CN107488735A - miR‑339‑5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF‑β信号通路中的应用 - Google Patents
miR‑339‑5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF‑β信号通路中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了miR‑339‑5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF‑β信号通路中的应用。本发明研究发现miR‑339‑5p在前列腺癌骨转移中低表达，进一步研究发现，miR‑339‑5p通过靶向TGF‑β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI，抑制TGF‑β信号通路活性，从而抑制骨转移前例腺癌细胞的迁移和侵袭，因此，miR‑339‑5p有望应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、抑制骨转移药物、TGF‑β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及TGFBRI抑制剂。
Description
技术领域
本发明属于分子生物学领域，更具体地涉及miR-339-5p在抑制前列腺癌骨转移及TGF- β信号通路中的应用。
背景技术
前列腺癌(Prostate Cancer、PCa)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。癌症转移会大大增加前列腺癌患者的死亡率，骨是癌症转移的第二最常见部位，在我国超过80％的前列腺癌患者在确诊时已经发生骨转移，而骨转移是导致前列腺癌患者死亡的重要原因，因此，对骨转移的早期诊断，是临床诊疗和预后的关键。此外，对于中晚期前列腺癌患者，手术治疗的效果差，大多数采用药物治疗。根据不同的病情可以采用化学药物治疗、外放射治疗、放射性核素内放射治疗以及各种疗法的综合应用等。然而，放化疗药物不仅作用于肿瘤，还可以作用于肿瘤周围健康的组织，因而在杀伤肿瘤的同时，也给机体带来了很大的副作用，最终影响对肿瘤的治疗效果。因此，本领域迫切需要开发早期判断前列腺癌骨转移的特异性标志物，并开发前列腺癌骨转移的靶向药物。
TGF-β信号通路在癌症中常表现出复杂甚至矛盾的作用，如癌症早期，TGF-β信号通路能抑制癌细胞生长，而在癌症后期，却能促进癌细胞的转移和侵袭，特别是骨转移，现有研究已经证实TGF-β信号通路的激活能促进前列腺癌细胞的骨转移。miRNA是具有18～24个核苷酸的非编码RNA，其结合信使RNA的3’未翻译区域中的互补性位点且抑制它们的翻译。单一miRNA能够靶向若干mRNA且调控细胞通路和细胞命运。已有研究表明，一些 miRNA会促进肿瘤细胞转移，如脑癌中的miR-10b、结肠直肠癌中的miR-21、前列腺癌中的miR-184。也有发现抑制前列腺癌骨转移的一些miRNA，如miR-143、miR-145和miR-203。目前尚没有miR-339-5p与前列腺癌骨转移及TGF-β信号通路之间的研究报道。
发明内容
本发明的目的在于提供miR-339-5p在制备前列腺癌骨转移诊断试剂、抑制骨转移药物、 TGF-β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及TGFBRI抑制剂中的应用。
本发明所采取的技术方案是：
miR-339-5p在制备前列腺癌骨转移诊断试剂和/或抑制前列腺癌骨转移药物中的应用。
作为上述应用的优选，所述前列腺癌骨转移诊断试剂含有能定量检测miR-339-5p和/或其编码基因的试剂。
作为上述应用的优选，所述前列腺癌骨转移诊断试剂含有miR-339-5p的特异性引物、探针及芯片中的一种或多种。
作为上述应用的优选，所述抑制前列腺癌骨转移药物含有以下物质中的一种或多种：1) 能促进miR-339-5p表达的物质；2)能增强miR-339-5p活性的物质；3)能增长miR-339-5p 有效作用时间的物质；4)能增强miR-339-5p稳定性的物质；5)模拟miR-339-5p结构的物质。
作为上述应用的优选，所述抑制前列腺癌骨转移药物含有以下物质中的一种或多种：1) miR-339-5p分子；2)miR-339-5p修饰物；3)miR-339-5p模拟物；4)编码miR-339-5p的DNA；5)表达miR-339-5p的载体或病毒。
作为上述应用的优选，所述miR-339-5p选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。
miR-339-5p在制备抑制剂中的应用，所述抑制剂选自TGF-β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂、TGFBRI抑制剂中的一种或多种。
作为上述应用的优选，所述抑制剂含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-339-5p 表达的物质；2)能增强miR-339-5p活性的物质；3)能增长miR-339-5p有效作用时间的物质；4)能增强miR-339-5p稳定性的物质；5)模拟miR-339-5p结构的物质。
作为上述应用的优选，所述抑制剂含有以下物质中的一种或多种：1)miR-339-5p分子； 2)miR-339-5p修饰物；3)miR-339-5p模拟物；4)编码miR-339-5p的DNA；5)表达miR-339-5p 的载体或病毒。
作为上述应用的优选，所述miR-339-5p选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。
本发明的有益效果是：
本发明研究发现miR-339-5p在前列腺癌骨转移中低表达，进一步研究发现，miR-339-5p 通过靶向TGF-β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI，抑制TGF-β信号通路活性，从而抑制骨转移前例腺癌细胞的迁移和侵袭，因此，miR-339-5p有望应用于制备前列腺癌骨转移诊断试剂、抑制骨转移药物、TGF-β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及 TGFBRI抑制剂。
附图说明
图1：TCGA数据库中前列腺癌及癌旁组织/良性组织中miR-339-5p表达量，图A为TCGA 中前列腺癌与良性组织中miR-339-5p表达量；图B为TCGA中前列腺癌与配对的癌旁组织中miR-339-5p表达量；
图2：临床样品及细胞系中miR-339-5p的表达情况；其中，图A为前列腺癌骨转移组织和无骨转移组织中miR-339-5p的表达情况；图B为miR-339-5p表达量与骨转移状态的病例统计图，图C为良性前列腺细胞及前列腺癌细胞中miR-339-5p的表达情况；图中， miR-339-5p-H为miR-339-5p高表达组，miR-339-5p-L为miR-339-5p低表达组；
图3：不同前列腺癌细胞中上调或下调miR-339-5p后miR-339-5p的表达量；
图4：不同前列腺癌细胞中上调或下调miR-339-5p后TGF-β/Smad荧光酶素表达强度；
图5：不同前列腺癌细胞中上调或下调miR-339-5p后SMAD2、SMAD3和TGFBRI的mRNA表达量；
图6：不同前列腺癌细胞中上调或下调miR-339-5p后SMAD2、SMAD3和TGFBRI的蛋白表达量；
图7：不同前列腺癌细胞中miR-339-5p靶向SMAD2、SMAD3和TGFBRI验证结果，图A为VCaP细胞情况，图B为PC-3细胞情况，图C为C4-2B细胞情况；
图8：不同前列腺癌细胞中上调或下调miR-339-5p对前列腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响；
图9：前列腺癌VCaP细胞中，anti-miR-339-5p与SD208共同处理对细胞迁移和侵袭能力的影响。
具体实施方式
现结合具体实验例进一步阐述本发明，但并不局限于此。下述实验例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，具体条件未注明的，按常规操作或厂家所建议的条件，下述实验例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明的人前列腺癌细胞系22RV1、PC-3、VCaP、DU145、LNCaP和正常的人前列腺上皮细胞RWPE-1由ATCC细胞库提供；人前列腺癌细胞C4-2B购自MD安德森癌症中心；以上细胞系培养方法按本领域常规操作；115例前列腺癌组织(包括73例无骨转移和42 例骨转移)由广州市第一人民医院提供，以上临床标本均来自手术过程或穿刺活检，经临床病理学确诊。
实验例1、miR-339-5p在前列腺癌组织中高表达，而在骨转移前列腺癌组织中则低表达
发明人利用TCGA数据库中的资料进行生物信息学分析，发现miR-339-5p在前列腺癌组织中高表达，如图1所示，与52例癌旁组织相比，498例前列腺癌组织中miR-339-5p表达量显著提高(图1A)，一致地，与配对的癌旁组织相比，52例配对的前列腺癌组织中miR-339-5p 高表达(图1B)。然而出人意料是，发明人研究发现，miR-339-5p在骨转移前列腺癌组织中却低表达，研究方法如下：
RNA提取、逆转录和实时定量RT-PCR检测miR-339-5p：采用TRIzol裂解液(LifeTechnologies公司)说明书提取所有组织和细胞的总RNA，按照Revert Aid First StrandcDNA Synthesis Kit(Thermo Fisher公司)说明书进行逆转录，选用2-ddCt相对定量法进行荧光定量检测，以U6为内参，求算miR-339-5p的相对表达量。
结果：
临床标本和细胞系中miR-339-5p表达量结果如图2所示，图2A表明，相对于与非骨转移前列腺癌组织，骨转移前列腺癌组织中miR-339-5p表达量更低，按前列腺癌组织中miR-339-5p表达量的中位值将患者划分为miR-339-5p低表达组和miR-339-5p高表达组，统计miR-339-5p表达量与前列腺癌患者骨转移状态关系如图2B所示，miR-339-5p低表达与前列腺癌骨转移相关，进一步的，参照图2C，对比正常的人前列腺上皮细胞系RWPE-1，前列腺癌细胞系22RV1和淋巴结转移前列腺细胞系LNCaP中miR-339-5p高表达，而在脑转移前列腺癌细胞系DU145和骨转移前列腺癌细胞系PC-3、C4-2B、VCaP中miR-339-5p则低表达，以上结果一致表明，miR-339-5p在骨转移前列腺癌组织/细胞中低表达，因此，miR-339-5p 可作为前列腺癌骨转移的生物标志物，可应用于制备前列腺癌骨转移的诊断试剂。
实验例2、miR-339-5p抑制前列腺癌骨转移的分子机制
实验方法：
(1)RNA提取、逆转录及实时定量PCR
采用TRIzol裂解液(Life Technologies公司)说明书提取所有组织和细胞的总RNA，mRNA 和miRNA按照Revert Aid First Strand cDNA Synthesis Kit(Thermo Fisher公司)说明书进行逆转录，选用2-ddCt相对定量法进行荧光定量检测，miRNA和mRNA分别以U6和GAPDH 为内参，求算相对表达量。
(2)质粒构建、siRNA以人基因组为模板，扩增人miR-339-5p(miRBase编号MIMAT0000764)基因，并克隆到pMSCV-puro逆转录病毒载体(Clontech公司)中，获得 miR-339-5p表达质粒，用于上调细胞中miR-339-5p的表达量；将人miR-339-5p的反义核苷酸克隆到载体上，获得anti-miR-339-5p表达质粒(Promega公司设计和合成)，用于下调 miR-339-5p的表达量。用于定量检测TGF-β信号通路组分转录活性的TGF-β/Smad荧光酶素报告质粒购自Clontech公司；以人基因组为模板，扩增SMAD2-3`UTR、SMAD2-3`UTR和 TGFBRI-3`UTR序列，分别克隆到pmirGLO荧光酶素报告质粒(Promega公司)上，构建成 pmirGLO-SMAD2-3′UTR、pmirGLO–SMAD3-3′UTR和pmirGLO–TGFBR1-3′UTR这3个荧光酶素报告质粒，针对构建好的以上3个质粒，分别将miR-339-5p的结合位点进行突变处理，得到对应的3个突变质粒pmirGLO-SMAD2-3`UTR-mut、pmirGLO-SMAD2-3`UTR-mut和 pmirGLO-TGFBRI-3`UTR-mut，用于荧光酶素靶向验证试验。
(3)采用transwell小室法进行迁移和侵袭实验，实验方法按本领域常规操作。
(4)荧光酶素检测
将目标前列腺癌细胞(4×104)接种到24孔板中培养24h，将pmirGLO-SMAD2-3′UTR、 pmirGLO–SMAD3-3′UTR和pmirGLO–TGFBR1-3′UTR荧光酶素报告质粒或突变质粒pmirGLO-SMAD2-3`UTR-mut、pmirGLO-SMAD2-3`UTR-mut和pmirGLO-TGFBRI-3`UTR-mut 与miR-339-5p表达质粒或anti-miR-339-5p表达质粒共转染到目标前列腺癌细胞中，进行荧光酶素靶向验证试验，将miR-339-5p表达质粒或anti-miR-339-5p表达质粒和TGF-β/Smad荧光酶素报告质粒共转染到目标前列腺癌细胞中，用于检测TGF-β/Smad转录活性，转染36h后，检测各组细胞的荧光强度，统计荧光强度值，计算出相对荧光强度值。
(5)Western blotting检测
抗SMAD2、SMAD3、TGFBRI的抗体购自CST公司，抗α-tubulin抗体为内参，检测方法按本领域常规操作。
实验结果：
(1)miR-339-5p抑制TGF-β信号通路活性
根据实验例1的研究结果，在骨转移前列腺癌细胞PC-3、C4-2B、VCaP中作进一步研究，通过上调低表达miR-339-5p的PC-3和C4-2B细胞，上调或下调中表达miR-339-5p的VCaP细胞来研究miR-339-5p对TGF-β信号通路的作用，各组细胞miR-339-5p的表达量如图3所示，TGF-β/Smad荧光酶素报告检测结果如图4所示，在PC-3、C4-2B、VCaP细胞中，上调 miR-339-5p抑制TGF-β/Smad转录活性，而下调miR-339-5p促进TGF-β/Smad转录活性。
(2)miR-339-5p靶向TGF-β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI
将miR-339-5p表达质粒或anti-miR-339-5p表达质粒分别转染到骨转移前列腺癌细胞 PC-3、C4-2B、VCaP中，实时定量PCR和Western blotting分析结果如图5和图6显示，上调miR-339-5p减少了SMAD2、SMAD3和TGFBRI的mRNA和蛋白表达量；荧光酶素靶向验证显示(如图7)，上调miR-339-5p降低了SMAD2、SMAD3和TGFBRI的活性，对突变的SMAD2、SMAD3和TGFBRI的3’-UTR没有影响，证实了miR-339-5p靶向TGF-β信号通路中SMAD2、SMAD3和TGFBRI。
(3)miR-339-5p过表达能在抑制前列腺癌迁移和侵袭
将miR-339-5p表达质粒或anti-miR-339-5p表达质粒分别转染到骨转移前列腺癌细胞 PC-3、C4-2B、VCaP中，迁移和侵袭情况如图8所示，可见miR-339-5p过表达能在抑制前列腺癌迁移和侵袭。
(4)miR-339-5p通过抑制TGF-β信号通路抑制前例腺癌迁移和侵袭
SD208是剂量依赖的TGF-β信号通路抑制剂，通过转染SD208和anti-miR-339-5p表达质粒，验证miR-339-5p是否通过抑制TGF-β信号通路抑制前例腺癌迁移和侵袭，结果如图9 所示，SD208也能抑制anti-miR-339-5p促进的前例腺癌迁移和侵袭，因此，可以说明miR-339-5p通过抑制TGF-β信号通路抑制前例腺癌迁移和侵袭。
以上结果表明，miR-339-5p可应用于前列腺癌骨转移的诊断和治疗，通过定量检测 miR-339-5p或其编码基因，可以实现前列腺癌骨转移的诊断，此外，上调miR-339-5p能抑制 TGF-β信号通路的活化，并且靶向抑制SMAD2、SMAD3和TGFBRI的表达，从而抑制前列腺癌骨转移，可应用于制备TGF-β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂及TGFBRI 抑制剂，更进一步的，可应用于制备抑制前列腺癌骨转移的药物。
以上所述仅是用于解释本发明，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.miR-339-5p在制备前列腺癌骨转移诊断试剂和/或抑制前列腺癌骨转移药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，所述前列腺癌骨转移诊断试剂含有能定量检测miR-339-5p和/或其编码基因的试剂。
3.根据权利要求1所述的应用，所述前列腺癌骨转移诊断试剂含有miR-339-5p的特异性引物、探针及芯片中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的应用，所述抑制前列腺癌骨转移药物含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-339-5p表达的物质；2)能增强miR-339-5p活性的物质；3)能增长miR-339-5p有效作用时间的物质；4)能增强miR-339-5p稳定性的物质；5)模拟miR-339-5p结构的物质。
5.根据权利要求1所述的应用，所述抑制前列腺癌骨转移药物含有以下物质中的一种或多种：1)miR-339-5p分子；2)miR-339-5p修饰物；3)miR-339-5p模拟物；4)编码miR-339-5p的DNA；5)表达miR-339-5p的载体或病毒。
6.根据权利要求1所述的应用，所述miR-339-5p选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。
7.miR-339-5p在制备抑制剂中的应用，所述抑制剂选自TGF-β/smad抑制剂、SMAD2抑制剂、SMAD3抑制剂、TGFBRI抑制剂中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述的应用，所述抑制剂含有以下物质中的一种或多种：1)能促进miR-339-5p表达的物质；2)能增强miR-339-5p活性的物质；3)能增长miR-339-5p有效作用时间的物质；4)能增强miR-339-5p稳定性的物质；5)模拟miR-339-5p结构的物质。
9.根据权利要求1所述的应用，所述抑制剂含有以下物质中的一种或多种：1)miR-339-5p分子；2)miR-339-5p修饰物；3)miR-339-5p模拟物；4)编码miR-339-5p的DNA；5)表达miR-339-5p的载体或病毒。
10.根据权利要求1所述的应用，所述miR-339-5p选自pri-miRNA、pre-miRNA、成熟miRNA、dsmiRNA及其片段或变体中的一种或几种。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110643711A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-01-03 | 广州医科大学附属第二医院 | 前列腺癌骨转移的生物标志物 |
| CN113528522A (zh) * | 2021-07-09 | 2021-10-22 | 复旦大学 | miR-339-增强子-靶基因网络激活模型及其应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010056993A2 (en) * | 2008-11-14 | 2010-05-20 | Emory University | Prostate cancer biomarkers to predict recurrence and metastatic potential |
| WO2010135692A2 (en) * | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Asuragen, Inc. | Mirna biomarkers of prostate disease |
| WO2011082198A3 (en) * | 2009-12-31 | 2012-02-23 | Emory University | Cancer biomarkers to predict recurrence and metastatic potential |
| CN103966334A (zh) * | 2014-05-20 | 2014-08-06 | 李群 | Csf2rb基因在前列腺癌骨转移中的应用 |
| CN105056250A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-18 | 中国农业大学 | 一种microRNA在制备治疗前列腺癌的药物中的应用 |
| CN106636310A (zh) * | 2015-10-30 | 2017-05-10 | 益善生物技术股份有限公司 | 前列腺癌相关microRNA检测试剂盒 |
-
2017
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Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2010056993A2 (en) * | 2008-11-14 | 2010-05-20 | Emory University | Prostate cancer biomarkers to predict recurrence and metastatic potential |
| WO2010135692A2 (en) * | 2009-05-22 | 2010-11-25 | Asuragen, Inc. | Mirna biomarkers of prostate disease |
| WO2011082198A3 (en) * | 2009-12-31 | 2012-02-23 | Emory University | Cancer biomarkers to predict recurrence and metastatic potential |
| CN103966334A (zh) * | 2014-05-20 | 2014-08-06 | 李群 | Csf2rb基因在前列腺癌骨转移中的应用 |
| CN105056250A (zh) * | 2015-07-15 | 2015-11-18 | 中国农业大学 | 一种microRNA在制备治疗前列腺癌的药物中的应用 |
| CN106636310A (zh) * | 2015-10-30 | 2017-05-10 | 益善生物技术股份有限公司 | 前列腺癌相关microRNA检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| LINGLING GUO ET AL: "MicroRNA，TGF-β signaling，and the inflammatory microenvironment in cancer", 《TUMOR BIOLOGY》 * |
| PIERRICK G. J. FOURNIER ET AL: "The TGF-β Signaling Regulator PMEPA1 Suppresses Prostate Cancer Metastases to Bone", 《CANCER CELL》 * |
| WATAHIKI A ET AL: "MicroRNAs associated with metastatic prostate cancer", 《PLOS ONE》 * |
| ZHENG CAO ET AL: "Mechanisms navigating the TGF-β pathway in prostate cancer", 《ASIAN JOURNAL OF UROLOGY》 * |
| 李泽良: "TGF-β信号系统在前列腺癌发生、发展中的作用", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 (博士)医药卫生科技辑》 * |
| 胡洁琼 等: "miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义", 《中国普外基础与临床杂志》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110643711A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-01-03 | 广州医科大学附属第二医院 | 前列腺癌骨转移的生物标志物 |
| CN113528522A (zh) * | 2021-07-09 | 2021-10-22 | 复旦大学 | miR-339-增强子-靶基因网络激活模型及其应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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