CN109115543A - 一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，包括如下步骤：实验动物安乐死后→解剖→将甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10%的中性福尔马林固定→苏木素溶液进行标记→脱水→石蜡包埋→切片→染色。通过与传统制作方法进行对比研究发现，新的制片方法可将动物甲状旁腺切出率从原来的50%‑70%提高到100%，且该方法简单，易于掌握，可广泛推广应用于实验动物甲状旁腺制片，有效防止甲状旁腺切片过程中丢失或无法切出。
Description
技术领域
本发明涉及一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，属于病理技术新方法领域。
背景技术
新药临床前安全性评价的单次给药及重复给药毒性试验中，甲状旁腺是国家药品监督管理局颁布的指导原则要求检查的组织脏器。由于甲状旁腺太小，部位不规则，传统做法不易切出，导致部分动物甲状旁腺切片观察记录缺失。特别是有些药物作用的靶器官是甲状旁腺时，可能会由于甲状旁腺切出率太低而影响试验结果的正确判断，从而严重影响试验质量及资料的完整性。
传统甲状旁腺切片为先将甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→脱水→石蜡包埋→切片→染色。由于甲状旁腺太小，部位不规则，经常导致甲状旁腺组织无法切出，造成甲状旁腺组织丢失，严重影响试验质量。
发明内容
为了克服上述缺陷，本发明的目的是提供一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，可有效防止修片时造成的甲状旁腺丢失和不易切出，能非常显著提高甲状旁腺的切出率，保证试验结果的准确性和试验资料的完整性。
为了实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，包括如下步骤：实验动物安乐死后→解剖→将甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液进行标记→脱水→石蜡包埋→切片→染色。
所述的苏木素溶液为以下溶液中的任意一种：
苏木素溶液1：硫酸铝钾：15g，无水乙醇：10mL，苏木精：1g，蒸馏水：200mL，氧化汞：0.5g，冰醋酸：10mL；
苏木素溶液2：硫酸铝钾：50g，无水乙醇：50mL，苏木精：5g，蒸馏水：650mL，碘酸钠：0.5g，冰醋酸：20mL，甘油：300mL；
苏木素溶液3：硫酸铝钾：17g，无水乙醇：250mL，苏木精：2g，蒸馏水：mL，碘酸钠：0.2g，冰醋酸：20mL；
苏木素溶液4：硫酸铝钾：3g，无水乙醇：100mL，苏木精：2g，蒸馏水：100mL，碘酸钠：0.5g，冰醋酸：10mL。
固定好的甲状腺用无尘纸擦干，查看甲状旁腺所在的位置，将牙签的尖头磨钝，蘸染色用的苏木素溶液将甲状旁腺染色，待苏木素溶液干后和其它组织一起脱水；包埋时，将两侧有苏木素颜色的部位包埋在同一水平位置；切片时，组织粗修，靠近苏木素标记的部位时，仔细观察，待甲状旁腺修出后，切片。
苏木素溶液用于标记甲状旁腺。所述的苏木素溶液可选用不同于苏木素溶液1-4组成的配比。
前述的方法应用于所有种属动物甲状旁腺组织病理学制片。
苏木素溶液是一种细胞核染色剂，苏木素标记的组织会对细胞核染色，脱水不会掉色，不影响组织切片制作和观察。
本发明中甲状旁腺组织切片的制片流程为：实验动物安乐死后→解剖→甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液进行标记→脱水→石蜡包埋→切片→染色，该方法较传统不标记方法可有效防止修片时造成的甲状旁腺丢失和不易切出，能非常显著提高甲状旁腺的切出率，保证试验结果的准确性和试验资料的完整性，更好地提高试验质量。
通过传统方法与本发明方法的对比研究结果亦显示，用苏木素溶液标记的甲状旁腺组织病理切片质量与未标记的甲状旁腺组织切片质量一致，但切出率由未标记时的62％提高到100％，差异在统计学上有非常显著意义(P＜0.0001)。
附图说明
图1为传统方法切片染色结果示意图；
图2为本发明的采用苏木素溶液1标记染色结果示意图；
图3为本发明的采用苏木素溶液2标记染色结果示意图；
图4为本发明的采用苏木素溶液3标记染色结果示意图；
图5为本发明的采用苏木素溶液4标记染色结果示意图；
图6和图7为传统方法得到的甲状旁腺组织切片质量示意图；
图8为本发明的采用苏木素溶液1标记得到的甲状旁腺组织切片质量示意图；
图9为本发明的采用苏木素溶液2标记得到的甲状旁腺组织切片质量示意图；
图10为本发明的采用苏木素溶液3标记得到的甲状旁腺组织切片质量示意图；
图11为本发明的采用苏木素溶液4标记得到的甲状旁腺组织切片质量示意图。
具体实施方式
以下所列实施例，仅为帮助本领域技术人员更全面理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1苏木素染色方法
固定好的甲状腺用无尘纸擦干，查看甲状旁腺所在的位置，将牙签的尖头磨钝，蘸染色用的苏木素溶液将甲状旁腺染色，待苏木素溶液干后和其它组织一起脱水。包埋时，将两侧有苏木素颜色的部位包埋在同一水平位置。切片时，组织粗修，靠近苏木素标记的部位时，仔细观察，待甲状旁腺修出后，切片。
实施例2苏木素标记甲状旁腺与传统制片方法的对比研究
研究方法：将250个大鼠的甲状腺连同甲状旁腺组织，随机用5种方法进行制片。常规方法的制片流程为：甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→脱水→石蜡包埋→切片→染色。苏木素溶液1-4标记方法制片流程为：甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液1标记甲状旁腺→脱水→石蜡包埋→切片→染色；甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液2标记甲状旁腺→脱水→石蜡包埋→切片→染色；甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液3标记甲状旁腺→脱水→石蜡包埋→切片→染色；甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10％的中性福尔马林固定→苏木素溶液4标记甲状旁腺→脱水→石蜡包埋→切片→染色。每种方法制50个甲状腺和甲状旁腺组织切片，统计切出和未切出甲状旁腺组织的切片数，用SPSS22.0统计软件将各标记组与未标记组进行Fisher精确概率统计，P＜0.05认为两组之间具有统计学差异。
研究结果：研究结果见表1和图1-11。图1-5结果显示传统方法肉眼很难观察到甲状旁腺组织，而分别用苏木素溶液1-4标记的甲状旁腺组织很容易看出，确保在修片时不被误修掉而导致甲状旁腺丢失或漏切；且与未标记甲状旁腺组织病理切片相比，用苏木素溶液标记过的甲状旁腺组织切片质量未受任何影响(见图6-11)。传统制片方法50个甲状旁腺组织切出31个，切出率为62％；分别用苏木素溶液1-4标记后甲状旁腺组织其切出率均为100％，与传统方法比较，差异在统计学上有非常显著意义(P＜0.0001)。
表1.不同制片方法大鼠甲状旁腺切出结果
结论：
研究结果提示用苏木素溶液1-4标记甲状旁腺组织的制片方法能有效防止传统方法在修片过程中造成的甲状旁腺组织丢失和漏切，可非常显著地提高甲状旁腺组织病理制片的切出率，从而保证试验结果的准确性和试验资料的完整性，更好地提高试验质量，该标记法可广泛推广应用于甲状旁腺组织病理学制片。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征以及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (6)
1.一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，包括如下步骤：实验动物安乐死后→解剖→将甲状旁腺连同甲状腺一同取出→10%的中性福尔马林固定→苏木素溶液进行标记→脱水→石蜡包埋→切片→染色。
2.根据权利要求1所述的一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，所述的苏木素溶液为以下溶液中的任意一种：
苏木素溶液1：硫酸铝钾：15 g，无水乙醇：10 mL，苏木精：1 g，蒸馏水：200 mL，氧化汞：0.5 g，冰醋酸：10 mL；
苏木素溶液2：硫酸铝钾：50 g，无水乙醇：50 mL，苏木精：5 g，蒸馏水：650 mL，碘酸钠：0.5 g，冰醋酸：20 mL，甘油：300 mL；
苏木素溶液3：硫酸铝钾：17 g，无水乙醇：250 mL，苏木精：2 g，蒸馏水： mL，碘酸钠：0.2 g，冰醋酸：20 mL；
苏木素溶液4：硫酸铝钾：3 g，无水乙醇：100 mL，苏木精：2 g，蒸馏水：100 mL，碘酸钠：0.5 g，冰醋酸：10 mL。
3.根据权利要求1所述的一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，固定好的甲状腺用无尘纸擦干，查看甲状旁腺所在的位置，将牙签的尖头磨钝，蘸染色用的苏木素溶液将甲状旁腺染色，待苏木素溶液干后和其它组织一起脱水；包埋时，将两侧有苏木素颜色的部位包埋在同一水平位置；切片时，组织粗修，靠近苏木素标记的部位时，仔细观察，待甲状旁腺修出后，切片。
4.根据权利要求1所述的一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，苏木素溶液用于标记甲状旁腺。
5.根据权利要求2所述的一种有效提高实验动物甲状旁腺组织病理制片切出率的方法，其特征在于，所述的苏木素溶液可选用不同于苏木素溶液1-4组成的配比。
6.如权利要求1-5任意一项所述的方法应用于所有种属动物甲状旁腺组织病理学制片。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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