CN108865934B - 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 - Google Patents
一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108865934B CN108865934B CN201810725632.2A CN201810725632A CN108865934B CN 108865934 B CN108865934 B CN 108865934B CN 201810725632 A CN201810725632 A CN 201810725632A CN 108865934 B CN108865934 B CN 108865934B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hmd9204
- bacillus
- preparation
- soil
- bacterial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 19
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 title claims description 21
- 239000003895 organic fertilizer Substances 0.000 claims abstract description 23
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 claims abstract description 17
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 claims abstract description 17
- 241000835167 Bacillus safensis Species 0.000 claims abstract description 9
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 5,8-dihydroxy-2-methoxy-6-methyl-7-(2-oxopropyl)naphthalene-1,4-dione Chemical compound CC1=C(CC(C)=O)C(O)=C2C(=O)C(OC)=CC(=O)C2=C1O UHPMCKVQTMMPCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 241000223218 Fusarium Species 0.000 claims description 28
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 18
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 5
- 235000017590 Nymphoides indica Nutrition 0.000 claims description 4
- 240000000905 Nymphoides indica Species 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 241000234295 Musa Species 0.000 abstract description 19
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 abstract 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 21
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 4
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 4
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 235000015655 Crocus sativus Nutrition 0.000 description 2
- 244000124209 Crocus sativus Species 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 241000223221 Fusarium oxysporum Species 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 2
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 2
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 235000008160 pyridoxine Nutrition 0.000 description 2
- 239000011677 pyridoxine Substances 0.000 description 2
- 235000013974 saffron Nutrition 0.000 description 2
- 239000004248 saffron Substances 0.000 description 2
- 239000004016 soil organic matter Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 2
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 2
- XKLJLHAPJBUBNL-UHFFFAOYSA-N 12-methyltetradecanoic acid Chemical compound CCC(C)CCCCCCCCCCC(O)=O XKLJLHAPJBUBNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 1
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N Muraminsaeure Natural products OC(=O)C(C)OC1C(N)C(O)OC(CO)C1O MSFSPUZXLOGKHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 108010013639 Peptidoglycan Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021015 bananas Nutrition 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000000443 biocontrol Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000009335 monocropping Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000028070 sporulation Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/07—Bacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明公开了一种沙福芽孢杆菌HMD9204及其菌剂和应用，该菌株已于2017年12月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No.60302。该菌株与有机肥或农家肥配合使用，对茄子枯萎病和香蕉枯萎病的防治效果十分明显，可使茄子枯萎病发病率降至2‑5％，香蕉枯萎病发病率降至6.7‑9.6％。
Description
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种沙福芽孢杆菌 HMD9204及其菌剂和应用。
背景技术
由于长时期的连年种植某一作物，造成土壤次生盐渍化严重和土传病害为害加剧，导致作物品质降低，产量下降，现已成为制约设施农业持续发展的重要障碍因子。植物土传病害是一类重要的植物病害，引起土传病害的病原物种类很多(真菌、细菌、线虫、病毒)，它们通常侵染植物根部，引起植物根部乃至全株的病害，造成重大的经济损失。其中，土传病原真菌目前已成为农作物、蔬菜稳产、高产的主要制约因素之一。
香蕉枯萎病是一种侵染香蕉植株维管束的真菌引起的土传病。是一种毁灭性病害，是国际植物检疫对象，由尖孢镰刀菌古巴专化型侵染引起。在中国南方数省香蕉产区都有发生。病原菌在土壤中存活时间达数年之久，一般减产20％以上，严重的田块甚至绝收。因此，为了有效防治土传病害、保证我国农作物、蔬菜产量稳定增长，必然需要进行综合防治。其中，由于生物防治绿色无害高效而广受政府、农庄及农户关注，生防微生物资源研究迫在眉睫。
发明内容
本发明的目的在于提供能够防控土传病害的沙福芽孢杆菌 (Bacillussafensis)，该菌株可以有效的防控土传病害对作物的病害，提高作物产量，特别是对枯萎病的防治效果明显。同时本发明还提供了该菌株的菌剂的制备和其应用。
本发明具体通过以下技术方案来实现：
本发明提供的一种能够防控土传病害的沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)HMD9204，该菌株已进行保藏，保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：中国广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼，保藏日期：2017年12月18日，保藏编号：GDMCCNo.60302。
本发明沙福芽孢杆菌HMD9204主要生物学特性为革兰氏阳性 (G+)，细胞形状为杆状，细胞大小为长1.0-1.2μm、宽0.5-0.7μm，需氧，产孢，运动。在TSA培养基生长2天菌落直径为3-7mm，菌落呈灰白色，圆形，边缘波浪状。菌株能在0-10％(w/v)NaCl，10-50℃的条件下生长，最适的生长条件是35℃、pH值7和0.5％(w/v)NaCl。过氧化氢酶、氧化酶、碱性磷酸酶和脂酶呈阳性，能水解明胶、酪蛋白、秦皮甲素和RNA，不能水解吲哚和淀粉。
本发明沙福芽孢杆菌HMD9204的16S rRNA序列为：SEQ ID NO： 1。
本发明的另一个目的在于提供上述沙福芽孢杆菌HMD9204或其菌悬液或其培养液或其发酵产物或含有其的菌剂。
一种用于防治土传病害的菌种制剂，所述的菌种制剂包含沙福芽孢杆菌HMD9204或其菌悬液或其培养液或其发酵产物的粉剂。
本发明所述的菌种制剂通常通过常规的液体或固体培养，获得包括细菌培养物，通过常规的液体发酵生产，然后加入表面活性剂如分散剂、稳定剂、湿润剂、粘结剂、崩解剂等中的一种或几种，或吸附载体按一定比例混合后，制备成粉剂。
在本发明制剂的基础上，本发明还提供了一种用于防治土传病害的方法，具体为沙福芽孢杆菌HMD9204粉剂与有机肥或农家肥按质量比1.5～3:1000比率混合，3～10千克/亩底施或追施，使用过程中避免与杀虫剂一起使用。
所述的沙福芽孢杆菌HMD9204粉剂与有机肥或农家肥混合后的有效活菌数不小于1亿cfu/g。
本发明还提供了所述的沙福芽孢杆菌HMD9204或其菌悬液或其培养液或其发酵产物在防治作物土传病害中的应用，所述的土传病害为枯萎病，所述的作物选自香蕉或茄子。
同时上述沙福芽孢杆菌HMD9204粉剂在防治作物土传病害中的应用也在本发明的保护范围内。
本发明的有益效果为：
尖孢镰刀菌引起许多作物的枯萎病，通过土壤传播，一般化学药剂很难防治，而且易带来化学污染，生物防治是最可行最环保的手段。本发明分离到一株对枯萎病具有拮抗作用的沙福芽孢杆菌HMD9204，与有机肥或农家肥配合使用，对茄子枯萎病和香蕉枯萎病的防治效果十分明显，可使茄子枯萎病发病率降至2-5％，香蕉枯萎病发病率降至6.7-9.6％。
具体实施方式
下面将结合本发明具体的实施例中，对本发明实技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1沙福芽孢杆菌HMD9204的分离与鉴定
1)沙福芽孢杆菌HMD9204的分离
本实施例分离土壤采自于山东德州陵县中国农业科学院实验基地的盐渍土壤(37°34'N 116°49'E)。采用五点取样法，即先确定对角线的中点作为中心抽样点，再在对角线上选择四个与中心样点距离相等的点作为样点。对地块1000m2的改良耕作土壤小区进行采样，取距地面15-20cm的表层土壤进行检测。将采集到的土样分装于样品袋中并记录，及时送回实验室。
称取土壤5g，加入到盛有45ml无菌生理盐水的三角瓶中(含玻璃珠)，30℃，180rpm恒温摇床中振荡20min使土壤分散均匀。在无菌操作台中依次制备不同稀释浓度的土壤溶液，如10-2、10-3、10-4、10-5、 10-6和10-7g/ml。吸取10-3-10-7稀释度的土壤溶液0.1ml，用涂布棒均匀涂布到NA固体培养基平板上，每个样品设置3-5个重复，倒置于恒温培养箱中培养，NA培养基于30℃，2-5天中观察平板上菌体生长情况，记录平板表面菌落数量和生长情况，将平板上生长的单菌落四区划线法接种于新的平板上，直至菌株为纯菌。
2)沙福芽孢杆菌HMD9204的鉴定
分离纯化的菌株，经过16S rRNA基因扩增以及PCR扩增，经由测序公司进行测序拼接，结果在Ezbiocloud网站上比对鉴定得到菌株的种属名为Bacillus safensis。将分离得到的菌株在显微镜下观察，革兰氏染色阳性(G+)，细胞形状为杆状，细胞大小为长1.0-1.2μm、宽 0.5-0.7μm。产孢。在TSA培养基生长2天菌落直径为3-7mm，菌落呈灰白色，圆形，边缘波浪状。能在10-50℃的条件下生长，最适的生长条件是35℃。
对菌株进行接触酶试验，按《伯杰细菌鉴定手册》进行，过氧化氢酶、氧化酶、碱性磷酸酶和脂酶呈阳性，能水解明胶、酪蛋白、秦皮甲素和RNA，不能水解吲哚和淀粉。
细胞壁成分分析，收集细胞，水浴灭活，分离肽聚糖，然后测定脂肪酸成分。结果显示主要的脂肪酸组分有iso-C15:0，anteiso-C15:0， iso-C17:0和anteiso-C17:0。
耐逆性测定，接种到不同PH值、不同浓度NaCl的牛肉膏蛋白胨培养基。菌株能在0-10％(w/v)NaCl条件下生长，最适pH值7和 NaCl 0.5％(w/v)。
琼脂糖凝胶电泳结果显示，该菌株16S rRNA基因扩增片段大小约为1446，测得的序列如SEQ ID NO：1所示，系统发育分析显示菌株HMD9204和Bacillus safensis相似度99.65％。基于该菌的理化性质和16S rRNA基因系统发育树，可以确定该菌为沙福芽孢杆菌。
基于以上特征，将菌株HMD9204鉴定为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)。该菌株于2017年12月18日寄存于广东省微生物菌种保藏中心，菌种保藏号为GDMCC No.60302。
实施例2HMD9204菌对香蕉枯萎病菌和茄子枯萎病菌的抑制作用
对峙试验：试验共设3组：1)香蕉枯萎病菌-沙福芽孢杆菌组； 2)茄子枯萎病菌-沙福芽孢杆菌组；3)对照组。每组3个重复。在营养肉汤培养基的中心用无菌的直径5mm打孔器打孔，并于中心接种病原菌菌饼，培养24h后，于距离中心病原菌菌饼边缘3cm，两侧用无菌的直径5mm打孔器打孔，并接种沙福芽孢杆菌菌饼，而阴性对照组接种病原菌之后由琼脂块代替沙福芽孢杆菌菌饼，置于28℃恒温箱中培养48h，测量抑菌圈并计算抑菌率。结果如表1所示。
表1HMD9204菌对香蕉枯萎病菌和茄子枯萎病菌的抑制作用
| 抑菌圈直径(mm) | 抑菌率(％) | |
| 香蕉枯萎病菌 | 27.1士1.2 | 63.8士2.1 |
| 茄子枯萎病菌 | 23.3士1.5 | 59.0士3.7 |
由表1可知，菌株HMD9204对香蕉枯萎病和茄子枯萎病具有良好的抑制作用，抑菌率达到了60％以上。
实施例3
本发明提供的沙福芽孢杆菌HMD9204粉剂与有机肥或农家肥按比例混合后对茄子枯萎病和香蕉枯萎病的防治效果十分明显，为了进一步的充分发挥其作用，确定其最佳混合比例，对其测定有效活菌数。结果如表2所示。
表2HMD9204粉剂与有机肥混合有效活菌数检测
据HMD9204菌剂与有机肥混合有效活菌数检测结果表明，粉剂/ 有机肥在1.5:1000比例以上有效活菌数均可达到1亿cfu/g。
实施例3HMD9204粉剂与有机肥混合使用对香蕉枯萎病等的影响
本实施例设置在连作2年的海南巴西蕉地(上一年发病率约40％)。
具体方法为：
对照组：每亩底肥复合肥50kg，花期追肥复合肥10kg，尿素10kg，果期追肥复合肥10kg，氯化钾20kg；
实验组1：每亩施粉剂1.5千克+有机肥0.5吨，2次，底施和花期追施各一次。底施复合肥40kg，花期追肥复合肥10kg，尿素10kg，果期追肥复合肥10kg，氯化钾20kg；
实验组2：每亩施粉剂2.5千克+有机肥0.75吨，2次，底施和花期追施各一次。底施复合肥40kg，花期追肥复合肥10kg，尿素10kg，果期追肥复合肥10kg，氯化钾20kg；
实验组3：每亩施粉剂5千克+有机肥1.25吨，2次，底施和花期追施各一次。底施复合肥40kg，花期追肥复合肥10kg，尿素10kg，果期追肥复合肥10kg，氯化钾20kg。
表3HMD9204粉剂与有机肥混合使用对香蕉发病率等的影响
结果表明：HMD9204粉剂与有机肥混合使用，可应用于香蕉枯萎病就有很好的防治和效果，改善了土壤的酸性，提高了土壤有机质含量，香蕉枯萎病发病率降至6.7-9.6％，表现出了明显的效果，且产量最少增加一倍以上。
实施例4HMD9204粉剂与有机肥混合使用对茄子枯萎病等的影响
本实施例设置在连作2年的海南茄子地试验(上一年发病率约 50％)。
具体方法为：
对照组：每亩底施复合肥40kg；中期追施复合肥10kg，尿素5kg；
实验组1：每亩底施粉剂3千克+有机肥0.5吨，底施复合肥30kg；中期追施复合肥10kg，尿素5kg；
实验组2：每亩底施粉剂5千克+有机肥1.25吨，底施复合肥30kg；中期追施复合肥10kg，尿素5kg；
实验组3：每亩底施粉剂10千克+有机肥2.5吨，底施复合肥30kg；中期追施复合肥10kg，尿素5kg。
表4HMD9204粉剂与有机肥混合使用对茄子发病率等的影响
结果表明：HMD9204粉剂与有机肥混合使用，可应用于茄子枯萎病就有很好的防治和效果，改善了土壤的酸性，提高了土壤有机质含量，香蕉枯萎病发病率降至2-5％，表现出了明显的效果，且产量增加两倍左右。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
序列表
<110> 中国热带农业科学院热带生物技术研究所
<120> 一种沙福芽孢杆菌HMD9204及其菌剂和应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1446
<212> DNA
<213> 沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis)
<400> 1
gggggggggg ctatacatgc agtcgagcgg acagaaggga gcttgctccc ggatgttagc 60
ggcggacggg tgagtaacac gtgggtaacc tgcctgtaag actgggataa ctccgggaaa 120
ccggagctaa taccggatag ttccttgaac cgcatggttc aaggatgaaa gacggtttcg 180
gctgtcactt acagatggac ccgcggcgca ttagctagtt ggtggggtaa tggctcacca 240
aggcgacgat gcgtagccga cctgagaggg tgatcggcca cactgggact gagacacggc 300
ccagactcct acgggaggca gcagtaggga atcttccgca atggacgaaa gtctgacgga 360
gcaacgccgc gtgagtgatg aaggttttcg gatcgtaaag ctctgttgtt agggaagaac 420
aagtgcgaga gtaactgctc gcaccttgac ggtacctaac cagaaagcca cggctaacta 480
cgtgccagca gccgcggtaa tacgtaggtg gcaagcgttg tccggaatta ttgggcgtaa 540
agggctcgca ggcggtttct taagtctgat gtgaaagccc ccggctcaac cggggagggt 600
cattggaaac tgggaaactt gagtgcagaa gaggagagtg gaattccacg tgtagcggtg 660
aaatgcgtag agatgtggag gaacaccagt ggcgaaggcg actctctggt ctgtaactga 720
cgctgaggag cgaaagcgtg gggagcgaac aggattagat accctggtag tccacgccgt 780
aaacgatgag tgctaagtgt tagggggttt ccgcccctta gtgctgcagc taacgcatta 840
agcactccgc ctggggagta cggtcgcaag actgaaactc aaaggaattg acgggggccc 900
gcacaagcgg tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggtctt 960
gacatcctct gacaacccta gagatagggc tttcccttcg gggacagagt gacaggtggt 1020
gcatggttgt cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgcaa cgagcgcaac 1080
ccttgatctt agttgccagc attcagttgg gcactctaag gtgactgccg gtgacaaacc 1140
ggaggaaggt ggggatgacg tcaaatcatc atgcccctta tgacctgggc tacacacgtg 1200
ctacaatgga cagaacaaag ggctgcaaga ccgcaaggtt tagccaatcc cataaatctg 1260
ttctcagttc ggatcgcagt ctgcaactcg actgcgtgaa gctggaatcg ctagtaatcg 1320
cggatcagca tgccgcggtg aatacgttcc cgggccttgt acacaccgcc cgtcacacca 1380
cgagagtttg caacacccga agtcggtgag gtaaccttta ggagccagcc gccggaaggg 1440
tggggc 1446
Claims (6)
1.一种用于防控土传病害的沙福芽孢杆菌（Bacillus safensis）HMD9204，其特征在于，该菌株已于2017年12月18日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNo.60302。
2.一种用于防治土传病害的菌种制剂，其特征在于，所述的菌种制剂包含权利要求1所述沙福芽孢杆菌HMD9204或其菌悬液或其培养液的粉剂。
3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述的制剂在使用时与有机肥或农家肥按质量比1.5～3:1000比率混合。
4.根据权利要求3所述的制剂，其特征在于，所述的制剂与有机肥或农家肥混合后有效活菌数不小于1亿cfu/g。
5.权利要求1所述的沙福芽孢杆菌HMD9204或其菌悬液或其培养液在防治香蕉和茄子枯萎病中的应用。
6.权利要求2所述的菌种制剂在防治香蕉和茄子枯萎病中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810725632.2A CN108865934B (zh) | 2018-07-04 | 2018-07-04 | 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810725632.2A CN108865934B (zh) | 2018-07-04 | 2018-07-04 | 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108865934A CN108865934A (zh) | 2018-11-23 |
| CN108865934B true CN108865934B (zh) | 2022-06-28 |
Family
ID=64298822
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810725632.2A Active CN108865934B (zh) | 2018-07-04 | 2018-07-04 | 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108865934B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110862947B (zh) * | 2019-12-18 | 2020-08-11 | 江苏恒顺醋业股份有限公司 | 一株沙福芽孢杆菌、微生物菌剂及应用、食醋制备方法 |
| PE20231917A1 (es) | 2020-12-08 | 2023-11-28 | Blanes Spa | Formulacion agricola que comprende al menos una cepa bacteriana b. safensis rgm 2450, y/o una cepa bacteriana b. siamensis rgm 2529 y excipientes agricolas; uso de la formulacion y metodo para promover el crecimiento y/o aumentar el rendimiento de cultivos y/o protegerlos contra enfermedades y plagas |
| US20240251801A1 (en) * | 2021-05-18 | 2024-08-01 | AgBiome, Inc. | Compositions and methods for improving plant health and controlling plant disease |
| CN117210375B (zh) * | 2023-10-16 | 2024-07-12 | 陕西省生物农业研究所 | 一种沙福芽孢杆菌及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101186887A (zh) * | 2007-12-04 | 2008-05-28 | 华南农业大学 | 高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢杆菌203及应用 |
| CN102329756A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种防治香蕉枯萎病的白刺链霉菌株bwl15-4及其应用 |
| CN104560770A (zh) * | 2013-10-28 | 2015-04-29 | 北京中农赛世农业科技有限公司 | 一种微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN107641607A (zh) * | 2016-07-22 | 2018-01-30 | 上海农乐生物制品股份有限公司 | 一种增效型抗病菌及其培养方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20160289130A1 (en) * | 2012-11-15 | 2016-10-06 | Basf Corporation | Mulch and Potting Soil Compositions Containing Microorganisms and Related Methods |
-
2018
- 2018-07-04 CN CN201810725632.2A patent/CN108865934B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101186887A (zh) * | 2007-12-04 | 2008-05-28 | 华南农业大学 | 高效防治香蕉枯萎病的枯草芽孢杆菌203及应用 |
| CN102329756A (zh) * | 2011-09-28 | 2012-01-25 | 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 | 一种防治香蕉枯萎病的白刺链霉菌株bwl15-4及其应用 |
| CN104560770A (zh) * | 2013-10-28 | 2015-04-29 | 北京中农赛世农业科技有限公司 | 一种微生物菌剂及其制备方法和应用 |
| CN107641607A (zh) * | 2016-07-22 | 2018-01-30 | 上海农乐生物制品股份有限公司 | 一种增效型抗病菌及其培养方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Diversity, distribution, and antagonistic activities of rhizobacteria of Panax notoginseng;Ze-Yan Fan et al.;《J Ginseng Res》;20150521;第40卷;第97-104页 * |
| Water stress amelioration and plant growth promotion in wheat plants by osmotic stress tolerant bacteria;U.Chakraborty et al.;《WORLD JOURNAL OF MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY》;20121214;第29卷;第789-803页 * |
| 拮抗棉花枯萎病菌的地黄内生细菌筛选、鉴定和促生潜能;赵龙飞等;《微生物学报》;20201113;第61卷(第8期);第2338-2357页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108865934A (zh) | 2018-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102911878B (zh) | 一株棘孢木霉菌株及其应用 | |
| CN108865934B (zh) | 一种沙福芽孢杆菌hmd9204及其菌剂和应用 | |
| CN111004760B (zh) | 一株苏云金芽孢杆菌及其应用 | |
| CN110452832B (zh) | 一株耐酸性解淀粉芽孢杆菌Kc-5及其应用 | |
| CN105734000A (zh) | 一株有促生防病能力的多粘类芽孢杆菌nsy50 | |
| CN108728374B (zh) | 一株粘着剑菌dt8菌株及其在降解多效唑中的应用 | |
| CN103243030B (zh) | 一株用于防治柑橘木虱的刀孢轮枝菌菌株 | |
| CN116622649A (zh) | 一种广谱型青枯菌噬菌体pty21及其应用 | |
| CN112779192A (zh) | 一株对植物疮痂病有抑制作用的卡氏芽孢菌株dm4-2及其菌剂和应用 | |
| CN116286550B (zh) | 一株多功能普沙根瘤菌、含有其的微生物菌剂及应用 | |
| CN103333844B (zh) | 一株拮抗杨树炭疽病菌的菌株及其应用 | |
| CN118620795A (zh) | 一种防病促生长的沙福芽孢杆菌 | |
| CN115011486B (zh) | 一株淡紫拟青霉及其应用 | |
| CN110964644A (zh) | 一种青霉菌及其发酵方法与应用 | |
| CN104108964B (zh) | 一种全营养微生物生防有机肥的制备方法与应用 | |
| CN111808778B (zh) | 一株防治黄萎病的韦氏芽孢杆菌及其培养方法、菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN113528395A (zh) | 一株捕食番茄青枯菌的黄色黏球菌及其在番茄青枯病生物防控中的应用 | |
| CN113061559A (zh) | 一种复合生物菌剂及其在防治水稻稻瘟病和促进水稻生长中的应用 | |
| CN118146992A (zh) | 一株野尻链霉菌及其应用 | |
| CN108998395B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN117431191A (zh) | 一种假蕈状芽孢杆菌hdcp1及其应用 | |
| CN114456945B (zh) | 一种降解氟咯草酮的拟青霉菌及其应用 | |
| CN111349589B (zh) | 一种防治金线莲茎腐病的解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN115927052A (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用 | |
| CN108753629B (zh) | 一株具有耐盐能力的米根霉及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |