[go: up one dir, main page]
More Web Proxy on the site http://driver.im/

CN108553424B - 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品 - Google Patents

一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品 Download PDF

Info

Publication number
CN108553424B
CN108553424B CN201810496158.0A CN201810496158A CN108553424B CN 108553424 B CN108553424 B CN 108553424B CN 201810496158 A CN201810496158 A CN 201810496158A CN 108553424 B CN108553424 B CN 108553424B
Authority
CN
China
Prior art keywords
amoxicillin
drug
nano
polyglutamic acid
dialysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810496158.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108553424A (zh
Inventor
陈鹏程
郑璞
任东雪
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201810496158.0A priority Critical patent/CN108553424B/zh
Publication of CN108553424A publication Critical patent/CN108553424A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108553424B publication Critical patent/CN108553424B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/43—Compounds containing 4-thia-1-azabicyclo [3.2.0] heptane ring systems, i.e. compounds containing a ring system of the formula, e.g. penicillins, penems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品，其包括，混合：将阿莫西林、聚谷氨酸与水混合；滴加：混合后，将阿莫西林、聚谷氨酸水溶液滴加到壳聚糖水溶液中；透析：滴加后置于透析袋中透析。本发明制备的纳米颗粒带负电荷，可以通过表面吸附及其内部氢键作用和静电吸附作用结合药物，且克服了传统化学载药的复杂操作和释放困难的问题，通过静电络合药物实现药物pH响应型释放，实现了药物在胃部释放量低而在肠道释放量高的理想状态。本发明实现负载阿莫西林的纳米颗粒在胃酸条件下释放量低而在肠道生理条件下完全释放，减少了药物对胃部的刺激，增加了药物在肠道的缓释时间，提高了药物利用率。

Description

一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品
技术领域
本发明属于医用生物材料技术领域，具体涉及一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品。
背景技术
口服给药相对于注射给药是一种方便、无疼痛、无感染的较舒适的给药方式，其流程为药物从口腔进入到胃部，再进入到肠道，被肠道吸收进入到全身血液循环。现有利用聚合物制备的药物载体虽然能提高药物在消化道中以及血液中的溶解性和稳定性，但是这些体系具有一定的缺陷：药物缓释到完全释放需要24到48h左右。现实是药物在肠道中的停滞时间只有3-20h左右，因此会使得药物的利用率较低。2013年中国专利CN 102698279B公布了一种两亲性γ-聚谷氨酸纳米载体的制备，但是其包载药物后在pH 7.4下80h左右才释放40％，不适用于口服给药体系。Ashish Dev等人利用聚乳酸和壳聚糖制备药物载体，药物在24h左右才能完全释放，更不具备pH响应性能，更不适合口服给药体系(CarbohydratePolymers，2010，80：833–838)。因此，要实现装载药物在肠道细胞间隙的特定部位快速释放，需要给与载药体系对人体消化道pH响应的特性。一个较为理想的口服给药体系应该满足在胃部强酸性环境中(pH1.0～2.5)尽可能避免药物释放；进入到肠道环境中(pH 5.0～7.4)，在短时间内(6～10小时)完全释放出所装载的药物，便于药物在肠道细胞间隙更好的被吸收进入到血液循环中。
阿莫西林，别名安莫西林、安默西林等，为一种常用的青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素，其在酸性条件下稳定，胃肠道吸收率达90％。阿莫西林杀菌作用强，穿透细胞膜的能力也强。是目前应用较为广泛的口服半合成青霉素之一，其制剂有胶囊、片剂、颗粒剂、分散片等等，现在常与克拉维酸合用制成分散片。阿莫西林主要用于治疗肺炎链球菌、金黄色葡萄糖球菌、溶血性链球菌和流感嗜血杆菌等造成的呼吸道感染和皮肤软组织感染，同时也可用于敏感大肠埃希菌、奇异变形杆菌等所致的泌尿生殖系统感染。中国专利CN107496360A公布了用聚酯，醋酸酯、聚乙二醇等制备阿莫西林缓释剂的方法，虽然提高了阿莫西林的水溶性，但是制备工艺繁琐，药物缓释时间较长，不适合人体口服给药体系。2016年中国专利CN105919978B用PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)制备的阿莫西林微球胶囊虽然具备pH响应性能，但是在pH7.2下72h才能使药物完全释放，降低了药物在肠道的利用率。中国专利CN101889984A用羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素钛酸酯(CAP)等制备阿莫西林肠溶剂，虽可以控制药物不在胃部释放，但是其制备流程复杂，所需化学试剂较多，生物相容性差，不利于人体口服体系。现有阿莫西林胃溶性口服制剂，就是说阿莫西林在胃液酸性环境下释放，但是此类制剂容易对胃黏膜造成刺激，引起多种腹痛、恶心等多种不良反应，更不适合于有胃病的患者使用。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。
因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法，其包括，
混合：将阿莫西林、聚谷氨酸与水混合；
滴加：混合后，将阿莫西林、聚谷氨酸水溶液滴加到壳聚糖水溶液中；
透析：滴加后置于透析袋中透析。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：所述混合，其中，所述阿莫西林浓度为1～4g/L，所述聚谷氨酸浓度为2～6g/L。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：所述滴加，其中，所述壳聚糖浓度为0.1～0.5g/L，滴加速度为2～10ml/h，温度为25℃，条件为避光、于600～800rpm搅拌，所述聚谷氨酸与所述壳聚糖的摩尔比为1：2～4：1。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：所述滴加，包括使用微量注射泵滴加，所述微量注射泵针头的内径为0.1～0.2mm，外径为0.2～0.6mm。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：所述透析，包括置于MWCO＝8000～14000的透析袋中透析至透析液中检测不到阿莫西林的紫外吸收。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：还包括，
干燥：冷冻干燥经过透析的溶液，得到所述纳米载体。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：还包括，进行所述滴加后，分别调节为pH 2.5、4.0、5.0、6.0、7.4，采用马尔文纳米粒径仪测定其不同pH下的电位和粒径，选用表面分别带正、负电荷的两种pH＝2.5时的粒径为200nm的纳米载体。
作为本发明所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法的优选方案：所述聚谷氨酸包括采用枯草芽孢杆菌发酵产生的聚谷氨酸，其分子量为70万道尔顿以上。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供权利要求1～8任一所述的方法制得的纳米载体，其中：所述纳米载体中，阳离子纳米载体在酸性条件下药物释放率为40％，在pH 7.4下释放达到95％，阴离子纳米载体在酸性条件下药物释放为25％，在pH 7.4时，药物释放达到80％。
本发明的有益效果：本发明制备的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在强酸性条件(胃酸pH 2.5)下形态良好，为单一均匀的球形结构。本发明制备的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs抗杂蛋白吸附能力强，生物相容性良好。本发明γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在胃部强酸环境下释放量低，在肠道及其细胞间隙生理条件下释放量高。
相比于通过传统的单纯扩散机制包埋负载药物的方式，本发明制备的纳米颗粒带负电荷，可以通过表面吸附及其内部氢键作用和静电吸附作用结合药物，且克服了传统化学载药的复杂操作和释放困难的问题，通过静电络合药物实现药物pH响应型释放，实现了药物在胃部释放量低而在肠道释放量高的理想状态。本发明实现负载阿莫西林的纳米颗粒在胃酸条件下释放量低而在肠道生理条件下完全释放，减少了药物对胃部的刺激，增加了药物在肠道的缓释时间，提高了药物利用率。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1为本发明两种γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在胃酸条件下的TEM表征图。
图2为本发明两种γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在胃酸条件下的SEM表征图。
图3为本发明不同聚谷氨酸水溶液的滴加速度对粒径清晰稳定性的影响TEM图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
本发明pH响应型的载药纳米颗粒γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs的制备方法如下：
(1)γ-PGA/CS NPs的制备：将0.1-5g/L的聚谷氨酸水溶液，用微量注射泵按照2-10ml/h的速度滴加到0.1-1.0g/L的壳聚糖水溶液中，室温，600-800rpm搅拌过夜，用2M盐酸和2M氢氧化钠调节pH 2.5、4.0、5.0、6.0、7.4，采用马尔文纳米粒径仪测定其不同pH下的电位和粒径。
(2)γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs的制备：将阿莫西林(1-4g/L)与2-6g/L的聚谷氨酸水溶液混合均匀，将其混合物用微量注射泵按照2-10ml/h滴加到0.1-0.5g/L的壳聚糖水溶液中，室温、避光、600-800rpm搅拌过夜，将其置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，透析至透析液中检测不到阿莫西林的紫外吸收。利用冷冻干燥来获得装载药物的纳米颗粒，采用DLS、SEM、TEM等表征γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs的大小和形态，测定γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs包埋率和载药率。取1-6ml上述不同投药量制备的γ-PGA/CS-AmoxicllinNPs冷冻干燥，将冻干的产物用DMSO溶解，稀释2-10倍，利用紫外分光光度计测定其在波长272nm下的吸光度，根据阿莫西林在DMSO中的标准曲线，按照公式计算药物包封率及其载药率。
包埋率(％)＝(负载的药物质量/总投药量)×100％
载药率(％)＝(负载的药物质量/NPs总质量)×100％
(3)γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs生物相容性实验
γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在不同pH下抗蛋白(牛血清蛋白)吸附能力：将制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs用1M HCl和1M NaOH调节pH 2.5、4.0、6.5、7.4，取10ml不同pH下的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，与10ml 0.5g/L的牛血清蛋白溶液混合，置于37℃110rpm摇床反应，间隔一定时间，取出1ml混合溶液，14000rpm离心30min，取上清液，稀释2-10倍，用考马斯亮蓝法测定未吸附蛋白含量。
Figure BDA0001669227580000051
其中Ma和Mb指吸附在γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs上的蛋白含量和蛋白在反应溶液中的总含量。
(4)γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs抗离子破环能力测定：取5ml制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，浸入20ml相同pH不同离子强度(10mM，25Mm，100mM，1M，2M)的缓冲液中，37℃，110rpm摇床开始透析，间隔一定时间取5ml透析液，同时补加5ml新鲜的缓冲液使得总释放介质体积不变，置于272nm处测定其吸光度，根据标准曲线算出不同时刻的药物浓度，从而计算其不同时间段的药物累积释放量。每个离子浓度下设置3个平行对照，取其平均值为最终结果。
Figure BDA0001669227580000052
其中V0为总释放介质的体积，Ci为第i次取样的药物(阿莫西林)浓度(mg/L)，V为每次取样的体积，m为透析袋内的总载药量。
(5)不同pH下体外释放实验
γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs的体外药物释放实验在体外模拟消化道缓冲液中进行，包括pH为2.5、6.5(25mM)柠檬酸缓冲液和pH为7.4(25mM)的磷酸钠缓冲液，取5ml制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，浸入20ml不同pH的缓冲液中，37℃，110rpm摇床开始透析，间隔一定时间取5ml透析液，同时补加4ml新鲜的缓冲液使得总释放介质体积不变，置于272nm处测定其吸光度，根据标准曲线算出不同时刻的药物浓度，从而计算其不同时间段的阿莫西林累积释放量。每个pH下设置3个平行对照，取其平均值为最终结果。
Figure BDA0001669227580000061
其中V0为总释放介质的体积，Ci为第i次取样的药物(阿莫西林)浓度(mg/L)，V为每次取样的体积，m为透析袋内的总载药量。
(6)模拟消化道胃液-肠液pH响应
取5ml制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，浸入20ml pH 2.5(胃液)的缓冲液中，37℃，110rpm摇床开始透析，2-5h后调节透析液的pH至pH 6.5(肠道)，10h左右调节pH至7.4(肠道细胞间隙)，间隔一定时间取5ml透析液，按照上述方法计算阿莫西林累积释放率。
实施例1：
γ-PGA/CS NPs(+)和γ-PGA/CS NPs(-)的制备：
将0.1-5g/L的聚谷氨酸水溶液，用微量注射泵按照2-10ml/h的速度滴加到不同浓度(0.1-1.0g/L)的壳聚糖水溶液中，25℃、600-800rpm搅拌过夜，用2M盐酸和2M氢氧化钠调节pH 2.5、4.0、5.0、6.0、7.4，采用马尔文纳米粒径仪测定其不同pH下的电位和粒径。最后选用表面分别带正、负电荷的两种粒径为200nm的γ-PGA/CS NPs作为阿莫西林药物包埋的载体，γ-PGA/CSNPs在pH 2.5下粒径约为200nm，在pH 7.4下为800nm左右。
表1：γ-PGA浓度对γ-PGA/CS NPs粒径的影响
Figure BDA0001669227580000062
Figure BDA0001669227580000071
表2：CS浓度对γ-PGA/CS NPs粒径的影响
Figure BDA0001669227580000072
表3：滴加速度的选择
Figure BDA0001669227580000073
表4：γ-PGA的羧基和CS的氨基摩尔比对粒径和电位的影响
Figure BDA0001669227580000074
表5：γ-PGA的羧基和CS的氨基摩尔比为1:2和2:1(即表面分别带正、
负电荷的纳米颗粒)在不同pH下的粒径和电位变化
Figure BDA0001669227580000075
Figure BDA0001669227580000081
图3为本发明不同聚谷氨酸水溶液的滴加速度对粒径清晰稳定性的影响TEM图。从图3中，左图为以60ml/h的速度滴加聚谷氨酸水溶液的TEM图，右图为一次性滴加聚谷氨酸水溶液的TEM图，从表3及图3可知，一次性滴加或以60ml/h的速度滴加俊辉使纳米载体发生粘连。
实施例2：
γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs(+)和γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs(-)的制备：
将阿莫西林(1-4g/L)与2-6g/L的分子量为70万道尔顿以上的聚谷氨酸水溶液混合均匀，按照实施例1的方法将其混合物用微量注射泵(针头的内径0.1-0.2mm，外径0.2-0.6mm)按照2-10ml/h滴加到0.1-0.5g/L的壳聚糖水溶液中，室温、避光、600-800rpm搅拌过夜制备γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs，将其置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)透析直至透析液中检测不到阿莫西林的紫外吸收，冷冻干燥获得装载阿莫西林的γ-PGA/CS-AmoxicllinNPs，扫描电镜观察其表观形态，同时用pH 2.5的柠檬酸缓冲液溶解配制成1mg/ml的溶液，利用透射电镜观察溶液下的外观形态。(如图1，两种γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs透射电镜TEM图，图2，两种γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs扫描电镜SEM图)。用DMSO溶解γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs，稀释2-10倍，利用紫外分光光度计测定其在波长272nm下的吸光度，计算药物包埋率及其载药率。结果表1显示γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs(+)和γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs(-)在投药量为1.5:2(w:w)时，药物包埋率分别为24％，35％，载药率为4.58％，15.66％。
表3粒径大小对包埋率和载药率的影响
Figure BDA0001669227580000082
Figure BDA0001669227580000091
表4不同投药量对γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs的包埋率与载药率的影响
Figure BDA0001669227580000092
实施例3：
离子浓度对γ-PGA/CS-Amoxicllin 1.2NPs药物释放的影响：
取5ml按照实例2制备的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，浸入20ml相同pH不同离子强度(10mM，25mM，100mM，500mM，1M，2M)的缓冲液中，37℃，110rpm摇床开始透析，间隔一定时间取5ml透析液，同时补加相同体积的新鲜缓冲液，测定其不同时间下阿莫西林的累积释放率。结果表3显示两种γ-PGA/CS-AmoxicllinNPs均在离子浓度10mM-100mM范围内稳定性良好。
表3离子浓度对γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs释放的影响(pH 25，20h)
Figure BDA0001669227580000093
Figure BDA0001669227580000101
实施例4：
不同pH下的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs释放阿莫西林的规律：
在体外模拟消化道pH缓冲液中，进行的体外γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs药物释放实验，包括pH为2.5、6.5(25mM)柠檬酸缓冲液和pH为7.4(25mM)的磷酸钠缓冲液，取5ml按照实施例2制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液，置于透析袋中(MWCO＝8000-14000)，浸入20ml不同pH的缓冲液中，37℃，110rpm摇床开始透析，间隔一定时间取5ml透析液，同时补加5ml新鲜的缓冲液，测定不同时间下的累积释放量。结果显示γ-PGA/CS-AmoxicllinNPs(+)在酸性(pH 2.0-4.0)条件下释放率为40％，在pH 7.4下就能释放95％。γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs(-)在pH 2.0-4.0时，药物释放为25％，而pH 7.4时，药物释放达到80％。
实施例5：
模拟消化道胃液-肠液pH响应：
取5ml按照实施例2制备好的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs溶液透析袋中浸入20mlpH 2.5(胃液)的缓冲液中，按照实施例4的方法，开始透析，2-5h后调节透析液的pH至6.5(肠道)，10h左右调节pH至7.4(肠道细胞间隙)。结果如表4显示两种γ-PGA/CS-AmoxicllinNPs都具有良好的pH响应性能，都可以实现在胃酸性条件下释放量低而肠道弱酸和弱碱条件下释放量高。
表4两种γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs模拟胃肠道的pH响应释放率
Figure BDA0001669227580000102
实施例6：
微生物发酵产高分子量聚谷氨酸(γ-PGA)：
将枯草芽孢杆菌HB-1接种于20-30ml LB液体培养基，30-37℃，110-200rpm活化12-24h，按照5-10％的接种量接种至发酵培养基，30-37℃，110-220rpm培养36-48h后，收集发酵液，用1M盐酸调pH至2.5-3.5，8000-12000rpm离心30-45min去除菌体，调回pH7.0-7.5，加入3倍体积的乙醇沉淀，10000-12000rpm离心20-30min去除上清液(培养基成分)，沉淀用去离子水重悬溶解，再次用乙醇沉淀，离心后沉淀再次用去离子水重悬，置于透析袋中(8000-14000)透析3-5天，冷冻干燥成γ-PGA纯品。采用凝胶色谱柱测试γ-PGA分子量，为500万。
发酵培养基：还原糖60-100g/L，胰蛋白胨30-45g/L，一水谷氨酸钠40-60g/L，MgSO4-7H2O 0.5-1g/L，CaCl2 0.5-1g/L，NaCl 5-10g/L。
综上，本发明制备的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在强酸性条件(胃酸pH 2.5)下形态良好，为单一均匀的球形结构。本发明制备的γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs抗杂蛋白吸附能力强，生物相容性良好。本发明γ-PGA/CS-Amoxicllin NPs在胃部强酸环境下释放量低，在肠道及其细胞间隙生理条件下释放量高。
相比于通过传统的单纯扩散机制包埋负载药物的方式，本发明制备的纳米颗粒带负电荷，可以通过表面吸附及其内部氢键作用和静电吸附作用结合药物，且克服了传统化学载药的复杂操作和释放困难的问题，通过静电络合药物实现药物pH响应型释放，实现了药物在胃部释放量低而在肠道释放量高的理想状态。本发明实现负载阿莫西林的纳米颗粒在胃酸条件下释放量低而在肠道生理条件下完全释放，减少了药物对胃部的刺激，增加了药物在肠道的缓释时间，提高了药物利用率。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法，其特征在于：包括，
混合：将阿莫西林、聚谷氨酸与水混合，其中，所述阿莫西林浓度为1～4g/L，所述聚谷氨酸浓度为2～6g/L；
滴加：混合后，将阿莫西林、聚谷氨酸水溶液滴加到壳聚糖水溶液中，其中，所述壳聚糖浓度为0.1～0.5g/L，滴加速度为2～10ml/h，温度为25℃，条件为避光、于600～800rpm搅拌，所述聚谷氨酸与所述壳聚糖的摩尔比为1：2～4：1；进行滴加后，分别调节pH＝2.5、4.0、5.0、6.0、7.4，测定其不同pH下的电位和粒径，选用表面分别带正、负电荷的并且pH＝2.5时的粒径为200nm的两种纳米载体；
透析：滴加后置于透析袋中透析，为置于MWCO＝8000～14000的透析袋中透析至透析液中检测不到阿莫西林的紫外吸收；
干燥：冷冻干燥经过透析的溶液，得到所述纳米载体。
2.如权利要求1所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法，其特征在于：所述滴加，包括使用微量注射泵滴加，所述微量注射泵针头的内径为0 .1～0.2mm，外径为0.2～0.6mm。
3.如权利要求1或2所述的口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法，其特征在于：所述聚谷氨酸包括采用枯草芽孢杆菌发酵产生的聚谷氨酸，其分子量为70万道尔顿以上。
4.如权利要求1～3中任一所述的方法制得的纳米载体，其特征在于：所述纳米载体中，阳离子纳米载体在酸性条件下药物释放率为40％，在pH7.4下释放达到95％，阴离子纳米载体在酸性条件下药物释放为25％，在pH 7.4时，药物释放达到80％。
CN201810496158.0A 2018-05-22 2018-05-22 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品 Active CN108553424B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810496158.0A CN108553424B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810496158.0A CN108553424B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108553424A CN108553424A (zh) 2018-09-21
CN108553424B true CN108553424B (zh) 2021-02-12

Family

ID=63539661

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810496158.0A Active CN108553424B (zh) 2018-05-22 2018-05-22 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108553424B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113243532A (zh) * 2021-06-10 2021-08-13 曲阜师范大学 一种能改善肠易激综合征膳食补充剂天然凝胶及其制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103146002A (zh) * 2013-03-04 2013-06-12 上海大学 可注射用聚谷氨酸化学交联水凝胶及其制备方法
CN104606680A (zh) * 2014-12-29 2015-05-13 天津北洋百川生物技术有限公司 一种负载药物的γ-聚谷氨酸水凝胶的制备方法
CN106389391A (zh) * 2016-09-18 2017-02-15 天津北洋百川生物技术有限公司 一种适用于儿童的新型用药剂型及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103146002A (zh) * 2013-03-04 2013-06-12 上海大学 可注射用聚谷氨酸化学交联水凝胶及其制备方法
CN104606680A (zh) * 2014-12-29 2015-05-13 天津北洋百川生物技术有限公司 一种负载药物的γ-聚谷氨酸水凝胶的制备方法
CN106389391A (zh) * 2016-09-18 2017-02-15 天津北洋百川生物技术有限公司 一种适用于儿童的新型用药剂型及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Reinforcement of pH-Responsiveγ-Poly(glutamic acid)/Chitosan Hydrogel for Orally Administrade Colon-Targeted Drug Delivery;Bo Gi Park等;<<Journal of applied polymer science>>;20130105;文章摘要，第2页左栏第2段至右栏第1段，第5页右栏第1段 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108553424A (zh) 2018-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Sinha et al. Chitosan microspheres as a potential carrier for drugs
Tønnesen et al. Alginate in drug delivery systems
Varshosaz The promise of chitosan microspheres in drug delivery systems
US20050226905A1 (en) Biocompatible compositions as carriers or excipients for pharmaceutical and nutraceutical formulations and for food protection
TWI439288B (zh) 藥用載體及其製備方法與用途
Zheng et al. Biodegradable and redox-responsive chitosan/poly (L-aspartic acid) submicron capsules for transmucosal delivery of proteins and peptides
CN110623918A (zh) 羧甲基壳聚糖/海藻酸钠纳米水凝胶及其制备方法和应用
CN101690716A (zh) 一种载生长激素海藻酸钙壳聚糖缓释微球及其应用
CN108553424B (zh) 一种口服阿莫西林pH响应型纳米载体的制备方法及其产品
JP2013537221A (ja) 改良された経口標的化薬物送達システム
CN112386584B (zh) 一种细菌响应性兽用恩诺沙星复合纳米系统及其制备方法
CN111743880B (zh) 一种单抗类药物口服纳米-微球制剂及其制备方法
CN114796155B (zh) 天然活性物质-玉米蛋白纳米颗粒及其制备方法和用途
CN115337272B (zh) 一种天然多糖基化学-物理双交联水凝胶微粒及其制备与应用
CN115590981B (zh) 一种生物活性大分子药物的口服递送系统及其制备方法
CN114522150B (zh) 一种pH敏感型植物微胶囊纳米挤出器的制备方法及其应用
Yurdasiper et al. An overview of modified release chitosan, alginate and eudragit RS microparticles
CN101181273A (zh) 壳聚糖-聚天冬氨酸-5氟尿嘧啶纳米粒子的制备方法
CN109125290B (zh) 一种pH和还原双重响应型载药纳米颗粒
AU2019334434B2 (en) Controlled drug release formulation
WO2008054042A1 (en) Bio-degradable nanoparticles of poly(dl-lactide-co-glycolide) encapsulating ciprofloxacin hcl having an extended-release property, and manufacturing method thereof
CN114983928B (zh) 一种口服胰岛素的海藻酸锌凝胶及其制备方法
CN115282127B (zh) 壳聚糖海藻酸钙纳米粒微球及其制备方法
CN111870582B (zh) 正硅酸乙酯-利拉鲁肽复合微球制剂及其制备方法和应用
US20110064818A1 (en) Pharmaceutical composition and a method for the production thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant