CN108310377A

CN108310377A - 一种将pd-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用

Info

Publication number: CN108310377A
Application number: CN201810204275.5A
Authority: CN
Inventors: 汪国兴; 武婷; 樊丽
Original assignee: ANHUI RUBIOX-VISION BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ANHUI RUBIOX-VISION BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2018-03-13
Filing date: 2018-03-13
Publication date: 2018-07-24

Abstract

本发明公开了一种将PD‑1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，涉及医药技术领域。PD‑1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物；所述抗癌药物包括PD‑1抗体和二甲双胍；所述抗癌药物0.1ml中二甲双胍的含量为0.02mg～0.10mg；所述抗癌药物0.1ml中PD‑1抗体的含量为0.01mg～0.05mg。本发明通过将PD‑1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的作用，解决了现有的技术仅仅只能进行单抗体治疗，抑癌效果不够好的问题。

Description

一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别是涉及一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用。

背景技术

程序性死亡受体1(ProgrammedDeath-1；PD-1)，是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员，其最初是从凋亡的小鼠T细胞杂交瘤2B4.11克隆出来。PD-1主要是在激活的T细胞和B细胞中表达，具有抑制细胞激活的功能，这是免疫系统中一种正常的自稳机制，因为过度的T/B细胞激活会引起自身免疫疾病，所以PD-1相当于人体内的一道护栏。

在肿瘤微环境中，肿瘤细胞会高表达PD-1的配体PD-L1(细胞程式死亡-配体1或表面抗原分化簇274或B7同源体)。肿瘤细胞上表达的PD-L1和T细胞表面的PD-1相互作用，导致肿瘤微环境中PD-1通路持续激活，T细胞功能被抑制，无法杀伤肿瘤细胞。PD-1单克隆抗体可以通过阻断这一通路，部分恢复T细胞的功能，进而利用激活的T细胞和相应的细胞因子杀伤肿瘤细胞，从而其成为癌症免疫疗法的重要治疗手段。

二甲双胍是目前临床上治疗2型糖尿病的一线口服降糖药。近年来，已有多项研究实验表明二甲双胍对多种肿瘤具有一定程度的抑制作用。相关的临床研究也表明了，服用二甲双胍的糖尿病患者罹患恶性肿瘤的风险以及肿瘤的相关死亡率明显小于采用其他降糖药物或胰岛素治疗的糖尿病患者，从而显示其抗癌效果与降血糖效果无关。

目前抗癌药物中存在如下缺陷：现有技术仅仅只能进行单抗体治疗，抑癌效果不够好的问题。至今尚未有相关报道将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物。将PD-1抗体与二甲双胍联合用于治疗癌症具有深远的临床意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，通过将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的作用，解决了现有的技术仅仅只能进行单抗体治疗，抑癌效果不够好的问题。

为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明为一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，所述PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物；所述抗癌药物包括PD-1抗体和二甲双胍；所述抗癌药物0.1ml中二甲双胍的含量为0.02mg～0.10mg；所述抗癌药物0.1ml中PD-1抗体的含量为0.01mg～0.05mg。

进一步地，所述PD-1抗体与二甲双胍的质量配比为1：2～10；所述二甲双胍是治疗2型糖尿病的一线口服药，具有一定的抗癌效果，也具有杀死肿瘤干细胞的功能；所述PD-1单克隆抗体对多种癌细胞具有杀伤作用；所述二甲双胍可以增强PD-1单克隆抗体对癌症的疗效。

进一步地，所述抗癌药物的应用为治疗胰腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、结肠直肠癌、黑色素瘤、肾瘤、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、食管癌、大肠癌、鼻咽癌、脑肿瘤、宫颈癌、血癌、骨癌、淋巴癌或其他癌症的药物。

本发明具有以下有益效果：

本发明通过将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的作用，其中二甲双胍是治疗2型糖尿病的一线口服药，具有一定的抗癌效果，也具有杀死肿瘤干细胞的功能；PD-1单克隆抗体对多种癌细胞具有杀伤作用；具有二甲双胍可以使得PD-1单克隆抗体对癌症的疗效更佳的优点。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式

对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例一

本发明为一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物；抗癌药物包括PD-1抗体和二甲双胍；抗癌药物0.1ml中二甲双胍的含量为0.02mg～0.10mg；抗癌药物0.1ml中PD-1抗体的含量为0.01mg～0.05mg。

其中，PD-1抗体与二甲双胍的质量配比为1：2～10；二甲双胍是治疗2型糖尿病的一线口服药，具有一定的抗癌效果，也具有杀死肿瘤干细胞的功能；PD-1单克隆抗体对多种癌细胞具有杀伤作用；二甲双胍可以增强PD-1单克隆抗体对癌症的疗效。

其中，抗癌药物的应用为治疗胰腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、结肠直肠癌、黑色素瘤、肾瘤、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、食管癌、大肠癌、鼻咽癌、脑肿瘤、宫颈癌、血癌、骨癌、淋巴癌或其他癌症的药物。

其中，PD-1抗体与二甲双胍联合使用能抑制胰腺癌细胞的增值：

实验所用材料：胰腺癌细胞株panc-l；二甲双胍，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；PD-1抗体，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；CCK8细胞增值与活性检测；10％FBS+90％DMEM培养基；本实验所用试剂均为市面常见试剂。

细胞实验流程如下：

(1)取状态良好的panc-l细胞，调节密度为的2.0×104/mL，将细胞悬液接种于96孔板(0.1mL/孔)(设置空白实验，仅加培养基)；

(2)贴壁生长48小时，弃去原来培养基；对照组加入培养基(0.1mL)，实验组加入二甲双胍(0.1mL二甲双胍含量0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg)，实验组加入PD-1抗体(0.1mL PD-1抗体含量0.01mg),实验组加入二甲双胍与PD-1抗体联合使用(0.1mL二甲双胍含量0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg和PD-1抗体含量0.01mg)，空白实验组换掉培养基即可，培养48小时；

(3)弃去所有孔的培养基，于孔中加入CCK8溶液(10uL)，继续培养2小时；

(4)用酶标仪在450nm波长处测其吸光度；

(5)计算细胞活力；细胞活力＝(A实验-A空白)/(A对照-A空白)。

实验结果：

表1panc-l胰腺癌细胞株经过细胞培养、药物处理、CCK8检测得到的实验结果：

结果显示：panc-l胰腺癌细胞株经过培养基处理成活率100％，经过二甲双胍(0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg)处理成活率为90％、88％、83％、70％、89％，经过PD-1抗体处理成活率为59％，经过二甲双胍(0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.05mg、0.06mg)与PD-1抗体联合使用成活率为59％、60％、55％、40％、57％；与培养基处理48小时的成活率100％相比，二甲双胍(0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.06mg)差异有统计学意义(P＜0.05)，二甲双胍(0.05mg)差异有统计学意义(P＜0.05)；与PD-1抗体单独处理成活率59％相比，二甲双胍(0.02mg、0.03mg、0.04mg、0.06mg)与PD-1抗体联合使用差异有统计学意义(P＜0.05)，二甲双胍(0.05mg)与PD-1抗体联合使用差异有统计学意义(P＜0.05)；综合不同用量的二甲双胍单独处理及与PD-1抗体联合使用的实验结果，可选择质量比5:1为后续实验所用比例。

实施例二

其中，PD-1抗体与二甲双胍联合使用能明显的抑制胰腺癌细胞的增值：

实验所用材料：胰腺癌细胞株panc-l、MIAPACA-2、BXPC-3；二甲双胍，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；PD-1抗体，10％FBS+90％DMEM培养基溶解后分装，4℃保存；CCK8细胞增值与活性检测；10％FBS+90％DMEM培养基；本实验所用试剂均为市面常见试剂。

细胞实验流程如下：

(1)取状态良好的细胞，调节密度为的2.0×104/mL，将细胞悬液接种于96孔板(0.1mL/孔)(设置空白实验，仅加培养基)；

(2)贴壁生长48小时，弃去原来培养基；分组后分别加入：对照组仅培养基(0.1mL/孔)、实验组二甲双胍(0.1mL二甲双胍含量0.05mg)、实验组PD-1抗体(0.1mL PD-1含量0.01mg)、实验组二甲双胍与PD-1抗体联合使用(0.1mL二甲双胍含量0.05mg和PD-1含量0.01mg)，空白实验组换掉培养基即可(0.1mL/孔)，培养48小时；

(4)用酶标仪在450nm波长处测其吸光度；

(5)计算细胞活力；细胞活力＝(A实验-A空白)/(A对照-A空白)。

实验结果：

表2不同胰腺癌细胞株经过细胞培养、药物处理、CCK8检测得到的实验结果：

结果显示：

由4种不同方法处理48小时的panc-l细胞株的成活率分别为100％、71％、57％、43％；

由4种不同方法处理48小时的MIAPACA-2细胞株的成活率分别为100％、73％、60％、38％；

由4种不同方法处理48小时的BXPC-3细胞株的成活率分别为100％、74％、58％、40％；

由3组不同细胞株实验结果分析，与对照组100％细胞活率相比二甲双胍与PD-1抗体联合使用组有显著统计学意义(P＜0.01)，单独使用PD-1抗体组和单独使用二甲双胍组的实验结果与对照组差异均小于联合使用组的差异有统计学意义(P＜0.05)；说明二甲双胍与PD-1抗体联合使用比二甲双胍、PD-1抗体单独使用抑癌效果更好。

实施例三

其中，PD-1抗体与二甲双胍联合使用能更好的抑制裸鼠体内实体肿瘤的生长：

实验所用材料：取正常6周龄裸鼠若干只雄性，每只老鼠体重约为20g；panc-l细胞株；二甲双胍，无菌PBS溶液溶解后分装，4℃保存；PD-1抗体，无菌PBS溶液溶解后分装，4℃保存。

小鼠实验流程如下：

(1)小鼠胰腺癌模型的建立采用皮下移植瘤模型，便于观察肿瘤生长情况；取细胞密度为2.0×107/mL的panc-l细胞，消毒小鼠欲注射部位的皮肤，在每只裸鼠背部皮下注射0.1mL细胞悬液，10d后接种出长出2-3mm瘤时，小鼠胰腺癌模型制作成功；

(2)将建模成功的小鼠随机分成4组，PBS对照组、二甲双胍实验组、PD-1抗体实验组、二甲双胍与PD-1抗体联合使用实验组；在裸鼠接种肿瘤细胞10天后对照组给药无菌PBS(腹腔注射0.1mL),实验组给药二甲双胍(腹腔注射0.1ml 10mg/kg/d)、PD-1抗体(腹腔注射0.1ml 2mg/kg/d)、二甲双胍与PD-1抗体联合使用(腹腔注射0.1ml二甲双胍10mg/kg/d与PD-1抗体2mg/kg/d)，对照组和实验组均连续给药12天；

(3)停药24小时称重后处死小鼠，剥离皮下移植瘤，称重并保存；按平均瘤重计算抑瘤率；抑瘤率＝[(对照组肿瘤体积-实验组肿瘤体积)/对照组肿瘤体积]×100％。

小鼠实验结果：

结果显示，PD-1抗体与二甲双胍联合使用实验组的抑瘤率明显高于PBS对照组，差异有统计学意义(P＜0.05)，PD-1抗体与二甲双胍联合使用实验组的抑瘤率高于二甲双胍实验组和PD-1抗体实验组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

以上公开的本发明优选实施例只是用于帮助阐述本发明。优选实施例并没有详尽叙述所有的细节，也不限制该发明仅为所述的具体实施方式。显然，根据本说明书的内容，可作很多的修改和变化。本说明书选取并具体描述这些实施例，是为了更好地解释本发明的原理和实际应用，从而使所属技术领域技术人员能很好地理解和利用本发明。本发明仅受权利要求书及其全部范围和等效物的限制。

Claims

1.一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，其特征在于：所述PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物；所述抗癌药物包括PD-1抗体和二甲双胍；所述抗癌药物0.1ml中二甲双胍的含量为0.02mg～0.10mg；所述抗癌药物0.1ml中PD-1抗体的含量为0.01mg～0.05mg。

2.根据权利要求1所述的一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，其特征在于，所述PD-1抗体与二甲双胍的质量配比为1：2～10。

3.根据权利要求1所述的一种将PD-1抗体与二甲双胍联合用于制备抗癌药物的应用，其特征在于，所述抗癌药物的应用为治疗胰腺癌、肺癌、胃癌、肝癌、结肠直肠癌、黑色素瘤、肾瘤、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌、食管癌、大肠癌、鼻咽癌、脑肿瘤、宫颈癌、血癌、骨癌、淋巴癌或其他癌症的药物。