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CN108927078A - 一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球及其制备方法与应用 - Google Patents

一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球及其制备方法与应用 Download PDF

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CN108927078A
CN108927078A CN201810770696.4A CN201810770696A CN108927078A CN 108927078 A CN108927078 A CN 108927078A CN 201810770696 A CN201810770696 A CN 201810770696A CN 108927078 A CN108927078 A CN 108927078A
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CN
China
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magnetic nano
nano microsphere
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diazanyl
magnetic
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Application number
CN201810770696.4A
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张利鹏
谢苍桑
李军华
张溪之
徐畅
姜长安
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Zhuhai Zhongke Advanced Technology Research Institute Co Ltd
Original Assignee
Zhuhai Zhongke Advanced Technology Research Institute Co Ltd
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    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
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Abstract

本发明公开了一种含有Fmoc‑肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球及其制备方法与应用，合成氨基硅烷化磁性纳米微球后，再将制得的氨基硅烷化磁性纳米微球与含有Fmoc保护基的对肼基苯甲酸通过酰胺键链接形成所述含有Fmoc‑肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。所述制备方法包括以下步骤：S1、四氧化三铁磁性纳米微球的制备；S2、硅烷化磁性纳米微球的制备；S3、氨基磁性纳米微球的制备；S4、将产物用无水DMF洗涤数次，洗涤完后，以无水DMF为溶剂并加入DCC、4‑(氨基保护羧基)苯甲酸及DMAP在室温下搅拌制得所述含有Fmoc‑肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。该微球可用于多肽合成且合成过程中分离提纯步骤简单高效。

Description

一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球及其制备方 法与应用
技术领域
本发明涉及功能材料技术领域，具体涉及一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球及其制备方法与应用。
背景技术
纳米磁性微球，由于颗粒直径在纳米范围内，因而表现出诸多特殊的物理特性，如小尺寸效应(包括特殊的光学性质、特殊的磁学性质、特殊的热学性质)、表面效应及量子效应。其中，纳米磁性微球的超顺磁性是其最重要的特性。在现代科学技术领域中，纳米磁性微球已经成为化学、物理学、生物学、医学和工程学等多种学科研究中不可或缺的一种材料。
磁性微球的顺磁性内核物质决定了其磁性能，而制备过程对其顺磁性内核物质的性质有着重要影响。这类微球的制备方法通常包括：化学共沉淀法、机械研磨法、金属有机热分解法、微乳液法、溶胶凝胶法等。其中，化学共沉淀法的应用最为广泛，这种方法是将Fe3+和Fe2+离子以摩尔比为2：1或3：2混合的溶液在碱性条件下沉淀制备而得，粒径在8-10nm之间，具有粒径小、颗粒大小均匀、操作简单等特点且该方法通过适当的控制工艺条件，就能得到性能优良的磁性颗粒。虽然这种方法制得的磁性微球具有良好的磁性性能，但是由于其分散性和生物相容性都具有缺陷，因而在制备后还需要对其进行表面的改性。
二氧化硅由于具有可以减小磁性纳米颗粒之间的磁偶极相互作用，阻止粒子团聚及优良的生物相容性、亲水性及优良的化学稳定性和胶体稳定性，所以磁性纳米颗粒经过二氧化硅的表面改性后，可以制备出强磁响应性的复合纳米粒子，并且很容易进行进一步的表面改性。氨丙基三乙氧基硅烷(aminopropyltriethoxysilane，APTES)是最常用的烷氧基硅烷，其可通过物理吸附法或者共价结合法结合到磁性纳米颗粒的表面，从而引入氨基。因此，利用APTES对化学共沉淀法制得的磁性微球进行表面改性是一种常用的改性手段。
多肽在生命体的很多生理过程中起着重要的调控作用，从分子水平上了解活性肽的化学结构活性作用、调控机制是生物学和药学研究的主要目标。与传统的药物相比，活性肽具有药用效价高、生物利用率高、不积蓄中毒、副作用少等优点。因此，活性肽的开发利用引起了科学界的高度重视，近几年，其已发展成为国际市场上的一类重要药物。多肽的化学合成不仅能大量的合成天然多肽，而且还能在多肽中插入非常见氨基酸或氨基酸衍生物。
现有技术中，通常通过固相合成法和液相合成法合成多肽，相对于液相合成法，固相合成法由于使用了载体具有足够的机械强度，便于机械和震荡搅拌、拥有较大的网格空间，有利于多肽的延长、分离纯化操作简单等优点，而被广泛的应用于各种肽的合成中。现有技术中，固相合成法中通常采用高分子树脂作为载体，如聚苯乙烯(Polystyrene，PS)树脂、Sheppard树脂、Tenta-Gel树脂等，树脂类载体能够特异性强，然而，树脂在作为固相载体前需要活化，使得操作较为繁杂，且后期分离操作虽然较为简单，便需要多次重复洗脱，因此，制备的效率还存在较大的提升空间。
基于此，若能将含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球用于多肽合成的载体，将得到一种可以直接用磁分离的多肽合成载体，使得分离提纯更方便，制备效率更高且肼键的引入使其在碱性环境下更稳定，有利于含Fmoc保护基的氨基酸的合成，及后期的切除。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是：提供一种利用磁场即可实现分离纯化的多肽载体。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球，所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球是合成氨基硅烷化磁性纳米微球后，再将制得的纳米微球与含有芴甲氧碳基(Fmoc)保护基的对肼基苯甲酸通过酰胺键链接形成所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。
本发明的有益效果在于：将氨基硅烷化磁性纳米微球与带有Fmoc保护基的对肼基苯甲酸结合所形成的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球不仅可用于多肽的合成，而且由于磁性内核的存在使得反应的后处理变得更加简便，直接利用磁场即可对产物进行分离和进一步纯化，且肼基的加入使得载体在合成的过程中可以在碱性条件下稳定存在，对于以有Fmoc保护基的氨基酸为原料的多肽合成有良好的优异性。
本发明还包括上述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，包括以下步骤：
S1、四氧化三铁磁性纳米微球的制备；
S2、在所述步骤S1制得的四氧化三铁磁性纳米微球(magnetic nanoparticles，MNP)表面包覆二氧化硅制得硅烷化磁性纳米微球(Silananized magneticnanoparticles，SMNP)；
S3、取所述步骤S2制得的硅烷化磁性纳米微球，用乙醇和蒸馏水稀释后，再经超声处理30～40min，逐滴加入APTES后剧烈搅拌7～9h，用无水乙醇洗涤数次后进行干燥处理得到氨基磁性纳米微球(Amino magnetic nanoparticles，AMNP)；
S4、将所述步骤S3干燥后得到的产物用无水二甲基甲酰胺(Dimethyl Formamide，DMF)洗涤数次，洗涤完后，以无水DMF为溶剂并加入二环己基碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide，DCC)、4-(氨基保护羧基)苯甲酸及二甲基氨基吡啶(dimethylaminopyridine，DMAP)在室温下搅拌2～3h制得所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。
进一步地，所述步骤S4中DCC、4-(氨基保护羧基)苯甲酸及DMAP的物质的量之比为15:15:1。
进一步地，所述步骤S1中四氧化三铁磁性纳米微球的制备包括以下步骤：
S101、将氢氧化钠溶液加入到干燥洁净的反应容器中，并向其中通入氮气同时水浴搅拌加热30～45min；
S102、向所述步骤S101中的反应容器中加入摩尔比为1:2～2:3的硫酸亚铁和氯化铁溶液，通入氮气搅拌1.5～2小时至溶液变为黑色后，停止加热，磁性分离后，用蒸馏水洗涤数次，直至液体变为中性后干燥12h以上得到所述四氧化三铁磁性纳米微球。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：加入过量的硫酸亚铁，防止其被氧化为三价铁。
进一步地，所述步骤S101中水浴的温度为60℃。
进一步地，所述步骤S101和102中的搅拌速度为200～300r/s，优选为240r/s。
进一步地，所述步骤S2中包覆二氧化硅的操作包括以下步骤：取步骤S1制得的四氧化三铁磁性纳米微球用乙醇洗涤2-4次后溶于乙醇中并超声，依次加入25％的氨水、蒸馏水及四乙基原硅酸盐(tetraethyl orthosilicate，TEOS)后剧烈搅拌2～3h后，再经超声乙醇洗涤后，重分散于乙醇溶液中，在60℃下回流12h，分离得到所述硅烷化磁性纳米微球。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：通过超声处理使得磁性纳米微球分散得均为均匀同时使得功能基团的结合更为牢固。
进一步地，所述S2和S3中剧烈搅拌的速度为700～850r/s，优选为750r/s。
进一步地，所述步骤S3中，用乙醇和蒸馏水的稀释操作为：用乙醇和1ml的蒸馏水将0.25mmol的硅烷化磁性纳米微球稀释至150ml。
优选地，所述步骤S3中，APTES的加入量为35μL。
本发明还包括将上述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球作为载体在多肽合成中的应用。
附图说明
图1为本发明实施例一制得的MNP、SMNP、AMNP的TEM谱图；
图2为本发明实施例一制得的MNP、SMNP、AMNP的红外光谱图；
图3为本发明实施例一制得的MNP、SMNP、AMNP的热重分析图；
图4为本发明实施例二合成多肽CRGDS的质谱图；
图5为本发明实施例二合成多肽CRGDS的高效液相色谱图。
标号说明：
a、MNP；b、SMNP；c、AMNP。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球，所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球是合成氨基硅烷化磁性纳米微球后，再将制得的纳米微球与含有芴甲氧碳基(Fmoc)保护基的对肼基苯甲酸通过酰胺键链接形成所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。
本发明的有益效果在于：将氨基硅烷化磁性纳米微球与带有Fmoc保护基的对肼基苯甲酸结合所形成的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球不仅可用于多肽的合成，而且由于磁性内核的存在使得反应的后处理变得更加简便，直接利用磁场即可对产物进行分离和进一步纯化，且肼基的加入使得载体在合成的过程中可以在碱性条件下稳定存在，对于以有Fmoc保护基的氨基酸为原料的多肽合成有良好的优异性。
本发明还包括上述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，包括以下步骤：
S1、四氧化三铁磁性纳米微球的制备；
S2、取所述步骤S1制得的磁性纳米微球200mg，先用乙醇清洗2次，之后溶于乙醇中超声1小时，依次加入25％的氨水8.9ml，蒸馏水7.5ml，TEOS 0.15ml剧烈搅拌2-3小时，超声1小时，乙醇洗涤3次，重分散于乙醇溶液中在60℃下回流12小时，分离得到硅烷化磁性纳米微球；
S3、取分散于乙醇中的S2制得的硅烷化磁性纳米微球0.25mmol，用乙醇和1ml的双蒸水稀释至150ml超声处理30-40分钟，逐滴加入35μl的APTES硅烷化试剂并剧烈搅拌7-9小时，溶液用无水乙醇洗涤数次后放入真空干燥箱中干燥；
S4、取S3制得的产物用无水DMF洗涤数次，之后用无水DMF做溶剂，加入1.5当量的DCC和1.5当量的4-(氨基保护羧基)苯甲酸及0.1当量的DMAP在室温条件下搅拌2-3小时。
进一步地，所述步骤S1中四氧化三铁磁性纳米微球的制备包括以下步骤：
S101、将4mol/l的氢氧化钠的水溶液加入到一个干燥洁净的四口瓶中，通氮气的条件下水浴搅拌加热30-45分钟；
S102、向所述步骤S101的烧瓶中加入摩尔比为1：2-2：3的硫酸亚铁和氯化铁溶液，通气搅拌1.5-2小时，溶液变为黑色，停止加热，磁性分离，用蒸馏水洗涤数次，直至洗出液变为中性，真空干燥12小时以上。
从上述描述可知，本发明的有益效果在于：加入过量的硫酸亚铁，防止其被氧化为三价铁。
进一步地，所述步骤S101中水浴的温度为60℃。
进一步地，所述步骤S101和102中的搅拌速度为200～300r/s，优选为240r/s。
进一步地，所述S2和S3中剧烈搅拌的速度为700～850r/s，优选为750r/s。
本发明还包括将上述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球作为载体在多肽合成中的应用。
本发明的实施例一为：一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球，其制备原料包括硫酸亚铁、氯化铁、TEOS、APTES、4-(氨基保护羧基)苯甲酸。
上述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，包括以下步骤：
1、将4mol/L的氢氧化钠的水溶液加入到一个干燥洁净的四口瓶中，通氮气的条件下60℃水浴搅拌加热30-45分钟；向上述烧瓶中加入摩尔比为1：2的硫酸亚铁和氯化铁溶液，通气搅拌至溶液变为黑色，停止加热，磁性分离，用蒸馏水洗涤数次，直至洗出液为中性，真空干燥12小时以上得到MNP；
2、取所述步骤1制得的纳米磁性颗粒200mg，先用乙醇清洗2次，之后溶于乙醇中超声1小时，依次加入8.9ml 25％的氨水，7.5ml蒸馏水，0.15ml TEOS剧烈搅拌2-3小时，超声1小时，乙醇洗涤3次，重分散于乙醇溶液中在60℃下回流12小时，分离得到SMNP；
3、取分散于乙醇中的步骤2制得的SMNP 0.25mmol，用乙醇和1ml的双蒸水稀释至150ml超声处理30分钟，逐滴加入35μl的APTES硅烷化试剂并剧烈搅拌7-9小时，溶液用无水乙醇洗涤数次后放入真空干燥箱中干燥得AMNP；
4、取步骤3制得的产物用无水DMF洗涤数次，之后用无水DMF做溶剂加入1.5当量的DCC和1.5当量的4-(氨基保护羧基)苯甲酸及0.1当量的DMAP在室温条件下搅拌2.5小时。
取上述实施例一制得的产品进行定性测试及表征，具体如下：
1)定性测试：
取少量产品用DMF洗涤数次之后，加入一滴茚三酮溶液置于90℃的恒温摇床上振摇5分钟观察变色情况，结果发现未变色，说明溶液中没有氨基的存在，即证明4-(氨基保护羧基)苯甲酸已经结合到磁性纳米微球上。
2)表征：
2.1)形貌表征：
将实施例中步骤1-3的产物进行透射电镜分析，结果如图1所示，从图中可以看出，MNP、SMNP、AMNP粒子的平均粒径为8nm，形貌为球形，同时，用TEOS和APTES修饰后粒子的直径仅稍有增大，表明TEOS和APTES修饰对磁性纳米粒子的大小几乎没有影响，充分的体现了小分子修饰的优点，可以保证粒子在修饰后可以维持磁性纳米颗粒的高吸附量，并减小修饰对纳米粒子磁性的影响。
2.2)官能团表征：
将实施例中步骤1-3的产物进行红外光谱分析，结果如图2所示，曲线a代表MNP、曲线b代表SMNP、曲线c代表AMNP；a中579cm-1处对应于Fe3O4中Fe-O特征伸缩振动；b中799cm-1和1083cm-1处分别为Si-O-Si的对称和不对称伸缩振动吸收峰，962cm-1和462cm-1处分别为Si-OH和Si-O-Si的弯曲振动吸收峰，表明二氧化硅成功的包覆MNP；c中3422cm-1处为N-H伸缩振动吸收峰，2929cm-1处为C-H的反振动吸收峰，C-N吸收峰出现在1335cm-1处，1558cm-1处为N-H键变形振动吸收峰，693cm-1处为N-H键面外弯曲振动吸收峰，表明氨基已经修饰成功。
将实施例一中步骤1-3的产物进行热重分析结果如图3所示，对应于图中的a，b，c。从图中可以看出，MNP无明显的热失重，说明其热稳定性良好；SMNP失重约13％，是由SiO2层中的游离水和结合水的失去所致；AMNP失重约33％，可知其修饰上的氨基含量大约为5.7％。
本发明实施例二为：将实施例一制得的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球作为多肽合成的载体，进行多肽(CRGDS)的合成，其制备原料包括二氯甲烷(dichloromethane，DCM)、二乙胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1-Ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl)carbodiimide hydrochloride，EDC-HCl)、1-羟基苯并三氮唑(NHydroxybenzotrizole，HOBT)和Fmoc保护的氨基酸半胱氨酸(Cys)、精氨酸(Arg)、甘氨酸(Gly)、天冬氨酸(Asp)、丝氨酸(Ser)包括以下步骤：
1、取实施例一制得的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球200mg加入烧瓶中用DCM洗涤2次，加入2ml DCM搅拌，之后加入2ml的二乙胺，反应液在室温下进行2小时，取少量的微球用DCM反复洗涤数次，之后加入一滴茚三酮溶液90℃摇床反应4分钟溶液变为深紫色，间隔半小时再测一次颜色变化不明显则反应终止Fmoc保护基已经脱去，进行磁分离，固体用DCM反复的洗涤3次。取另外一个烧瓶按照加入的APTES量的3倍当量加入EDC-HCl，0.1当量的HOBT和2.5倍当量Fmoc-半胱氨酸，以10ml DMF为溶液反应活化15分钟，加入到已经脱保护的磁性载体中，300r/s室温搅拌反应4小时，从3.5小时开始每半小时用茚三酮检测一次直到不变色为止。磁性分离，用DMF洗涤3次之后用无水二氯DCM洗2次。
2、将步骤1的生成物如步骤1的合成方法一样先用二乙胺和DCM脱去Fmoc保护基，再与经EDC-HCl和HOBT预先活化的Fmoc-精氨酸反应得到二肽，之后以同样的步骤依次接上Fmoc-甘氨酸、Fmoc-天冬氨酸、Fmoc-丝氨酸。
3、将洗净的链接有多肽的磁性纳米载体放入烧瓶中向其中加入7ml的三氟乙酸(trifluoroacetic，TFA)：三乙基硅烷(triethyl-Silane，Tis)：H2O＝85：2.5：2.5的切割液，室温下反应3小时，期间以HPLC监测反应进行的情况，与标准的CRGDS的HPLC图谱比较，反应完成后，磁性分离固体，收集液体相，30℃旋转蒸发多余的液体，用剩余液体体积5倍冰乙醚进行沉降，以8000r/s的离心机离心10分钟，去掉上层的清液，再加入5倍体积的冰乙醚进行离心操作5次，得到粗品肽，然后以0.1％的TFA溶液和乙腈为洗脱剂进行HPLC分离，收集产物进行质谱检测得到预期的多肽(CRGDS)，将收集的含有目标肽的溶液30℃浓缩，然后低温冻干。
取上述实施例二制得的产品进行表征，具体如下：
将实施例二中制得的CRGDS进行质谱表征，本试验中采用Bruker Daltonice公司的AUTOFLEX III型基质附助激光解吸电离-飞行时间(Matrix-assisted laserdesorption ionization time of flight，MALDI-TOF)质谱仪(氮源激光器，激光波长为337nm加速电压为19kV，反射电压为20kV，延时时间大约为50-200ns采用正离子检测，累加10-50次单次扫描信号)对物质进行表征，结果如图4所示，CRGDS的理论分子量为536.6，质谱结果显示只有一个峰，位置在537.4，与理论计算出的分子量十分吻合，可以判断为得到的产物即为目标产物。
再对其进行高效液相色谱仪(high performance liquid chromatograph，HPLC)检测(流动相A为0.1％的TFA超纯水溶液，流动相B为HPLC级乙腈，紫外检测波长为214nm，流速：0.2ml/min，柱温：25℃，色谱柱型号是RP-8，4.6mm*150mm，色谱仪型号为：waters2695alliance HPLC)结果如图5所示。从图5中可以看出，高效液相色谱上显示合成物的纯度较高，几乎没有杂质的干扰，结合图4中质谱的检测结果可以共同说明：本发明方案合成的产物为CRGDS且纯度很高。
由以上的试验说明制得的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球，可以用于多肽的合成，且合成过程中分离提纯步骤简单高效。
本发明方案中所使用的试剂及仪器直接从市面购置的普通试剂及仪器，为本领域的常用器材，无特殊要求。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (10)

1.一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球，其特征在于：所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球是合成氨基硅烷化磁性纳米微球后，再将制得的氨基硅烷化磁性纳米微球与含有Fmoc保护基的对肼基苯甲酸通过酰胺键链接形成所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。
2.一种含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、四氧化三铁磁性纳米微球的制备；
S2、在所述步骤S1制得的四氧化三铁磁性纳米微球表面包覆二氧化硅制得硅烷化磁性纳米微球；
S3、取所述步骤S2制得的硅烷化磁性纳米微球，用乙醇和蒸馏水稀释后，再经超声处理30～40min，逐滴加入APTES后剧烈搅拌7～9h，用无水乙醇洗涤数次后进行干燥处理得到氨基磁性纳米微球；
S4、将所述步骤S3干燥后得到的产物用无水DMF洗涤数次，洗涤完后，以无水DMF为溶剂并加入DCC、4-(氨基保护羧基)苯甲酸及DMAP在室温下搅拌2～3h制得所述含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球。
3.根据权利要求2所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中四氧化三铁磁性纳米微球的制备包括以下步骤：
S101、将氢氧化钠溶液加入到干燥洁净的反应容器中，并向其中通入氮气同时水浴搅拌加热30～45min；
S102、向所述步骤S101中的反应容器中加入摩尔比为1:2～2:3的硫酸亚铁和氯化铁溶液，通入氮气搅拌1.5～2小时至溶液变为黑色后，停止加热，磁性分离后，用蒸馏水洗涤数次，直至液体变为中性后干燥12h以上得到所述四氧化三铁磁性纳米微球。
4.根据权利要求3所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S101中水浴的温度为60℃。
5.根据权利要求3所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S101和102中的搅拌速度为200～300r/s。
6.根据权利要求2所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中包覆二氧化硅的操作包括以下步骤：取步骤S1制得的四氧化三铁磁性纳米微球用乙醇洗涤2-4次后溶于乙醇中并超声，依次加入25％的氨水、蒸馏水及TEOS后剧烈搅拌2～3h后，再经超声乙醇洗涤后，重分散于乙醇溶液中，在60℃下回流12h，分离得到所述硅烷化磁性纳米微球。
7.根据权利要求2所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述S2和S3中剧烈搅拌的速度为700～850r/s。
8.根据权利要求2所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，用乙醇和蒸馏水的稀释操作为：用乙醇和1ml的蒸馏水将0.25mmol的硅烷化磁性纳米微球稀释至150ml。
9.根据权利要求8所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，APTES的加入量为35μL。
10.一种如权利要求1所述的含有Fmoc-肼基的氨基硅烷化磁性纳米微球作为载体在多肽合成中的应用。
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