CN1087911A

CN1087911A - 雷怕霉素衍生物

Info

Publication number: CN1087911A
Application number: CN93116557A
Authority: CN
Inventors: D·A·霍尔特; 小·L·W·罗沙穆斯; J·I·卢恩戈
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1992-07-17
Filing date: 1993-07-17
Publication date: 1994-06-15
Also published as: WO1994002485A1; US5648361A; ZA935111B; DE69332484T2; EP0650489A1; EP0650489B1; DE69332484D1; JPH07509247A; MX9304360A; EP0650489A4; AU4680093A

Abstract

雷怕霉素衍生物，包括此类雷怕霉素衍生物和制药上可接受的载体或稀释剂的药物组合物，和使用此类衍生物来抑制致病真菌生长，诱发免疫抑制或治疗致癌肿瘤的方法都得到了公开。

Description

本发明涉及雷怕霉素（rapamycin）衍生物，包括此类衍生物的药物组合物以及使用此类雷怕霉素衍生物治疗致病真菌的方法、诱发免疫抑制的方法和治疗致癌肿瘤的方法。

雷怕霉素是一种自然存在的大环三烯抗菌素，它可通过在含水营养介质中培养一种生物体来制得。它的结构表征如下：

至少一种吸水链霉素的产生雷怕霉素的菌株被寄存在the Northern Utilization and Research Division，AgriculturalResearch Service，U.S.Department of Agriculture，Peoria，Illinois，U.S.A.，在寄存号NRRL 5491下。1975年12月30日出版的美国专利3，929，992公开了雷怕霉素和通过培养NRRL 5491制备它的方法，它的整个公开特此结合起来作为参考。

本发明涉及如下结构式的新型雷怕霉素衍生物：

其中：

R¹是选自由＝O，（-OR⁶，H）和（H，H）组成的一组;

R²是选自由＝O，（H，H）和（H，OH）组成的一组;

R³和R⁶各自独立地选自由-H，-C（＝O）R⁷，-C（＝O）OR⁷，-C（＝O）NHR⁷，和-C（＝S）OR⁷组成的一组;

R⁴是选自由＝O和（H，OR⁶）组成的一组;或R³和R⁴可被连在一起形成结构式A-C（R⁸）（R⁹）-O-B的桥，其中A是与连接在28位碳上的氧相连的价键和B是与30位碳相连的价键;

R⁵是选自由-H和C₁-C₄烷基组成的一组;

R⁷是选自由C₁-C₁₀烷基，C₃-C₆环烷基，芳基和杂环基组成的一组;

R⁸和R⁹是各自独立地选自由H，C₁-C₆烷基组成的一组，或R⁸和R⁹合在一起是＝O;

条件是，当R⁴是＝O时，R²是（H，OH）;

和涉及它的所有制药上可接受的盐类，水合物类或溶剂化物类。

本发明还涉及包括有效量的结构式Ⅱ的一种或多种化合物和制药上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。

本发明还涉及在人体内或其他动物体内需要的抑制致病真菌生长的方法，它包括对此类人或其他动物供给有效、无毒量的一种或多种结构式Ⅱ的化合物。

本发明还涉及在人或其他动物体内需要的诱发免疫抑制的方法，它包括对此类人或其他动物供给有效、无毒量的一种或多种结构式Ⅱ的化合物。

此外，本发明涉及治疗人体或其他动物体内致癌肿瘤的方法，包括对此类人或其他动物供给有效、无毒量的一种或多种结构式Ⅱ的化合物。

以及，本发明涉及制备新型的结构式Ⅱ的化合物的方法，其中R⁴是（H，OH）和R¹，R²，R³，R⁵，R⁶，R⁷，R⁸和R⁹如上所述，该方法包括让结构式

的化合物与三氯化铈和氰基硼氢钠的混合物相接触混合。

当任何一个取代基或可变因素（例如，芳基，烷氧基，R¹，R²，R³，R⁵，R⁶等）在任何一种结构式Ⅱ化合物的结构式中存在不止一次时，在每一种情况下该可变因素或取代基的定义与在每一种其他情况下它的定义是相互独立的，除非另有说明。取代基和/或可变因素的结合在本发明化合物的成分中是允许的，只有当此类结合得到一稳定的化合物时。

在取代基如R¹的定义中使用的括弧术语（例如（H，OR⁶））是想要反映出相关原子的两价上的取代基。本发明并不限于特殊的异构体，而且括弧内各部分的顺序并不表示一种特殊的构型。

正如这里所使用的，除了另有注明，术语“烷基”是想要既包括支链的又包括直链的饱和和不饱和脂肪烃基。优选的烷基具有1至6个碳原子，除非另有注明。此类烷基可任选地被一个或多个独立地选自由芳基，羟基，C₁-C₆烷氧基，酰氧基，氨基，N-酰氨基，酮基，卤素，氰基和羧基组成的一组的基团所取代。术语“烷基”还包括上述其中选自氧、氮和硫的杂原子取代烷基部分中一个或多个碳原子的基团。

正如这里所使用的，术语“芳基”是想要包括环，杂环，多环和杂多环的不饱和C₄-C₁₄部分，尤其是苯基或萘基。此类芳基可任选地被1至5个独立地选自由C₁-C₆烷基，芳基，羟基，被保护的羟基，C₁-C₆烷氧基，酰氧基，氨基，N-酰氨基，-S（O）n烷基，硝基，氰基，羧基和卤素组成的一组的基团所取代。

正如这里所使用的，术语“烷氧基”表示如这里定义的具有指定数目碳原子的烷基通过氧桥被连接。

正如这里所使用的，术语“酰氧基”是想要表示基团-OC（O）-（烷基）和-OC（O）-（芳基）。

正如这里所使用的，术语“氨基”是想要表示基团-NH₂，N（烷基）₂，-NH（烷基），-N（芳基）₂和-NH（芳基）。

正如这里所使用的，术语“N-酰氨基”是想要表示基团-NHC（O）-（烷基）和-NHC（O）-（芳基）。

正如这里所使用的，术语“酮基”意指-C（O）-部分。

正如这里所使用的，术语“卤素”是想要包括氟、氯、溴和碘。

正如这里所使用的，术语“环烷基”是想要包括具有特定数目碳原子的饱和的和不饱和的烃脂肪族环基团。此类环烷基可任选地被一个或多个独立地选自由芳基，羟基，C₁-C₆烷氧基，酰氧基，氨基，N-酰氨基，酮基和卤素组成的一组的基团所取代。

正如这里所使用的，术语“杂环”是想要包括一稳定的5至7元单或双环或稳定的7至10元双环杂环，它或者是饱和的或者是不饱和的，并且它由碳原子和1至3个独立地选自由N，O和S组成的一组的杂原子组成，其中的氮和硫杂原子可任选地被氧化，氮原子可任选地被季铵化，以及包括其中任何以上定义的杂环被稠合到苯环上的任何双环基团。杂环可在任何杂原子或碳原子上被连接，形成稳定的结构。此类杂环单元的例子包括但不限于哌啶基（2-，3-，4-），哌啶基（1-位），哌嗪基，嘧啶基，哒嗪基，噁唑基，呋喃基和噻吩基。杂环可以任选地以一种方式被1至4个独立地选自由C₁-C₆烷基，芳基，羟基，C₁-C₆烷氧基，酰氧基，氨基，N-酰氨基，硝基和卤素组成的基团所取代，以使得连接到杂原子上的碳原子不是直接被杂原子取代。

本发明优选的化合物包括以下化合物，其中一起或独立地：

1.R¹是（H，OH）;

2.R²是（H，OH）或＝O;

3.R³是H;

4.R⁴是＝O或（H，OH）;和

5.R⁵是H或CH₃。

特别优选的化合物是：

1.R¹是（H，OH），R²是＝O，R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-H。

2.R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-H。

3.R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是-H，R⁴是＝O，和R⁵是-H。

4.R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-CH₃。

5.R¹是（H，OH），R²是（H，H），R³是H，R⁴是（H，OH），和R⁵是H。

本发明的化合物可以以游离形式或，如果合适的话，以盐的形式存在。制药上可接受的盐和它们的制备对于那些本技术领域的熟练人员来说是公知的。本发明化合物的制药上可接受的盐包括此类化合物的普通无毒盐类或季铵盐类，它们由例如无机或有机酸和碱形成。

本发明的化合物可形成水合物或溶剂化物。带电荷的化合物当用水冻干时形成水合物类，或当用一种合适的有机溶剂在溶液中被浓缩时形成溶剂化物类。

本发明化合物通过以下所列的方法从雷怕霉素或它的一般变体制成。所使用的试剂或在文献中描述过，或在市场上可买到。

在C-30位被还原的雷怕霉素衍生物可通过用三氯化铈和氰基硼氢钠的混合物处理雷怕霉素而制备。用于该反应的合适溶剂包括乙酸和四氢呋喃的混合物。该反应在图A中被表征，雷怕霉素显示为起始原料;然而其他雷怕霉素衍生物可使用这种方法在C-30位被还原。

同时在C-14和C-30位被还原的本发明化合物（即，R²和R⁴＝（H，OH））可通过氢化二异丁基铝对雷怕霉素或它的衍生物的作用来制备。通过对同样还原方法的适当控制（限制反应时间和还原剂的量），可制备仅在C-14位被还原的化合物。该反应在图B中被表征（显示在C-14和C-30位同时还原），雷怕霉素作为起始原料。

同样，在图B中表征了C-13 O-甲基化衍生物的制备，它是通过用酸性甲醇处理来制成的。

在C-28和C-30位之间具有一个桥的本发明化合物可通过类似图C所示的方法来制备。C-30还原的衍生物与二烷氧基丙烷如二甲氧基丙烷接触生成所需要的化合物，其中R⁸和R⁹各自是甲基。用另一种方法，该还原的衍生物与酮缩醇（例如，（CH₃O）₂CR⁸R⁹）接触。

在C-28和C-30位之间具有一个桥的另一种类型的化合物可通过类似于图D中所示的方法来制备。C-30还原的衍生物与羰基二咪唑接触生成所需的化合物，其中R⁸和R⁹合在一起为＝O。

本发明的某些化合物可从新型的苯基硫羰碳酸酯中间体制得。这些中间体的制备和它们向本发明化合物的转变在图E中得到表征。如图E所示，雷怕霉素（尽管还可使用衍生化的雷怕霉素）在一种碱如二甲氨基吡啶（DMAP）存在下与苯基氯硫羰甲酸酯接触以制备在C-28和/或C-43原子上衍生的雷怕霉素。这些中间体可通过与一种以自由基为基础的还原剂如氢化三烷基锡或三（三甲基甲硅基）硅烷和一种自由基引发剂如偶氮二异丁腈（AIBN），过氧化苯甲酰或三乙基硼烷进行反应被转变为本发明的化合物。

可以按照在图F中表征的那样制备在C-43位具有氧代（＝O）部分的本发明化合物。图F表征了43-脱氢雷怕霉素的制备，它可用来作为制备本发明的其他化合物的中间体。

在C-28位衍生化的本发明化合物可通过使其中R⁵是H的一种化合物与一种合适的酰基氯（例如，R⁷C（O）Cl，R⁷OC（O）Cl，R⁷NHC（O）Cl或R⁷OC（S）Cl）在一种碱如二甲氨基吡啶存在下相接触来制得。

在以下本说明中提供的实施例提供了各种各样的制备本发明化合物的合成方法。

本发明还涉及包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效量的一种或多种结构式Ⅱ的化合物的药物组合物。

结构式Ⅱ的化合物是以普通剂量形式给药，这种形式是根据通常步骤使在治疗上有效量的化合物（“活性成分”）与标准药物载体或稀释剂结合而制得的。这些步骤可包括混合，制粒和压缩或按照适合于所需要的制备方法溶解各种成分。

可使用的药物载体，例如可以或者是固体，或者是液体。固体载体的例子是乳糖，石膏粉，蔗糖，滑石，明胶，琼脂，果胶，阿拉伯树胶，硬脂酸镁，硬脂酸等。液体载体的例子是糖浆，花生油，橄榄油，水等。类似地，该载体或稀释剂可包括现有技术中已公知的延时材料，例如单硬脂酸甘油酯，或单有二硬脂酸甘油酯或一起还有蜡，乙基纤维素，羟丙基甲基纤维素，甲基丙烯酸甲酯等。

可使用各种各样的药物形式。因而，如果使用固体载体，则制备方式可以是压片，以粉末或丸状形式放入硬明胶囊中或可以是片剂或锭剂的形式。固体载体的量可在大范围内变化，但优选在约25mg至约1g。如果使用液体载体，制剂方式将是糖浆，乳浊液，软明胶囊，在安瓿或管形瓶中的无菌注射溶液或悬浮液或非水液体悬浮液的形式。

为了获得稳定的水溶性剂量形式，本发明化合物的一种制药上可接受的盐被溶解在一种有机酸或无机酸的水溶液中，如0.3M琥珀酸溶液，或优选柠檬酸溶液。用另一种方法，酸性衍生物可被溶于合适的碱性溶液中。如果可溶性的盐形式不适用，本发明的化合物可溶在合适的助溶剂中或它们的混合物中。此类合适的助溶剂的例子包括但不限于乙醇，丙二醇，聚乙二醇300，多乙氧基醚80，甘油等，浓度范围在总体积的0-60%。

试验表明，本发明的化合物对于人或其他动物体内需要的在预防或治疗上抑制致病真菌生长是有用的，因此，本发明包括人或其他动物体内需要的抑制致病真菌生长的方法，它包括向此类人或动物供给有效、无毒量的结构式Ⅱ的化合物。

术语“致病真菌”是指能够在人或其他动物体内引起疾病的真菌。致病真菌的例子包括但不限于白色念株菌（Candida albicans）和其他念株菌（Candida）种类，石膏样小孢子菌（Microsporum gypseum），毛癣须疮菌（Trichophyton mentagrophytes），曲霉菌属（Asperqillus sp.）和孢子丝菌属（Sporotrichum sp.）。本发明化合物抑制致病真菌生长的能力可通过为此目的已知的和已用过的标准方法，例如下面描述的酵母测定法来证明或预测。

本技术领域的熟练人员能够通过常规实验测定为了抑制致病真菌生长将需要多少有效、无毒量的化合物。但一般，有效剂量将在每公斤体重每天约0.05-100mg的范围内。

试验表明，本发明的化合物也可用于诱发免疫抑制，即诱发人或动物的免疫系统的抑制作用。因此本发明涉及人或其他动物体内需要的在预防或治疗上诱发免疫抑制的方法，它包括向此类人或其他动物供给有效、无毒量的本发明的这种化合物。

本发明谷物诱发免疫抑制的能力可以由用于此目的的标准试验来证明，例如混合的淋巴细胞反应试验或测量抑制T-细胞增殖的试验，其中T-细胞增殖是通过胸腺嘧啶脱氧核苷的摄入来测量的。

本发明化合物在诱发免疫抑制方面有效用的事实意味着它们可用于治疗或防止对移植器官或组织（例如，肾，心脏，肺，骨髓，皮肤，角膜，等等）的抵抗或排斥作用;治疗或防止自身免疫，发炎，增殖性或过增殖性疾病，和免疫学上中介疾病的皮肤表现（例如，类风湿性关节炎，红斑狼疮，全身红斑狼疮，桥本氏淋巴瘤性甲状腺肿，多发性硬化，重症肌无力，1型糖尿病，眼色素层炎，肾病综合症，牛皮癣，特应性皮炎，接触性皮炎和进一步的湿疹性皮炎，脂溢性皮炎，扁平苔癣，Pemplugus，大疱性类天疱疮，表皮松解大疱，热激性皮炎，血管水肿（angiodemas），脉管炎（vasculitides），红斑，皮肤嗜曙红细胞增多，簇状脱发，等等）;治疗可逆转的障碍性气道疾病，肠炎和过敏反应（例如，腹腔疾病，直肠炎，嗜曙红性胃肠炎，肥大细胞增多症（mastocytosis），克罗恩氏（Chrohn′s）病和溃疡性结肠炎）和与食物相关的过敏反应（例如，migrane，鼻炎，和湿疹）。

本技术领域的熟练人员将能够通过常规实验测定为了诱发免疫抑制将需要多少有效、无毒量的化合物。但一般来说，有效剂量将在每公斤体重每天约0.05-100mg的范围内。

本发明化合物还应有用于治疗哺乳动物体内的致癌肿瘤。更准确地说，该化合物应有用于减小肿瘤的尺寸，抑制肿瘤增长和/或延长患有肿瘤的动物的存活时间。因而，本发明还涉及治疗人体内或其他动物体内致癌肿瘤的方法，它包括给此类人或动物供给有效、无毒量的结构式Ⅱ的化合物。本技术领域的熟练人员将能通过常规实验测量为了治疗致癌肿瘤将需要多少有效、无毒量的化合物。但一般来说，希望有效剂量在每公斤体重每天约0.05-100mg的范围内。

可根据前述用足以产生达到治疗或预防程度之效果的量进行治疗的方法，向人或其他动物供给本发明的化合物。本发明的此类化合物可以以通过根据现有技术将本发明化合物与常用的制药上可接受的载体或稀释剂相结合而制备的常规剂量形式给此类人或动物投药。本技术领域的熟练人员将会认识到，制药上可接受的载体或稀释剂的形式和特性取决于将与它结合的活性成分的量，给药途径和其他众所周知的可变因素。

本发明化合物的给药途径可以是口服，肠胃外投药，通过吸入法或局部法。这里所使用的术语肠胃外投药包括静脉内，肌内，皮下，直肠，阴道或腹膜内给药。一般优选皮下和肌内的胃肠外给药形式。

对于使用本发明的化合物预防性或治疗性地抑制致病真菌的生长，预防性或治疗性地诱发免疫抑制，或治疗致癌肿瘤，每天胃肠外给药或口服的剂量制度一般将在每公斤体重每天约0.05-100，但优选0.5-10mg的范围内。

本发明化合物还可通过吸入法给药。通过“吸入法”指鼻内和口内吸入法给药。通过常规技术可制备用于此类给药方法的合适剂量形式，如气雾剂制剂或计量的剂量吸入器。所使用的本发明化合物优选的剂量一般在约10-100mg的范围内。

本发明的化合物还可以局部给药。局部给药指非系统给药并包括本发明化合物的表皮外使用，口腔前庭外使用和将此化合物滴入耳，眼和鼻中，其中该化合物不大量进入血流。系统给药是指口服，静脉内，腹膜内和肌内给药。当然，对抑制致病真菌生长或诱发免疫抑制有治疗或预防效果时所需的本发明化合物（以下指活性成分）局部给药的量，将随所选择的化合物，被处理条件的性质和严重程度和接受治疗的动物而变化，最终根据医师自行处理的能力而定。本发明化合物合适的局部剂量在每公斤体重每天约1-100mg的范围内。

尽管活性成分作为原始化学药品单独给药是可能的，但优选以药物制剂的形式。对于局部给药，该活性成分可包括从0.001%至10%w/w，例如从1%至2%（重量）的制剂，虽然，它可包括高达10%w/w，但优选不超过5%w/w更优选从0.1%至1%w/w的制剂。

既兽医用又人体医用的本发明的局部制剂包括活性成分和一种或多种可接受的载体及任选地还可包括任何其他治疗成分。该载体在与制剂中其他成分相容和对它的接受者无害的意义上必须是“可接受的”。

适合于局部给药的制剂包括适合于从皮肤渗透到达所需治疗部位的液体或半液体制剂，如搽剂，洗液，乳油，软膏或糊剂，和适合于对眼，耳或鼻给药的滴剂。

根据本发明的滴剂可包括无菌的水或油溶液或悬浮液，并可通过将活性成分溶解在合适的灭细菌和/或灭真菌和/或任何其他合适的防腐剂，优选包括表面活性剂的水溶液中来制备。然后通过过滤将所得溶液澄清，转移到合适的容器中然后密封并通过高压灭菌法或保持在90-100℃达半小时来消毒。用另一种方法，可通过过滤将该溶液消毒并通过一种无菌技术将它转移到容器中。适合于包含在滴剂中的灭细菌和灭真菌剂的例子是硝酸苯汞或乙酸苯汞（0.002%），氯化苄烷铵（杀藻铵）（0.01%）和醋酸洗必太（0.01%）。适合于制备油溶液的溶剂包括甘油，稀醇和丙二醇。

根据本发明的洗液包括那些适合应用于皮肤或眼睛的洗液。一种眼睛洗液可包括一种任选地含有灭细菌剂的无菌水溶液，它可通过那些类似于滴剂制备方法的方法来制备。用于皮肤的洗液或擦剂还可包括一种加速干燥和冷却皮肤的试剂，如乙醇或丙酮，和/或一种湿润剂如甘油或一种油如蓖麻油或花生油。

根据本发明的乳油，软膏或糊剂是外用的活性成分的半固态制剂。它们可通过借助于合适的机器将细碎或粉末形式的活性成分，单独地或在含水或无水液体的溶液中或悬浮液中，与一种油脂或非油脂基底物相混合来制成。该基底物可包括烃类如硬、软或液体石蜡，甘油，蜂蜡，金属皂;粘液;天然来源的油如杏仁油，玉米油，花生油，蓖麻油或橄榄油;羊毛脂或它的衍生物，或脂肪酸如硬脂酸或油酸和醇如丙二醇或聚乙二醇。该制剂还可引入任何合适的表面活性剂如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂，比如脱水山梨糖醇酯类或它的聚氧乙烯衍生物。还可包括悬浮剂例如天然树胶，纤维素衍生物或无机材料如含硅的硅石，和其他成分如羊毛脂。

本技术领域的熟练人员将认识到，本发明化合物的各个剂量的最适宜量和间隔将取决于被处理条件的特性和程度，给药的形式、途径和部位，和所要被处理的特殊的动物，并且该最佳条件可通过常规技术来确定。本技术领域的熟练人员还应知道，最适宜的疗程，即在所限定的天数内每天所给的本发明化合物的剂量数，可由那些本技术领域熟练人员使用常规的疗程测定试验来确定。

不需要进一步的详细描述，可以相信，本技术领域熟练人员可依据以上描述，充分应用本发明。因此，以下实施例被认为仅作为说明性的而决不是限制本发明的范围。

实施例

Ⅰ组合物实施例

实施例A-胶囊组合物

胶囊形式的本发明药物组合物是通过用50mg粉末形式的本发明化合物，100mg乳糖，32mg滑石和8mg硬脂酸镁填充标准的两片形式硬明胶囊而制成。

实施例B-可注射的胃肠外组合物

适于注射给药形式的本发明药物组合物是通过搅拌在10%（体积）丙二醇和水中的1.5%（重量）本发明化合物而制备。该溶液通过过滤消毒。

实施例C-软膏组合物

本发明化合物 1.0g

白色软石蜡至 100.0g

将本发明化合物分散在小体积的赋形剂中并随后引入到大量的赋形剂中制得一种光滑、均匀的产物。然后用该分散体填充在可收缩的金属管中。

实施例D-局部用乳油组合物

本发明化合物 1.0g

Polawax GP200 20.0g

无水羊毛脂 2.0g

白色蜂蜡 2.5g

羟基苯甲酸甲酯 0.1g

蒸馏水至 100.0g

Polawax，蜂蜡和羊毛脂一起在60℃加热。加入羟基苯甲酸甲酯的溶液并通过高速搅拌得以均匀化。然后让温度降至50℃。然后加入本发明化合物，完全分散，一边慢速搅拌，一边冷却该组合物。

实施例E-局部用洗液组合物

本发明化合物 1.0g

单月桂酸脱水山梨醇酯 0.6g

多乙氧基醚20 0.6g

十八醇十六醇混合物 1.2g

甘油 6.0g

羟基苯甲酸甲酯 0.2g

纯化水B.P.至 100.00ml

将羟基苯甲酸甲酯和甘油于75℃溶解在70ml水中。单月桂酸脱水山梨醇酯，多乙氧基醚20和十八醇十六醇混合物在75℃一起熔化并加入到该水溶液中。搅匀所得浮液，边连续搅拌边冷却，然后加入作为在剩余水中悬浮液的本发明化合物。搅拌整个悬浮液直至均匀化。

实施例F-滴眼组合物

本发明化合物 0.5g

羟基苯甲酸甲酯 0.01g

羟基苯甲酸丙酯 0.04g

纯化水B.P.至 100.00ml

（B.P.＝British Pharmacopia）

将羟基苯甲酸甲酯和丙酯于75℃溶解在70ml纯化水中，然后将所得溶液冷却。然后加入本发明化合物，并且该溶液由膜过滤器（0.22mum孔尺寸）进行过滤来消毒并无菌地装入合适的消毒容器中。

实施例G-吸入法给药的组合物

容量15-20ml的气雾剂容器：将10mg本发明化合物与0.1-0.2%的润滑剂如多乙氧基醚85或油酸混合，并将该混合物分散在推进剂如氟里昂（优选1，2-二氯四氟乙烷和二氟氯甲烷的混合物）中，然后倾入适用于或者鼻内吸入法给药或者口内吸入法给药的适宜的气雾剂容器中。

实施例H-吸入法给药的组合物

容量15-20ml的气雾剂容器：将10mg本发明化合物溶于乙醇（6-8ml）中，加入0.1-0.2%的润滑剂如多乙氧基醚85或油酸;然后将它分散在推进剂如氟里昂（优选1，2-二氯四氟乙烷和二氟氯甲烷的混合物）中，并倾入到适用于或者鼻内吸入法给药或者口内吸入法给药的适宜的气雾剂容器中。

Ⅱ合成实施例

在以下实施例中，经过发酵获得雷怕霉素，并且，除非另有说明，所有的起始原料和化学试剂是从商业渠道获得。

实施例1 14-二氢雷怕霉素

（R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是H，R⁴是＝O，和R⁵是H）

在-78℃氩气下，用DIBAL（氢化二异丁基铝）（0.2ml的1MTHF溶液，0.20mmol，缓慢滴加）处理THF中的雷怕霉素（45.7mg，0.05mmol）。该反应混合物被搅拌30分钟，然后用6ml 1N盐酸于-78℃淬灭反应。加入乙酸乙酯（40ml）并分离出各层;所得有机萃取液依次用1N盐酸（6ml），水（6ml），盐水（6ml）洗涤，并由无水硫酸镁干燥。粗料通过prep HPLC（反相，用85∶15甲醇/水洗脱）提纯。分离出回收的雷怕霉素（19.2mg 42%）以及需进一步通过硅胶色谱法提纯的物料。在C-14上差向立体异构的两种14-二氢雷怕霉素因而以3∶1的比率被分离出来。

主异构体数据：

MS（ES⁺/NH₄OAC）m/z 938（M+Na⁺），933（M+NH₄ ⁺），884（M+H-MeOH⁺），866（M+H-MeOH＝H₂O⁺）;MS（ES/NH₄COOH）m/z 960（M+HCOO^-），914（M-H^-）。

次异构体的数据：

¹H NMR（CDCl₃，400 MHz）：_6.403（dd，J＝14.4，10.8 Hz，1H），6.281（dd，J＝14.4，10.2 Hz，1H），6.161（d，J＝0.3 Hz，1H），5.160（m，1H），4.406（br s，1H，H-14），4.179（d，J＝5.9 Hz，1H），3.789（d，J＝5.9 Hz，1H），3.399（s，3H），3.304（s，3H），3.163（s，3H），2.98-2.92（m，1H），MS（FAB/NaCl）m/z938（M+Na⁺）;UV（MeOH）_max266，277，288 nm.

实施例2 14，30-双二氢雷怕霉素

（R¹是（H，OH），R²是（H，OH，），R³是H，R⁴是（H，OH），和R⁵是H）

在-78℃氩气下，向雷怕霉素（91.4mg，0.10nmol）在THF（5ml）中的溶液中加入DIBAL（1.0ml 1M THF溶液，1.0mmol）。在-78℃搅拌15分钟之后，通过在-78℃加入10ml 1N盐酸淬灭反应，该混合物在乙酸乙酯（70ml）和盐水（10ml）之间分配。用盐水（10ml）洗涤有机层，经无水硫酸镁干燥，并蒸发。分光镜分析法显示该原料由14，28-双二氢-雷怕霉素和14-二氢-雷怕霉素的混合物组成。通过prep HPLC（反相，用85∶15甲醇/水洗脱）提纯得到两种14，28-双二氢雷怕霉素的异构体。

每种异构体的数据：

MS（FAB/NaCl）m/z 940（M+Na）;UV（MeOH）max 266，277，288nm.

实施例3 14，30-双二氢-13-O-甲基雷怕霉素

（R¹是（H，OH），R²是（H，OCH₃），R³是H，R⁴是（H，OH）和R⁵是H）

14，30-二氢雷怕霉素（15mg）在85∶15甲醇/水中的溶液在冷冻箱中贮放7天。HPLC和TLC分析显示了两种新化合物的出现。真空下蒸除溶剂，通过快速色谱法（硅胶，用70∶30-50∶50己烷/丙酮梯度洗脱）提纯得到标题化合物的两种异构体：次异构体2.1mg和主异构体3.8mg。

次异构体的数据：Rf（50∶50 己烷/丙酮）0.38;¹H NMR（CDCl₃400MHz）：_6.21-6.17（m，2H），6.09-6.03（m，1H），5.823（d，J＝8.7 Hz，1H），5.631（dd，J＝14.8，8.5 Hz，1H），5.564（d，J＝9.8 Hz，1H），5.15-5.10（m，2H），4.404（d，J＝8.2 Hz，1H，H-14变成尖锐的单峰经过D₂O交换），4.207（br d，J＝6.8 Hz，1H），3.835（br d，J＝11.7 Hz，1H），3.790（dd，J＝9.4，6.1Hz，1H），3.542（m，1H，H-30，变成三重峰，J＝5.5 Hz经过D₂O交换），3.418（s，3H），3.326（s，3H），3.172（dd，J＝6.8，5.5Hz，1H，H-29），3.137（s，3H），3.086（s，3H），2.98-2.92（m，1H），2.800（dd，J＝17.1，5.5Hz，1H），2.696（dd，J＝17.1，6.3Hz，1H），1.744（d，J＝1.1 Hz，3H），1.631（s，3H），1.184（d，J＝6.9 Hz，3H），1.020（d，J＝6.8 Hz，3H），1.006（d，J＝6.7 Hz，3H），0.913（d，J＝6.7 Hz，3H），0.896（d，J＝6.6 Hz，3H），0.684（q，J＝11.8，1H）;MS（FAB/NaCl） m/z 954（M+Na⁺）;UV（MeOH）_max266，277，288 nm.

主异构体的数据：

Rf（50∶50（己烷/丙酮）0.31;¹H NMR（CDCl₃，400 MHz）：_6.24-6.12（m，2H），6.050（dd，J＝14.8，9.6Hz，1H），5.835（d，J＝9.3 Hz，1H），5.674（dd，J＝14.8，7.8Hz，1H），5.632（d，J＝10.1 Hz，1H），5.20-5.14（m，1H），5.143（d，J＝4.6 Hz，1H），4.418（d，J＝7.6 Hz，1H，H-14，变成尖锐的单峰.经过D₂O交换），4.177（br d，J＝5.6 Hz，1H），3.874（br d，J＝12.8 Hz，1H），3.801（dd，J＝6.2，3.3Hz，1H），3.614（m，1H，H-30，变成dd，J＝5.2，3.5Hz，1H），经过D₂O交换），3.421（s，3H），3.419（s，3H），3.145（s，3H），3.092（s，3H），2.98-2.92（m，1H），2.769（dd，J＝16.3，7.6Hz，1H），2.566（dd，J＝16.3，4.1Hz，1H），1.741（d，J＝0.9 Hz，3H），1.630（s，3H），1.177（d，J＝6.9 Hz，3H），1.051（d，J＝6.7 Hz，3H），1.000（d，J＝6.3 Hz，3H），0.966（d，J＝6.8 Hz，3H），0.908（d，J＝6.7 Hz，3H），0.693（q，J＝11.9，1H）;MS（FAB/NaCl） m/z 954（M+Na⁺）;UV（MeOH）_max266，277，288nm.

实施例4 30-二氢-雷怕霉素

（R¹是（H，OH），R²是＝O，R³是H，R⁴是（H，OH）和R⁵是H）

在室温氩气气氛下将雷怕霉素（120mg，0.131mmol）溶于2ml无水四氢呋喃中。加入氯化铈（111）七水合物（390mg，1.05mmol），搅拌该混合物4小时。然后注射乙酸（15μl，0.262mmol），经过5分钟的时间后，加入氰基硼氢钠（9.0mg，0.143mmol）。搅拌所得混合物20分钟，然后注入含硅胶的快速色谱柱中。用2%甲醇/11%己烷/43%二氯甲烷/44%乙酸乙酯移动相洗脱得到雷怕霉素（10mg，Rf＝0.42，M⁺＝913）和30-二氢-雷怕霉素的两种异构体（46mg，Rf＝0.38，M⁺＝915）和（4.5mg，Rf＝0.35，M⁺＝915）。

实施例5 30-二氢-雷怕霉素-28，30-丙酮化合物

（R¹是（H，OH），R²是＝O，R³和R⁴是-C-C（CH₃）₂-C-，和R⁵是H）

将30-二氢-雷怕霉素（10mg，10.9μmol）溶解在500μl2，2-二甲氧基丙烷中。加入小部分Dowex 50X 8-200离子交换树脂，并在室温氩气气氛下将该混合物搅拌1小时。然后将该混合物注入快速色谱柱中。用以上溶剂体系洗脱得到二噁烷（4mg，Rf＝0.078，M⁺＝955）。

实施例6 14-脱氧-30（S）-二氢-雷怕霉素

（R¹是（H，OH），R²是（H，H），R³是H，R⁴是（H，OH）和R⁵是H）

将30-二氢-雷怕霉素（15mg，16.4μmol）在室温下溶于2.0ml的甲醇和吡啶为1∶1的混合物中。用硫化氢向该溶液鼓泡30分钟，然后密封该反应混合物并另外搅拌48小时。浓缩，随后经快速色谱法（用2%甲醇/11%己烷/43%二氯甲烷/44%乙酸乙酯流动相洗脱）得到标题化合物（12mg）;NMR：（_TMS）4.20（d，J＝6 Hz）H28，3.50（d，J＝.3Hz）H30，3.20（t，J＝6 Hz）H29.

实施例7 二氢-雷怕霉素的环状碳酸酯

（R¹是（H，OH），R²是＝O，R³和R⁴是-C-C（O）O-，和R⁵是H）

在氩气气氛下将30-二氢-雷怕霉素（10mg，10.9μmol）溶于300μl甲苯中。加入N，N-羰基二咪唑（5.3mg，33μmol），并将该混合物在60℃搅拌24小时。用上述溶剂体系对该混合物进行快速色谱法分离得到标题化合物。

Ⅲ生物学实施例

使用以下测定方法分析本发明化合物的抗真菌和免疫抑制的活性。

抗真菌活性测定

将以对数生长的酵母有机体（酿酒酵母SaccharomycesCerevisiac）置于装在盘中的完全琼脂介质（YPD）上。将溶于合适的含水或有机溶剂中的化合物置于在琼脂中打出的小孔中。这些盘培育48小时，并测量抑制区域。在该测定方法中试验的所有本发明化合物都表现出抗真菌活性。

免疫抑制活性的有丝分裂发生测定

来自BDFl雌鼠的脾脏细胞用10%胎牛血清以5×10⁶/ml固定在RPMI中。该悬浮液的一百毫升等分试样（5×10⁵细胞）被分配在96-孔圆底微滴度盘（Linbro，Flow Laboratories）中。加入伴刀豆球蛋白A（5μg/ml）作为促细胞分裂激发剂，而在微滴度孔中的最终体积用RPMI调节至200μl。细胞培养物在5%CO₂气氛中于37℃被培育72小时，并用0.5μCi³H-胸腺嘧啶脱氧核苷（比活性2.00 Ci/mole）进行脉冲该72小时培养的最后18小时。这些细胞被收集在自动多重样品收集器上并在贝克曼液体闪烁计数器中计数与细胞有关的放射性。该结果被表达为四次测量的平均值。细胞存活力可在72小时培养后用锥虫蓝排斥来测定。在加入细胞之前，将所要试验的化合物在适宜的稀释度下加入到微滴度盘中。在该测定中被试验的所有本发明化合物都表现出免疫抑制活性。

在表1中提供了本发明化合物的这两种测定（即抗真菌活性测定和免疫抑制活性的有丝分裂发生测定）的结果。

表 1

生物活性

化合物酵母有丝分裂

IC12(Ng/mL) IC50(nM)

Ex.1^*,主异构体 13 10

Ex.1,次异构体 20 ND

Ex.2,异构体1 40 1-10

Ex.2,异构体2 135 1-10

Ex.3,主异构体 250 100-1000

Ex.3,次异构体 235 ND

Ex.4,异构体1 6 2

Ex.4,异构体2 19 0.1-1

Ex.5 3500 100-1000

Ex.6 180 >1000

＊Ex.指其制备方法被本公开所指定的合成实施例描述过的化合物。

ND＝未测

尽管上述说明和实施例充分描述了本发明及其优选的实施方案，但应明白，本发明不限于在以下权利要求范围内所特别公开的实施方案。

Claims

1、结构式

的化合物

其中

R¹是选自由=O，(-OR⁶，H)和(H，H)组成的一组；

R²是选自由=O，(H，H)和(H，OH)组成的一组；

R³和R⁵是独立地选自由-H，-C(=O)R⁷，-C(=O)OR⁷，-C(=O)NHR⁷，和-C(=S)OR⁷组成的一组；

R⁴是选自由=O和(H，OR⁶)组成的一组；或R³和R⁴可连在一起形成结构式A-C(R⁸)(R⁹)-O-B的桥，其中A是与连接在28位碳上的氧相连的价键和B是与30位碳相连的价键；

R⁵是选自由-H和C₁-C₄烷基组成的一组；

R⁷是选自由C₁-C₁₀烷基，C₃-C₆环烷基，芳基，和杂环基组成的一组；

R⁸和R⁹是独立地选自由H，C₁-C₆烷基组成的一组，或R⁸和R⁹合在一起是=O；

条件是，当R⁴是=O时，R²是(H，OH)；

以及，它的所有制药上可接受的盐类，水合物类或溶剂化物类。

2、权利要求1的化合物，其中R¹是（H，OH）。

3、权利要求1的化合物，其中R²是（H，OH）。

4、权利要求1的化合物，其中R³是H。

5、权利要求1的化合物，其中R⁴是选自由＝O和（H，OH）组成的一组。

6、权利要求1的化合物，其中R⁵是H。

7、权利要求1的化合物，其中：

（a）R¹是（H，OH），R²是＝O，R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-H;

（b）R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-H;

（c）R¹是（H，OH），R²是（H，OH），R³是-H，R⁴是＝O，和R⁵是-H;

（d）R¹是（H，OH），R²是（H，OCH₃），R³是-H，R⁴是（H，OH），和R⁵是-H;或

（e）R¹是（H，OH），R²是（H，H），R³是H，R⁴是（H，OH），和R⁵是H。

8、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂，和有效治疗或预防量的权利要求1的一种或多种化合物。

9、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求2的一种或多种化合物。

10、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求3的一种或多种化合物。

11、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求4的一种或多种化合物。

12、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求5的一种化合物。

13、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求6的一种化合物。

14、一种药物组合物，包括一种制药上可接受的载体或稀释剂和有效治疗或预防量的权利要求7的一种化合物。

15、一种在人或其他动物体内需要的抑制致病真菌生长的方法，包括向此类人或其他动物供给有效、无毒量的权利要求1的化合物。

16、一种在人或其他动物体内需要的诱发免疫抑制的方法，包括向此类人或其他动物供给有效、无毒量的权利要求1的化合物。

17、一种治疗人或其他动物体内致癌肿瘤的方法，包括向此类人或动物供给有效、无毒量的权利要求1的化合物。

18、一种制备其中R⁴是（H，OH）的权利要求1的化合物的方法，包括使结构式

的化合物，其中：

R¹是选自由＝O，（-OR⁶，H）和（H，H）组成的一组;

R²是选自由＝O，（H，H）和（H，OH）组成的一组;

R³和R⁶是独立地选自由-H，-C（＝O）R⁷，-C（＝O）OR⁷，-C（＝O）NHR⁷，和-C（＝S）OR⁷组成的一组;

R⁵是选自由-H和C₁-C₄烷基组成的一组;

R⁷是选自由C₁-C₁₀烷基，C₃-C₆环烷基，芳基，和杂环基组成的一组;和

R⁸和R⁹是独立地选自由H，C₁-C₆烷基组成的一组，或R⁸和R⁹合在一起是＝O;

与三氯化铈和氰基硼氢钠的混合物接触反应。