CN108218967B - 水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，名称为DH1，是由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。本发明克隆得到DH1基因，过表达该基因可以推迟植物的抽穗时间，而缺失该基因可以提前植物的抽穗时间，说明该基因可用来调控植物抽穗时间；为培养高适应性的植物奠定了基础。因此应用DH1基因调控植物抽穗期，提高不同地区和条件下农作物的适应性、产量和质量。

Description

水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，尤其涉及一种水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

水稻是世界重要的粮食作物之一，水稻生产在我国粮食生产和国民经济中具有极其重要的作用。然而，由于经济飞速发展、人口增长和耕地面积减少，水稻生产面临很大的压力，近些年来利用分子遗传学和功能基因组学的方法研究出高产水稻成为人们较为关注的热点问题。抽穗期是影响水稻产量的重要农艺性状之一，一般是指第一个穗子抽出的日期，由水稻的感光性、感温性和基本营养生长特性决定，适宜的抽穗期是水稻稳产高产的前提条件之一，过早抽穗会导致水稻的营养生长不够充分，而过晚抽穗会由于外界环境如季节温度不适宜而导致产量下降。为了解单子叶植物水稻的生长发育过程、解决杂交稻超亲晚熟的问题、提高水稻的产量及对外界环境的适应性，对水稻抽穗期调控机制的研究备受关注。

水稻属于短日照植物，即在短日照下抽穗较早，而长日照下抽穗延迟。研究发现很多基因参与水稻抽穗期的调控网络，包括成花素基因Hd3a、RFT1和上游基因Hd1、Ehd1、DTH2、COL4，下游基因MADS14、MADS15等，鉴定水稻抽穗期调控基因，进而对水稻抽穗期调控机制的深入研究不仅具有重要的理论意义，更有育种实践、品种改良等广阔的应用前景。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因。

本发明提供的蛋白质，名称为DH1(Delayed heading date 1)，来源于水稻(Oryza sativa ），是如下（a）或（b）：

（a）由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与植物抽穗期相关的由SEQ ID NO.2衍生的蛋白质。

所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

上述SEQ ID NO.2由355个氨基酸残基组成。

编码所述蛋白的DNA分子也属于本发明的保护范围。

上述DNA分子是如下(1）或(2）或(3）的DNA分子：

(1）编码区为SEQ ID NO.1所示的DNA分子；

(2）在严格条件下与（1）限定的DNA序列杂交且编码与植物抽穗期相关蛋白的DNA分子；

(3）与（1）限定的DNA序列至少具有70%、至少具有75%、至少具有80%、至少具有85%、至少具有90%、至少具有95%、至少具有96%、至少具有97%、至少具有98%或至少具有99%同源性且编码与植物抽穗期相关蛋白的DNA分子。

所述严格条件为在6×SSC，0.5% SDS的溶液中，在65^oC下杂交,然后用2×SSC,0.1% SDS和1×SSC,0.1% SDS各洗膜一次。

上述序列表中的SEQ ID NO.1由1068个核苷酸组成。

上述抽穗期均具体为植物的抽穗时间。

本发明的另一个目的是提供抑制或沉默上述蛋白表达的物质的用途。

本发明提供的抑制或沉默上述蛋白表达的物质在促进植物抽穗中的应用。

上述应用中，所述抑制或沉默所述蛋白表达的物质为重组载体、含有重组载体的转基因细胞系或重组菌；

所述重组载体为将DNA片段1和DNA片段2均插入双元表达载体中，得到的抑制或沉默权利要求1所述蛋白表达的重组载体；所述DNA片段1的编码区与所述DNA片段2的编码区互为反向互补；所述DNA分子1编码区的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5’末端第141位-530位核苷酸；在本发明的实施例中，双元表达载体为pCUbi1390-△FAD2，重组载体为RNA干扰重组载体pCUbi1390-△FAD2-DH1，其构建方法见实施例2的一的2。

上述应用中，所述促进植物抽穗期为抽穗时间的提前，通过田间统计营养生长时间缩短体现。

所述植物具体为双子叶植物或单子叶植物；所述单子叶植物进一步具体为水稻。

同时，本发明还提供重组载体、含有重组载体的转基因细胞系或重组菌：

所述重组载体为将DNA片段1和DNA片段2均插入双元表达载体中，得到的抑制或沉默所述蛋白表达的重组载体；所述DNA片段1的编码区与所述DNA片段2的编码区互为反向互补；所述DNA分子1编码区的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5’末端第141位-530位核苷酸。

在本发明的实施例中，双元表达载体为pCUbi1390-△FAD2，重组载体为RNA干扰重组载体pCUbi1390-△FAD2-DH1，其构建方法见实施例2。

含有上述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌也是本发明保护的范围；

所述重组载体为将上述DNA分子插入表达载体中，得到表达上述蛋白的重组载体。在本发明的实施例中，表达载体具体为pCUbi1390，重组载体为SEQ ID NO.1所示的核苷酸同源重组到双元表达载体pCUbi1390上得到的载体，命名为pCUbi1390-DH1。

上述蛋白、上述DNA分子或上述含有上述DNA分子的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在推迟植物抽穗期中的应用；

所述推迟植物抽穗期具体为抽穗时间的推迟，通过田间统计营养生长时间延长体现。

所述植物具体为双子叶植物或单子叶植物；所述单子叶植物进一步具体为水稻。

本发明的第四个目的是提供一种培育转基因植物B的方法或一种培育转基因植物A的方法。

本发明提供的一种培育转基因植物B的方法，为抑制目的植物中的上述蛋白的活性或表达，得到转基因植物B，所述转基因植物B的抽穗时间早于所述目的植物；

所述抑制目的植物中的上述蛋白的活性或表达具体为将第三个目的中的重组载体导入所述目的植物；

本发明提供的一种培育转基因植物A的方法，为将上述DNA分子导入目的植物中，得到转基因植物A，所述转基因植物A的抽穗时间晚于所述目的植物；

所述将编码上述蛋白的DNA分子具体通过上述含有上述DNA分子的重组载体导入目的植物。

所述目的植物具体为双子叶植物或单子叶植物；所述单子叶植物进一步具体为水稻。

扩增所述DNA分子全长或其任意片段的引物对也是本发明保护的范围。

本发明实施例中的引物对如下：5’-ATGGGGAAGAAGAAGAAGCG-3’和5’-TTACACAATATTCCAGTTCA-3’。

本发明的实验证明，本发明克隆得到DH1基因，过表达该基因导致植物抽穗期推迟，而缺失该基因可以提前植物的抽穗时间，说明该基因可用来调控植物抽穗期，为提高植物适应性、增加植物产量奠定了基础。因此应用DH1基因调控植物抽穗期，提高不同地区和条件下农作物的适应性、产量和质量。

附图说明

图1为pCUbi1390-△FAD2 载体结构示意图。

图2为DH1缺失和过表达植株中DH1基因转录水平检测。

图3为DH1缺失和过表达植株的表型。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

水稻(Oryza sativa ssp. Japonica)kitaake（Kit）和Nipponbare（Nip）记载在如下文献中：Gao H, Zheng X, Fei G, Chen J, Jin M, Ren Y, Wu W, Zhou K, Sheng P,Zhou F, Jiang L, Wang J, Zhang X, Guo X, Wang J, Cheng Z, Wu C, Wang H, WanJ. Ehd4 encodes a novel and Oryza-genus-specific regulator of photoperiodicflowering in rice. PLoS Genet 9(2):e1003281 (2013)，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得，以下也称为水稻野生型水稻。

根癌农杆菌EHA105（Agrobacterium tumefaciens EHA105）记载在如下文献中：New Agrobacterium helper plasmids for gene transfer to plants. Hood,Elizabeth E; Gelvin, Stanton B; Melchers, Leo S; Hoekema, Andre. Transgenic Research, 2(4): p. 208-218-218（1993）. 公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。

双元表达载体pCUbi1390记载在如下文献中：Wu Z, Zhang X, He B, Diao L,Sheng S, Wang J, Guo X, Su N, Wang L, Jiang L, Wang C, Zhai H, Wan J. Achlorophyll-deficient rice mutant with impaired chlorophyllide esterificationin chlorophyll biosynthesis. Plant Physiol. 2007 Sep;145(1):29-40，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。

pCUbi1390-△FAD2载体记载在如下文献中：Wax crystal-sparse leaf2, a ricehomologue of WAX2/GL1, is involved in synthesis of leaf cuticular wax. MaoB., et al. (2012). Planta 235: 39–52，公众可从中国农业科学院作物科学研究所获得。

水稻材料的栽培条件：将水稻种子用水浸泡3天，然后播种在苗床上。4叶期的水稻幼苗移栽到水田中，分单株插秧。

实施例1、DH1基因的获得

根据gramene数据库，设计引物（引物序列为：forward primer，5’-ATGGGGAAGAAGAAGAAGCG-3’；reverse primer，5’-TTACACAATATTCCAGTTCA-3’），用上述引物，以水稻(Oryza sativa ssp. Japonica)Kitaake 2周幼苗的cDNA为模板，得到全长cDNA序列1068bp，结果为该PCR产物具有序列表中序列1所示的核苷酸，该PCR产物的基因为DH1，该基因的编码区为序列表中序列1；该基因编码的蛋白命名为DH1，该蛋白的氨基酸序列为序列表中的序列2。

实施例2、DH1基因在调控植物抽穗期中的应用

一、过表达重组载体获得

1、过表达重组载体pCUbi1390-DH1的获得

以水稻(Oryza sativa ssp. Japonica)Kitaake 2周苗提取RNA反转录得到的总cDNA为模板，用引物5’- TCTGCACTAGGTACCTGCAGATGGGGAAGAAGAAGAAGCG -3’和5’- ATGGATCCGTCGACCTGCAGCACAATATTCCAGTTCAGAG -3’进行扩增，得到1105bp的PCR产物。经过测序，该PCR产物具有序列表中序列1编码区所示的核苷酸；

回收上述PCR产物，通过clontech infusion kit (takara公司产品)同源重组到双元表达载体pCUbi1390的酶切位点PstI上，得到的连接产物转入大肠杆菌中，得到转化子。

提取转化子的质粒送去测序，该质粒为将序列表中序列1所示的核苷酸同源重组到双元表达载体pCUbi1390上得到的载体，命名为pCUbi1390-DH1，为过表达重组载体。

二、DH1基因RNA干扰载体pCUbi1390-△FAD2 -DH1的构建

1、DH1基因干扰片段的获得

（1）水稻品种Kitaake幼苗RNA的提取及cDNA的制备

使用RNAprep pure植物总RNA提取试剂盒（购自天根生化科技（北京）有限公司），提取水稻(Oryza sativa ssp. Japonica)Kitaake 14天幼苗的RNA，反转录得到cDNA。

（2）引物的设计

扩增DH1正义片段的引物为DH1-sense-F:5- CGTAGTCGACGGATCCCGGCGGCATGGCCATCCACG -3和DH1-sense-R:5- GAATTCCCGGGGATCCGGTGCAAGCCCAGAAGCCAT -3。

扩增DH1反义片段的引物为DH1-antisense-F:5- TTACTTCTGCACTAGGTACCGGTGCAAGCCCAGAAGCCAT -3和DH1-antisense-R: 5-TAGAGCTCAGGCCTGGTACCCGGCGGCATGGCCATCCACG -3。

（3）PCR扩增DH1基因干扰片段

以cDNA为模板，用DH1-sense-F及DH1-sense -R引物进行PCR扩增，得到片段1。以cDNA为模板，用DH1-antisense-F及DH1-antisense-R引物进行PCR扩增，得到片段2。

将上述片段电泳检测, 片段1大小约为390bp，片段2大小约为390bp。将片段1和片段2均送去测序，结果表明片段1的编码序列为序列表中序列1所示核苷酸自5’末端第141-530bp，片段2的编码序列为序列表中序列1所示核苷酸自5’末端第141-530的反向互补序列。

2、带DH1基因正义干扰片段的pCUbi1390-△FAD2 -sense-DH1重组载体获得

（1）DH1基因正义干扰片段的同源重组定向克隆

用BamHⅠ酶切pCUbi1390-△FAD2 载体（结构示意图如图1所示），得到了线性pCUbi1390-△FAD2 ，回收。将片段1采用同源重组定向克隆的方法连接到线性的pCUbi1390-△FAD2 载体（具体步骤和方法参考clontech infusion kit说明书，该试剂盒可从大连宝生物公司购买）， 再将同源重组产物转入DH5α感受态细胞，37度培养过夜，得到单克隆。

（2）鉴定pCUbi1390-△FAD2 -sense-DH1重组载体

挑选（1）中所得的单克隆，接种于含卡那霉素的LB液体培养基中，过夜培养；取过夜培养的菌液作为PCR反应模板，使用载体引物1390-F及FAD-R进行PCR扩增,鉴定已经插入片段1的 pCUbi1390-△FAD2 -sense-DH1重组载体，得到745bp DNA条带的即为阳性克隆，引物序列如下：

1390-F：5'-TGCCTTCATACGCTATTTATTTGC-3'；

FAD-R：5'-GAAGCGACGGACCTGGAGAT-3'。

提取阳性克隆的质粒，送去测序，测序引物为Left MCS-F及Left MCS-R，测序结果表明，片段1正确连接到pCUbi1390-△FAD2 载体BamHⅠ上的质粒命名为pCUbi1390-△FAD2-sense-DH1。

3、带DH1基因正义及反义干扰片段的pCUbi1390-△FAD2 -DH1重组载体的获得

（1）DH1基因反义干扰片段的同源重组定向克隆

用KpnⅠ酶切步骤pCUbi1390-△FAD2 -sense- DH1质粒，回收待用。采用同源重组定向克隆的方法（具体步骤和方法参考clontech infusion kit说明书，该试剂盒可从大连宝生物公司购买），先将回收的片段2和线性pCUbi1390-△FAD2 -sense-DH1进行同源重组反应，再将同源重组产物转入DH5α感受态细胞，37度过夜培养得到单克隆。

（2）鉴定pCUbi1390-△FAD2 -DH1重组载体

挑选单克隆菌，接种于含卡拉霉素的LB液体培养基中，过夜培养；取过夜培养的菌液作为PCR反应模板，使用FAD-F及1390-R引物，进行PCR扩增反应。引物序列如下：

FAD-F：5'-CCTTTCACAACCTGATTTCCCA-3'；

1390-R：5'-TAATCATCGCAAGACCGGCAACAGG-3'。

能够扩出片段大小为891bp的质粒即为阳性克隆。将该质粒送去测序，以FAD-F及1390-R作为测序引物，该质粒为将片段1连接到pCUbi1390-△FAD2 载体BamHⅠ，且将片段2连接到pCUbi1390-△FAD2 载体KpnI位点的质粒，片段1的编码区和片段2的编码区互为反向互补；命名为pCUbi1390-△FAD2 -DH1。

三、过表达转DH1水稻和RNA干扰转DH1 RNAi水稻的获得

1、过表达转DH1水稻的获得

将上述获得的过表达重组载体pCUbi1390-DH1通过热激的方法转入根癌农杆菌EHA105中，得到重组菌，提取质粒，送去测序，质粒为pCUbi1390-DH1，含有该质粒的重组菌命名为EHA105/ pCUbi1390-DH1。

将水稻Kitaake的种子脱壳灭菌，参照Hiei 等的方法（Plant J. 1994，6:271–282）进行转化，得到T0代转DH1水稻植株。

T0代转DH1水稻植株收种后播种得到T1代转DH1水稻植株。

T1代转DH1水稻植株生长1个月后，提取叶片的RNA反转录得到cDNA作为模板，用引物ACGGTGCAGTAAGTTCTCCA和TGCTTCATCATCCCACACCA进行荧光定量PCR（方法参照Takara 公司，SYBR® Premix Ex Taq™试剂说明书），筛选DH1表达量调高的单株。以野生型水稻（WT）为对照。

内参为Ubiquitin，内参的引物为UBI-F:ACCCTGGCTGACTACAACATC和UBI-R:AGTTGACAGCCCTAGGGTG。结果如图2所示，野生型水稻中DH1的相对表达量为1.0,而T1代转DH1水稻株系OE1、OE2、OE3、OE4、OE5、OE6的DH1基因的表达量分别为63, 21.1, 34.6,18.2, 12.9, 11.3。

表明，T1代转DH1水稻中DH1基因的表达量高于野生型水稻，为过表达DH1水稻。

采用同样方法将空载体pCUbi1390转入野生型水稻中，得到T0代转pCUbi1390水稻，收种、播种，得到T1代转pCUbi1390水稻。

2、DH1基因RNA干扰水稻的获得

将上述获得的质粒pCUbi1390-△FAD2 -SX通过热激的方法转入根癌农杆菌EHA105中，得到重组菌，提取质粒，送去测序，质粒为pCUbi1390-△FAD2 -DH1，含有该质粒的重组菌命名为EHA105/ pCUbi1390-△FAD2 -DH1。

将水稻日本晴的种子脱壳灭菌，接种到诱导愈伤的培养基中。培养3周后，从盾片处生长出愈伤组织，挑选生长旺盛，颜色浅黄，比较松散的胚性愈伤，用作转化的受体。

将上述获得的EHA105/pCUbi1390-△FAD2 -DH1侵染胚性愈伤，在黑暗处25℃培养3天后，在含有50 mg／L潮霉素的选择培养基上筛选潮霉素抗性植株。将潮霉素抗性植株在阴凉处炼苗，几天后移栽到水田，得到T0代转DH1 RNAi水稻。

T0代转DH1 RNAi水稻植株收种后播种得到T1代转DH1 RNAi水稻植株。

T1代转DH1 RNAi水稻植株生长1个月后，提取叶片的RNA反转录得到cDNA作为模板，用引物ACGGTGCAGTAAGTTCTCCA和TGCTTCATCATCCCACACCA进行定量PCR。以野生型水稻（WT）为对照。

内参为Ubiquitin，内参的引物为UBI-F:ACCCTGGCTGACTACAACATC和UBI-R:AGTTGACAGCCCTAGGGTG。结果如图2显示，野生型水稻中DH1的表达量为1.0，而T1代转DH1RNAi水稻中RNAi-1, RNAi-2, RNAi-3中DH1基因的表达量分别为 0.5, 0.7, 0.6，均低于野生型水稻。

表明，T1代转DH1 RNAi水稻中DH1基因的表达量低于野生型水稻。

采用同样方法将空载体pCUbi1390-△FAD2转入野生型水稻中，得到T0代转pCUbi1390-△FAD2水稻，收种、播种，得到T1代转pCUbi1390-△FAD2水稻。

三、过表达转DH1水稻和RNA干扰转DH1 RNAi水稻的表型鉴定

将编号为OE6和OE1的T1代转DH1水稻、编号为RNAi-1的T1代转DH1 RNAi水稻、野生型水稻（WT）、T1代转pCUbi1390水稻和T1代转pCUbi1390-△FAD2水稻的种子播种后，将生长20天的幼苗移栽到北京田间，统计水稻第一个穗子抽出的时间和穗粒数、穗长、株高相关农艺性状。每个株系20株，实验重复3次。

穗粒数、穗长分别为每株水稻主穗上稻粒数和穗长度；株高为每株水稻从根部到穗顶端的长度。

结果如图3所示，A、B为表型观察，C为抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数的统计数据。

从图3A可以看出，OE6和OE1的穗长比WT长，穗粒数较多，株高较高，抽穗时间较晚。

从图3B看出，RNAi的穗长比野生型日本晴短，穗粒数较少，株高较矮，抽穗时间较早。

从图3C看出，

编号为OE6的抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数分别为66天、75.4cm、14.2cm、80。

编号为OE1的抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数分别为91天、90.9cm、15.9cm、151。

OE对应的野生型kitaake的抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数分别为58天、64cm、12.4cm、60。

编号为RNAi1的抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数分别为108天、86.7cm、17.5cm、112。

RNAi对应的野生型日本晴的抽穗时间、株高、穗长和每穗粒数分别为117天、111.8cm、22.4cm、170。

以上结果表明，DH1编码的蛋白与水稻抽穗期相关，该基因过表达导致水稻抽穗时间延迟，株高变高，穗粒数增多，而干扰该基因的表达导致水稻抽穗期提前，株高变矮，穗粒数减少。

<110>中国农业科学院作物科学研究所

<120>水稻抽穗期相关蛋白及其编码基因与应用

<160>2

<210> 1

<211> 1068

<212> DNA

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 1

1 ATGGGGAAGA AGAAGAAGCG CGTGGAGAAG GTGTTCTGCT ACTACTGCGA CCGCGAGTTC

61 GACGACGAGA AGATCCTCGT GCAGCACCAG AAGGCCAAGC ACTTCAAGTG CCACGTCTGC

121 CACAAGAAGC TCTCCACCGC CGGCGGCATG GCCATCCACG TCCTCCAGGT CCACAAGGAG

181 TCCGTCACCA AGGTTCCCAA TGCAAAGCCT GAGAGGGAAT CAACAGAGAT TGAGATCTTT

241 GGGATGCAAG GGATTCCTCC AGATGTGTTG GCCGCCCACT ATGGAGAAGA GGAAGACCCT

301 TCATCGAAGG TAGCCAAAGT GGAAGTGCCA TCGCTAAGGC CTCCTGTTAT GCCCAATCCA

361 GCGGGCATGG TATATCCTCC ACGACCGGCC TATGGTGTAG CTCCACCTAT GTATAACCCT

421 GCACTGAATC CATTGATGGC CAGACCTCCA ATCTGGCCTG CTCCACCTCC GCAACCTTGG

481 TTTACACAAC CAGTAGTTTC GGTTCCTCAA ATGGCTTCTG GGCTTGCACC ACAACAGCCA

541 CTATTTCCAA TTCAAAACAT GCCTGCTCCT ATGACATCAG CACCTGCAAA TTTACTTCAG

601 ACTTCGTTCC CTATGGCCCA TGTTGGAGTA CCTTCACCTG TTACCCCTCA GGTGTCACAA

661 CCTCTCTTTC CTGTCAGTAC ATCTGCTGGA AACGGTGCAG TAAGTTCTCC ATATGTAGCA

721 TCTGTTGCAC CTGGAAGCAT CCCAACAAGC TCTCCATCAG TTGCTCCTGC AGGAGTAGGA

781 TATGCAGCTA CTAACCAAGG TACAGGAGGT CCAGCGGCTG TACCTCCACC CGCTTCTAAT

841 AATAAAGCAC CAGCCACCCA ACCTGGTGCA AATGAAGTCT ATCTGGTGTG GGATGATGAA

901 GCAATGTCAA TGGAGGAAAG AAGATTGTCG CTACCCAAGT ATCAGGTGCA TGATGAAACT

961 AGCCAGGTAA GTTCTGATTT TTATAATTTT ATATCTGTAA TATTAATGAT ATGTGAAAAA

1021 AACCAAGTTG AAGTTCATGG GGATGCTCTG AACTGGAATA TTGTGTAA

<210> 2

<211> 355

<212> 蛋白序列

<213> 水稻(Oryza sativa)

<400> 2

1 MGKKKKRVEK VFCYYCDREF DDEKILVQHQ KAKHFKCHVC HKKLSTAGGM AIHVLQVHKE

61 SVTKVPNAKP ERESTEIEIF GMQGIPPDVL AAHYGEEEDP SSKVAKVEVP SLRPPVMPNP

121 AGMVYPPRPA YGVAPPMYNP ALNPLMARPP IWPAPPPQPW FTQPVVSVPQ MASGLAPQQP

181 LFPIQNMPAP MTSAPANLLQ TSFPMAHVGV PSPVTPQVSQ PLFPVSTSAG NGAVSSPYVA

241 SVAPGSIPTS SPSVAPAGVG YAATNQGTGG PAAVPPPASN NKAPATQPGA NEVYLVWDDE

301 AMSMEERRLS LPKYQVHDET SQVSSDFYNF ISVILMICEK NQVEVHGDAL NWNIV

Claims (8)

1.编码SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的DNA分子在调控水稻抽穗期中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述DNA分子是编码区为SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的DNA分子。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述应用是抑制或沉默所述DNA分子在植物中的表达。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于：所述调控水稻抽穗期为提前植物抽穗时间。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述抑制或沉默所述DNA分子在植物中的表达是将重组载体转化所述植物实现，其中，所述重组载体为将DNA片段1和DNA片段2均插入双元表达载体中，得到的抑制或沉默如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白表达的重组载体；所述DNA片段1的编码区与所述DNA片段2的编码区互为反向互补；所述DNA片段1编码区的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5’末端第141位-530位核苷酸。

6.重组载体、含有重组载体的不可再生的转基因细胞系或重组菌，所述重组载体为将DNA片段1和DNA片段2均插入双元表达载体中，得到的抑制或沉默如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的蛋白表达的重组载体；所述DNA片段1的编码区与所述DNA片段2的编码区互为反向互补；所述DNA片段1编码区的核苷酸序列为SEQ ID NO.1自5’末端第141位-530位核苷酸。

7.含有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的DNA分子的重组载体、表达盒、不可再生的转基因细胞系或重组菌。

8.权利要求7所述重组载体、表达盒、不可再生的转基因细胞系或重组菌在调控水稻抽穗期中的应用。

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