CN108137589A

CN108137589A - 作为布罗莫区结构域抑制剂的咔啉衍生物

Info

Publication number: CN108137589A
Application number: CN201780002697.8A
Authority: CN
Inventors: 王能辉
Original assignee: Ningbo Wenda Pharma Technology Ltd
Current assignee: Zhejiang Wenda Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.
Priority date: 2016-01-20
Filing date: 2017-01-09
Publication date: 2018-06-08
Anticipated expiration: 2037-01-09
Also published as: JP6855505B2; WO2017124936A1; JP2019504120A; KR20180108675A; EP3406612A4; US10428071B2; CN108137589B; US20190031660A1; EP3406612B1; EP3406612A1; KR102238012B1

Abstract

本发明公开了一种作为布罗莫区结构域(bromodomain)抑制剂的咔啉衍生物。本发明的咔啉衍生物可用作布罗莫区结构域抑制剂，能提供一种控制由布罗莫区结构域蛋白介入的病变的方法和药物组合物。

Description

作为布罗莫区结构域抑制剂的咔啉衍生物

技术领域

本发明涉及一种咔啉衍生物，作为布罗莫区结构域(bromodomain)抑制剂。

背景技术

真核生物的基因组在细胞核内是高度组织的。双链DNA的长链缠绕组蛋白质八聚体(最通常包含组蛋白H2A，H2B,H3和H4的两个副本)以形成核小体。然后，通过核小体聚集和折叠而进一步压缩该基本单元以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，且该结构的紧密度在细胞周期过程中变化，在细胞分裂过程期间最为紧密。染色质结构在调控基因转录中起着关键作用，基因转录不能由高度凝聚的染色质有效地发生。通过对组蛋白(尤其是组蛋白H3和H4)的一系列翻译后修饰对染色质结构进行控制，并且修饰最通常在组蛋白尾部内，所述尾部延伸超出核心核小体结构。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和SUMO化。通过特定酶写入和抹去这些外遗传标志(epigenetic mark)，该特定酶将标签于组蛋白尾部内的特定残基上，因而形成外遗传编码，然后通过细胞解读以允许染色质结构的基因特异性调控并因此允许转录。

组蛋白乙酰化最通常与基因转录的活化相关联，因为该修饰通过改变静电学性质而放松了DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除这种物理变化之外，特定蛋白质结合在组蛋白内的乙酰化的赖氨酸残基以读取外遗传编码。在组蛋白的情况中，布罗莫区结构域(bromodomains)是通常但非专门与乙酰化的赖氨酸残基结合的蛋白质内小的明显不同的结构域。有一族约50种己知含有布罗莫区结构域的蛋白质，且它们在细胞内具有一系列功能。

Bet族的含布罗莫区结构域的蛋白质包括4种含串联布罗莫区结构域的蛋白质(BRD2，BRD3,BRD4和BRD-t)，所述串联布罗莫区结构域能结合两个紧密靠近的乙酰化赖氨酸残基，从而提高了相互作用的特异性。据报道BRD2和BRD3沿活跃转录的基因与组蛋白相结合，并可能参与促进转录延伸(Leroy等，Mol.Cell.2008 30(1)：51-60)，而BRD4似乎参与将pTEF-I3复合体募集到可诱导基因，从而导致RNA聚合酶的磷酸化以及转录输出增加(Hargreaves等Cell,2009 138(1)：129-145)。而且所有家族成员都在细胞周期的控制或执行方面具有某些功能，并己被证明在细胞分裂期间保持与染色体的复合，这提示在维持外遗传记忆中的作用。另外，作为病毒复制过程的部分，一些病毒利用这些蛋白质以将它们的基因组拴系至宿主细胞的染色质上(You等Cell，2004 117(3)：349-60)。

相关的近期文章有Trends in Molecular Medicines about BET(2014,20(9)477-478)；Trends in Pharmacological Sciences(2012,33(3)146-153)；J.Med.Chem.,(2012,55,9393-9413)；J.Biol.Chem.,(2012,287(46):38956)。有数百个不同的遗传因子被识别，其中的许多都是和染色质有关联的蛋白。这些相关联的蛋白都和不同的疾病如癌症，神经性疾病，代谢性疾病，心血管疾病，病毒，炎症，自身免疫性疾病等有直接的联系。在临床开发的布罗莫区结构域抑制剂有BMS-986158(BMS),MRK-8628(Merck),BAY1238097(Bayer),INCB54329(Incyte)等许多化合物。因此，本发明提供的布罗莫区结构域抑制剂能提供一种控制由布罗莫区结构域蛋白介入的病变的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种作为布罗莫区结构域抑制剂的咔啉衍生物。

本发明的第一方面，提供了一种咔啉衍生物，其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体、或互变异构体，所述咔啉衍生物的结构如下式I所示：

式中，

A为芳基、杂芳基、或3-至12-元单环或多环杂环，其中，所述的杂环含有0-4个(优选为1个-3个)各自独立地为N、O、S、S(O)或S(O)₂的杂原子

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地为氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、C_3-8环氧烷基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；或者，相邻的R₁,R₂,R₃,R₄与其相连的A环上的原子共同形成3-至9-元环；

R₅选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₆选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₇选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₈选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基；

R₉选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基；

其中，各个上述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、3-至9-元环任选地且各自独立地被一个或多个取代基取代，所述的取代基各自独立地为氘、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、3-至12-元杂环基，芳基、杂芳基、CN、NO₂、＝O、＝S。

在另一优选例中，所述咔啉衍生物结构如下式II所示：

其中，P、Q、K、M各自独立地为N或C；

表示单键或双键；

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉分别如上所述。

在另一优选例中，P为N。

在另一优选例中，Q为N。

在另一优选例中，K为N。

在另一优选例中，所述各取代是指被1-6个取代基取代，优选为地为1-3个代基取代。

在另一优选例中，所述3-至9-元环任选地含有1-3个选自N、O或S的杂原子。

在另一优选例中，所述3-至9-元环为饱和的或不饱和的。

在另一优选例中，R₁和R₂与其相连的碳原子共同形成3-至9-元环，优选地为5-元环或6-元环。

在另一优选例中，R₂和R₃与其相连的碳原子共同形成3-至9-元环，优选地为5-元环或6-元环。

在另一优选例中，R₄选自下组：氢、卤素、C_1-3烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-5烷氧基。

在另一优选例中，R₅选自下组：C_3-8环氧烷基、芳基、和杂芳基。

在另一优选例中，R₆选自下组：芳基、杂芳基、和3-至12-元杂环基。

在另一优选例中，所述3-至12-元杂环基为饱和的或不饱和的，且含有1、2、或3个选自N、O或S的杂原子。

在另一优选例中，R₇选自下组：氢、卤素、C_1-3烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基、C_1-5直链和支链烷氧基。

在另一优选例中，R₈选自下组：氢、卤素、C_1-8氘代烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基。

在另一优选例中，R₈选自下组：氢、卤素、氘代的C_1-3烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基。

在另一优选例中，R₈为氘代甲基。

在另一优选例中，R₉选自下组：C_1-3烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-5烷氧基。

在另一优选例中，式(I)化合物中的手性碳原子的构型为R型或S型。

在另一优选例中，所述的咔啉衍生物选自下组：

本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括：(i)治疗有效量的本发明第一方面所述的化合物，或其药学上可接受的盐；和(ii)药学上可接受的载体。

本发明的第三方面，提供了如本发明第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于：

(a)制备布罗莫区结构域抑制剂；

(b)制备预防和/或治疗与布罗莫区结构域有关的疾病的药物；和/或

(c)体外非治疗性地抑制布罗莫区结构域。

在另一优选例中，所述疾病选自下组：癌症、神经性疾病、代谢性疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、组织纤维化相关疾病、和自身免疫性疾病。

在另一优选例中，所述肿瘤选自：肺癌,乳腺癌,血液癌,宫颈癌,卵巢癌,肠胃癌,胰腺癌,前列腺癌,肝癌,脑瘤,皮肤癌,以及其它实体瘤等疾病。

本发明的第四方面，提供了一种抑制布罗莫区结构域活性的方法，包括步骤：对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第一方面所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，或对抑制对象施用抑制有效量的如本发明第二方面所述的药物组合物。

本发明的第五方面，提供了一种如本发明第一方面所述的化合物的制备方法，该方法包括步骤：

(1)将式II化合物和式III化合物反应，从而生成式I化合物，其中L为离去基团，M为可与L偶联的基团。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

(2)将式IV化合物和式V化合物反应，从而生成式II化合物，其中L为离去基团。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

(3)通过式VI化合物制备式IV的步骤。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

(4)将式VIII化合物和式VII化合物反应，从而生成式VI化合物，其中L为离去基团，M为可与L偶联的基团。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

(5)通过式IX化合物制备式VIII化合物的步骤，其中，Hal为卤素、M如上所述。

在另一优选例中，L为卤素基团。

在另一优选例中，M为硼酸或硼酸酯基团。

在另一优选例中，所述方法包括步骤：

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

(3)通过式VI化合物制备式IV的步骤。

在另一优选例中，所述方法还包括步骤：

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

本申请的发明人经过广泛而深入地研究，首次意外研发出一种新型的结构如式I所示的咔啉衍生物，用作布罗莫区结构域抑制剂。在此基础上，完成了本发明。

术语

除特别说明之处，本文中提到的“或”具有与“和/或”相同的意义(指“或”以及“和”)。

除特别说明之处，本发明的所有化合物之中，各手性碳原子(手性中心)可以任选地为R构型或S构型，或R构型和S构型的混合物。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烷基”指具有1～8个碳原子的直链(即，无支链)或支链烷基，或其组合。所述的烷基可以是饱和的，单不饱和或多不饱和的，且可以包括二价或多价的原子团。当烷基前具有碳原子数限定(如C_1-10)时，指所述的烷基含有1-10个碳原子，例如，C_1-8烷基可以包括具有1-8个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、或类似基团。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“烯基”是指直链或支链，具有至少1个碳碳双键的碳链。具有一个双键的烯基可以被表示为-C_nH_2n-1，具有2个双键的烯基可以被表示为-C_nH_2n-3。当烯基前具有碳原子数限定(如C_2-8)时，指所述的烯基含有2-8个碳原子，例如，具有2-8个碳原子的直链或支链烯基，例如乙烯基、丙烯基、1,2-丁烯基、2,3-丁烯基、丁二烯基、或类似基团。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“炔基”是指具有至少一个碳碳三键的脂肪族碳氢基团。所述的炔基可以是直链或支链的，或其组合。在一些实施例中，所述的炔基具有2-12(例如，2-8，2-6，或2-4)个碳原子。当炔基前具有碳原子数限定(如C_2-8炔基)时，指所述的炔基含有2-8个碳原子，例如，术语“C_2-8炔基”指具有2～8个碳原子的直链或支链炔基，例如乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、仲丁炔基、叔丁炔基、或类似基团。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“环烷基”指具有饱和的或部分饱和的单环、二环或三环(包括并环、桥环或螺环)环系。所述的环烷基可以具有3-12个(例如，3-10个，或5-10个)碳原子。当某个环烷基前具有碳原子数限定(如C_3-10)时，指所述的环烷基含有3-10个碳原子。在一些优选实施例中，术语“C_3-8环烷基”指具有3～8个碳原子的饱和或部分饱和的单环或二环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环庚基、或类似基团。

如本文所用，术语“烷氧基”或“烷基氧基”指通过氧原子相连的烷基(例如，-O-烷基)，其中烷基如上所述。特定的烷氧基的例子例如(但并不限于)甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、或类似基团。烷氧基可以被1个或多个取代基取代，所述的取代基例如卤素、氨基、氰基，或羟基。烷氧基可以为直链或支链的。当烷氧基前具有碳原子数限定(如C_1-8)时，指所述的环烷基含有1-8个碳原子。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“卤素”指F、Cl、Br和I。

如本文所用，术语“烷氧基羰基”指直链或支链的烷基-氧羰基片段(烷氧基-C＝O)。烷氧基可具有1-8个碳原子。当烷氧基羰基前具有碳原子数限定(如C_1-8)时，指所述的烷氧基羰基的烷基部分含有1-8个碳原子，例如，C_1-8烷氧基羰基指具有C_1-8烷氧基-C＝O-结构的基团，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基、叔丁氧基羰基，或类似基团。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“芳基”指单环，二环或稠环的芳香族碳氢基团。所述的芳基可以是取代或未取代的。当一个芳基前具有碳原子数限定(如C_6-12)时，指所述的芳基含有6-12个碳原子。芳基的例子例如(但并不限于)：苯基、联苯基、萘基、或类似基团(其中的每个碳原子均可以被任意取代)。在本发明中，芳基优选为C_6-12芳基。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂芳基”指单环，二环或稠环的芳香族基团，所述基团具有特定的成环碳原子数(例如，C_4-10即具有4-10个成环碳原子)，且包括至少一个相同或不同的选自N、O或S的杂原子。每个环上原子可以被任意取代。所述的杂芳基可以是5-至15-元的，具有1-5个各自独立地选自N、O或S的杂原子的芳香环基。杂芳基的例子例如(但并不限于)：吡啶、嘧啶、吡咯、吲唑、吲哚、呋喃、苯并呋喃、噻吩，或类似基团。

如本文所用，在单独或作为其他取代基一部分时，术语“杂环基”指单环或稠环的饱和或部分饱和取代基，所述基团具有特定的成环碳原子数(例如，C_3-11即具有3-11个成环碳原子)，且包括至少一个相同或不同的选自N、O或S的杂原子。本发明中，所述的杂环基可以是3-至15-元的，具有1-5个各自独立地选自N、O或S的杂原子的杂环基。杂环基的例子例如(但并不限于)：氮杂环基、氧杂环基、硫杂环基、氮氧杂环基、氮硫杂环基、氧硫杂环基等，更优选的为本申请各实施例中所出现的杂环基。本发明中，杂环基可以为单环、二环或三环(包括并环、桥环或螺环)。

如本文所用，术语“任意的”或“任选的”(例如，“被任意取代的”)指所述的部分为取代的或未取代的，且该取代仅发生与化学上可实现的位置。例如，H、共价键或-C(＝O)-基团不可以被取代基取代。

如本文所用，“氧”或“氧基”指＝O。

如本文所用，除非特别说明，术语“药学上可接受的盐”指适合与对象(例如，人)的组织接触，而不会产生不适度的副作用的盐。在一些实施例中，本发明的某一化合物的药学上可接受的盐包括具有酸性基团的本发明的化合物的盐(例如，钾盐，钠盐，镁盐，钙盐)或具有碱性基团的本发明的化合物的盐(例如，硫酸盐，盐酸盐，磷酸盐，硝酸盐，碳酸盐)。

如本文所用，术语“取代”(在有或无“任意地”修饰时)指特定的基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所取代。特定的取代基为在前文中相应描述的取代基，或各实施例中所出现的取代基。除非特别说明，某个任意取代的基团可以在该基团的任何可取代的位点上具有一个选自特定组的取代基，所述的取代基在各个位置上可以是相同或不同的。环状取代基，例如杂环烷基，可以与另一个环相连，例如环烷基，从而形成螺二环系，例如，两个环具有一个共用碳原子。本领域技术人员应理解，本发明所预期的取代基的组合是那些稳定的或化学上可实现的组合。所述取代基例如(但并不限于)：氘、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、3-至12-元杂环基，芳基、杂芳基、卤素、羟基、羧基(-COOH)、C_1-8醛基、C_2-10酰基、C_2-10酯基、氨基。在本发明中，氘代的烷基可以是全氘代的，或部分氘代的或其混合。

为了方便以及符合常规理解，术语“任意取代”或“任选取代”只适用于能够被取代基所取代的位点，而不包括那些化学上不能实现的取代。

药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体、互变异构体

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与药学上可接受的无机酸和有机酸所形成的盐，其中，优选的无机酸包括(但并不限于)：盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸；优选的有机酸包括(但并不限于)：甲酸、乙酸、丙酸、丁二酸、萘二磺酸(1,5)、亚细亚酸、草酸、酒石酸、乳酸、水杨酸、苯甲酸、戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、庚二酸、己二酸、马来酸、苹果酸、氨基磺酸、苯丙酸、葡糖酸、抗坏血酸、烟酸、异烟酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸，以及氨基酸。

如本文所用，术语“药学上可接受的溶剂合物”指本发明化合物与药学上可接受的溶剂形成溶剂合物，其中，所述药学上可接受的溶剂包括(但并不限于)：水、乙醇、甲醇、异丙醇、四氢呋喃、二氯甲烷。

如本文所用，术语“药学上可接受的立体异构体”指本发明化合物所涉及手性碳原子可以为R构型，也可以为S构型，或其组合。

药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，其具有显著的抗肿瘤功效，其中含有治疗有效量的所述式I化合物或其药学上可接受的盐，以及一种或多种药学上可接受的载体。

可将化合物本身或其药学上可接受的盐与可药用赋形剂、稀释剂等的混合物以片剂、胶囊、颗粒剂、散剂或糖浆剂的形式口服给药，或以注射剂的形式非口服给药。该药物组合物优选含有重量比为0.01％-99％的本发明的式I化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分，更优选含有重量比为0.1％-90％的活性成分。

上述制剂可通过常规制药方法制备。可用的药用辅剂的例子包括赋形剂(例如糖类衍生物如乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和山梨糖醇；淀粉衍生物如玉米淀粉、土豆淀粉、糊精和羧甲基淀粉；纤维素衍生物如结晶纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠；阿拉伯胶；右旋糖酐；硅酸盐衍生物如偏硅酸镁铝；磷酸盐衍生物如磷酸钙；碳酸盐衍生物如碳酸钙；硫酸盐衍生物如硫酸钙等)、粘合剂(例如明胶、聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇)、崩解剂(例如纤维素衍生物如羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮)、润滑剂(例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、鲸蜡、硼酸、苯甲酸钠、亮氨酸)、稳定剂(对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯等)、矫味剂(例如常用的甜味剂、酸味剂和香料等)、稀释剂和注射液用溶剂(例如水、乙醇和甘油等)。

本发明的化合物、其药学上可接受的盐或前药，或其药物组合物的给药量随患者的年龄、性别、种族、病情等的不同而不同。

药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的对布罗莫区结构域(bromodomain)的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由与布罗莫区结构域活性或表达量相关的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病(但并不限于)：各种癌症，例如肺癌、膀胱癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、唾液腺肉瘤、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、上皮细胞癌、多发性骨髓瘤、胰腺癌、淋巴瘤、慢性髓性白血病、淋巴细胞性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤等；T细胞调节的炎症和自身免疫疾病，例如：类风湿关节炎、胶原II关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、银屑病、青少年型糖尿病、干燥综合征、甲状腺疾病、结节病、炎性肠病、乳糜泻等等。以及其它的神经性疾病、代谢性疾病、心血管疾病、病毒感染、炎症、组织纤维化相关疾病等。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有5-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。

“药学上可以接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如 )、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选5～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

制备方法

对于根据本发明的咔啉衍生物，可以用有机合成化学领域及技术人员熟知的各种方法制备。可以使用下文中所描述的方法，与有机化学领域己知的合成方法一起或本领域技术人员所理解的在其上的变化来合成本发明化合物。

本发明所述式I化合物的制备方法可以从易于获得的起始原料使用以下的一般性方法和过程来制备本发明的化合物。将理解的是当给出典型的或优选的工艺操作条件(即反应温度，时间，反应物的摩尔，溶剂，压力等)时，还可以使用其他工艺操作条件，除非另有说明。最佳反应条件可以随所用的具体反应物或溶剂而变化，但这些条件可以由本领域技术人员通过常规最佳过程加以确定。

在此所描述的本发明所述式I化合物的方法可以根据本领域己知的任何适宜的方法加以监控。例如，核磁共振，质谱分析，HPLC，薄层色谱来监控产物的生成。化合物的制备可以涉及多个化学基团的保护和脱保护。对于保护和脱保护的需要，以及对适当的保护基的选择可以由本领域技术人员容易的加以确定，保护基的化学在Greene and Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Third Edition,Wiley&Sons,1999.

在本发明的一个优选地实施方式中，根据本发明的化合物的合成路线如下：

通常,可以采用如上所述的反应路线及工艺制备本发明化合物,但并不限于反应条件中的试剂和溶剂。R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉各为如上面所定义的官能团。Hal是卤素,能够轻易地转换成化合物VIII。L是离去官能团,例如卤素或OH能够转换成三氟甲磺酸离去官能团。Suzuki反应,例如2,5-二溴-3-硝基吡啶和VII得到吡啶化合物VI。接下来应用膦试剂,如1,2-双(二苯基膦基)乙烷还原关环得到咔啉化合物IV。咔啉化合物IV中的氮能够在Mitsunobu的反应条件下和V反应来得到化合物II。然后II和中间体化合物III在适当的催化剂条件下得到咔啉化合物I。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的有益之处在于：

(1)本发明提供了一种新型结构的咔啉衍生物；

(2)本发明提供的化合物对布罗莫区结构域具有显著的抑制作用；

(3)本发明提供了一类预防或治疗布罗莫区结构域相关的疾病的药物组合物。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

步骤A

向一个含有化合物1a(15g,50mmol)的甲醇(150ml)中加入甲胺(25ml,33％的乙醇溶液),反应液回流过夜.抽干有机溶剂后,硅胶柱层析分离(PE/EA＝3:1) 得一黄色油状化合物1b.

HNMR(CDCl3),7.5-7.7(m,3H),4.3(s,2H),3.1(s,3H).MS(ESI)m/z:225.9(M+H)+.

步骤B

向一个含有化合物1b(5g,22mmol),联硼酸频那醇脂(8.5g,33mmol)和KOAc(3.2g,33mmol)的1,4二氧六环(50ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,10ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(9g,33mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物1c.

HNMR(CDCl3),9.0(s,1H),8.4(s,1H),8.0(d,1H),7.6-7.7(m,2H),4.5(s,2H),3.3(s,3H).MS(ESI)m/z:347.9(M+H)+.

步骤C

将化合物1c(3.4g,10mmol)在亚磷酸三乙脂(50ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥得一混合化合物1d.(异构体比例大约是6:4).

HNMR(DMSO),11.8-12.2(d,1H),8.6(s,1H),8.2-8.4(m,2H),7.4-7.8(m,1H),4.4-4.8(m,2H),3.0-3.4(m,3H).MS(ESI)m/z:316.0(M+H)+.

步骤D

中间体a的制备是按照文献报道的方法[Orjales,A.et al.J.Med.Chem.2003,46,5512-5532和WO2015100282].化合物1d混合物(1.6g,5mmol)溶解于DCM(35ml)中,加入PPh3(2g,7.5mmol),中间体a(0.7g,3.7mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将10ml的DIAD(1.5g,7.5mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.TLC检测只有一个异构体反应.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一白色化合物1e.

MS(ESI)m/z:490.0(M+H)+.

步骤E

将含有化合物1e(500mg,1.02mmol),中间体b(592mg,1.5mmol),三乙胺(0.3ml,2mmol),Pd(dppf)2Cl2(100mg)的DMF(10ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物1.

HNMR(DMSO),8.4-8.8(m,2H),7.2-7.6(m,7H),5.4-5.7(m,1H),4.6(s,2H),3.8-4.2(m,5H),3.0-3.4(m,5H),2.0-2.4(m,5H),0.8-1.6(m,3H).MS(ESI)m/z:507.2(M+H)+.

实施例2

步骤A

向一个含有化合物2a(15g,50mmol)的甲醇(150ml)中加入甲胺(25ml,33％的乙醇溶液),反应液回流过夜.抽干有机溶剂后,硅胶柱层析分离(PE/EA＝3:1)得一黄色油状化合物2b.MS(ESI)m/z:225.9(M+H)+.

步骤B

向一个含有化合物2b(5g,22mmol),联硼酸频那醇脂(8.5g,33mmol)和KOAc(3.2g,33mmol)的1,4二氧六环(50ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,10ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(9g,33mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物2c.

HNMR(DMSO),9.1(s,1H),8.8(s,1H),7.7-7.8(m,3H),4.5(s,2H),3.1(s,3H).MS(ESI)m/z:347.9(M+H)+.

步骤C

将化合物2c(3.4g,10mmol)在亚磷酸三乙脂(50ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥得一混合化合物2d.

HNMR(DMSO),11.8-12.2(m,1H),8.0-8.6(m,3H),7.2-7.8(m,1H),4.4-4.6(m,2H),3.0-3.1(m,3H).MS(ESI)m/z:316.0(M+H)+.

步骤D

化合物2d混合物(1.6g,5mmol)溶解于DCM(35ml)中,加入PPh3(2g,7.5mmol),中间体a(1.4g,7.5mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将10ml的DIAD(1.5g,7.5mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.TLC检测只有一个异构体反应.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一白色化合物2e.

MS(ESI)m/z:490.0(M+H)+.

步骤E

将含有化合物2e(500mg,1.02mmol),中间体b(592mg,1.5mmol),三乙胺(0.3ml,2mmol),Pd(dppf)2Cl2(100mg)的DMF(10ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物2.

HNMR(DMSO),8.9(s,1H),8.6(s,1H),7.7(d,2H),7.2-7.5(m,5H),5.6(m,1H),4.6(s,2H),3.8-4.2(m,5H),3.0-3.6(m,5H),2.0-2.4(m,5H),1.0-1.6(m,3H).MS(ESI)m/z:507.2(M+H)+.

实施例3

步骤A

向一个含有化合物3a(15g,50mmol)的甲醇(150ml)中加入甲胺(25ml,33％的乙醇溶液),反应液回流过夜.抽干有机溶剂后,硅胶柱层析分离(PE/EA＝3:1)得一黄色油状化合物3b.

HNMR(DMSO)7.7(m,1H),7.6(m,2H),4.4(s,2H),3.0(s,3H).MS(ESI)m/z:225.9(M+H)+.

步骤B

向一个含有化合物3b(5g,22mmol),联硼酸频那醇脂(8.5g,33mmol)和KOAc(3.2g,33mmol)的1,4二氧六环(50ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,10ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(9g,33mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物3c.MS(ESI)m/z:347.9(M+H)+.

步骤C

将化合物3c(3.4g,10mmol)在亚磷酸三乙脂(50ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物3d.

HNMR(DMSO),11.8(s,1H),8.5(s,1H),8.1(s,1H),7.7(s,1H),7.6(s,1H),4.7(s,2H),3.1(s,3H).MS(ESI)m/z:316.0(M+H)+.

步骤D

化合物3d(1.6g,5mmol)溶解于DCM(35ml)中,加入PPh3(2g,7.5mmol),中间体a(0.7g,3.7mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将10ml的DIAD(1.5g,7.5mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一白色化合物3e.MS(ESI)m/z:490.0(M+H)+.

步骤E

将含有化合物3e(500mg,1.02mmol),中间体b(592mg,1.5mmol),三乙胺(0.3ml,2mmol),Pd(dppf)2Cl2(100mg)的DMF(10ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物3.

HNMR(DMSO),8.6(s,1H),8.1(s,1H),7.7-7.9(m,2H),7.2-7.5(m,5H),5.6(d,1H),5.0(s,2H),3.8-4.1(m,5H),3.0-3.8(m,5H),2.0-2.4(m,5H),1.0-1.8(m,3H).MS(ESI)m/z:507.2(M+H)+.

实施例4

步骤A

向一个含有化合物4a(10.5g,50mmol),联硼酸频那醇脂(19g,75mmol)和KOAc(7.5g,75mmol)的1,4二氧六环(150ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,30ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(21g,75mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物4b.

HNMR(CDCl3),8.9(s,1H),8.3(s,1H),8.0(s,1H),7.8(m,1H),7.7(m,1H),7.2(m,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:332.8(M+H)+.

步骤B

将化合物4b(6.6g,20mmol)在亚磷酸三乙脂(80ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物4c.

HNMR(CDCl3),8.5(s,1H),8.0-8.1(m,3H),7.5(s,1H),3.0(s,3H).MS(ESI)m/z:301.0(M+H)+.

步骤C

化合物4c(3g,10mmol)溶解于DCM(250ml)中,加入PPh3(4g,15mmol),中间体a(2.9g,15mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将30ml的DIAD(3g,15mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一白色化合物4d.

HNMR(CDCl3),8.6(s,1H),8.2(s,1H),8.0-8.1(m,1H),7.8(s,1H),7.6-7.7(m,2H),7.3-7.6(m,4H),6.0(d,1H),4.4(s,3H),3.9-4.0(m,1H),3.6-3.7(m,1H),3.4-3.5(m,1H),3.1-3.2(m,1H),2.8-3.0(m,1H),2.0-2.1(m,1H),0.8-1.4(m,2H),0.5(m,1H).MS(ESI)m/z:475.0(M+H)+.

步骤D

将含有化合物4d(1g,2.1mmol),中间体b(1.6g,4.2mmol),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物4.

HNMR(CDCl3),8.54(s,1H),8.23(s,1H),8.17(d,1H),7.70(d,1H),7.5(m,3H),7.3-7.4(m,3H),6.22(d,1H),4.5(s,3H),4.0(m,1H),3.85(s,3H),3.6-3.7(m,1H),3.4-3.5(m,1H),3.0-3.1(m,1H),2.9-3.0(m,1H),2.26(s,3H),2.0-2.2(m,1H),1.0-1.4(m,2H),1.0(m,1H).MS(ESI)m/z:492.2(M+H)+.

实施例5

步骤A

向一个含有化合物5a(10.5g,50mmol),联硼酸频那醇脂(19g,75mmol)和KOAc(7.5g,75mmol)的1,4二氧六环(150ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,30ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(21g,75mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物5b.

HNMR(CDCl3),8.9(d,1H),8.3(d,1H),8.0(s,1H),7.9(s,1H),7.5(m,1H),7.4(m,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:332.8(M+H)+.

步骤B

将化合物5b(6.6g,20mmol)在亚磷酸三乙脂(80ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物5c.

HNMR(CDCl3),8.5(s,1H),8.25(s,1H),8.18(s,1H),7.88(s,1H),7.2(s,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:301.0(M+H)+.

步骤C

化合物5c(3g,10mmol)溶解于DCM(200ml)中,加入PPh3(4g,15mmol),中间体a(2.9g,15mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将30ml的DIAD(3g,15mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一白色化合物5d.MS(ESI)m/z:475.0(M+H)+.

步骤D

将含有化合物5d(1g,2.1mmol),中间体b(1.6g,4.2mmol),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1) 得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物5.

HNMR(DMSO),9.0(s,1H),8.52(s,1H),8.27(s,1H),8.2(d,1H),7.5-7.7(m,3H),7.2-7.4(m,3H),6.0(d,1H),4.3(s,3H),4.1(m,1H),3.95(s,3H),3.0-3.8(m,4H),2.26(s,3H),1.8-2.0(m,1H),1.0-1.4(m,3H).MS(ESI)m/z:492.2(M+H)+.

实施例6

步骤A

向一个含有化合物6a(10.5g,50mmol),联硼酸频那醇脂(19g,75mmol)和KOAc(7.5g,75mmol)的1,4二氧六环(150ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,30ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(21g,75mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物6b.

HNMR(CDCl3),8.99(s,1H),8.39(s,1H),7.9(s,1H),7.52(m,1H),7.45(m,1H),7.2(m,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:332.8(M+H)+.

步骤B

将化合物6b(6.6g,20mmol)在亚磷酸三乙脂(80ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物6c.

HNMR(DMSO),11.8(s,1H),8.6(s,1H),8.4(s,1H),8.2(s,1H),7.85(m,1H),7.7(m,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:301.0(M+H)+.

步骤C

化合物6c(3g,10mmol)溶解于DCM(200ml)中,加入PPh3(4g,15mmol),中间体a(2.9g,15mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将30ml的DIAD(3g,15mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一白色化合物6d.MS(ESI)m/z:475.0(M+H)+.

步骤D

将含有化合物6d(1g,2.1mmol),中间体b(1.6g,4.2mmol),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,再用HPLC纯化得化合物6.

HNMR(CDCl3),8.72(s,1H),8.58(s,1H),7.8(m,1H),7.6-7.7(m,2H),7.4(m,2H),7.2-7.3(m,3H),5.6(d,1H),4.2(s,3H),3.95-4.05(m,1H),3.9(s,3H),3.8-3.9(m,1H),3.5-3.6( m,1H),3.2-3.4(m,1H),3.0-3.2(m,1H),2.3(s,3H),2.0-2.1(m,1H),1.2-1.6(m,2H),1.05(m,1H).MS(ESI)m/z:492.2(M+H)+.

实施例7

步骤A

向一个含有化合物7a(10.5g,50mmol),联硼酸频那醇脂(19g,75mmol)和KOAc(7.5g,75mmol)的1,4二氧六环(150ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,30ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(21g,75mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物7b.

HNMR(DMSO),9.14(s,1H),8.8(s,1H),8.4(s,1H),7.85(m,1H),7.60(m,1H),7.2(m,1H),4.1(s,3H).MS(ESI)m/z:332.8(M+H)+.

步骤B

将化合物7b(6.6g,20mmol)在亚磷酸三乙脂(80ml)溶液中回流3h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物7c.

HNMR(DMSO),11.8(s,1H),8.55(s,1H),8.41(s,1H),8.14(s,1H),7.8(m,1H),7.35(m,1H),4.2(s,3H).MS(ESI)m/z:301.0(M+H)+.

步骤C

化合物7c(3g,10mmol)溶解于DCM(200ml)中,加入PPh3(4g,15mmol),中间体a(2.9g,15mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将30ml的DIAD(3g,15mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一白色化合物7d.

HNMR(CDCl3),8.6(s,1H),8.1(s,1H),7.8(m,1H),7.4-7.5(m,3H),7.2-7.4(m,4H),5.5(d,1H),4.9(s,3H),4.0-4.1(m,1H),3.8(m,1H),3.5(m,1H),3.3(m,1H),3.1(m,1H),2.0(m,1H),1.8(m,1H),1.2-1.4(m,1H),0.8-1.0(m,1).MS(ESI)m/z:475.0(M+H)+.

步骤D

将含有化合物7d(1g,2.1mmol),中间体b(1.6g,4.2mmol),三乙胺 (0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物7.

HNMR(DMSO),8.62(s,1H),8.15(s,1H),7.89(m,2H),7.68(m,2H),7.2-7.4(m,4H),5.93(d,1H),4.9(s,3H),4.0(s,3H),3.0-4.0(m,5H),2.31(s,3H),1.0-2.0(m,4H).MS(ESI)m/z:492.2(M+H)+.

实施例8

步骤A

向一个含有化合物8a(11.5g,50mmol)的51ml乙二醇二甲醚溶液中加入51ml无水肼,反应液搅拌回流三小时.冷却到室温后,乙二醇二甲醚减压蒸馏后,向残留液中加入冰块形成白色固体.过滤,水洗后,用二氯甲烷溶解,过滤.滤液减压蒸馏后化合物8b.MS(ESI)m/z:215.2(M+H)+.

向一个含有化合物8b(5.5g,25.6mmol)的100ml THF溶液中在冰浴的条件下加入NaH(1.2g,30.7mmol,60％).在冰浴的条件下反应液搅拌一小时后,将25ml的含有CH3I(7.2g,51.2mmol)THF溶液慢慢滴加进去,然后搅拌过夜.倒入水中,用乙酸乙酯萃取后,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(PE:EA＝100:1to 10:1)得白色固体化合物8c.MS(ESI)m/z:229.2(M+H)+.

向一个含有化合物8c(11g,48mmol),联硼酸频那醇脂(14.4g,56.8mmol)和KOAc(9.3g,95mmol)的1,4二氧六环(200ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1.5g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入 Na2CO3水溶液(2.5M,38ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(16g,56.8mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物8d.MS(ESI)m/z:351.2(M+H)+.

步骤B

将化合物8d(10g)在亚磷酸三乙脂(80ml)溶液中回流1h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥得黄色固体化合物8e.

HNMR(DMSO),11.8(s,1H),8.6(s,1H),8.4(s,1H),8.2(s,1H),7.5(d,1H),4.2(s,3H).MS(ESI)m/z:319.2(M+H)+.

步骤C

化合物8e(2g,6.3mmol)溶解于DCM(40ml)中,加入PPh3(3.3g,12.6mmol),中间体a(2.4g,12.6mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将10ml的DIAD(3g,15mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌二天,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体化合物8f.MS(ESI)m/z:493.4(M+H)+.

步骤D

将含有化合物8f(0.98g,2mmol),中间体b(1.5g,4mmol),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(10ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物8.

HNMR(DMSO),8.6(s,1H),8.4(m,2H),7.6(m,2H),7.2-7.3(m,4H),5.9(d,1H),4.2(s,3H),4.0(s,3H),3.85(m,1H),3.65(m,1H),3.2-3.6(m,3H),2.3(s,3H),1.2-1.8(m,3H),0.8-1.0(m,1H).MS(ESI)m/z:510.8(M+H)+.

实施例9

步骤A

向一个含有化合物9a(5g,24mmol),联硼酸频那醇脂(7.6g,30mmol)和 KOAc(5g,48mmol)的1,4二氧六环(150ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,20ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(8g,30mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物9b.

HNMR(DMSO),9.0(s,1H),8.8(s,1H),7.5(m,1H),7.4(m,1H),7.2-7.3(m,2H),7.1-7.2(m,1H),3.8(s,3H).MS(ESI)m/z:332.4(M+H)+.

步骤B

将化合物9b(5g,15mmol)在亚磷酸三乙脂(50ml)溶液中回流1h.抽干溶剂后,加入水得固体,洗涤,干燥化合物9c.

HNMR(DMSO),11.5(s,1H),8.5(s,1H),8.1(s,1H),7.7(m,1H),7.47(s,1H),7.4(m,1H),7.0(s,1H),3.9(s,3H).MS(ESI)m/z:301.2(M+H)+.

步骤C

化合物9c(2g,6.6mmol)溶解于无水DMF(30ml)中,加入Cs2CO3(5g,14.4mmol),中间体c(3.2g,13.2mmol).反应混合物在45℃搅拌三天,然后将中间体c(3.2g,13.2mmol)滴加进去,然后在50℃搅拌三天.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色化合物9d.

HNMR(CD3Cl),8.55(s,1H),7.96(s,1H),7.2-7.6(m,9H),5.4(d,1H),3.7-4.0(m,5H),3.0-3.4(m,3H),1.0-2.0(m,4H).MS(ESI)m/z:474.2.0(M+H)+.

步骤D

将含有化合物9d(0.8g,1.7mmol),中间体b(1.3g,3.4mmol),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(10ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物9.

HNMR(CDCl3),8.88(s,1H),8.59(s,1H),7.8-7.9(m,2H),7.7(s,1H),7.2-7.6(m,6H),5.6(d,1H),4.1(m,1H),3.9(s,3H),3.8(m,1H),3.5(m,1H),3.3(m,1H),3.1(m,1H),2.3(s,3H),2.0(m,4H),1.4(m,1H),1.2(m,1H),1.05(m,1H).MS(ESI)m/z:491.8(M+H)+.

实施例10

步骤A

向一个含有化合物10a(10g,51mmol)的100ml THF溶液中在冰浴的条件下加入NaH(2.4g,60mmol,60％).在冰浴的条件下反应液搅拌一小时后,将25ml的含有2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯(SEMCl,8.5g,51.2mmol)THF溶液慢慢滴加进去,然后搅拌过夜.倒入水中,用乙酸乙酯萃取后,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(PE:EA＝100:1to 10:1)得白色固体化合物10b.

HNMR(CDCl3),7.4(m,1H),7.3(m,1H),7.2(m,1H),7.05(m,1H),6.5(m,1H),5.4(s,2H),3.4(m,2H),0.9(m,2H),0(m,9H).MS(ESI)m/z:326.2(M+H)+.

步骤B

向一个含有化合物10b(15g,46mmol),联硼酸频那醇脂(14.4g,56.8mmol)和KOAc(9.3g,95mmol)的1,4二氧六环(200ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1.5g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,38ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(16g,56.8mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物10c.

HNMR(CDCl3),8.96(s,1H),8.39(s,1H),7.6(m,1H),7.2-7.3(m,3H),6.4(m,1H),5.5(s,2H),3.4-3.5(m,2H),0.8-0.9(m,2H),0(m,9H).MS(ESI)m/z:448.2(M+H)+.

步骤C

将化合物10c(12.5g,30mmol)在亚磷酸三乙脂(150ml)溶液中回流1h.然后在冰浴里搅拌得固体,过滤后,用水和乙醚洗涤,干燥得化合物10d.

HNMR(DMSO),11.6(s,1H),8.6(s,1H),8.2(s,1H),7.9(m,1H),7.7(s,1H),7.5(m,1H),7.2(s,1H),5.77(s,2H),3.4-3.5(m,2H),0.8-1.0(m,2H),0(s,9H).MS(ESI)m/z:416.2(M+H)+.

步骤D

化合物10d(3g,7.2mmol)溶解于无水DMF(30ml)中,加入Cs2CO3(5g,14.4mmol),中间体c(3.8g,14.4mmol).反应混合物在45℃搅拌三天,然后将中间体c(2g,8mmol)滴加进去,然后在50℃搅拌三天.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色化合物10e.HNMR(CDCl3),8.6(s,1H),8.0(s,1H),7.7(m,1H),7.5(m,3H),7.2-7.4(m,5H),5.6(s,2H),5.5(d,1H),3.0-4.0(m,8H),1.0-2.0(m,4H),0.9(m,2H),0(m,9H).MS(ESI)m/z:590.2(M+H)+.

步骤E

将含有化合物10e(1.5g,2.5mmol),中间体b(2g,5mmol),三乙胺(0.7ml,5mmol),Pd(dppf)2Cl2(300mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品化合物10f.MS(ESI)m/z:607.2(M+H)+.

步骤F

将含有化合物10f(300mg,0.5mmol),TBAF(2ml,1.0M in THF)的THF(5ml)混合液加热回流搅拌18h后,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,用HPLC纯化得化合物10.

HNMR(CDCl3),9.39(s,1H),8.62(s,1H),7.8(m,1H),7.7(m,1H),7.6(m,1H),7.2-7.6(m,6H),5.6(d,1H),4.14(m,1H),3.8-4.0(m,4H),3.5-3.7(m,1H),3.3-3.5(m,1H),3.1-3.3(m,1H),2.3(s,3H),2.0-2.2(m,1H),1.6-1.8(m,1H),1.4-1.6(m,1H),1.1-1.3(m,1H).

MS(ESI)m/z:477.4(M+H)+.

实施例11

步骤A

向一个含有化合物11a(10g,51mmol)的100ml THF溶液中在冰浴的条件下加入NaH(2.4g,60mmol,60％).在冰浴的条件下反应液搅拌一小时后,将25ml的含有2-(三甲硅烷基)乙氧甲基氯(SEMCl,8.5g,51.2mmol)THF溶液慢慢滴加进去,然后搅拌过夜.倒入水中,用乙酸乙酯萃取后,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(PE:EA＝100:1to 10:1)得白色固体化合物11b.HNMR(CDCl3),8.0(m,1H),7.5(m,1H),7.2-7.4(m,2H),5.7(m,2H),3.5(m,2H),0.9(m,2H),0(m,9H).MS(ESI)m/z:327.2(M+H)+.

步骤B

向一个含有化合物11b(15g,46mmol),联硼酸频那醇脂(14.4g,56.8mmol)和KOAc(9.3g,95mmol)的1,4二氧六环(200ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1.5g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,38ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(16g,56.8mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物11c.

HNMR(CDCl3),9.0(s,1H),8.4(s,1H),7.99(s,1H),7.7(m,1H),7.48(m,1H),7.25(m,1H),5.78(s,2H),3.58(m,2H),0.88(m,2H),0(m,9H).MS(ESI)m/z:449.2(M+H)+.

步骤C

将化合物11c(12.5g,30mmol)在亚磷酸三乙脂(150ml)溶液中回流1h.然后在冰浴里搅拌得固体,过滤后,用水和乙醚洗涤,干燥得化合物11d.

HNMR(DMSO),12.0(s,1H),8.75(s,1H),8.64(s,1H),8.37(s,1H),8.06(d,1H),7.85(d,1H),5.99(s,2H),3.68(m,2H),0.94(m,2H),0(s,9H).MS(ESI)m/z:417.2(M+H)+.

步骤D

化合物11d(3g,7.2mmol)溶解于DCM(40ml)中,加入PPh3(3.7g,14.4mmol),中间体a(2.7g,14.4mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将30ml的DIAD(4g,20mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌二天,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色液体化合物11e.MS(ESI)m/z:591.2(M+H)+.

步骤E

将含有化合物11e(1.5g,2.5mmol),中间体b(2g,5mmol),三乙胺(0.7ml,5mmol),Pd(dppf)2Cl2(300mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品化合物11f.

HNMR(DMSO),8.7(s,1H),8.5(s,1H),7.8(m,2H),7.7(s,1H),7.45(m,2H),7.2-7.3(m,3H),5.85(s,2H),5.6-5.7(d,1H),4.0-4.1(m,4H),3.0-4.0(m,6H),2.2(m,2H),1.0-2.0(m,4H),0.8-1.0(m,2H),0(s,9H).MS(ESI)m/z:608.2(M+H)+.

步骤F

将含有化合物11f(600mg,1mmol)的DCM(10ml)混合液加入TFA(5ml),加热回流搅拌18h后,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一黄色固体粗品,再用HPLC纯化得化合物11.

HNMR(CDCl3),9.18(s,1H),8.87(s,1H),7.95-8.03(m,2H),7.90(s,1H),7.45(m,2H),7.3-7.4(m,3H),5.74(d,1H),4.07-4.09(m,1H),3.95(s,3H),3.83-3.87(m,1H),3.54-3.60(m,1H),3.32-3.38(m,1H),3.13-3.16(m,1H),2.3(s,3H),2.11-2.14(m,1H),1.63-1.67(m,1H),1.4-1.42(m,1H),1.0(m,1H).MS(ESI)m/z:478.7(M+H)+.

实施例12

步骤A

向一个含有化合物12a(10g,48.4mmol),联硼酸频那醇脂(14.4g,56.8mmol)和KOAc(9.3g,95mmol)的1,4二氧六环(200ml)混合液中加入Pd(dppf)2Cl2(1.5g),用氮气冲洗.封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.冷却到室温后,再加入Na2CO3水溶液(2.5M,38ml),Pd(dppf)2Cl2(1g)和2,5-二溴-3-硝基吡啶(16g,56.8mmol).冲氮十分钟后,封闭反应瓶,反应液在85℃搅拌过夜.将反应液倒入水中,用乙酸乙脂萃取.混合后的有机相用Na2SO4干燥,抽干,硅胶柱层析纯化(PE:EA＝10:1to 1:1)得一黄色固体化合物12b.

HNMR(CDCl3),8.9(m,2H),8.47(s,1H),8.2(d,1H),7.85(m,1H),7.72(m,1H),7.4(m,1H),7.35(m,1H).MS(ESI)m/z:330.2(M+H)+.

步骤B

将化合物12b(10g,30mmol)在亚磷酸三乙脂(100ml)溶液中回流1h.然后在冰浴里搅拌得固体,过滤后,用水和乙醚洗涤,干燥得化合物12c.

HNMR(DMSO),12.2(s,1H),9.5(d,1H),8.8(d,1H),8.6(s,1H),8.3(m,1H),8.0-8.1(m,2H),7.7(m,1H).MS(ESI)m/z:298.2(M+H)+.

步骤C

化合物12d(3g,10mmol)溶解于DCM(100ml)中,加入PPh3(5.2g,20mmol),中间体a(6.3g,33mmol).反应混合物在冰水浴中搅拌1h,然后将50ml的DIAD(4g,20mmol)DCM溶液缓慢地滴加进去,然后在室温下搅拌,用TLC检测直到反应完全.溶液抽干后,粗品硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得化合物12d.

HNMR(CDCl3),9.8(s,1H),8.9(m,1H),8.7(m,1H),8.2(m,1H),8.05(m,2H),7.2-7.6(m,6H),5.5(d,1H),4.05(m,1H),3.8(m,1H),3.5(m,1H),3.35(m,1H),3.15(m,1H),2.0(m,1H),0.8-1.8(m,3H).MS(ESI)m/z:472.8(M+H)+.

步骤D

将含有化合物12d(1.5g,3.2mmol),中间体b(2.4g,6.4mmol),三乙胺(0.9ml,6.4mmol),Pd(dppf)2Cl2(300mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,再HPLC纯化得化合物12.

HNMR(DMSO),9.75(m,1H),8.9(m,1H),8.7(m,1H),8.2(m,1H),7.7(m,4H),7.2-7.4(m,4H),6.0(d,1H),4.0(s,3H),3.2-4.0(m,5H),2.3(s,3H),1.2-1.8(m,3H),0.8-1.0(m,1H).MS(ESI)m/z:489.8(M+H)+.

实施例13

步骤A

将含有化合物6d(1g,2.1mmol),中间体d(1.7g,4.3mmol)(中间体d的制备是按照文献报道的方法,WO2015100282),三乙胺(0.6ml,4.2mmol),Pd(dppf)2Cl2(200mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品,再HPLC纯化得化合物13.

HNMR(CDCl3),8.7(s,1H),8.6(s,1H),7.8(m,1H),7.6-7.7(m,2H),7.4(m,2H),7.2-7.3(m,3H),5.6(d,1H),4.25(s,3H),4.0-4.1(m,1H),3.9(s,3H),3.8-3.9(m,1H),3.5-3.6(m,1H),3.2-3.5(m,1H),3.0-3.2(m,1H),2.0-2.1(m,1H),1.6-1.8(m,1H),1.2-1.6(m,1H),1.0-1.1(m,1H).MS(ESI)m/z:495.2(M+H)+.

实施例14

步骤A

将含有化合物11e(1.5g,2.5mmol),中间体d(2g,5mmol),三乙胺(0.7ml,5mmol),Pd(dppf)2Cl2(300mg)的DMF(20ml)的混合液用氮气冲洗.反应瓶封闭后,在100-140℃加热搅拌4h后,倒入水中.用DCM萃取,混合后的有机相干燥,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to 10:1)得一黄色固体粗品化合物14a.MS(ESI)m/z:611.2(M+H)+.

步骤B

将含有化合物14a(600mg,1mmol)的DCM(10ml)混合液加入TFA(5ml),加热回流搅拌18h后,抽干得粗品,硅胶柱层析分离纯化(DCM:MeOH＝50:1to10:1)得一黄色固体粗品,再用HPLC纯化得化合物14.

HNMR(DMSO),13.4(s,1H),8.5-8.6(d,2H),7.6-7.8(m,4H),7.2-7.3(m,3H),7.19-7.23(m,1H),5.9(d,1H),4.0(s,3H),3.8(m,1H),3.6-3.7(m,1H),3.4-3.5(m,2H),3.2-3.3(m,1H),1.7(m,1H),1.5(m,1H),1.3(m,1H),0.95(m,1H).MS(ESI)m/z:481.7(M+H)+.

实施例15

TR-FRET BRD4活性检测:

BRD4活性检测是根据Cayman试剂盒中的TR-FRET方法进行的.使用超纯水稀释3x BRD TR-FRET Assay Buffer 1至1x BRD TR-FRET Assay Buffer备用.用1x BRD TR-FRET Assay Buffer分别100倍稀释Tb-labeled donor和dye-labeled acceptor.在样品孔、阴性对照孔和阳性对照孔中分别加入5μl稀释好的Tb-labeled donor和dye-labeled acceptor.使用配置好的1x BRD TR-FRET Assay Buffer配制10％的DMSO溶液(DMSO浓度过高会对反应产生影响，控制DMSO的终浓度为1％)，然后用10％的DMSO溶液稀释待测化合物，化合物的初筛浓度为1μM和100nM，IC50测试从10μM或100μM开始，3倍倍比稀释，8个或者10个浓度点。除对照孔外，向所用反应孔中加入2μl的稀释好的待测化合物溶液，向对照孔中加入2μl先前配制的10％的DMSO溶液.用1x BRD TR-FRET Assay Buffer分别40倍稀释BET Bromodomain Ligand和Non-acetylated Ligand 1. 在样品孔和阳性对照孔中加入5μl稀释好的BET Bromodomain Ligand，在阴性对照孔中加入5μl稀释好的Non-acetylated Ligand 1.用1x BRD TR-FRET Assay Buffer将BRD4(BD1+BD2)bromodomain protein稀释至6ng/μl(18ng/孔)，向所有孔中加入3μl稀释好的BRD4(BD1+BD2)bromodomain protein.封板混匀，室温反应2h后，用ENVISION(Perkinelmer)仪器检测荧光信号(320nm刺激,665nm，615nm发射).通过阳性对照孔和阴性对照孔计算出每个孔的抑制率，复孔取平均值，同时用画图分析软件PRISM 5.0对每个待测化合物进行半数抑制活性(IC50)的拟合,表1。

表1

化合物编号	FRET BRD4 IC50(nM)
1	3.6
2	2.2
3	1.9
4	4.6
5	3.8
6	1
7	5.2
8	2.6
9	3.5
10	1.5
11	1
12	3.2
13	1
14	1

实施例16

细胞活性检测:

MDA-MB-231细胞株订购于中科院上海细胞资源中心,是根据CCK-8的试剂盒中的方法进行.收集对数生长期细胞，计数，用完全培养基重新悬浮细胞，调整细胞浓度至合适浓度(依照细胞密度优化试验结果确定)，接种96孔板，每孔加100μl细胞悬液.细胞在37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育24小时.用培养基将待测化合物稀释至所设置的相应作用浓度，按25μl/孔加入细胞.化合物作用终浓度从1μM至0μM，3倍梯度稀释，共10个浓度点.细胞置于37℃，100％相对湿度，5％CO₂培养箱中孵育72小时.直接加入1/10体积的CCK-8于细胞培养基中，置于37℃培养箱中孵育2-4小时.轻轻震荡后在SpectraMax M5Microplate Reader上测定450nm波长处的吸光度，以650nm处吸光度作为参比，计算抑制率,运用软件Graphpad Prism 5进行IC50曲线拟合并计算出IC50值.

H211和H187细胞株订购于ATCC,按照Alamar-Blue检测试剂盒的说明来检测.用DMSO溶解药物至50mM储液，并储存于‐20℃的冰箱。首先稀释待测药物储液，并按照1:3倍的倍比用DMSO做倍比梯度稀释.随后用细胞完全培养基稀释DMSO倍比梯度稀释好的药品至10X终浓度的药物溶液,从培养箱中取出96孔细胞培养板，向96孔板中加入10μl包含一系列不同浓度药物的培养基(10X终浓度)，放入到CO2培养箱37℃培养72h后进行检测,计算出来的抑制率利用GraphPad Prism 5.0和MATILAB软件采用非线性回归的方法作图得到一系列的剂量反应曲线，从中获得待测样品的IC50,表2。

表2

化合物编号	MDA-MB-231 IC50(nM)	H211 IC50(nM)	H187 IC50(nM)
1	ND	7.2	21
2	ND	8.5	19
3	ND	5.2	35
4	ND	11.2	37
5	ND	29.5	35
6	1.6	2	5.5
7	4.6	3.5	6.5
8	3.2	4.2	6.5
9	ND	6.7	7
10	8.1	32	8.5
11	3.7	4.2	5.5
12	ND	12	7.5
13	1.8	2	5.5
14	3.5	4	5.5

ND:没有检测.

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

一种咔啉衍生物，其药学上可接受的盐、溶剂合物、立体异构体、或互变异构体，其特征在于，所述咔啉衍生物的结构如下式I所示：

式中，

A为芳基、杂芳基、或3-至12-元单环或多环杂环，其中，所述的杂环含有0-4个各自独立地为N、O、S、S(O)或S(O)₂的杂原子；

R₁、R₂、R₃、R₄各自独立地为氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、C_3-8环氧烷基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；或者，相邻的R₁,R₂,R₃,R₄与其相连的A环上的原子共同形成3-至9-元环；

R₅选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₆选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₇选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基、芳基、杂芳基、或3-至12-元杂环基；

R₈选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基；

R₉选自：氢、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-8烷氧基、C_1-8烷氧基羰基；

其中，各个上述的烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基、3-至9-元环任选地且各自独立地被一个或多个取代基取代，所述的取代基各自独立地为氘、卤素、C_1-8烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、3-至12-元杂环基，芳基、杂芳基、CN、NO₂、＝O、＝S。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，所述咔啉衍生物结构如下式II所示：

其中，P、Q、K、M各自独立地为N或C；

表示单键或双键；

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉分别如上所述。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，R₁和R₂与其相连的碳原子共同形成3-至9-元环，优选地为5-元环或6-元环。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，R₂和R₃与其相连的碳原子共同形成3-至9-元环，优选地为5-元环或6-元环。
如权利要求3或4所述的咔啉衍生物，其特征在于，所述3-至9-元环任选地含有1-3个选自N、O或S的杂原子。
如权利要求3或4所述的咔啉衍生物，其特征在于，所述3-至9-元环为饱和的或不饱和的。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，R₈选自下组：氢、卤素、C_1-8氘代烷基、C_2-4烯基、C_2-4炔基。
在另一优选例中，R₉选自下组：C_1-3烷基、C_2-8烯基、C_2-8炔基、C_3-8环烷基、C_1-5烷氧基。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，R₈为氘代甲基。
如权利要求1所述的咔啉衍生物，其特征在于，所述的咔啉衍生物选自下组：
一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括：(i)治疗有效量的权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐；和(ii)药学上可接受的载体。
如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于：

(a)制备布罗莫区结构域抑制剂；

(b)制备预防和/或治疗与布罗莫区结构域有关的疾病的药物；和/或

(c)体外非治疗性地抑制布罗莫区结构域。
一种抑制布罗莫区结构域活性的方法，其特征在于，包括步骤：对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求1所述的式I化合物或其药学上可接受的盐，或对抑制对象施用抑制有效量的如权利要求7所述的药物组合物。
一种如权利要求1所述化合物的制备方法，该方法包括步骤：

(1)将式II化合物和式III化合物反应，从而生成式I化合物，其中L为离去基团，M为可与L偶联的基团。
如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述方法还包括步骤：

(2)将式IV化合物和式V化合物反应，从而生成式II化合物，其中L为离去基团。