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CN108042547A - 胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用 - Google Patents

胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用 Download PDF

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CN108042547A
CN108042547A CN201711317423.6A CN201711317423A CN108042547A CN 108042547 A CN108042547 A CN 108042547A CN 201711317423 A CN201711317423 A CN 201711317423A CN 108042547 A CN108042547 A CN 108042547A
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CN
China
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diketone
damage
cholesteric
alkene
disease
Prior art date
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Pending
Application number
CN201711317423.6A
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English (en)
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张静夏
颜光美
银巍
陈文礼
张伟
李心花
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Sun Yat Sen University
Original Assignee
Sun Yat Sen University
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Publication date
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    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol

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Abstract

本发明公开了胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮中在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮能减轻由谷氨酸引起的海马神经细胞氧化应激损伤、能减轻钾剥夺引起的小脑颗粒神经元凋亡损伤、能减轻谷氨酸引起的皮层神经元和小脑颗粒神经元氧化应激损伤，同时在脑卒中大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型中具有显著减少梗死体积的功能，具有用于开发成多种作用机制的神经保护剂的潜能。帕金森病、阿尔兹海默症、tau蛋白病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病及脑中风、脑损伤、脊髓损伤均由神经元的损伤引起，且进一步加重神经元损伤，胆甾‑4‑烯‑3,6‑二酮对神经元损伤的保护作用在上述疾病的治疗或预防神经元损伤药物中具有潜在功能。

Description

胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的 应用
技术领域
本发明涉及胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
背景技术
胆甾-4-烯-3,6-二酮是一种胆固醇衍生物，其结构式如下所示：
目前关于该化合物的合成方法主要有以胆固醇为原料(1)经过Jones试剂氧化一步反应 获得(Zhang Wei，et al,Steroids,2014,86,39-44)；(2)经过PCC/二氯甲烷氧化一步反 应获得(Huang,Yanmin et al,Faming Zhuanli Shenqing,103044514)；(3)经过PDC/DMF 氧化反应一步获得(Hector Markus et al,Synthetic Communications,26(6),1075-82； 1996)；(4)经过四丙基高钌酸铵/N-甲基-N-氧化吗啉/二氯甲烷氧化一步反应获得(Moreno, M.J.S.et al,Tetrahedron Letters,32(27),3201-4；1991)；(5)经过三氧化铬/吡啶/二 氯甲烷氧化反应一步获得(Yang,Chun et al,Bioorganic&Medicinal ChemistryLetters, 23(17),4806-4812；2013)；(6)经过CrO4(t-Bu)2/吡啶氧化反应一步获得(Menini,E.and Norymberski,J.K.Biochemical Journal,84,195-201；1962)；(7)经过重铬酸钠/苯/乙 酸氧化一步反应可以获得等多种合成方法。自然界或者生物体内，该化合物的来源主要来自 于微生物氧化甾醇、海洋天然产物提取物和植物提取物等，同时该化合物在新生的DhCr7△ 3-5/T93M小鼠大脑中被检测到(Meljon Anna,et al,BiochemicalPharmacology,2013, 86(1),43-55)。
迄今，关于该化合物的活性研究主要有(1)Labyrinthula物种的生长因子(Vishniac, Helen S.Journal of General Microbiology,1955,12,464-72)；(2)致癌活性(Bischoff, Fritz,et al,Federation Proceedings,1955,14,183)；(3)致家蝇绝育(Rezabova,B.et al, Steroids,1968,11(4),475-96)；(4)减肥药(Suzuki,Kunio,et al,PCT Int.Appl.(1995), WO 9508995A1)；(5)抗肿瘤活性(Braekman,Jean-Claude,et al,PCT Int. Appl.(2004),WO2004055039A1 20040701)；(6)抗真菌活性(Brunel,JeanMichel,et al, Steroids,2005,70(13),907-912)；(7)移植医疗器械外包材料(Hakimi-Mehr,Dorna,et al, PCT Int.Appl.(2008),WO 2008077248 A1和Liu,Deanmo,et al,PCTInt.Appl.(2008), WO 2008077247A1)；(8)抗动脉粥样硬化；(9)可能在脂肪组织中逆转二噁英的毒性(Hu Chuanqin,et al,Analytical Methods,2014,6(20),8207-8211)；(10)抗微生物作用(Jain,S. C.et al,Pharma Chemica,2012,4(5),2073-2079)；(11)醛酮还原酶AKR1B10抑制剂 (Zhang Wei，et al,Steroids,2014,86,39-44)等。目前暂无该化合物在神经元保护方面 的报道。
神经元保护剂的研发一直是临床和基础研究的重点，制备神经保护细胞模型上通常依据 不同的目的选用不同的原代培养神经元损伤模型。
HT-22细胞株是小鼠海马原代神经元经过改造而得，能表达胆碱能神经元标记物，具有 形态和生理功能与正常海马神经元相似，培养过程简单，可以传代等优点。谷氨酸诱导的HT-22 细胞损伤包括细胞坏死、凋亡和死亡等，分子机制上存在多种解释(Fukui M,etal..European journal of pharmacology,2009,617(1):1-11.)，目前该模型是一种公认的神经元氧化应激 损伤模型(Breyer A,et al.Phytomedicine,2007,14(4):250-255)。同时，氧化应激损伤贯穿 着脑卒中的缺血和再灌注全过程，氧化应激是研发多靶点神经保护剂重要靶点，该模型已被 广泛用于抗氧化损伤神经保护剂研究。
正常情况下神经元胞内外离子维持一定浓度梯度，是维持神经元去极化和复极化所必须 的。缺血时，大量梗死灶周围的神经元凋亡，造成了半影区不断变成梗死区。神经元凋亡是 研究脑卒中神经保护剂的重要靶点(Alhadidi Q,et al.Translational strokeresearch, 2016,7(1):33-41)。用含25mM KCl的BME培养基培养大鼠小脑颗粒神经元，经过5mM KCl 的BME处理24小时，可以建立稳定的小脑颗粒神经元凋亡模型，该模型已被广泛用于抗凋亡 神经保护剂研究(Dragotto J,et al.Springer International Publishing,2015:513-523)。
兴奋性毒性是脑卒中重要病理机制之一，在缺血性脑卒中，神经元释放过量谷氨酸，同 时由于供能障碍，胶质细胞重吸收谷氨酸的功能受阻，导致谷氨酸浓度过高，造成神经兴奋 性毒性(Kritis AA,et al.Frontiers in cellular neuroscience,2015,9:91)。谷氨酸介导 的神经兴奋性是脑卒中神经保护的重要靶点(Chamorroet al.The LancetNeurology, 2016,15(8):869-881)。神经元兴奋性毒性模型已被广泛用于神经保护剂研究，申请人已开 展在大鼠大脑皮质神经元和小脑颗粒神经元上进行药物神经保护活性研究。
日本科学家Koizumi J在1986年发明了线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型(MCAO)。在颈 总动脉分叉部插入栓线，经过颈内动脉、大脑中动脉末端，到达大脑前动脉始段。为了防止 线栓插入过程损伤血管壁，栓头要略大和圆润。目前该动物模型被公认为局灶性脑缺血标准 模型，在国内外得到广泛运用。
发明内容
本发明的目的在于提供胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应 用，其旨在提供一种用于治疗中枢神经退行性疾病及急性或慢性脑损伤的药物。
胆甾-4-烯-3,6-二酮能减轻由谷氨酸引起的海马神经细胞氧化应激损伤、能减轻钾剥夺 引起的小脑颗粒神经元凋亡损伤、能减轻谷氨酸引起的皮层神经元和小脑颗粒神经元氧化应 激损伤，同时在脑卒中大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型中具有显著减少梗死体积的功能，具 有用于开发成多种作用机制的神经保护剂的潜能。
本发明的胆甾-4-烯-3,6-二酮可通过化学合成或天然产物提取分离获得：
(1)化学合成：在反应瓶中加入胆固醇(5g，13mmol)，100ml二氯甲烷，加入琼斯试剂 (14g，65mmol)，室温下反应24h，TCL检查反应完全后，结束反应，滤去不溶物，反应液 浓缩，过硅胶柱，石油醚-乙酸乙酯(5：1)洗脱，淋洗液浓缩，得目标产物8.6g,产率86％， 纯度98％；m.p.108.0–110.2C.1H NMR(400MHz,CDCl3)d 6.10(s,1H,4-H),2.62(m,2H, 2-H),2.43(m,2H,7-H),1.09(s,3H,19-CH3),0.86(d,J＝5.2Hz,3H,21-H),0.81(s,3H,26or 27-CH3),0.79(s,3H,26or 27-CH3),0.66(s,3H,18-CH3).13C NMR(100MHz,CDCl3)d 202.24(C),199.42(C),161.05(C),125.42(CH),56.55(CH),55.97(CH),50.98(CH),46.78(CH2),42.53 (C),39.79(C),39.45(CH2),39.14(CH2),36.05(CH2),35.65(CH),35.53(CH2),34.20(CH),33.94 (CH2),27.98(CH),27.97(CH2),23.95(CH2),23.78(CH2),22.78(CH3),22.53(CH3),20.87(CH2), 18.63(CH3),17.49(CH3),11.87(CH3)；LR–EI–MS m/z 398(M+)；HRMS测定值C27H42O2: 398.3179(M+),理论值:398.3177。
(2)天然产物提取：将晒干的海绵1kg溶于95％乙醇，浸泡提取三次。将乙醇浓缩物均 匀分散于500mL水中,以等体积的乙酸乙酯萃取三次。乙酸乙酯萃取物经减压浓缩得褐色 膏状物30g。膏状物经硅胶柱层析以500mL不同比例的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱,以合成 的胆甾-4-烯-3,6-二酮为对照，获得含该化合物的有效成分，再过硅胶柱，用9：1的石油醚- 丙酮溶液淋洗主成分，再经葡聚糖凝胶LH-20(30％氯仿-甲醇)柱层析和石油醚-丙酮混合溶 剂反复结晶得到白色晶体胆甾-4-烯-3,6-二酮25mg。
本发明的胆甾-4-烯-3,6-二酮是一种药物活性成分，按照常规的制剂工艺，可以胆甾-4- 烯-3,6-二酮作为唯一活性成分或主要活性成分，加入常规的赋性剂、调味剂、崩解剂、防腐 剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂药物辅料，制成任何一种适合于临床 上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、乳剂、注射剂等。
本发明首次提出了胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经损伤药物中的应用，利用 胆甾-4-烯-3,6-二酮为主活性组分制成的药物，对帕金森病、阿尔兹海默症、tau蛋白病、肌 萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病及脑中风、脑损伤和脊髓损伤具有潜在的治疗作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简 单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的 限定。
图1：胆甾-4-烯-3,6-二酮对L-谷氨酸诱导HT-22细胞氧化应激损伤的神经保护作用。(A) 细胞形态图，bar＝100μm；(B)MTT法测得细胞存活率柱状图(Glu：0.171±0.017；P7C3： 0.743±0.061；甾体：0.577±0.046)。
图2：胆甾-4-烯-3,6-二酮对钾剥夺引起的小脑颗粒神经元凋亡损伤的神经保护作用。(A) 细胞形态图，Scale bar 100μm；(B)MTT法测得的细胞存活率柱状图，(5K：0.327±0.015， steroid：0.487±0.029，***P<0.001，n＝3)；(C)Hoechst33342染色图，Scalebar 50μm； (D)凋亡细胞百分数柱状图(5K：0.545±0.036，78：0.354±0.032，***P<0.001Vs.5K,n＝5)。
图3：胆甾-4-烯-3,6-二酮对谷氨酸造成的小脑颗粒神经元兴奋性毒性的神经保护作用。 (A)细胞形态图，Scale bar 100μm；(B)FDA法测得的存活细胞个数比柱状图，(Glu：0.157 ±0.031,MK801:0.821±0.028，steroid：0.345±0.040，***P<0.001，n＝5)。
图4：胆甾-4-烯-3,6-二酮对谷氨酸造成的皮质神经元兴奋性毒性的神经保护作用。(A)细 胞形态图，Scale bar 100μm；(B)MTT法测得的细胞存活率柱状图，(Glu：0.338±0.022, MK801:0.930±0.068，steroid：0.544±0.041，***P<0.001，n＝5)。
图5：胆甾-4-烯-3,6-二酮对MCAO大鼠的神经保护作用。(A)TTC染色大脑切片各处理组 代表图；(B)各处理组的梗死容积百分数，n＝7；(C)MCAO术后24小时行为学评分。
具体实施方式
实施例1.谷氨酸诱导HT-22氧化应激损伤模型
取液氮复苏后中皿传代3次的HT-22细胞，使用前观察细胞状态很好，胞体圆润饱满， 突触完整，几乎没死细胞，用0.5ml浓度为0.25％的胰酶消化半分钟，吹散成单细胞悬液，收 集到15ml离心管，加完全培养基至3ml，1000rpm离心3min，去上清，将沉淀均匀分散在 4ml完全DMEM培养基(DMEM+10％FBS+1％P/S)，取0.8ml细胞悬液用于传代，再取适量悬液 加入到完全DMEM培养基中，稀释至4*104cells/ml，种植在48孔板中(200μl/孔)，24小时后用于实验。
首先将胆甾-4-烯-3,6-二酮溶解于DMSO中，使终浓度为10mM作为药物储备液，将药物 储备液用完全DMEM培养基稀释1000倍，使药物测试浓度为10μM。做如下分组处理：
a)control组：细胞全量换完全DMEM培养基；
b)模型组(Glu)：细胞全量换带有溶剂(DMSO)的完全DMEM培养基；
c)药物组(Steroid)：细胞全量换带有10μM胆甾-4-烯-3,6-二酮的完全DMEM培养基；
d)阳性药物组(P7C3)：细胞全量换带有10μM阳性药物(P7C3)的完全DMEM培养基。
全量换上述4组溶液，孵育半小时后，加入谷氨酸(Glu)使终浓度为3mM。随后，在5％CO2浓度，37℃恒温下培养24小时，在相差显微镜下观察细胞形态，拍照。接着，每孔加入20 μl浓度为5mg/ml的MTT溶液(PBS配制)，孵育3小时，去上清，每孔加200μl的DMSO， 轻轻震荡5min至固体完全溶解，然后用酶标仪在490nm波长下测各孔的吸光值，取三个孔的 平均值进行细胞存活率计算，细胞存活率＝OD各浓度/ODcontrol*100％，取三批细胞数据用于统计分析。
实施例2.钾剥夺引起的小脑颗粒神经元凋亡损伤模型
取出生7天的大鼠，用大手术剪断头后，用眼科小剪从椎孔往左右耳朵上缘剪开，然后 用镊子弄开上面大脑上层，暴露出脑组织，取出小脑组织放入装有无酚红DMEM(当解剖液用) 的置于冰袋上的中皿里。
用眼科镊去除小脑上的脑膜和血管后，用组织剪剪碎小脑组织。将组织转移入浓度为 0.25％的胰酶中，37℃消化15分钟，往里加完全BME培养基至15ml，紧接着加入100μl的 Dnase I(8mg/ml)，用滴管吹散组织团，随后1000rpm离心三秒，转移上层悬液至另一离心管， 1000rpm离心5分钟，去除上清得到细胞，往里加5ml完全BME培养基，轻轻吹打细胞至均 匀(约30次)。用细胞计数器计数，调整细胞浓度至5*105个/ml。
将细胞种植到PLL包被过的培养板上，周围一圈加灭菌过的水液封，置于37℃、5％CO2、 95％湿度的培养箱中培养，24小时后加入Ara-C使终浓度为10μM。
神经元培养至第7天加Glucose至5mM，第8天用于实验，做如下分组处理：
a)25K组：细胞全量换含25mM K的完全BME培养基；
b)5K组：细胞全量换含5mM K的完全BME培养基；
c)胆甾-4-烯-3,6-二酮组(steroid)：细胞全量换含5mM K的完全BME培养基+10μM甾体。
上述处理24小时后，在相差显微镜观察细胞形态，用MTT法测细胞存活率来评价药物促 进神经元存活的能力，用Hoechst33342染色来评价药物对抗钾剥夺诱导小脑颗粒神经元凋亡 的能力。
MTT法测细胞存活率：经过上述处理24小时，在相差显微镜下拍照后，加入5mg/ml的 MTT使终浓度为0.5g/L，37℃下孵育3小时，随后用多功能酶标仪在490nm下测定各组的OD 值。细胞存活率的计算方法如下：细胞存活率(％)＝各处理组OD值/25K组OD值*100％。
Hoechst33342染色：经过上述处理24小时，在在相差显微镜下拍取荧光照片后，加入 Hoechst33342使终浓度为2μg/ml，37℃染色15分钟后在相差荧光显微镜350nm波长下拍照， 计算细胞凋亡率＝白色凋亡信号个数/总细胞个数*100％。
实施例3.谷氨酸引起的小脑颗粒神经元兴奋性毒性模型
取培养7天的小脑颗粒神经元，在显微镜下观察，细胞圆润，突触明显，分布均匀，即 可用于实验。做如下分组处理：
a)Control组：预敷无Mg2+的Locke,s Buffer液
b)谷氨酸组：预敷无Mg2+的Locke,s Buffer液+200μM Glu
c)MK801组：预敷含10μM的MK801无Mg2+的Locke,s Buffer+200μM Glu
d)胆甾-4-烯-3,6-二酮组：预敷含10μM的甾体无Mg2+的Locke,s Buffer+200μMGlu
取培养7天的小脑颗粒神经元，收集各孔BME条件培养基，用无Mg2+的Locke,sBuffer 液洗涤细胞三次，然后用无Mg2+的Locke,s Buffer液配置的药物溶液37℃预敷20分钟，之后 加入200μM的谷氨酸，10μM甘氨酸，置于37℃培养箱处理30分钟，随后换回原来的条 件培养基继续培养24小时，显微镜下观察细胞形态，同时用FDA(60μg/ml,15min)染存活的 神经元，初步评价药物的神经保护活性。
实施例4.谷氨酸引起的大脑皮质神经元兴奋性毒性模型
实验前，将完全DMEM培养基、5ml 0.25％胰酶放于37℃水浴锅加热，将手术器械用75％ 乙醇消毒，吹干包被的孔板或皿，将无酚红DMEM放于冰袋上降温。
取出生12小时内的大鼠，用大手术剪断头后，用眼科小剪从椎孔往左右耳朵上缘剪开， 同时沿着颅骨中缝剪开，然后用镊子翻开颅骨，暴露出脑组织，取出大脑组织放入装有无酚 红DMEM(当解剖液用)的置于冰袋上的中皿里。
用眼科镊去除大脑上的脑膜、血管、海马等组织，剥离出大脑皮层后，用组织剪剪碎皮 层组织为1mm3大小。然后移到5ml胰酶消化液(0.25％)中于37℃消化15min，随后加入含有 FBS(10％)和Dnase I(8mg/ml,100μl)的解剖液终止消化并轻轻吹散为单细胞悬液。用1000rpm 离心3s，弃沉淀，悬液1200rpm离心5min。弃上清，沉淀分散于10％FBS的DMEM培养基 中轻柔吹打混匀，1000rpm离心3s后，在完全DMEM培养基中稀释细胞数目为3*e5左右细胞 悬液。悬液种植于多聚赖氨酸(5mg/L)包被的48孔板中。置于含37℃、5％CO2、湿度为95％ 的细胞培养箱中培养，4小时后，培养基全部换成不含血清的Neurobasal A培养基(2％B27, 1％GlutaMAX,1％P/S)，接种24小时后加入10μmol/L的Ara-C抑制非神经元细胞生长，每 隔3天进行半量换液。培养至第八天进行试验。
取培养7天的大脑皮质神经元，在显微镜下观察，细胞圆润，突触明显，分布均匀，即 可用于实验。
实验方法和组别设置同实施例3。
谷氨酸处理24小时后用相差显微镜观察神经元形态，并且用MTT法测定各组细胞存活率， 用三批细胞数据做统计学分析，初步评价药物的神经保护活性。
实施例5.胆甾-4-烯-3,6-二酮对MCAO大鼠的神经保护作用
动物术前禁食12h，自由饮水。术前用10％水合氯醛腹腔麻醉(350μl/100g体重)。麻 醉后仰卧固定于手术台上，保持手术台温度为37℃。颈正中切口1.5-2.0cm，钝性分离皮下 组织，暴露左侧颈总动脉、颈内动脉及颈外动脉。用线结扎断枕动脉和翼颚动脉，在靠近颈 总动脉分叉处的颈外动脉上用注射器刺一小口，让颈外动脉残端向外下方牵引使之与颈内动 脉平行并拉直与颈内动脉的夹角，再将预先依次用75％乙醇浸泡10min、1％肝素钠浸泡的栓 线经小口插入颈内动脉约18.0±0.5mm，直至感到轻微阻力感后，结扎颈内动脉。栓塞2h后 抽出栓线，恢复灌注。去除栓塞22h后盲法进行神经行为学评分，随后进行TTC染色，盲法 用Photoshop统计梗死容积，揭盲，实验结果用Sigmaplot软件进行统计分析。
将240～250g雄性SD大鼠按如下随机分组处理：
(a)假手术组(Sham)：只做暴露手术，不做MCAO手术，给药时给予生理盐水。(2)生理盐水 组(Saline)：做MCAO手术，给药时给予生理盐水；
(b)溶剂组(HP)：做MCAO手术，给药时给予40％HP-β-CD；
(c)MK801组(MK801-10mg/Kg)：做MCAO手术，给药时给予10mg/Kg的MK801；
(d)低剂量药物组(胆甾-4-烯-3,6-二酮：5mg/Kg)：做MCAO手术，给药时给予5mg/Kg的药物；
(e)高剂量药物组(胆甾-4-烯-3,6-二酮：10mg/Kg)：做MCAO手术，给药时给予10mg/Kg药物。
动物恢复和功能评分：术毕麻醉苏醒后，将动物放回鼠笼，自由饮食。再灌注后22h， 由不了解分组情况的观察者根据Longa评分法评估并记录神经功能评分。0分：无功能障碍； 1分：不能伸展右侧前肢；2分：向右侧旋转；3分：向右侧倾倒4分：无自主活动伴意识抑 制；5分：死亡。
脑梗死容积百分比测量：神经功能评分完成后，断头处死大鼠，迅速去除整个大脑，立 即置于-20℃盐水中冰冻10min，取冠状面切成2mm厚脑片，迅速置于浓度为2％，溶解于PBS 中的TTC溶液中，于37℃避光孵育10-20min，每隔5min摇一次。随后将标本置于4℃多聚 甲醛中固定。24h后用数码相机拍照，输入计算机，用Adobe Photoshop CS6软件计算梗死 面积(粉红色区为正常脑组织，白色区为梗死区)。为校正脑水肿给梗死容积计算带来的偏差， 用占对侧正常容积的百分比表示梗死容积。梗死容积百分比＝(对侧正常组织容积—同侧正常 组织容积)/对侧正常组织容积×100％。

Claims (5)

1.胆甾-4-烯-3,6-二酮在制备治疗或预防神经元损伤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述胆甾-4-烯-3,6-二酮由化学合成或天然产物提取获得。
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述治疗或预防神经元损伤药物的适应症为帕金森病、阿尔兹海默症、tau蛋白病、肌萎缩侧索硬化症等神经退行性疾病及脑中风、脑损伤和脊髓损伤。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述胆甾-4-烯-3,6-二酮作为唯一活性成分或主要活性成分，加入常规的赋性剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、粘合剂、溶剂、增稠剂和增溶剂药物辅料中的一种或几种，制成适合于临床上使用的剂型。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、乳剂或注射剂。
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