CN109060973B

CN109060973B - 一种检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法

Info

Publication number: CN109060973B
Application number: CN201810701011.0A
Authority: CN
Inventors: 童庆国; 徐立宁; 罗鸣; 李英富; 苏忠海
Original assignee: Chengdu Beite Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Chengdu Beite Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2018-06-29
Filing date: 2018-06-29
Publication date: 2021-09-10
Anticipated expiration: 2038-06-29
Also published as: CN109060973A

Abstract

本发明具体涉及一种检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，包括以下内容：1)取乙二胺制备对照品溶液；2)取硫酸锌注射液制备供试品溶液；3)采用离子色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，计算乙二胺含量；其中离子色谱法的色谱条件包括以下内容：色谱柱：固定相为阳离子交换树脂或化学键合离子交换剂；流动相：流动相A为甲基磺酸，流动相B甲醇或乙腈；流动相A和流动相B的体积比为90～98:10～2。采用本发明所述离子色谱法检测乙二胺，能够有效对乙二胺进行检测，其检测结果精准，基线平整，峰形对称，稳定性高、重复性好、灵敏度高。

Description

一种检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法

技术领域

本发明涉及检测方法领域，特别是涉及一种检测乙二胺的方法。

背景技术

乙二胺，无色或微黄色油状或水样液体，有类似氨的气味，其沸点为116～117.2℃，呈强碱性，有腐蚀性，主要用于溶剂和分析试剂。

乙二胺为药物中常用的pH值调节剂和助溶剂，食品药品监督管理局在药物报批中要求对乙二胺含量采用专门的方法进行控制，并将限度收紧。现有技术中采用气相色谱测定乙二胺，但是对进样系统腐蚀性大，且在色谱柱中易拖尾和峰分叉，导致进样精度较差，无法满足标示量±5％的限度要求。

发明内容

目前未发现现有技术中有采用离子色谱法测定硫辛酸注射液中乙二胺的相关报道。申请人研究发现采用阳离子色谱法测定乙二胺得到的色谱图峰型对称、基线平整，该方法还具有灵敏度高、稳定性好、重现性好的特点。

本发明提供了一种检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，包括以下内容：

1)取乙二胺制备对照品溶液；

2)取硫酸锌注射液制备供试品溶液；

3)采用离子色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，计算乙二胺含量；其中离子色谱法的色谱条件包括以下内容：

色谱柱：固定相为阳离子交换树脂或化学键合离子交换剂；

流动相：流动相A为有机酸，流动相B为甲醇或乙腈；流动相A和流动相B的体积比为90-98:10-2。

本发明对乙二胺含量的计算，可以采用如外标法、内标法、面积归一法等常规方法。当采用内标法时，所选择的内标物是不干扰乙二胺吸收峰的物质，具体可以通过现有技术以及一些常规试验得到。本发明一实施例中，采用外标法进行计算，简单方便。

本发明一实施例中，所述有机酸浓度为5-50mmol/L；包括但不限于8mmol/L、10mmol/L、18mmol/L、22mmol/L、27mmol/L、32mmol/L、36mmol/L、41mmol/L、47mmol/L等。在本发明一实施例中，该浓度优选为15mmol/L。所述有机酸优选为甲基磺酸。

本发明一实施例中，所述流动相B为乙腈。相较甲醇，有更好的洗脱能力，在检测效果好的基础上，能更快出峰，同时大大降低了检测成本。

本发明一实施例中，所述流动相A和流动相B的体积比为90-92:10-8；优选的，体积比为90:10或92:8。

本发明一实施例中，制备所述对照品溶液或供试品溶液的溶剂选自甲基磺酸溶液、甲醇、乙腈、水中一种或多种。本发明优选溶剂为水，与仪器兼容性好，提高检测的精度和灵敏度，提高检测准确性。

本发明一实施例中，所述色谱柱为RFIC IonPac，CS17；进一步的，所述色谱柱的长度为250-500mm，内径为3-5mm；优选的色谱柱的长度为250mm，内径为4mm。

本发明一实施例中，流动相的流速为0.6-1ml/min；优选为0.8ml/min。

本发明一实施例中，色谱柱的柱温为25-40℃；优选为30℃。

本发明一实施例中，该方法的进样量为5-50μl；进一步的试验发现当选自10μl时，不对称度低，色谱对称性好。

其中，所述电导检测器选自带抑制器的电导检测器。检测方法采用常规方法，也可以根据实际情况进行一些简单的变换，这些变换都是本领域的常规操作。

本发明有益效果：

一、本发明采用离子色谱法检测乙二胺，以酸性流动相洗脱，能够有效对乙二胺进行检测，其检测结果精准，基线平整，峰形对称，稳定性高、重复性好、分离度高、检测限低、灵敏度高。

二、采用本发明方法乙二胺的回收率高达97.57％～100.71％，RSD％为0.98％。

说明书附图

图1乙二胺线性关系图；

图2乙二胺定量限；

图3IC法空白溶解色谱峰图；

图4乙二胺对照品溶液色谱峰；

图5供试品溶液色谱峰图。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品即可获得，详细如下：

1、仪器：

离子色谱仪：DIONEX ICS1100离子色谱仪-DionexAS-DV进样器，检测器：电导检测器，工作站：Chromeleon 6.80SR9a Build 2680(163077)。

离子色谱(IC)柱：RFIC^TM

CS17(4*250mm)，离子色谱(IC)保护柱：RFIC^TM

CG17(4*250mm)，抑制器：Dionex CERS 500 4mm。

气相色谱仪：Agilent 7890B气相色谱仪，检测器：氢火焰离子化检测器(FID)

GC色谱柱：SE-30毛细管柱(30m*0.32mm*0.5μm)、DB-WAX毛细管柱(30m*0.53mm*1.0μm)、DB-1毛细管柱(30m*0.53mm*3.0μm)

天平：METTLERTOLEDOXA205DU十万分之一天平；赛多利斯SartoriusCPA255D十万分之一天平

移液枪：SartoriusBioHit移液枪(10～100μl；20～200μl；100～1000μl；1000～5000μl)

2、试剂与试药：

水为超纯水(赛多利斯ariumpro)，甲基磺酸(色谱纯，CNW)，乙腈(色谱纯，Fisher)；

乙二胺(分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号2017011101，纯度≥99.0％)

3、样品：

硫辛酸注射液(批号：170701、170702、170703，成都倍特药业有限公司，规格：12ml：300mg)

成分	用量	作用
			硫辛酸	300mg	活性成分
乙二胺	约80mg	pH调节剂
			注射用水	12ml	溶剂
药用炭	4.8mg	吸附剂
			氮气	适量	惰性气体

硫辛酸注射液(批号62402，德国史达德大药厂，规格12ml:300mg)

硫辛酸原料药(批号20170601，成都倍特药业有限公司)

传统检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法：

传统检测方法：乙二胺采用气相色谱法(中国药典2010年版二部附录VE)测定。检测器：氢火焰离子化检测器，温度320℃；进样口温度：320℃；分流比50:1。色谱柱：固定液为聚二甲基硅氧烷(SE-30,30m*0.32mm*0.5um)毛细管柱。柱温起始温度100℃，保持3min，以每分钟50℃的速率升温至280℃，保持15min。对照品溶液的制备：取乙二胺适量，精密称定，加二甲亚砜：水(1:1)溶解并稀释制成每1ml中约含3.4mg的对照品溶液。供试品溶液：精密量取本品5ml，置10ml量瓶中，加入适量二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。测定法取对照品溶液与供试品溶液各1ul，注入气相色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，即得。检测得到乙二胺的含量6.003mg/ml-7.337mg/ml。

申请人按照原申报标准中采用气相色谱法，外标法计算，分别采用了SE-30毛细管柱(30m*0.32mm*0.5μm)、DB-WAX毛细管柱(30m*0.53mm*1.0μm)、DB-1毛细管柱(30m*0.53mm*3.0μm)实验发现：由于乙二胺浓度较高，碱度相对较大，进样系统腐蚀较大，且在色谱柱中易拖尾和峰分叉，进样精度较差，无法满足±5％的限度要求。其中在DB-1毛细管柱的峰形与拖尾现象要优于其他毛细管色谱柱，因此选定DB-1毛细管柱继续考察研究。

考虑外标法进样可能导致精度下降，因此考虑选择内标法实验，校正和消除由于进样引起的偏差，内标物采用弱碱性有机物吡啶，调节程序升温条件，乙二胺拖尾现象略有改善，乙二胺、吡啶分离度良好，但实验中发现，经过连续一周左右的实验后，色谱柱柱效有明显下降趋势，且连续进样过程中，偶尔会有一针至两针数据突然异常，相对偏差较大，同一样品平行进样两次，实验结果相对偏差6.1％；对照品的进样精度(n＝6)RSD达到3.2％，表明乙二胺采用气相法测定对色谱柱有较强的腐蚀和破坏作用，长时间实验易导致结果异常，由于本品限度范围较窄，因此GC法不是检测乙二胺的最佳方法。

申请人采用离子色谱法进一步的对乙二胺研究进行测定，实施例如下：

实施例一

硫辛酸注射液中乙二胺含量检测：

色谱柱：RFIC IonPac CG17，4mm*50mm，CS17，4mm*250mm；

流动相：15mmol/L甲基磺酸为流动相A，乙腈为流动相B，体积比为9:1；

检测器：检测器为电导检测器，带抑制器CERS500，4mm；

进料量：10μl；

柱温：30℃；

流速：0.8ml/min；

检测步骤：

精密量取本品1ml，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取乙二胺对照品，精密称定，加水溶解并定量稀释66.7μg/ml的溶液，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液、对照品溶液各10μl，分别注入离子色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。结果如下：

取硫辛酸注射液(170701、170702、170703)以及参比制剂硫辛酸注射液(批号62402，德国史达德)按照拟定的检查方法进行测定。试验结果见表1，批号170703结果同重复性实验项下。

表1硫辛酸注射液中乙二胺检查结果

测得结果均满足标示量±5％的限定要求。

实施例二

申请人充分考虑乙二胺的化学性质，利用电导检测器进行测定。由于乙二胺物质特性，仍在色谱柱上明显拖尾，因此以不对称度为指标，进一步筛选流动相和进样体积，筛选条件见表2。

表2IC色谱条件筛选

申请人在考察乙腈加入量的时候，当体积百分比大于10％时，乙二胺保留时间将小于5min，不利于检测，且随着乙腈加入量的增加，抑制信号在增强，因此确定甲基磺酸：乙腈的体积比为90:10。

研究发现以甲基磺酸作为流动相，随着甲基磺酸的浓度增加，乙二胺保留时间将会提前，当甲基磺酸磺酸的浓度超过15mmol/L时，保留时间逐渐趋于5min，因此，本发明优选甲基磺酸的浓度为15mmol/L，保留时间小，检测速度快，且节约溶剂。

研究还发现，随着进样体积的增大，乙二胺的不对称度在增大。

综上，选择色谱条件5为最优色谱条件，乙二胺保留时间为5.3min左右，不对称度为1.31。

为了进一步说明本发明检测方法的有益效果，本发明提供以下试验例。

均采用以下检测条件：

色谱柱：RFIC IonPac CG17，4mm*50mm，CS17，4mm*250mm；

检测器：检测器为电导检测器，带抑制器CERS500，4mm；

进料量：10μl；

柱温：30℃；

流速：0.8ml/min

溶液的配制：

(1)对照品储备溶液精密称取乙二胺0.3343g、0.3348g，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，备用，浓度分别为6.686mg/ml、6.696mg/ml。

(2)对照品溶液精密量取对照品储备溶液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，浓度分别为66.86μg/ml、66.96μg/ml。

(3)样品溶液精密量取样品(企业：成都倍特药业有限公司，批号：170703)1ml，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1、系统适用性试验

离子色谱法试验，采用阳离子交换柱(

CG17(4mm*50mm)，CS17(4mm*250mm))；检测器为电导检测器(带抑制器CERS500，4mm)；精密量取空白溶剂、乙二胺对照品溶液及样品溶液各10μl进样，记录色谱图，如图4-5。理论板数及分离度见下表3。

表3乙二胺理论板数及分离度

结果表明：空白溶剂不干扰待测组份测定；对照品溶液、样品溶液中无其他杂质峰干扰；待测峰理论板数均大于3000，峰形良好。

2、线性实验

取对照品储备液进行稀释，得不同浓度的线性标准溶液，具体稀释步骤如下：精密量取对照品储备溶液(6.696mg/ml)0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml、2.0ml分别置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

取上述各溶液进样，记录色谱图。以浓度作为横坐标，待测组分峰面积作为纵坐标，绘制各组分标准曲线，线性图如图1：

表4乙二胺线性关系

试验结果：乙二胺线性方程为Y＝0.0181X+0.4584，相关系数R为0.9988，结果表明，乙二胺在33.48μg/ml～133.92μg/ml范围内，线性关系良好。

3、定量限

精密量取对照品溶液(66.96μg/ml)适量，通过逐级稀释1000倍，注入离子色谱仪，记录色谱图。信噪比(S/N)约为10时的进样量即为定量限，经换算，乙二胺定量限为0.75μg/ml，色谱图见附图2。

4、准确度试验

精密称取硫辛酸原料药(批号20170601)约1.25g，置50ml量瓶中，加少量乙腈使其溶解，加水稀释至刻度摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，再分别精密加入对照品储备溶液溶液(浓度约6.6mg/ml)0.8ml、1ml、1.2ml，各三份，分别按照拟定样品制备方法溶解，作为回收率试验80％、100％、120％的供试液，按照拟定的色谱条件检测，结果见表5。

表5乙二胺回收率

结果表明：乙二胺的回收率在97.57％～100.71％之间，RSD％为0.98％，结果表明，该方法准确度较高，能够准确检测出样品中乙二胺。

5、日内精密度试验

量取对照品溶液(浓度约66.7μg/ml)注入液相色谱仪，分别连续进样6次，记录色谱图，考察精密度，结果见表6。

表6精密度试验结果

试验结果显示乙二胺色谱峰的保留时间与峰面积的RSD均小于1.0％，说明本品日内精密度良好。

6、溶液稳定性

量取对照品溶液分别于0小时、4小时、6小时、8小时、24小时注入液相色谱仪，记录色谱图，考察溶液稳定性，结果见表7。

表7溶液稳定性

试验结果显示对照品溶液在24小时内稳定。

7、重复性试验

精密量取样品(批号170703)1ml，共6份，分别按照拟定方法制备供试品溶液，依法测定，每份平行进两针，记录色谱图，考察乙二胺含量，结果见表8。

表8重复性试验结果

试验结果可见，6份样品中乙二胺的含量无显著差异，RSD值均小于1.0％，重复性良好。

8、日间精密度试验

取本品分别于三天分别采用离子色谱法测定，考察日间精密度，结果见表9。

表9日间精密度试验结果

试验结果表明，不同时间(三天)乙二胺含量测定结果RSD％均小于2.0％，日间精密度良好。

9、耐用性

取硫辛酸注射液(170701)以及参比制剂硫辛酸注射液(批号62402，德国史达德)，分别按照①耐用性1调整流速至1.0ml/min、②耐用性2调整流速至0.6ml/min、③耐用性3调整柱温至35℃，检测池温度至40℃、④耐用性4调整流动相为15mmol/L甲基磺酸：乙腈(92:8)，进行色谱条件调整，依法对乙二胺进行测定，结果见表10。

表10耐用性试验结果

试验结果表明，色谱条件发生一定变化时乙二胺含量测定结果RSD％均小于1.5％，本方法耐用性良好。

10、限度确定

按照国家CDE中心发补意见要求提高限度要求至每1ml含乙二胺的量为6.33～7.00mg。

综上所述，本发明提供了一种硫辛酸注射液中乙二胺含量的检测方法，操作简便，容易控制，检测成本低，并具有良好的线性关系、专属性好、精密度、稳定性、灵敏度和重复性，加样回收率准确度高，方法重现性好，检测结果准确、可靠，为精确检测乙二胺的含量提供了一种行之有效的方法，保证了硫酸锌注射液的产品质量。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的技术人员在本发明所揭露的技术范围内，可不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。

Claims

1.一种检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于，包括以下内容：

1）取乙二胺制备对照品溶液；

2）取硫辛酸注射液制备供试品溶液；

3）采用离子色谱法分别检测对照品溶液和供试品溶液，计算乙二胺含量；

其中离子色谱法的色谱条件包括以下内容：

色谱柱：以阳离子交换树脂为固定相；流动相：流动相A为15mmol/L的甲基磺酸，流动相B为乙腈；流动相A和流动相B的体积比为90-92:10-8；

流动相的流速为0.6-1ml/min；

色谱柱的柱温为25-40℃。

2.根据权利要求1 所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：体积比为90:10或92:8。

3.根据权利要求1或2所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：制备所述对照品溶液或供试品溶液的溶剂选自甲基磺酸溶液、甲醇、乙腈、水中一种或多种。

4.根据权利要求3所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：制备所述对照品溶液或供试品溶液的溶剂为水。

5.根据权利要求1所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：所述色谱柱为RFIC IonPac，CS17。

6.根据权利要求1所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：所述色谱柱的长度为250-500mm，内径为3-5mm。

7.根据权利要求1所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：流动相的流速为 0.8ml/min。

8.根据权利要求1所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：色谱柱的柱温为30℃。

9.根据权利要求1所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：该方法的进样量为5-50μl。

10.根据权利要求9所述检测硫辛酸注射液中乙二胺的方法，其特征在于：进样量为10μl。