry,2006,(13),2956-2969”制备而得)溶于10mL甲醇中，滴加入0.5mL浓硫酸，升温至60℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物中加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物2b(170mg，产率：98.5％)

MS m/z(ESI):194.1[M+1]。

第二步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2c

将化合物2b(70mg，0.37mmol)溶于5mL N,N-二甲基乙酰胺中，加入二(乙腈)二氯化钯(19mg，0.072mmol)、双环[2.2.1]-2-庚烯(68mg，0.72mmol)和碳酸氢钠(61mg，0.73mmol)，再加入粗品化合物1c(100mg，0.37mmol)，升温至70℃ 搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，依次用水，饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题化合物2c(80mg，产率： 56％)。

MS m/z(ESI):386.0[M+1]。

第三步

1-(2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2d

将化合物2c(80mg，0.22mmol)、化合物1f(208mg，0.87mmol)、碳酸铯(142 mg，0.44mmol)和碘化钾(10mg，0.06mmol)加入到1.5mL N,N-二甲基甲酰胺中，升温至100℃微波搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题化合物2d(110mg，产率：91.9％)。

第四步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯2e

将化合物2d(110mg，0.2mmol)溶于5mL四氢呋喃中，滴加入1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(0.4mL，0.4mmol)，搅拌反应1小时。反应液中加入水，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系B纯化，得到标题化合物2e(80mg，产率：93％)。

MS m/z(ESI):430.0[M+1]。

第五步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-6-氟-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-羧酸2f

将化合物2e(80mg，0.19mmol)溶于6mL甲醇和四氢呋喃(V/V＝5:1)的混合溶剂中，加入2mL 4M的氢氧化钠溶液，升温至60℃搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物中加入水，滴加浓盐酸至pH为4，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物2f(60mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第六步

将粗品化合物2f(60mg，0.14mmol)和化合物1j(44mg，0.22mmol)溶于10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(42 mg，0.22mmol)，1-羟基苯并三唑(30mg，0.22mmol)和N,N-二异丙基乙胺(93mg， 0.72mmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入水中，用二氯甲烷和甲醇的混合溶剂 (V/V＝10:1)萃取三次，合并有机相，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用薄层色谱法以展开剂体系A纯化，得到标题化合物2(44mg，产率：51％)。

MS m/z(ESI):597.1[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.74(t,1H),7.86-7.84(m,3H),7.80(d,1H),7.76(d,1H),7.59(d,2H),7.41(d,1H),7.30(d,1H),5.95(s,1H),4.95(t,1H),4.58(d,2H), 4.37(brs,2H),4.16(t,2H),3.64(q,2H),3.27(q,2H),1.09(t,3H)。

实施例3

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺3

采用实施例1的合成路线，将原料化合物1f替换为1-溴-2-甲氧基乙烷(采用专利申请“CN101671238”公开的方法制备而得)制得标题化合物3(47mg)。

MS m/z(ESI):593.4[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.98(t,1H),8.04(d,1H),7.85(d,1H),7.83(d,2H),7.73(dd,1H),7.68(dd,1H),7.57(d,2H),7.52(d,1H),7.29(d,1H),5.96(d,1H),4.57 (d,2H),4.37(s,2H),4.30(t,2H),3.56(t,2H),3.25(q,2H),3.15(s,3H),1.07(t,3H)。

实施例4

N-(4-(乙磺酰基)苄基)-6-氟-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺4

采用实施例1的合成路线，将原料化合物1c替换为1-(溴甲基)-4-氟-2-(三氟甲基)苯(Adamas)，原料化合物1d替换为化合物2b，制得标题化合物4(38mg)。

MS m/z(ESI):581.4[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.73(brs,1H),7.85(d,2H),7.79(d,1H),7.69(d, 1H),7.61(d,2H),7.59-7.58(m,1H),7.44(d,1H),7.41-7.35(m,1H),5.91(s,1H),4.96 (t,1H),4.58(d,2H),4.35(brs,2H),4.18(t,2H),3.64(q,2H),3.27(q,2H),1.09(t,3H)

实施例5

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二氟甲氧基)乙基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-1H-吲哚 -5-甲酰胺5

第一步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二氟甲氧基)乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯5a

将化合物1h(0.1g，242.84μmol)和碘化亚铜(23.12mg，121.42μmol)溶于10 mL乙腈中，升温至50℃，加入2-氟磺酰基二氟乙酸(86.49mg，485.67μmol)，搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物5a(20mg，产率：17.83％)。

MS m/z(ESI):462.1[M+1]。

第二步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二氟甲氧基)乙基)-1H-吲哚-5-羧酸5b

将化合物5a(0.02g，43.31μmol)溶于2mL甲醇中，加入1mL氢氧化钠(159.99 mg，4.00mmol)溶液，升温至60℃搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，滴加2M 盐酸至pH为3～4，减压浓缩，得到粗品标题化合物5b(19mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):448.1[M+1]。

第三步

将粗品化合物5b(0.019g，42.43μmol)和(4-(乙磺酰基)苯基)甲胺盐酸盐5c(20.00mg，84.86μmol，采用专利申请“WO2015035032”公开的方法制备而得)溶于 2mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(19.97mg，84.86μmol)和N,N-二异丙基乙胺(16.45mg，127.29μmol)，搅拌反应1小时。反应液倒入20mL水中，用乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题化合物5(5mg，产率：18.73％)。

MS m/z(ESI):629.5[M+1]。

实施例6

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二氟甲氧基)乙基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-6-氟-1H- 吲哚-5-甲酰胺6

采用实施例5的合成路线，将原料化合物1h替换为2e制得标题化合物6(8 mg)。

MS m/z(ESI):647.5[M+1]。

实施例7

(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺7

将粗品化合物2f(20mg，48.1μmol)和(R)-2-氨基-2-(4-(乙磺酰基)苯基)乙醇7a(11.03mg，48.1μmol，采用专利申请“US9481674”公开的方法制备而得)溶于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(18.38mg， 96.21μmol)、1-羟基苯并三唑(14.64mg，96.21μmol)和N,N-二异丙基乙胺(18.65 mg，144.31μmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物7(10mg，产率：33.15％)。

MS m/z(ESI):627.5[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.44(m,1H),7.84(d,3H),7.77-7.73(m,2H),7.65 (d,2H),7.43(d,1H),7.30(d,1H),5.94(s,1H),5.15-5.12(m,1H),5.06(t,1H),4.94(t, 1H),4.36(s,2H),4.16(t,2H),3.71(t,2H),3.62(t,2H),3.30-3.24(m,2H),1.09(t, 3H)。

实施例8

(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺8

采用实施例1的合成路线，将原料化合物1c替换为1-(溴甲基)-4-氟-2-(三氟甲基)苯(Adamas)，原料化合物1j替换为化合物7a，制得标题化合物8(10.1mg)。

MS m/z(ESI):593.6[M+1]。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.68-8.66(d,1H),8.10(s,1H),7.91-7.89(d,2H), 7.73-7.71(d,2H),7.57-7.56(d,1H),7.50-7.48(d,1H),7.36-7.28(m,2H),6.11(s,1H), 5.33-5.28(m,1H),4.3(s,2H),4.26-4.23(t,2H),3.94-3.93(d,2H),3.82-3.79(t,2H), 3.23-3.18(q,2H),1.24-1.21(t,3H)。

实施例9

(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-甲氧基乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺9

采用实施例2的合成路线，将原料化合物1c替换为1-(溴甲基)-4-氟-2-(三氟甲基)苯(Adamas)，原料化合物1f替换为1-溴-2-甲氧基乙烷，原料化合物1j替换为化合物7a，制得标题化合物9(6.5mg)。

MS m/z(ESI):625.5[M+1]。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.24(d,1H),7.90(d,2H),7.65-7.61(m,3H),7.43(d,1H),7.16-7.06(m,3H),6.17(s,1H),5.40(s,1H),4.30(s,3H),4.12-3.99(m,3H),3.56 (d,1H),3.24(s,3H),3.13-3.07(m,2H),1.27(t,3H)。

实施例10

(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-6-氟-2-(4-氟-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺10

采用实施例2的合成路线，将原料化合物1c替换为1-(溴甲基)-4-氟-2-(三氟甲基)苯(Adamas)，原料化合物1j替换为化合物7a，制得标题化合物10(5mg)。

MS m/z(ESI):611.5[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.44(m,1H),7.84(d,2H),7.75(d,1H),7.69-7.64 (m,3H),7.52(t,1H),7.42(d,1H),7.33(t,1H),5.90(s,1H),5.14-5.11(m,1H),5.05(t, 1H),4.94(t,1H),4.34(s,2H),4.17(t,2H),3.70(t,2H),3.61(t,2H),3.29-3.24(m,2H), 1.09(t,3H)。

实施例11

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-1H-吲哚 -5-甲酰胺11

第一步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯 11b

将化合物1e(100mg，0.272mmol)、2-氯-N,N-二甲基乙酰胺11a(67mg，0.55 mmol，采用专利申请“CN1721392”公开的方法制备而得)和碳酸铯(177mg，0.55 mmol)溶于10mL乙腈中，升温至100℃，微波搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，过滤，滤液减压浓缩，得粗品标题化合物11b(133mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第二步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯11c

将粗品化合物11b(133mg，0.296mmol)溶于10mL四氢呋喃中，加入2M的硼烷二甲硫醚的四氢呋喃溶液(0.5mL，1mmol)，升温至60℃搅拌反应12小时。反应液中加入1mL 3M的盐酸，60℃搅拌反应15分钟，冷却至室温，滴加入饱和碳酸氢钠溶液至pH大于7，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物11c(55mg，产率：43％)

MS m/z(ESI):439.1[M+1]。

第三步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-(二甲基氨基)乙基)-1H-吲哚-5-羧酸11d

将化合物11c(55mg，0.125mmol)溶于19mL甲醇、四氢呋喃和水 (V/V/V＝10:3:6)的混合溶剂中，加入氢氧化钠(100mg，2.5mmol)，升温至50℃搅拌反应3小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物中加入水，滴加1M盐酸至pH小于7，减压浓缩，得到粗品标题化合物11d(53mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第四步

将粗品化合物11d(53mg，0.125mmol)和化合物1j(36mg，0.188mmol)溶于 5mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(37 mg，0.188mmol)、1-羟基苯并三唑(25mg，0.188mmol)和三乙胺(0.1mL，0.72 mmol)，搅拌反应12小时。反应液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系A纯化，得到标题化合物11(22mg，产率：29.1％)。

MS m/z(ESI):606.5[M+1]。

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.08(s,1H),7.87(d,2H),7.73-7.69(m,2H), 7.58-7.52(m,3H),7.44-7.42(m,1H),7.06(d,1H),6.65(t,1H),6.30(s,1H),4.80(d, 2H),4.36-4.31(m,4H),3.11(q,2H),2.69(s,2H),2.41(s,6H),1.28(t,3H)。

实施例12

N-((5-(乙磺酰基)吡啶-2-基)甲基)-1-(2-甲氧基乙基)-2-((2-(三氟甲基)哌啶-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺12

第一步

2-(((叔丁基二甲基硅基)氧基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸乙酯12c

将3-碘代-4-(2,2,2-三氟乙酰氨基)苯甲酸乙酯12a(2g，5.17mmol，韶远)、叔丁基二甲基(丙-2-炔-1-基氧基)硅烷12b(1.32g，7.75mmol，Sigma)、二氯二(三苯基膦)钯(181mg，0.258mmol)、三乙胺(2.61g，25.83mmol)和碘化亚铜(98.4mg， 0.517mmol)加入到50mL N,N-二甲基甲酰胺中，升温至100℃搅拌反应12小时。反应液冷却至室温，倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物12c(800mg，产率：46.43％)。

MS m/z(ESI):334.2[M+1]。

第二步

2-(羟甲基)-1H-吲哚-5-羧酸乙酯12d

将化合物12c(300mg，899.56μmol)溶于5mL四氢呋喃中，冰浴冷却下，滴加入1M的四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液(202.56mg，899.56umol)，搅拌反应2 小时。反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物12d(190mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):220.2[M+1]。

第三步

2-甲酰基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯12e

将粗品化合物12d(200mg，912.26μmol)和二氧化锰(79.31mg，912.26μmol) 加入到5mL四氢呋喃中，搅拌反应12小时。反应液过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物12e(160mg，产率： 80.74％)。

MS m/z(ESI):218.1[M+1]。

第四步

2-((2-(三氟甲基)哌啶-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸乙酯12g

将化合物12e(100mg，460.36μmol)和2-(三氟甲基)哌啶12f(84.6mg，552.43 μmol，韶远)加入到5mL四氢呋喃中，滴加入3滴醋酸，室温搅拌反应3小时后，分批加入三乙酰基硼氢化钠(292.71mg，1.38mmol)，室温搅拌反应12小时。反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物12g (100mg，产率：61.3％)。

MS m/z(ESI):355.2[M+1]。

第五步

1-(2-甲氧基乙基)-2-((2-(三氟甲基)哌啶-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸乙酯12h

将化合物12g(100mg，282.19μmol)溶于四氢呋喃中，加入氢化钠(22.57mg，564.39μmol)，搅拌反应15分钟后，加入1-溴-2-甲氧基乙烷(58.83mg，423.29μmol)，微波80℃搅拌反应1小时。反应液冷却至室温，倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物12h (116.39mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

第六步

1-(2-甲氧基乙基)-2-((2-(三氟甲基)哌啶-1-基)甲基)-1H-吲哚-5-羧酸12i

将粗品化合物12h(80mg，193.97μmol)和氢氧化钠(38.79mg，969.83μmol) 加入到5mL甲醇中，加入2滴水，升温至100℃搅拌反应2小时。反应液冷却至室温，减压浓缩，所得残余物滴加1M稀盐酸至pH为3，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，得到粗品标题化合物12i(60mg)，产品不经纯化直接进行下一步反应。

MS m/z(ESI):383.1[M+1]。

第七步

将粗品化合物12i(20mg，52.03μmol)和(5-(乙磺酰基)吡啶-2-基)甲胺12j(12.50mg，62.44μmol，韶远)溶于3mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(19.98mg，104.06μmol)、1-羟基苯并三唑(15.83mg， 104.06μmol)和N,N-二异丙基乙胺(20.17mg，156.09μmol)，搅拌反应12小时。反应液倒入水中，用乙酸乙酯萃取，合并有机相，依次用水和饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，所得残余物用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化，得到标题化合物12(12mg，产率：41.4％)。

MS m/z(ESI):567.5[M+1]。

1H NMR(400MHz,CDCl₃)δ9.06(s,1H),8.17(d,1H),8.11(s,1H),7.72(d,1H),7.58(d,1H),7.41(d,1H),7.35(t,1H),6.48(s,1H),4.91(d,2H),4.45(d,2H),4.12(d,1H),4.02(d,1H),3.69(t,2H),3.29(s,3H),3.21-3.13(m,3H),2.89(bar,1H),2.55(bar,1H),1.85(bar,2H),1.54(bar,3H),1.32(t,3H)。

实施例13

1-(2-氨基-2-氧代乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(4-(乙磺酰基)苄基)-1H-吲哚 -5-甲酰胺13

第一步

1-(2-(叔丁氧基)-2-氧代乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯13b

将化合物1e(21.6 mg，0.059 mmol)，2-溴乙酸叔丁酯13a(43.4μL，0.294 mmol，采用公知的方法“Tetrahedron,2007,63(2),337-346”制备而得)和碳酸铯(95.7 mg，0.294 mmol)加入到1 mL N,N-二甲基甲酰胺中，升温至110℃微波搅拌反应1.5小时。反应结束后得标题化合物13b的反应液，不作处理直接进行下一步反应。

第二步

2-(2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-5-(甲氧羰基)-1H-吲哚-1-基)乙酸13c

向上述化合物13b的反应液中加入1 mL甲醇，加入1 mL 2M的氢氧化钾溶液，搅拌反应16小时。反应液用6M盐酸调节pH小于3，用乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用饱和氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物13c(10 mg，产率：40％)。

MS m/z(ESI):426[M+1]。

第三步

1-(2-氨基-2-氧代乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯13d

将化合物13c(10 mg，0.0235 mmol)溶于1mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入((1H- 苯并[d][1,2,3]三唑-1-基)氧基)三(吡咯烷-1-基)鏻六氟磷酸盐(V)(18.3 mg，0.0352mmol)、三乙胺(20μL，0.141 mmol)和氯化铵(12.56 mg，0.235 mmol)，搅拌反应 16小时。反应液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得标题化合物13d (4 mg，产率：40％)

MS m/z(ESI):425[M+1]。

第四步

1-(2-氨基-2-氧代乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-羧酸13e

将化合物13d(4 mg，9μmol)溶于2 mL甲醇和N,N-二甲基甲酰胺(V/V＝1:1)的混合溶剂中，加入1 mL 2M的氢氧化钾溶液，室温搅拌反应3小时，补加1 mL 2M 的氢氧化钾溶液，室温搅拌反应16小时，升温至50℃搅拌反应24小时，补加1 mL 2M的氢氧化钾溶液，50℃搅拌反应48小时。反应液冷却至室温，滴加6M盐酸至 pH小于2，减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物13e(2.5 mg，产率：60％)。

MS m/z(ESI):411[M+1]。

第五步

将化合物13e(2.5 mg，6.09μmol)和化合物1j(2.4 mg，12.2μmol)溶于1 mL二氯甲烷中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.3 mg，12.2μmol)、 1-羟基苯并三唑(1.65 mg，12.2μmol)和三乙胺(4.3μL，30.4μmol)，搅拌反应16小时。反应液减压浓缩，用高效液相色谱法纯化所得残余物，得到标题化合物13(1.5 mg，产率：42％)。

MS m/z(ESI):592[M+1]。

实施例14

(R)-N-(1-(4-(乙磺酰基)苯基)-2-羟乙基)-1-(2-羟乙基)-2-((2-(三氟甲基)吡啶-3-基) 甲基)-1H-吲哚-5-甲酰胺14

采用实施例1的合成路线，将原料化合物1c替换为3-(溴甲基)-2-(三氟甲基) 吡啶(采用专利申请“WO2016168633”公开的方法制备而得)，原料化合物1j替换为化合物7a，制得标题化合物14(2.3 mg)。

MS m/z(ESI):576[M+1]。

实施例15

(R)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-N-(1-(4-(乙基磺酰基)苯基)-2-甲氧乙基)-1-(2-羟乙基)-1H-吲哚-5-甲酰胺15

第一步

1-(2-((叔丁基二甲基硅基)氧)乙基)-2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1H-吲哚-5-甲酸甲酯 1j

将化合物1e(110 mg，0.3 mmol)溶于4 mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入2- 叔丁基二甲基氧基溴乙烷(215 mg，0.9 mmol)和碳酸铯(195 mg，0.6 mmol)，微波加热至100℃反应2小时。冷却反应，减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B 纯化所得残余物，得到标题化合物1j(200 mg)。

第二步

2-(4-氯-2-(三氟甲基)苄基)-1-(2-羟基乙基)-1H-吲哚-5-甲酸1i

将化合物1j(120 mg，0.23 mmol)，溶于2 mL甲醇中，加入2N氢氧化钠水溶液(1.2mL,，23.0 mmol)，加热至70℃搅拌反应1小时。冷却反应液，用1N稀盐酸酸化至PH＝3～4，旋干得到粗品化合物1i(90 mg)。

第三步

将粗品化合物1i(40.05 mg，0.10 mmol)，粗品化合物15a(49.02 mg，0.20 mmol)溶于5 mL N,N-二甲基甲酰胺中，依次加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(76.00 mg，0.21 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(38.00 mg，0.30 mmol)，室温搅拌反应1小时。反应液减压浓缩，用硅胶柱色谱法以洗脱剂体系B纯化所得残余物，得到标题化合物15(10 mg，产率：16％)。

MS m/z(ESI):623[M+1]。

生物学评价

以下结合测试例进一步描述解释本发明，但这些实施例并非意味着限制本发明的范围。

测试例1、本发明化合物对RORγ体外活性的测定

一、实验材料及仪器

1.

TR-FRET RORγ共激活体系(Life Technologies)

2.RORγLBD(AB Vector)

3.DMSO(SigmaAldrich)

4.酶标仪(Tecan)

二、实验步骤

采用LanthaScreen TR-FRET(时间分辨荧光能量共振转移)RORγ共激活体系筛选本发明的化合物对RORγ活性的调节。

首先配制完整缓冲液D(complete TR-FRET Coregulator)(Life Technologies)包含终浓度5mM DTT。DMSO终浓度为2％。将待测化合物在含有2％DMSO的完整缓冲液D中连续稀释为2x终浓度，最高剂量为的60μm。10μl/孔加入384孔板的试验孔(PerkinElmer)。每个检测化合物在相同浓度下设置2个平行对照孔。准备4X RORγLBD(AB Vector)。使用完整缓冲液D稀释RORγLBD浓度为1ng/ μL。5μl/孔加入384孔测定板的试验孔。阴性对照孔为5μL完整缓冲液D，无RORγ LBD。使用完全缓冲液D配制含有0.6μM荧光素-D22(4X)和8nM铽(Tb)标记的抗GST抗体(4X)(Life Technologies)混合液，将5μL混合液加入到384孔板中。总反应体系为20μL。在振荡器上轻轻混匀该384孔板并在室温下避光孵育 2-4小时。

使用Tecan Infinite M1000检测荧光读数,通过GraphPad Prism 6.0软件绘制发射波长520nm/495nm的比值与化合物浓度的对数曲线，计算待测化合物的EC₅₀值。

本发明化合物对RORγ体外活性通过以上的试验进行测定，测得的EC₅₀值见表1。

表1 本发明化合物对RORγ体外活性的EC₅₀值

实施例编号	EC<sub>50</sub>(nM)	Emax(％)
			1	2	112％
7	49	95％
			8	16	101％
9	24	104％
			10	49	107％

结论：本发明化合物对RORγ体外活性具有明显的激动作用。

测试例2、本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析活性测定

一、实验材料及仪器

1.人外周血单核细胞(PBMC)(Zenbio)

2.淋巴细胞培养基(Zenbio)

3.TexMACS(Miltenyi Biotec)

4.人Cytostim(Miltenyi Biotec)

5.人IL-17酶联免疫试剂盒(R&D系统)

6.CO₂培养箱(Fisher Scientific)

7.离心机(Fisher Scientific)

8. 96孔细胞培养板(Fisher Scientific)

9.酶标仪(Tecan)

二、实验步骤

将冻存的人外周血单核细胞(PBMC)在预热的淋巴细胞培养基中快速复苏，离心1000rpm，10min，除去细胞培养上清，将细胞轻轻悬浮于TexMACS培养基中，计数细胞。在细胞悬液中按比例加入T细胞激活试剂cytostim(10μl/ml)，然后以1×10⁵外周血单核细胞/孔的密度将细胞种植于96孔细胞培养板中。使用 TexMACS培养基梯度稀释待测化合物，分别加入各实验孔中，每组2-3个平行孔。准备只含细胞不含cytostim的阴性对照孔，以得到背景读数。将细胞培养板放置于5％二氧化碳37℃培养箱孵育3天。药物处理3天后收取细胞培养上清液，离心去除悬浮物。然后使用IL-17A酶联免疫试剂盒定量上清液中IL-17A。使用 GraphPad Prism 6.0计算待测化合物的EC₅₀值。

本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析通过以上的试验进行测定，测得的 EC₅₀值见表2。

表2 本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析的EC₅₀值

实施例编号	EC<sub>50</sub>(nM)	Emax(％)
			1	3	80％
2	105	129％
			3	27	80％
7	49	95％
			8	66	110％
9	26	96％
			10	74	97％

结论：本发明化合物对IL-17A酶联免疫定量分析活性具有明显的调节作用。