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CN107849050B - 化合物 - Google Patents

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CN107849050B
CN107849050B CN201680042794.5A CN201680042794A CN107849050B CN 107849050 B CN107849050 B CN 107849050B CN 201680042794 A CN201680042794 A CN 201680042794A CN 107849050 B CN107849050 B CN 107849050B
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克雷格·弗雷泽
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Abstract

本发明涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐或酯，(式(I))
Figure DDA0002355360850000011
其中：R1为(CH2)mNR11R12；R2选自H、卤素、OR13、NHR13、烷基、烯基和炔基；R3选自烷基、烯基、炔基、芳基、卤素、芳氧基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCOR7、NH‑烷基、NH‑烯基、NH(CH2)n‑芳基、(CH2)p‑杂芳基、(CH2)qCO2R8、(CH2)rCOR9和NHSO2R10，其中以上提及的清单中的每个烷基、烯基、芳基或杂芳基部分任选地进一步被选自烷基、卤素、OH、NH2、烷氧基、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、羧基和甲酰胺的一个或更多个基团取代；R4至R10和R13各自独立地选自烷基、烯基和芳基；R11和R12各自独立地选自烷基和烯基；或R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成杂环烷基或杂环烯基基团；n、m、p、q和r各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6。

Description

化合物
本发明涉及能够抑制、更优选地选择性抑制一种或更多种酪氨酸激酶的吡唑并嘧啶化合物。化合物可应用于治疗多种紊乱，包括增殖性紊乱诸如癌症、骨、神经学和病毒性紊乱。
发明背景
大多数药物发现程序开始于针对与特定疾病相关的指定靶的激动剂、拮抗剂或抑制剂的筛选活动(例如生物化学的、虚拟的或生物物理学的)[1-4]。在命中确定之后，随后的化学优化基本上是基于“命中靶 (on-target)”的效力[1]。在产生所谓的先导化合物(＝高亲和力配体)之后的是药物化学改进为具有优异的效力和/或选择性以及合意的药代动力学性质 (＝类药性(druglikeness))的衍生物[1，5]。选择的候选药物然后在体内进行验证，并且经证实安全性和功效后，推进至人类试验[5]。这个定义明确的工艺通常花费超过十年的研究工作，并且在其通往临床的道路上要花费数千万英镑，该工艺在开发抗癌药物中发现成功率特别低[6]。这是因为，除了将药物发现程序从靶确定-通过临床前开发和临床开发-转化为监管机构批准和市场营销的很多困难以外，已经变得明显的是，常规方法没有被合适地定制用于由多种病因学因素的并发或顺序作用产生的病理学诸如癌症 [6-8]。在晚期药物开发期间的高耗损已经强调了阐明患者之间的癌症异质性和适应性药物抗性机制为开发有效靶向抗癌疗法的主要障碍[9-11]。这些挑战刺激了药物疗法研究(例如靶向多重药理学(polypharmacology)[10]、抗体-药物缀合物[12]、创新前体药物方法[13-17]等)中的开箱即用思维以及对肿瘤学中的药物发现的核心原则的重新审视[18-20]。现代表型药物发现的兴起[18，19]以及指导早期药物开发[20]的临床相关的癌症模型的使用，为在该领域中发起以引发积极的转折点的范例式的转变的代表性实例。
蛋白激酶为细胞内信号转导级联(cascades)的组成组分(integral component)。它们管理宽范围的基本细胞功能，并且协调细胞至细胞和细胞外基质(ECM)至细胞的通讯以影响细胞和组织的生理学。由此，激酶直接参与进行性疾病，包括癌症和炎症[21]。对癌细胞生物学的理解的进展以及用于癌症治疗的若干种激酶抑制剂的批准，已经证明许多激酶作为抗癌靶的有效性[22]，而相比之下，其他蛋白激酶已经示出在肿瘤抑制途径中发挥重要的作用(抗靶(anti-target))[23-26]。
绝大多数激酶抑制剂靶向激酶ATP袋，并且因为所有激酶(>500)必然具有该相对良好保守的催化位点，所以很大可能存在交叉反应性[10]。事实上，即使大多数临床批准的激酶抑制剂已经由单一靶假说开发，但它们通常显示宽的选择性概况，在一些情况下，这导致未预料到的临床应用(例如索拉非尼(sorafenib))[26]。当偏离靶的(off-target)活性有助于解决与途径冗余、分子异质性或抗性机制相关的生物活性问题时，抑制剂的杂泛性(promiscuity)对于抗癌疗法也可能是有利的[9，10，26]。相反，如果这些活性导致抑制抗致癌途径或导致严重的副作用，则药物的杂泛性成为主要缺点。矛盾地，存在有力的证据表明，根据癌症的情况，一些激酶可能表现为靶或抗靶。通过例证的方式，活化的融合癌蛋白Bcr-Abl的表达为与慢性髓性白血病(chronic myeloid leukemia)(CML)相关的遗传异常，且Abl抑制剂(伊马替尼(imatinib)、达沙替尼(dasatinib))临床上用于慢性期CML治疗[27]。另外，Abl家族激酶在多种实体肿瘤中异常活化，支持其参与肿瘤发生[27]。然而，已经发现Abl(Abl1)和Arg(Abl2)负调节体内乳腺癌进展 [28-30]，这表明Abl抑制可能对其治疗适得其反(＝乳腺癌抗靶)。该实例用来描述癌症病因学的复杂性，并且强调开发具有定制药效学概况的激酶抑制剂以有效靶向每种癌症亚型的必要性。不幸地，尽管多年来建立了大量的小分子抑制剂和生物医学知识，但对癌症生物学的有限理解妨碍了合适地靶向产生、维持和推进大多数肿瘤过程的协调作用。
认识到这些局限性，许多研究组正在对稳健的经验数据进行前瞻性探求(frontload)，以推进抗癌药物开发程序远离经典的黑白抗癌假说。
本发明力图提供具有有效的抗增殖性质的酪氨酸激酶抑制剂。本发明基于以下三种假说：(i)在指定的癌症模型中使用表型筛选可以用于产生靶不可知的结构-生物活性关系并且指导针对特定癌症类型/亚型定制的配体优化；(ii)用衍生自杂泛性激酶抑制剂的化合物靶向激酶ATP袋可以使得“合理偏向的”偶然发现成为可能；以及(iii)对杂泛性配体的类药性的早期改进可以同时用于探索药效学多样性。通过这种激酶抑制剂发现的实用方法，确定的命中和导向的靶解卷积(target deconvolution)在很大程度上得到促进，由此能够快速确定观察到的表型中涉及的分子靶和抗靶。
发明陈述
本发明的第一方面涉及式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0001553603060000031
其中：
R1为(CH2)mNR11R12；
R2选自H、卤素、OR13、NHR13、烷基、烯基和炔基；
R3选自烷基、烯基、炔基、芳基、卤素、芳氧基、NHCO2R4、NHCONR5R6、 NHCOR7、NH-烷基、NH-烯基、NH(CH2)n-芳基、(CH2)p-杂芳基、 (CH2)qCO2R8、(CH2)rCOR9和NHSO2R10，其中以上提及的清单中的每个烷基、烯基、芳基或杂芳基部分任选地进一步被选自烷基、卤素、OH、NH2、烷氧基、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、羧基和甲酰胺的一个或更多个基团取代；
R4至R10和R13各自独立地选自烷基、烯基和芳基；
R11和R12各自独立地选自烷基和烯基；或R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成杂环烷基或杂环烯基基团；
n、m、p、q和r各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6。
本发明的第二方面涉及药物组合物，所述药物组合物包含如以上描述的至少一种化合物和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的第三方面涉及如以上描述的化合物用于在医学中使用。
本发明的第四方面涉及如以上描述的化合物用于在治疗选自增殖性紊乱和病毒性紊乱的紊乱中使用。
本发明的第五方面涉及如以上描述的化合物在制备用于治疗或预防选自增殖性紊乱、骨质疏松症、阿尔茨海默病和帕金森氏病及病毒性紊乱的紊乱的药物中的用途。
本发明的第七方面涉及治疗患有疾病状态的哺乳动物的方法，所述方法通过抑制、或优选地选择性抑制酪氨酸激酶来减轻，其中所述方法包括将治疗有效量的如以上描述的化合物施用至哺乳动物。
本发明的第八方面涉及如以上描述的化合物在用于确定能够抑制、或选择性抑制酪氨酸激酶的另外的候选化合物的测定中的用途。
本发明的第九方面涉及组合，所述组合包含如以上描述的化合物和第二治疗剂。
本发明的第十方面涉及用于制备如本文描述的化合物的工艺。
本发明的第十一方面涉及式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0001553603060000041
其中：
X选自氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基和芳氧基；
L为具有从1个至6个碳原子的亚烷基连接基基团，其中所述亚烷基连接基基团任选地被一个或更多个R”基团取代；
Z为任选地被选自R”和(CH2)mNR11R12的一个或更多个基团取代的哌啶基或哌嗪基基团；
Y为芳基或杂芳基基团，其中所述芳基或杂芳基基团任选地被选自卤素、OR13、烷基、芳基、烯基、炔基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCOR7、 NH-烷基、NH-烯基、NH(CH2)n-芳基、(CH2)p-杂芳基、(CH2)qCO2R8、 (CH2)rCOR9和NHSO2R10的一个或更多个基团取代，其中以上提及的清单中的每个烷基、烯基、芳基或杂芳基部分任选地进一步被选自烷基、卤素、 OH、NH2、烷氧基、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、羧基和甲酰胺的一个或更多个基团取代；
R'选自H、烷基、芳基、杂芳基和卤素，其中所述烷基、芳基和杂芳基基团可以任选地被一个或更多个R”基团取代；
R4至R10和R13各自独立地选自烷基、烯基和芳基；以及
n、m、p、q和r各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6；
每个R”独立地选自烷基、OH、烷氧基和卤素；
R11和R12各自独立地选自烷基和烯基；或R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成杂环烷基或杂环烯基基团；
用于在治疗选自EB病毒(Epstein Barr Virus)、阿尔茨海默病和登革热的紊乱中使用。
详述
本发明涉及吡唑并嘧啶化合物，所述吡唑并嘧啶化合物能够抑制或更优选地选择性抑制一种或更多种激酶、优选地一种或更多种酪氨酸激酶、甚至更优选地Src激酶。特别地，本发明涉及具有特定取代模式的被取代的吡唑并嘧啶化合物。
“烷基”在本文中被定义为直链或支链烷基基团，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基。优选地，烷基基团为C1-12-烷基基团，更优选地C1-6-烷基基团，甚至更优选地C1-4-烷基基团。
“烯基”在本文中被定义为包含一个或更多个碳-碳双键的直链或支链基团。优选地，烯基基团为C2-12-烯基基团，更优选地C2-6-烯基基团，甚至更优选地C2-4-烯基基团。
“炔基”在本文中被定义为包含一个或更多个碳-碳三键的直链或支链基团。优选地，炔基基团为C2-12-炔基基团，更优选地C2-6-炔基基团，甚至更优选地C2-4-炔基基团。
“环烷基”在本文中被定义为单环烷基环，诸如，环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基、或稠合双环环体系诸如降莰烷(norbornane)。优选地，环烷基基团为C3-8-环烷基基团，更优选地C3-6-环烷基基团。
“环烯基”在本文中被定义为如以上对于环烷基定义的但包含一个或更多个碳-碳双键的环状基团。优选地，环烯基基团为C3-8-环烯基基团，更优选地C3-6-环烯基基团。
“卤素”在本文中被定义为氯、氟、溴或碘。
如本文使用的，术语“芳基”指的是C6-12芳香族基团，其可以是苯并稠合的，例如苯基或萘基。
“杂芳基”在本文中被定义为包含一个或更多个杂原子(其可以相同或不同)诸如氧、氮或硫的单环或双环C2-12芳香族环。合适的杂芳基基团的实例包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基等及其苯并衍生物诸如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基等；或吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等及其苯并衍生物诸如喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基等。
在一个优选的实施方案中，n、m、p、q和r各自独立地选自0、1、2 和3。
在一个优选的实施方案中，R11和R12为烷基。
在一个优选的实施方案中，m为0。
在另一个优选的实施方案中，m为1。
在另一个优选的实施方案中，R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成杂环烷基基团。优选地，对于该实施方案，m为0。
优选地，R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成6元杂环烷基基团或5元杂环烷基基团。
在更优选的实施方案中，R1选自NMe2、CH2NMe2、吡咯烷-1-基和哌啶-1-基。
在一个优选的实施方案中，R2选自H和烷氧基，更优选地选自H和 OMe。
在一个优选的实施方案中，R3选自烷基、NHCO2R4、NHCOR7、 NH(CH2)n-芳基、NHCONR5R6、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2R8。
在一个优选的实施方案中，R4至R10各自独立地为烷基。
在一个优选的实施方案中，R3选自Me、NHCO2-烷基、NHCO-烷基、 NH(CH2)n-芳基、NHCONH-烷基、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2-烷基。
在一个优选的实施方案中，n、p、q和r中的每个为1。
在一个优选的实施方案中，R3选自Me、NHCO2-tBu、NHCOCH2C(Me)3、 NHCH2苯基、NHCONH-tBu、CH2-(4-甲基-噁唑-2-基)和CH2CO2-tBu。
在一个优选的实施方案中，R3选自Me和NHCO2-tBu。
在一个优选的实施方案中，R3为Me且R2为H。
在一个优选的实施方案中，R2为烷氧基且R3选自NHCO2R4、NHCOR7、 NH(CH2)n-芳基、NHCONR5R6、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2R8。
在一个优选的实施方案中，R2为OMe且R3选自NHCO2-tBu、 NHCOCH2C(Me)3、NHCH2苯基、NHCONH-tBu、CH2-(4-甲基-噁唑-2-基) 和CH2CO2-tBu。
在本发明的一个高度优选的实施方案中，式I的化合物选自以下：
Figure BDA0001553603060000071
Figure BDA0001553603060000081
Figure BDA0001553603060000091
Figure BDA0001553603060000101
以及其药学上可接受的盐。
在一个高度优选的实施方案中，化合物选自化合物506、518、519、 533、553和565。
在另一个高度优选的实施方案中，化合物选自化合物506和565。
式(II)的化合物
本发明的另一个方面涉及式(II)的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0001553603060000102
其中：
X选自氨基、烷基氨基、芳基氨基、羟基、烷氧基和芳氧基；
L为具有从1个至6个碳原子的亚烷基连接基基团，其中所述亚烷基连接基基团任选地被一个或更多个R”基团取代；
Z为任选地被选自R”和(CH2)mNR11R12的一个或更多个基团取代的哌啶基或哌嗪基基团；
Y为芳基或杂芳基基团，其中所述芳基或杂芳基基团任选地被选自卤素、OR13、烷基、芳基、烯基、炔基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCOR7、 NH-烷基、NH-烯基、NH(CH2)n-芳基、(CH2)p-杂芳基、(CH2)qCO2R8、 (CH2)rCOR9和NHSO2R10的一个或更多个基团取代，其中以上提及的清单中的每个烷基、烯基、芳基或杂芳基部分任选地进一步被选自烷基、卤素、 OH、NH2、烷氧基、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、羧基和甲酰胺的一个或更多个基团取代；
R'选自H、烷基、芳基、杂芳基和卤素，其中所述烷基、芳基和杂芳基基团可以任选地被一个或更多个R”基团取代；
R4至R10和R13各自独立地选自烷基、烯基和芳基；以及
n、m、p、q和r各自独立地选自0、1、2、3、4、5和6；
每个R”独立地选自烷基、OH、烷氧基和卤素；
R11和R12各自独立地选自烷基和烯基；或R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成杂环烷基或杂环烯基基团；
用于在治疗选自EB病毒、阿尔茨海默病和登革热的紊乱中使用。
在一个优选的实施方案中，L为可以是被取代或未被取代的C2-C4亚烷基连接基。
在更优选的实施方案中，L为可以是被取代或未被取代的亚乙基连接基。
在一个优选的实施方案中，X选自氨基、烷基氨基和芳基氨基。更优选地，X为氨基。
在一个优选的实施方案中，R’选自H和烷基。更优选地，R’为H。
在一个优选的实施方案中，Z为任选地被选自R”和(CH2)mNR11R12的一个或更多个基团取代的哌啶-1-基或哌嗪-1-基基团。
在更优选的实施方案中，Z为任选地被选自R”和(CH2)mNR11R12的一个或更多个基团取代的哌啶-1-基基团；
在更优选的实施方案中，Z为被一个或更多个(CH2)mNR11R12基团取代的哌啶-1-基基团。更优选地，Z为在4-位被选自二烷基氨基、环烷基氨基和二烷基氨基烷基的基团取代的哌啶-1-基基团。
在一个优选的实施方案中，Y为任选地被取代的芳基基团，更优选地任选地被取代的苯基基团。
在优选的实施方案中，Y为在3-位任选地被选自卤素、烷氧基、芳氧基、烷基氨基和烷基的基团取代的苯基基团。
在优选的实施方案中，Y为在4-位任选地被选自烷基、芳基、卤素、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCOR7、NH- 烷基、NH(CH2)n-芳基、(CH2)p-杂芳基、(CH2)qCO2R8、(CH2)rCOR9和 NHSO2R10的基团取代的苯基基团，其中以上提及的清单中的烷基、芳基或杂芳基的每个实例任选地进一步被选自烷基、卤素、OH和NH2的一个或更多个基团取代。
还更优选地，Y为在3-位被选自卤素、烷氧基、芳氧基、烷基氨基和烷基的基团取代并且在4-位被选自烷基、芳基、卤素、芳氧基、烷基氨基、芳基氨基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCOR7、NH-烷基、NH(CH2)n-芳基、(CH2)p-杂芳基、(CH2)qCO2R8、(CH2)rCOR9和NHSO2R10的基团取代的苯基基团，其中以上提及的清单中的烷基、芳基或杂芳基的每个实例任选地进一步被选自烷基、卤素、OH和NH2的一个或更多个基团取代。
如以上描述了式(I)的化合物的高度优选的实施方案。
新颖的吡唑并嘧啶类的设计、合成和筛选
在探求可以潜在地靶向在癌症中具有相关性的宽范围的激酶的抑制剂中，使用多重激酶抑制剂PP1作为核心结构进行基于配体的药物开发程序(图1)。PP1不加选择地靶向酪氨酸蛋白激酶，酪氨酸蛋白激酶中的许多诸如Src家族激酶(SFK)、Ret、Kit和Abl参与肿瘤发生[31-34]。此外，此后开发的相关衍生物[35，36]已经示出针对在癌症中具有相关性的其他组激酶(包括VEGFR、PDGFR、PI3K和mTOR)的强抑制。根据PP1与Hck[37] 和Ret[38]激酶的共晶结构，该小分子为原型I型激酶抑制剂(archetypical type I kinaseinhibitor)[39，40]，其中该抑制剂的N5和4-NH2基团与激酶催化位点的铰链区域形成多个氢键[39-41]。C3对甲苯基基团位于在大多数酪氨酸激酶中良好保守的疏水区域，因此负责抑制剂相对于其他激酶家族的部分选择性。尽管PP1对疾病相关激酶(例如SFK、Ret等)的有效抑制使其成为用于生物学研究的有价值的工具，其临床使用受限于在水中的非常低的溶解度和差的选择性，这些是对于许多候选药物的临床转化的主要限制性因素[42]。
用柔性的水溶性基团取代在N1位置处的PP1的叔丁基基团可以用于既改进其类似药物的性质且在用于新颖的结合亲和力概况的探求中探索由天然配体ATP占据的可用的糖/磷酸区域(图1)。如图1的下部分中示出的，化合物被设计为显示通过亚乙基连接基连接至吡唑并嘧啶环的N1位置的环状叔胺(参见图2中的一般合成)。在该合成程序之后，结构多样性通过将选择的环状仲胺经由还原胺化偶联至对应的醛衍生物来容易地实施。
若干研究已经报道了通过被取代的芳基部分(甚至密切相关的部分)取代PP1的C3位上的对甲苯基基团显著地影响蛋白-配体结合。对该位置的药物化学活动已经产生了对于宽范围激酶的抑制剂，所述宽范围激酶包括受体酪氨酸激酶和非受体酪氨酸激酶(例如c-Src、Ret、PDGFR、VEGFR、 c-Kit和Abl)[31-35]和非酪氨酸激酶(例如PI3K和mTOR)[36，43]。为了扩展新颖的化合物的预期药效学范围，与在N3位置上实施的修饰并行地(alongside)，通过钯催化的交叉偶联化学，宽选择的芳基硼酸被用于官能化吡唑并嘧啶环的C3位置。
选择人类乳腺癌细胞系MCF7作为基于细胞的模型并且表型筛选被用于评价新颖的化合物，并且针对不同的抗癌活性将命中化合物(hits)进行分类。高度区分的基于细胞的测定不仅允许确定靶向参与MCF7细胞生长、迁移和存活的蛋白的化合物，而且还排除具有低细胞渗透性(并且因此缺乏类药性)的化学物质(chemicals)。探求作为主要输出的抗增殖性质，使用10 点半对数剂量应答研究(100μM至0.01μM)计算新颖的化合物在MCF7细胞中的EC50值。使用
Figure BDA0001553603060000131
试剂在第5天确定细胞存活力。荧光光谱测定法分析在
Figure BDA0001553603060000132
板读取器中进行。
在合成和测试的所有结构中(参见活性1和2的表)，在C3位置处引入 4-(N-Boc-氨基)-3-甲氧基苯基为最成功的一种(图3a)。在另一方面，发现在 N1位置处包含二甲基氨基的哌啶基基团的存在对于化合物的抗增殖效力为最佳的，其中二甲基氨基哌啶基乙基基团为发现的最好的部分。使用达沙替尼作为阳性对照在细胞中测试化合物503和506的抗增殖性质。达沙替尼为Abl和Src两者的有效抑制剂，当前用于慢性期CML的治疗，并且在若干种临床试验中用于不同类型的癌症，包括乳腺癌。与MCF7细胞一起，三组阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞被并行地测试以探索化合物针对不同乳腺癌亚型的抗增殖效力。如图3b中示出的，相比于化合物503，化合物506示出对MCF7和MDA-MB-231乳腺癌细胞两者的优异的抗增殖作用。显著地，在两种细胞系中化合物506也均优于金标准的Src抑制剂达沙替尼。
为了确定可能负责MCF7细胞中由先导化合物506诱导的表型的靶 (target/s)，针对选择的参与癌症的人类蛋白激酶测定IC50值。根据文献 [31-36]中发现的相关吡唑并嘧啶类的激酶概况，选择测定的重组蛋白。如表3中示出的(注意值以nM表示)，化合物503和化合物506两者针对Src 和Yes(原癌基因，其在参与肿瘤生长、血管生成、侵入和传播的信号转导途径中发挥关键作用)[30]具有亚纳摩尔效力，其中化合物506具有相对于 Abl的改进的选择性(>950倍的效力差异)。从药理学上讲，这是非常值得注意的，因为文献中的证据强烈表明Abl抑制可能对一些类型的乳腺癌的治疗适得其反[28-30]，并且Abl抑制也已经与心脏毒性相关[44]。重要地，这种独特的选择性概况将本发明的化合物与化合物PP20区别开来(图 3a)[35]，化合物PP20为已知的非特异性Abl/Src激酶抑制剂，对Abl和Src 两者均显示出亚纳摩尔效力。不希望受理论束缚，认为在吡唑并嘧啶类的 N1位置引入多胺部分在这些衍生物的史无前例的选择性概况中发挥作用。
为了进一步评价化合物506和化合物503对非癌性细胞模型所示出的选择性概括，在鼠科(murine)SYF成纤维细胞(该细胞缺乏Src、Yes和Fyn) 中用化合物506、503和达沙替尼进行剂量应答研究。使用
Figure BDA0001553603060000141
试剂在第5天确定细胞存活力，并且通过荧光光谱测定法进行分析(图3c)。显著地，化合物506和化合物503在SYF细胞中示出比达沙替尼低得多的抗增殖活性，这表明新颖的化合物比达沙替尼更有选择性，并且可能导致降低的由脱靶活性引起的副作用。
化合物506的修饰导致具有相似性质的许多衍生物(表1)和具有低选择性和/或抗增殖活性的许多化合物(表2)。
高度选择性的Src激酶抑制剂
Src为非受体酪氨酸激酶，并且为Src家族激酶(SFK)中最广泛研究的成员，所述Src家族激酶(SFK)包括Lyn、Fyn、Lck、Hck、Fgr、Blk、Frk 和Yes。已经报道了在许多肿瘤类型中上调的Src表达和/或活性，但在结肠癌和乳腺癌中被最好地描述，其中Src活性与恶性肿瘤潜在且差的临床预后相关[47，49]。
对许多抗癌剂(包括西妥昔单抗(cetuximab)、奥沙利铂(oxaliplatin)、吉西他滨(gemcitabine)、雷帕霉素(rapamycin)、紫杉烷类(taxanes)和B-RAF 抑制剂)的获得性药物抗性与异常调节的Src信号传导相关[65，57，54，48， 56，50]。这些研究表明，Src活性代表了常见的药物抗性机制，并且Src的靶向抑制可能使有抗性的肿瘤对许多治疗干预敏感，或在晚期复发性疾病中提供替代治疗选择。例如，Src活性也已经被确定为曲妥珠单抗(trastuzumab)抗性中的常见信号传导机制，这表明Src抑制剂可能为抗曲妥珠单抗的乳腺肿瘤提供替代治疗[66]。
Src活性与差的癌症预后、发病率和对现有疗法的获得性抗性之间的强烈的疾病联系和相关性均支持Src代表重要的抗癌治疗靶的前提。若干种Src抑制剂(达沙替尼(Dasatanib)、博舒替尼(Bosutinib)、塞卡替尼 (Saracatinib)、AZD0424)已进入临床，并且对不同的癌症指征正在进行许多I/II期试验[58，49]。然而，迄今公布的临床结果数据尚不令人信服，并且尚未解决的挑战为确定哪些患者最可能从靶向Src抑制中受益，以及哪些为证明功效的最适合的临床环境，例如疾病晚期终点或与现有剂的组合或合理设计的新颖的组合疗法。
所有当前的Src激酶抑制剂(达沙替尼、博舒替尼、塞卡替尼、AZD0424) 均代表具有显著的脱靶活性的非选择性酪氨酸激酶抑制剂，所述脱靶活性导致不良事件和剂量限制性毒性。所有现有的Src抑制剂还表现出针对 Abl1(Abelson鼠科白血病病毒致癌基因同源物1)细胞质和核蛋白酪氨酸激酶的有效活性。t(9；22)易位导致BCR和ABL1基因头对尾(head-to-tail)的融合，导致在用BCR-Abl1抑制剂成功治疗的慢性髓细胞性白血病的许多病例中存在组成性活性融合基因。
已知的Src抑制剂的脱靶活性没有通过合理的设计来选择或优化，并且可能限制它们在癌症疾病晚期环境中作为组合疗法的使用，其中不必要的脱靶活性导致剂量限制性毒性和组合限制性毒性。存在证据表明，Abl 的治疗靶向可通过其作为肿瘤抑制剂的双重功能对心脏毒性[51，56]和非肿瘤发生组织具有不利影响，因此潜在地导致瘤形成[64，62，45，55]。此外，证据表明，靶向Abl导致骨质减少[60]。因此，当前的非选择性双重Src/Abl抑制剂不适合于长期应用于癌症和非癌症(例如骨质疏松症或病毒感染)指征两者。
采用表型筛选策略以确定和优化新颖的和高度有效的c-Src激酶抑制剂，所述c-Src激酶抑制剂与市场上现有的Src抑制剂相比具有改进的靶选择性概况。表型筛选策略有利于发现具有最佳生物物理性质的小分子。使用这种方法，发现具有有效的抗增殖活性的吡唑并嘧啶类。出乎意料地，在靶确定之后，证明的是本发明要求保护的化合物(包括，例如化合物506、 518、519、533、553和565)恰好为迄今报道的不靶向Abl但在体外针对癌细胞发挥抗增殖、抗迁移和细胞毒性性质的高度有效的c-Src激酶抑制剂，具有与现有的非选择性Src抑制剂相当的效力(表4和5)。
总之，由于显著脱靶活性(包括不良Abl1抑制)，当前临床开发中的所有Src激酶抑制剂均不适合定制于Src抑制剂作为药物组合疗法在疾病晚期环境或慢性治疗非癌性疾病指征中的最佳使用。本发明要求保护的化合物为报道的不抑制Abl1的第一种选择性Src激酶抑制剂。例如，高度优选的化合物506和化合物565优于用于作为组合疗法在癌症疾病晚期环境中使用的现有Src抑制剂。
如表5和图4中示出的，相对于更广的蛋白激酶组(kinome)家族的其他成员，新颖的Src抑制剂对“Src家族”激酶为特异性的。Src家族包括若干密切相关的同源物(例如Lyn、Fyn、Lck、Hck、Fgr、Blk、Frk和Yes)。同源物高度保守，并且通过小分子选择性靶向不同的家族成员是非常困难的。与迄今公布的所有Src抑制剂以及临床中的相比，本发明要求保护的化合物恰好为以低/亚纳摩尔效力特异性靶向Src家族成员而不靶向其他激酶(包括Abl)的分子。用于化合物506的完全的蛋白激酶组的组筛选数据支持这一要求(参见图4)。
对溶解度性质的分析发现，本发明要求保护的化合物在PBS中具有良好的溶解度(>100mg/mL)。另外，它们在肝微粒体的存在下示出良好的稳定性并且血浆结合水平为81％-91％(参见表6)。
研究选择的本发明化合物的hERG通道抑制。使用Life Technologies 基于荧光的试剂盒(
Figure BDA0001553603060000171
hERG荧光偏振测定试剂盒)。所有的化合物示出IC50>10μM。该系列中最有效的为具有IC50(10-15μM)的化合物533。还利用IonworksTM高通量电生理学筛选对选择的本发明化合物进行了第二 hERG安全性测定以及血浆稳定性分析(小鼠、大鼠和人类)。结果示于表7 中。这些实验证实了化合物的安全性。血浆稳定性研究证明化合物在人类血浆中的高稳定性。
随后在雌性小鼠中研究化合物506和化合物565的体内PK(iv和po)。血液和血浆水平被研究持续8小时，并且该化合物未示出毒性作用。口服施用证明这些化合物为口服可用的。虽然506显示中等口服生物利用度， 565示出优良的口服生物利用度(52％)。化合物506的半衰期优于化合物 565的半衰期。
如表8中观察的，CYP P450抑制被示出为残余的。考虑到化合物的效力，在高于10μM的浓度任何少于50％的抑制均不被认为是显著的。
用MDA-MB-231细胞在体外完成PD研究，这示出在低纳摩尔浓度对磷酸-Src的强抑制(参见下文图5)。
为了测试Abl的抑制是否可以影响由化合物介导的表型效应，用化合物506和特异性Abl别构抑制剂GNF-2进行组合研究。如图6中示出的， Abl抑制剂的滴定拮抗化合物对体外癌细胞存活力的活性。现有的Src抑制剂当在癌症中作为单一疗法使用时观察到缺乏临床功效，因此一段时间以来一直认为Src抑制剂必须以组合疗法使用。认为，有害的脱靶活性(包括Abl活性)的不存在(本发明要求保护的化合物特有的)将既增强功效且使由脱靶活性造成的不良事件最小化。
熟知Src家族激酶在细胞迁移和侵入中具有积极作用，并且参与癌症患者中的转移[67，68]。为了测试化合物506是否能够抑制体外细胞迁移，使用Incucyte Zoom系统建立了划痕损伤测定(scratch wound assay)。在24 小时内经过30分钟间隔使细胞成像。
早在研究的6小时时MDA-MB-231细胞的迁移受到抑制，并且效力保持直至测定结束，24小时(参见图7)。化合物506示出与达沙替尼相当的结果。
作为毒性研究和表型体内研究，进行了斑马鱼尾部再生测定[69]。如由Yoo及其同事所证明的[69]，Src家族激酶(特别地Fynb，类似于人类Fyn) 的作用是再生截断的鳍所必需的。这被用于评价和比较化合物506和达沙替尼的体内活性。如图8中示出的，化合物506和达沙替尼抑制尾鳍的再生。然而，化合物506对胚胎未示出任何其他表型或毒性作用，而达沙替尼明确地诱导了心脏毒性(Abl抑制剂(包括达沙替尼)的良好建立的剂量限制性副作用)。
SRC抑制剂506在斑马鱼中的表型筛选
发育中的斑马鱼(developing zebrafish)提供了快速的表型测定，以同时测试新颖的化合物在活脊椎动物中的安全性和功效[78]。斑马鱼中的基于小分子表型的筛选最近涉及后部侧线原基的迁移中的SRC激酶[79]，所述后部侧线原基为一种粘连的细胞簇，在皮肤下沿着肌隔水平地迁移至尾部末端，定期地沉积神经丘。为了确定506对体内细胞迁移的影响，我们用 506和达沙替尼处理在侧线的机械感觉(mechanosensory)毛细胞(其形成神经丘的一部分)中表达绿色荧光蛋白(GFP)的Tg(brn3c:mGFP)转基因斑马鱼持续2d[80]，并且测量最后的神经丘至尾部尖端的距离(通过脊索的末端和黑色黑素细胞的存在标记，图9a，垂直虚线)。506显著降低成神经细胞迁移(平均>100微米)，具有对胚胎发育的最小影响(图9a-c)。相比之下，以>10μM的达沙替尼处理导致严重的心脏毒性以及大部分胚胎死亡。在与胚胎存活(1-10μM)相容的浓度，达沙替尼不抑制成神经细胞的迁移，而它仍然诱导了患者的心脏毒性表型(注意图9c中的心脏扩大)。进一步的安全性研究示出，双重ABL/SRC抑制剂PP20甚至在短治疗之后也在斑马鱼中诱发严重的心脏毒性。这些结果与ABL在心脏发育和治愈中的重要作用相关[81]、[82]，表明当不需要ABL抑制时，506相对于ABL的选择性可能有利于疗法。
肿瘤异种移植模型中的体内SRC抑制研究
通过蛋白印迹证实在人类结肠直肠癌HCT116细胞中活性(磷酸化)SRC的存在及其在506治疗下的抑制。随后，在小鼠中的HCT116细胞的异种移植模型中进行体内PD研究[83]。将HCT116细胞皮下注射，并且使肿瘤生长至直径多达3-4mm。随后，将小鼠通过经口灌胃每天给药 506(50mg/kg，在纳米级纯水(nanopure water)中)或媒介物(纳米纯水)持续3天，并且在最后给药(n＝4)之后3h将其屠宰。将肿瘤切除，固定并且切片被标记为磷酸-SRCY416并且用苏木精染色。如图10中示出的，显微术分析证明相对于未治疗的动物对照，在来自用506治疗的小鼠的异种移植物切片中的磷酸-SRCY416的显著降低。
治疗应用
本发明的另外的方面涉及如以上描述的化合物用于在医学中使用。
本发明的另一个方面涉及如以上描述的化合物用于在治疗选自增殖性紊乱、病毒性紊乱、神经学紊乱和骨质疏松症的紊乱中使用。
在一个优选的实施方案中，细胞增殖性紊乱为癌症。优选地，癌症选自在任何时期的实体癌症。优选地，癌症处于晚期，伴有转移性病变。
优选地，原发性癌症选自乳腺癌、结肠癌、前列腺黑素瘤、膀胱癌、胰腺癌、头颈部癌和卵巢癌，有或没有转移，以及血液学癌症诸如急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma)。
特别优选的原发性癌症疾病指征包括但不限于：三阴性乳腺癌、抗曲妥珠单抗和/或拉帕替尼的Her2阳性乳腺癌、黑素瘤晚期(包括抗威罗菲尼 (Vemurafenib)的疾病和多发性骨髓瘤)。
在一个优选的实施方案中，增殖性紊乱为淋巴管平滑肌瘤病(LAM)，一种进行性肺疾病，其中起源于身体某处的非典型细胞散布于整个肺中，逐渐阻塞小气道并且产生囊肿。通常，疾病进展缓慢，但最终它可以限制呼吸以导致死亡。当前对于LAM无被证实的治愈。Src激酶在LAM细胞中为有活性的，并且对于细胞生长和细胞在肺组织周围移动和侵入肺组织的能力是重要的[70]。当前正在进行临床试验来研究塞卡替尼在Lam患者中的耐受性。
在一个优选的实施方案中，增殖性紊乱为以血管平滑肌细胞的迁移和过度增殖为特征的动脉粥样硬化和再狭窄。Src激酶信号传导先前已经参与由循环中检测到的临床风险因素(C-肽和糖化LDL)诱导的主动脉平滑肌细胞增殖[71，72]。
本文描述的化合物也适用于在若干种非癌症疾病指征诸如骨质疏松症、帕金森氏病、阿尔茨海默病和登革热病毒感染中的慢性施用。
在一个优选的实施方案中，紊乱为骨质疏松症或骨转移。Src活性涉及转移性骨疾病，这代表了患有乳腺癌的患者的原发性转移部位。骨的结构完整性和正常功能通过由破骨细胞介导的骨吸收和成骨细胞介导的骨产生的仔细控制的平衡来控制。Src活性在破骨细胞功能和骨的肿瘤定殖两者中发挥关键作用[61]。因此，Src活性的靶向抑制可以诱导净骨形成 [46]，并且减轻与转移性骨疾病和潜在地骨质疏松症相关的显著发病率。
在一个特别优选的实施方案中，病毒性紊乱为EB病毒。EB病毒(EBV) 也被称为人类疱疹病毒4(HHV-4)，为疱疹家族中的八种病毒之一，并且为人类中最常见的病毒之一。其作为传染性单核细胞增多症(腺热)的病因是最有名的。它还与特定形式的癌症相关，诸如，霍奇金氏淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、以及与人类免疫缺陷病毒(HIV)相关的状况，诸如毛状白斑和中枢神经系统淋巴瘤。存在感染EBV与较高风险的某些自身免疫疾病，特别地皮肌炎、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、干燥综合征 (
Figure BDA0001553603060000201
syndrome)和多发性硬化症相关的证据。每年有大约200,000个癌症病例被认为归因于EBV。EBV感染免疫系统的B细胞和上皮细胞。在 EBV的初始裂解性感染得到控制后，EBV潜伏地存留在个体的生命的剩余部分的个体的B细胞中。
在一个特别优选的实施方案中，病毒性紊乱为登革病毒感染。过去四十年来，登革热病例急剧增加，每年有0.5亿与5.28亿之间的人感染。症状包括突发高热、严重头痛、眼后疼痛、严重的关节和肌肉疼痛、恶心、呕吐、皮疹、轻度出血(诸如鼻出血，牙龈出血或容易挫伤)。大约5％的人罹患更严重和威胁生命的症状(例如登革热休克综合征和登革热出血热)。登革热与登革热病毒(蚊媒单链正链RNA病毒(mosquito-borne single positive-stranded RNA virus))的感染直接相关。开发针对该疾病的疫苗由可以引起该疾病的登革热病毒的五种不同的血清型复杂化(compound)，因此，任何疫苗均必须针对所有五种类型进行免疫才能有效。迄今尚未开发出疫苗或治愈性治疗。在病毒学期刊(Journal ofVirology)上公布的最近的研究确定，Src家族成员Fyn激酶作为细胞中登革热病毒的RNA复制所需的重要宿主细胞靶[53]。感染了登革热病毒的细胞用小分子Src抑制剂AZD0530 和达沙替尼的治疗抑制病毒复制，然而，登革热病毒在达沙替尼存在下的连续传代导致确定在NS4B蛋白的跨膜结构域3中的克服由AZD0530和达沙替尼对RNA复制的抑制的突变。因此，类似于癌细胞，病毒可以快速获得对靶向疗法的抗性，并且因此，组合疗法代表了护理的标准。与其他Src抑制剂相比，化合物518的选择性严格受限制于蛋白激酶组的Src 家族成员，包括Fyn(表5)，并且因此可以代表用于登革热病毒感染或其他病毒感染的组合疗法的理想组分，其中Src家族成员涉及例如EB病毒和 HIV1[63，59]。
在一个特别优选的实施方案中，病毒性紊乱为HIV1。
在一个优选的实施方案中，神经学紊乱为阿尔茨海默病。最近的研究已经证明，Src家族的成员Fyn参与了导致严重的脑病理诸如阿尔茨海默病和帕金森氏病的信号传导途径[73，74]。Fyn在调节淀粉样物质-β(Aβ)斑块产生中发挥作用并且介导Aβ-诱导的突触缺陷和神经毒性。Fyn还诱导了tau的酪氨酸磷酸化[75]。最近已经完成了用于治疗AD的对Src和Fyn 具有高效力的小分子抑制剂塞卡替尼(AZD0530)的Ib期研究，结果令人鼓舞，支持更大规模进行的IIa期临床试验。显著地，在使用的最高剂量，用塞卡替尼治疗的受试者之一形成了与治疗相关的充血性心力衰竭[76]。该剂量限制性不良作用强调了高度特异性Src家族抑制剂在治疗不同疾病中的重要性。
另一个方面涉及如以上描述的化合物在制备用于治疗或预防选自骨质疏松症、神经学紊乱、增殖性紊乱和病毒性紊乱的紊乱的药物中的用途。
另一个方面涉及如以上描述的化合物在制备用于治疗或预防增殖性紊乱例如癌症的药物中的用途。
优选地，化合物以足以抑制一种或更多种酪氨酸激酶的量施用。更优选地，酪氨酸激酶为Src家族激酶。如本文使用的，术语“Src激酶”指的是非受体酪氨酸激酶的Src家族的成员。
另一个方面涉及本发明的化合物用于在预防或治疗由针对生物靶的任何异常活性引起的、与针对生物靶的任何异常活性相关的或伴随针对生物靶的任何异常活性的紊乱中使用，其中所述靶为酪氨酸激酶，更优选地 Src家族激酶。
又另一个方面涉及本发明的化合物在制备用于预防或治疗由针对生物靶的任何异常活性引起的、与针对生物靶的任何异常活性相关的或伴随针对生物靶的任何异常活性的紊乱的药物中的用途，其中所述靶为酪氨酸激酶，更优选地Src家族激酶。
本发明的另一个方面涉及治疗酪氨酸激酶相关的疾病或紊乱、更优选地Src激酶相关的疾病或紊乱的方法。根据本发明的该方面的方法通过将治疗有效量的如上文描述的本发明的化合物(本身或者更优选地作为药物组合物的一部分，与例如药学上可接受的载体混合，如下文所详述的)施用至需要其的受试者来实施。
本发明的又另一个方面涉及治疗患有疾病状态的哺乳动物的方法，所述疾病状态通过抑制酪氨酸激酶、更优选地Src激酶来减轻，其中所述方法包括将治疗有效量的根据本发明的化合物施用至哺乳动物。
本发明的另一个方面涉及治疗患有疾病状态的哺乳动物的方法，所述疾病状态通过选择性抑制c-Src激酶来减轻，其中所述方法包括将治疗有效量的根据本发明的化合物施用至哺乳动物。优选地，疾病状态通过相对于Abl激酶选择性抑制c-Src激酶来减轻。
优选地，哺乳动物为人类。
术语“方法”指的是用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于化学、药理学、生物学、生物化学和医学领域的从业者已知的方式、手段、技术和程序或者由化学、药理学、生物学、生物化学和医学领域的从业者从已知的方式、手段、技术和程序容易地开发的那些方式、手段、技术和程序。
如本文使用的术语“施用”指的是用于促使本发明的化合物和蛋白激酶在一起的方法，所述方法以使化合物可以直接地(即通过与蛋白激酶本身相互作用)或间接地(即通过与蛋白激酶的催化活性所依赖的另一种分子相互作用)影响蛋白激酶的酶活性的方式。如本文使用的，可以在体外(即在试管中)或体内(即在活的有机体的细胞或组织中)完成施用。
在本文中，术语“治疗”包括消除、大体上抑制、减慢或逆转疾病或紊乱的进展，大体上改善疾病或紊乱的临床症状，或大体上预防疾病或紊乱的临床症状的出现。
在本文中，术语“预防”指的是用于首先阻止有机体以免获得紊乱或疾病的方法。
术语“治疗有效量”指的是被施用的化合物的量，该量将在某种程度上减轻被治疗的疾病或紊乱的症状中的一种或更多种。
对于本发明中使用的任何化合物，治疗有效量(在本文也被称为治疗有效剂量)最初可以从细胞培养测定来估计。例如，可以在动物模型中配制剂量以获得包括如在细胞培养中确定的IC50或IC100的循环浓度范围。此类信息可以用于更精确地确定在人类中的有用的剂量。最初的剂量也可以从体内数据估计。本领域普通技术人员使用这些最初的指南可以确定在人类中的有效剂量。
此外，本文描述的化合物的毒性和治疗功效可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药物程序，例如通过确定LD50和ED50来确定。毒性与治疗作用之间的剂量比率为治疗指数，并且可以被表示为LD50与ED50之间的比率。呈现出高的治疗指数的化合物为优选的。从这些细胞培养物测定和动物研究获得的数据可以被用于配制对在人类中使用无毒性的剂量范围。优选地，此类化合物的剂量处于包括具有很少毒性或没有毒性的ED50的循环浓度的范围内。剂量可以根据采用的剂型和利用的施用途径而在该范围内改变。确切的制剂、施用途径和剂量可以由个体医师鉴于患者状况选择。(参见，例如，Fingl等人，1975，In:ThePharmacological Basis of Therapeutics，第1章，第1页)。
剂量的量和间隔可以被个体地调整以提供足以维持治疗作用的活性化合物的血浆水平。用于口服施用的常用患者剂量的范围为从约50-2000 mg/kg/天，通常从约100-1000mg/kg/天，优选地从约150-700mg/kg天，并且最优选地从约250-500mg/kg/天。优选地，治疗有效的血清水平将通过每天施用多个剂量来实现。在局部施用或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可以与血浆浓度不相关。本领域技术人员将能够优化治疗有效的局部剂量而不需要过度实验。
如本文使用的，“酪氨酸激酶相关的疾病或紊乱”指的是以不适合的激酶活性或过度活性为特征的疾病或紊乱。不适合的活性指的是以下任一种；(i)在通常不表达所述激酶的细胞中的激酶表达；(ii)增加的激酶表达，导致不想要的细胞增殖、分化和/或生长；或(iii)减少的激酶表达，导致细胞增殖、分化和/或生长的不想要的降低。激酶的过度活性指的是扩增编码特定激酶的基因或产生可以与细胞增殖、分化和/或生长紊乱相关的激酶活性水平(即，随着激酶水平增加，细胞紊乱的一种或更多种症状的严重程度增加)。过度活性还可以是由于突变(诸如负责配体结合的激酶片段的缺失) 而导致的配体非依赖性或组成性活化的结果。
本文描述的化合物可以在预防中是有用的优选的疾病或紊乱包括癌症、骨质疏松症、神经学紊乱诸如帕金森氏病和阿尔茨海默病以及病毒性紊乱诸如EB病毒、登革热病毒感染和HIV。
因此，本发明还提供了如本文定义的化合物用于制备用于治疗疾病的药物的用途，其中抑制酪氨酸激酶，更优选地Src激酶是合意的。此类疾病包括增殖性紊乱、骨质疏松症和病毒性紊乱。
选择性
有利地，根据本发明的选择的化合物对一种或更多种蛋白激酶、更优选地一种或更多种酪氨酸激酶呈现出选择性。
在优选的实施方案中，如通过适合的激酶筛选测定所测量，相对于一种或更多种其他蛋白激酶，本发明的化合物对Src-激酶呈现出选择性。技术人员将熟悉此类测定，其进一步的细节提供于所附的实施例部分中[77]。
更优选地，相对于一种或更多种其他蛋白激酶，本发明的化合物对Src 激酶呈现出至少2倍选择性，优选地至少5倍选择性，更优选地相对于一种或更多种其他蛋白激酶，本发明的化合物对Src激酶呈现出至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍或至少1000 倍选择性。
在优选的实施方案中，相对于Abl激酶，本发明的化合物对Src激酶呈现出至少2倍选择性，优选地至少5倍选择性，更优选地相对于Abl激酶，本发明的化合物对Src激酶呈现出至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍或至少1000倍选择性，例如，如通过IC50 Abl/IC50 Src的比率测量的。
药物组合物
对于根据本发明的用途，本文描述的化合物或其生理学上可接受的盐、酯或其他生理学功能衍生物可以被呈现为药物制剂，所述药物制剂包含化合物或其生理学上可接受的盐、酯或其他生理学功能衍生物、以及一种或更多种药学上可接受的载体以及任选地其他治疗和/或预防成分。载体 (carrier(s))必须在与制剂的其他成分相容并且对其接受者不是有害的意义上是“可接受的”。药物组合物可以在人类医学和兽医学中用于人类或动物使用。
用于本文描述的多种不同形式的药物组合物的此类合适的赋形剂的实例可以见于由A Wade和PJ Weller编辑的“Handbook of Pharmaceutical Excipients，第2版，(1994)中。
用于治疗用途的可接受的载体或稀释剂为制药领域熟知的，并且被描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.中(A. R.Gennaro编著，1985)。
合适的载体的实例包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨糖醇等。合适的稀释剂的实例包括乙醇、甘油和水。
药物载体、赋形剂或稀释剂的选择可以关于预期施用途径和标准药学实践来选择。药物组合物可以包含作为载体、赋形剂或稀释剂的或除了载体、赋形剂或稀释剂以外的任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂、缓冲液、调味剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂(包括抗氧化剂) 等，以及为了使制剂与所意图的接受者的血液等渗的目的而包括的物质。
合适的粘合剂的实例包括：淀粉，明胶，天然糖诸如葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖、玉米甜味剂，天然和合成树胶诸如阿拉伯胶、黄蓍胶或海藻酸钠，羧甲基纤维素和聚乙二醇。
合适的润滑剂的实例包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。
可以在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、山梨酸和对-羟基苯甲酸的酯。也可以使用抗氧化剂和悬浮剂。
药物制剂包括适用于口服施用、局部施用(包括皮肤、含服和舌下)、直肠或肠胃外施用(包括皮下、皮内、肌内和静脉内)、鼻和肺部施用(例如，通过吸入)的那些。在适合的情况下，制剂可以便利地以离散剂量单位呈现，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。所有的方法均包括使活性化合物与液体载体或细分的固体载体或两者联合的步骤，并且然后，如必要的话，将产品成形为所期望的制剂。
其中载体为固体的适用于口服施用的药物制剂最优选地作为单位剂量制剂诸如丸剂(bolus)、胶囊或片剂呈现，各自包含预定量的活性化合物。片剂可以通过任选地与一种或更多种辅助成分一起压制或模制来制备。压制的片剂可以通过在合适的机器中将呈自由流动形式诸如粉末或颗粒的活性化合物(任选地与粘合剂、润滑剂(lubricant)、惰性稀释剂、润滑剂 (lubricating agent)、表面活性剂或分散剂混合)压制来制备。模制片剂可以通过将活性化合物与惰性液体稀释剂模制来制备。片剂可以任选地被包衣，并且如果未包衣，可以任选地被刻痕(score)。胶囊可以通过将活性化合物(单独地或与一种或更多种辅助成分掺合)填充到胶囊壳中，并且然后将它们以通常的方法密封来制备。扁囊剂(cachet)类似于胶囊，其中活性化合物连同任何辅助成分一起被密封在米纸包装中。活性化合物还可被配制为可分散的颗粒，其在施用之前可以例如悬浮于水中，或撒在食物上。颗粒可以被包装在例如小袋中。其中载体为液体的适用于口服施用的制剂可以作为在水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；或作为水包油液体乳液呈现。
用于口服施用的制剂包括控制释放剂型，例如其中活性化合物被配制于适合的控制释放基质中或者被包覆有合适的控制释放膜的片剂。此类制剂对于预防性用途可以是特别便利的。
其中载体为固体的适用于直肠施用的药物制剂最优选地作为单位剂量栓剂呈现。合适的载体包括可可脂和本领域常用的其他材料。栓剂可以通过将活性化合物与软化或熔化的载体混合、随后在模具中冷却和成形来便利地形成。适用于肠胃外施用的药物制剂包括活性化合物在水性或油性媒介物中的无菌溶液或悬浮液。
可注射制剂可以适用于弹丸注射(bolus injection)或连续输注。此类制剂便利地以单位剂量或多剂量容器呈现，其在引入制剂之后密封直至需要使用。可选择地，活性化合物可以呈粉末形式，其在使用之前用合适的媒介物诸如无菌无热原水构成。
活性化合物也可以被配制为长效储库制剂，其可以通过肌内注射或通过植入(例如，皮下或肌内)施用。储库制剂可以包括，例如，合适的聚合物或疏水材料或离子交换树脂。此类长效制剂对于预防性用途是特别便利的。
呈现了适用于经由口腔(buccal cavity)进行肺部施用的制剂，使得包含活性化合物且合意地具有在0.5微米至7微米的范围内的直径的颗粒在接受者的支气管树中被递送。
作为一种可能性，此类制剂呈细碎粉末形式，其可以便利地存在于合适地例如用于在吸入装置中使用的明胶的可刺破的胶囊中，或者可选择地作为包含活性化合物、合适的液体或气体推进剂以及任选地其他成分诸如表面活性剂和/或固体稀释剂的自推进制剂存在。合适的液体推进剂包括丙烷和氯氟烃，并且合适的气体推进剂包括二氧化碳。也可以采用自推进制剂，其中活性化合物以溶液或悬浮液的液滴形式分配。
此类自推进制剂类似于本领域已知的那些，并且可以通过建立的程序来制备。合适地，它们存在于装备有具有期望的喷雾特性的可手动操作或自动运行的阀的容器中；有利地，阀为计量型的，在其每一次操作后递送固定的体积，例如25微升至100微升。
作为另外的可能性，活性化合物可以呈用于在雾化器(atomizer)或喷雾器(nebuliser)中使用的溶液或悬浮液的形式，其中加速气流或超声波搅动被用于产生用于吸入的细雾滴(fine droplet mist)。
适用于鼻施用的制剂包括通常类似于以上描述用于肺部施用的那些的制剂。当分配时，此类制剂应该合意地具有在10微米至200微米范围内的粒径以能够保持在鼻腔中；这可以通过视情况使用合适粒度的粉末或者选择适合的阀来实现。其他合适的制剂包括用于通过从保持靠近鼻子的容器经过鼻腔通道快速吸入施用的具有在20微米至500微米范围内的粒径的粗粉、以及包含在水性或油性溶液或悬浮液中的0.2％至5％w/v的活性化合物的滴鼻剂(nasal drop)。
药学上可接受的载体为本领域技术人员熟知的，并且包括但不限于0.1 M，并且优选地0.05M磷酸盐缓冲液或0.8％盐水。另外，此类药学上可接受的载体可以是水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油和可注射有机酯诸如油酸乙酯。水性载体包括水、醇/水性溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖(Ringer's dextrose)、右旋糖和氯化钠、乳酸林格氏液(lactated Ringer's)或不挥发性油。还可以存在防腐剂和其他添加剂，诸如，例如，抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
可以提供适用于局部制剂的制剂，例如，如凝胶、乳膏或软膏。此类制剂可以应用于例如伤口或溃疡，直接散布到伤口或溃疡的表面上，或者被携带在可以被应用于并且在待治疗的区域上的合适的支持物上，诸如绷带、纱布、网状物(mesh)等。
还可以提供液体或粉末制剂，其可以直接喷雾或喷洒到待治疗的部位，例如，伤口或溃疡上。可选择地，载体诸如绷带、纱布、网状物等可以被喷雾或喷洒有该制剂，并且然后被应用于待治疗的部位。
根据本发明的另外的方面，提供了用于制备如以上描述的药物组合物或兽药组合物的工艺，所述工艺包括使活性化合物与载体例如通过掺合来联合。
通常，通过如下制备制剂：将活性剂与液体载体或细分的固体载体或两者均匀地和紧密地联合，并且然后如必要的话，使产品成形。本发明延伸至用于制备药物组合物的方法，所述方法包括使通式(I)或(II)的化合物与药学上或兽药学上可接受的载体或媒介物结合或联合。
盐/酯
本发明的化合物可以以盐或酯，特别地药学上和兽药学上可接受的盐或酯存在。
本发明的化合物的药学上可接受的盐包括其合适的酸加成盐或碱盐。合适的药用盐的综述可以见于Berge等人，J Pharm Sci，66，1-19(1977)中。盐用以下形成：例如强无机酸诸如矿物酸，例如氢卤酸诸如盐酸盐、氢溴酸盐和氢碘酸盐、硫酸、磷酸、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐和磺酸；强有机羧酸，诸如未被取代或被取代(例如被卤素取代) 的1个至4个碳原子的烷烃羧酸，诸如乙酸；饱和或不饱和二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或对苯二甲酸 (tetraphthalic)；羟基羧酸，例如，抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或有机磺酸诸如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸，诸如甲烷-磺酸或对甲苯磺酸。非药学上或兽药学上可接受的盐作为中间体仍然可以是有价值的。
优选的盐包括，例如，乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、葡萄糖酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、双葡萄糖酸盐、环戊酸盐 (cyclopentanate)、葡庚糖酸盐(glucoheptanate)、甘油磷酸盐、草酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、烟酸盐(nicotinate)、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐(pectinate)、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐(pivalate)、丙酸盐、酒石酸盐、乳糖醛酸盐(lactobionate)、pivolate、樟脑酸盐、十一烷酸盐 (undecanoate)和琥珀酸盐，有机磺酸诸如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、樟脑磺酸盐、2-萘磺酸盐(2-naphthalenesulphonate)、苯磺酸盐、对氯苯磺酸盐和对甲苯磺酸盐；和无机酸诸如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸和磺酸。
取决于被酯化的官能团，使用有机酸或醇类/氢氧化物类形成酯。有机酸包括羧酸，诸如未被取代或被取代(例如被卤素取代)的1个至12个碳原子的烷烃羧酸，诸如乙酸；饱和或不饱和二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或对苯二甲酸；羟基羧酸，例如，抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸或柠檬酸；氨基酸，例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或有机磺酸诸如未被取代或被取代(例如被卤素取代) 的(C1-C4)-烷基-或芳基-磺酸，诸如甲烷-磺酸或对甲苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，诸如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇类包括1-12个碳原子的烷醇类，其可以是未被取代的或被取代的(例如，被卤素取代的)。
对映异构体/互变异构体
在先前讨论的本发明的所有方面中，本发明在适合的情况下包括本发明的化合物的所有对映异构体、非对映异构体和互变异构体。本领域技术人员将认识到具有光学性质(一个或更多个手性碳原子)或互变异构特性的化合物。对应的对映异构体和/或互变异构体可以通过本领域已知的方法分离/制备。
对映异构体的特征在于它们的手性中心的绝对构型，并且由Cahn、 Ingold和Prelog的R-和S-顺序规则描述。此类惯例是本领域熟知的(例如参见‘Advanced OrganicChemistry’，第3版，编辑March，J.，John Wiley和 Sons，New York，1985)。
包含手性中心的本发明的化合物可以用作外消旋混合物、对映异构体富集的混合物，或者外消旋混合物可以使用熟知的技术分离，并且可以单独使用单独的对映异构体。
立体异构体和几何异构体
本发明的一些化合物可以以立体异构体和/或几何异构体存在-例如，它们可以具有一个或更多个不对称和/或几何中心，并且因此可以以两个或更多个立体异构和/或几何形式存在。本发明预期了使用那些抑制剂的所有单独的立体异构体和几何异构体、及其混合物。权利要求中使用的术语涵盖这些形式，只要所述形式保持适合的功能活性(尽管不一定达到相同的程度)。
本发明还包括剂或其药学上可接受的盐的所有合适的同位素变型 (variation)。本发明的剂或其药学上可接受的盐的同位素变型被定义为其中至少一个原子被具有相同原子序数但原子质量与自然界中常见的原子质量不同的原子代替的剂或其药学上可接受的盐。可以掺入到剂及其药学上可接受的盐中的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，诸如分别为2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F 和36Cl。剂及其药学上可接受的盐的某些同位素变型，例如，其中掺入了放射性同位素诸如3H或14C的那些，可用于药物和/或底物组织分布研究 (substrate tissue distribution study)。氚化，即，3H和碳-14即，14C同位素为特别优选的，这是由于它们易于制备和检测。此外，用同位素诸如氘即2H 取代，由于更高的代谢稳定性，例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求，可以提供某些治疗优势，并且因此在一些情况下可以是优选的。例如，本发明包括其中任何氢原子被氘原子代替的通式(I)或(II)的化合物。本发明的剂及其药学上可接受的盐的同位素变型通常可以通过常规程序使用合适的试剂的适合的同位素变型来制备。
前体药物
本发明还包括以前体药物形式的本发明化合物，即在体内释放根据通式(I)或(II)的活性母体药物的共价键合的化合物。此类前体药物通常为本发明的化合物，其中一个或更多个适合的基团已经被修饰，使得该修饰可以在施用至人类或哺乳动物受试者后被逆转。逆转通常通过天然存在于此类受试者中的酶进行，然而第二剂与此类前体药物一起被施用以便进行体内逆转是可能的。此类修饰的实例包括酯(例如，以上描述的那些中的任一种)，其中可以进行逆转的是酯酶等。其他此类系统是本领域技术人员熟知的。
溶剂化物
本发明还包括本发明的化合物的溶剂化物形式。权利要求中使用的术语涵盖这些形式。
多晶型物(POLYMORPH)
本发明还涉及以其多种结晶形式、多晶型物形式和(无水)含水形式的本发明的化合物。在制药工业中已经良好建立的是，化学化合物可以以任何此类形式分离，通过稍微改变从在此类化合物的合成制备中使用的溶剂的纯化和/或分离方法来进行。
施用
本发明的药物组合物可以适用于直肠、鼻、支气管内、局部(包括含服和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内和皮内)、腹膜内或鞘内施用。优选地该制剂为口服施用的制剂。制剂可以以单位剂型，即，以包含单位剂量或多个单位剂量或单位剂量的亚单位的离散部分的形式便利地呈现。通过实例的方式，制剂可以呈片剂和持续释放(sustained release)胶囊的形式，并且可以通过药学领域熟知的任何方法制备。
在本发明中用于口服施用的制剂可以呈现为以下：各自包含预定量的活性剂的离散单位，诸如胶囊、凝胶剂(gellule)、滴剂、扁囊剂、丸剂或片剂；粉末或颗粒；活性剂在水性液体或非水性液体中的溶液、乳液或悬浮液；或者水包油液体乳液或油包水液体乳液；或丸剂等。优选地，这些组合物每剂量包含从1mg至250mg，并且更优选地从10mg-100mg的活性成分。
对于用于口服施用的组合物(例如片剂和胶囊)，术语“可接受的载体”包括媒介物，诸如常见赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填充剂和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和海藻酸；和润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他金属硬脂酸盐、甘油硬脂酸酯、硬脂酸、硅油(silicone fluid)、滑石、蜡、油和胶体二氧化硅。也可以使用调味剂诸如薄荷、冬青油、樱桃调味剂等。可能合意的是，添加着色剂以使剂型容易地可辨认。片剂也可以通过本领域熟知的方法包衣。
片剂可以通过任选地与一种或更多种辅助成分一起压制或模制来制备。压制的片剂可以通过在合适的机器中压制活性剂来制备，所述活性剂呈自由流动形式诸如粉末或颗粒，任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合。模制的片剂可以通过在合适的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉末化的化合物的混合物来制备。片剂可以任选地被包衣或刻痕，并且可以被配制以提供活性剂的缓慢释放或控制释放。
适用于口服施用的其他制剂包括锭剂(lozenge)，所述锭剂在调味基底 (通常为蔗糖和阿拉伯胶(acacia)或黄蓍胶)中包含活性剂；糖锭(pastille)，所述含片在惰性基底诸如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶中包含活性剂；以及漱口剂，所述漱口剂在合适液体载体中包含活性剂。
其他施用形式包括可以静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹膜内或肌内注射的并且由无菌或可灭菌的溶液制备的溶液或乳液。可注射形式通常每剂量包含在10-1000mg之间，优选地在10-250mg之间的活性成分。
本发明的药物组合物也可以呈栓剂、阴道栓剂、悬浮液、乳液、洗液、软膏、乳膏、凝胶、喷雾、溶液或撒布剂(dusting powder)的形式。
透皮施用的可选择的手段为通过使用皮肤贴剂。例如，可以将活性成分掺入到由聚乙二醇或液体石蜡的水性乳液组成的乳膏中。还可以将活性成分以按重量计在1％与10％之间的浓度掺入到由白蜡或白软石蜡基底以及如可能需要的此类稳定剂和防腐剂组成的软膏中。
剂量
本领域普通技术人员可以容易地确定施用至受试者的本发明组合物中的一种的适合剂量而无需过度实验。通常，医师将确定将最适用于个体患者的实际剂量，并且它将取决于多种因素，包括所采用的具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用时长、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用模式和时间、排泄率、药物组合、特定状况的严重程度以及个体经历的疗法。本文公开的剂量为示例性的平均情况。当然可以存在其中更高或更低的剂量范围为应得的个体情况，并且此类情况也在本发明的范围内。
根据本发明，可以施用有效量的通式(I)或(II)的化合物以抑制与特定状况或疾病相关的激酶。当然，该剂量的量将根据化合物的施用类型进一步修改。例如，为了达到用于急性疗法的“有效量”，通式(I)或(II)的化合物的肠胃外施用为优选的。化合物在水或生理盐水中的5％右旋糖中的静脉内输注或与合适赋形剂的类似制剂为最有效的，尽管肌内弹丸注射也是有用的。通常，以维持血浆中的药物浓度在有效抑制激酶的浓度的方式，肠胃外剂量将为约0.01mg/kg至约100mg/kg；优选地在0.1mg/kg与20mg/kg 之间。化合物可以每天以一定的水平施用一至四次以达到约0.4mg/kg/天至约400mg/kg/天的总日剂量。本领域普通技术人员通过比较剂的血液浓度与具有治疗作用所需的浓度，可以容易地确定治疗有效的本发明的化合物的精确量以及此类化合物最佳施用的途径。
本发明的化合物还可以以使得药物浓度足以实现本文公开的一种或更多种治疗指征的方式口服施用至患者。通常，包含该化合物的药物组合物以与患者状况一致的方式，以在约0.1mg/kg至约50mg/kg之间的口服剂量被施用。优选地，口服剂量将为约0.5mg/kg至约20mg/kg。
根据本发明，当本发明的化合物被施用时预期不存在不可接受的毒理学作用。可以具有良好的生物利用度的本发明的化合物可以在若干生物学测定中的一个中被测试以确定具有给定药理学作用所需的化合物的浓度。
组合
在特别优选的实施方案中，本发明的一种或更多种化合物与一种或更多种其他活性剂(例如市场上可得的现有药物)组合施用。在此类情况下，本发明的化合物可以与一种或更多种其他活性剂连续地、同时地或顺序地施用。
通常，药物当组合使用时更为有效。特别地，为了避免主要毒性、作用机制和抗性机制的重叠，组合疗法为合意的。此外，还合意的是，以其最大耐受剂量与在此类剂量之间的最小时间间隔施用大多数药物。将化学治疗药物组合的主要优势为它可以通过生物化学相互作用促进累加效应或可能的协同效应，并且也可以减少或延迟抗性的出现。
可以通过研究测试化合物与已知或怀疑在治疗特定紊乱中有价值的剂的抑制活性来建议有益的组合。例如，本发明涉及如以上描述的化合物在用于确定当与化合物组合时促进对抗癌活性的累加活性和协同活性的该化合物的测定中的用途。优选地，该测定为高通量的基于细胞的表型筛选。该程序也可以用于确定剂的施用顺序，即在递送之前、同时或之后。此类时序安排可以是在本文确定的所有活性剂的特征。
测定
本发明的另外的方面涉及如以上描述的化合物在用于确定能够抑制或选择性抑制一种或更多种酪氨酸激酶、更优选地Src家族激酶的另外的候选化合物的测定中的用途。
优选地，相对于Abl激酶，候选化合物能够选择性抑制c-Src激酶。
优选地，该测定为竞争性结合测定。
更优选地，竞争性结合测定包括使本发明的化合物与激酶和候选化合物接触，并且检测在根据本发明的化合物与激酶之间的相互作用中的任何变化。
优选地，候选化合物通过对本发明的化合物的常规SAR修饰产生。
如本文使用的，术语“常规SAR修饰”指的是本领域已知的用于通过化学衍生改变给定化合物的标准方法。
因此，在一个方面中，所确定的化合物可以充当用于开发其他化合物的模型(例如，模板)。在此类测试中采用的化合物可以在溶液中是游离的、附着至固体支持物上、携带在细胞表面上或位于细胞内。可以测量化合物与待测试的剂之间的活性的消除或结合复合物的形成。
本发明的测定可以是筛选，由此测试许多剂。在一个方面中，本发明的测定方法为高通量筛选。
本发明还预期了使用竞争性药物筛选测定，其中能够结合化合物的中和抗体与测试化合物特异性竞争结合化合物。
用于筛选的另一种技术提供了对物质具有合适的结合亲和力的剂的高通量筛选(HTS)，并且是基于WO 84/03564中详细描述的方法。
预期本发明的测定方法将适用于测试化合物的小规模和大规模筛选以及定量测定。
优选地，竞争性结合测定包括使本发明化合物与激酶在所述激酶的已知底物的存在下接触，并且检测在所述激酶与所述已知底物之间的相互作用中的任何变化。
本发明的另外的方面提供了检测配体与激酶结合的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)使配体与激酶在所述激酶的已知底物存在下接触；
(ii)检测在所述激酶与所述已知底物之间的相互作用中的任何变化；
并且其中所述配体为本发明的化合物。
本发明的一个方面涉及工艺，所述工艺包括以下步骤：
(a)进行上文描述的测定方法；
(b)确定能够结合至配体结合结构域的一种或更多种配体；以及
(c)制备一定量的所述一种或更多种配体。
本发明的另一个方面提供了工艺，所述工艺包括以下步骤：
(a)进行上文描述的测定方法；
(b)确定能够结合至配体结合结构域的一种或更多种配体；以及
(c)制备包含所述一种或更多种配体的药物组合物。
本发明的另一个方面提供了工艺，所述工艺包括以下步骤：
(a)进行上文描述的测定方法；
(b)确定能够结合至配体结合结构域的一种或更多种配体；
(c)修饰能够结合至配体结合结构域的所述一种或更多种配体；
(d)进行上文描述的测定方法；
(e)任选地，制备包含所述一种或更多种配体的药物组合物。
本发明还涉及通过上文描述的方法确定的配体。
本发明的又另一个方面涉及药物组合物，所述药物组合物包含通过上文描述方法确定的配体。
本发明的另一个方面涉及通过上文描述的方法确定的配体在制备用于在治疗如上文描述的一种或更多种紊乱中使用的药物组合物中的用途。
以上方法可以用于筛选可用作一种或更多种激酶的抑制剂的配体。
通式(I)或(II)的化合物既可用作实验室工具也可用作治疗剂。在实验室中，本发明的某些化合物可用于确定已知的或新近发现的激酶是否在疾病状态的建立或进展期间提供关键的或至少显著的生物化学功能，该过程通常被称为‘靶验证’。
合成
本发明的另一个方面涉及用于制备如以上定义的式I的化合物的工艺，所述工艺包括以下步骤：
Figure BDA0001553603060000381
(i)将式(III)的化合物转化为式(IV)的化合物；
(ii)将所述式(IV)的化合物转化为式(V)的化合物；
(iii)将所述式(V)的化合物转化为式(VI)的化合物；以及
(iv)将所述式(VI)的化合物转化为式(I)的化合物。
图2中列出了用于制备根据本发明的化合物的优选的合成方案。用于步骤(i)至(iv)的优选的试剂如图2中示出。
通过例证的方式，4-氨基吡唑并嘧啶通过吡唑在过量甲酰胺中的微波辅助反应来合成。N-碘代琥珀酰亚胺(NIS)介导的碘化、用溴代乙醛缩二乙醇(bromoacetaldehydediethyl acetal)的N-烷基化、随后是与对应的芳基硼酸进行Suzuki交叉偶联，以良好的总收率(25％-50％，3步)产生缩醛保护的衍生物。在TFA:水(1:1)中的定量缩醛脱保护产生对应的醛衍生物，该醛衍生物用于通过与环状仲胺(哌啶，吗啉和哌嗪)进行还原胺化来产生最终化合物。
通过以下非限制性实例的方式并且参考以下附图来描述本发明，在附图中：
图1示出：上部分：ATP和PP1(中性形式)；下部分：新颖的化合物的一般结构及其逆合成分析。
图2示出用于制备根据本发明的化合物的优选的合成方案。
图3示出：a)化合物PP20[35]、化合物506和化合物503；b)在用化合物506和化合物503孵育MCF7和MDA-MB-231细胞之后计算的EC50值，达沙替尼被用作阳性对照；c)在用化合物506、化合物503和达沙替尼孵育SYF细胞之后计算的EC50值。
图4示出以1μM的化合物506的完全的蛋白激酶组筛选点图。测试的大多数激酶(321种)的酶促活性不受化合物506(活性>35％)的影响，或仅受微弱影响。尽管21种激酶被确定为潜在的命中(<35％)，在测试的浓度化合物506针对3种激酶：c-Src、Yes和PTK6为最有活性的(0-0.5％的活性)。对于激酶的组计算的IC50值示出c-Src和Yes实际上在亚纳摩尔范围内被抑制。然而，PTK6(也被称为Brk，乳腺癌激酶)示出IC50＝20nM。其他Src家族激酶也被确定为具有在低纳摩尔范围内的IC50。
图5示出比较化合物506与达沙替尼的对MDA-MB-231细胞进行的蛋白印迹。化合物506诱导对SRC自磷酸化(Y416磷酸-SRC)和下游SRC介导的FAK磷酸化(Y861磷酸-FAK)的强抑制。虽然达沙替尼以相同浓度抑制 pSRC和pFAK，它在其他途径中也示出另外的作用(pAKT的强上调)，并且似乎稳定了总SRC。
图6示出GNF-2(选择性Abl抑制剂)相对于化合物506的EC50值的拮抗作用。如图中示出的，在10μM的GNF-2，EC50值递增多达50倍。
图7示出在6h、12h和24h时间点相对于DMSO被归一化的 MDA-MB-231处理细胞在划痕损伤上的迁移。以10nM使用药物、化合物 506和达沙替尼，并且相对于DMSO进行比较。
图8示出斑马鱼尾部再生测定。程序：用以100μM的达沙替尼或化合物506进行2小时的预处理→尾部切割→再处理持续2小时→洗净，2 天后成像。注意到由达沙替尼处理引起的心脏扩大。
图9示出SRC抑制剂506在斑马鱼中的表型筛选。(a，b)神经丘迁移测定。将具有DMSO或506(500μM)的新鲜E3培养基以20hpf、36hpf和 48hpf添加至斑马鱼胚胎中，并且在72hpf成像。(a)没有(顶部)和有506 处理(底部)的3dpf斑马鱼的尾部的代表性图像。神经丘由GFP表达(绿色) 来确定并且尾部的尖端为红线。黄色箭头指示从尾部尖端至神经丘的最短距离。(b)在用DMSO(阴性对照)或506(500μM)的处理下最后神经丘与尾部尖端(n＝10)之间的距离的成像分析。P值由t-检验计算。(c)在用506(500 μM)和达沙替尼(10μM)短处理下的斑马鱼心脏发育的研究。将化合物添加至2dpf斑马鱼胚胎中并且孵育持续4h(n＝5)。随后，添加新鲜的培养基并且在孵育48h之后对鱼进行成像。
图10示出人类肿瘤异种移植物中磷酸-SRCY416的免疫组织化学分析。 (a)来自以下的HCT116异种移植物的代表性切片(低分辨率和高分辨率)的图像：(左)未处理的小鼠和(右)用506(n＝4)处理的小鼠。(b)组织学评分 (Histoscore)分析(每个实验分析6-7个切片)。对来自未处理的动物(水)和506 处理的组的肿瘤组织切片以盲法方式进行免疫组织化学定量。P值由t-检验计算。
实施例
材料和方法
用于合成化合物的一般程序
色谱法
柱色谱法指的是硅胶色谱法，并且使用来自Sigma-Aldrich的常规玻璃柱和硅胶(孔径
Figure BDA0001553603060000401
粒度230-400目，40-63μm)手动进行。
分析方法
除非另外陈述，否则1H核磁共振(NMR)光谱学在接近室温在陈述的溶剂中使用500MHz Bruker Avance III光谱仪进行。在所有情况下，NMR数据与所提出的结构一致。特征化学位移(Characteristic chemical shift)(δ)以百万分率给出，使用的常规缩写指示主峰：例如，s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；dd，双二重峰；br，宽峰。低分辨率质谱(LRMS)在电喷雾电离(ESI)条件下使用Microsaic Systems 4000MiD系统获得。高分辨质谱(HRMS)使用Bruker 3.0 T Apex II质谱仪获得。薄层色谱法在Merck TLC硅胶60F254板上运行；通常5cm×10cm。检测使用254nm UV光源或高锰酸盐染色剂来实现。
化合物制备
在未描述起始材料的制备的情况下，这些为可商购的、文献中已知的、或者本领域技术人员使用标准程序容易地获得的。本文使用的所有可商购的化学物质均从FisherScientific、Matrix Scientific、Sigma-Aldrich或VWR International Ltd获得。在陈述了类似于较早的实施例或中间体制备化合物的情况下，本领域技术人员将理解，反应时间、试剂的当量数和温度可以针对每个特定反应进行修改，并且采用不同的后处理或纯化技术可能是必要的或合意的。在使用微波辐照进行反应的情况下，使用的微波为由 Biotage供应的Initiator 60。非微波反应在氮气惰性气氛下使用无水溶剂进行。供应的实际功率在反应过程期间改变以维持恒定温度。
缩写
CDCl3＝氘代氯仿
DCM＝二氯甲烷
Et2O＝乙醚
MgSO4＝硫酸镁
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
eq.＝当量
mg＝毫克
ml＝毫升
mmol＝毫摩尔
m/z＝质荷比(Mass to charge ratio)
MeOD＝氘代甲醇
MHz＝兆赫
mw＝微波
TLC＝薄层色谱法
NEt3＝三乙胺
THF＝四氢呋喃
MeOH＝甲醇
TFA＝三氟乙酸
r.t.＝室温
AcOH＝乙酸
EtOH＝乙醇
EtOAc＝乙酸乙酯
UV＝紫外线
DMSO＝二甲基亚砜
下文描述了本发明的选择的化合物的合成。
1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000421
将5-氨基-1H-吡唑-4-甲腈(3g，27.77mmol)和甲酰胺(15ml)添加至20 ml微波小瓶中，并且使用微波辐射将混合物在180℃加热2小时。将在冷却后形成的沉淀物过滤并且用水(50ml)洗涤并且允许干燥，给出作为奶油色固体(cream solid)的产物(3.5g，25.92mmol，93％)。1H NMR(500MHz， DMSO)δ13.34(s，1H)，8.13(s，1H)，8.07(s，1H)，7.69(br.m，2H)；13C NMR (126MHz，DMSO)δ158.19(CH)，156.03(C)，154.98(C)，132.79(CH)，99.83 (C)；MS(ES+ve)[M+H]+：136.0，157.9(+Na)，(ES-ve)[M-H]-：133.9。
3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000431
将1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.5g，11.11mmol)悬浮于15ml的DMF 中，并且添加N-碘代琥珀酰亚胺(1.2eq.，3.0g，13.34mmol)。将混合物在微波中在180℃加热1小时。将EtOH(80ml)添加至反应中，并且沉淀物开始形成，这通过声处理辅助。将沉淀物过滤并且用EtOH(×3，20ml)洗涤并且允许在40℃的烘箱中干燥过夜，以给出沙色固体(sand colouredsolid)(2.115g，8.105mmol，73.0％)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ13.80(s， 1H)，8.16(s，1H)，7.79-6.44(m，2H)；13C NMR(126MHz，DMSO)δ157.60 (C)，156.08(CH)，155.04(C)，102.50(C)，89.82(C)；MS(ES+ve)[M+H]+： 283.9(+Na)，(ES-ve)[M-H]-：259.9，287.8(+Na)。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000432
将氢化钠(1.5eq.，2.88mmol，在矿物油中的60％分散体，115.2mg)添加至3-碘-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(500mg，1.92mmol)在DMF(15ml)中的溶液中，并且允许该溶液搅拌30分钟，直至气体逸出已经消退。然后逐滴地添加溴代乙醛缩二乙醇(1.5eq.，2.88mmol，0.435ml)，并且将混合物在微波中在150℃加热40分钟。将EtOAc和水(50ml)添加至混合物中并且分离有机物。将水性层用EtOAc(50ml，×3)洗涤，并且合并有机物并且用水(×3，30ml)洗涤，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-5％)纯化，以给出浅橙色固体(461mg，1.22 mmol，63.7％)。1H NMR(500MHz，DMSO)δ8.21(s，1H)，7.90-6.30(m， 2H)，4.93(t，J＝5.7，1H)，4.33(d，J＝5.8，2H)，3.62(dq，J＝9.4，6.9，2H)，3.40 (dq，J＝9.6，7.0，2H)，0.98(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，DMSO)δ 157.86(C)，156.30(CH)，154.03(C)，103.18(CH)，99.50(C)，89.51(C)，61.39 (CH2)，48.76(CH2)，15.39(CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：377.8，400.0(+Na)， (ES-ve)[M-H]-：376.0。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(对甲苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000441
将对甲基苯硼酸(1.5eq.，614mg，4.52mmol)、碳酸钾(1.5eq.，624.7mg，4.52mmol)、随后的乙酸钯(5mol％，33.8mg)添加至1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(1.135g，3.01mmol)在二氧六环/水(10ml/1 ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将EtOAc 和水(50ml)添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-5％)纯化，以给出浅棕色固体(902mg，2.64mmol，87.8％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.42(s， 1H)，7.58(d，J＝8.0，2H)，7.34(d，J＝7.8，2H)，5.12(t，J＝5.8，1H)，4.58(d，J ＝5.8，2H)，3.78(dq，J＝9.4，7.0，2H)，3.52(dq，J＝9.4，7.0，2H)，2.44(s，3H)， 1.12(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ158.28(C)，156.43(C)， 155.55(CH)，145.25(C)，139.76(C)，131.90(CH)，128.93(CH)，100.49(CH)， 62.46(CH2)，49.53(CH2)，21.09(CH3)，15.78(CH3)；MS(ES+ve)[M+1]+： 341.19，(ES-ve)[M-1]-：340.0。
2-[4-氨基-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛:
Figure BDA0001553603060000442
将5ml的TFA添加至1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(400mg，1.17mmol)在5ml的水中的悬浮液中，并将混合物在微波中加热至100℃持续30分钟。将混合物转移至RBF中，用DCM洗涤并且在真空中浓缩。将产物用DCM和Et2O洗涤并且在真空中干燥，以给出浅棕色固体(假定定量收率)。由于产物的不同盐导致杂乱的光谱，因此未获得该化合物的NMR光谱。
化合物105&109.分别将N-二甲基-2-哌嗪-1-基-乙胺或N，N-二甲基哌啶-4-胺(1eq.，0.105mmol)和一滴AcOH添加至2-[4-氨基-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛(40mg，0.105mmol)在DCM(1ml)中的悬浮液中，并且允许混合物搅拌10分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(22.2mg， 0.105mmol)并且搅拌混合物直到完成(～1小时)。由于产物在水性层中的高溶解度，将反应混合物在真空中浓缩并且在没有任何进一步后处理的情况下进行纯化。
1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺 (103)：
Figure BDA0001553603060000451
通过柱色谱法(MeOH/DCM 0-10％-10％MeOH与3滴NH3水性溶液 /20ml)纯化，以给出淡橙色固体(20mg，0.057mmol，54.2％)。1H NMR(500 MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，7.60(d，J＝8.1，2H)，7.41(d，J＝7.8，2H)，4.57(t，J＝6.5，2H)，2.97(t，J＝6.5，2H)，2.53(m，8H)，2.47(s，3H)，2.37(s，3H).；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ158.02(C)，155.87(CH)，154.77(C)，144.58(C)， 139.25(C)，130.45(C)，130.14(CH)，128.50(CH)，98.59(C)，56.89(CH2)，54.91(CH2)，52.50(CH2)，45.59(CH3)，44.60(CH2)，21.47(CH3)；MS(ES+ve) [M+1]+：352.0，374.2(+Na)，(ES-ve)[M-1]-：350.2；HRMS(ES+ve)， C19H26N7[M+H]+；计算352.22442，实测352.224816。
1-[2-[4-(2-二甲基氨基乙基)哌嗪-1-基]乙基]-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(105)：
Figure BDA0001553603060000461
通过柱色谱法(MeOH/DCM 5-10％-10％MeOH与25滴NH3水性溶液 /100ml)纯化，以给出淡橙色固体(5mg，0.0312mmol，11.7％)。1H NMR(500 MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，7.59(d，J＝8.0，2H)，7.41(d，J＝8.0，2H)，4.56(t， J＝6.6，2H)，2.96(t，J＝6.6，2H)，2.89(t，J＝6.6，2H)，2.76–2.60(m，6H)， 2.60(s，6H)，2.51(m，4H)，2.46(s，3H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.50 (C)，155.39(CH)，154.14(C)，145.16(C)，139.21(C)，129.83(C)，129.60(CH)，128.10(CH)，97.76(C)，56.40(CH2)，54.64(CH2)，53.51(CH2)，52.56(CH2)， 52.24(CH2)，43.79(CH2)，43.36(CH3)，19.97(CH3)；MS(ES+ve)[M+1]+： 409.3，431.2(+Na)；HRMS(ES+ve)，C22H33N8[M+H]+：计算409.28227，实测409.282102。
1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶 -4-胺(109)：
Figure BDA0001553603060000471
通过柱色谱法(MeOH/DCM 10％-10％MeOH与20滴NH3水性溶液 /50ml)纯化，以给出浅棕色固体(13mg，0.034mmol，32.7％)。1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ8.35(s，1H)，7.56(d，J＝8.0，2H)，7.33(d，J＝7.8，2H)，5.68(s， 2H)，4.54(t，J＝7.0，2H)，3.08(d，J＝11.8，2H)，2.93(t，J＝7.0，2H)，2.43(s， 3H)，2.41(m，1H)，2.40(s，6H)，2.10(dd，J＝11.8，9.9，2H)，1.84(d，J＝12.3， 2H)，1.52(qd，J＝12.1，3.7，2H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ158.16(C)，156.04(CH)，154.87(C)，144.69(C)，139.38(C)，130.60(C)，130.32(CH)， 128.57(CH)，98.70(C)，62.72(CH)，56.96(CH2)，52.86(2x CH2)，45.13(CH2)， 41.01(2x CH3)，27.71(CH2)，21.61(CH3)；MS(ES+ve)[M+1]+：380.2，402.1 (+Na)；HRMS(ES+ve)，C21H30N7[M+H]+：计算380.25572，实测 380.255345。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(112)：
Figure BDA0001553603060000472
将N，N-二甲基-1-哌啶-4-基甲胺(1eq.，53.2mg，0.374mmol)和一滴 AcOH添加至2-[4-氨基-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛(100mg， 0.374mmol)在DCM(2ml)中的悬浮液中并且允许混合物搅拌10分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(79.3mg，0.374mmol)并且允许混合物搅拌18 小时。将混合物在真空中浓缩(reduced)并且不经后处理通过柱色谱法 MeOH/DCM(0-10％-10％与10滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅橙色固体(48mg，0.122mmol，32.6％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.30(s， 1H)，7.55(d，J＝8.1，2H)，7.32(d，J＝7.8，2H)，4.54(t，J＝6.8，2H)，3.04(d，J ＝11.6，2H)，2.95(t，J＝6.8，2H)，2.57(s，6H)，2.41(s，3H)，2.11(t，J＝10.9， 2H)，1.74(d，J＝12.6，2H)，1.63(s，2H)，1.26(m，3H)；13C NMR(126MHz， CDCl3)δ158.06(C)，155.40(CH)，154.56(C)，144.79(C)，139.23(C)，130.36 (C)，130.16(CH)，128.40(CH)，98.53(C)，64.32(CH2)，56.97(CH2)，53.15 (CH2)，44.52(CH2)，44.42(CH3)，32.62(CH)，30.14(CH2)，21.44(CH3)；MS (ES+ve)[M+1]+：394.3，416.2(+Na)；HRMS(ES+ve)，C22H32N7[M+H]+：计算394.27137，实测394.271595。
1-[2-[4-(2-二甲基氨基乙基)-1-哌啶基]乙基]-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(113)：
Figure BDA0001553603060000481
将二甲基-(2-哌啶-4-基-乙基)-胺(1eq.，58.4mg，0.374mmol)和一滴AcOH添加至2-[4-氨基-3-(对甲苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛(100mg， 0.374mmol)在DCM(2ml)中的悬浮液中并且允许混合物搅拌10分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(79.3mg，0.374mmol)并且允许混合物搅拌18 小时。将混合物在真空中浓缩并且不经后处理通过柱色谱法MeOH/DCM (0-10％-10％与0-10滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅黄色固体(69.8 mg，0.171mmol，45.8％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.25(s，1H)，7.59– 7.55(m，2H)，7.38(d，J＝7.8，2H)，4.58(t，J＝6.6，2H)，3.14(d，J＝11.8，2H)， 3.09–2.99(m，4H)，2.79(s，6H)，2.43(s，3H)，2.23(t，J＝11.0，2H)，1.74(d，J ＝12.9，2H)，1.65–1.57(m，2H)，1.44–1.36(m，1H)，1.27(dd，J＝21.1，11.8， 2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.50(C).155.45(CH)，154.14(C)， 145.30(C)，139.23(C)，129.79(C)，129.60(CH)，128.09(CH)，97.83(C)， 56.50(CH2)，55.70(CH2)，52.99(2x CH2)，43.45(CH2)，42.14(2x CH3)，32.84(CH)，30.88(2x CH2)，30.64(CH2)，19.97(CH3)；MS(ES+ve)[M+1]+：408.1； HRMS(ES+ve)，C23H34N7[M+H]+：计算408.28702，实测408.286812。
对于021-030的化合物中间体：将1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-硼酸频哪醇酯、5-异喹啉硼酸、3，4-二甲氧基苯基硼酸、3-羟基苯基硼酸或呋喃-3- 硼酸(1.5eq.，0.397mmol)、碳酸钾(1.5eq.，54.8mg，0.397mmol)、三苯基膦 (20mol％，20.8mg)和乙酸钯(5mol％，4.5mg)添加至1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.265mmol)在二氧六环/水(4.5 ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将EtOAc(50ml)和水(50ml)添加至混合物中，并且分离有机层，用盐水(50ml) 洗涤，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000491
通过柱色谱法MeOH/DCM(0-6％)纯化，以给出白色固体(93mg，0.253 mmol，95.6％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.53(s，1H)，8.62(d，J＝1.9， 1H)，8.41(s，1H)，8.24(d，J＝2.0，1H)，7.45(d，J＝3.4，1H)，6.62(d，J＝3.5， 1H)，6.29–5.86(br.s，2H)，5.14(t，J＝5.7，1H)，4.62(d，J＝5.7，2H)，3.79(dq， J＝9.4，7.0，2H)，3.55(dq，J＝9.4，7.0，2H)，1.14(t，J＝7.0，6H)；13C NMR (126MHz，CDCl3)δ156.75(C)，154.58(C)，153.42(CH)，148.87(C)，143.78 (C)，142.83(CH)，128.83(CH)，126.85(CH)，121.30(C)，120.46(C)，101.80 (CH)，99.93(CH)，98.47(C)，62.17(2x CH2)，49.33(CH2)，15.34(2x CH3)； MS(ES+ve)[M+H]+：368.2，390.2(+Na)，(ES–ve)[M-H]-：366.2；HRMS (ES+ve)，C18H22N7O2(M+H)+：计算368.18295，实测368.18090。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(6-喹啉基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000501
通过柱色谱法MeOH/DCM(0-5％)纯化，以给出淡橙色固体(86mg， 0.227mmol，85.8％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.39(s，1H)，8.59(d，J＝ 6.0，1H)，8.47(s，1H)，8.16(d，J＝8.2，1H)，7.93(dd，J＝7.1，1.2，1H)，7.84(d， J＝6.0，1H)，7.79(dd，J＝8.2，7.2，1H)，5.18(t，J＝5.7，1H)，4.68(d，J＝5.8， 2H)，3.83(dq，J＝9.4，7.0，2H)，3.58(dq，J＝9.4，7.0，2H)，1.21–1.13(m， 6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ157.36(C)，155.87(CH)，154.77(C)，152.99(CH)，144.34(CH)，141.21(C)，134.32(C)，132.29(CH)，129.43(CH)， 129.32(C)，128.98(C)，127.01(CH)，118.25(CH)，99.92(C)，99.80(CH)， 61.94(2x CH2)，49.18(CH2)，15.23(2x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：379.2， 401.2(+Na)，(ES–ve)[M-H]-：377.2；HRMS(ES+ve)，C20H23N6O2(M+H)+：计算379.18770，实测379.18660。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(3，4-二甲氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000511
通过柱色谱法MeOH/DCM(0-2％)纯化，以给出淡黄色固体(97mg， 0.251mmol，94.5％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.38(s，1H)，7.23–7.19 (m，2H)，7.02(d，J＝8.7，1H)，5.94(s，2H)，5.12(t，J＝5.7，1H)，4.57(d，J＝5.8， 2H)，3.97(d，J＝9.8，6H)，3.78(dq，J＝9.4，7.0，2H)，3.53(dq，J＝9.4，7.0，2H)， 1.13(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ157.59(C)，155.28(CH)， 154.78(C)，149.94(C)，149.69(C)，144.70(C)，125.68(C)，120.81(CH)， 111.61(CH)，111.56(CH)，99.82(CH)，98.32(C)，61.81(2x CH2)，56.06(2xCH3)，48.88(CH2)，15.19(2x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：388.2，(ES–ve) [M-H]-：368.2；HRMS(ES+ve)，C19H26N5O4(M+H)+：计算388.19793，实测388.19620。
3-[4-氨基-1-(2，2-二乙氧基乙基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]苯酚：
Figure BDA0001553603060000512
通过柱色谱法MeOH/DCM(0-3％)纯化，以给出奶油色固体(80mg， 0.233mmol，88.0％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.45(s，1H)，7.38(t，J＝ 7.9，1H)，7.20(d，J＝7.5，1H)，7.12(s，1H)，6.95(d，J＝8.1，1H)，5.89(s，2H)， 5.10(t，J＝5.7，1H)，4.57(d，J＝5.7，2H)，3.76(tt，J＝14.1，7.0，2H)，3.52(tt，J ＝14.1，7.0，2H)，1.11(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ157.10 (C)，155.85(CH)，153.86(C)，152.23(C)，145.53(C)，133.41(C)，131.04(CH)， 120.31(CH)，117.10(CH)，115.15(CH)，99.75(CH)，97.78(C)，62.16(2xCH2)，49.22(CH2)，15.17(2x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：344.2，366.2(+Na)， (ES–ve)[M-H]-：342.2；HRMS(ES+ve)，C17H22N5O3(M+H)+：计算 344.17172，实测344.17000。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(3-呋喃基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000521
通过柱色谱法MeOH/DCM(0-2％)纯化，以给出奶油色固体(66.8mg， 0.211mmol，79.5％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.38(s，1H)，7.83(dd，J＝ 1.4，0.9，1H)，7.61(t，J＝1.7，1H)，6.77(dd，J＝1.8，0.8，1H)，5.82(s，2H)，5.09 (t，J＝5.8，1H)，4.55(d，J＝5.8，2H)，3.76(dq，J＝9.4，7.0，2H)，3.52(dq，J＝ 9.4，7.0，2H)，1.11(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ156.93(C)， 154.38(C)，154.12(CH)，144.66(CH)，141.11(CH)，136.98(C)，118.52(C)， 110.29(CH)，99.73(CH)，98.61(C)，61.92(2x CH2)，49.04(CH2)，15.17(2x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：318.2，340.2(+Na)，657.2(2M+Na)，(ES–ve) [M-H]-：317.2；HRMS(ES+ve)，C15H20N5O3(M+H)+：计算318.15607，实测318.15400。
1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(2-苯基乙炔基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000522
将苯基乙炔(1.5eq.，0.397mmol，40.5mg，37.7μl)、三乙胺(1.5eq.， 0.397mmol，29.1μl)、乙酸钯(5mol％，4.5mg)、三苯基膦(20mol％，20.8mg) 和碘化亚铜(5mol％，2.5mg)添加至1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(100mg，0.265mmol)在THF(5ml)中的溶液中。将混合物在70℃常规加热2小时。将EtOAc和水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-2％)纯化，以给出浅黄色固体(52mg，0.148mmol，55.9％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.90–8.35(m，1H)，7.59(dd，J＝7.7，1.7，2H)， 7.45–7.36(m，3H)，6.20(s，2H)，5.09(t，J＝5.6，1H)，4.53(d，J＝5.7，2H)， 3.74(dq，J＝9.3，7.0，2H)，3.50(dq，J＝14.4，7.2，2H)，1.10(t，J＝7.0，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ153.88(CH)，131.82(2x CH)，129.58(CH)， 128.67(2x CH)，121.45(C)，99.81(CH)，94.33(C)，80.63(C)，62.07(2xCH2)， 49.41(CH2)，15.16(2x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：352.2，725.2(2M+Na)， (ES–ve)[M-H]-：350.2；HRMS(ES+ve)，C19H22N5O2(M+H)+：计算 352.17680，实测352.17680。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(221)：
Figure BDA0001553603060000531
将60mg、0.163mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是5ml的TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以留下浅棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.163 mmol的2-[4-氨基-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基] 乙醛溶解于2ml的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.245mmol，34.8mg)，随后是一滴乙酸。允许混合物搅拌10分钟，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.245mmol，51.9mg)并且允许混合物搅拌 2小时。将混合物在真空中浓缩，并且将产物通过柱色谱法 MeOH/DCM(5％-10％然后10％与5-20滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅橙色固体(15.3mg，0.0365mmol，14.9％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ 8.52(s，1H)，8.29(d，J＝2.0，1H)，8.28(s，1H)，7.52(d，J＝3.5，1H)，6.62(d，J ＝3.5，1H)，4.64(t，J＝6.4，2H)，3.25(d，J＝11.7，2H)，3.13(t，J＝6.3，2H)， 2.96(d，J＝7.2，2H)，2.84(s，6H)，2.37(t，J＝11.4，2H)，1.88(m，1H)，1.80(d， J＝13.1，2H)，1.36–1.31(m，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ161.79(C)， 158.65(C)，155.54(CH)，154.33(C)，148.16(C)，143.72(C)，141.84(CH)， 128.67(CH)，127.12(CH)，120.73(C)，100.63(CH)，98.19(C)，62.67(CH2)，56.31(CH2)，52.22(2x CH2)，43.41(CH2)，42.72(2x CH3)，30.93(CH)，28.39 (2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：420.2；HRMS(ES+ve)，C22H29N9[M+H]+：计算420.25404，实测420.254249。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-(6-喹啉基)吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(223)：
Figure BDA0001553603060000541
将60mg、0.159mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(6-喹啉基)吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是5ml的 TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以给出棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.159mmol的2-[4- 氨基-3-(6-喹啉基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛溶解于2ml的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.238mmol，33.9mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.238 mmol，50.4mg)并且允许混合物搅拌17小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后20滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出荧光黄色固体，48.9mg，0.122mmol，70.6％。1H NMR(500MHz， MeOD)δ9.37(s，1H)，8.47(d，J＝6.0，1H)，8.31(m，2H)，7.99(dd，J＝7.1，1.2，1H)，7.90–7.84(m，2H)，4.65(t，J＝6.7，2H)，3.09(d，J＝11.7，2H)，2.99(t，J ＝6.7，2H)，2.28(s，6H)，2.27(m，2H)，2.18–2.11(m，2H)，1.75(d，J＝12.4， 2H)，1.57(ddd，J＝11.3，7.4，3.9，1H)，1.24–1.12(m，2H)；13C NMR(126 MHz，MeOD)δ158.26(C)，155.67(CH)，154.06(C)，152.47(CH)，142.47 (CH)，141.58(C)，134.67(C)，132.89(CH)，129.35(CH)，129.21(c)，129.11 (C)，127.33(CH)，118.82(CH)，99.55(C)，65.35(CH2)，56.79(CH2)，53.22(2xCH2)，44.34(2x CH3)，44.05(CH2)，33.06(CH)，30.04(2x CH2)；MS(ES+ve) [M+H]+：431.2；HRMS(ES+ve)，C24H30N9[M+H]+：计算431.25879，实测 431.258695。
3-(3，4-二甲氧基苯基)-1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(224)：
Figure BDA0001553603060000551
将70mg、0.181mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(3，4-二甲氧基苯基) 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是 5ml的TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以留下浅棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.181mmol 的2-[4-氨基-3-(3，4-二甲氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛溶解于4ml 的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.271mmol，38.5mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.271mmol，57.4mg)并且允许混合物搅拌17小时。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后10滴 NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅黄色固体(14.5mg，0.033mmol， 20.8％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.26(s，1H)，7.27(s，1H)，7.25(d，J＝ 8.2，1H)，7.14(d，J＝8.2，1H)，4.63(t，J＝6.3，2H)，3.91(s，6H)，3.18(s，2H)， 2.98(d，J＝7.2，2H)，2.85(s，6H)，2.45(m，2H)，1.92(m，1H)，1.83(d，J＝13.2， 2H)，1.35(dd，J＝22.2，11.5，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.58(C)， 155.51(CH)，154.22(C)，150.22(C)，149.67(C)，145.44(C)，125.19(C)， 120.91(CH)，111.94(CH)，111.73(CH)，97.82(C)，62.49(CH2)，56.18(CH2)， 55.13(2x CH3)，52.16(2x CH2)，43.08(CH2)，42.69(2x CH3)，30.70(CH)， 28.13(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：440.2；HRMS(ES+ve)，C23H33N7O2 [M+H]+：计算440.26902，实测440.268379。
3-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯酚(225)：
Figure BDA0001553603060000561
将60mg，0.175mmol的3-[4-氨基-1-(2，2-二乙氧基乙基)吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]苯酚添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是5ml的 TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以留下浅棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.175mmol的2-[4- 氨基-3-(3-羟基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛溶解于4ml的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.262mmol，37.2mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.， 0.262mmol，55.5mg)并且允许混合物搅拌20小时。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后0-20滴NH3水性溶液/100 ml)纯化，以给出深橙色固体(5.5mg，0.0139mmol，8.0％)。1HNMR(500 MHz，MeOD)δ8.26(s，1H)，7.39(t，J＝7.9，1H)，7.17–7.09(m，2H)，6.95 (dd，J＝7.8，2.1，1H)，4.57(t，J＝6.7，2H)，3.08(d，J＝11.7，2H)，2.96(t，J＝ 6.7，2H)，2.47(m，8H)，2.16(t，J＝11.0，2H)，1.74(d，J＝12.9，2H)，1.64(m， 1H)，1.21(dd，J＝21.1，12.0，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.44(C)， 158.06(C)，155.42(CH)，154.06(C)，145.17(C)，133.97(C)，130.16(CH)， 119.09(CH)，115.96(CH)，114.92(CH)，97.73(C)，64.57(CH2)，56.66(CH2)， 52.78(2x CH2)，43.83(2x CH3)，43.77(CH2)，32.46(CH)，29.58(2x CH2).MS(ES+ve)[M+H]+：396.4；HRMS(ES+ve)，C21H29N7O[M+H]+：计算 396.24281，实测396.242971。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-(3-呋喃基)吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(226)：
Figure BDA0001553603060000571
将52mg、0.164mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(3-呋喃基)吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是5ml的 TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以留下浅棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.164mmol的2-[4- 氨基-3-(3-呋喃基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛溶解于4ml的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.246mmol，35.0mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.246 mmol，52.1mg)并且允许混合物搅拌经过周末。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后10-20滴NH3水性溶液 /100ml)纯化，以得给出深金棕色固体(45.7mg，0.124mmol，75.5％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.23(s，1H)，7.96(dd，J＝1.4，0.9，1H)，7.71(t，J＝ 1.7，1H)，6.82(dd，J＝1.8，0.8，1H)，4.53(t，J＝6.7，2H)，3.08(d，J＝11.7，2H)，2.94(t，J＝6.7，2H)，2.62(d，J＝6.6，2H)，2.57(s，6H)，2.16(dd，J＝11.8，10.0， 2H)，1.72(d，J＝12.9，2H)，1.68(m，1H)，1.26–1.18(m，2H)；13C NMR(126 MHz，MeOD)δ158.57(C)，155.45(CH)，153.98(C)，144.34(CH)，141.47 (CH)，137.22(C)，118.30(C)，109.73(CH)，98.17(C)，63.97(CH2)，56.59 (CH2)，52.62(2x CH2)，43.73(CH2)，43.43(2x CH3)，32.02(CH)，29.27(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：370.2；HRMS(ES+ve)，C19H27N7O[M+H]+：计算370.22716，实测370.227049。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-(2-苯基乙炔基)吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(230)：
Figure BDA0001553603060000581
将50mg、0.142mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(2-苯基乙炔基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至20ml微波小瓶中。添加5ml的水，随后是5ml 的TFA，并且将混合物在100℃常规加热1小时。将混合物在真空中浓缩，以留下深棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.142mmol的2-[4- 氨基-3-(2-苯基乙炔基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛悬浮于4ml的DCM 中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.213mmol，30.3mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.， 0.213mmol，45.1mg)并且允许混合物搅拌1小时。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后5-10滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出深橙色固体(23.4mg，0.058mmol，40.7％)。1H NMR (500MHz，MeOD)δ8.23(s，1H)，7.69–7.61(m，2H)，7.46–7.40(m，3H)， 4.51(t，J＝6.7，2H)，3.02(d，J＝11.7，2H)，2.90(t，J＝6.7，2H)，2.29(s，6H)，2.28–2.25(m，2H)，2.10(td，J＝11.8，2.3，2H)，1.71(d，J＝12.8，2H)，1.54 (dtd，J＝14.6，7.5，3.7，1H)，1.15(qd，J＝12.5，3.7，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ158.22(C)，156.07(CH)，153.13(C)，131.48(CH x2)，129.25(CH)， 128.38(CH x2)，126.72(C)，121.47(C)，100.98(C)，93.76(C)，79.88(C)， 65.21(CH2)，56.68(CH2)，52.96(CH2x2)，44.27(CH3x2)，44.22(CH2)，32.94 (CH)，29.92(CH2x2)；MS(ES+ve)[M+H]+：404.3；HRMS(ES+ve)， C23H29N7[M+H]+：计算404.24790，实测404.247888。
1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4- 胺(232)：
Figure BDA0001553603060000591
将75mg、0.199mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶 -4-胺添加至10ml微波管中。添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物加热至100℃持续1小时。将混合物在真空中浓缩，以给出白色固体，其不经进一步纯化即可使用。将0.199mmol的2-[4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-1-基]乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加N，N-二甲基-1-(4-哌啶基)甲胺(1.5eq.，0.299mmol，42.2mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10 分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.299mmol，63.4mg)并且允许混合物搅拌17小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(0-10％，然后5-15滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅黄色固体(63.6mg，0.148mmol，74.5％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.20(s， 1H)，4.49(t，J＝6.7，2H)，3.01(d，J＝11.7，2H)，2.87(t，J＝6.7，2H)，2.28(s， 6H)，2.27(d，2H)，2.10(td，J＝11.8，2.3，2H)，1.72(d，J＝13.0，2H)，1.55(ddt， J＝15.0，7.6，3.8，1H)，1.15(qd，J＝12.3，3.7，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ158.05(C)，155.63(CH)，153.58(C)，103.66(C)，86.95(C)，65.27 (CH2)，56.73(CH2)，52.96(2x CH2)，44.30(2xCH3)，44.15(CH2)，32.97(CH)， 30.09(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：430.2。
1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基) 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(402)：
Figure BDA0001553603060000601
将40mg、0.109mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至10ml微波管中。然后添加2.5ml 的水和2.5ml的TFA，并且将混合物在微波中加热至100℃持续30分钟。将溶剂在真空中去除，以给出深棕色油状物，其不经进一步纯化即可使用。将0.109mmol的2-[4-氨基-3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛溶解于3ml的THF中。添加N，N-二甲基哌啶-4-胺(1.5eq.，0.1635mmol，20.9mg)并且允许混合物搅拌5分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.1635mmol，34.7mg)并且允许混合物搅拌1小时。将反应混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后5-40滴 NH3水性溶液/50ml)纯化，以给出浅黄色固体(26.9mg，0.0664mmol， 60.9％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.50(d，J＝1.9，1H)，8.28(d，J＝2.0， 1H)，8.27(s，1H)，7.51(d，J＝3.5，1H)，6.62(d，J＝3.5，1H)，4.56(t，J＝6.4， 2H)，3.19(d，J＝12.1，2H)，3.06(tt，J＝12.0，3.9，1H)，2.97(t，J＝6.4，2H)， 2.77(s，6H)，2.18(t，J＝11.1，2H)，2.00(d，J＝12.4，2H)，1.58(qd，J＝12.3， 3.9，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.64(C)，155.49(CH)，154.32(C)， 148.16(C)，143.50(C)，141.84(CH)，128.66(CH)，127.12(CH)，120.78(C)， 120.73(C)，100.63(CH)，98.08(C)，63.37(CH)，55.82(CH2)，51.54(2xCH2)， 44.11(CH2)，39.16(2xCH3)，26.18(2xCH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：406.6； HRMS(ES+ve)，C21H28N9(M+H)+：计算406.24622，实测406.24490。
1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000611
将150mg、0.398mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至10ml微波管中。添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物加热至100℃持续1小时。将混合物在真空中浓缩，以给出白色固体，其不经进一步纯化即可使用。将0.398mmol的2-[4-氨基-3-碘-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加N，N-二甲基哌啶-4-胺 (1.5eq.，0.598mmol，76.6mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.598mmol，126.8mg)并且允许混合物搅拌17小时过夜。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法 MeOH/DCM(0-10％，然后5-20滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅橙色/棕色固体(163.8mg，0.405mmol，99.1％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ 8.22(s，1H)，4.49(t，J＝6.4，2H)，3.32(s，3H)，3.15(d，J＝12.1，2H)，2.96(ddd， J＝16.0，8.0，4.0，1H)，2.91(t，J＝6.4，2H)，2.72(s，6H)，2.15(td，J＝12.0，2.0， 2H)，2.04–1.96(m，2H)，1.54(qd，J＝12.2，3.9，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ158.07(C)，155.67(CH)，153.70(C)，103.59(C)，86.97(C)，63.18 (CH)，55.86(CH2)，51.38(2x CH2)，44.37(CH2)，39.31(2x CH3)，26.42(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：416.2。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d] 嘧啶-3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(503)：
Figure BDA0001553603060000621
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，46.7mg，0.175 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，24.2mg，0.175mmol)和三苯基膦(20mol％，9.2mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基甲基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1165mmol)在二氧六环/水(4.5 ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热45分钟。将 EtOAc(50ml)和水(50ml)添加至混合物中并且分离有机层。将水性层用 EtOAc(20ml，×3)洗涤，并且合并有机物，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％，然后5-20滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出深棕色固体(36.5mg，0.0696mmol，59.7％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，8.08(d，J＝8.2，1H)，7.30(d，J＝1.8， 1H)，7.26(dd，J＝8.2，1.8，1H)，4.58(t，J＝6.8，2H)，3.98(s，3H)，3.08(d，J＝ 11.7，2H)，2.96(t，J＝6.8，2H)，2.34(s，6H)，2.32(d，J＝7.2，2H)，2.16(dd，J＝11.8，9.6，2H)，1.76(d，J＝12.3，2H)，1.63–1.58(m，1H)，1.57(s，9H)，1.24– 1.16(m，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.52(C)，155.40(CH)，154.07 (C)，153.46(C)，149.24(C)，145.04(C)，128.77(C)，127.39(C)，120.43(CH)， 119.56(CH)，110.29(CH)，97.78(C)，80.18(C)，65.19(CH2)，56.76(CH2)， 55.08(CH3)，52.96(2x CH2)，44.24(2x CH3)，43.79(CH2)，32.92(CH)，29.89 (2x CH2)，27.22(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：525.4，(ES–ve)[M-H]-： 523.3；HRMS(ES+ve)，C27H41N8O3(M+H)+：计算525.32961，实测 525.32890。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(506)：
Figure BDA0001553603060000631
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，48.3mg，0.181 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml) 中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将EtOAc(50ml) 和水(50ml)添加至混合物中并且分离有机层。将水性层用EtOAc(20ml，×2) 洗涤，并且合并有机物，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％，然后5-20滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(23.1mg，0.0453mmol，37.6％)。1H NMR(500MHz， MeOD)δ8.27(s，1H)，8.08(d，J＝8.2，1H)，7.30(d，J＝1.8，1H)，7.26(dd，J＝ 8.2，1.9，1H)，4.56(t，J＝6.7，2H)，3.98(s，3H)，3.14(d，J＝11.9，2H)，2.94(t，J ＝6.7，2H)，2.39(m，7H)，2.14(dd，J＝12.0，10.0，2H)，1.90(d，J＝12.5，2H)， 1.57(s，9H)，1.49(qd，J＝12.1，3.6，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ 158.53(C)，155.40(CH)，154.12(C)，153.46(C)，149.24(C)，145.02(C)， 128.78(C)，127.38(C)，120.43(CH)，119.56(CH)，110.28(CH)，97.73(C)， 80.18(C)，62.29(CH)，56.22(CH2)，55.07(CH3)，52.20(2x CH2)，44.00(CH2)， 40.06(2x CH3)，27.24(2x CH2)，27.21(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：511.3； HRMS(ES+ve)，C26H38N8O3[M+H]+：计算511.31396，实测511.3151。
3-碘-1-[2-(4-吡咯烷-1-基-1-哌啶基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000641
将300mg、0.8646mmol的1-(1，3-二氧戊环-2-基甲基)-3-碘-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺添加至10ml微波管中。添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物加热至100℃持续3小时。将产物在真空中浓缩，并且不进一步纯化即可使用。将0.432mmol的2-[4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加4-(1-吡咯烷基)哌啶(1.5eq.，0.648 mmol，99.9mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.648mmol，137.3mg)并且允许混合物搅拌17小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％)纯化，以给出绿色/棕色固体(183.1mg，0.415mmol，96.1％)。1H NMR(500MHz， MeOD)δ8.22(s，1H)，4.50(t，J＝6.3，2H)，3.34(m，4H)，3.12(d，J＝12.0，2H)， 3.06(dd，J＝13.9，9.7，1H)，2.90(t，J＝6.3，2H)，2.21–2.00(m，8H)，1.52(td， J＝12.1，8.1，2H)；MS(ES+ve)(M+H)+：442.2。
3-碘-1-[2-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000642
将300mg、0.8646mmol的1-(1，3-二氧戊环-2-基甲基)-3-碘-吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺添加至10ml微波管中。添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物加热至100℃持续3小时。将产物在真空中浓缩，并且不进一步纯化即可使用。将0.432mmol的2-[4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基]乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加1，4-联哌啶(1.5eq.，0.648mmol，108.9 mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.648mmol，137.3mg)并且允许混合物搅拌17小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％)纯化，以给出深绿色/ 棕色稠油状物(191.6mg，0.421mmol，97.5％)。1H NMR(601MHz，DMSO)δ 8.21(s，1H)，4.38(t，J＝6.6，2H)，2.85(宽峰m，9H)，1.98(m，2H)，1.54(宽峰 m，10H)；MS(ES+ve)(M+H)+：456.2。
N-[4-[4-氨基-1-[2-(4-吡咯烷-1-基-1-哌啶基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(518)：
Figure BDA0001553603060000651
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，45.4mg，0.170 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，23.5mg，0.170mmol)和三苯基膦(20mol％，8.9mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至3-碘-1-[2-(4-吡咯烷-1-基-1-哌啶基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.113mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将EtOAc(50ml)和水(50ml)添加至混合物中并且分离有机层。将水性层用EtOAc(20ml，×2) 洗涤，并且合并有机物并且用盐水洗涤，然后经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％，然后5-25滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅橙色固体(16.69mg，31.12μmol，27.5％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，8.08(d，J＝8.2，1H)，7.30(d，J＝1.8，1H)，7.25(dd，J＝8.2，1.8，1H)，4.56(t，J＝6.6，2H)，3.98(s，3H)，3.12(d， J＝12.0，2H)，2.94(m，6H)，2.53(m，1H)，2.15(t，J＝11.1，2H)，2.01(d，J＝12.2，2H)，1.93(dd，J＝8.3，5.0，4H)，1.57(s，9H)，1.55–1.48(m，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.52(C)，155.40(CH)，154.15(C)，153.45(C)， 149.24(C)，145.00(C)，128.80(C)，127.36(C)，120.43(CH)，119.55(CH)， 110.27(CH)，97.69(C)，80.19(C)，62.00(CH)，56.16(CH2)，55.08(CH3)， 51.62(2x CH2)，51.22(2x CH2)，44.01(CH2)，29.65(2x CH2)，27.22(3x CH3)， 22.49(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：537.4，(ES-ve)[M-H]-：535.3；HRMS(ES+ve)，C28H40N8O3[M+H]+：计算537.32961，实测537.3281。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(519)：
Figure BDA0001553603060000661
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，44.0mg，0.165 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，22.8mg，0.165mmol)和三苯基膦(20mol％，5.8mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至3-碘-1-[2-[4-(1-哌啶基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.110mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将EtOAc(50ml)和水 (50ml)添加至混合物中并且分离有机层。将水性层用EtOAc(20ml，×2)洗涤，并且合并有机物，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％，然后5-15滴NH3水性溶液/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(12.3mg，22.35μmol，20.3％)。1H NMR(500MHz， MeOD)δ8.27(s，1H)，8.08(d，J＝8.2，1H)，7.30(d，J＝1.7，1H)，7.26(dd，J＝ 8.2，1.8，1H)，4.55(t，J＝6.6，2H)，3.96(s，3H)，3.15(d，J＝11.8，2H)，2.93(t，J ＝6.6，2H)，2.74(br.s，4H)，2.51(br.s，1H)，2.13(t，J＝11.1，2H)，1.91(d，J＝ 12.0，2H)，1.72–1.62(m，4H)，1.55(m，13H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ 158.52(C)，155.40(CH)，154.13(C)，153.45(C)，149.24(C)，145.02(C)， 128.79(C)，127.37(C)，120.43(CH)，119.56(CH)，110.28(CH)，97.73(C)， 80.19(C)，62.69(CH)，56.21(CH2)，55.08(CH3)，52.43(2x CH2)，49.83(2x CH2)，44.00(CH2)，27.22(3x CH3)，26.78(2x CH2)，24.68(2x CH2)，23.34 (CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：551.2；HRMS(ES+ve)，C29H42N8O3[M+H]+：计算551.34526，实测551.3469。
N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸苯酯：
Figure BDA0001553603060000671
将三乙胺(1.2eq.，0.722mmol，73.1mg，100.76μl)、随后的氯甲酸苯酯 (1.2eq.，0.722mmol，112.6mg，90.25μl)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(2ml)中的溶液中并且允许混合物搅拌 20小时。将水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法(100％DCM)纯化，以给出透明白色固体(190.8mg，0.517mmol，85.9％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.16(d，J＝7.6，1H)，7.74(s，1H)，7.49(dd，J＝8.0，1.1，1H)，7.46–7.40(m，2H)，7.33(d， J＝1.0，1H)，7.29–7.20(m，3H)，3.99(s，3H)，1.38(s，12H)；13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ151.36(C)，150.61(C)，146.98(C)，129.97(C)，129.41(2x CH)，128.61(CH)，125.68(CH)，125.05(C)，121.74(2x CH)，117.30(CH)， 115.41(CH)，83.80(2x C)，55.96(CH3)，24.92(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：370.5，392.5(+Na)。
N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3，3- 二甲基-丁酰胺：
Figure BDA0001553603060000681
将三乙胺(1.2eq.，0.722mmol，73.1mg，100.76μl)、随后的叔丁基缩醛氯化物(1.2eq.，0.722mmol，96.8mg，99.9μl)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(2ml)中的溶液中并且允许混合物搅拌20小时。将水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-3％)纯化，以给出棕色固体(195.7mg，0.564mmol，93.6％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.44(d，J ＝8.0，1H)，7.83(s，1H)，7.47(dd，J＝8.0，1.0，1H)，7.32–7.29(m，1H)，3.95(s， 3H)，2.31–2.27(m，2H)，1.36(s，12H)，1.13(s，9H)；13C NMR(126MHz， CDCl3)δ170.06(C)，169.99(C)，146.89(C)，130.52(C)，128.54(CH)，118.61 (CH)，115.22(CH)，83.75(2x C)，55.86(CH3)，52.08(CH2)，31.22(C)，29.81 (3x CH3)，24.86(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：348.6，370.6(+Na)。
N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3-苯基-丙酰胺：
Figure BDA0001553603060000682
将三乙胺(1.2eq.，0.722mmol，73.1mg，100.76μl)、随后的氢化肉桂酰氯(1.2eq.，0.722mmol，121.3mg，106.9μl)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(2ml)中的溶液中并且允许混合物搅拌 23小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-2％)纯化，以给出棕色固体(240.0mg，0.629mmol，100％)。1H NMR(500MHz， CDCl3)δ8.44(d，J＝8.0，1H)，7.83(s，1H)，7.47(d，J＝8.0，1H)，7.35–7.30 (m，2H)，7.28–7.21(m，4H)，3.90(s，3H)，3.14–3.04(m，2H)，2.79–2.72(m， 2H)，1.37(s，12H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ170.25(C)，170.17(C)， 146.82(C)，140.70(C)，130.40(C)，128.56(CH)，128.52(CH)，128.40(CH)， 126.34(CH)，118.68(CH)，115.21(CH)，83.78(2x C)，55.84(CH3)，39.72 (CH2)，31.42(CH2)，24.87(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：382.7，390.6 (+Na)。
N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧戊环-2-基)苯基]-2-苯基-乙酰胺：
Figure BDA0001553603060000691
将三乙胺(1.2eq.，0.722mmol，73.1mg，100.76μl)、随后的苯基乙酰氯 (1.2eq.，0.722mmol，111.2mg，95.1μl)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(2ml)中的溶液中并且允许混合物搅拌 18小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-1.5％) 纯化，以给出奶油色固体(200.9mg，0.547mmol，90.9％)。1HNMR(500MHz， CDCl3)δ8.40(d，J＝8.0，1H)，7.95(s，1H)，7.43(ddd，J＝11.3，6.6，1.6，3H)，7.39–7.33(m，3H)，7.22(d，J＝1.0，1H)，3.78(s，5H)，1.35(s，12H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ168.92(C)，168.84(C)，147.04(C)，134.50(C)， 130.31(C)，129.61(2x CH)，129.05(2xCH)，128.51(CH)，127.47(CH)， 118.43(CH)，115.31(CH)，83.76(C)，55.88(CH3)，45.24(CH2)，24.86(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：368.7，390.6(+Na)。
N-苄基-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺：
Figure BDA0001553603060000701
将三乙胺(1.2eq.，0.722mmol，73.1mg，100.76μl)、随后的氯甲酸苄酯 (1.2eq.，0.722mmol，123.2mg，103.07μl)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(2ml)中的溶液中并且允许混合物搅拌 18小时。将产物在真空中浓缩并且通过柱色谱法(100％DCM)纯化，以给出浅棕色稠油状物(65.9mg，0.172mmol，28.6％)。仅在表征之后，才发现烷基化产物(示出的)已经代替地被产生。1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.43– 7.26(m，8H)，6.68(d，J＝7.6，1H)，4.41(s，2H)，3.91(s，3H)，1.35(s，12H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.39(C)，146.09(C)，141.18(C)，139.78(C)， 128.82(CH)，128.08(CH)，126.76(CH)，126.52(CH)，114.34(CH)，108.93 (CH)，83.13(CH2)，54.55(CH3)，46.58(C)，23.73(4x CH3)；MS(ES+ve) [M+H]+：340.6。
1-叔丁基-3-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 苯基]脲：
Figure BDA0001553603060000702
将异氰酸叔丁酯(20eq.，12.04mmol，1.19g)添加至4-氨基-3-甲氧基苯硼酸频哪醇酯(150mg，0.602mmol)在DCM(3ml)中的溶液中并且混合物被留下搅拌持续72小时。将DCM和水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-2％) 纯化，以给出深棕色固体(40.9mg，0.117mmol，19.5％)。1H NMR(500MHz， CDCl3)δ8.09(d，J＝8.0，1H)，7.44(dd，J＝8.0，1.2，1H)，7.27(d，J＝1.0，1H)，6.88(s，1H)，3.92(s，3H)，1.42(s，9H)，1.37(d，J＝3.9，12H)；13C NMR(126 MHz，CDCl3)δ153.97(C)，146.81(C)，131.78(C)，128.70(CH)，117.77(CH)， 115.36(CH)，83.65(CH)，55.74(C)，50.97(CH3)，29.36(C)，29.09(3x CH3)， 24.87(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：349.7，371.6(+Na)。
2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸叔丁酯：
Figure BDA0001553603060000711
将4-(羧甲基)苯基硼酸频哪醇酯(150mg，0.572mmol)溶解于5ml的干燥甲苯中。添加亚硫酰氯(1.2eq.，0.686mmol，81.6mg，49.8ul)，随后是一滴DMF，并且将反应加热至回流(120℃)持续2小时。将反应冷却至r.t.，然后添加叔丁醇(5eq.，2.86mmol，211.8mg，0.273ml)和三乙胺(2.5eq.， 1.43mmol，199.3ul)并且允许混合物搅拌18小时。将水和DCM添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将粗制产物通过柱色谱法(100％DCM)纯化，以给出浅棕色油状物(60mg，0.189mmol， 33.0％)。MS(ES+ve)(M+H)+：340.8(+Na)。
[3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-苯基]硼酸：
Figure BDA0001553603060000712
将(3-氨基-4-甲氧基苯基)硼酸(150mg，0.898mmol)悬浮于DCM(5ml) 中。添加二碳酸二叔丁酯(1.5eq.，1.347mmol，294.0mg)，随后是一小刮刀的DMAP并且允许反应物搅拌18小时。将水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法 MeOH/DCM(0-4％)纯化，以给出深棕色固体(189.9mg，0.711mmol，79.2％)。1HNMR(500MHz，MeOD)δ8.12(s，1H)，7.34(dd，J＝8.2，1.5，1H)，6.98(d， J＝8.2，1H)，3.88(s，J＝4.9，3H)，1.53(s，9H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ 153.77(C)，150.52(C)，129.82(CH)，129.49(CH)，126.76(C)，125.18(C)， 109.48(CH)，79.78(C)，54.74(CH3)，27.26(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+： 268.5。
2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸叔丁酯：
Figure BDA0001553603060000721
将2-(4-溴-2-甲氧基苯基)乙酸(2g，8.198mmol)溶解于20ml的干燥 THF中。添加亚硫酰氯(1.2eq.，9.837mmol，1.17g，0.714ml)，随后是一滴 DMF，并且将反应加热至回流(80℃)持续2小时。将反应冷却至r.t.，然后添加叔丁醇(5eq.，40.99mmol，3.04g，3.92ml)和三乙胺(2.5eq.，20.49mmol， 2.86ml)并且混合物被留下搅拌20小时。将水和EtOAc添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法EtOAC/己烷(0-4％)纯化，以给出浅橙色液体(694.8mg，2.316mmol，28.2％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ7.10(s，1H)，7.07–7.02(m，2H)，3.81s，3H)， 3.47(s，2H)，1.42(s，9H)；13CNMR(126MHz，MeOD)δ171.39(C)，158.43 (C)，131.77(CH)，122.99(C)，122.98(CH)，121.02(C)，113.67(CH)，80.51(C)， 54.84(CH3)，36.42(CH2)，26.85(3x CH3)；MS(ES+ve)(M+H)+：323.2/324.8 (+Na)。
2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸叔丁酯：
Figure BDA0001553603060000731
将双(频哪醇合)二硼(1.5eq.，762.6mg，3.0mmol)、碳酸钾(1.5eq.，414.6 mg，3.0mmol)和三苯基膦(20mol％，104.9mg)、随后的乙酸钯(5mol％， 22.5mg)添加至2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基) 苯基]乙酸叔丁酯(600mg，2.0mmol)在二氧六环/水(18/2ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。MS示出一点SM，所以将混合物加热持续另一小时。MS和TLC示出反应是完全的。将EtOAc和水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法EtOAc/己烷(0-10％)纯化，以给出无色油状物(322.4mg，0.926 mmol，46.3％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.37(d，J＝8.0，1H)，7.26(d，J ＝3.0，1H)，7.18(d，J＝7.3，1H)，3.86(s，3H)，3.54(s，2H)，1.42(s，9H)，1.34(s， 12H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ170.96(C)，157.02(C)，130.25(CH)， 127.29(C)，127.28(CH)，115.89(CH)，109.97(C)，83.75(C)，80.34(C)，55.46 (CH3)，37.58(CH2)，28.03(3x CH3)，24.85(4x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+： 349.7。
2-(4-溴-2-甲氧基-苯基)-N-丙-2-炔基-乙酰胺：
Figure BDA0001553603060000732
将2-(4-溴-2-甲氧基苯基)乙酸(500mg，2.049mmol)溶解于5ml的干燥甲苯中。添加亚硫酰氯(1.2eq.，2.46mmol，292.7mg，178.3ul)，随后是一滴 DMF，并且将反应加热至回流(120℃)持续3小时。将反应冷却至r.t.，然后添加炔丙胺(2.5eq.，5.12mmol，282.2mg，0.328ml)和三乙胺(2.5eq.，5.12 mmol，0.714ml)并且反应被留下搅拌20小时。将DCM和水添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-3％)纯化，以给出奶油色固体(458.2mg，1.631mmol， 79.6％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.13–7.07(m，2H)，7.04(s，1H)，5.78 (s，1H)，3.99(dd，J＝5.2，2.6，2H)，3.86(s，3H)，3.51(s，2H)，2.21–2.16(m， 1H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ170.11(C)，157.79(C)，132.32(CH)， 124.16(CH)，122.35(C)，122.07(C)，114.50(CH)，79.53(C)，71.45(CH)，55.85(CH3)，38.02(CH2)，29.23(CH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：281.6/283.6， 303.8/306.0(+Na)。
2-[(4-溴-2-甲氧基-苯基)甲基]-5-甲基-噁唑：
Figure BDA0001553603060000741
将2-(4-溴-2-甲氧基-苯基)-N-丙-2-炔基-乙酰胺(200mg，0.713mmol)溶解于在微波小瓶中的2ml的1，2-二氯乙烷中。添加FeCl3(0.5eq.，57.6mg， 0.356mmol)，并且将混合物加热至150℃持续90分钟。将水和DCM添加至混合物中，并且分离有机层，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(1％)纯化，以给出浅黄色/橙色油状物(108.7mg， 0.389mmol，54.3％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.09–7.03(m，2H)，7.01 (s，1H)，6.65(d，J＝1.1，1H)，4.04(s，2H)，3.82(s，3H)，2.26(d，J＝1.2，3H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ161.66(C)，157.87(C)，148.90(C)，131.42 (CH)，123.66(CH)，123.09(C)，122.03(CH)，121.65(C)，114.31(CH)，55.83 (CH3)，28.30(CH2)，10.88(CH3)；MS(ES+ve)(M+H)+：281.6/283.6， 303.8/306.0(+Na)。
2-[[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]甲基]-5-甲基-噁唑：
Figure BDA0001553603060000751
将双(频哪醇合)二硼(1.5eq.，108.5mg，0.427mmol)、碳酸钾(1.5eq.， 59.0mg，0.427mmol)和三苯基膦(20mol％，15.0mg)、随后的乙酸钯(5 mol％)添加至2-[(4-溴-2-甲氧基-苯基)甲基]-5-甲基-噁唑(80mg，0.285 mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在 120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法EtOAc/己烷 (30％-40％)纯化，以给出澄清油状物(37.0mg，0.1124mmol，39.4％)。1HNMR(500MHz，MeOD)δ7.35–7.30(m，1H)，7.20–7.12(m，1H)，6.69– 6.65(m，1H)，5.97(s，1H)，4.51(s，2H)，4.08(s，3H)，2.28(s，3H)，1.37(s， 12H)；MS(ES+ve)(M+H)+：329.18。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]-3，3-二甲基-丁酰胺(526)：
Figure BDA0001553603060000752
将N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3，3-二甲基-丁酰胺(1.5eq.，63.1mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0 mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50 mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将产物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(5％-10％，然后0-30滴三乙胺/100ml)纯化，以给出沙色固体 (34.3mg，0.0675mmol，56.0％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.28(s，1H)， 8.10(d，J＝8.1，1H)，7.35(d，J＝1.8，1H)，7.28(dd，J＝8.1，1.8，1H)，4.57(t，J ＝6.7，2H)，3.99(s，3H)，3.15(m，2H)，2.95(t，J＝6.7，2H)，2.39(m，9H)，2.15 (t，J＝11.0，2H)，1.91(d，J＝16.8，2H)，1.49(m，2H)，1.14(s，9H)；13C NMR (126MHz，MeOD)δ172.20(C)，158.53(C)，155.44(CH)，154.22(C)，151.00 (C)，144.89(C)，129.52(C)，127.69(C)，123.12(CH)，120.22(CH)，110.74 (CH)，97.79(C)，62.24(CH)，56.24(CH2)，55.08(CH3)，52.23(2x CH2)，49.79 (CH2)，44.04(CH2)，40.11(2x CH3)，30.67(C)，28.81(3x CH3)，27.31(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：509.6；HRMS(ES+ve)，C27H41N8O2[M+H]+：计算509.33470，实测509.3363。
3-(4-氨基-3-甲氧基-苯基)-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(532)：
Figure BDA0001553603060000761
将N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]氨基甲酸苯酯(1.5eq.，66.8mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181 mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至 1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg， 0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出棕色固体(19.4 mg，0.0473mmol，39.2％)。1H NMR(600MHz，MeOD)δ8.25(s，1H)，7.16 (d，J＝1.8，1H)，7.09(dd，J＝7.9，1.8，1H)，6.91(d，J＝7.9，1H)，4.54(t，J＝6.7， 2H)，3.95(s，3H)，3.14(d，J＝12.0，2H)，2.93(t，J＝6.7，2H)，2.40(m，7H)， 2.14(t，J＝11.0，2H)，1.90(d，J＝12.3，2H)，1.49(d，J＝12.1，2H)；13C NMR (126MHz，MeOD)δ158.62(C)，155.35(CH)，153.98(C)，147.74(C)，146.01 (C)，138.32(C)，121.70(CH)，121.07(C)，114.69(CH)，110.25(CH)，109.97(C)，62.19(CH2)，56.24(CH3)，54.74(2x CH2)，52.29(CH)，43.91(CH2)，40.14 (2x CH3)，27.35(2x CH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：411.6；HRMS(ES+ve)， C21H31N8O1(M+H)+：计算411.26208，实测411.26270。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]-2-苯基-乙酰胺(530)：
Figure BDA0001553603060000771
将N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧戊环-2-基)苯基]-2-苯基-乙酰胺(1.5eq.，66.5mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol) 在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将产物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后0-30滴三乙胺/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(37.9mg，0.0717mmol，59.5％)。1H NMR(600MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)，8.20(d，J＝8.2，1H)，7.40 (dt，J＝15.2，7.5，4H)，7.32(dd，J＝11.0，4.4，2H)，7.26(dd，J＝8.2，1.8，1H)， 4.56(t，J＝6.7，2H)，3.95(s，3H)，3.83(s，2H)，3.13(d，J＝11.8，2H)，2.93(t，J ＝6.7，2H)，2.34(d，J＝13.6，7H)，2.13(t，J＝11.0，2H)，1.88(d，J＝12.7，2H)， 1.47(dt，J＝12.2，8.6，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ171.20(C)，158.51 (C)，155.42(CH)，154.17(C)，150.35(C)，144.81(C)，135.19(C)，129.30(C)， 128.98(2x CH)，128.38(2x CH)，127.83(C)，126.78(CH)，122.00(CH)， 120.30(CH)，110.62(CH)，97.77(C)，62.25(CH)，56.21(CH2)，55.12(CH3)， 52.24(2xCH2)，44.05(CH2)，43.30(CH2)，40.09(2x CH3)，27.29(2x CH2)； MS(ES+ve)[M+H]+：529.6；HRMS(ES+ve)，C29H37N8O2[M+H]+：计算 529.30340，实测529.3051。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]-3-苯基-丙酰胺(531)：
Figure BDA0001553603060000781
将N-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]-3- 苯基-丙酰胺(1.5eq.，69.0mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181 mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至 1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg， 0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将产物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(10％，然后0-30滴三乙胺/100ml)纯化，以给出浅棕色固体 (36.0mg，0.0664mmol，55.1％)。1H NMR(600MHz，MeOD)δ8.27(s，1H)， 8.13(d，J＝8.1，1H)，7.27(d，J＝1.7，5H)，7.26(dd，J＝8.2，1.8，1H)，7.21(dd， J＝8.6，4.4，1H)，4.57(t，J＝6.7，2H)，3.95(s，3H)，3.15(d，J＝11.8，2H)，3.05 (m，3H)，2.95(t，J＝6.7，2H)，2.81(t，J＝7.7，2H)，2.41(s，6H)，2.14(t，J＝ 11.0，2H)，1.91(d，J＝17.2，3H)，1.49(d，J＝8.7，2H)；13CNMR(126MHz， MeOD)δ172.65(C)，158.53(CH)，155.44(C)，154.18(C)，150.64(C)，144.88(C)，140.73(C)，129.32(C)，128.15(CH)，127.76(C)，125.85(CH)，122.70 (CH)，120.20(CH)，110.65(CH)，97.77(CH)，62.38(C)，56.18(CH2)，55.06 (CH3)，52.14(2x CH2)，46.33(CH2)，44.04(CH2)，39.99(2x CH3)，38.18(CH2)， 31.38(CH2)，27.17(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：543.6；HRMS(ES+ve)， C30H39N8O2[M+H]+：计算543.31905，实测543.3204。
3-[4-(苄基氨基)-3-甲氧基-苯基]-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基] 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(533)：
Figure BDA0001553603060000791
将N-苄基-2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯胺(1.5eq.，61.4mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩，并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后5-20滴NEt3/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(31.8mg，0.0584mmol，48.5％)。1H NMR(400MHz，MeOD)δ8.24(s，1H)，7.40(d，J＝7.5，2H)，7.33 (t，J＝7.5，2H)，7.24(t，J＝7.3，1H)，7.15(d，J＝1.8，1H)，7.08(dd，J＝8.1，1.8， 1H)，6.67(d，J＝8.1，1H)，4.52(t，J＝6.7，2H)，4.47(s，2H)，3.98(s，3H)，3.13 (d，J＝11.9，2H)，2.92(t，J＝6.7，2H)，2.37(s，7H)，2.13(t，J＝11.0，2H)，1.88 (d，J＝12.3，2H)，1.47(d，J＝8.5，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ166.23 (C)，158.62(C)，155.34(CH)，153.97(C)，147.34(C)，139.75(C)，139.27(C)， 128.13(2x CH)，126.78(2x CH)，126.58(CH)，121.15(CH)，119.94(C)， 109.78(CH)，109.27(CH)，97.66(C)，62.17(CH)，56.20(CH2)，54.81(CH3)， 52.22(2xCH2)，46.71(CH2)，43.89(CH2)，40.08(2x CH3)，27.28(2x CH2)； MS(ES+ve)[M+H]+：501.4；HRMS(ES+ve)，C28H37N8O1[M+H]+：计算 501.30848，实测501.3087。
1-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]-3-叔丁基-脲(540)：
Figure BDA0001553603060000801
将1-叔丁基-3-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]脲(1.5eq.，62.9mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol) 和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205 mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在 120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(10％，然后0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(30.4 mg，0.0597mmol，49.5％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.24(s，1H)，8.16 (d，J＝8.3，1H)，7.25(d，J＝1.8，1H)，7.19(dd，J＝8.3，1.9，1H)，4.53(t，J＝ 6.7，2H)，3.96(s，3H)，3.12(d，J＝11.9，2H)，2.92(t，J＝6.7，2H)，2.36(m，7H)， 2.12(t，J＝11.1，2H)，1.87(d，J＝12.5，2H)，1.51–1.42(m，2H)，1.38(s，9H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ155.74(C)，155.40(CH)，154.09(C)，148.52 (C)，145.33(C)，130.34(C)，125.66(C)，120.49(CH)，118.66(CH)，110.02(CH)，97.73(C)，62.27(CH)，56.23(CH2)，55.02(CH3)，52.22(2x CH2)，49.71 (C)，43.97(CH2)，40.07(2x CH3)，28.15(3x CH3)，27.20(2x CH2)；MS(ES +ve)[M+H]+：510.8；HRMS(ES+ve)，C26H40N9O2(M+H)+：计算510.32995，实测510.32830。
N-[3-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯基]氨基甲酸叔丁酯(542)：
Figure BDA0001553603060000811
将3-(boc-氨基)苯硼酸(1.5eq.，42.9mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.， 25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5 mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出奶油色固体(28.0mg，0.0583mmol，48.4％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.27(s， 1H)，7.88(s，1H)，7.50–7.44(m，2H)，7.37(d，J＝7.0，1H)，4.57(t，J＝6.7， 2H)，3.16–3.10(m，2H)，2.95(t，J＝6.7，2H)，2.35(m，7H)，2.14(t，J＝11.0， 2H)，1.88(d，J＝12.7，2H)，1.56(s，9H)，1.47(m，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ158.42(C)，155.37(CH)，154.22(C)，154.00(C)，144.97(C)，140.14 (C)，133.30(C)，129.46(CH)，122.27(CH)，119.16(CH)，118.54(CH)，97.74(C)，79.72(C)，62.16(CH)，56.21(CH2)，52.29(2x CH2)，44.06(CH2)，40.16 (2x CH3)，27.38(2x CH2)，27.28(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：481.4； HRMS(ES+ve)，C25H37N8O2[M+H]+：计算480.30340，实测481.3054。
N-[5-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-吡啶基]氨基甲酸叔丁酯(549)：
Figure BDA0001553603060000821
将(6-((叔丁氧基羰基)氨基)吡啶-3-基)硼酸(1.5eq.，43.1mg，0.181 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后10-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出白色固体(23.8mg，0.0495mmol，41.0％)。1H NMR(500MHz，MeOD) δ8.55–8.51(m，1H)，8.26(s，1H)，8.06–8.01(m，2H)，4.55(t，J＝6.5，2H)， 3.14(d，J＝12.0，2H)，2.94(t，J＝6.5，2H)，2.68(m，1H)，2.55(s，6H)，2.14(t， J＝11.0，2H)，1.92(d，J＝12.7，2H)，1.55(s，9H)，1.53–1.46(m，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.58(C)，155.47(CH)，154.40(C)，153.05(C)， 152.96(C)，147.13(CH)，141.83(C)，137.78(CH)，123.46(C)，112.28(CH)， 97.92(C)，80.49(C)，62.79(CH)，56.00(CH2)，51.78(2x CH2)，44.12(CH2)，39.64(2x CH3)，27.16(3x CH3)，26.76(2x CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：481.8； HRMS(ES+ve)，C24H36N9O2[M+H]+：计算482.29865，实测482.3004。
2-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯基]乙酸叔丁酯(553)：
Figure BDA0001553603060000831
将2-[4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸叔丁酯(1.5eq.，57.6mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30 分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后 0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出浅棕色稠油状物(40.5mg，0.0845mmol，70.1％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.26(s，1H)，7.68–7.63(m，2H)，7.47 (d，J＝8.2，2H)，4.55(t，J＝6.6，2H)，3.68(s，2H)，3.12(d，J＝11.9，2H)，2.93 (t，J＝6.6，2H)，2.43(m，7H)，2.13(t，J＝11.0，2H)，1.87(m，2H)，1.47(m， 11H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ171.52(C)，158.52(C)，155.44(CH)， 154.21(C)，144.85(C)，136.00(C)，131.41(C)，129.95(2x CH)，128.45(2x CH)，97.81(C)，81.01(C)，62.40(CH)，56.15(CH2)，52.10(2x CH2)，44.04(CH2)，41.58(CH2)，39.95(2x CH3)，27.13(2x CH2)，26.88(3x CH3)；MS(ES +ve)[M+H]+：480.0；HRMS(ES+ve)，C26H38N7O2[M+H]+：计算480.30815，实测480.3121。
2-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯基]乙酸(556)：
Figure BDA0001553603060000841
将4-(羧甲基)苯基硼酸频哪醇酯(1.5eq.，47.4mg，0.181mmol)、碳酸钾 (1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯 (5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d] 嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(10％，然后0-50滴NEt3/100ml)纯化，以给出奶油色固体(25.0mg，0.0591mmol，49.0％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.26 (s，1H)，7.59(d，J＝8.2，2H)，7.49(d，J＝8.2，2H)，4.55(t，J＝6.3，2H)，3.62(s， 2H)，3.20–3.15(m，2H)，2.98(t，J＝6.3，3H)，2.74(s，6H)，2.18(t，J＝11.0， 2H)，2.03–1.96(m，2H)，1.56(dd，J＝12.1，3.9，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ177.81(C)，158.57(C)，155.42(CH)，154.16(C)，145.31(C)，139.11 (C)，130.29(C)，129.88(2x CH)，128.10(2x CH)，97.82(C)，63.29(CH2)， 55.78(CH2)，51.37(2x CH2)，44.08(CH2)，39.26(2x CH3)，29.53(CH)，26.34 (2xCH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：424.4；HRMS(ES+ve)，C22H30N7O2 [M+H]+：计算424.24555，实测424.2475。
N-[5-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(559)：
Figure BDA0001553603060000851
将[3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，48.4mg，0.181 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％，然后0-20滴NEt3/100ml)纯化，以给出浅棕色固体(32.9mg，0.0645mmol，53.5％)。1H NMR(500MHz， MeOD)δ8.26(d，J＝5.2，1H)，8.19(d，J＝2.1，1H)，7.41(dd，J＝8.4，2.2，1H)， 7.19(d，J＝8.5，1H)，4.56(t，J＝6.6，2H)，3.99(d，J＝5.1，3H)，3.15(d，J＝ 12.1，2H)，2.96(t，J＝6.6，2H)，2.54(m，1H)，2.48(s，6H)，2.16(t，J＝10.9，2H)， 1.92(d，J＝10.5，2H)，1.56(d，J＝5.1，9H)，1.55–1.46(m，2H)；13C NMR (126MHz，MeOD)δ158.48(C)，155.35(CH)，154.20(C)，153.82(C)，149.93 (C)，145.03(C)，128.25(C)，124.95(C)，123.27(CH)，119.69(CH)，111.00 (CH)，97.67(C)，80.15(C)，62.52(CH)，56.07(CH2)，55.11(CH3)，51.99(2x CH2)，44.01(CH2)，39.86(2x CH3)，27.22(3x CH3)，27.03(2x CH2)；MS(ES +ve)[M+H]+：511.4；HRMS(ES+ve)，C26H39N8O3[M+H]+：计算511.31396，实测511.3166。
2-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基苯基]乙酸叔丁酯(565)：
Figure BDA0001553603060000861
将2-[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]乙酸叔丁酯(1eq.，29.1mg，0.0836mmol)、碳酸钾(1.5eq.，17.3mg，0.125mmol) 和三苯基膦(20mol％，4.4mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(34.7mg，0.0836 mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在 120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(0-10％，然后0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出奶油色固体(19 mg，0.0373mmol，44.6％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.26(s，1H)，7.35 (d，J＝7.6，1H)，7.26(d，J＝1.4，1H)，7.22(dd，J＝7.5，1.6，1H)，4.56(t，J＝6.7， 2H)，3.91(s，3H)，3.64(s，2H)，3.13(d，J＝11.9，2H)，2.94(t，J＝6.7，2H)，2.37 (m，7H)，2.13(t，J＝11.0，2H)，1.91–1.85(m，2H)，1.48(m，11H)；13C NMR (126MHz，MeOD)δ172.07(C)，158.55(C)，158.18(C)，155.46(CH)，154.14 (C)，145.09(C)，133.02(C)，131.48(CH)，124.76(C)，120.21(CH)，110.45(CH)，97.82(C)，80.76(C)，62.26(CH)，56.22(CH2)，54.70(CH3)，52.24(2x CH2)，44.04(CH2)，40.09(2x CH3)，36.61(CH2)，27.28(2x CH2)，26.90(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：510.2；HRMS(ES+ve)，C27H40N7O3[M+H]+：计算510.31872，实测510.3185。
3-碘-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000871
将100mg、0.265mmol的1-(2，2-二乙氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至5ml微波管中。然后添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物在微波中加热至100℃持续30分钟。将溶剂在真空中去除，以给出深棕色油状物。将0.265mmol的2-(4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1- 基)乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加1-甲基哌嗪(1.5eq.，0.399mmol，39.8 mg，44.1μl)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.399mmol，84.6mg)并且允许混合物搅拌17小时过夜。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后 0-15滴NEt3/100ml)纯化，以给出浅橙色稠油状物(89.1mg，0.2302mmol， 86.9％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.22(s，1H)，4.51(t，J＝6.0，2H)，3.33 (d，J＝1.7，4H)，3.20–3.04(m，4H)，2.98(t，J＝6.0，2H)，2.83(s，3H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.05(C)，155.67(CH)，153.80(C)，103.55(C)， 87.02(C)，55.51(CH2)，53.44(CH2)，49.45(CH2)，44.18(CH2)，43.07(CH2)， 42.03(CH3)；MS(ES+ve)(M+H)+：388.4。
1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-[3-甲氧基-4-[(5-甲基噁唑-2-基)甲基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(584)：
Figure BDA0001553603060000881
将2-[[2-甲氧基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯基]甲基]-5-甲基-噁唑(1eq.，39.7mg，0.1205mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg， 0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至 1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg， 0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(10％，然后0-30滴NEt3/100ml)纯化，以给出淡黄色固体(36.8mg，0.0751mmol，62.3％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.28(s，1H)，7.38 (d，J＝7.6，1H)，7.29(s，1H)，7.26(dd，J＝7.6，1.6，1H)，6.69(d，J＝1.2，1H)， 4.57(t，J＝6.6，2H)，4.15(s，2H)，3.91(s，3H)，3.17(d，J＝7.4，2H)，2.96(t，J＝ 6.6，2H)，2.69(m，1H)，2.56(s，6H)，2.31(s，3H)，2.17(t，J＝11.0，2H)，1.94(m， 2H)，1.54(m，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ162.54(C)，158.55(C)， 157.95(C)，155.47(CH)，154.21(C)，149.33(C)，145.01(C)，133.18(C)， 130.96(CH)，124.85(C)，121.56(CH)，120.34(CH)，110.70(CH)，97.78(C)，62.77(CH)，56.03(CH2)，54.78(CH3)，51.82(2x CH2)，44.08(CH2)，39.66(2x CH3)，28.17(CH2)，26.79(2x CH2)，9.16(CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：491.8； HRMS(ES+ve)，C26H35N8O2[M+H]+：计算491.28775，实测491.2862。
3-碘-1-[2-(4-甲氧基-1-哌啶基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000891
将100mg、0.287mmol的1-(2，2-二甲氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至5ml微波管中。然后将混合物在真空中浓缩。将0.287mmol 的2-(4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)乙醛悬浮于3ml的DCM中。添加4-甲氧基哌啶(1.5eq.，0.430mmol，49.5mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.430mmol， 91.1mg)并且允许混合物搅拌72小时。将产物在真空中浓缩并且将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-8％)纯化，以给出淡黄色固体(112mg，0.279 mmol，97.1％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.23(s，1H)，4.53(t，J＝6.6， 2H)，3.29(s，1H)，2.98(t，J＝6.5，2H)，2.91(s，2H)，2.45(s，2H)，1.89(s，2H)， 1.57(s，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.09(C)，155.71(CH)，153.68 (C)，103.71(C)，87.16(C)，75.13(CH)，56.19(CH2)，54.43(CH3)，50.24(2x CH2)，43.96(CH2)，29.68(2x CH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：403.0。
N-[4-[4-氨基-1-[2-(4-甲氧基-1-哌啶基)乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-3- 基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(593)：
Figure BDA0001553603060000892
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，49.8mg，0.187 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.8mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，6.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至3-碘-1-[2-(4-甲氧基-1-哌啶基)乙基]吡唑并 [3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.124mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(0-10％)纯化，以给出奶油色固体(60.0mg， 0.121mmol，97.3％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.29(s，1H)，8.08(d，J＝8.2，1H)，7.31(d，J＝1.8，1H)，7.27(dd，J＝8.2，1.8，1H)，4.63(t，J＝6.6，2H)， 3.98(s，3H)，3.34(s，3H)，3.12(m，2H)，3.02(m，2H)，2.60(m，2H)，1.93(m， 2H)，1.65(m，2H)，1.57(s，9H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ158.53(C)， 155.46(CH)，154.22(C)，153.42(C)，149.28(C)，145.17(C)，128.73(C)， 127.38(C)，120.44(CH)，119.50(CH)，110.33(CH)，97.94(C)，80.15(C)， 75.12(CH)，56.21(CH2)，55.10(CH3)，54.79(CH3)，50.02(2x CH2)，43.60 (CH2)，29.69(2x CH2)，27.21(3x CH3)；MS(ES+ve)[M+H]+：498.2；HRMS (ES+ve)，C25H35N7O4[M+H]+：计算498.28233，实测498.2850。
1-(2，2-二甲氧基乙基)-3-碘-吡唑：
Figure BDA0001553603060000901
将氢化钠(1.5eq.，3.867mmol，在矿物油中的60％分散体，154.7mg)添加至3-碘-1H-吡唑(500mg，2.578mmol)在DMF(10ml)中的溶液中，并且允许悬浮液搅拌30分钟，直至气体逸出已经消退。然后逐滴地添加溴代乙醛缩二甲醇(1.5eq.，3.867mmol，649.6mg，0.454ml)，并且将混合物在微波中在150℃加热1小时。将混合物在真空中浓缩以尽可能多地去除DMF。然后将EtOAc和水添加至混合物中并且分离有机层。将水性层用EtOAc 洗涤两次，并且合并有机物，经MgSO4干燥并且在真空中浓缩。将产物通过柱色谱法MeOH/DCM(0-1％)纯化，以给出浅橙色固体(519.2mg，1.841 mmol，71.4％)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.28(d，J＝2.3，1H)，6.40(d，J ＝2.3，1H)，4.62(t，J＝5.4，1H)，4.20(d，J＝5.4，2H)，3.37(d，J＝2.4，6H)；13C NMR(126MHz，CDCl3)δ132.61(CH)，114.84(CH)，103.29(CH2)，94.49(C)，55.20(2x CH3)，54.55(CH)；MS(ES+ve)(M+H)+：304.6(+Na)。
1-[2-(3-碘吡唑-1-基)乙基]-N，N-二甲基-哌啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000911
将1-(2，2-二甲氧基乙基)-3-碘-吡唑(250mg，0.887mmol)添加至微波小瓶中，随后是水(0.25ml)和TFA(0.25ml)，并且将混合物在微波中加热至 100℃持续1小时。将产物在真空中浓缩，并且不进一步纯化即可使用。将0.887mmol的2-(3-碘吡唑-1-基)乙醛悬浮于5ml的DCM中。添加N，N- 二甲基哌啶-4-胺(1.5eq.，1.33mmol，170.5mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，1.33mmol，281.9mg) 并且允许混合物搅拌72小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法 MeOH/DCM(5％-10％，然后10-20滴NEt3/100ml)纯化，以给出稠的浅橙色油状物(306.3mg，0.880mmol，99.2％)。1HNMR(500MHz，MeOD)δ7.54 (d，J＝2.3，1H)，6.43(d，J＝2.3，1H)，4.27(t，J＝6.4，2H)，3.10–3.05(m，1H)， 3.05–2.99(m，2H)，2.85–2.76(m，8H)，2.17(td，J＝12.0，2.3，2H)，2.01(d，J＝13.2，2H)，1.67(tt，J＝12.1，6.1，2H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ132.70 (CH)，114.34(CH)，93.40(C)，63.39(CH)，56.57(CH2)，51.40(2x CH2)，49.59 (CH2)，39.17(2xCH2)，26.24(CH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：348.8。
N-[4-[1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑-3-基]-2-甲氧基-苯基] 氨基甲酸叔丁酯(597)：
Figure BDA0001553603060000921
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，57.6mg，0.215 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，29.7mg，0.215mmol)和三苯基膦(20mol％，7.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-(3-碘吡唑-1-基)乙基]-N，N-二甲基-哌啶 -4-胺(50mg，0.1436mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热1小时。将反应在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％)纯化，以给出深橙色固体(42.7mg，0.0963 mmol，67.1％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ7.88(s，1H)，7.69(d，J＝2.3， 1H)，7.42(d，J＝1.7，1H)，7.33(dd，J＝8.3，1.8，1H)，6.62(d，J＝2.3，1H)， 4.33(t，J＝6.4，2H)，3.96(s，3H)，3.22–3.15(m，1H)，3.11(s，2H)，2.94(s， 2H)，2.85(d，J＝14.6，6H)，2.26(s，2H)，2.05(s，2H)，1.73(d，J＝8.3，2H)， 1.55(d，J＝4.2，9H)；13C NMR(126MHz，MeOD)δ153.56(C)，151.55(C)， 149.10(C)，131.77(CH)，128.50(C)，127.36(C)，123.00(C)，119.24(CH)，117.75(CH)，107.31(CH)，102.25(CH)，63.48(CH)，56.69(CH2)，54.95(CH3)， 51.21(2xCH2)，49.11(CH2)，39.19(2x CH3)，27.23(3x CH3)，26.22(2x CH2)； MS(ES+ve)(M+H)+：444.2；HRMS(ES+ve)，C24H38N5O3(M+H)+：计算 444.29692，实测444.29650。
2-[4-[4-氨基-1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]苯基]乙腈(5-100)：
Figure BDA0001553603060000931
将4-(氰基甲基)苯硼酸(1eq.，29.1mg，0.181mmol)、碳酸钾(1.5eq.， 25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5 mol％)添加至1-[2-[4-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5/0.5ml)中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％，然后20滴NEt3/100ml)纯化，以给出奶油色固体(41.8mg，0.1034mmol，85.8％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.27 (s，1H)，7.79–7.70(m，2H)，7.59(d，J＝8.3，2H)，4.56(t，J＝6.4，2H)，4.03(s， 2H)，3.18(d，J＝5.8，2H)，3.04–2.93(m，3H)，2.74(s，6H)，2.17(dd，J＝15.1， 6.9，2H)，1.99(d，J＝12.8，2H)，1.61–1.51(m，2H)；13C NMR(126MHz， MeOD)δ158.49(C)，155.47(CH)，154.36(C)，144.35(C)，132.22(C)，128.84 (2x CH)，128.70(2x CH)，117.95(C)，110.00(C)，97.74(C)，63.27(CH)，55.84(CH2)，51.39(2x CH2)，44.11(CH2)，39.27(2x CH3)，26.32(2x CH2)，21.98 (CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：405.0；HRMS(ES+ve)，C22H29N8(M+H)+：计算405.25097，实测405.24950。
1-[2-[3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺：
Figure BDA0001553603060000941
将100mg、0.287mmol的1-(2，2-二甲氧基乙基)-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺添加至5ml微波管中。然后添加2.5ml的水和2.5ml的TFA，并且将混合物在微波中加热至100℃持续30分钟。然后，将产物在真空中浓缩。将0.287mmol的2-[4-氨基-3-碘-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基]乙醛悬浮于3 ml的DCM中。添加3-二甲基氨基哌啶(1.5eq.，0.430mmol，55.1mg)，随后是一滴乙酸并且允许混合物搅拌10分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.5eq.，0.430mmol，91.1mg)并且允许混合物搅拌18小时。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％)纯化，以给出奶油色固体 (117.5mg，0.283mmol，98.6％)。1HNMR(500MHz，MeOD)δ8.22(s，1H)， 4.54–4.43(m，2H)，3.08(m，1H)，2.99–2.90(m，3H)，2.84(s，6H)，2.65(m， 2H)，2.38(m，1H)，1.88(m，1H)，1.75–1.65(m，2H)，1.55–1.47(m，1H)；13CNMR(126MHz，MeOD)δ158.13(C)，155.80(CH)，153.62(C)，103.65(C)， 87.01(C)，62.48(CH)，56.37(CH2)，52.78(CH2)，52.75(CH2)，44.50(CH2)， 40.40(2x CH3)，24.67(CH2)，21.95(CH2)；MS(ES+ve)(M+H)+：415.8。
N-[4-[4-氨基-1-[2-[3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]吡唑并[3，4-d]嘧啶 -3-基]-2-甲氧基-苯基]氨基甲酸叔丁酯(5-103)：
Figure BDA0001553603060000951
将[4-(叔丁氧基羰基氨基)-3-甲氧基-苯基]硼酸(1.5eq.，48.3mg，0.181 mmol)、碳酸钾(1.5eq.，25.0mg，0.181mmol)和三苯基膦(20mol％，9.5mg)、随后的乙酸钯(5mol％)添加至1-[2-[3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]乙基]-3-碘- 吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(50mg，0.1205mmol)在二氧六环/水(4.5ml/0.5ml) 中的溶液中，并且将混合物在微波中在120℃加热30分钟。将混合物在真空中浓缩并且通过柱色谱法MeOH/DCM(5％-10％)纯化，以给出深红色固体(60.5mg，0.119mmol，98.4％)。1H NMR(500MHz，MeOD)δ8.25(s，1H)， 8.05(d，J＝8.2，1H)，7.26(d，J＝1.8，1H)，7.22(dd，J＝8.2，1.8，1H)，4.58– 4.48(m，2H)，3.94(s，3H)，3.13(m，1H)，2.97(m，3H)，2.82(s，6H)，2.66(m， 2H)，2.42(m，1H)，1.86(m，1H)，1.71(m，2H)，1.52(m，10H)；13C NMR(126 MHz，MeOD)δ158.61(C)，155.59(CH)，154.11(C)，153.49(C)，149.33(C)， 145.10(C)，128.93(C)，127.24(C)，120.44(CH)，119.66(CH)，110.28(CH)， 97.76(C)，80.24(C)，62.58(CH)，56.39(CH2)，55.12(CH3)，52.86(CH2)， 52.73(CH2)，44.28(CH2)，40.32(2x CH3)，27.20(3x CH3)，24.59(CH2)，21.84 (CH2)；MS(ES+ve)[M+H]+：511.0；HRMS(ES+ve)，C26H39N8O3(M+H)+：计算511.31396，实测511.31140。
生物学方法和材料
一般细胞培养
使细胞在补充有血清(10％胎牛血清)和L-谷氨酰胺(2mM)的Dulbecco 氏改良的Eagle培养基(Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM)或 Roswell Park MemorialInstitute(RPMI)培养基中生长，并且在37℃和5％ CO2在Heracell 240i组织培养箱中孵育。
细胞存活力测定
将细胞以2000个细胞/孔铺板在96孔板中的100μl的包含10％FBS 和2mM L-谷氨酰胺的DMEM或RPMI培养基中，并在37℃和5％CO2在培养箱中孵育48h。在48小时之后，从每个孔中吸出培养基并且用95μl 的新鲜培养基代替。化合物(包括DMSO)在DMEM培养基中以20X在单独的96孔中间板中制备。然后将来自中间板的5μl添加至包含细胞的每个孔中。将未处理的细胞与DMSO(0.1％v/v)一起孵育。在5天之后，将 PrestoBlueTM细胞存活力试剂(10μl)添加至每个孔中，并且将板孵育60-90 min。荧光发射使用荧光板读取器(激发540nm，发射590nm)来检测。所有条件均相对于未处理的细胞(100％)归一化，并且使用GraphPad Prism软件拟合剂量-应答曲线。
凋亡测定-使用来自Essen BioScience的
Figure BDA0001553603060000961
系统
将细胞以3000个细胞/孔铺板在96孔NuncTM黑光底板(NuncTM black optical-bottom plate)(Thermo Scientific)中的100μl的包含10％FBS和2mM L-谷氨酰胺的DMEM或RPMI培养基中，并且在37℃和5％CO2在培养箱中孵育48h。如在细胞存活力测定中描述的，将培养基用95μL的包含以1μM 浓度的NucViewTM 488和沿着浓度梯度添加的药物或DMSO的新鲜培养基代替，并且将板置于IncuCyte用于孵育。使用明视野和绿色荧光通道(激发460nm，发射524nm)显微术在5天内监测细胞生长和凋亡。细胞汇合(明视野)和凋亡(绿色)计数由IncuCyte软件进行。
细胞周期测定
将细胞以5000个细胞/孔铺板在96孔NuncTM黑光底板中的100μl的包含10％FBS和2mM L-谷氨酰胺的DMEM或RPMI培养基中，并且在37℃与5％ CO2孵育。在48小时之后，将培养基吸出并且用95μl的新鲜培养基代替。化合物(包括DMSO)在单独的板中在DMEM或RMPI中以20X来制备，并且然后将5μl添加至包含细胞的每个孔中。将未处理的细胞与DMSO(0.1％v/v) 一起孵育。将细胞在37℃孵育24小时，然后将100μl的在PBS中的8％PFA 添加至每个孔中，并且留下在室温孵育20分钟。去除培养基/PFA，并且用 100μl的PBS洗涤孔(x3)。将100μl的封闭缓冲液(包含1.1％BSA和0.2％ Trixton X100的PBS)添加至每个孔中并且留置30分钟。将30μl的包含混合了小鼠单克隆抗体(1:300)和抗-pHH3兔多克隆抗体(1:800)的抗-细胞周期蛋白B1的第一抗体溶液添加至每个孔中，并且将板在室温孵育一小时。然后去除溶液，并且用100μl的封闭缓冲液洗涤孔(x3)。将100μl的封闭缓冲液添加至每个孔，并且将板在室温孵育30分钟。将30μl的包含4μg/ml DAPI、
Figure BDA0001553603060000971
488驴抗小鼠抗体(1:500)和
Figure BDA0001553603060000972
594山羊抗兔抗体(1:500)的第二抗体溶液添加至每个孔中，并且留下在室温在黑暗中孵育 45分钟。然后去除溶液，并且用100μl的PBS洗涤板(x3)，并且在黑暗中储存在100μl PBS中直至成像。使用来自Olympus的scan^R荧光显微镜或来自Molecular Devices的ImageXpress系统获得图像，并且使用scan^R或 ImageXpress软件进行分析。将细胞根据其细胞周期状态由DNA含量和强度进行分选。
蛋白印迹方案
将细胞以1x106个细胞/孔铺板在6孔板中的2ml的包含10％FBS和2 mM L-谷氨酰胺的DMEM或RPMI培养基中，并且在37℃与5％CO2孵育。在24小时之后，将培养基吸出并且用2ml的包含0.1％FBS和2mM L-谷氨酰胺的DMEM培养基代替，并且将细胞孵育持续另外的24小时。然后将2μl 的以适合浓度溶解于DMSO中的化合物添加至每个孔中，并且将板孵育30分钟。然后将222μl的FBS添加至每个孔(得到最终浓度为10％)中并且将细胞孵育一小时。然后使用100μl的MD Anderson裂解物缓冲液/孔制备细胞裂解物。每种裂解物中的总细胞蛋白浓度使用来自Cytoskeleton的精密红高级蛋白试剂(Precision Red AdvancedProtein Reagent)#2来确定。将多达100 μl以给出2-3mg/ml的溶液的25μl的SDS-PAGE样品装载缓冲液、10μl的1 M DDT、裂解物和水，在100℃煮沸3分钟。使样品在140V在60分钟内在BioRad 4％-15％预制凝胶上经受SDS-PAGE，并且在210mA在150分钟内转移至PVDF膜。将膜使用Roche氏封闭缓冲液在室温封闭1小时，然后添加在0.5％封闭缓冲液中的第一抗体在4℃过夜。将膜用TBS/T洗涤(x3，5分钟)，然后添加与辣根过氧化物酶(HRP)连接的第二抗体，在室温持续1小时。在用TBS/T(x3，5分钟)和TBS(x2，5分钟)进一步洗涤之后，HRP通过过氧化物酶增强的化学发光(来自Roche的POD ECL)来检测，并且将带使用来自 BioRad的X-射线胶片或the ChemiDocTM MP成像系统可视化。
细胞迁移测定
将细胞以50000个细胞/孔铺板在来自Essen BioScience的96孔 ImageLock板中的100μl的包含10％FBS和2mM L-谷氨酰胺的DMEM或 RPMI培养基中，并且在37℃和5％CO2在培养箱中留置过夜以粘附。划痕损伤使用由Essen BioScience供应的WoundMakerTM在每个孔中创建，并且每个孔用培养基洗涤(100μl，x2)以去除漂浮的细胞。将95μl的新鲜培养基添加在每个孔中。化合物(包括DMSO)在单独的板中在DMEM中以20X 来制备，并且然后将5μl添加至包含细胞的每个孔中。将未处理的细胞与 DMSO(0.1％v/v)一起孵育。每隔30分钟使用IncuCyte-ZOOMTM记录图像持续24小时。使用IncuCyte软件进行损伤宽度分析以监测细胞迁移。
斑马鱼测定
从AB-TPL繁殖对收集野生型斑马鱼胚胎并且在28℃在E3胚胎培养基中培养。将受精后2天(dpf)的胚胎用以100μM的化合物506或达沙替尼和作为阴性对照的DMSO(0.1％v/v)进行处理，持续2小时，然后尾部截断。然后从胚胎剪下尾部。将胚胎与药物一起孵育持续另外的2小时，然后洗去，并且用新鲜的E3培养基代替。将胚胎留置以在28℃在E3培养基中发育2天，在此之后，将它们通过相差显微术成像。
激酶筛选测定
由Reaction Biology Corp从起始于100μM或10μM的10个点、1:3 稀释曲线与10μMATP确定化合物IC50值。对于整个蛋白激酶组筛选，由 Reaction Biology Corp针对以1μM的单个剂量的340种野生型激酶以一式两份与10μM ATP筛选化合物。使用DiscoverRXTREEspotTM软件将数据平均化并且绘制为相对于作为阴性对照的DMSO的酶活性百分比。
斑马鱼PD/毒理学测定
从繁殖对收集转基因cldnb:EGFP斑马鱼胚胎并且在28℃在E3胚胎培养基中培养。将1dpf胚胎用以不同剂量(10-750μM)的506或达沙替尼或 DMSO(0.1％v/v)在20hpf、36hpf和48hpf时进行处理。将斑马鱼胚胎通过荧光显微术在72hpf时成像。安全性测定。从AB-TPL繁殖对收集野生型斑马鱼胚胎并且在28℃在E3胚胎培养基中培养。将1dpf胚胎用以100 μM的506或达沙替尼或作为阴性对照的DMSO(0.1％v/v)处理4h，然后洗去并且用新鲜E3培养基代替。对于PP20处理，将鱼在截断后孵育2h，然后用新鲜的E3培养基代替。将胚胎留置以在28℃在E3培养基中发育2 d，在此之后，将它们通过光学显微术成像。斑马鱼饲养根据1986年动物 (科学程序)法案并且由爱丁堡大学伦理委员会(the University ofEdinburgh Ethics Committee)批准，根据内政部执照(Home Office License)进行。
体内PD研究
通过皮下注射200万HCT116细胞在小鼠中产生肿瘤异种移植物。允许肿瘤生长直至直径3-4mm。506在纯水中的50mg/kg的每日剂量通过口服灌胃施用。将小鼠在最后一次剂量之后3h处死，并且将肿瘤切离，在 0.1M磷酸盐缓冲液(pH 7.2)中的4％甲醛中固定，并且包埋于石蜡中。将切片使用Reichert-Jung 1150/自动切割切片机(Autocut microtome)切割以进行磷酸-SRC免疫化学。在10mM柠檬酸盐缓冲液pH＝6中在微波炉中在压力下使用热处理进行抗原修复持续10分钟。将切片以内源性过氧化物酶封闭，随后与抗-磷酸-SRC抗体(Cell Signaling Technology)(1:200稀释) 在4℃孵育过夜。染色使用EnVision(Dako)和二氨基联苯胺 (diaminobenzidene)(Dako)显影，然后将载玻片在苏木精中复染，脱水并且在DPX中固定。将切片在NanoZoomer数字载玻片扫描仪，Hammamatsu 上成像。使用加权组织学评分(weighted histoscore)方法，由单一有经验的无视处理的观察者对染色进行评分。
在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明的描述的方面的各种修改和变型对于本领域技术人员将是明显的。尽管本发明结合具体优选的实施方案已被描述，应该理解，如要求保护的本发明不应该被过度地限制于此类具体实施方案。实际上，对于相关领域的技术人员明显的对描述的实施本发明的模式的各种修改被意图在所附权利要求的范围内。
表1：达沙替尼和相对于ABL对SRC具有高选择性的抑制剂的活性
EC50＝->10μM>+>1μM>++>0.1μM>+++
IC50＝->1.0μM>+>100nM>++>10nM>+++
Figure BDA0001553603060001001
Figure BDA0001553603060001011
Figure BDA0001553603060001021
Figure BDA0001553603060001031
Figure BDA0001553603060001041
Figure BDA0001553603060001051
表2：达沙替尼的活性和与新颖的抑制剂相关但呈现出低抗增殖性质或相对于ABL对SRC的低选择性的结构
EC50＝->10μM>+>1μM>++>0.1μM>+++
IC50＝->1.0μM>+>100nM>++>10nM>+++
Figure BDA0001553603060001061
Figure BDA0001553603060001071
Figure BDA0001553603060001081
Figure BDA0001553603060001091
Figure BDA0001553603060001101
Figure BDA0001553603060001111
Figure BDA0001553603060001121
Figure BDA0001553603060001131
表3：计算达沙替尼、化合物506和化合物503与选择的重组激酶的 IC50(nM)值。
激酶\命中 达沙替尼 506 503
Abl ＜0.5 479 189
Fyn<sup>1</sup> ＜0.5 4.1 4.6
Kit 39 5,130 7,130
mTOR ＞10<sup>4</sup> ＞10<sup>4</sup> ＞10<sup>4</sup>
PDGFRα 9.9 ＞10<sup>4</sup> ＞10<sup>4</sup>
Src<sup>1</sup> ＜0.5 ＜0.5 ＜0.5
Ret 433 ＞10<sup>4</sup> ＞10<sup>4</sup>
Yes<sup>1</sup> ＜0.5 ＜0.5 ＜0.5
1SFK成员。
表4：细胞筛选(EC50 ＊)
Figure BDA0001553603060001141
*EC50：针对细胞存活力终点的8点半对数剂量应答概况
表5：激酶筛选(IC50)(＊)Src家族
Figure BDA0001553603060001142
IC50＝-＞1.0μM＞+＞100nM＞++＞10nM＞+++
表6：物理化学和ADME性质
Figure BDA0001553603060001143
*在与肝微粒体孵育30min之后的未修饰的药物的％。对照：利多卡因(Lidocaine)92.0％；心得安(Propanolol)68.1％；维拉帕米(Verapamil)8.1％。
表7：hERG通道抑制、血浆中的稳定性和口服生物利用度
Figure BDA0001553603060001151
*为在血浆中120min之后的未修饰的药物的％。对照：尤卡托品 (Eucatropine)10.5％(人类)和20.3(小鼠)；地尔硫卓(Diltiazem)21.5％(大鼠)。
表8：在10μM的CYP P450抑制值。在所测试的浓度，所有化合物导致对代谢活性的少于50％抑制。
Figure BDA0001553603060001152
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83.Animal experiments were performed under Home Office License incompliance with the Animals(Scientific Procedures)Act 1986 and approved bythe University of Edinburgh Ethics Committee.

Claims (22)

1.一种式I的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0002473913300000011
其中：
R1为(CH2)mNR11R12；
R2选自H、卤素、OR13、NHR13、C1-12烷基、C2-12烯基和C2-12炔基；
R3选自C1-12烷基、NHCO2R4、NHCONR5R6、NHCONH-C1-12烷基、NHCOR7、NH(CH2)n-C6-12芳基、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2R8，其中所述杂芳基是包含选自氧、氮或硫的一个或更多个杂原子的单环或双环C2-12芳香族环且任选地进一步被选自C1-12烷基的一个或更多个基团取代；
R4至R8和R13各自独立地选自C1-12烷基、C2-12烯基和C6-12芳基；
R11和R12各自独立地选自C1-12烷基和C2-12烯基；或R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成5或6元杂环烷基基团；
n、m、p和q各自独立地选自0、1和2。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中R11和R12为C1-12烷基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R11和R12与它们所附接的氮被连接在一起以形成5或6元杂环烷基基团。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R1选自NMe2、CH2NMe2、吡咯烷-1-基和哌啶-1-基。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R2选自H和C1-12烷氧基。
6.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R3选自NHCO2-C1-12烷基、NHCO-C1-12烷基、NH(CH2)n-C6-12芳基、NHCONH-C1-12烷基、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2-C1-12烷基。
7.根据权利要求5所述的化合物，其中R3选自NHCO2-C1-12烷基、NHCO-C1-12烷基、NH(CH2)n-C6-12芳基、NHCONH-C1-12烷基、(CH2)p-杂芳基和(CH2)qCO2-C1-12烷基。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R4至R8各自独立地为C1-12烷基。
9.根据权利要求5所述的化合物，其中R4至R8各自独立地为C1-12烷基。
10.根据权利要求6所述的化合物，其中R4至R8各自独立地为C1-12烷基。
11.根据权利要求7所述的化合物，其中R4至R8各自独立地为C1-12烷基。
12.根据权利要求1-4中任一项所述的化合物，其中R3选自Me、NHCO2-tBu、NHCOCH2C(Me)3、NHCH2苯基、NHCONH-tBu、CH2-(4-甲基-噁唑-2-基)和CH2CO2-tBu。
13.根据权利要求5所述的化合物，其中R3选自Me、NHCO2-tBu、NHCOCH2C(Me)3、NHCH2苯基、NHCONH-tBu、CH2-(4-甲基-噁唑-2-基)和CH2CO2-tBu。
14.根据权利要求8所述的化合物，其中R3选自Me、NHCO2-tBu、NHCOCH2C(Me)3、NHCH2苯基、NHCONH-tBu、CH2-(4-甲基-噁唑-2-基)和CH2CO2-tBu。
15.一种化合物，所述化合物选自以下：
Figure FDA0002473913300000031
Figure FDA0002473913300000041
Figure FDA0002473913300000051
以及其药学上可接受的盐。
16.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至15中任一项所述的化合物以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
17.根据权利要求1所述的化合物，用于在医学中使用。
18.根据权利要求1所述的化合物，用于在治疗癌症、或骨质疏松症、或神经学紊乱、或血管生成、或肺疾病、或转移性骨疾病中使用。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中所述神经学紊乱为阿尔茨海默病。
20.一种组合，所述组合包含根据权利要求1至15中任一项所述的化合物和另外的治疗剂。
21.根据权利要求16所述的药物组合物，所述药物组合物还包含第二治疗剂。
22.根据权利要求1至15中任一项所述的化合物在生产用于治疗癌症、或骨质疏松症、或神经学紊乱、或血管生成、或肺疾病、或转移性骨疾病的药物中的用途。
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