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CN107709334B - 新的氨基酸衍生物、其制备方法和包含它们的药用组合物 - Google Patents

新的氨基酸衍生物、其制备方法和包含它们的药用组合物 Download PDF

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CN107709334B CN201680039612.9A CN201680039612A CN107709334B CN 107709334 B CN107709334 B CN 107709334B CN 201680039612 A CN201680039612 A CN 201680039612A CN 107709334 B CN107709334 B CN 107709334B
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Abstract

本发明公开式(I)化合物，在式(I)中，R1、R2、R5、R6、R7、R12、X、Y、A、E和n如说明书中所定义。本发明还公开药物。

Description

新的氨基酸衍生物、其制备方法和包含它们的药用组合物
本发明涉及新的氨基酸衍生物、其制备方法和包含它们的药用组合物。
本发明化合物是新化合物，在细胞凋亡和癌症学领域具有非常有价值的药理学特性。
细胞凋亡或程序性细胞死亡是对胚胎发育和组织稳态维持具有至关重要作用的生理过程。
凋亡型细胞死亡涉及形态学改变(例如细胞核固缩、DNA片段化)以及生物化学现象(例如半胱氨酸蛋白酶的活化)，其能够导致细胞关键结构成分的损伤，诱导其解体和死亡。细胞凋亡过程的调节是复杂的并且涉及多种细胞内信号传导通路的激活或抑制(CoryS.等,Nature Review Cancer 2002,2,647－656)。
凋亡的失调涉及某些病理学。细胞凋亡的增加与神经退行性疾病有关，例如帕金森病、阿尔茨海默氏病和局部缺血。相反，细胞凋亡进行过程中的缺陷在癌症及其化学抗性的发展、自身免疫性疾病、炎性疾病和病毒感染中起重要作用。因此，细胞凋亡的缺乏是癌症的表型特征之一(Hanahan D.等,Cell 2000,100,57－70)。
Bcl-2家族的抗凋亡蛋白与许多病理学有关。在许多类型的癌症中均有Bcl-2家族的蛋白质参与其中的描述，例如结肠癌、乳腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、急性粒细胞白血病、胰腺癌等。Bcl-2家族抗凋亡蛋白的过度表达涉及肿瘤发生、对化疗的抗性以及癌症患者的临床预后。值得注意的是，抗凋亡Bcl-2家族成员Mcl-1在各种癌症中均有过度表达(Beroukhim R.等,Nature 2010,899－905)。因此，在治疗上需要能够抑制Bcl-2家族的蛋白质的抗凋亡活性的化合物。
除了是新化合物之外，本发明化合物具有促细胞凋亡特性，使其可用于与细胞凋亡缺陷有关的病理学中，例如用于治疗癌症以及免疫和自身免疫疾病。
更具体而言，本发明涉及式(I)化合物：
Figure BDA0001538919380000021
其中：
◆A代表
Figure BDA0001538919380000022
其中1与-NH-基团连接，2与芳族环连接，
◆E代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
◆X代表氮原子或C-R4基团，
◆Y代表氮原子或C-R3基团，
◆R1代表卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’、-SO2-烷基(C1-C6)，
◆R2、R3、R4和R5彼此互相独立表示氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’或-SO2-烷基(C1-C6)，或一对(R1,R2)的取代基与携有它们的碳原子一起形成5－7个环成员组成的芳族或非芳族环，其可以含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，应当理解，所形成的环可以被1－2个选自下列的基团取代：卤素、直链或支链(C1-C6)烷基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-NR11R11’、-烷基(C0-C6)-Cy1或氧代，
◆R6代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-S-(C1-C6)烷基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-O-Cy1、-烷基(C0-C6)-Cy1、-链烯基(C2-C6)-Cy1、-炔基(C2-C6)-Cy1、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-OR9、-O-C(O)-R9、-C(O)-NR9R9’、-NR9-C(O)-R9’、-NR9-C(O)-OR9’、-烷基(C1-C6)-NR9-C(O)-R9’、-SO2-NR9R9’或-SO2-烷基(C1-C6)，
◆R7代表氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、-CHRaRb、芳基、杂芳基、芳基烷基(C1-C6)或杂芳基烷基(C1-C6)，
◆R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、-Cy2、卤素原子、氰基、-C(O)-R11或-C(O)-NR11R11’，
◆R9和R9’彼此互相独立表示氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或一对(R9、R9’)的取代基与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的芳族或非芳族环，其除了氮原子外可以含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被一个代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基的基团取代，
◆R10代表-Cy3、-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4、-C(O)-NR9R9’、-NR9R9’、-OR9、-NR9-C(O)-R9’、-O-烷基(C1-C6)-OR9、-SO2-R9、-C(O)-OR9或-NH-C(O)-NH-R9，
◆R11和R11’彼此互相独立表示氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R12代表氢原子、羟基或羟基(C1-C6)烷基，
◆Ra代表氢原子或者直链或支链(C1-C6)烷基，
◆Rb代表-O-C(O)-O-Rc、-O-C(O)-NRcRc’或-O-P(O)(ORc)2，
◆Rc和Rc’彼此互相独立表示氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基，或一对(Rc,Rc’)的取代基与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的非芳族环，其除了氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被表示直链或支链(C1-C6)烷基的一个基团取代，
◆Cy1、Cy2、Cy3和Cy4彼此互相独立表示环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
◆n为等于0、1或2的整数，
应当理解：
-“芳基”是指苯基、萘基、联苯基，
-“杂芳基”是指任何由5－10个环成员组成的单-或双-环状基团，其具有至少一个芳族部分并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指任何单-或双-环状非芳族碳环基团，其含有3－10个环成员，
-“杂环烷基”是指任何单-或双-环状非芳族碳环基团，其含有3－10个环成员并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，其可以包括稠合、桥连或螺环环系，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基可能被1－4个选自下列的基团取代：任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的直链或支链(C2-C6)链烯基、任选取代的直链或支链(C2-C6)炔基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C1-C6)烷基-S-、羟基、羟基(C1-C6)烷基、氧代(或N-氧化物，如果适当的话)、硝基、氰基、-C(O)-OR’、-O-C(O)-R’、-C(O)-NR’R”、-O-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-(C＝NR’)-OR”、-O-P(O)(OR’)2、-O-P(O)(O-M+)2、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、三氟甲氧基、卤素或下式的己醛糖：
Figure BDA0001538919380000051
其中每个R’是独立的；
应当理解，所述R’和R”彼此互相独立表示氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，M+代表可药用的单价阳离子，
它们的对映体、非对映异构体和阻转异构体及其与可药用的酸或碱形成的加成盐。
优选，本发明涉及式(I)化合物，其中：
◆R1和R2彼此互相独立表示卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基，
或一对(R1,R2)的取代基与携有它们的碳原子一起形成由5－7个环成员组成的芳族环，其可以包含1－3个氮原子，应当理解，所形成的环可以被1－2个选自下列的基团取代：卤素、直链或支链(C1-C6)烷基或-烷基(C0-C6)-NR9R9’，
◆R3代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基或-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’，
◆R4和R5彼此互相独立表示氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基，
◆R6代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-烷基(C0-C6)-Cy1、-O-烷基(C1-C6)-R10或-C(O)-NR9R9’,
◆R7代表氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、-CHRaRb或杂芳基烷基(C1-C6)，
◆R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、-Cy2、卤素原子或-C(O)-R11，
◆R9和R9’彼此互相独立表示氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或一对(R9,R9’)的取代基与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的非芳族环，其除了氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被表示直链或支链(C1-C6)烷基的一个基团取代，
◆R10代表-Cy3或-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4，
◆R11代表直链或支链(C1-C6)烷基，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基可以被1－4个选自下列的基团取代：任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、羟基、羟基(C1-C6)烷基、氧代(或N-氧化物，如果适当的话)、-C(O)-OR’、-C(O)-NR’R”、-O-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-O-P(O)(OR’)2、-O-P(O)(O-M+)2、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、卤素或下式的己醛糖：
Figure BDA0001538919380000061
其中每个R’是独立的；
应当理解，所述R’和R”彼此互相独立表示氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，M+代表可药用的单价阳离子。
在可药用的酸中，可以提及但不加任何限定的是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、草酸、甲烷磺酸、樟脑酸等。
在可药用的碱中，可以提及但不加任何限定的是氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、叔-丁基胺等。
更具体的是，优选的式(I)化合物是其中n为等于1的整数的化合物。
在本发明的另一个实施方案中，有益的可能性由式(I-a)化合物组成：
Figure BDA0001538919380000071
其中A、E、R1、R2、R5、R6、R7、R12、X、Y和n如式(I)所定义。
阻转异构体为由于单键旋转受阻而产生的立体异构体，由于空间张力或其它参与的能量差异造成旋转障碍，该障碍足够高使得能够分离单个构象异构体。对于本发明的化合物，阻转异构体如下：
Figure BDA0001538919380000072
当X代表C-R4基团并且Y代表C-R3基团时，优选的阻转异构体为(5Sa)。
有利地是，选自R2、R3、R4和R5的基团中至少一个基团不表示氢原子。
优选，R12代表氢原子、羟基甲基或羟基乙基。更优选R12代表氢原子。
在本发明优选的化合物中，R1代表直链或支链(C1-C6)烷基或卤素原子。更优选，R1代表甲基、乙基、溴原子或氯原子。甚至更优选，R1代表甲基。
有利地是，R2代表卤素原子、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基。更优选，R2代表甲氧基、羟基、氟原子、溴原子或氯原子。甚至更优选，R2代表氯原子。
在本发明的某些优选的实施方案中，当一对(R1,R2)的取代基与携有它们的碳原子一起形成芳族环时，
Figure BDA0001538919380000082
代表
Figure BDA0001538919380000083
Figure BDA0001538919380000081
其中R13代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基或-烷基(C0-C6)-NR9R9’，其中R9和R9’如式(I)所定义，R14代表氢原子、卤素原子或直链或支链(C1-C6)烷基。
R13优选代表氢原子、甲基或-(CH2)m-NR9R9’，其中m为2或3的整数，R9和R9’代表甲基，或者一对(R9,R9’)的取代基与携带它们的氮原子一起形成吡咯烷基、哌啶基、吗啉基或4-甲基-哌嗪-1-基。
R14有利地代表氢原子、溴原子、碘原子、氯原子或甲基。R14优选在氮原子的β位被取代。
优选，X代表C-R4基团。在本发明的优选实施方案中，Y代表C-R3基团。R3有利地代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷氧基或-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’。R4优选代表氢原子。
在本发明的某些优选实施方案中，
Figure BDA0001538919380000091
代表
Figure BDA0001538919380000092
其中R1、R2、R9和R9’如式(I)所定义。
在本发明优选的化合物中，
Figure BDA0001538919380000093
代表
Figure BDA0001538919380000094
其中R9和R9’如式(I)所定义。
R5优选代表氢原子。
在一个有利的实施方案中，一对(R1,R5)的取代基是相同的，一对(R2,R4)的取代基也是相同的。在本发明优选的化合物中，一对(R1,R5)的取代基是相同的，代表(C1-C6)烷基，优选甲基，同时一对(R2,R4)的取代基是相同的，代表卤素原子，优选氯原子或氢原子。
在本发明的另一个实施方案中，E代表苯基、吡啶-2-基、环己基、吡唑-1-基、环戊基、吲哚-4-基、环丙基、吡啶-3-基、吲哚-3-基、萘-1-基、咪唑-4-基或吡啶-4-基。有利地是，E代表苯基。
在本发明优选的化合物中，R6代表氢原子；氟原子；氯原子；溴原子；甲基；三氟甲基；羟基；甲氧基；被卤素原子取代的线性(C1-C6)烷氧基、-C(O)-NR’R”基团或-NR’R”基团；氰基；硝基；氨基甲基；苄基；-O-烷基(C1-C6)-R10；-C(O)-NR9R9’。优选，R6代表甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基或-O-烷基(C1-C6)-R10。
在本发明的另一个实施方案中，有利的可能性由式(I-b)化合物组成：
Figure BDA0001538919380000101
其中R1、R2、R5、R6、R7、R12、X、Y、A和n如式(I)所定义。
在本发明的另一个实施方案中，有利的可能性由式(I-c)化合物组成：
Figure BDA0001538919380000102
其中R6、R7、R9、R9’、R12和A如式(I)所定义。
优选，R7代表氢原子、-CHRaRb基团、任选被取代的直链或支链(C1-C8)烷基或杂芳基烷基(C1-C6)基团。优选，R7代表-CHRaRb基团，其中Ra代表氢原子或甲基，Rb代表-O-C(O)-O-(C1-C8)烷基；-O-C(O)-O-环烷基；-O-C(O)-NRcRc’基团，其中Rc和Rc’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基，或者一对(Rc,Rc’)的取代基与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的非芳族环，其除了氮原子外可以包含1－3个选自氧和氮的杂原子；或-O-P(O)(OH)2基团。优选的R7基团如下：氢；甲基；乙基；(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基；-CHRaRb基团，其中Ra代表甲基，Rb代表-O-C(O)-O-CH2CH3基团或-O-C(O)-N(CH3)2基团。甚至更优选，R7代表氢。
在本发明优选的化合物中，R8代表直链或支链(C2-C6)炔基、芳基或杂芳基。更优选，R8代表丙-1-炔-1-基、苯基或呋喃-2-基。在更优选的实施方案中，R8代表丙-1-炔-1-基、4-氟苯基或5-氟呋喃-2-基。甚至更优选，R8代表4-氟苯基。
在本发明优选的化合物中，R9和R9’彼此互相独立代表直链或支链(C1-C6)烷基，或者一对(R9,R9’)的取代基与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的非芳族环，其除了氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被直链或支链(C1-C6)烷基取代。更优选，R9和R9’代表甲基，或者一对(R9,R9’)的取代基一起形成4-甲基-哌嗪基。
有利地是，R10代表-Cy3或-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4。优选，R10代表-Cy3或-Cy3-Cy4。
Cy3优选代表环烷基，特别是环戊基。在一个优选的实施方案中，Cy3代表芳基，特别是苯基。有利地是，Cy3代表杂芳基，特别是嘧啶基、吡唑基或吡啶基。更优选，Cy3代表嘧啶-4-基、吡唑-5-基或吡啶-2-基。在本发明优选的化合物中，Cy3代表嘧啶-4-基。在本发明的另一个实施方案中，Cy3代表杂芳基，其可以被下列基团取代：任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基或直链或支链(C1-C6)多卤代烷基。优选，Cy3代表杂芳基，其可以被下列基团取代：2,2,2-三氟乙氧基、2-甲氧基乙基、乙氧基；叔-丁基、乙基、正-丁基、2,2,2-三氟乙基或甲基。
Cy4优选代表苯基、吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基或吗啉基。更优选，Cy4代表苯基。
优选的其它本发明化合物为下列化合物，其中：
R10代表
Figure BDA0001538919380000111
其中p为0或1的整数，R15代表氢原子、羟基、任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-O-(CHR16-CHR17-O)q-R’基团、-O-P(O)(OR’)2基团、-O-P(O)(O-M+)2基团、-O-C(O)-NR18R19基团、二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷氧基、卤素原子或下式的己醛糖：
Figure BDA0001538919380000121
其中每个R’是独立的；
应当理解：
◆R’代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R16代表氢原子或(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，
◆R17代表氢原子或羟基(C1-C6)烷基，
◆R18代表氢原子或(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，
◆R19代表(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、-(CH2)r-NR9R9’基团或-(CH2)r-O-(CHR16-CHR17-O)q-R’基团，
◆q为1、2或3的整数，r为0或1的整数，
◆M+代表可药用的单价阳离子。
本发明的己醛糖优选为D-甘露糖。有利地是，R15代表甲氧基、2-甲氧基乙氧基或氟。优选，基团-(CH2)p-R15位于苯基的邻位。
在优选的本发明化合物中，可以提及的包括：
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-乙基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
-2-[(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
-2-[(1-叔-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
-N-[5-{3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
本发明还涉及式(I)化合物的制备方法，该方法的特征在于采用式(II-a)化合物作为原料：
Figure BDA0001538919380000151
其中Z代表溴或碘，A如式(I)所定义，其中1与氯原子连接，2与Z基团连接，
使得式(II-a)化合物与式(III)化合物偶合：
Figure BDA0001538919380000161
其中R6、R12、E和n如式(I)所定义，Alk代表直链或支链(C1-C6)烷基，获得式(IV)化合物：
Figure BDA0001538919380000162
其中R6、R12、A、E和n如式(I)所定义，Z和Alk如前文所定义，
使得式(IV)化合物与式(V)化合物进一步偶合：
Figure BDA0001538919380000163
其中R1、R2、R5、X和Y如式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或RB1和RB2与携带它们的氧一起形成任选甲基化的环，获得式(VI)化合物：
Figure BDA0001538919380000164
其中R1、R2、R5、R6、R12、X、Y、A、E和n如式(I)所定义，Alk如前文所定义，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解，获得羧酸，其可以任选与式R7’-OH的醇或式R7’-Cl的氯化化合物反应，其中R7’代表直链或支链(C1-C8)烷基、-CHRaRb基团、芳基、杂芳基、芳基烷基(C1-C6)基团或杂芳基烷基(C1-C6)基团，Ra和Rb如式(I)所定义，
获得式(I)化合物，其可以根据常规分离技术进行纯化，如果需要，将其转化为其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，任选根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解的是，在上述方法的过程中被认为是适当的任何时候，起始试剂或合成中间体的某些基团(羟基、氨基...)可以被保护，随后脱保护并功能化，根据合成的要求而定。
在本发明的另一个实施方案中，式(I)化合物可以采用可替代方法获得，该方法的特征在于采用式(II-b)化合物作为原料：
Figure BDA0001538919380000171
其中A如式(I)所定义，其中1与氯原子连接，2与碘原子连接，
使得式(II-b)化合物与式(V)化合物偶合：
Figure BDA0001538919380000172
其中R1、R2、R5、X和Y如式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或者RB1和RB2与携带它们的氧一起形成如下甲基化的环，
获得式(VII)化合物：
Figure BDA0001538919380000181
其中R1、R2、R5、A、X和Y如式(I)所定义，
使得式(VII)化合物与式(III)化合物进一步偶合：
Figure BDA0001538919380000182
其中R6、R12、E和n如式(I)所定义，Alk代表直链或支链(C1-C6)烷基，获得式(VI)化合物：
Figure BDA0001538919380000183
其中R1、R2、R5、R6、R12、X、Y、A、E和n如式(I)所定义，Alk如前文所定义，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解，获得羧酸，其可以任选与式R7’-OH的醇或式R7’-Cl的氯化化合物反应，其中R7’代表直链或支链(C1-C8)烷基、-CHRaRb基团、芳基、杂芳基、芳基烷基(C1-C6)基团或杂芳基烷基(C1-C6)基团，Ra和Rb如式(I)所定义，
获得式(I)化合物，其可以根据常规分离技术进行纯化，如果需要，将其转化为其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，任选根据常规分离技术将其分离成其异构体，
应当理解的是，在上述方法的过程中被认为是适当的任何时候，起始试剂或合成中间体的某些基团(羟基、氨基...)可以被保护，随后脱保护并功能化，根据合成的要求而定。
式(II-a)、(II-b)、(III)、(V)化合物、R7’-OH和R7’-Cl既可以获自商业，或者也可以由本领域技术人员采用文献中描述的常规化学反应获得。
本发明化合物的药理学研究显示它们具有促凋亡特性。在癌细胞中重新激活凋亡过程的能力在癌症以及免疫和自身免疫疾病的治疗中具有重大的治疗意义。
更特别地是，本发明化合物可以用于治疗化疗-或放疗-抗性的癌症。
在设想的癌症治疗中，可以提及但不加任何限定的是治疗膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、恶性血液病、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
本发明还涉及包含至少一种式(I)化合物与一或多种药学上可接受的赋形剂的药用组合物。
在本发明的药用组合物中，那些可以特别提及的是适用于口服、肠胃外、鼻内、经皮或透皮、直肠、经舌、眼部或呼吸道给药的药用组合物，尤其是片剂或糖衣丸、舌下片剂、小药囊、药包(paquets)、胶囊剂、锭剂(glossettes)、锭剂、栓剂、乳膏剂、软膏剂、皮肤凝胶剂以及可饮用或可注射的安瓿。
剂量根据患者的性别、年龄和体重、给药途径、治疗适应症的性质或任何相关的治疗而变化，其范围在一次或多次给药中为每24小时0.01mg至1g。
此外，本发明还涉及式(I)化合物与选自下列的抗癌药物的组合：基因毒性药物(genotoxic agent)、有丝分裂毒素、抗代谢物、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂和抗体，还涉及包含该类型组合的药用组合物以及它们在生产用于治疗癌症的药物中的用途。
有利的是，本发明涉及式(I)化合物与EGFR抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与mTOR/PI3K抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与MEK抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
优选，本发明涉及式(I)化合物与HER2抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
有利地是，本发明涉及式(I)化合物与RAF抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与EGFR/HER2抑制剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与紫杉烷的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物与蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂或烷化剂的组合，还涉及包含该类型组合的药用组合物。
式(I)化合物与抗癌药物的组合可以同时或依次给药。给药途径优选口服途径，相应的药用组合物可以允许活性成分的瞬时释放或延迟释放。此外，组合的化合物还可以以两种独立的药用组合物的形式给药，每种药用组合物含有一种活性成分，或者以其中活性成分混合在一起的单一药用组合物的形式给药。
本发明化合物还可以与放疗一起组合治疗癌症。
最后，本发明化合物可以连接到单克隆抗体或其片段上，或者可以连接到与单克隆抗体相关或不相关的支架蛋白上。
抗体片段应当被理解为Fv、scFv、Fab、F(ab')2、F(ab')、scFv-Fc型或双抗体的片段，其通常具有与它们所起源的抗体相同的结合特异性。根据本发明，可以通过诸如胃蛋白酶或木瓜蛋白酶等酶的消化和/或通过化学还原裂解二硫键的方法从抗体开始获得本发明的抗体片段。另一方面，本发明所包含的抗体片段可以通过本领域技术人员所熟知的遗传重组技术获得，或者通过例如自动肽合成仪进行肽合成获得，所述自动肽合成仪例如由Applied Biosystems等提供。
可以与单克隆抗体相关或不相关的支架蛋白应当理解为是指含有或不包含免疫球蛋白折叠并产生类似于单克隆抗体的结合能力的蛋白质。本领域技术人员知道如何选择蛋白质支架。更具体地说，已知的是，选择的此类支架应当具有如下多个特征(Skerra A.,J.Mol.Recogn.2000,13,167－187)：种系的良好保存、具有已知三维分子结构的稳健架构(例如，结晶学或NMR)、小尺寸、不存在或仅有低度的翻译修饰、易于生产、表达和净化。此类蛋白支架可以是但不限于选自下列的结构：纤连蛋白和优选的第十纤连蛋白III型结构域(FNfn10)、脂质运载蛋白、anticalin(Skerra A.,J.Biotechnol.2001,74(4):257－75)、源自葡萄球菌蛋白A的结构域B的蛋白质Z衍生物、硫氧还蛋白A或具有重复结构域的任何蛋白质，如“锚蛋白重复序列(ankyrin repeat)”(Kohl等,PNAS 2003,100(4),1700－1705)、“犰狳重复序列”(armadillo repeat)、“亮氨酸富集重复序列”或“四重三肽重复序列”。还可以提及的是源自毒素(例如蝎子、昆虫、植物或软体动物毒素)或神经元型一氧化氮合酶(PIN)的蛋白质抑制剂的支架衍生物。
下面的制备方法和实施例阐明了本发明，但不以任何方式对其加以限定。
通用方法
获自商业来源的所有试剂可以不经进一步纯化即可使用。无水溶剂可以获自商业来源并无需进一步干燥即可使用。
快速色谱在配备预填充的硅胶柱(
Figure BDA0001538919380000212
Rf Gold High Performance)的ISCO CombiFlash Rf 200i上进行。
薄层色谱采用涂有Merck Type 60F254硅胶的5×10cm板进行。
微波加热采用Anton Parr MonoWave或CEM
Figure BDA0001538919380000213
设备进行。
制备性HPLC纯化在Armen Spot液相色谱系统上进行，采用
Figure BDA0001538919380000211
10μMC18,250mM×50mM i.d.柱，流速为118mL min-1，UV二极管矩阵检测(210–400nm)，除非特别说明，采用25mM NH4HCO3水溶液和MeCN作为洗脱液。
分析型LC-MS：本发明化合物在配备Agilent 6140四极LC/MS以正离子或负离子电喷雾电离模式运行的Agilent HP1200上通过高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)进行定性。分子量范围为100至1350。平行UV检测波长为210nm和254nm。样品以1mM的ACN溶液或THF/H2O(1:1)溶液提供，5μL循环注射(loop injection)。LCMS分析在两台仪器上进行，其中之一采用碱性洗脱液进行，另一台采用酸性洗脱液。
碱性LCMS：Gemini-NX，3μm,C18,50mM×3.00mM i.d.柱，23℃，流速1mL min-1，采用5mM碳酸氢铵(溶剂A)和乙腈(溶剂B)，梯度自100％的溶剂A开始，经过不同/确定的时间以100％的溶剂B结束。
酸性LCMS：ZORBAX Eclipse XDB-C18，1.8μm,50mM×4.6mM i.d.柱，40℃，流速1mLmin-1，采用0.02％v/v甲酸水溶液(溶剂A)和0.02％v/v甲酸乙腈溶液(溶剂B)，梯度自100％的溶剂A开始，经过不同/确定的时间以100％的溶剂B结束。
1H-NMR测定在Bruker Avance III 500MHz光谱仪和Bruker AvanceIII 400MHz光谱仪上进行，采用DMSO-d6或CDCl3作为溶剂。1H NMR数据为δ值的形式，以百万分之几(ppm)给出，采用溶剂残留峰(DMSO-d6为2.50ppm，CDCl3为7.26ppm)作为内标。分裂模式指定如下：s(单峰)，d(双峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，quint(五重峰)，m(多重峰)，br s(宽单峰)，dd(双双重峰)，td(三双重峰)，dt(双三重峰)，ddd(双双双重峰)。
气相色谱和低分辨质谱的组合可以在Agilent 6850气相色谱和Agilent5975C质谱上进行，采用0.25μm HP-5MS涂层的15m×0.25mm柱和氦作为载气。离子源：EI+，70eV，230℃，四极:150℃，界面：300℃。
HRMS采用Shimadzu IT-TOF测定，离子源温度200℃,ESI+/-，电离电压：(+-)4.5kV。质量分辨率min.10000。
元素分析在Thermo Flash EA 1112元素分析仪上进行。
缩写列表
缩写 名称
2-Me-THF 2-甲基-四氢呋喃
Ac 乙酰基
Ad 金刚烷基
aq. 水的
AtaPhos 二(二-叔-丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯化钯(II)
BuPAd2 丁基-二(金刚烷-1-基)磷烷
cc. 浓的
DAST 二乙基氨基三氟化硫
dba 二亚苄基丙酮
DCM 二氯甲烷
DIPA 二异丙基胺
DMA 二甲基乙酰胺
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁
eq. 当量
Et 乙基
HILIC 亲水作用液相色谱
HMDS 六甲基二硅氮烷
iPr 异丙基
LDA 二异丙基氨化锂
Me 甲基
MeCN 乙腈
MTBE 甲基叔-丁基醚
MW 微波
NBS N-溴代琥珀酰亚胺
nBu n-丁基
NCS N-氯代琥珀酰亚胺
Ph 苯基
PtBu3 x HBF4 三叔-丁基四氟硼酸
Figure BDA0001538919380000231
PCy3 x HBF4 三环己基四氟硼酸
Figure BDA0001538919380000232
Q-Phos 1,2,3,4,5-五苯基-1’-(二-叔-丁基膦基)二茂铁
r.t. 室温
TBAF 四丁基氟化铵
tBu 叔-丁基
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TIPSCl 三异丙基甲硅烷基氯
XantPhos 4,5-二(二苯基膦基)-9,9-二甲基氧杂蒽
通用方法Ia：
将1eq.适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物、2eq.适当的氨基酸衍生物和2eq.K2CO3在tBuOH:水4:1(4mL/mmol)中混合，于回流温度下搅拌(或者，如果需要在MW反应器中于100℃搅拌)直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用水稀释，采用1M HCl溶液酸化(至pH＝1，或在碱性氨基存在下至pH＝6)，用EtOAc萃取，或者酸化后形成的沉淀通过过滤分离。在萃取纯化的情况下，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Ib：
将1eq.适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物、2eq.适当的氨基酸衍生物和3eq.K2CO3在DMSO(10mL/mmol)中混合，于50℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用水稀释，采用1M HCl溶液酸化(至pH＝1，或在碱性氨基存在下至pH＝6)，用EtOAc萃取，或者酸化后形成的沉淀通过过滤分离。在萃取纯化的情况下，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Ic：
将1eq.适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物、1.5eq.适当的氨基酸衍生物和1.5eq.Cs2CO3在DMSO(6mL/mmol)中混合，于70℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用水稀释，采用1M HCl溶液酸化(至pH＝1，或在碱性氨基存在下至pH＝6)，用EtOAc萃取，或者酸化后形成的沉淀通过过滤分离。在萃取纯化的情况下，合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IIa：
将1eq.适当的5-(或6)-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和3eq.适当的硼酸衍生物溶于DME(15mL/mmol)，然后加入5eq.K2CO3、0.2eq.Pd2dba3、0.4eq.nBuPAd2和水(5mL/mmol)，将混合物于60℃在MW反应器中搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后真空除去挥发物，残留物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IIb：
将1eq.适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和5eq.适当的硼酸衍生物溶于2-Me-THF(8mL/mmol)，然后加入5eq.K2CO3、0.1eq.Q-Phos和0.05eq.Pd2dba3，将混合物于80℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IIc：
将1eq.适当的5-(或6)-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和1.1eq.适当的硼酸衍生物溶于2-Me-THF(8mL/mmol)，然后加入1.1eq.Ag2CO3和0.1eq.Pd(PPh3)4，将混合物于100℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IId：
将1eq.适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和3eq.适当的硼酸衍生物溶于二氧六环:水2:1混合物(10mL/mmol)，然后加入2eq.Cs2CO3、5mol％Pd(OAc)2和0.2eq.PtBu3×HBF4，将混合物于120℃在MW反应器中搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物用1MHC溶液中和，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液真空浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IIIa：
将1eq.适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和4eq.适当的硼酸衍生物溶于二氧六环:水4:1混合物(10mL/mmol)中，然后加入2.2eq.Cs2CO3和0.1eq.Pd(dppf)Cl2，将混合物于40℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用水稀释，用DCM萃取。合并的有机相用水洗涤，经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物采用制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IIIb：
将1eq.适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和3eq.适当的硼酸衍生物溶于THF:水1:1混合物(10mL/mmol)中，然后加入3eq.Cs2CO3和0.1eq.AtaPhos，将混合物于100℃在MW反应器中搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发挥发物，残留物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IVa：
将1eq.制备4i溶于无水THF(5mL/mmol)并冷却至-78℃。在氩气环境中滴加LDA溶液(1.2eq.2M的THF、庚烷、EtPh溶液)，将混合物搅拌1.5小时。然后于-78℃加入1.2eq.适当的纯亲电子试剂或其溶液(溶于3mL/mmol的无水THF)，将混合物温热至室温。将其搅拌直到没有观察到进一步的转化。反应混合物通过小心地加入cc.NH4Cl溶液骤冷。将混合物用MTBE萃取，有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Va：
将1eq.适当的缩醛在2M HCl溶液(3mL/mmol)中于60℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物冷却至0℃，然后分次加入5.7eq.NaOH。采用10％K2CO3溶液将pH调节至8，然后分次加入2eq.硼氢化钠，保持温度低于5℃。加入后将混合物于0℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物用EtOAc萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Vb：
步骤A
于-78℃向1eq.适当的N-烷基吡唑的无水THF(1.5mL/mmol)溶液中滴加1.1eq.nBuLi。将混合物搅拌30分钟，然后温热至0℃，将其搅拌30分钟，然后再次冷却至-78℃。滴加1.1eq.DMF，然后将反应混合物温热至室温，将其搅拌过夜。将混合物用cc.NH4Cl溶液骤冷。分离相，水层用EtOAc萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。残留物无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。
步骤B
于-15℃向1eq.适当的粗品醛的EtOH(0.5mL/mmol)溶液中分次加入1.3eq.硼氢化钠，将反应混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物倒至碎冰上并搅拌16小时。过滤沉淀物，将滤液减压浓缩。分离油相，水层用EtOAc萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。如果需要，产物经快速色谱进一步纯化。
通用方法Vc：
向1.2eq.适当的脒盐和1eq.制备8a在无水甲醇(0.5mL/mmol)中的混合物中分次加入1.2eq.甲醇钠，将混合物于75℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。冷却反应混合物并减压浓缩。向残留物中加入水，将其用DCM萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Vd：
向1.2eq.适当的肼或肼盐酸盐和1eq.制备8a在无水甲醇(0.5mL/mmol)中的混合物中分次加入1.2eq.甲醇钠，将混合物于75℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物冷却并减压浓缩。向残留物中加入水，将其用DCM萃取。合并的有机相经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法Ve：
将1eq.适当的缩醛在1M HCl溶液(3mL/mmol)中于50℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物冷却至0℃，然后分次加入2.85eq.固体NaOH。采用10％K2CO3溶液将pH调节至8，然后分次加入2eq.硼氢化钠，保持温度低于5℃，于0℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物用EtOAc萃取,合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法VI：
在氮气环境中，将1eq.适当的酚衍生物、2eq.适当的醇衍生物和3eq.PPh3溶于无水甲苯(7mL/mmol)，于室温下加入3eq.偶氮二甲酸二-叔-丁基酯。然后将混合物于50℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。真空除去挥发物，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc(如果需要加上MeOH)作为洗脱液。如果需要，产物通过制备性反相色谱进一步纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法VII：
将1eq.适当的酯衍生物溶于THF(15mL/mmol)，然后加入10eq.LiOH×H2O和水(15mL/mmol)。将混合物于室温下搅拌(或如果需要于60℃搅拌)直到没有观察到进一步的转化。将采用1M HCl溶液pH调节至6，然后将混合物用盐水洗涤，用DCM或EtOAc萃取。有机层经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法VIII：
在氮气环境中，将1eq.适当的吲哚衍生物和2eq.适当的醇衍生物溶于无水甲苯(8mL/mmol)，将混合物冷却至0℃，然后加入2eq.2-(三丁基-亚膦酰基)乙腈。然后将混合物加热至100℃并搅拌直到没有观察到进一步的转化。真空除去挥发物，然后加入水(4mL/mmol)和2M NaOH溶液(1mL/mmol)，将混合物搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物采用1M HCl溶液酸化至pH＝6，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4,采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液，除非另有说明。
通用方法IXa：
步骤A
将1eq.制备9b溶于无水甲苯(8mL/mmol)，然后于室温下加入1.18eq.PPh3、1.1eq.适当的醇衍生物和1.18eq.偶氮二甲酸二乙酯(40％的甲苯溶液)。将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。过滤获得的沉淀物，滤液用10％KHSO4溶液、水、sat.NaHCO3溶液和水顺序洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。将残留物与乙醚(5mL/mmol)一起搅拌，过滤不溶物，将滤液减压浓缩，获得粗品产物。
步骤B
将步骤A的产物采用10eq.HCl溶液(4.9M的MeOH溶液)处理，将其于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物减压浓缩。将残留物在冷EtOAc和冰冷的水之间分配，分离相，有机相用冰冷的5％KHSO4溶液萃取。合并的水相采用固体Na2CO3碱化，产物用EtOAc萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，获得目标产物的甲酯。
步骤C
将1eq.获自步骤B的甲酯溶于MeOH(9mL/mmol)，然后加入1.05eq.NaOH和水(1mL/mmol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压除去甲醇，混合物采用1M HCl溶液中和，然后将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，获得O-烷基化的氨基酸衍生物，其无需进一步纯化可以直接使用。
通用方法IXb：
步骤A
将1eq.制备9b溶于无水DMF(10mL/mmol)中，于室温下加入4eq.K2CO3和2eq.适当的烷基化试剂。将混合物于50℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物用水稀释，然后用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和甲醇作为洗脱液，除非另有说明。
步骤B和步骤C与通用方法IXa所述方法相同。
制备1a：5-溴-4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：6-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向配备机械搅拌器、温度计和回流冷凝器的2L圆底烧瓶中加入433mL乙酸、13mL硫酸和87mL水的溶液。向该搅拌的溶液中加入69.3g3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.46mol)、51.9g高碘酸(0.23mol)和104g碘(0.41mol)，将其加热至60℃1小时。将获得的悬浮液冷却至室温，过滤，用乙酸和水(5:1)的混合物洗涤，然后用乙醚洗涤。将获得的米黄色结晶固体空气干燥。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.57(br s,1H),8.09(s,1H),7.65(s,1H)
步骤B：4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
向配备机械搅拌器、温度计和回流冷凝器和CaCl2-管的1L圆底烧瓶中加入113mL磷酰氯和35mL N,N-二甲基苯胺(0.29mol)。5分钟内向混合物中分次加入75.54g的6-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.27mol)。将反应混合物于105℃搅拌1小时。将获得的悬浮液冷却至10℃，过滤，用己烷洗涤。将粗品产物加入冰水中并搅拌10分钟，过滤，用冷水、乙醚洗涤，空气干燥。获得米黄色结晶固体。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.89(s,1H),7.98(s,1H)
步骤C：制备1a
向配备机械搅拌器、温度计和鼓泡器的2L圆底烧瓶中加入600mL乙腈。加入84.9g4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶(0.29mol)、50.9g NBS(0.29mol)和8.5mL四氟硼酸乙醚复合物。将反应混合物于室温下搅拌16小时。向混合物中分三次加入22.9g(0.12mol)NBS。将悬浮液冷却至0℃并再搅拌1小时，过滤沉淀物，用乙腈洗涤，空气干燥。获得为米黄色结晶固体的产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.88(s,1H)
制备1b：4-氯代-5,6-二碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：5,6-二碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
向充分搅拌的61.3g的3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(396mMol)的浆液中加入92.4g高碘酸(405mMol)、1L乙酸、200mL水、6mL的浓硫酸和203g碘(799mMol)。将反应混合物加热至110℃并搅拌3小时。将悬浮液冷却至室温，然后加入940mL乙醚，将混合物于10℃再搅拌30分钟。过滤沉淀，用乙醚和乙醇的2:1混合物(100mL)洗涤，最后用乙醚洗涤(3×250mL)，然后将其空气干燥，获得为褐色粉末的产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.60(brs,1H),8.13(s,1H)
步骤B：制备1b
向充分搅拌的180g的5,6-二碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(445mMol)在2.5L磷酰氯中的浆液中加入64mL的N,N-二甲基苯胺。将反应混合物加热至105℃并搅拌1.5小时。将获得的悬浮液冷却至室温，加入1.5L己烷，将其再搅拌20分钟。过滤沉淀，用己烷洗涤(3×500mL)和水(3×100mL)洗涤，然后空气干燥，获得为灰色结晶固体的产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.88(s,1H)
制备1c：4-氯代-5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
将52.8g制备1b(125mMol)溶于400mL无水THF，冷却至0℃.15分钟内加入100mL的tBuMgCl(200mMol,2M的乙醚溶液)。然后加入50mL水，移出溶液并减压浓缩。将粗品产物在乙腈和水(3:1)的混合物中超声，然后通过过滤收集。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.95(s,1H),8.45(s,1H)
制备2a：4-氯代-6-乙基-5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：6-乙基-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将701g的2-氨基-5-乙基-噻吩-3-羧酸乙酯(3.52mol)和2200mL甲酰胺的混合物加热至200℃，蒸馏除去低沸点溶剂。2小时后，加入另一份250mL甲酰胺，将混合物于相同温度下再搅拌1小时，然后于室温下搅拌16小时。将获得的混合物倒入7.5L水中，过滤沉淀，用1.5L甲苯和3L水洗涤，然后空气干燥获得为棕色结晶固体的产物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.40(br s,1H),8.05(s,1H),7.11(t,1H),2.85(qd,2H),1.27(t,3H)
步骤B：6-乙基-5-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将301g的6-乙基-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.67mol)、847g碘(3.34mol)、1040g硫酸银(3.34mol)和1.7L乙醇的混合物于室温下搅拌3天。过滤获得的沉淀物，用乙醇(3×400mL)洗涤。采用下列方法从滤饼中洗脱产物：将滤饼与800mL DMF一起于50℃搅拌1小时，然后过滤悬浮液。将该顺序重复6次。将合并的有机层蒸发至干，获得为褐色结晶固体的产物。
步骤C：制备2a
将搅拌的880mL磷酰氯和102mL的N,N-二甲基苯胺的混合物加热至95℃，于此温度下快速加入220g的6-乙基-5-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.719mol)，然后搅拌15分钟。将反应混合物冷却至80℃，倒入搅拌的水(1L)、碎冰(2kg)和DCM(700mL)的混合物中。将获得的混合物再搅拌30分钟，同时保持温度低于20℃。分离相，无机层用DCM萃取(100mL)，有机层用水(100mL)洗涤。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩，获得为褐色结晶固体的产物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.79(s,1H),3.02(q,2H),1.39(t,3H)
制备2b：5-溴-4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将75.08g制备1a(200mMol)、53.63g的2-(4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(240mMol)、130g碳酸铯(400mMol)、2.245g的Pd(OAc)2(10mMol)和8.50g的tBuX-Phos(20mMol)置于2L烧瓶中。加入600mL的THF和200mL水，然后在氩气环境中于70℃搅拌过夜。蒸发THF，然后通过过滤收集产物。将粗品产物在250mL乙腈中超声，再次过滤。然后制备2b在EtOH/THF(2:1)中结晶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.02(s,1H),7.80-7.77(m,2H),7.47-7.43(m,2H)
制备2c：4-氯代-5-碘-6-(丙-1-炔基)-噻吩并[2,3-d]嘧啶
将42.24g制备1b(100mMol)、3.509g的Pd(PPh3)2Cl(5mMol)和1.904g的CuI(10mMol)溶于400mL的DIPA中，然后向反应混合物中通入丙炔，将其于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发挥发物，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷/EtOAc作为洗脱液。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.92(s,1H),2.25(s,3H)
制备2d：4-氯代-5-碘-6-异丙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：6-异丙基-5-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将2.858g(14.7mMol)6-异丙基-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮、7.468g(29.4mMol)碘、9.175g(29.4mMol)硫酸银和55mL乙醇的混合物于室温下搅拌3天。将混合物用Et2O稀释，过滤获得的沉淀物，其无需进一步纯化可以直接使用。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.49(br s,1H),8.11(s,1H),3.35(m,1H,被H2O信号掩盖),1.28(d,6H)
MS(M-H)：319.0
步骤B：制备2d
将15mL(161mMol)磷酰氯和1.9mL(14.7mMol)N,N-二甲基苯胺的混合物加热至95℃，快速加入25.9g(14.7mMol)6-异丙基-5-碘-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.719mol)，然后于此温度下再搅拌15分钟。将反应混合物冷却至80℃，倒入搅拌的冰水(300g)和EtOAc(200mL)的混合物中。将获得的混合物再搅拌30分钟，同时保持温度低于20℃。分离相，无机层用EtOAc萃取(100mL)，有机层用水和NaHCO3溶液洗涤。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，将滤液减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAC作为洗脱液，获得目标产物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.78(s,1H),3.63(七重峰,1H),1.41(d,6H)
MS(M+H)：339.0
制备3a：(2R)-2-[(6-乙基-5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-3-苯基-丙酸
采用通用方法Ia，制备2a作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得制备3a。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.44(s,1H),7.45(d,1H),7.30-7.20(m,5H),5.07(m,1H),3.35(dd,1H),3.16(dd,1H),2.82(q,2H),1.22(t,3H)
HRMS C17H16IN3O2S的计算值：453.0008；实测值：454.0064(M+H)
制备4a：4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIa，制备1c作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B4作为适当的硼酸衍生物，通过快速色谱纯化产物，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.98(s,1H),7.97(s,1H),7.22(d,1H),7.09(s,1H),4.25-4.16(m,2H),2.76(t,2H),2.54(br s,4H),2.32(br s,4H),2.14(s,3H),2.06(s,3H)
步骤B：制备4a
将10.935g的4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶(25mMol)溶于250mL无水THF，冷却至-78℃。在氩气环境中，滴加25mL的LDA溶液(50mMol,2M的THF、庚烷、乙基苯溶液)，将混合物搅拌15分钟。然后于-78℃加入12.69g(50mMol)碘，将混合物温热至室温。然后将混合物用EtOAc稀释，用NH4Cl溶液洗涤，然后用Na2S2O3溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得制备4a。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.93(s,1H),7.15(d,1H),7.13(d,1H),4.22(t,2H),2.77(t,2H),2.56(br s,4H),2.34(br s,4H),2.16(s,3H),2.00(s,3H)
制备4b：4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIa，制备4a作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得制备4b。MS：(M+H)＝503.0
制备4c：4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIIa，制备4a作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得制备4c。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.93(s,1H),7.24(d,1H),7.18(d,1H),5.92(dd,1H),5.68(t,1H),4.23(t,2H),2.79(t,2H),2.58(br s,4H),2.38(br s,4H),2.19(s,3H),2.05(s,3H)
HRMS C24H23N4O2FSCl2计算值：520.0903；实测值：521.0972(M+H)
制备4d：2-氯代-4-(4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯酚
步骤A：[2-氯代-4-(4-氯代噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷
采用通用方法IIa，制备1c作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B3作为适当的硼酸衍生物，获得[2-氯代-4-(4-氯代噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.95(s,1H),7.98(s,1H),7.13(d,1H),6.91(d,1H),2.05(s,3H),1.40-1.29(m,3H),1.10(dd,18H)
步骤B：[2-氯代-4-(4-氯代-6-碘噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷
将33.7g的[2-氯代-4-(4-氯代噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷(72mMol)溶于300mL无水THF，冷却至-78℃。在氩气环境中滴加43.2mL的LDA溶液(86.4mMol,2M的THF、庚烷、乙基苯溶液)，将混合物搅拌15分钟。然后于-78℃加入23.8g碘(93.7mMol)，将混合物温热至室温。然后将混合物用EtOAc稀释，用NH4Cl溶液洗涤，然后用Na2S2O3溶液洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.91(s,1H),7.05(d,1H),6.97(d,1H),1.99(s,3H),1.39-1.30(m,3H),1.10(dd,18H)
步骤C：制备4d
将10.0g的[2-氯代-4-(4-氯代-6-碘噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷(16.85mMol)溶于100mL无水THF，加入18.5mL的TBAF溶液(18.5mMol,1M的THF溶液)，将混合物于室温下搅拌10分钟。然后将混合物用EtOAc稀释，用1M HCl溶液和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备4d。HRMS C13H7Cl2IN2OS计算值：435.8701，实测值：436.8780(M+H)
制备4e：2-[2-氯代-4-(4-氯代-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基)-3-甲基-苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺
采用通用方法VI，制备4d作为适当的苯酚衍生物，N,N-二甲基乙醇胺作为适当的醇，获得制备4e。S(M+H)：508.0
制备4f：2-氯代-4-[4-氯代-6-(3-噻吩基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯酚
采用通用方法IIIa，制备4d作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，噻吩-3-硼酸频哪醇酯作为适当的硼酸衍生物，获得制备4f。MS(M+H)：393.0
制备4g：4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(3-噻吩基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法VI，制备4f作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇,获得制备4g。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.94(s,1H),7.60(dd,1H),7.56(dd,1H),7.19(d,1H),7.12(d,1H),6.79(dd,1H),4.21(t,1H),2.77(t,1H),2.56(br,4H),2.33(br,4H),2.15(s,3H),2.04(s,3H)
HRMS C24H24Cl2N4OS2计算值：518.0769；实测值：519.0852(M+H)
制备4h：4-[2-[2-氯代-4-[4-氯代-6-(3-噻吩基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]乙基]吗啉
采用通用方法VI，制备4f作为适当的苯酚衍生物，2-吗啉代乙醇作为适当的醇,获得制备4h。
制备4i：4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：2-氨基-4-(1-萘基)噻吩-3-甲酸乙酯
将50.00g的1-(1-萘基)乙酮(293.8mMol)、43.66g的氰基乙酸乙酯(386.0mMol)、18.84g硫(587.5mMol)、8.4mL的AcOH和38.39g吗啉溶于300mL EtOH，于60℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。真空除去挥发物，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得2-氨基-4-(1-萘基)噻吩-3-甲酸乙酯。HRMS C17H15NO2S计算值：297.0823；实测值：298.0891(M+H)
步骤B：5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将9.40g的2-氨基-4-(1-萘基)噻吩-3-甲酸乙酯(31.6mMol)溶于45mL甲酰胺，于200℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物冷却至室温，倒入水中。过滤沉淀的固体，用水洗涤，然后干燥，获得5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮。HRMS C16H10N2OS计算值：278.0514；实测值：279.0582(M+H)
步骤C：制备4i
将8.50g的5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(30.5mMol)、4.07g的N,N-二甲基苯胺(33.6mMol)和22.8mL三氯氧磷(244mMol)于100℃搅拌1小时。将混合物冷却至室温，倒入搅拌的冰水中。过滤沉淀的固体，在乙腈中重结晶，获得制备4i。HRMS C16H9N2SCl计算值：296.0175；实测值：297.0255(M+H)
制备4j：4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIb，制备2a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3-氯代-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得制备4j。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.89(s,1H),7.55(dd,1H),7.33(t,1H),7.23(dd,1H),2.65(m,2H),2.03(s,3H),1.17(t,3H)
HRMS C15H12Cl2N2S计算值：322.0098；实测值：323.0164(M+H)
制备4k：4-氯代-6-乙基-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIb，制备2a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，1-萘硼酸新戊二醇酯作为适当的硼酸衍生物，获得制备4k。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.91(s,1H),8.07(dd,1H),8.03(dm,1H),7.63(dd,1H),7.55(tm,1H),7.51(dd,1H),7.44(tm,1H),7.33(dm,1H),2.61(q,2H),1.13(t,3H)
HRMS C18H13ClN2S计算值：324.0488；实测值：325.0562(M+H)
制备4l：4-氯代-6-甲基-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IVa，甲基-碘作为适当的亲电子试剂，获得制备4l。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.90(s,1H),8.04(dd,2H),7.63(dd,1H),7.54(td,1H),7.49(dd,1H),7.43(td,1H),7.32(d,1H),2.28(s,3H)
MS(M+H)：311.0
制备4m：[4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]甲醇
步骤A：4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛
采用通用方法IVa，DMF作为适当的亲电子试剂，获得4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：9.65(s,1H),9.00(s,1H),8.07(d,1H),7.99(d,1H),7.68-7.52(m,3H),7.47(t,1H),7.33(d,1H)
步骤B：制备4m
将4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛溶于THF:MeOH 1:1(4mL/mmol)，于0℃加入3eq.NaBH4。将混合物搅拌10分钟，然后用1M柠檬酸骤冷。将混合物用DCM萃取，用碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，将滤液真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备4m。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.92(s,1H),8.06(d,1H),8.03(d,1H),7.62(m,1H),7.58-7.49(m,2H),7.44(m,1H),7.35(d,1H),5.99(t,1H),4.54(dd,1H),4.33(dd,1H)
MS(M+H)：327.0
制备4n1和制备4n2：1-[4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]乙醇
采用通用方法IVa，乙醛作为适当的亲电子试剂，获得作为非对映体混合物的粗品产物，顺序通过连续快速色谱法分离，采用DCM-丙酮和庚烷-MTBE作为洗脱液。非对映体对的洗脱顺序在两个洗脱系统中是相同的。获得制备4n1，是较早洗脱的非对映异构体(外消旋体)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.85(s,1H),7.99(d,1H),7.95(d,1H),7.60-7.49(m,2H),7.46-7.34(m,3H),4.84(m,1H),2.06(d,1H)1.53(d,3H)
MS(M+H)：341.0
获得制备4n2，为较晚洗脱的非对映异构体(外消旋体)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.85(s,1H),7.99(d,1H),7.94(d,1H),7.60-7.49(m,2H),7.46(dd,1H)7.43-7.37(m,1H),7.27(overlap,1H),4.98(m,1H),2.14(d,1H)1.35(d,3H)
MS(M+H)：341.0
制备4o：1-[4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]乙酮
将157mg戴斯马丁氧化剂(0.37mMol)溶于2mL DCM，然后加入制备4n1和制备4n2的混合物(120mg,0.35mMol，溶于10mL DCM中)，将混合物搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用DCM稀释，用NaOH和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备4o。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：9.09(s,1H),8.16(dd,1H),8.08(d,1H),7.72-7.65(m,2H),7.62-7.57(m,1H),7.52-7.43(m,2H),1.71(s,3H)
MS(M+H)：339.0
制备4p：2-[4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]丙-2-醇
采用通用方法IVa，丙酮作为适当的亲电子试剂，获得制备4p。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.80(s,1H),7.98(d,1H),7.92(d,1H),7.59-7.46(m,2H),7.46-7.34(m,2H),7.30(d,1H),2.53(br s,1H),1.54(s,3H),1.21(s,3H)
MS(M+H)：355.0
制备4q：4-氯代-6-异丙基-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：6-异丙基-5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将250mg制备4p(0.705mMol)和1.75mL的Et3SiH(10.9mMol)置于烧瓶中，采用10mL的TFA于-10℃处理。然后将混合物于50℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后混合物用DCM稀释，用固体K2CO3和NaHCO3溶液中和。分离相后，有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩，获得6-异丙基-5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮，为粗品中间体。MS(M+H)：321.0
步骤B：制备4q
在氩气环境中，将2mL磷酰氯和0.161mL的N,N-二甲基苯胺(1.27mMol)置于烧瓶中，5分钟内向混合物中分次加入1.22g的6-异丙基-5-(1-萘基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮。将反应混合物于100℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物冷却至室温，倒入搅拌的冰水中。获得水性介质通过小心地加入固体NaHCO3中和。气体溢出停止后，产物用DCM萃取三次。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备4q。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：8.80(s,1H),7.97(d,1H),7.94(d,1H),7.57(dd,1H),7.54-7.49(m,1H),7.42-7.37(m,2H),7.34(d,1H),3.02(七重峰,1H),1.31(d,3H),1.20(d,3H)
MS(M+H)：339.0
制备4r：4-氯代-6-(二氟甲基)-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将0.250g的4-氯代-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-甲醛(制备4m合成中步骤A中间体,0.77mMol)溶于7mL DCM，然后加入270μlDAST(1.16mMol)。将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用DCM稀释，用水洗涤，再用NaHCO3溶液和盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备4r。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ：8.97(s,1H),8.04(d,1H),7.97(d,1H),7.62-7.54(m,2H),7.49-7.43(m,2H),7.28(d,1H),6.47(t,1H)
MS(M+H)：347.0
制备4s：4-氯代-6-碘-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IVa，碘作为适当的亲电子试剂，获得制备4s。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.94(s,1H),8.10(dm,1H),8.05(dm,1H),7.66(dm,1H),7.56(tm,1H),7.48(dd,1H),7.44(tm,1H),7.31(dm,1H)
HRMS C16H8N2SC lI计算值：421.9141；实测值：422.9211(M+H)
制备4t：4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIb，制备1c作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3-氯代-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.89(s,1H),7.47(dd,1H),7.43(s,1H),7.20(t,1H),7.14(dd,1H),2.14(s,3H)
步骤B：制备4t
采用通用方法IVa，4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶代替制备4i，碘作为适当的亲电子试剂，获得制备4t。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.82(s,1H),7.52(dd,1H),7.25(t,1H),7.05(dd,1H),2.09(s,3H)
制备4u：4-氯代-5-(3-氯代-2-甲基-苯基)-6-异丙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIb，制备2d作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3-氯代-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得制备4u。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.90(s,1H),7.56(dd,1H),7.34(t,1H),7.29-7.22(m,1H),2.94(七重峰,1H),2.04(s,3H),1.26(d,3H),1.22(d,3H)
HRMS C16H14N2SCl2计算值：336.0255；实测值：337.0335(M+H)
制备4v：4-氯代-6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将0.664g制备2a(2.0mMol)、0.400g的1H-吲哚-4-基硼酸(1.2eq,2.4mMol)、44.9mg的Pd(OAc)2(10mol％,0.2mMol)、152mg的PCy3×HBF4(20mol％,0.4mMol)、1.96g的Cs2CO3(3.0eq,6.0mMol)在7.3mL二甲氧基乙烷和7.3mL水中的混合物在微波反应器中于100℃加热直到没有观察到进一步的转化。粗品反应混合物通过硅藻土垫过滤，用2×10mLMTBE和2×10mL水洗涤。分离两层滤液，有机层用盐水洗涤，然后经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。残留物通过制备性反相色谱纯化，采用水(含有0.1％TFA)和乙腈作为洗脱液，获得制备4v。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.22(br s,1H),8.87(s,1H),7.49(dm,1H),7.32(m,1H),7.19(dd,1H),6.95(dm,1H),5.96(m,1H),2.67(m,2H),1.14(t,3H)
HRMS计算值C16H12ClN3S：313.0440；实测值：314.0508(M+H)
制备4w：4-氯代-5-(1-萘基)-6-乙烯基-噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIc，制备4s作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，乙烯基硼酸频哪醇酯作为适当的硼酸衍生物，获得制备4w。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.95(s,1H),8.09(d,1H),8.05(d,1H),7.65(dd,1H),7.56(t,1H),7.52(dd,1H),7.45(t,1H),7.35(d,1H),6.34(dd,1H),5.90(d,1H),5.45(d,1H)
HRMS C18H11ClN2S计算值：322.0331；实测值：323.0415(M+H)
制备4x：4-氯代-5-(1-萘基)-6-[(E/Z)-丙-1-烯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：5,5-二甲基-2-[(Z/E)-丙-1-烯基]-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷
向0.172g(Z)-丙-1-烯-1-基硼酸(2.0mMol,9:1Z/E异构体混合物)和0.208g新戊二醇(2.0mMol)的6mL 2-Me-THF的溶液中加入20mgAmberlyst 15H+离子交换树脂，将其于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。在CDCl3溶液中通过1H-NMR测定监测转化。将混合物通过硅藻土垫过滤，用2×3mL 2-Me-THF洗涤，将滤液真空浓缩。获得的粗品纯度足以用于下一步骤，NMR测定为Z/E异构体的87:13混合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.57-6.43(m,1H),5.39-5.27(dd,1H),3.67(s,4H),1.95-1.83(dd,3H),0.97(s,6H)
步骤B：制备4x
采用通用方法IIc，制备4s作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，5,5-二甲基-2-[(Z/E)-丙-1-烯基]-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷(Z/E-混合物,步骤A)作为适当的硼酸衍生物，获得制备4x，为Z/E异构体的63:37混合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.95-8.90(s,1H),8.11-8.06(m,1H),8.06-8.01(m,1H),7.67-7.60(m,1H),7.58-7.52(m,1H),7.52-7.48(m,1H),7.46-7.40(m,1H),7.36-7.29(m,1H),6.45-5.90(m,1H),6.10-6.04(m,1H),2.06-1.72(dd,3H)
HRMS C19H13ClN2S计算值：336.0488；实测值：337.0541(M+H)
制备4y：4-氯代-6-异丙烯基-5-(1-萘基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIc，制备4s作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-异丙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得制备4y。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.83(s,1H),7.96(d,1H),7.92(d,1H),7.55-7.37(m,5H),5.23(m,1H),5.12(m,1H),1.65(dd,3H)
HRMS C19H13ClN2S计算值：336.0488；实测值337.0551(M+H)
制备4z：4-氯代-5-(1-萘基)-6-[(E)-丙-1-烯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶
步骤A：5,5-二甲基-2-[(E)-丙-1-烯基]-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷
向0.172g(E)-丙-1-烯-1-基硼酸(2.0mMol)和0.208g新戊二醇(2.0mMol)的6mL2-Me-THF溶液中加入20mg Amberlyst 15H+离子交换树脂，将其于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。在CDCl3溶液中通过1H-NMR测定监测转化。将混合物通过硅藻土垫过滤，用2×3mL2-Me-THF洗涤，将滤液真空浓缩。获得的粗品的纯度足以用于下一步骤。其仅含有E-立体异构体。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：6.57(m,1H),5.39(dd,1H),3.63(s,4H),1.83(dd,3H),0.97(s,6H)
步骤B：制备4z
采用通用方法IIcIIIb，制备4s作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物和5,5-二甲基-2-[(E)-丙-1-烯基]-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷(步骤A)作为适当的硼酸衍生物，获得制备4z。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.90(s,1H),8.09(d,1H),8.04(d,1H),7.64(dd,1H),7.58-7.53(m,1H),7.50(dd,1H),7.44(m,1H),7.34(d,1H),6.45(m,1H),6.10-6.03(m,1H),1.72(dd,3H)
HRMS C19H13ClN2S计算值：336.0488；实测值：337.0550(M+H)
制备5a：(2R)-2-[[5-(3-氯代-2-甲基-苯基)-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸
采用通用方法Ib，制备4t作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，合成制备5a。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA溶液和乙腈作为洗脱液，获得制备5a，为非对映异构体的1:1混合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:13.15(br s,1H),8.42-8.41(s,1H),7.62-7.54(d,1H),7.39-7.17(t,1H),7.21-7.01(m,d,1H),7.21(m,4H),6.82-6.79(d,1H),5.15-5.11(d,1H),4.82-4.76(q,1H),3.23-3.14(dd,1H),2.73-2.67(dd,1H),2.02-1.80(s,3H)
HRMS C22H17N2O2SClI计算值：548.9775；实测值：549.9842和549.9864(M+H)
制备5b：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法Ib，制备4a作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A1作为适当的氨基酸衍生物，随后通过HILIC纯化，获得制备5b，为后洗脱的非对映异构体。MS：(M+H)＝802.0
制备5c：(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[(2-乙基吡唑-3-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法Ib，制备4a作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A7作为适当的氨基酸衍生物，通过HILIC纯化，获得制备5c，后洗脱的非对映异构体。MS：(M+H)＝816.0
制备6a：(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法Ib，制备2b作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得制备6a，通过过滤分离。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:12.90(br s,1H),9.65(br s,1H),8.41(s,1H),7.70(m,2H),7.45-7.34(m,3H),7.18(dd,1H),7.04(td,1H),6.80(d,1H),6.72(t,1H),4.96(m,1H),3.31(dd,1H),3.08(dd,1H)
MS(M+H)：488.0
制备6b：(2R)-3-(2-羟基苯基)-2-[(5-碘-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]丙酸
采用通用方法Ib，制备2c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得制备6b。该产物通过过滤而非色谱法分离。MS：(M+H)＝480.0
制备6c：(2R)-2-[(6-乙基-5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
将3.246g制备2a(10mMol)、3.70g的[(1R)-1-苄基-2-甲氧基-2-氧代-乙基]氯化铵(17mMol)和13.03g的Cs2CO3(40mMol)溶于15mL DMSO，于室温下、氮气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物采用2M HCl溶液酸化至pH＝1，用2×300mL EtOAc萃取。合并的有机相用NaHCO3溶液洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备6c。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：8.39(s,1H),7.33(d,1H),7.30(m,2H),7.25-7.22(m,3H),5.11(m,1H),3.69(s,3H),3.33(dd,1H),3.18(dd,1H),2.82(q,2H),1.23(t,3H)
HRMS C18H18IN3O2S计算值：467.0164；实测值：468.0242(M+H)
制备7a：(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
步骤A：(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法IId，制备6a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B4作为适当的硼酸衍生物，获得(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。HRMSC35H35ClFN5O4S计算值：675.2082；实测值：676.2097(M+H)
步骤B：制备7a
将2.3g(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸(3.4mMol)溶于20mL的1.25M HCl的EtOH溶液中，于40℃搅拌过夜。然后将混合物用NaHCO3溶液稀释，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得制备7a。HRMS C37H39ClFN5O4S计算值：703.2395；实测值：704.2417(M+H)
制备7ad2：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法IId，制备6a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B4作为适当的硼酸衍生物，获得(2R)-2-[[5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸，为非对映异构体的混合物。将混合物通过快速色谱分离，采用HILIC作为洗脱液。较早洗脱的非对映异构体收集为制备7a1.MS(M+H)：676.2
后洗脱的非对映异构体收集为制备7a2。MS(M+H)：676.2
步骤B：制备7ad2
将44.51g制备7a2(6.67mMol)溶于85mL 1.25M HCl的EtOH溶液中，于40℃搅拌过夜。然后将混合物采用NaHCO3溶液小心地稀释，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得制备7ad2。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：9.49(s,1H),8.40(s,1H),7.34(d,1H),7.27-7.21(m,3H),7.20-7.14(m,2H),7.00(td,1H),6.71(dd,1H),6.60(td,1H),6.39(dd,1H),5.03(d,1H),4.92(m,1H),4.26(t,2H),4.03(m,2H),3.03(dd,1H),2.78(t,2H),2.54(br,4H),2.36(dd,1H),2.30(br,4H),2.12(s,3H),1.83(s,3H),1.10(t,3H)
HRMS C37H39ClFN5O4S计算值：703.2395；实测值：704.2450(M+H)
制备7b：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法IIb，制备6b作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B4作为适当的硼酸衍生物，Ataphos作为催化剂，THF:水3:1作为溶剂，获得非对映异构体混合物。它们通过快速色谱分离，采用HILIC作为洗脱液。后洗脱的非对映异构体收集为(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。MS：(M+H)：620.2
步骤B：制备7b
将2.3g的(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸(3.71mMol)溶于20mL 1.25M HCl的EtOH溶液中，于40℃搅拌过夜。然后将混合物用NaHCO3溶液稀释，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用EtOAc或DCM和MeOH作为洗脱液，获得制备7b。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：9.47(s,1H),8.41(s,1H),7.21(s,1H),7.21(s,1H),7.00(td,1H),6.70(dd,1H),6.60(td,1H),6.34(d,1H),5.11(d,1H),4.89(m,1H),4.27(t,2H),4.03(m,2H),3.06(dd,1H),2.79(t,2H),2.55(br,4H),2.40(dd,1H),2.30(br,4H),2.12(s,3H),2.00(s,3H),1.97(s,3H),1.11(t,3H)
HRMS C34H38ClN5O4S计算值：647.2333；实测值：648.2385(M+H)
制备7c：(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法IId，制备6b作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B5作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体混合物。它们通过快速色谱分离，采用HILIC作为洗脱液。后洗脱的非对映异构体收集为(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸。MS(M+H)：565.2
步骤B：制备7c
将2.3g的(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-丙-1-炔基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸(4.07mMol)溶于20mL 1.25M HCl的EtOH溶液中，于40℃搅拌过夜。然后将混合物用NaHCO3溶液稀释，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得制备7c。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：9.45(s,1H),8.41(s,1H),7.21(s,1H),7.21(s,1H),7.00(td,1H),6.70(dd,1H),6.60(td,1H),6.34(d,1H),5.12(d,1H),4.89(m,1H),4.26(m,2H),4.03(m,2H),3.06(dd,1H),2.74(t,2H),2.39(dd,1H),2.27(s,6H),2.01(s,3H),1.97(s,3H),1.11(t,3H)
HRMS C31H33ClN4O4S计算值：592.1911；实测值：593.1954(M+H)
制备7d：(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
将2.5g制备6a(5.1mMol)溶于20mL 1.25M HCl的EtOH溶液，于40℃搅拌过夜。将获得的混合物用aq.NaHCO3溶液稀释，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备7d。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.67(s,1H),8.42(s,1H),7.70(m,2H),7.43-7.37(m,3H),7.14(dd,1H),7.05(td,1H),6.80(dd,1H),6.72(td,1H),5.01(m,1H),4.12(q,2H),3.26(dd,1H),3.14(dd,1H),1.17(t,3H)
制备7e：(2R)-2-[[6-乙基-5-(4-羟基-2-甲基-苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
将934mg制备6c(2mMol)、903mg制备B6(2.4mMol)、231mg Pd(PPh3)4(0.2mMol)、662mg Ag2CO3(2.4mMol)和81μL甲醇(2mMol)溶于20mL 2-Me-THF中，在MW反应器中于110℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物通过硅藻土过滤，用100mL EtOAc稀释，然后加入2.5mL TBAF(1M的THF溶液)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用NH4Cl溶液和盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备7e，为非对映异构体的混合物。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.43-8.43(s,1H),7.26-6.80(m,7H),6.76-6.64(m,2H),5.18(m,1H),5.03(m,1H),3.66-3.65(s,3H),3.16-3.13(dd,1H),2.73(dd,1H),2.57(m,2H),2.07-1.80(s,3H),1.18-1.17(t,3H)
MS(M+H)：448.2
制备7f：(2R)-2-[[5-(3,5-二氯代-4-羟基-2-甲基-苯基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
将402mg制备7e(0.898mMol)和300mg NCS(2.245mMol)溶于5mLTHF，于60℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。真空除去挥发物，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得目标产物，为非对映异构体的混合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:10.46-10.44(s,1H),8.40-8.38(s,1H),7.29-7.24(s,1H),7.20(m,3H),6.80-6.78(d,2H),5.09-5.01(d,1H),4.95(m,1H),3.59-3.58(s,3H),3.15-3.13(dd,1H),2.78-2.61(dd,1H),2.53(q,2H),2.02-1.84(s,3H),1.11(t,3H)
HRMS C25H23Cl2N3O3S计算值：515.0837；实测值：516.0908(M+H)
制备7g：(2R)-2-[[5-(3-氯代-4-羟基-2-甲基-苯基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
采用通用方法IIc，制备6c作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B2作为适当的硼酸衍生物，获得制备7g，为非对映异构体的混合物。MS(M+H)：482.1
制备7gd1：(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-4-羟基-2-甲基-苯基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
将制备7g的非对映异构体通过快速色谱分离，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液。后洗脱的非对映异构体收集为制备7gd1。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:10.53(s,1H),8.36(s,1H),7.23(m,2H),7.20(m,1H),7.04(d,1H),6.98(d,1H),6.80(m,2H),5.11(d,1H),4.90(m,1H),3.57(s,3H),3.10(dd,1H),2.63(dd,1H),2.51-2.46(m,2H),1.86(s,3H),1.10(t,3H)
HRMS C25H24ClN3O3S计算值：481.1227；实测值：482.1313(M+H)
制备7h：(2R)-2-[[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸
采用通用方法Ib，制备4v作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得制备7h，为非对映异构体的混合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:12.71-12.59(br s,1H),11.48-11.37(s,1H),8.35-8.30(s,1H),7.64-7.53(d,1H),7.45-7.39(dd,1H),7.30-7.08(t,1H),7.17-6.33(m,6H),6.07-6.01(s,1H),5.27(d,1H),4.59/4.50(m,1H),2.98-2.83(dd,1H),2.56(m,2H),2.35-2.15(dd,1H),1.11-1.09(t,3H)
HRMS C25H22N4O2S计算值：442.1463；实测值：443.1529和443.1538(M+H)
制备7i：(2R)-2-[[5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
步骤A：(2R)-2-[[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯
将8.87g制备7h(20mMol)溶于60mL MeOH，加入5.88mL cc.H2SO4(60mMol)。将混合物于室温下、氮气环境中搅拌2小时。然后将混合物倒入冰水中，获得(2R)-2-[[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯，为非对映异构体的混合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.52-11.43(s,1H),8.39-8.34(s,1H),7.65-7.57(d,1H),7.47-7.42(t,1H),7.30-7.11(dd,1H),7.18-6.79(m,2H),7.02(m,1H),6.93(m,1H),6.65(m,1H),6.34(m,1H),6.05(dt,1H),5.28(m,1H),4.71-4.62(m,1H),3.55-3.41(s,3H),2.91-2.77(dd,1H),2.57(m,2H),2.37-2.23(dd,1H),1.11-1.10(t,3H)
MS(M+H)：457.2和457.2
步骤B：制备7i
将8.477g的(2R)-2-[[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯(18.5mMol)、2.47g NCS(18.5mMol)和30mL abs.THF于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物倒入冰水，用EtOAc萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备7i，为非对映异构体的混合物。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:11.73-11.65(d,1H),8.35-8.31(s,1H),7.63-7.56(d,1H),7.62-7.54(d,1H),7.44-7.15(dd,1H),7.20-7.03(m,3H),7.04-6.84(d,1H),6.70-6.44(dm,2H),5.09-4.98(d,1H),4.80-4.72(m,1H),3.51-3.38(s,3H),2.93-2.81(dd,1H),2.52(m,2H),2.46-2.29(dd,1H),1.10-1.09(t,3H)
HRMS C26H23ClN4O2S计算值：490.1230；实测值：491.1282和491.1316(M+H)
制备7j：4-氯代-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶
将1.099g制备4v(3.5mMol)和0.572g NCS(4.2mMol)在20mL CCl4中的混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物倒在碎冰上，将其用DCM萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-氯代-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶制备7j。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ：8.79(s,1H),8.33(br s,1H),7.47(dd,1H),7.31(t,1H),7.18(d,1H),7.03(dd,1H),2.73(m,2H),1.24(t,3H)
制备8a：(E)-4-(二甲基氨基)-1,1-二甲氧基-丁-3-烯-2-酮
将502.1g的1,1-二甲氧基丙-2-酮(4.25mol)和506.4g的1,1-二甲氧基-N,N-二甲基-甲胺(4.25mol)在2L烧瓶中混合，于105℃搅拌3小时。通过蒸馏连续除去形成的MeOH。当MeOH形成停止(于65℃头部温度)后，将反应混合物真空蒸馏(将压力缓慢降低至30mbar)以除去副产物和未反应的原料。将粗品产物于0.1mbar蒸馏。收集头部温度107-118℃之间的组分(浴温160－165℃)，获得黄色油状物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：7.59(d,1H),5.17(d,1H),4.42(s,1H),3.25(s,6H),3.09(s,3H),2.78(s,3H)
制备8b：4-(二甲氧基甲基)-2-甲基磺酰基-嘧啶
步骤A：4-(二甲氧基甲基)-2-甲基硫烷基-嘧啶
将198g甲醇钠(3.67mMol)溶于3L MeOH，冷却至0℃。分次加入322g硫脲(4.23mol)，将混合物搅拌1小时。然后于0℃滴加488g制备8a(2.82mol)，随后将其加热至70℃直到没有观察到进一步的转化。将其冷却至室温，滴加237mL甲基碘(3.81mol)，保持温度低于28℃，将获得的混合物于室温下搅拌过夜。将其过滤，滤液减压浓缩，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤。合并的水层用EtOAc萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。将残留物溶于500mL Et2O，通过硅胶垫过滤，采用Et2O作为洗脱液。将滤液减压浓缩，获得浅黄色油状物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.69(d,1H),7.23(d,1H),5.22(s,1H),3.33(s,6H),2.52(s,3H)
步骤B：制备8b
于-5℃，向180g的4-(二甲氧基甲基)-2-甲基硫烷基-嘧啶(940mMol)在1.5L甲醇和1.5L水中的溶液中分次加入752g
Figure BDA0001538919380000511
(过硫酸钾(potassiumperoxymonosulfate),1220mMol)，然后于0℃搅拌过夜。采用30℃浴将反应混合物减压浓缩至一半的体积，然后将混合物过滤，沉淀物用DCM洗涤。滤液用DCM萃取。合并的有机层经硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，获得浅棕色油状物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.98(d,1H),7.97(d,1H),5.36(s,1H),3.47(s,6H),3.39(s,3H)
制备9a：(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸甲酯盐酸盐
将24.6g的(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸(136mMol)于室温下在900mL 3MHCl的甲醇溶液中搅拌40小时。将反应混合物减压浓缩，保持浴温低于40℃。将残留物用乙醚研磨，获得产物，为奶油色闪亮粉末。HRMS C11H15NO3(游离碱)计算值：209.1052；实测值：210.1128(M+H)
制备9b：(2R)-2-(叔-丁氧基羰基氨基)-3-(2-羟基苯基)丙酸甲酯
将16.7g制备9a(73.0mMol)悬浮于180mL DCM中。加入30.5mL(219mMol)TEA，溶液采用冰水浴冷却。缓慢加入15.6g二碳酸二叔丁基酯(73.0mMol)的75mL DCM溶液(2.5小时)。将混合物于室温下搅拌过夜。然后加入100mL水，分离有机相，用水、1M HCl溶液洗涤，最后再用水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，获得为油状物的产物。
制备A1：(2R)-2-氨基-3-[2-[(2-甲基吡唑-3-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，(2-甲基吡唑-3-基)甲醇作为适当的醇衍生物，获得制备A1。MS(M+H)：276.2
制备A2：(2R)-2-氨基-3-[2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，制备C1作为适当的醇衍生物，获得制备A2。MS(M+H)：318.1
制备A3：(2R)-2-氨基-3-[2-[(2-丁基吡唑-3-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，制备C2作为适当的醇衍生物，获得制备A3。MS(M+H)：318.2
制备A4：(2R)-2-氨基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，制备C3作为适当的醇衍生物，获得制备A4。MS(M+H)：380.2
制备A5：(2R)-2-氨基-3-[2-(2-吡啶基甲氧基)苯基]丙酸
采用通用方法IXa，2-吡啶基甲醇作为适当的醇衍生物，获得制备A5。MS(M+H)：273.1
制备A6：(2R)-2-氨基-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]丙酸
采用通用方法IXb，2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯作为适当的烷基化试剂，获得制备A6。MS(M+H)：264.1
制备A7：(2R)-2-氨基-3-[2-[(2-乙基吡唑-3-基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，(2-乙基吡唑-3-基)甲醇作为适当的醇衍生物，获得制备A7。HRMS C15H19N3O3计算值：289.1426，实测值：290.1512(M+H)
制备A8：(2R)-2-氨基-3-[2-[[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，制备C8作为适当的醇衍生物，获得制备A8。MS(M+H)：372.1
制备A9：(2R)-2-氨基-3-[2-[2-(二甲基氨基)-2-氧代-乙氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXb，2-氯代-N,N-二甲基乙酰胺作为适当的烷基化试剂,获得制备A9。MS(M+H)：267.1
制备A10：(2R)-2-氨基-3-[2-(2-环戊基乙氧基)苯基]丙酸
采用通用方法IXa，2-环戊基乙醇作为适当的醇衍生物，获得制备A10。MS(M+H)：278.2
制备A11：(2R)-2-氨基-3-(2-苯乙基氧基苯基)丙酸盐酸盐
采用通用方法IXa，2-苯基乙醇作为适当的醇衍生物，获得制备A11。MS(M+H)：286.1
制备A12：(2R)-2-氨基-3-[2-(3-苯基丙氧基)苯基]丙酸
采用通用方法IXa，3-苯基丙-1-醇作为适当的醇衍生物，获得制备A12。MS(M+H)：300.2
制备A13：(2R)-2-氨基-3-[2-[(3-氯代苯基)甲氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，(3-氯代苯基)甲醇作为适当的醇衍生物，获得制备A13。MS(M+H)：306.1
制备A14：(2R)-2-氨基-3-[2-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇衍生物，获得制备A14。MS(M+H)：308.2
制备A15：(2R)-2-氨基-3-[2-(2-二甲基氨基乙基氧基)苯基]丙酸
采用通用方法IXa，2-(二甲基氨基)乙醇作为适当的醇衍生物，获得制备A15。MS(M+H)：253.2
制备A16：(2R)-2-氨基-3-[2-[3-(二甲基氨基)丙氧基]苯基]丙酸
采用通用方法IXa，3-(二甲基氨基)丙-1-醇作为适当的醇衍生物，获得制备A16。MS(M+H)：267.2
制备B1：3-甲基-4-(3,3,4,4-四甲基环戊硼烷-1-基)-1H-吲哚
将1.87g 4-溴-3-甲基-1H-吲哚(8.9mMol)、5.028g双(频哪醇合)二硼(19.6mMol)和2.65g乙酸钾(26.7mMol)在氩气环境中溶于35mL无水DMF，然后加入652mg[1,1'-二(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(0.89mMol)。将反应混合物加热至85℃并搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备B1。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.92(br s,1H),7.56(d,1H),7.42(dd,1H),7.16(t,1H),7.01(d,1H),2.47(d,3H),1.40(s,12H)
HRMS C15H20NO2B计算值：257.1587；实测值：258.1665(M+H)
制备B2：2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚
步骤A：(4-溴-2-氯代-苯氧基)-三甲基-硅烷
将20.8g 4-溴-2-氯代-苯酚(100mMol)溶于150mL无水THF，然后加入24.2g HMDS(150mMol)。将反应混合物于85℃、氩气环境中搅拌1.5小时，然后减压浓缩。获得的粗品产物无需进一步纯化可以直接使用。1HNMR(200MHz,CDCl3)δ：7.49(d,1H),7.23(dd,1H),6.75(d,1H),0.26(s,9H)
步骤B：4-溴-2-氯代-3-甲基-苯酚
于-78℃、氩气环境中，将48mL nBuLi溶液(120mMol,2.5M的己烷溶液)滴加至12.1g无水DIPA(120mMol)的250mL无水THF溶液中。将混合物于相同的温度下搅拌30分钟，然后滴加28.0g(4-溴-2-氯代-苯氧基)-三甲基-硅烷(100mMol)。2.5小时后，滴加21.3gMeI(150mMol)，然后移除冷浴，将混合物搅拌过夜。反应物采用100mL NH4OH溶液和200mLNH4Cl溶液骤冷，然后用EtOAc萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。将获得的黑色物质与纯己烷(150－150mL等份)一起回流数次并移出，留下黑焦油。将合并的有机相减压浓缩，获得19.0g粗品产物，其无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ：7.32(d,1H),6.76(d,1H),5.62(s,1H),2.49(s,3H)
步骤C：(4-溴-2-氯代-3-甲基-苯氧基)-三甲基-硅烷
将20.8g HMDS(129mMol)加至19.0g 4-溴-2-氯代-3-甲基-苯酚(86.0mMol)的150mL无水THF溶液中。将混合物于85℃、氩气环境中搅拌1.5小时，然后减压浓缩。获得的产物无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(200MHz,CDCl3)δ：7.30(d,1H),6.63(d,1H),2.50(s,3H),0.28(s,9H)
步骤D：制备B2
将25.2g(4-溴-2-氯代-3-甲基-苯氧基)-三甲基-硅烷(86.0mMol)的250mL无水THF溶液在氩气环境中冷却至-78℃，然后滴加38mL nBuLi溶液(94.6mMol,2.5M的己烷溶液)。5分钟后滴加19.2g 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(103mMol)。移除冷浴，将混合物缓慢加热至室温。然后将混合物加入200mL NH4Cl溶液中，用EtOAc萃取。将合并的有机层减压浓缩，通过硅胶垫过滤，采用己烷和EtOAc作为洗脱液。粗品产物在EtOAc和己烷的混合物中重结晶，获得制备B2。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ:10.40(s,1H),7.42(d,1H),6.80(d,1H),2.49(s,3H),1.27(s,12H)
制备B3：[2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基]-三异丙基-硅烷
步骤A：(4-溴-2-氯代-苯氧基)-三异丙基-硅烷
将200g 4-溴-2-氯代-苯酚(0.97mol)和126mL TIPSCl(1.18mol)溶于1.6L DCM。加入167g咪唑(2.45mol)，将混合物于室温下搅拌2小时。然后减压蒸发挥发物，将残留物溶于1.5L EtOAc。将混合物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。三异丙基甲硅烷基氢氧化物杂质通过蒸馏除去(120℃，0.01mMHg)。残留物通过硅胶短垫过滤，己烷洗脱，减压浓缩。产物(无色油状物)无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.49(d,1H),7.21(dd,1H),6.78(d,1H),1.31(七重峰,3H),1.14(d,18H)
MS(EI,70eV)m/z(％相对强度,[离子])：63(30),79(24),93(41),170(17),235(19),251(16),265(24),293(23),319(77),321(100),323(28),362(1,[M+])。
步骤B：(4-溴-2-氯代-3-甲基-苯氧基)-三异丙基-硅烷
将76.0mL无水DIPA(0.54mol)在氩气环境中溶于1.2L无水THF，于-78℃滴加51.2mL nBuLi溶液(0.512mol,10M的己烷溶液)。将混合物于相同的温度下搅拌45分钟。然后于-78℃滴加178g(4-溴-2-氯代-苯氧基)-三异丙基-硅烷(0.488mol)，将白色悬浮液搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后于此温度下加入36.5mL MeI(0.586mMol)，将反应混合物在无需进一步冷却下搅拌过夜。减压蒸发挥发物。将残留物溶于1.5L EtOAc，用盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过硅胶短柱过滤，采用己烷作为洗脱液，减压浓缩，获得为浅黄色油状物的产物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.30(d,1H),6.68(d,1H),2.53(s,3H),1.32(七重峰,3H),1.14(d,18H)
步骤C：制备B3
将178g(4-溴-2-氯代-3-甲基-苯氧基)-三异丙基-硅烷(0.472mol)在氩气环境中溶于1.4L无水THF，于-78℃滴加52mL nBuLi溶液(0.52mol,10M的己烷溶液)。将混合物于此温度下搅拌5分钟。然后加入116mL 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.569mol)，将混合物温热至室温。减压蒸发挥发物。将残留物溶于1.5L EtOAc，用盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷杂质通过蒸馏除去(80℃，0.01mMHg)。粗品产物在MeOH中研磨，获得为白色固体的制备B3。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.53(d,1H),6.74(d,1H),2.60(s,3H),1.34(s,12H),1.32(m,3H),1.12(d,18H)
制备B4:1-[2-[2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪
将10.0g制备B2(37.2mMol)、8.7g的2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(60.3mMol)和15.8g的PPh3(60.3mMol)溶于100mL无水甲苯，然后滴加27mL偶氮二甲酸二乙酯(60.3mMol,40％的甲苯溶液)。将混合物于50℃、氩气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发挥发物，加入100mL Et2O。过滤沉淀的白色结晶，用Et2O洗涤。将滤液减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用CHCl3和MeOH作为洗脱液。将获得的浅棕色油状物在己烷中结晶，获得为灰白色固体的制备B4。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：7.56(d,1H),6.99(d,1H),4.15(t,2H),2.72(t,2H),2.51(s,3H),2.50(br s,4H),2.29(br s,4H),2.13(s,3H),1.29(s,12H)
制备B5:1-[2-[2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯氧基]乙基]-4-甲基-哌嗪
将10.0g制备B2(37.2mMol)、5.366g N,N-二甲基乙醇胺(60.3mMol)和15.8g PPh3(60.3mMol)溶于100mL无水甲苯，然后滴加27mL偶氮二甲酸二乙酯(60.3mMol,40％的甲苯溶液)。将混合物于50℃、氩气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发挥发物，加入100mL Et2O。将沉淀的白色结晶过滤，用Et2O洗涤。将滤液减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用CHCl3和MeOH作为洗脱液。将获得的浅棕色油状物在己烷中结晶，获得制备B5。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.56(d,1H),6.99(d,1H),4.13(t,2H),2.66(t,2H),2.51(s,3H),2.23(s,6H),1.29(s,12H)
制备B6：[4-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷-2-基)-3-甲基-苯氧基]-三异丙基-硅烷
步骤A：4-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷-2-基)-3-甲基-苯酚
将4.675g(4-羟基-2-甲基-苯基)硼酸(30.76mMol)、3.204新戊二醇(32.9mMol)、Amberlyst 15H+和150mL 2-Me-THF于室温下、氮气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，获得4-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷-2-基)-3-甲基-苯酚。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.64(m,1H),6.60(m,2H),5.23(brs,1H),3.75(s,4H),2.47(s,3H),1.01(s,6H)
步骤B：制备B6
将30.76mMol的4-(5,5-二甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环己烷-2-基)-3-甲基-苯酚、8.56mL的TIPSCl(40mMol)和4.19g咪唑(61.52mMol)溶于100mL DCM，于室温下、氮气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。过滤除去咪唑鎓盐酸盐，将滤液减压浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备B6。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.62(d,1H),6.68-6.66(m,2H),3.76(s,4H),2.47(s,3H),1.32-1.21(m,3H),1.11(d,18H),1.03(s,6H)
制备B7：2-(3-溴-2-甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷
将2.362g 2,6-二溴-甲苯(9.45mMol)在氮气环境中溶于10mL无水THF，将混合物冷却至-78℃。然后滴加5.2mL的nBuLi(2.0M的戊烷溶液,10.4mMol)，将混合物搅拌15分钟。然后滴加2.31mL的2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(11.3mMol)，将混合物温热至室温。将其搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后混合物采用NH4Cl水溶液骤冷，用EtOAc萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备B7。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：7.67(d,1H),7.62(d,1H),7.10(t,1H),2.53(s,3H),1.29(s,12H)
制备C1：(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲醇
步骤A：4-(二甲氧基甲基)-2-乙氧基-嘧啶
将1500mg制备8b(6.46mMol)溶于60mL乙醇，然后加入527mg乙醇钠(7.75mMol)，将混合物于室温下搅拌1小时。减压蒸发挥发物，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(二甲氧基甲基)-2-乙氧基-嘧啶。MS(M+H):199.2
步骤B：制备C1
采用通用方法Va，4-(二甲氧基甲基)-2-乙氧基-嘧啶作为适当的缩醛，获得制备C1。MS(M+H):155.2
制备C2：(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲醇
采用通用方法Vb，1-丁基吡唑作为适当的烷基吡唑，获得制备C2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.30(d,1H),6.12(d,1H),5.23(t,1H),4.49(d,2H),4.06(t,2H),1.72(m,2H),1.26(m,2H),0.88(t,3H)
MS(M+H):155.2
制备C3：[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲醇
步骤A：4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶
采用通用方法Vc，2-甲氧基苯甲脒乙酸盐作为适当的脒盐，获得4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.93(d,1H),7.55-7.44(m,3H),7.16(d,1H),7.06(m,1H),5.31(s,1H),3.76(s,3H),3.37(s,6H)
步骤B：制备C3
将261mg的4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基苯基)嘧啶(1.0mMol)溶于2mL HCl的二氧六环溶液(4M溶液)，然后加入2mL水，将混合物于50℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至0℃，然后分次加入320mg NaOH(8.0mMol)。采用10％K2CO3溶液将pH调节至8，然后加入76mg硼氢化钠(2.0mMol)，将混合物于0℃搅拌30分钟。将反应混合物用5mL水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得制备C3。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.84(d,1H),7.50-7.42(m,3H),7.14(d,1H),7.03(m,1H),5.66(t,1H),4.58(d,2H),3.75(s,3H)
制备C4：(1-叔-丁基-1H-吡唑-5-基)甲醇
步骤A:1-叔-丁基-5-(二甲氧基甲基)-1H-吡唑
采用通用方法Vd，叔-丁基肼盐酸盐作为适当的肼盐酸盐，获得1-叔-丁基-5-(二甲氧基甲基)-1H-吡唑。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.34(d,1H),6.34(d,1H),5.74(s,1H),3.24(s,6H),1.57(s,9H)
注意：也获得1-叔-丁基-3-(二甲氧基甲基)-1H-吡唑。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.75(d,1H),6.18(d,1H),5.34(s,1H),3.24(s,6H),1.50(s,9H)
步骤B：制备C4
采用通用方法Ve，1-叔-丁基-5-(二甲氧基甲基)-1H-吡唑作为适当的缩醛，获得制备C4。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.27(d,1H),6.19(d,1H),5.31(t,1H),4.61(d,2H),1.56(s,9H)
制备C5：[2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-4-基]甲醇
步骤A：4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基乙基)嘧啶
采用通用方法Vc，3-甲氧基丙脒盐酸盐作为适当的脒盐酸盐，获得4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基乙基)嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.78(d,1H),7.38(d,1H),5.25(s,1H),3.80(t,2H),3.33(s,6H),3.22(s,3H),3.11(t,2H)
注意：也获得2-[4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-基]-N,N-二甲基-乙胺。MS(M+H)：226.2
步骤B：制备C5
采用通用方法Va，4-(二甲氧基甲基)-2-(2-甲氧基乙基)嘧啶作为适当的缩醛，获得制备C5。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.70(d,1H),7.39(d,1H),5.60(t,1H),4.52(d,2H),3.78(t,2H),3.22(s,3H),3.06(t,2H)
制备C6：[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲醇
步骤A：5-(二甲氧基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-5-醇
采用通用方法Vd，在甲醇钠不存在下，采用乙醇替代甲醇，2,2,2-三氟乙基肼(70w/w％的水溶液)作为适当的肼，获得5-(二甲氧基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-5-醇。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：6.83(t,1H),6.03(s,1H),4.30(s,1H),3.95(m,1H),3.47(m,1H),3.40(d,6H),2.88(m,1H),2.50(m,1H)
步骤B：制备C6
采用通用方法Ve，5-(二甲氧基甲基)-1-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-1H-吡唑-5-醇作为适当的缩醛，获得制备C6。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：7.48(d,1H),6.27(d,1H),5.46(t,1H),5.08(q,2H),4.56(d,2H)
制备C7：(2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基)甲醇
步骤A：4-[4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-基]吗啉
将25.0g制备8b(107.6mMol)溶于161mL吗啉，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-[4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-基]吗啉。
步骤B：制备C7
采用通用方法Va，4-[4-(二甲氧基甲基)嘧啶-2-基]吗啉作为适当的缩醛，制备C7。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.35(d,1H),6.75(dm,1H),5.431(t,1H),4.36(dm,2H),3.67(m,4H),3.63(m,4H)
制备C8：[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲醇
步骤A：4-(二甲氧基甲基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶
将5.00g制备8b(21.5mMol)溶于54mL无水乙腈，然后加入5.95g K2CO3(43.1mMol)和3.24g 2,2,2-三氟乙醇(32.3mMol)，将混合物于60℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物冷却，过滤，固体用EtOAc洗涤，然后将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(二甲氧基甲基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.74(d,1H),7.32(d,1H),5.25(s,1H),5.05(q,2H),3.34(s,6H)
步骤B：制备C8
采用通用方法Va，4-(二甲氧基甲基)-2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶作为适当的缩醛，获得制备C8。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.65(d,1H),7.32(d,1H),5.69(t,1H),5.02(q,2H),4.51(d,2H)
制备C9：[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲醇
步骤A：2-氟-N'-羟基-苯甲脒
将11.48g盐酸羟胺(165mMol)、13.87g NaHCO3(165mMol)和120mL MeOH的混合物于室温下搅拌30分钟。然后加入10g的2-氟苄腈(82.6mMol)，将混合物于75℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发部分溶剂，过滤残留物，用MeOH洗涤。将滤液减压浓缩，然后用水稀释，用EtOAc萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩，获得2-氟-N'-羟基-苯甲脒。
步骤B：2-氟苯甲脒
将12.67g 2-氟-N'-羟基-苯甲脒(81.55mMol)于0℃溶于300mL AcOH，加入9.24mLAc2O(97.86mMol)。将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后加入630mg10％Pd/C，将混合物在氢气环境中(4bars)搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，获得2-氟苯甲脒乙酸盐。MS(M(游离碱)+H):139.4
步骤C：4-(二甲氧基甲基)-2-(2-氟苯基)嘧啶
采用通用方法Vc，2-氟苯甲脒作为适当的脒，获得4-(二甲氧基甲基)-2-(2-氟苯基)嘧啶。MS(M+H)：249.2
步骤D：制备C9
采用通用方法Va，4-(二甲氧基甲基)-2-(2-氟苯基)嘧啶作为适当的缩醛，获得制备C9。MS(M+H)：205.2
制备C10：[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲醇
步骤A：N'-羟基-2-甲氧基乙氧基-苯甲脒
将2eq.盐酸羟胺溶于MeOH(1mL/mmol)，然后加入2eq.NaHCO3。将混合物于室温下搅拌20分钟，然后加入1eq.2-甲氧基乙氧基-苄腈，将混合物回流直到没有观察到进一步的转化。蒸发部分MeOH，残留物过滤，将滤液减压浓缩。获得的N'-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基)苯甲脒无需进一步纯化可以直接使用。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：9.48(s,1H),7.45(m,1H),7.34(m,1H),7.08(d,1H),6.94(td,1H),5.65(br s,2H),4.17(m,2H),3.67(m,2H),3.31(s,3H)
MS(M+H)：211.2
步骤B：2-甲氧基乙氧基-苯甲脒
将8.22g N'-羟基-2-(2-甲氧基乙氧基)苯甲脒(39.1mMol)于0℃溶于80mL AcOH，然后滴加4.43mL Ac2O(46.92mMol)。将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。加入575mg 10％Pd/C，将混合物在氢气环境中(4bars)搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩，获得2-(2-甲氧基乙氧基)苯甲脒乙酸盐。MS(M+H):195.2
步骤C：4-(二甲氧基甲基)-2-[2-甲氧基乙氧基-苯基]嘧啶
采用通用方法Vc，2-(2-甲氧基乙氧基)苯甲脒乙酸盐作为适当的脒盐，获得4-(二甲氧基甲基)-2-[2-甲氧基乙氧基-苯基]嘧啶。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.92(d,1H),7.55(m,1H),7.47(m,1H),7.45(m,1H),7.17(d,1H),7.08(m,1H),5.29(s,1H),4.12(m,2H),3.57(m,2H),3.36(s,6H),3.20(s,3H)
MS(M+H)：305.0
步骤D：制备C10
采用通用方法Va，4-(二甲氧基甲基)-2-[2-甲氧基乙氧基-苯基]嘧啶作为适当的缩醛，获得制备C10。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ：8.84(d,1H),7.53(m,1H),7.47(m,1H),7.43(m,1H),7.14(d,1H),7.05(td,1H),5.64(t,1H),4.58(d,2H),4.11(m,2H),3.57(m,2H),3.21(s,3H)
MS(M+H)：261.0
实施例1：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例2：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7a作为适当的苯酚衍生物，甲醇作为适当的醇，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例1，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC36H37ClFN5O4S计算值：689.2240，实测值：345.6182(M+2H)
获得实施例2，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C36H37ClFN5O4S计算值：689.2240，实测值：345.6185(M+2H)
实施例3：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7ad2作为适当的苯酚衍生物，(2-甲基吡唑-3-基)甲醇作为适当的醇，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例3。HRMS C40H41ClFN7O4S计算值：769.2613，实测值：385.6378(M+2H)
实施例4：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
和
实施例5：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7a作为适当的苯酚衍生物，制备C1作为适当的醇，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液，获得实施例4，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C42H43ClFN7O5S计算值：811.2719，实测值：406.6417(M+2H)
获得实施例5，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C42H43ClFN7O5S计算值：811.2719，实测值：406.6436(M+2H)
实施例6：2-[(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7ad2作为适当的苯酚衍生物，制备C2作为适当的醇，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例6。HRMS C43H47ClFN7O4S计算值：811.3082，实测值：406.6616(M+2H)
实施例7：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7ad2作为适当的苯酚衍生物，制备C3作为适当的醇，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例7。HRMS C47H45ClFN7O5S计算值：873.2875，实测值：437.6498(M+2H)
实施例8：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例9：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4b作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例8，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C34H36ClN5O5S计算值：661.2126，实测值：662.2203(M+H)
获得实施例9，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C34H36ClN5O5S计算值：661.2126,实测值：662.2203(M+H)
实施例10：2-氯代-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
采用通用方法Ic，制备4b作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]，(2R)-2-氨基-3-(2-氯代苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例10，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C33H33Cl2N5O4S计算值：665.1630，实测值：666.1670(M+H)
实施例11：2-氨基甲酰基-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
步骤A：5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-4-氟-6-(2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将150mg制备4b(0.3mMol)和380mg氟化银(3.0mMol)在6mL甲苯中的混合物于回流温度下加热3小时。然后将其冷却至室温，过滤无机组分。将滤液减压浓缩，获得粗品产物，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。
步骤B：实施例11
将316mg的5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-4-氟-6-(2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶(0.65mMol)、271mg的(2R)-2-氨基-3-(2-氨基甲酰基苯基)丙酸(1.30mMol)和424mg的Cs2CO3(1.30mMol)在6mL DMSO中的混合物于40℃搅拌30分钟。将混合物用水稀释，采用1M HCl溶液将pH调节至5，用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％的TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。收集较早洗脱的非对映异构体，为实施例11。HRMS C34H35ClN6O5S计算值：674.2078，实测值：675.2146(M+H)
实施例12：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸
和
实施例13：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4b作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A5作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例12，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C39H39ClN6O5S计算值：738.2391，实测值：370.1269(M+2H)
获得实施例13，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C39H39ClN6O5S计算值：738.2391，实测值：370.1263(M+2H)
实施例14：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸
采用通用方法Ic，制备4a作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，获得(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸，为非对映异构体的混合物。它们可通过HILIC色谱分离。获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸，为后洗脱的非对映异构体。MS(M+H)：708.0
步骤B：实施例14
采用通用方法IIIb，(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸酯衍生物，获得实施例14。HRMS C33H33ClFN5O5S计算值：665.1875，实测值：333.6012(M+2H)
实施例15：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例16：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例15，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C34H35ClFN5O5S计算值：679.2031，实测值：680.2100(M+H)
获得实施例16，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C34H35ClFN5O5S计算值：679.2031，实测值：680.2092(M+H)
实施例17：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-D-苯丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
将876mg(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸(1.24mMol)溶于5mL乙醇，然后加入0.05mL浓硫酸，将混合物于70℃搅拌2小时。然后将混合物用水稀释，采用1MNaHCO3溶液将pH调节至5，用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯。MS(M+H)：736.1
步骤B：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]丙酸乙酯
将648mg的(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯(0.88mMol)溶于10mL DMF，然后于室温下加入415mg的K2CO3(3.00mMol)和348mg的2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(1.50mMol)。将混合物于50℃搅拌5小时。将反应混合物用盐水稀释，用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和甲醇作为洗脱液，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]丙酸乙酯。MS(M+H)：818.1
步骤C：实施例17
将(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]丙酸乙酯根据通用方法VII水解，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-(2,2,2-三氟乙氧基)苯基]丙酸。该化合物可以用作适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，根据通用方法IIIb转化为实施例17，采用2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物。HRMS C35H34ClF4N5O5S计算值：747.1905，实测值：374.6006(M+2H)
实施例18：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸
和
实施例19：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A5作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例18，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC39H38ClFN6O5S计算值：756.2296，实测值：379.1230(M+2H)
获得实施例19，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C39H38ClFN6O5S计算值：756.2296，实测值：379.1230(M+2H)
实施例20：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIIb，制备5b作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得实施例20。HRMS C38H39ClFN7O5S计算值：759.2406，实测值：380.6271(M+2H)
实施例21：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-乙基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIIb，制备5c作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得实施例21。HRMS C39H41ClFN7O5S计算值：773.2562，实测值：387.6358(M+2H)
实施例22：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A2作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例22，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C40H41ClFN7O6计算值S：801.2512，实测值：401.6326(M+2H)
实施例23：2-[(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例24：2-[(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A3作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例23，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC41H45ClFN7O5S计算值：801.2875，实测值：401.6502(M+2H)
获得实施例24，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C41H45ClFN7O5S计算值：801.2875，实测值：401.6505(M+2H)
实施例25：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
和
实施例26：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4c作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A8作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例25，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC40H38ClF4N7O6S计算值：855.2228，实测值：428.6181(M+2H)
获得实施例26，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C40H38ClF4N7O6S计算值：855.2228，实测值：428.6193(M+2H)
实施例27：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯
将0.97g实施例14(1.46mMol)溶于15mL HCl溶液(1.25M的EtOH溶液)，于40℃搅拌过夜。将混合物冷却至室温，采用NaHCO3水溶液中和，混合物用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：9.48(br s,1H),8.39(s,1H),7.30(s,2H),7.01(td,1H),6.72(d,1H),6.64(t,1H),6.41(d,1H),5.83(m,1H),5.56(t,1H),5.08(d,1H),4.94(m,1H),4.30(t,2H),4.03(m,2H),3.07(dd,1H),2.81(t,2H),2.56(br,4H),2.36(dd,1H),2.32(br,4H),2.14(s,3H),1.91(s,3H)
MS(M+H)：694.2
步骤B：实施例27
采用通用方法VI，(2R)-2-[[(5Sa)-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-羟基苯基)丙酸乙酯作为适当的苯酚衍生物，制备C3作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例27。HRMSC45H43ClFN7O6S计算值：863.2668，实测值：432.6414(M+2H)
实施例28：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
步骤A：2-[2-氯代-4-[4-氯代-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺
采用通用方法IIIb，制备4e作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(5-氟-2-呋喃基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得2-[2-氯代-4-[4-氯代-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺。
步骤B：实施例28
采用通用方法Ib，2-[2-氯代-4-[4-氯代-6-(5-氟-2-呋喃基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3-甲基-苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-羟基-D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例28，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C30H28ClFN4O5S计算值：610.1453，实测值：611.1503(M+H)
实施例29：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
和
实施例30：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4g作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例29，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C32H33ClN6O3S2计算值：648.1744，实测值：649.1811(M+H)
获得实施例30，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C32H33ClN6O3S2计算值：648.1744，实测值：649.1816(M+H)
实施例31：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环己基-D-丙氨酸
和
实施例32：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环己基-D-丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4g作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环己基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例31，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C33H40ClN5O3S2计算值：653.2261，实测值：327.6194(M+2H)
获得实施例32，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C33H40ClN5O3S2计算值：653.2261，实测值：327.6195(M+2H)
实施例33：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-D-苯丙氨酸
和
实施例34：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4g作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例33，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C33H33ClFN5O3S2计算值：665.1697，实测值：666.1776(M+H)
获得实施例34，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C33H33ClFN5O3S2计算值：665.1697，实测值：666.1776(M+H)
实施例35：N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
和
实施例36：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4h作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例35，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H30ClN5O4S2计算值：635.1428，实测值：636.1499(M+H)
获得实施例36，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H30ClN5O4S2计算值：635.1428，实测值：636.1508(M+H)
实施例37：2-(氨基甲基)-N-[(5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例38：2-(氨基甲基)-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基}-6-(噻吩-3-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4h作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-[2-(氨基甲基)苯基]丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例37，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C33H34ClN5O4S2计算值：663.1741，实测值：664.1808(M+H)
获得实施例38，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C33H34ClN5O4S2计算值：663.1741，实测值：664.1825(M+H)
实施例39：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，甲醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例39。HRMS C33H36ClN5O4S计算值：633.2176，实测值：317.6163(M+2H)
实施例40：2-[(1-叔-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C4作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例40。HRMS C40H46ClN7O4S计算值：755.3021实测值：378.6573(M+2H)
实施例41：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C5作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例41。HRMS C40H44ClN7O5S计算值：769.2813，实测值：385.6476(M+2H)。
实施例42：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C6作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例42。HRMS C38H39ClF3N7O4S计算值：781.2425，实测值：391.6300(M+2H)
实施例43：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C7作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例43。HRMSC41H45ClN8O5S计算值：796.2922，实测值：399.1546(M+2H)
实施例44：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C8作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例44。HRMSC39H39ClF3N7O5S计算值：809.2374，实测值：405.6262(M+2H)
实施例45：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI和制备7b作为适当的苯酚衍生物，制备C3作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例45。HRMSC44H44ClN7O5S计算值：817.2813，实测值：409.6494(M+2H)
实施例46：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7c作为适当的苯酚衍生物，制备C6作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例46。HRMS C35H34ClF3N6O4S计算值：726.2003，实测值：727.2092(M+H)
实施例47：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7c作为适当的苯酚衍生物，制备C7作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例47。HRMSC38H40ClN7O5S计算值：741.2500，实测值：371.6331(M+2H)
实施例48：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7c作为适当的苯酚衍生物，制备C8作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例48。HRMSC36H34ClF3N6O5S计算值：754.1952，实测值：755.1971(M+H)
实施例49：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7c作为适当的苯酚衍生物，制备C3作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例49。HRMSC41H39ClN6O5S计算值：762.2391，实测值：371.6323(M+2H)
实施例50：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
采用通用方法VI，制备7d作为适当的苯酚衍生物，制备C9作为适当的醇衍生物，(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.84(d,1H),8.39(s,1H),7.95(td,1H),7.58-7.52(m,3H),7.39-7.24(m,8H),7.13(d,1H),6.95(t,1H),5.29-5.15(m,3H),4.16(q,2H),3.63(dd,1H),3.25(dd,1H),1.19(t,3H)
步骤B：(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
将1eq.(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯和1.2eq.制备B5溶于二噁烷(5mL/mmol)，然后加入5mol％AtaPhos、3eq.Cs2CO3和水(5mL/mmol)，将混合物于70℃氩气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤.有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯，为非对映异构体的混合物。MS(M+H)：834.6
步骤C：实施例50
采用通用方法VII，(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-(2-氟苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯作为适当的酯衍生物，获得实施例50，为后洗脱的非对映异构体。HRMSC43H37ClF2N6O4S计算值：806.2254，实测值：807.2343(M+H)
实施例51：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
采用通用方法VI，制备7d作为适当的苯酚衍生物，制备C10作为适当的醇衍生物，(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ：8.80(d,1H),8.41(s,1H),7.57-7.53(m,3H),7.46-7.23(m,7H),7.16(d,1H),7.07(d,1H),7.03(t,1H),6.94(t,1H),5.28-5.23(m,1H),5.19(dd,2H),4.18-4.11(m,4H),3.61-3.57(m,3H),3.27(dd,1H),3.21(s,3H),1.19(t,3H)
步骤B：(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯
将1eq.(2R)-2-[[5-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯和1.2eq.制备B5溶于二噁烷(5mL/mmol)，然后加入5mol％AtaPhos、3eq.Cs2CO3和水(5mL/mmol)，将混合物于70℃氩气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用EtOAc稀释，用盐水洗涤。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯，为非对映异构体的混合物。MS(M+H)：890.6
步骤C：实施例51
采用通用方法VII，(2R)-2-[[5-[3-氯代-4-(2-二甲基氨基乙基氧基)-2-甲基-苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-[2-[[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸乙酯作为适当的酯衍生物，获得
实施例51，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C46H44ClFN6O6S计算值：862.2716，实测值：432.1442(M+2H)
实施例52：N-[(5Ra)-5-(3,5-二氯代-4-羟基-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例53：N-[(5Sa)-5-(3,5-二氯代-4-羟基-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法VII，制备7f作为适当的酯衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例52，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21Cl2N3O3S计算值：501.0681，实测值：502.0755(M+H)
获得实施例53，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21Cl2N3O3S计算值：501.0681，实测值：502.0772(M+H)
实施例54：N-((5Sa)-5-{3,5-二氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例55：N-((5Ra)-5-{3,5-二氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7f作为适当的苯酚衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例54，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H35Cl2N5O3S计算值：627.1838，实测值：628.1935(M+H)
获得实施例55，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H35Cl2N5O3S计算值：627.1838，实测值：628.1932(M+H)
实施例56：N-{(5Sa)-5-[3-氯代-4-(2-羟基乙氧基)-2-甲基苯基]-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7gd1作为适当的苯酚衍生物，10eq.乙二醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例56。HRMS C26H26ClN3O4S计算值：511.1333，实测值：512.1390(M+H)
实施例57：N-{(5Sa)-5-[4-(羧基甲氧基)-3-氯代-2-甲基苯基]-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7gd1作为适当的苯酚衍生物，2-羟基-N,N-二甲基乙酰胺作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例57。HRMSC26H24ClN3O5S计算值：525.1125，实测值：526.1217(M+H)
实施例58：N-((5Ra)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-L-苯丙氨酸
和
实施例59：N-((5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-L-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7g作为适当的苯酚衍生物，2-(二甲基氨基)乙醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例58，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H31ClN4O3S计算值：538.1805，实测值：539.1869(M+H)
获得实施例59，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H31ClN4O3S计算值：538.1805，实测值：539.1866(M+H)
实施例60：N-((5Sa)-5-{3-氯代-4-[3-(二甲基氨基)丙氧基]-2-甲基苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7gd1作为适当的苯酚衍生物，3-(二甲基氨基)丙醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例60。HRMSC29H33ClN4O3S计算值：552.1962，实测值：553.2036(M+H)
实施例61：N-((5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(吗啉-4-基)乙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7gd1作为适当的苯酚衍生物，2-吗啉代乙醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例61。HRMS C30H33ClN4O4S计算值：580.1911，实测值：581.1981(M+H)
实施例62：N-((5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例63N-((5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7g作为适当的苯酚衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例62，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H36ClN5O3S计算值：593.2227，实测值：594.2313(M+H)
获得实施例63，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H36ClN5O3S计算值：593.2227，实测值：594.2304(M+H)
实施例64：N-((5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]苯基}-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VI，制备7gd1作为适当的苯酚衍生物，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-醇作为适当的醇衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得实施例64。HRMSC32H38ClN5O3S计算值：607.2384，实测值：608.2444(M+H)
实施例65：N-((5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-[5-(甲氧基羰基)-4-甲基呋喃-2-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例66：N-((5Ra)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-[5-(甲氧基羰基)-4-甲基呋喃-2-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
步骤A：[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-三甲基-锡烷
在氩气环境中，将1.97g的4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶(4.50mMol,获自制备4a的步骤A)溶于40mL无水THF，将混合物冷却至-78℃。然后加入4.5mL LDA(9mMol,2M的庚烷、THF和乙基苯溶液)，将混合物于-78℃搅拌1小时。然后加入13.5mL Me3SnCl溶液(13.5mMol,1M的己烷溶液)，将混合物温热至室温。然后将混合物用cc.NH4Cl溶液稀释，用乙醚萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。然后将其溶于60mL EtOAc，加入40mL饱和的NaF溶液，将其于室温下搅拌过夜。然后将其过滤，分离滤液相。水相用EtOAc萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-三甲基-锡烷。HRMS C23H30N4OSCl2Sn计算值：600.0539，实测值：601.0584(M+H)
步骤B：5-[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲酯
将900mg的[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-三甲基-锡烷(1.50mMol)、657mg的5-溴-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲酯(3mMol)、29mg CuI(0.15mMol)、29mg Pd(PhCN)2Cl2(0.075mMol)、46mg Ph3As(0.15mMol)和2mL NMP于100℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用EtOAc稀释，用饱和的NaF溶液洗涤。水相用EtOAc萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用DCM和MeOH作为洗脱液，获得5-[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲酯。HRMS C27H28Cl2N4O4S计算值：574.1208，实测值：575.1263(M+H)
步骤C：实施例65
采用通用方法Ib，5-[4-氯代-5-[3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基]-3-甲基-呋喃-2-甲酸甲酯作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例65，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C37H40ClN5O7S计算值：733.23369，实测值：367.6263(M+2H)
获得实施例66，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C37H40ClN5O7S计算值：733.23369，实测值：367.6223(M+2H)
实施例67：N-[6-乙基-5-(3-羟基-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IId，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-甲基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯酚作为适当的硼酸衍生物，获得实施例67，为非对映异构体的混合物。HRMS C24H23N3O3S计算值：433.1460，实测值：434.1545和434.1535(M+H)
实施例68：N-[6-乙基-5-(3-氟-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3-氟-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得实施例68，为非对映异构体的混合物。HRMSC24H22FN3O2S计算值：435.1417，实测值：436.1489和436.1484(M+H)
实施例69：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(3-氟-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例70：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(3-氟-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
实施例68的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例69，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22FN3O2S计算值：435.1417，实测值：436.1481(M+H)
获得实施例70，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22FN3O2S计算值：435.1417，实测值：436.1498(M+H)
实施例71：N-[6-乙基-5-(1H-吲哚-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例72：N-[6-乙基-5-(1H-吲哚-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例71，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22N4O2S计算值：442.1463，实测值：443.1540(M+H)
获得实施例72，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22N4O2S计算值：442.1463，实测值：443.1537(M+H)
实施例73：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例74：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
制备7h的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例73，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22N4O2S计算值：442.1463，实测值：443.1529(M+H)
获得实施例74，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22N4O2S计算值：442.1463，实测值：443.1538(M+H)
实施例75：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(3-甲氧基-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例76：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(3-甲氧基-2-甲基苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIb，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-(3-甲氧基-2-甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，采用DME:水5:1代替2-Me-THF，通过制备性反相色谱分离非对映异构体，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例75，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H25N3O3S计算值：447.1617，实测值：448.1701(M+H)
获得实施例76，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H25N3O3S计算值：447.1617，实测值：448.1672(M+H)
实施例77：N-[(5Ra)-5-(2-氯代-3-甲基吡啶-4-基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例78N-[(5Sa)-5-(2-氯代-3-甲基吡啶-4-基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIb，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-氯代-3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶作为适当的硼酸衍生物，采用DME:水5:1代替2-Me-THF，通过制备性反相色谱分离非对映异构体，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例77，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C23H21ClN4O2S计算值：452.1074，实测值：453.1158(M+H)
获得实施例78，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C23H21ClN4O2S计算值：452.1074，实测值：453.1165(M+H)
实施例79：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIb，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，4,4,5,5-四甲基-2-(1-萘基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例79，为非对映异构体混合物。HRMS C27H23N3O2S计算值：453.1511，实测值：454.1580和454.1580(M+H)
实施例80：N-[6-乙基-5-(喹啉-5-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)喹诺酮作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例80，为非对映异构体的混合物。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1554和455.1518(M+H)
实施例81：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(异喹啉-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例82：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(异喹啉-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
步骤A：4-氯代-6-乙基-5-(4-异喹啉基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
采用通用方法IIc，制备2a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶，4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)异喹啉作为适当的硼酸衍生物，获得4-氯代-6-乙基-5-(4-异喹啉基)噻吩并[2,3-d]嘧啶。
1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ：9.46(s,1H),8.93(s,1H),8.50(s,1H),8.26(m,1H),7.74(m,2H),7.42(m,1H),2.65(q,2H),1.14(t,3H)
HRMS C17H12ClN3S计算值：325.0440；实测值：326.0502(M+H)
步骤B：N-[6-乙基-5-(异喹啉-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，步骤A的产物作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得N-[6-乙基-5-(异喹啉-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，为非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用水和乙腈作为洗脱液。获得实施例81，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1526(M+H)
获得实施例82，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1538(M+H)
实施例83：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例84：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(1-甲基-1H-吲哚-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIb，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，1-甲基-7-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲哚作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例83，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC26H24N4O2S计算值：456.1620，实测值：457.1671(M+H)
获得实施例84，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H22N4O2S计算值：456.1620，实测值：457.1701(M+H)
实施例85：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(3-甲基-1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例86：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(3-甲基-1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIc，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1H-吲哚作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。HRMS C26H24N4O2S计算值：456.1620，实测值：457.1691(M+H)
获得实施例86，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H24N4O2S计算值：456.1620，实测值：457.1688(M+H)
实施例87：N-[6-乙基-5-(1-甲基-1H-吲唑-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吲唑作为适当的硼酸衍生物，获得实施例87，为非对映异构体的混合物。HRMS C25H23N5O2S计算值：457.1572，实测值：458.1646和458.1648(M+H)
实施例88：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例89：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(1-甲基-1H-吲唑-7-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(1-甲基吲唑-7-基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得实施例88，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC25H23N2O2S计算值：457.1572，实测值：458.1641(M+H)
获得实施例89，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H23N2O2S计算值：457.1572，实测值：458.1634(M+H)
实施例90：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-4-羟基-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例91：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-4-羟基-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将500mg制备7e(1.12mMol)和157mg NCS(1.173mMol)溶于30mL THF，将混合物于60℃搅拌过夜。减压蒸发溶剂，残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得2-[[5-(3-氯代-4-羟基-2-甲基-苯基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-苯基-丙酸甲酯，为非对映异构体的混合物(伴有其它区域异构体)。粗品产物根据通用方法VII水解。非对映异构体通过制备性反相色谱纯化和分离，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例90，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1153(M+H)
获得实施例91，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1143(M+H)
实施例92：N-[(5Ra)-5-(2,3-二氯代苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例93：N-[(5Sa)-5-(2,3-二氯代苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2,3-二氯代苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，采用Xantphos代替nBuPAd2，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例92，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C23H19Cl2N3O2S计算值：471.0575，实测值：472.0667(M+H)
获得实施例93，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C23H19Cl2N3O2S计算值：471.0575，实测值：472.0654(M+H)
实施例94：N-[(5Ra)-5-(3,4-二氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例95：N-[(5Sa)-5-(3,4-二氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIb，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3,4-二氯代-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，采用Xantphos作为配体代替Q-Phos，DME:水4:1代替2-Me-THF，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例94，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC24H21Cl2N3O2S计算值：485.0731，实测值：486.0816(M+H)
获得实施例95，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21Cl2N3O2S计算值：485.0731，实测值：486.0797(M+H)
实施例96：N-[(5Ra)-5-(3-溴-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例97：N-[(5Sa)-5-(3-溴-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备B7作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例96，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22BrN3O2S计算值：495.0616，实测值：496.0673(M+H)
获得实施例97，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22BrN3O2S计算值：495.0616，实测值：496.0687(M+H)
实施例98：N-[6-乙基-5-(1H-吲唑-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，1H-吲唑-4-基硼酸作为适当的硼酸衍生物，然后通过制备性反相色谱纯化粗品产物，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例98，为非对映异构体的混合物。HRMS C24H21N5O2S计算值：443.1416，实测值：444.1485和444.1481(M+H)
实施例99：N-[6-乙基-5-(喹啉-8-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IId，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，8-喹啉基硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得实施例99，为非对映异构体的混合物。HRMS C26H28N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1558(M+H)
实施例100：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例101：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用制备性反相色谱分离实施例79的非对映异构体，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例100，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O2S计算值：453.1511，实测值：454.1596(M+H)
获得实施例101，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O2S计算值：453.1511，实测值：454.1577(M+H)
实施例102：N-[6-乙烯基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例103：N-[6-乙烯基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4w作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得实施例102，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC27H21N3O2S计算值：451.1354，实测值：452.1411(M+H)
获得实施例103，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H21N3O2S计算值：451.1354，实测值：452.1412(M+H)
实施例104：N-[(5Sa)-5-(萘-1-基)-6-((1Z)-丙-1-烯-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例105：N-[(5Ra)-5-(萘-1-基)-6-((1Z)-丙-1-烯-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4x作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例104，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1577(M+H)
实施例104还包含55％的实施例108。
获得实施例105，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1578(M+H)
实施例105还包含55％的实施例109。
实施例106：N-[(5Sa)-5-(萘-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例107：N-[(5Ra)-5-(萘-1-基)-6-(丙-1-烯-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4y作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例106，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1581(M+H)
获得实施例107，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1597(M+H)
实施例108：N-{(5Sa)-5-(萘-1-基)-6-[(1E)-丙-1-烯-1-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基}-D-苯丙氨酸
和
实施例109：N-{(5Ra)-5-(萘-1-基)-6-[(1E)-丙-1-烯-1-基]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基}-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4z作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例108，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1593(M+H)
获得实施例109，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H23N3O2S计算值：465.1511，实测值：466.1581(M+H)
实施例110：N-[5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-(1H-吡唑-1-基)丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，2-氨基-3-吡唑-1-基-丙酸甲酯盐酸盐作为适当的氨基酸衍生物，然后水解根据通用方法VII形成的中间体，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例110，为非对映异构体混合物。HRMS C21H20ClN5O2S计算值：441.1026，实测值：442.1120和442.1123(M+H)
实施例111：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环戊基-D-丙氨酸
和
实施例112：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环戊基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环戊基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例111，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C23H26ClN3O2S计算值：443.1434，实测值：444.1519(M+H)
获得实施例112，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C23H26ClN3O2S计算值：443.1434，实测值：444.1518(M+H)
实施例113：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例114：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备3a作为适当的5-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(3-氯代-2-甲基-苯基)硼酸作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例113，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O2S计算值：451.1121，实测值：452.1192(M+H)
获得实施例114，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O2S计算值：451.1121，实测值：452.1174(M+H)
实施例115：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-L-苯丙氨酸
和
实施例116：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-L-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，L-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得
实施例115，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O2S计算值：451.1121，实测值：452.1207(M+H)
获得实施例116，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O2S计算值：451.1121，实测值：452.1183(M+H)
实施例117：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环己基-D-丙氨酸
和
实施例118：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-环己基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环己基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例117，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H28ClN3O2S计算值：457.1591，实测值：458.1672(M+H)
获得实施例118，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H28ClN3O2S计算值：457.1591，实测值：458.1663(M+H)
实施例119：N-[5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-α-甲基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-2-甲基-3-苯基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例119，为非对映异构体的混合物。HRMS C25H24ClN3O2S计算值：465.1278，实测值：466.1372和466.1356(M+H)
实施例120：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
和
实施例121：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例120，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1135(M+H)
获得实施例121，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1162(M+H)
实施例122：(βS)-N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-羟基-D-苯丙氨酸
和
实施例123：(βS)-N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-羟基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R,3S)-3-苯基丝氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例122，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1151(M+H)
获得实施例123，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1133(M+H)
实施例124：(βR)-N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-羟基-L-苯丙氨酸
和
实施例125：(βR)-N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-羟基-L-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2S,3R)-2-氨基-3-羟基-3-苯基丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例124，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1144(M+H)
获得实施例125，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H22ClN3O3S计算值：467.1070，实测值：468.1153(M+H)
实施例126：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氰基-D-苯丙氨酸
和
实施例127N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氰基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-氰基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液获得。实施例126，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClN4O2S计算值：476.1074，实测值：477.1129(M+H)
获得实施例127，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClN4O2S计算值：476.1074，实测值：477.1134(M+H)
实施例128：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例129：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ic，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例128，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O3S计算值：481.1227，实测值：482.1320(M+H)
获得实施例129，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O3S计算值：481.1227，实测值：482.1319(M+H)
实施例130：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2,6-二氟-D-苯丙氨酸
和
实施例131：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2,6-二氟-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2,6-二氟苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例130，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClF2N3O2S计算值：487.0933，实测值：488.1009(M+H)
获得实施例131，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClF2N3O2S计算值：487.0933，实测值：488.1020(M+H)
实施例132：(2R)-2-{[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}-3-(1H-吲哚-4-基)丙酸
和
实施例133：(2R)-2-{[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}-3-(1H-吲哚-4-基)丙酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-4-基)丙酸盐酸盐作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例132，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H23ClN4O2S计算值：490.1230，实测值：491.1289(M+H)
获得实施例133，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H23ClN4O2S计算值：490.1230，实测值：491.1309(M+H)
实施例134：2-氨基甲酰基-N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-氨基甲酰基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例134，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H23ClN4O3S计算值：494.1179，实测值：495.1255(M+H)
实施例135：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-硝基-D-苯丙氨酸
和
实施例136：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-硝基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-硝基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例135，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21ClN4O4S计算值：496.0972，实测值：497.1026(M+H)
获得实施例136，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21ClN4O4S计算值：496.0972，实测值：497.1045(M+H)
实施例137：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸
和
实施例138：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(三氟甲基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-[2-(三氟甲基)苯基]丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例137，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClF3N3O2S计算值：519.0995，实测值：520.1068(M+H)
获得实施例138，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClF3N3O2S计算值：519.0995，实测值：520.1047(M+H)
实施例139：2-溴-N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例140：2-溴-N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-[2-溴苯基]丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例139，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21ClBrN3O2S计算值：529.0226，实测值：530.0312(M+H)
获得实施例140，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H21ClBrN3O2S计算值：529.0226，实测值：530.0294(M+H)
实施例141：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙氧基]-D-苯丙氨酸
和
实施例142：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(二甲基氨基)-2-氧代乙氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A9作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例141，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC28H29ClN4O4S计算值：552.1598，实测值：553.1694(M+H)
获得实施例142，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H29ClN4O4S计算值：552.1598，实测值：553.1673(M+H)
实施例143：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2-环戊基乙氧基)-D-苯丙氨酸
和
实施例144：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2-环戊基乙氧基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A10作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例143，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC31H34ClN3O3S计算值：563.2009，实测值：564.2106(M+H)
获得实施例144，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H34ClN3O3S计算值：563.2009，实测值：564.2101(M+H)
实施例145：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2-苯基乙氧基)-D-苯丙氨酸
和
实施例146：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2-苯基乙氧基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A11作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例145，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC32H30ClN3O3S计算值：571.1696，实测值：572.1769(M+H)
获得实施例146，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C32H30ClN3O3S计算值：571.1696，实测值：572.1763(M+H)
实施例147：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(3-苯基丙氧基)-D-苯丙氨酸
和
实施例148：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(3-苯基丙氧基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A12作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例147，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC33H32ClN3O3S计算值：585.1853，实测值：586.1917(M+H)
获得实施例148，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C33H32ClN3O3S计算值：585.1853，实测值：586.1906(M+H)
实施例149：2-[(3-氯代苄基)氧基]-N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例150：2-[(3-氯代苄基)氧基]-N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A13作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例149，为较早洗脱的非对映异构体。HRMSC31H27Cl2N3O3S计算值：591.1150，实测值：592.1211(M+H)
获得实施例150，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H27Cl2N3O3S计算值：591.1150，实测值：592.1234(M+H)
实施例151：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
和
实施例152：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例151，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C23H21ClN4O2S计算值：452.1074，实测值：453.1146(M+H)
获得实施例15，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C23H21ClN4O2S计算值：452.1074，实测值：453.1135(M+H)
实施例153：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-D-苯丙氨酸
和
实施例154：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A14作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例153，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H36ClN5O3S计算值：593.2227，实测值：594.2297(M+H)
获得实施例154，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H36ClN5O3S计算值：593.2227，实测值：594.2289(M+H)
实施例155：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-D-苯丙氨酸
和
实施例156：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A15作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例155，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H31ClN4O3S计算值：538.1805，实测值：539.1890(M+H)
获得实施例156，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H31ClN4O3S计算值：538.1805，实测值：539.1887(M+H)
实施例157：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[3-(二甲基氨基)丙氧基]-D-苯丙氨酸
和
实施例158：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[3-(二甲基氨基)丙氧基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，制备A16作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例157，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C29H33ClN4O3S计算值：552.1962，实测值：553.2043(M+H)
获得实施例158，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C29H33ClN4O3S计算值：552.1962，实测值：553.2053(M+H)。
实施例159：3-环丙基-N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环丙基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例159，为非对映异构体混合物。HRMS C24H23N3O2S计算值：417.1511，实测值：418.1570(M+H)
实施例160：(2R)-{[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}(苯基)乙酸，非对映异构体1
和
实施例161：(2R)-{[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}(苯基)乙酸，非对映异构体2
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-2-苯基-乙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例160，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H21N3O2S计算值：439.1354，实测值：440.1428(M+H)
获得实施例161，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H21N3O2S计算值：439.1354，实测值：440.1412(M+H)
实施例162：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-3-基-D-丙氨酸
和
实施例163：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-3-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(3-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例162，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1520(M+H)
获得实施例163，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1536(M+H)
实施例164：3-环己基-N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环己基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.02％HCOOH水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例164，为非对映异构体混合物。HRMS C27H29N3O2S计算值：459.1980，实测值：460.2042(M+H)
实施例165：3-环己基-N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸
和
实施例166：3-环己基-N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸
通过制备性反相色谱分离实施例164的非对映异构体，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例165，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H29N3O2S计算值：459.1980，实测值：460.2043(M+H)
获得实施例166，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H29N3O2S计算值：459.1980，实测值：460.2058(M+H)
实施例167：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲基-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例168：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲基-D-苯丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-2’-甲基苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例167，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1747(M+H)
获得实施例168，为后洗脱的非对映异构体。HRMS计算值C28H25N3O2S：467.1667，实测值：468.1748(M+H)
实施例169：(2R)-2-{[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}-4-苯基丁酸
采用通用方法Ia，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-4-苯基-丁酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.02％HCOOH水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例169，为非对映异构体的混合物。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1731(M+H)
实施例170：(2R)-2-{[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}-4-苯基丁酸
和
实施例171：(2R)-2-{[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}-4-苯基丁酸
实施例169的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例170，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1733(M+H)
获得实施例171，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1726(M+H)
实施例172：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-酪氨酸
和
实施例173：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-酪氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(4-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例172，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1539(M+H)
获得实施例173，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1534(M+H)
实施例174：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
和
实施例175：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-羟基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-羟基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。
获得实施例174，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1546(M+H)
获得实施例175，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1520(M+H)
实施例176：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-4-氟-D-苯丙氨酸
和
实施例177：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-4-氟-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例176，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1493(M+H)
获得实施例177，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1494(M+H)
实施例178：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-氟-D-苯丙氨酸
和
实施例179：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-氟-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(3-氟苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例178，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1486(M+H)
获得实施例179，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1482(M+H)
实施例180：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-D-苯丙氨酸
和
实施例181：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-氟-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-氟苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。
获得实施例180，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1501(M+H)
获得实施例181，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H22FN3O2S计算值：471.1417，实测值：472.1492(M+H)
实施例182：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例182，为非对映异构体的混合物。HRMS C28H25N3O3S计算值：483.1617，实测值：484.1682和484.1695(M+H)
实施例183：2-氯代-N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-氯代苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例183，为非对映异构体混合物。HRMS C27H22ClN3O2S计算值：487.1121，实测值：488.1198和488.1199(M+H)
实施例184：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-色氨酸
和
实施例185：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-色氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1H-吲哚-3-基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例184，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C29H24N4O2S计算值：492.1620，实测值：493.1693(M+H)
获得实施例185，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C29H24N4O2S计算值：492.1620，实测值：493.1690(M+H)
实施例186：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-萘-1-基-D-丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例187：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-萘-1-基-D-丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1-萘基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例186，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H25N3O2S计算值：503.1667，实测值：504.1754(M+H)
获得实施例187，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H25N3O2S计算值：503.1667，实测值：504.1758(M+H)
实施例188：(2R)-联苯-2-基{[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}乙酸，非对映异构体2
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(R)-氨基-联苯-2-基-乙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例188，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C32H25N3O2S计算值：515.1667，实测值：516.1747(M+H)
实施例189：(2R)-联苯-3-基{[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基}乙酸，非对映异构体1
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(R)-氨基-联苯-3-基-乙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例189，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C32H25N3O2S计算值：515.1667，实测值：516.1743(M+H)
实施例190：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-组氨酸
采用通用方法Ia，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1H-咪唑-4-基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例190，为非对映异构体的混合物。HRMSC24H21N5O2S计算值：443.1416，实测值：444.1462和444.1471，两种非对映异构体s(M+H)
实施例191：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例191，为非对映异构体的混合物。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1463，实测值：455.1537和455.1558，两种非对映异构体(M+H)
实施例192：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-3-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，3-(3-吡啶基)-D-丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例192，为非对映异构体的混合物。HRMS C26H22N4O2S计算值：454.1445，实测值：455.1545和455.1553，两种非对映异构体(M+H)
实施例193：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-4-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(4-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例193，为非对映异构体的混合物。HRMSC26H22N4O2S计算值：454.1440，实测值：455.1540和455.1545，两种非对映异构体(M+H)
实施例194：N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-1-甲基-D-组氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1-甲基咪唑-4-基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例194，为非对映异构体的混合物。HRMSC25H23N5O2S计算值：457.1572，实测值：458.1641和458.1654，两种非对映异构体s(M+H)
实施例195：1-苄基-N-[6-乙基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-组氨酸
采用通用方法Ib，制备4k作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(1-苄基咪唑-4-基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例195，为非对映异构体的混合物。HRMS C31H27N5O2S计算值：533.1885，实测值：534.1934和534.1934，两种非对映异构体(M+H)
实施例196：N-[6-甲基-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4l作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得
实施例196，为非对映异构体的混合物。HRMS C26H21N3O2S计算值：439.1354，实测值：440.1421和440.1429(M+H)
实施例197：N-[6-(羟基甲基)-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例198：N-[6-(羟基甲基)-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4m作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例197，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H21N3O3S计算值：455.1304，实测值：456.1356(M+H)
获得实施例198，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H21N3O3S计算值：455.1304，实测值：456.1390(M+H)
实施例199：N-[6-乙酰基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例200：N-[6-乙酰基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4o作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例199，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H21N3O3S计算值：467.1304，实测值：468.1379(M+H)
获得实施例200，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H21N3O3S计算值：467.1304，实测值：468.1377(M+H)
实施例201：N-[5-(萘-1-基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例202：N-[5-(萘-1-基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ib，制备4q作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例201，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1731(M+H)
获得实施例202，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1720(M+H)
实施例203：N-[6-(1-羟基乙基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例204：N-[6-(1-羟基乙基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ia，制备4n1作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例203，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1511(M+H)
获得实施例204，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1536(M+H)
实施例205：N-[6-(1-羟基乙基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体3
和
实施例206：N-[6-(1-羟基乙基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体4
采用通用方法Ia，制备4n2作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例205，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C27H23N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1539(M+H)
获得实施例206，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C27H33N3O3S计算值：469.1460，实测值：470.1534(M+H)
实施例207：N-[6-(二氟甲基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例208：N-[6-(二氟甲基)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ia，制备4r作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例207，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H19F2N3O2S计算值：475.1166，实测值：476.1242(M+H)
获得实施例208，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H19F2N3O2S计算值：475.1166，实测值：476.1244(M+H)
实施例209：N-[6-(2-羟基丙-2-基)-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例210：N-[6-(2-羟基丙-2-基)-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4p作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例209，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O3S计算值：483.1617，实测值：484.1689(M+H)
获得实施例210，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C28H25N3O3S计算值：483.1617，实测值：484.1704(M+H)
实施例211：N-[6-碘-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4s作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，采用DMA作为溶剂代替DMSO，获得非对映异构体的混合物。将其通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例211，为非对映异构体的混合物。HRMS C25H18IN3O2S计算值：551.0164，实测值：552.0258(M+H)
实施例212：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙烯基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例213：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-乙烯基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIc，制备5a作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶，乙烯基硼酸频哪醇酯作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例212，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClN3O2S计算值：449.0965，实测值：450.1038(M+H)
获得实施例213，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClN3O2S计算值：449.0965，实测值：450.1050(M+H)
实施例214：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例215：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-1-烯-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIc，制备5a作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶，2-异丙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷作为适当的硼酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例214，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22ClN3O2S计算值：463.1121，实测值：464.1178(M+H)
获得实施例215，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22ClN3O2S计算值：463.1121，实测值：464.1179(M+H)
实施例216：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-环丙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例217：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-环丙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法IIa，制备5a作为适当的6-碘-噻吩并[2,3-d]嘧啶，环丙基硼酸作为适当的硼酸衍生物，Bu4NOH代替K2CO3，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例216，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22ClN3O2S计算值：463.1121，实测值：464.1177(M+H)
获得实施例217，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H22ClN3O2S计算值：463.1121，实测值：464.1182(M+H)
实施例218：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-L-苯丙氨酸
和
实施例219：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-L-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4u作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，L-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例218，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O2S计算值：465.1278，实测值：466.1371(M+H)
获得实施例219，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O2S计算值：465.1278，实测值：466.1361(M+H)
实施例220：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例221：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4u作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，D-苯丙氨酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例220，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O2S计算值：465.1278，实测值：466.1348(M+H)
获得实施例221，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H24ClN3O2S计算值：465.1278，实测值：466.1350(M+H)
实施例222：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
和
实施例223：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-2-甲基苯基)-6-(丙-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸
采用通用方法Ib，制备4u作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-甲氧基苯基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例222，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C26H26ClN3O3S计算值：495.1383，实测值：496.1460(M+H)
获得实施例223，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C26H26ClN3O3S计算值：495.1383，实测值：496.1454(M+H)
实施例224：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例225：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将522mg制备7h(1mMol)、164mg NCS(1.2mMol)、15mL CCl4和10mL THF于室温下氮气环境中搅拌2小时。然后将混合物倒入冰水中，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。形成的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例224，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClN4O2S计算值：476.1074，实测值：477.1133(M+H)
获得实施例225，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21ClN4O2S计算值：476.1074，实测值：477.1137(M+H)
实施例226：N-[(5Sa)-5-(3-溴-1H-吲哚-4-基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例227：N-[(5Ra)-5-(3-溴-1H-吲哚-4-基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将522mg制备7h(1mMol)、216mg NBS(1.2mMol)、15mL CCl4和5mL THF于室温下氮气环境中搅拌2小时。然后将混合物倒入冰水中，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。形成的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例226，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21BrN4O2S计算值：520.0569，实测值：521.0653(M+H)
获得实施例227，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21BrN4O2S计算值：520.0569，实测值：521.0629(M+H)
实施例228：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(3-碘-1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
和
实施例229：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(3-碘-1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将522mg制备7h(1mMol)、196mg KOH(3.5mMol)、15mL DMF和267mg碘(1.05mMol)于室温下氮气环境中搅拌18小时。然后将混合物倒入冰水中，加入饱和的Na2S2O3溶液。将混合物用DCM萃取，合并的有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。形成的非对映异构体通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例228，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21IN4O2S计算值：568.043，实测值：569.0498(M+H)
获得实施例229，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H21IN4O2S计算值：568.043，实测值：569.0502(M+H)
实施例230：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例231：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(二甲基氨基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，2-(N,N-二甲基氨基)乙醇作为适当的醇，获得实施例230，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C29H30ClN5O2S计算值：547.1809，实测值：548.1902(M+H)
获得实施例231，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C29H30ClN5O2S计算值：547.1809，实测值：548.1889(M+H)
实施例232：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例233：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(吡咯烷-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，2-吡咯烷-1-基乙醇作为适当的醇，获得实施例232，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H32ClN5O2S计算值：573.1965，实测值：574.2059(M+H)
获得实施例233，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H32ClN5O2S计算值：573.1965，实测值：574.2060(M+H)
实施例234：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例235：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(哌啶-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，2-(1-哌啶基)乙醇作为适当的醇，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例234，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C32H34ClN5O2S计算值：587.2122，实测值：588.2201(M+H)
获得实施例235，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C32H34ClN5O2S计算值：587.2122，实测值：588.2199(M+H)
实施例236：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例237：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，2-吗啉代乙醇作为适当的醇，获得实施例236，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C31H32ClN5O3S计算值：589.1914，实测值：590.1998(M+H)
获得实施例237，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C31H32ClN5O3S计算值：589.1914，实测值：590.1994(M+H)。
实施例238：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例239：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇，获得实施例238，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C32H35ClN6O2S计算值：602.2231，实测值：603.2312(M+H)
获得实施例239，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C32H35ClN6O2S计算值：602.2231，实测值：603.2311(M+H)
实施例240：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
和
实施例241：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-D-苯丙氨酸
采用通用方法VIII，制备7i作为适当的吲哚衍生物，3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-醇作为适当的醇，获得实施例240，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C33H37ClN6O2S计算值：616.2387，实测值：617.2466(M+H)
获得实施例241，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C33H37ClN6O2S计算值：616.2387，实测值：617.2473(M+H)
实施例242：3-环己基-N-[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸，非对映异构体1
和
实施例243：3-环己基-N-[6-乙基-5-(1H-吲哚-4-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-丙氨酸，非对映异构体2
采用通用方法Ia，制备4v作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-环己基-丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用0.1％TFA水溶液和乙腈作为洗脱液。获得实施例242，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H28N4O2S计算值：448.1933，实测值：449.1994(M+H)
获得实施例243，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H28N4O2S计算值：448.1933，实测值：449.2006(M+H)
实施例244：N-[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
和
实施例245：N-[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ia，制备7j作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例244，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClN5O2S计算值：477.1026，实测值：478.1087(M+H)
获得实施例245，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C24H20ClN5O2S计算值：477.1026，实测值：478.1089(M+H)
实施例246：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯
将0.13g实施例244(0.27mMol)溶于13mL MeOH，然后加入0.3mL cc.H2SO4，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，加入饱和的NaHCO3水溶液，振摇混合物。过滤收集形成的沉淀物，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯。
步骤B：实施例246
采用通用方法VIII，(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯作为适当的吲哚衍生物，2-吗啉代乙醇作为适当的醇，获得实施例246。HRMS C30H31ClN6O3S计算值：590.1867，实测值：591.1938(M+H)
实施例247：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(吗啉-4-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯
将0.157g实施例245(0.33mMol)溶于15mL MeOH，然后加入0.3mL cc.H2SO4，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，加入饱和的NaHCO3水溶液，振摇混合物。过滤收集形成的沉淀物，获得(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯。
步骤B：实施例247
采用通用方法VIII，(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯作为适当的胺，2-吗啉代乙醇作为适当的醇，获得实施例247。HRMS C30H31ClN6O3S计算值：590.1867，实测值：591.1918(M+H)
实施例248：N-((5Sa)-5-{3-氯代-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯
将0.13g实施例244(0.27mMol)溶于13mL MeOH，然后加入0.3mL cc.H2SO4，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，加入饱和的NaHCO3水溶液，振摇混合物。过滤收集形成的沉淀物，获得(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯。
步骤B：实施例248
采用通用方法VIII，(2R)-2-[[(5Sa)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯作为适当的吲哚衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇，获得实施例248。HRMSC31H34ClN7O2S计算值：603.2183，实测值：302.6172(M+2H)
实施例249：N-((5Ra)-5-{3-氯代-1-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基]-1H-吲哚-4-基}-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基)-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
步骤A：(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯
将0.157g实施例245(0.33mMol)溶于15mL MeOH，然后加入0.3mL cc.H2SO4，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其减压浓缩，加入饱和的NaHCO3水溶液，振摇混合物。过滤收集形成的沉淀物，获得(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯。
步骤B：实施例249
采用通用方法VIII，(2R)-2-[[(5Ra)-5-(3-氯代-1H-吲哚-4-基)-6-乙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]氨基]-3-(2-吡啶基)丙酸甲酯作为适当的吲哚衍生物，2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇作为适当的醇，获得实施例249。HRMS C31H34ClN7O2S计算值：603.2183，实测值：302.6164(M+2H)
实施例250：N-[6-(二氟甲基)-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
和
实施例251：N-[6-(二氟甲基)-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-3-吡啶-2-基-D-丙氨酸
采用通用方法Ia，制备4r作为适当的4-氯代-噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物，(2R)-2-氨基-3-(2-吡啶基)丙酸作为适当的氨基酸衍生物，获得非对映异构体的混合物。它们通过制备性反相色谱分离，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液。获得实施例250，为较早洗脱的非对映异构体。HRMS C25H18F2N4O2S计算值：476.1119，实测值：477.1195(M+H)
获得实施例251，为后洗脱的非对映异构体。HRMS C25H18F2N4O2S计算值：476.1119，实测值：477.1182(M+H)
实施例252：N-[(5Sa)-5-(萘-1-基)-6-丙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将266mg实施例108(0.57mMol)溶于10mL MeOH和2mL AcOH，然后加入61mg 10％Pd/C。将混合物于40℃氢气环境中搅拌2小时。将其通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液，获得实施例252。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1746(M+H)
实施例253：N-[(5Ra)-5-(萘-1-基)-6-丙基噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸
将266mg实施例109(0.57mMol)溶于10mL MeOH和2mL AcOH，然后加入61mg 10％Pd/C。将混合物于40℃氢气环境中搅拌2小时。将其通过硅藻土过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用40mM NH4OAc水溶液(pH＝4，采用AcOH调节)和乙腈作为洗脱液，获得实施例253。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1736(M+H)
实施例254：N-[6-乙基-(5Sa)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸甲酯
将102mg实施例101(0.225mMol)溶于2mL MeOH，将混合物在氮气环境中冷却至0℃。然后加入135μL重氮甲基(三甲基)硅烷溶液(2M的Et2O溶液)，将混合物温热至室温。然后将混合物真空浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得实施例254。HRMS C28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1746(M+H)
实施例255：N-[6-乙基-(5Ra)-5-(萘-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸甲酯
将102mg实施例100(0.225mMol)溶于2mL MeOH，将混合物在氮气环境中冷却至0℃。然后加入135μL重氮甲基(三甲基)硅烷溶液(2M的Et2O溶液)，将混合物温热至室温。将混合物真空浓缩，通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得实施例255。HRMSC28H25N3O2S计算值：467.1667，实测值：468.1737(M+H)
实施例256：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
将实施例7溶于HCl溶液(20mL/mmol,1.25M的EtOH溶液)，将混合物于室温下搅拌过夜.然后将混合物用NaHCO3溶液中和，将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例256。HRMS C49H49ClFN7O5S计算值：901.3188，实测值：902.3225(M+H)
实施例257：2-[(1-叔-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸乙酯
将实施例40溶于HCl溶液(20mL/mmol,1.25M的EtOH溶液)，将混合物于室温下搅拌过夜.然后将混合物用NaHCO3溶液中和，将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例257。HRMS C42H50ClN7O4S计算值：783.3334，实测值：392.6744(M+2H)
实施例258：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
将实施例45溶于HCl溶液(20mL/mmol,1.25M的EtOH溶液)，将混合物于室温下搅拌过夜.然后将混合物用NaHCO3溶液中和，将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例258。HRMS C46H48ClN7O5S计算值：845.3126，实测值：423.6650(M+H)
实施例259：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯
将实施例49溶于HCl溶液(20mL/mmol,1.25M的EtOH溶液)，将混合物于室温下搅拌过夜。然后将混合物用NaHCO3溶液中和，将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例259。HRMS C43H43ClN6O5S计算值：790.2704，实测值：396.1425(M+2H)
实施例260：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸乙酯
将实施例51溶于HCl溶液(20mL/mmol,1.25M的EtOH溶液)，将混合物于60℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物用NaHCO3溶液中和，将其用DCM萃取。有机相经硫酸钠干燥，过滤，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例260。HRMS C48H48ClFN6O6S计算值：890.3029，实测值：891.3105(M+H)
实施例261：(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸酯
将1eq.实施例51和1.1eq.4-(氯代甲基)-5-甲基-1,3-间二氧杂环戊烯-2-酮溶于DMF(10mL/mmol)，然后加入2eq.NaI和2eq.Cs2CO3，将混合物搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将混合物直接注射，通过制备性反相色谱纯化，采用25mM NH4HCO3水溶液和乙腈作为洗脱液，获得实施例261。HRMS C51H48ClFN6O9S计算值：974.2876，实测值：975.2949(M+H)
实施例262:N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸1-[(乙氧基羰基)氧基]乙酯
实施例263:N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸1-[(二甲基氨基甲酰基)氧基]乙酯
实施例264：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[3-(羟基甲基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
实施例265：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(羟基甲基)吡啶-4-基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
实施例266：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[6-(羟基甲基)哒嗪-4-基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
实施例267：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[6-(羟基甲基)吡嗪-2-基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
实施例268：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2'-(羟基甲基)-2,5'-联嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
实施例269：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[4-(磷酰氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸
实施例270：N-[5-{3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
步骤A：4-溴-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚
将30.16g 4-溴-3,5-二甲基-苯酚(150mMol)溶于75mL 1,2-二氯乙烷和75mL乙腈的混合物中，然后分次加入40.06g NCS(300mMol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，将残留物溶于DCM，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6):10.10(s,1H),2.46(s,6H)
步骤B:1-溴-3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯
向26.0g 4-溴-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚(96.3mMol)和26.6g K2CO3(192.6mMol)的300mL MeCN溶液中加入6.6mL MeI(105.9mMol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。过滤固体，将滤液减压浓缩。粗品产物溶于DCM，用水和盐水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，减压浓缩，其无需进一步纯化可以直接用于下一步骤。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：3.78(s,3H),2.49(s,6H)
步骤C：2-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷
将10.0g 1-溴-3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯(35.2mMol)在氮气环境中溶于360mL无水THF，用干冰-丙酮冷却至-78℃。加入23.2mL nBuLi(1.6M的己烷溶液)(37.0mMol)，将混合物搅拌15分钟，然后加入8.6mL 2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(42.24mMol)，将混合物温热至室温。将其用盐水骤冷，用DCM萃取，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得2-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：3.81(s,3H),2.33(s,6H),1.34(s,12H)
步骤D：4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
将3.92g 4-溴噻吩-3-甲酸乙酯(16.68mMol)和9.9g 2-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(30.0mMol)溶于140mL二氧六环，然后加入溶于40mL水的10.87g Cs2CO3(33.36mMol)。随后加入590mg AtaPhos(0.83mMol)，将混合物在氮气环境中于回流温度下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其用DCM和盐水稀释，相分离后，水相用DCM萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.53(d,1H),7.47(d,1H),4.02(q,2H),3.83(s,3H),1.95(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+NH4)+＝376.0538
步骤E：4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将2.65g 4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)噻吩-3-甲酸酯(7.38mMol)溶于75mL乙腈，然后加入2.2mL氟硼酸乙醚复合物(16.23mMol)和3.65g N-碘琥珀酰亚胺(16.23mMol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：3.98(q,2H),3.84(s,3H),1.92(s,6H),0.84(t,3H)
步骤F：4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯
将5.29g的4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-2,5-二碘-噻吩-3-甲酸酯(8.66mMol)溶于90mL无水THF，然后在氩气环境中冷却至-78℃。加入6.7mL异丙基氯化镁、氯化锂复合物(1.3M的THF溶液)(8.66mMol)，将混合物于-78℃搅拌30分钟。然后加入饱和的aq.NH4Cl，将混合物用乙酸乙酯萃取。有机层经硫酸钠干燥并减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.71(s,1H),4.01(q,2H),3.86(s,3H),1.89(s,6H),0.99(t,3H)
步骤G：4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
将4.20g的4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-碘-噻吩-3-甲酸乙酯(8.66mMol)和1.82g的4-氟苯基硼酸(13.0mMol)溶于80mL二氧六环，然后加入溶于20mL水的5.64g Cs2CO3(17.32mMol)。然后加入500mg Pd(PPh3)4(0.43mMol)，将混合物在氮气环境中于80℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其用DCM稀释，盐水洗涤。相分离后，水相用DCM萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：8.58(s,1H),7.22-7.10(m,4H),4.03(q,2H),3.82(s,3H),1.92(s,6H),1.00(t,3H)
HRMS(M+H)+＝453.0498
步骤H：4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯
将1.97g 4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯(4.34mMol)溶于40mL无水乙腈，然后加入576mg四氟硼酸硝(4.34mMol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其用DCM稀释，盐水洗涤。相分离后，水相用DCM萃取。合并有机层，经硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩。粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.37-7.33(m,2H),7.32-7.26(m,2H),4.14(q,2H),3.82(s,3H),2.06(s,6H),0.88(t,3H)
步骤I：2-氨基-4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯
将1.85g的4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)-2-硝基-噻吩-3-甲酸乙酯(3.71mMol)溶于90mL乙酸和18mL水的混合物中，然后分次加入2.43g锌粉(37.1mMol)，将混合物于室温下搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，粗品产物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得2-氨基-4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：7.73(s,2H),7.12-7.06(m,2H),7.02-6.97(m,2H),3.86-3.80(m,2H),3.80(s,3H),2.01(s,6H),0.72(t,3H)
HRMS(M+H)+＝456.0598
步骤J：5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮
将1.1g 2-氨基-4-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-5-(4-氟苯基)噻吩-3-甲酸乙酯(2.35mMol)溶于20mL甲酰胺，将其于150℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。然后将其倒入水中，过滤收集沉淀的产物，获得5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):12.53(br s,1H),8.18(s,1H),7.23-7.16(m,4H),3.84(s,3H),1.96(s,6H)
HRMS(M+H)+＝449.0289
步骤K：4-氯代-5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将700mg的5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(1.56mMol)溶于6mL磷酰氯，将其于90℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。将反应混合物减压浓缩，然后向粗品产物中加入冰水，将其超声10分钟。通过过滤收集沉淀的产物，获得4-氯代-5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.02(s,1H),7.38-7.26(m,4H),3.86(s,3H),1.99(s,6H)
HRMS(M+H)+＝466.9954
步骤L：2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚
于0℃向搅拌的700mg的4-氯代-5-(3,5-二氯代-4-甲氧基-2,6-二甲基-苯基)-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶(1.50mMol)的15mL DCM溶液中加入3.0mL三溴化硼(1M的DCM溶液)(3.0mMol)，将混合物温热至室温，将其搅拌直到没有观察到进一步的转化。将混合物用饱和的aq.NH4Cl骤冷，用DCM萃取。合并的有机相经硫酸钠干燥并减压浓缩。残留物通过快速色谱纯化，采用庚烷和EtOAc作为洗脱液，获得2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚，为37:63的产物混合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):10.14(br s,1H),9.01(s,1H),7.40-7.23(m,4H),1.95(s,6H)和10.14(br s,1H),8.93(s,1H),7.40-7.23(m,4H),1.93(s,6H)
HRMS(M+H)+＝452.9800和496.9287
步骤M：4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶
将300mg的2,6-二氯代-4-[4-氯代-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-3,5-二甲基-苯酚和4-[4-溴-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-5-基]-2,6-二氯代-3,5-二甲基-苯酚(0.62mMol)的混合物、286mg的2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙醇(1.98mMol)和520mg三苯基膦(1.98mMol)溶于10mL无水甲苯，然后加入460mg偶氮二甲酸二叔丁基酯(1.98mMol)。将混合物于50℃氮气环境中搅拌直到没有观察到进一步的转化。减压蒸发挥发物，粗品中间体通过快速色谱纯化，采用EtOAc和甲醇作为洗脱液，获得4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶，为35:65的产物混合物。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)：9.02(S,1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t,2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.17(br s,3H),1.98(s,6H)和8.94(S,1H),7.40-7.22(m,4H),4.11(t,2H),2.78(t,2H),2.63-2.20(m,8H),2.15(br s,3H),1.98(s,6H)
HRMS(M+H)+＝579.0968和623.0455
步骤N：实施例270
将250mg的4-氯代-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶和4-溴-5-[3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基]-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶(0.41mMol)的混合物、327mg(2R)-2-氨基-3-[2-[[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基]苯基]丙酸(制备A4,0.86mMol)和280mg Cs2CO3(0.86mMol)溶于5mL叔-丁醇，将混合物于70℃搅拌直到没有观察到进一步的转化。滤除固体，将滤液减压浓缩。粗品产物通过制备性反相色谱纯化，采用25mMNH4HCO3水溶液和MeCN洗脱，获得实施例270。HRMS C48H46N7O5FSCl2计算值：921.2642，实测值：461.6398(M+2H)
实施例271：N-[5-{2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸
实施例272：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-(羟基甲基)-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯丙氨酸
实施例273：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-羟基-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯丙氨酸
实施例274：N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-β-(2-羟基乙基)-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}苯丙氨酸
药理学研究
实施例A：通过荧光偏振技术抑制Mcl-1
通过荧光偏振(FP)测定每种化合物的相对结合效能。该方法使用与Mcl-1蛋白结合的荧光素标记的配体(荧光素-βAla-Ahx-A-REIGAQLRRMADDLNAQY-OH；mw 2,765)(使得Mcl-1对应于
Figure BDA0001538919380001321
入藏登记号(primary accession number)：Q07820)，从而导致采用读取器以毫偏振(milli-polarisation)(mP)单位测量的各向异性增加。竞争性结合与配体相同位点的化合物的加入导致系统中未结合配体的比例增加，由mP单位的降低表示。
方法1：在DMSO中制备各种化合物的11点连续稀释液，将2μl转移到平底低结合的384孔板(最终DMSO浓度5％)中。然后加入含有荧光素标记的配体(终浓度1nM)和Mcl-1蛋白质(终浓度5nM)的38μl缓冲液(10mM 4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸[HEPES]，150mM NaCl，0.05％吐温20，pH7.4)。
在用Biomek Synergy2读数仪(Ex.528nm,Em.640nm,截止510nm)测量FP并计算mP单位之前，将试验板在室温下孵育约2小时。递增剂量的试验化合物的结合表示为与在“仅有5％DMSO”和“100％抑制”对照之间建立的窗口相比mP降低的百分比。采用4-参数对数模型(S形剂量-响应模型)，用XL-Fit软件对11点剂量响应曲线进行绘图，测定给出的mP降低50％的抑制浓度(IC50)。采用方法1获得的结果如下面表1所示；Mcl-1抑制的IC50没有下划线。
方法2：在DMSO中制备各种化合物的11点连续稀释液，将2μl转移到平底低结合的384孔板(最终DMSO浓度5％)中。然后加入含有荧光素标记的配体(终浓度10nM)和Mcl-1蛋白质(终浓度10nM)的38μl缓冲液(20mM Na2HPO4,1mM EDTA,50mM NaCl,pH 7.4)。
在用Biomek Synergy2读数仪(Ex.528nm,Em.640nm,截止510nm)测量FP并计算mP单位之前，将试验板在室温下孵育约2小时。递增剂量的试验化合物的结合表示为与在“仅有5％DMSO”和“100％抑制”对照(50μM未标记配体)之间建立的窗口相比mP降低的百分比。采用4-参数对数模型(S形剂量-响应模型)，用XL-Fit软件对11点剂量响应曲线进行绘图，测定给出的mP降低50％的抑制浓度(IC50)。采用方法2获得的结果如下面表1所示；采用方法2获得的Mcl-1抑制的IC50有下划线。
结果表明，本发明化合物能够抑制Mcl-1蛋白质与上文中所述的荧光肽之间的相互作用。
实施例B：体外细胞毒性
细胞毒性研究在H929多发性骨髓瘤肿瘤细胞系上进行。
将细胞分配到微量板上并暴露于试验化合物48小时。然后通过比色测定-微量细胞培养四唑检验(Cancer Res.,1987,47,939－942)对细胞活力进行定量测定。
结果以IC50(能够抑制50％细胞活力的化合物的浓度)表示，列于下表1中。
结果显示本发明的化合物具有细胞毒性。
表1：Mcl-1抑制的IC50(荧光偏振试验)和对H929细胞的细胞毒性的IC50
注意：采用方法2获得的Mcl-1抑制的IC50有下划线
Figure BDA0001538919380001331
Figure BDA0001538919380001341
Figure BDA0001538919380001351
Figure BDA0001538919380001361
Figure BDA0001538919380001371
Figure BDA0001538919380001381
ND：未测定
对于部分抑制剂，表明了给定浓度的试验化合物的荧光偏振抑制百分比。因此，45.1％@10μM是指对于10μM的试验化合物的浓度观察到45.1％的荧光偏振抑制。
实施例C：体内PARP的裂解形式的定量试验
在AMO-1多发性骨髓瘤细胞的异种移植模型中通过测定裂解的PARP水平而评估本发明化合物诱导凋亡的能力。
将1×107个AMO-1细胞皮下移植到免疫抑制的小鼠(SCID株)中。移植后12－14天，用各种化合物通过静脉内或口服途径治疗动物。治疗后，回收并裂解肿瘤包块，在肿瘤裂解物中定量测定裂解形式的PARP。
采用“Meso Scale Discovery(MSD)ELISA平台”试验进行定量测定，该试验可以特异性测定PARP的裂解形式。它以激活因子的形式表达，对应于治疗小鼠中裂解的PARP的量除以对照小鼠中裂解的PARP的量之间的比值。
结果(在下表2中显示)表明，本发明化合物能够在体内诱导AMO-1肿瘤细胞的凋亡。
表2：体内PARP的裂解形式的定量试验
Figure BDA0001538919380001382
Figure BDA0001538919380001391
实施例D：体内抗肿瘤活性
在AMO-1多发性骨髓瘤细胞的异种移植模型中评估本发明化合物的抗肿瘤活性。
将1×107个AMO-1细胞皮下移植到免疫抑制的小鼠(SCID株)中。
移植后6－8天，当肿瘤包块达到约150mm3时，以每日治疗方案(5天治疗)采用各种化合物治疗小鼠。从治疗开始每周两次测量肿瘤包块。
本发明化合物在AMO-1多发性骨髓瘤模型中具有抗肿瘤活性(肿瘤消退)，具有ΔT/C(产品活性的定性参数，其测定如下：从最初治疗当天的中值肿瘤体积减去最后治疗当天的中值肿瘤体积/最后一次治疗当天的未治疗对照组的肿瘤体积)的范围从-1.5至-24.5％。获得的结果显示，本发明化合物在治疗期间能够诱导显著的肿瘤消退。
实施例E：药用组合物：片剂
1000片片剂含有剂量为5mg的选自实施例1－274的化合物5g
Figure BDA0001538919380001392

Claims (50)

1.式(I)化合物：
Figure FDA0002911621880000011
其中：
◆A代表基团
Figure FDA0002911621880000012
其中1与-NH-基团连接，2与芳族环连接，
◆E代表苯基、吡啶-2-基、环己基、吡唑-1-基、环戊基、吲哚-4-基、环丙基、吡啶-3-基、吲哚-3-基、萘-1-基、咪唑-4-基或吡啶-4-基，
◆X代表氮原子或C-R4基团，
◆Y代表氮原子或C-R3基团，
◆R1代表卤素原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R2代表氢原子、卤素原子、羟基或者直链或支链(C1-C6)烷氧基，或R1和R2与携有它们的碳原子一起形成芳族环，其中
Figure FDA0002911621880000013
代表
Figure FDA0002911621880000014
Figure FDA0002911621880000021
◆R3代表氢原子、卤素原子、羟基、-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’或-O-烷基(C1-C6)-R10，
◆R4代表氢原子或卤素原子；
◆R5代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R6代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、羟基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、氰基、硝基、-烷基(C0-C6)-NR9R9’、-烷基(C0-C6)-Cy1、-O-烷基(C1-C6)-R10、-C(O)-NR9R9’，◆R7代表氢原子、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、-CHRaRb基团或杂芳基烷基(C1-C6)基团，
◆R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、-Cy2、卤素原子、氰基、-C(O)-R11或-C(O)-NR11R11’，
◆R9和R9’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，
或者R9和R9’与携有它们的氮原子一起形成由5－7个环成员组成的芳族或非芳族环，其除了所述氮原子外可以含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基的一个基团取代，
◆R10代表-Cy3、-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4、-C(O)-NR9R9’、-NR9R9’、-OR9、-NR9-C(O)-R9’、-O-烷基(C1-C6)-OR9、-SO2-R9、-C(O)-OR9或-NH-C(O)-NH-R9，
◆R11和R11’彼此互相独立代表氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R12代表氢原子、羟基或羟基(C1-C6)烷基，
◆R13代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基或-烷基(C0-C6)-NR9R9’，
◆R14代表氢原子、卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基，
◆Ra代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆Rb代表-O-C(O)-O-Rc基团、-O-C(O)-NRcRc’基团或-O-P(O)(ORc)2基团，
◆Rc和Rc’彼此互相独立代表氢原子、直链或支链(C1-C8)烷基、环烷基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基羰基(C1-C6)烷基，
或者Rc和Rc’与携有它们的氮原子一起形成由5－7个环成员组成的非芳族环，其除了所述氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被代表直链或支链(C1-C6)烷基的一个基团取代，
◆Cy1、Cy2、Cy3和Cy4彼此互相独立代表环烷基、杂环烷基、芳基或杂芳基，
◆n为等于0、1或2的整数，
应当理解：
-“芳基”是指苯基、萘基、联苯基，
-“杂芳基”是指任何由5－10个环成员组成的单-或双-环状基团，其具有至少一个芳族部分并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，
-“环烷基”是指任何单-或双-环非芳族碳环基团，其含有3－10个环成员，
-“杂环烷基”是指任何单-或双-环非芳族碳环基团，其含有3－10个环成员并含有1－3个选自氧、硫和氮的杂原子，其可以包括稠合、桥连或螺环环系，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基任选被1－4个选自下列的基团取代：任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的直链或支链(C2-C6)链烯基、任选取代的直链或支链(C2-C6)炔基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、任选取代的(C1-C6)烷基-S-、羟基、羟基(C1-C6)烷基、氧代、N-氧化物、硝基、氰基、-C(O)-OR’、-O-C(O)-R’、-C(O)-NR’R”、-O-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-(C＝NR’)-OR”、-O-P(O)(OR’)2、-O-P(O)(O-M+)2、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、三氟甲氧基、卤素或下式的己醛糖：
Figure FDA0002911621880000041
其中每个R’是独立的；
应当理解，所述R’和R”彼此互相独立代表氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，M+代表可药用的单价阳离子，
它们的对映体、非对映异构体和阻转异构体及其与可药用的酸或碱形成的加成盐。
2.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中：
◆R1代表卤素原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R2代表卤素原子、直链或支链(C1-C6)烷基、羟基、或者直链或支链(C1-C6)烷氧基，
或R1和R2与携有它们的碳原子一起形成芳族环，其中
Figure FDA0002911621880000042
re代pre表se
Figure FDA0002911621880000043
Figure FDA0002911621880000044
Figure FDA0002911621880000051
◆R3代表氢原子、卤素原子、羟基或-O-烷基(C1-C6)-NR9R9’，
◆R4代表氢原子或卤素原子，
◆R5代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R8代表直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C2-C6)链烯基、直链或支链(C2-C6)炔基、-Cy2、卤素原子或-C(O)-R11，
◆R9和R9’彼此互相独立代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
或R9和R9’与携有它们的氮原子一起形成由5－7个环成员组成的非芳族环，其除了所述氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被代表直链或支链(C1-C6)烷基的一个基团取代，
◆R10代表-Cy3或-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4，
◆R11代表直链或支链(C1-C6)烷基，
如此定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基任选被1－4个选自下列的基团取代：任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、任选取代的直链或支链(C1-C6)烷氧基、羟基、氧代、N-氧化物、-C(O)-OR’、-C(O)-NR’R”、-O-C(O)-NR’R”、-NR’R”、-O-P(O)(OR’)2、-O-P(O)(O-M+)2、直链或支链(C1-C6)多卤代烷基、卤素或下式的己醛糖：
Figure FDA0002911621880000052
其中每个R’是独立的；应当理解，所述R’和R”彼此互相独立代表氢原子或任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基，M+代表可药用的单价阳离子。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中n为等于1的整数。
4.根据权利要求1所述的化合物，其中选自R2、R3、R4和R5的至少一个基团不代表氢原子。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中R12代表氢原子。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R2代表直链或支链(C1-C6)烷氧基、羟基或卤素原子。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中X代表C-R4基团。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中Y代表C-R3基团。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中R4和R5代表氢原子。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中R1、R5取代基是相同的，R2、R4取代基是相同的。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中：
Figure FDA0002911621880000061
代表
Figure FDA0002911621880000062
其中R1、R2、R9和R9’如权利要求1所定义。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中：
Figure FDA0002911621880000063
代表
Figure FDA0002911621880000064
其中R9和R9’如权利要求1所定义。
13.根据权利要求1所述的化合物，其为式(I-b)化合物：
Figure FDA0002911621880000071
其中R1、R2、R5、R6、R7、R12、X、Y、A和n如式(I)所定义。
14.根据权利要求1所述的化合物，其中R6代表氢原子；氟原子；氯原子；溴原子；甲基；三氟甲基；羟基；甲氧基；直链(C1-C6)烷氧基，其被1-4个选自卤素原子、-C(O)-NR’R”基团或-NR’R”基团的基团取代；氰基；硝基；氨基甲基；苄基；-O-烷基(C1-C6)-R10；-C(O)-NR9R9’。
15.根据权利要求1所述的化合物，其中R7代表氢原子；甲基；乙基；(5-甲基-2-氧代-1,3-间二氧杂环戊烯-4-基)甲基；-CHRaRb基团，其中Ra代表甲基，Rb代表-O-C(O)-O-CH2CH3基团或-O-C(O)-N(CH3)2基团。
16.根据权利要求1所述的化合物，其中R8代表直链或支链(C2-C6)炔基、芳基或杂芳基。
17.根据权利要求1所述的化合物，其中R9和R9’彼此互相独立代表直链或支链(C1-C6)烷基，或者R9和R9’与携有它们的氮原子一起形成5－7个环成员组成的非芳族环，其除了所述氮原子外可以含有1－3个选自氧和氮的杂原子，应当理解，所述氮可以被直链或支链(C1-C6)烷基取代。
18.根据权利要求1所述的化合物，其中R10代表-Cy3或-Cy3-烷基(C0-C6)-Cy4。
19.根据权利要求18所述的化合物，其中Cy3代表环烷基、芳基或杂芳基。
20.根据权利要求18所述的化合物，其中Cy3代表嘧啶-4-基、吡唑-5-基或吡啶-2-基。
21.根据权利要求18所述的化合物，其中Cy3代表杂芳基，其可以被下列基团取代：2,2,2-三氟乙氧基、2-甲氧基乙基、乙氧基、叔-丁基、乙基、正-丁基、2,2,2-三氟乙基或甲基。
22.根据权利要求18所述的化合物，其中Cy4代表苯基或吗啉基。
23.根据权利要求18所述的化合物，其中：
R10代表
Figure FDA0002911621880000081
其中p为0或1的整数，R15代表氢原子、羟基、任选被取代的直链或支链(C1-C6)烷基、直链或支链(C1-C6)烷氧基、-O-(CHR16-CHR17-O)q-R’基团、-O-P(O)(OR’)2基团、-O-P(O)(O-M+)2基团、-O-C(O)-NR18R19基团、二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷氧基、卤素原子或下式的己醛糖：
Figure FDA0002911621880000082
其中每个R’是独立的；
应当理解：
◆R’代表氢原子或直链或支链(C1-C6)烷基，
◆R16代表氢原子或(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，
◆R17代表氢原子或羟基(C1-C6)烷基，
◆R18代表氢原子或(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基，
◆R19代表(C1-C6)烷氧基(C1-C6)烷基、-(CH2)r-NR9R9’基团或-(CH2)r-O-(CHR16-CHR17-O)q-R’基团，
◆q为1、2或3的整数，r为1，
◆M+代表可药用的单价阳离子。
24.根据权利要求23所述的化合物，其中R15代表甲氧基、2-甲氧基乙氧基或氟。
25.根据权利要求23所述的化合物，其中所述己醛糖为D-甘露糖。
26.根据权利要求1-25中任何一项所述的化合物，其中所述的定义的芳基、杂芳基、环烷基和杂环烷基以及烷基、链烯基、炔基、烷氧基是未取代的。
27.化合物，所述化合物为：
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(2,2,2-三氟乙氧基)-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-(吡啶-2-基甲氧基)-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-甲基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(1-乙基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-[(2-乙氧基嘧啶-4-基)甲氧基]-D-苯丙氨酸，
-2-[(1-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(5-氟呋喃-2-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-甲氧基-D-苯丙氨酸，
-2-[(1-叔-丁基-1H-吡唑-5-基)甲氧基]-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基乙基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[1-(2,2,2-三氟乙基)-1H-吡唑-5-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(吗啉-4-基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2,2,2-三氟乙氧基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸，
-N-[5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-({2-[2-(2-甲氧基乙氧基)苯基]嘧啶-4-基}甲氧基)-D-苯丙氨酸；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-2-甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙酯；
-N-[(5Sa)-5-{3-氯代-4-[2-(二甲基氨基)乙氧基]-2-甲基苯基}-6-(丙-1-炔-1-基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸乙基酯；
-N-[5-{3,5-二氯代-2,6-二甲基-4-[2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙氧基]苯基}-6-(4-氟苯基)噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-基]-2-{[2-(2-甲氧基苯基)嘧啶-4-基]甲氧基}-D-苯丙氨酸。
28.式(I)化合物或其与可药用的酸或碱形成的加成盐的制备方法，
Figure FDA0002911621880000121
其中：R1、R2、R5、R7、X、Y、A、R6、R12、E和n如权利要求1中所定义，且
其特征在于采用式(II-a)化合物作为原料：
Figure FDA0002911621880000122
其中Z代表溴或碘，A如式(I)所定义，其中1与氯原子连接，2与Z基团连接，
使得式(II-a)化合物与式(III)化合物偶合：
Figure FDA0002911621880000123
其中R6、R12、E和n如式(I)所定义，Alk代表直链或支链(C1-C6)烷基，
获得式(IV)化合物：
Figure FDA0002911621880000124
其中R6、R12、A、E和n如式(I)所定义，Z和Alk如前文所定义，
使得式(IV)化合物进一步与式(V)化合物偶合：
Figure FDA0002911621880000131
其中R1、R2、R5、X和Y如式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或者RB1和RB2与携有它们的氧一起形成任选甲基化的环，
获得式(VI)化合物：
Figure FDA0002911621880000132
其中R1、R2、R5、R6、R12、X、Y、A、E和n如式(I)所定义，Alk为如前文所定义，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解，获得羧酸，其可以任选与式R7’-OH的醇或式R7’-Cl的氯化化合物反应，其中R7’代表任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、-CHRaRb基团或杂芳基烷基(C1-C6)基团，其中所述杂芳基、Ra和Rb如权利要求1中所定义，
获得式(I)化合物，其可以根据常规分离技术进行纯化，如果需要，将其转化为其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，任选根据常规分离技术将其分离成其异构体。
29.式(I)化合物或其与可药用的酸或碱形成的加成盐的制备方法，
Figure FDA0002911621880000141
其中：R1、R2、R5、R7、X、Y、A、R6、R12、E和n如权利要求1中所定义，且
其特征在于采用式(II-b)化合物作为原料：
Figure FDA0002911621880000142
其中A如式(I)所定义，其中1与氯原子连接，2与碘原子连接，
使得式(II-b)化合物与式(V)化合物偶合：
Figure FDA0002911621880000143
其中R1、R2、R5、X和Y如式(I)所定义，RB1和RB2代表氢原子、直链或支链(C1-C6)烷基，或RB1和RB2与携有它们的氧一起形成任选甲基化的环，
获得式(VII)化合物：
Figure FDA0002911621880000144
其中R1、R2、R5、A、X和Y如式(I)所定义,
使得式(VII)化合物进一步与式(III)化合物偶合：
Figure FDA0002911621880000151
其中R6、R12、E和n如式(I)所定义，Alk代表直链或支链(C1-C6)烷基，
获得式(VI)化合物：
Figure FDA0002911621880000152
其中R1、R2、R5、R6、R12、X、Y、A、E和n如式(I)所定义，Alk为如前文所定义，
将式(VI)化合物的Alk-O-C(O)-酯官能团水解，获得羧酸，其可以任选与式R7’-OH的醇或式R7’-Cl的氯化化合物反应，其中R7’代表任选取代的直链或支链(C1-C6)烷基、-CHRaRb基团或杂芳基烷基(C1-C6)基团，其中所述杂芳基、Ra和Rb如权利要求1中所定义，
获得式(I)化合物，其可以根据常规分离技术进行纯化，如果需要，将其转化为其与药学上可接受的酸或碱的加成盐，任选根据常规分离技术将其分离成其异构体。
30.药用组合物，该药用组合物包含根据权利要求1－27中任一项所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐以及与之组合的一或多种可药用的赋形剂。
31.根据权利要求30所述的药用组合物，其用作抗凋亡药物。
32.根据权利要求31所述的药用组合物，其用于治疗癌症以及自身免疫和免疫系统疾病。
33.根据权利要求32所述的药用组合物，其用于治疗膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
34.根据权利要求32所述的药用组合物，其用于治疗恶性血液病。
35.根据权利要求30所述的药用组合物在生产用作抗凋亡剂的药物中的用途。
36.根据权利要求30所述的药用组合物在生产用于治疗癌症以及自身免疫和免疫系统疾病的药物中的用途。
37.根据权利要求30所述的药用组合物在生产药物中的用途，所述药物用于治疗下列疾病：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
38.根据权利要求30所述的药用组合物在生产药物中的用途，所述药物用于治疗恶性血液病。
39.根据权利要求1－25和27中任一项所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐，其用于治疗膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
40.根据权利要求1－25和27中任一项所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐，其用于治疗恶性血液病。
41.根据权利要求26所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐，其用于治疗膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
42.根据权利要求26所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐，其用于治疗恶性血液病。
43.根据权利要求1－27中任一项所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐在生产药物中的用途，所述药物用于治疗下列疾病：膀胱癌、脑癌、乳腺癌和子宫癌、慢性淋巴样白血病、结肠癌、食管癌和肝癌、淋巴母细胞白血病、急性髓性白血病、淋巴瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、胰腺癌和小细胞肺癌。
44.根据权利要求1－27中任一项所述的式(I)化合物或其与可药用的酸或碱的加成盐在生产药物中的用途，所述药物用于治疗恶性血液病。
45.根据权利要求1－27中任一项所述的式(I)化合物与抗癌药物的组合产品，所述抗癌药物选自基因毒性药物、有丝分裂毒素、抗代谢物、蛋白酶体抑制剂、激酶抑制剂和抗体。
46.药用组合物，该药用组合物包含权利要求45所述的组合以及一或多种可药用的赋形剂。
47.权利要求45所述的组合产品，其用于治疗癌症。
48.权利要求45所述的组合产品在生产用于治疗癌症的药物中的用途。
49.权利要求1－25和27中任一项所述的式(I)化合物，其用于治疗需要放疗的癌症。
50.根据权利要求26所述的式(I)化合物，其用于治疗需要放疗的癌症。
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