CN106749337B

CN106749337B - 一种噻唑并[3,2-a]嘧啶类衍生物及其在制备抗炎药物中的应用

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Publication number: CN106749337B
Application number: CN201611055668.1A
Authority: CN
Inventors: 刘志国; 陈凌锋; 张亚利; 王怡; 赵云洁; 梁广
Original assignee: Wenzhou Medical University
Current assignee: Wenzhou Medical University
Priority date: 2016-11-25
Filing date: 2016-11-25
Publication date: 2019-02-12
Anticipated expiration: 2036-11-25
Also published as: CN106749337A

Abstract

本发明公开了一种噻唑并[3,2‑a]嘧啶衍生物或其可药用盐及应用，所述的噻唑并[3,2‑a]嘧啶衍生物的结构如通式(I)所示式(Ⅰ)中，R¹选自取代或未取代的芳基、烷基或杂环基，所述芳基上的取代基选自卤素、烷氧基、羟基、烯丙氧基中的一个或者多个；所述的烷基包括链烷基和环烷基；R²选自或杂环，其中，波浪线表示连接位置；R³为C₁～C₁₂烷氧基。细胞实验和动物实验表明，该噻唑并[3,2‑a]嘧啶衍生物或其可药用盐可以有效地抑制TNF‑α和IL‑6两种炎症因子。

Description

一种噻唑并[3,2-a]嘧啶类衍生物及其在制备抗炎药物中的应用

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物、其制备方法及其医药用途，特别是在制备用于治疗或者预防炎症相关疾病的药物。

背景技术

炎症作为一种重要的病理过程在人体中十分常见，它本身是作为机体对于外来的或者异体的刺激的一种自身免疫应答。而当这种应答失调或者过分应答导致机体的自损伤时，就演变成了炎症。在炎症过程中，损伤因子会直接或间接造成组织和细胞的破坏。

急性肺损伤(Acute Lung Inflammation，ALI)是由各种直接和间接致伤因素导致的肺泡上皮细胞及毛细血管内皮细胞损伤，造成弥漫性肺间质及肺泡水肿，导致急性低氧性呼吸功能不全。该疾病的死亡率可以达到30-40％。而目前临床上还没有有效的治疗手段。ALI的发病机制非常复杂，这是由于机体常遭受内源性或外源性致病微生物及其代谢产物的侵袭，以及中毒、休克、急性胰腺炎等均可引发机体组织细胞炎症反应，继而引发感染、脓毒血症等，并进一步诱发机体产生大量的炎性细胞因子主要有IL-6、IL-1β、IL-12和TNF-α等。多项临床研究表明，由炎症因子和趋化因子形成的复杂的网络在介导、放大和延续急性肺损伤的过程中起重要作用。因此抑制炎症因子的释放成为了治疗炎症因子的重要手段。

在药物化学研究领域中，噻唑并[3,2-a]嘧啶骨架化合物一直是药物学家关注和研究的热点，该母核具有多种药理活性，包括抗病毒、抗细菌和抗肿瘤等，其中抗肿瘤方面的报道最多，如2009年，法国科学家Kolb等人发现噻唑并[3,2-a]嘧啶对CDC25磷酸酶的抑制作用(ChemMedChem，2009，4：633-648)。2014年，遵义医学院报道了噻唑并[3,2-a]嘧啶母核化合物对前列腺癌的抑制和周期阻止作用(CN 103951681 A)。然而，目前针对噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物治疗炎症引起疾病，如急性肺损伤和脓毒血症等病症的研究报道，本发明人经过长期和艰苦的研究实验，获得了一类噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物。后续生物实验发现该化合物具有抗炎活性，尤其是能用于治疗由TNF-α和/或IL-6超出正常量表达和释放导致的炎症疾病。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物及其制备方法和应用，该衍生物具有高效、广谱的抗炎用途。

为达到上述技术目的，本发明的技术方案为：

一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的结构如通式(I)所示：

式(Ⅰ)中，R¹选自取代或未取代的芳基、烷基或杂环基，所述芳基上的取代基选自卤素、烷氧基、羟基、烯丙氧基中的一个或者多个；

所述的烷基包括链烷基和环烷基；

R²选自或杂环，其中，波浪线表示连接位置；

R³为C₁～C₁₂烷氧基，选自-OCH₃、-OCH₂CH₃或-OCH₂CH₂CH₃。

本发明中，“链烷基”是指直链或支链的烃链基团，仅由碳与氢原子组成，不含有不饱和性，具有一至十二个碳原子，优选为一至八个碳原子，更优选为一至六个碳原子，且其通过单键连接至分子的其余部份，例如甲基、乙基、正丙基、1-甲基乙基(异丙基)、正丁基、正戊基、1，1-二甲基乙基(叔丁基)、3-甲基己基、2-甲基己基等。其中，“低级烷基”是指具有一至六个碳原子的烷基。

本发明中，所述的环烷基“环烷基”是指环状基团，仅由碳与氢原子组成，不含有不饱和性，优选为C3～C5环烷基，例如：环丙基、环丁基等。

“烷氧基”是指式-ORa。基团，其中Ra为如上文定义的烷基，含有一至十二个碳原子。

“芳基”是指芳族单环或多环烃环系统，仅由氢与碳组成，且含有6至19个碳原子，其中所述环系统可为部份饱和。芳基基团包括但不限于如芴基、苯基及萘基的基团。

“卤素”是指溴、氯、氟或碘。

“杂环基”是指稳定的3-至18-元非芳香环基团，其包含二至十七个碳原子与一至十个选自氮、氧及硫的杂原子。除非本说明书中另外明确述及，杂环基可为单环、双环、三环或四环的环系统，其可包含稠合的或桥接的环系统；且在杂环基中的氮、碳或硫原子可任选地被氧化；氮原子可任选地被季胺化；且杂环基可为部份或完全饱和。

作为优选，所述的R¹为取代或未取代的苯基、C₁～C₅烷基、环丙基、环己基；

所述的R³为-OCH₃、-OCH₂CH₃或-OCH₂CH₂CH₃。

作为优选，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物为下列中的任一化合物：

本发明还提供了一种所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的应用，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物用于制备抗炎药物。

作为优选，所述的抗炎药物用于抑制TNF-α和IL-6；

所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物选自化合物25、29、35、42和61中的一种或者多种。

作为优选，所述的抗炎药物用于治疗由炎症引起的急性肺损伤或由炎症细胞因子超出正常量表达和释放而导致的与炎症相关的疾病。

作为进一步的优选，所述与炎症相关的疾病包括脓毒血症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮及相关综合征、骨关节炎、消化道炎症、多发性肌炎、皮肌炎、血管炎性综合征、痛风性关节炎、神经炎症、风湿性关节炎、化学性疼痛、炎性疼痛、肉芽肿、肉芽肿性血管炎、动脉炎、皮肤炎症、自身免疫性疾病、脂膜炎、腹膜后纤维化、肝炎、肺炎、胰腺炎、过敏性炎症、全身炎症反应综合症、败血症、感染性休克。

本发明还提供了一种药物制剂，包括有效成分和药用辅料，所述的有效成分包括所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物。

作为优选，所述的药物制剂为注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、软膏剂、控释剂、缓释剂或纳米制剂的任一种。

根据本发明的其他的实施方案，本发明涉及一类具有急性肺损伤治疗作用的一类以取代哌啶酮为母核结构的单羰基姜黄素类似物及与炎症相关疾病的治疗药物，所述疾病的病因至少部分地是由炎症引起，所述疾病包括但不限于以下疾病：缓解类风湿关节炎、骨关节炎、脊柱关节病、痛风性关节炎、风湿性关节炎、各种慢性关节炎的急性发作期或持续性的关节肿痛症状；治疗非关节性的各种软组织风湿性疼痛，如肩痛、腱鞘炎、滑囊炎、肌痛及运动后损伤性疼痛；急性的轻、中度疼痛，如，手术后、创伤后、劳损后、原发性痛经、牙痛、头痛；缺血性再灌注，如，脑缺血再灌注、心肌缺血再灌注；动脉粥样硬化；肝炎；淋巴炎；肺炎；痢疾；阑尾炎。

同现有技术相比，本发明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物具有更好的抗炎活性，尤其是对TNF-α和IL-6两种炎症因子具有较好的抑制活性，是一种潜在的治疗急性肺损伤的抗炎药物。

附图说明

这里所列举的化合物只是为了更好地说明本发明的化合物类别和结构形式，并非限制本发明。

图1所示为本发明合成的一类噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物的化学结构；

图2A所示为实施例24中本发明噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物对LPS刺激原代巨噬细胞释放IL-6的抑制的活性；

图2B所示为实施例24中本发明噻唑并[3,2-a]嘧啶类化合物对LPS刺激原代巨噬细胞释放TNF-α的抑制的活性；

图3A所示为实施例25中本发明活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激原代巨噬细胞释放IL-6的量效关系；

图3B所示为实施例25中本发明活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激原代巨噬细胞释放TNF-α的量效关系；

图4所示为实施例26中本发明活性化合物25、29、35、42和61对人正常肝细胞HL-7702的毒性；

图5A所示为实施例27中本发明化合物29和61在急性肺损伤模型中对大鼠肺泡灌洗液的蛋白浓度的抑制；

图5B所示为实施例27中本发明化合物29和61在急性肺损伤模型中对大鼠大鼠肺组织湿重/干重比的影响；

图6所示为实施例28中本发明化合物29和61缓解急性肺损伤中肺组织的病理学变化。

具体实施方式

下文将结合具体附图详细描述本发明具体实施例。应当注意的是，下述实施例中描述的技术特征或者技术特征的组合不应当被认为是孤立的，它们可以被相互组合从而达到更好的技术效果。

本发明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的一般合成路线如下：

具体包括如下步骤：

(a)合成2-巯基-4-甲基-6-取代-1,6-二氢嘧啶-5-羧酸乙酯(中间体1)：在带电磁搅拌的250ml圆底烧瓶中，加入取代苯甲醛或者杂环醛0.05mol，乙酰乙酸酯7.8g(0.06mol)，硫脲5.7g(0.075mol)，氨基磺酸3.75g(0.04mol)，无水乙醇50mL，加热回流2h，冷却，抽滤，水洗，干燥，得中间体1，收率为65％-90％。

(b、c)一锅法合成中间体2以及最终产物：在带回流冷凝管和干燥管的100mL圆底烧瓶中，加入2-巯基-4-甲基-6-取代-1,6-二氢-嘧啶-5-羧酸乙酯(中间体1)0.002mol，氯乙酸乙酯0.244g(0.002mol)，吡啶0.18g(0.002mol)，无水乙醇10ml，回流4h，然后加入取代芳香醛或杂环醛0.002mol，吗啡啉0.17g(0.002mol)，继续回流4h，将反应液冷却，过滤，充分水洗，冰乙酸重结晶或硅胶柱纯化得最终产物，收率为15％-65％。实施例1所合成的化合物3的化学结构表征数据

化合物(3)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-苯基-2,3-二氢-5H-噻唑并[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

Ethyl-(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-phenyl-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末，m.p；179.8-181.0℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ(ppm):7.679(s,1H),7.460(d,J＝9.0Hz,2H),7.332-7.360(m,3H),7.273-7.302(m,2H),7.211(d,J＝7.2Hz,1H),7.053(d,J＝7.8Hz,1H),6.043(s,1H),3.992-4.072(m,2H),3.713-3.730(m,4H),3.286-3.309(m,4H),2.385(m,3H),1.089-1.389(m,3H).ESI-MS m/z:490.1(M+H)⁺,512.1(M+Na)⁺。如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例2所合成的化合物19的化学结构表征数据

化合物(19)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-溴苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

ethyl(Z)-5-(4-bromophenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末，40.5％yield,m.p:162.5-163.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.676(s,1H),7.547(d,J＝8.4Hz,2H),7.464(d,J＝9.0Hz,2H),7.256(d,J＝8.4Hz,2H),7.058(d,J＝9.0Hz,2H),6.008(s,1H),4.026-4.047(m,2H),3.721(t,J＝4.8Hz,4H),3.295(t,J＝4.8Hz,4H),2.384(s,3H),1.124(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.773,164.478,156.160,152.245,152.025,139.895,133.827,132.084×2,131.587×2,129.691×2,122.045,121.686,114.123×2,113.414,107.592,65.786×2,60.153,54.285,46.649×2,22.532,13.877.ESI-MS m/z:570.2(M+H)⁺,calcd forC₂₇H₂₆BrN₃O₄S:568.48.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例3所合成的化合物22的化学结构表征数据

化合物(22):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-氟苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯：

ethyl(Z)-5-(4-fluorophenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,70.3％yield,m.p:193.0-195.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.673(s,1H),7.458(d,J＝9.0Hz,2H),7.327-7.351(m,2H),7.167(t,J＝8.4Hz,2H),7.052(d,J＝9.0Hz,2H),6.031(s,1H),3.986-4.075(m,2H),3.717(t,J＝4.2Hz,4H),3.289(t,J＝4.8Hz,4H),2.385(s,3H),1.109(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS m/z:508.3(M+H)⁺,calcd forC₂₇H₂₆FN₃O₄S:507.58.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例4所合成的化合物25的化学结构表征数据

化合物(25):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(3,4二甲氧基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(3,4-dimethoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末，29.3％yield，m.p:105.2-106.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.689(s,1H),7.465(d,J＝9.0Hz,2H),7.057(d,J＝9.0Hz,2H),6.904(d,J＝8.4Hz,1H),6.867(s,1H),6.775(d,J＝8.4Hz,1H),5.987(s,1H),4.021-4.080(m,2H),3.720(t,J＝4.8Hz,4H),3.712(s,3H),3.702(s,3H),3.290(t,J＝4.8Hz,4H),2.383(s,3H),1.146(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.022,164.630,155.927,152.208,151.405,148.888,148.293,133.573,133.107,132.035×2,122.152,119.371,114.147×2,113.736,111.900,111.459,108.248,65.796×2,60.060,55.497,55.448,54.383,46.684×2,22.392,13.971.ESI-MS m/z:550.3(M+H)⁺,calcd for C₂₉H₃₁N₃O₆S:549.64.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例5所合成的化合物26的化学结构表征数据

化合物(26):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-乙氧基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-ethoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,15.9％yield,m.p:165.1-167.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.657(s,1H),7.448(d,J＝9.0Hz,2H),7.187(d,J＝8.4Hz,2H),7.043(d,J＝9.0Hz,1H),6.857(d,J＝9.0Hz,1H),5.971(s,1H),4.015-4.039(m,2H),3.942-3.977(m,2H),3.715(t,J＝4.2Hz,4H),3.281(t,J＝4.2Hz,4H),2.375(s,3H),1.274(t,J＝7.2Hz,3H),1.118(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.042,164.615,158.561,155.947,152.248,151.461,133.583,132.594,132.072×2,128.764×2,122.168,114.384×2,114.184×2,113.776,108.358,65.842×2,63.074,60.097,54.174,46.722×2,22.451,14.620,13.950.ESI-MS m/z:534.3(M+H)⁺,calcd for C₂₉H₃₁N₃O₅S:533.64.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例6所合成的化合物29的化学结构表征数据

化合物(29)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-烯丙氧基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-(allyloxy)phenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,40.5％yield,m.p:157.2-158.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.678(s,1H),7.463(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝8.4Hz,2H),7.059(d,J＝9.0Hz,2H),6.900(d,J＝8.4Hz,2H),5.968-6.032(m,1H),5.988(s,1H),5.344-5.375(dd,J 1＝17.4Hz,J 2＝1.8Hz,1H),5.220-5.240(dd,J 1＝10.8Hz,J 2＝1.8Hz,1H),4.516(d,J＝5.4Hz,2H),4.006-4.066(m,2H),3.721(t,J＝4.8Hz,4H),3.292(t,J＝4.8Hz,4H),2.383(s,3H),1.123(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.978,164.560,158.162,155.903,152.203,151.445,133.560,132.836,132.025×2,128.706×2,122.128,117.516,114.629×2,114.146×2,113.728,108.282,68.161,65.789×2,60.035,54.102,46.672×2,22.416,13.902.ESI-MS m/z:546.0(M+H)⁺,calcd forC₃₀H₃₁N₃O₅S:545.65.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例7所合成的化合物35的化学结构表征数据

化合物(35):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-羟基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-hydroxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,38.6％yield,m.p:206.5-208.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.533(s,1H),7.670(s,1H),7.458(d,J＝9.0Hz,2H),7.090(d,J＝8.4Hz,2H),7.055(d,J＝9.6Hz,2H),6.693(d,J＝8.4Hz,2H),5.941(s,1H),4.021-4.048(m,2H),3.720(t,J＝4.8Hz,4H),3.288(t,J＝4.8Hz,4H),2.372(s,3H),1.123(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.040,164.578,157.516,155.800,152.180,151.203,133.420,131.997×2,131.072,128.718×2,122.167,115.219×2,114.149×2,113.847,108.479,65.791×2,59.993,54.169,46.685×2,22.372,13.910.ESI-MS m/z:506.1(M+H)⁺,calcdfor C₂₇H₂₇N₃O₅S:505.59.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例8所合成的化合物39的化学结构表征数据

化合物(39):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,28.2％yield,m.p:219.1-220.7℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.142(s,1H),7.693(s,1H),7.469(d,J＝9.0Hz,2H),7.062(d,J＝9.0Hz,2H),6.831(s,1H),6.714(d,J＝7.8Hz,1H),6.655(d,J＝7.8Hz,1H),5.957(s,1H),4.026-4.086(m,2H),3.722(s,3H),3.722(t,J＝4.8Hz,4H),3.292(t,J＝4.8Hz,4H),2.376(s,3H),1.145(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.082,164.655,155.846,152.202,151.224,147.175,146.867,133.477,132.023×2,131.625,122.180,119.678,115.589,114.164×2,113.835,111.951,108.408,65.798×2,60.024,55.624,54.403,46.697×2,22.359,13.974.ESI-MS m/z:536.1(M+H)⁺,calcd for C₂₈H₂₉N₃O₆S:535.61.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例9所合成的化合物42的化学结构表征数据

化合物(42):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(3,4-二羟基苯基)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-(3,4-dihydroxyphenyl)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,70.8％yield,m.p:154.1-156.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):9.023(s,1H),8.997(s,1H),7.671(s,1H),7.459(d,J＝9.0Hz,2H),7.052(d,J＝9.0Hz,2H),6.684(d,J＝2.4Hz,1H),6.642(d,J＝8.4Hz,1H),6.543-6.560(dd,J 1＝8.4Hz,J 2＝2.4Hz,1H),5.880(s,1H),4.019-4.080(m,2H),3.719(t,J＝4.8Hz,4H),3.285(t,J＝4.8Hz,4H),2.360(s,3H),1.147(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.169,164.615,155.847,152.222,150.952,145.663,145.135,133.461,132.043×2,131.513,122.216,118.515,115.406,114.632,114.193×2,113.922,108.659,65.834×2,60.076,54.236,46.729×2,22.383,13.977.ESI-MS m/z:522.3(M+H)⁺,calcd forC₂₇H₂₇N₃O₆S:521.58.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例10所合成的化合物49的化学结构表征数据

化合物(49):2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(4-甲基噻唑)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-5-(4-methylthiazol-5-yl)-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,50.8％yield,m.p:198.4-200.5℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):8.887(s,1H),7.741(s,1H),7.471(d,J＝9.0Hz,2H),7.062(d,J＝9.0Hz,2H),6.378(s,1H),4.070-4.120(m,2H),3.723(t,J＝4.8Hz,4H),3.301(t,J＝4.8Hz,4H),2.534(s,3H),2.372(s,3H),1.139(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.581,164.478,155.815,152.983,152.322,151.992,150.920,134.268,132.184×2,131.707,121.989,114.119×2,113.062,108.249,65.785×2,60.274,47.526,46.635×2,22.463,15.111,13.961.ESI-MS m/z:511.2(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₆N₄O₄S₂:510.63.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例11所合成的化合物52的化学结构表征数据

化合物(52)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-(5-甲基呋喃)-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-5-(5-methylfuran-2-yl)-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

橙色粉末,19.3％yield,m.p:200.4-201.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.757(s,1H),7.495(d,J＝9.0Hz,2H),7.070(d,J＝9.0Hz,2H),6.176(d,J＝3.0Hz,1H),6.105(s,1H),5.990(d,J＝1.8Hz,1H),4.064-4.155(m,2H),3.726(t,J＝4.8Hz,4H),3.300(t,J＝4.8Hz,4H),2.362(s,3H),2.160(s,3H),1.178(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.835,164.438,155.902,152.834,152.289,151.902,149.990,133.864,132.153×2,122.138,114.182×2,113.613,109.249,106.896,105.379,65.820×2,60.138,47.996,46.702×2,22.496,14.011,13.362.ESI-MS m/z:494.3(M+H)⁺,calcdfor C₂₆H₂₇N₃O₅S:493.57.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例12所合成的化合物61的化学结构表征数据

化合物(61)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,50.8％yield,m.p:160.3-162.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.780(s,1H),7.493(d,J＝9.0Hz,2H),7.460(d,J＝4.8Hz,1H),7.067(d,J＝9.0Hz,2H),6.992(d,J＝2.4Hz,1H),6.952-6.967(m,1H),6.350(s,1H),4.074-4.138(m,2H),3.724(t,J＝4.8Hz,4H),3.303(t,J＝4.8Hz,4H),2.400(s,3H),1.155(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):164.757,164.500,155.821,152.608,152.303,143.043,134.190,132.192×2,127.052,126.656,126.239,122.013,114.125×2,113.445,107.628,65.786×2,60.211,49.104,46.641×2,22.441,13.944.ESI-MS m/z:496.1(M+H)⁺,calcd forC₂₅H₂₅N₃O₄S₂:495.61.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例13所合成的化合物64的化学结构表征数据

化合物(64)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-环丙基-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-cyclopropyl-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,85.3％yield,m.p:122.6-123.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.820(s,1H),7.526(d,J＝9.0Hz,2H),7.085(d,J＝9.0Hz,2H),4.941(d,J＝7.8Hz,1H),4.144-4.238(m,2H),3.734(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.306(s,3H),1.264(t,J＝7.2Hz,3H),1.143-1.125(m,1H),0.289-0.433(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.638,165.341,156.527,152.825,152.350,152.221,133.580,132.089×2,122.222,114.178×2,106.441,65.809×2,60.131,53.067,46.696×2,22.278,16.628,14.130,3.043,1.418.ESI-MS m/z:454.3(M+H)⁺,calcd for C₂₄H₂₇N₃O₄S:453.55.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例14所合成的化合物65的化学结构表征数据

化合物(65)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-丙基-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-5-propyl-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,85.3％yield,m.p:135.1-136.9℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.789(s,1H),7.516(d,J＝8.4Hz,2H),7.083(d,J＝9.0Hz,2H),5.200(t,J＝4.8Hz,1H),4.131-4.225(m,2H),3.733(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.302(s,3H),1.429-1.711(m,2H),1.257(t,J＝7.2Hz,3H),1.043-1.100(m,2H),0.816(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.308,164.920,156.898,152.893,152.189,133.303,132.031×2,122.263,114.189×2,114.021,107.099,65.805×2,60.116,50.930,46.711×2,36.095,22.371,16.400,14.081,13.676.ESI-MS m/z:456.4(M+H)⁺,calcd for C₂₄H₂₉N₃O₄S:455.57.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例15所合成的化合物66的化学结构表征数据

化合物(66)：2-(4-吗啡啉)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-环己基-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-5-cyclohexyl-7-methyl-2-(4-morpholinobenzylidene)-3-oxo-3,5-dihydro-2H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,87.2％yield,m.p:177.5-179.3℃.¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):7.795(s,1H),7.520(d,J＝9.0Hz,2H),7.081(d,J＝9.0Hz,2H),5.146(d,J＝3.6Hz,1H),4.139-4.221(m,2H),3.732(t,J＝4.2Hz,4H),3.330(t,J＝4.2Hz,4H),2.290(s,3H),1.462-1.637(m,7H),1.054(t,J＝7.2Hz,3H),0.974-1.015(m,4H).¹³C NMR(150MHz,DMSO-d₆)δ(ppm):165.943,165.141,157.083,152.698,152.188,149.867,133.434,132.065×2,128.785,114.168×2,111.559,65.798×2,60.134,54.990,46.703×2,29.665,27.915,27.184,25.613,25.550,25.512,22.108,14.070.ESI-MS m/z:496.4(M+H)⁺,calcd forC₂₇H₃₃N₃O₄S:495.63.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例16所合成的化合物67的化学结构表征数据

化合物(67)：2-(4-甲基哌嗪-1-)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-(4-(4-methylpiperazin-1-yl)benzylidene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末，¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.745(s,1H),7.389(d,J＝9.0Hz,2H),7.198(d,J＝5.4Hz,1H),7.078(d,J＝5.4Hz,1H),6.918(d,J＝8.4Hz,2H)，6.897-6.905(m,1H)，6.325(s,1H)，4.125-4.189(m,2H),3.381(t,J＝5.4Hz,4H),2.571(t,J＝5.4Hz,4H),2.526(s,3H),2.363(s,3H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.751,165.600,156.812,153.796,152.263,143.319,134.438,132.383×2,126.984,126.816,126.146,123.180,115.145,114.774×2,108.233,60.658,54.781×2,49.715,47.302×2,46.156,22.910,14.287.ESI-MS m/z:509.70(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₂₈N₄O₃S₂:508.66.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例17所合成的化合物71的化学结构表征数据

化合物(71):2-(4-二甲氨基)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethy(Z)-2-(4-(dimethylamino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,60.2％yield,m.p:180.0-181.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.764(s,1H),7.389(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝4.8Hz,1H),7.086(d,J＝3.6Hz,1H),6.897-6.917(m,1H)，6.724(d,J＝8.4Hz,2H),6.536(s,1H)，4.122-4.208(m,2H),3.068(s,6H),2.538(s,3H),1.220(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.899,165.711,157.343,153.951,151.905,143.542,135.318,132.737×2,127.019,126.803,126.143,120.764,113.185,112.189×2,108.023,60.672,49.711,40.231×2,22.945,14.355.ESI-MS m/z:454.30(M+H)⁺,calcd for C₂₃H₂₃N₃O₃S₂:453.11.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例18所合成的化合物73的化学结构表征数据

化合物(73):2-((4-吡咯烷-1-)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-3-oxo-2-(4-(pyrrolidin-1-yl)benzylidene)-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,78.8％yield,m.p:158.5-158.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.757(s,1H),7.372(d,J＝9.0Hz,2H),7.191(d,J＝4.8Hz,1H),7.077(d,J＝4.2Hz,1H),6.892-6.907(m,1H)，6.584(d,J＝8.4Hz,2H)，6.530(s,1H)，4.125-4.181(m,2H),3.367-3.379(m,4H),2.529(s,3H)，2.031-2.053(m,4H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.867,165.677,157.475,149.520,143.552,135.639,132.913×2,126.952,126.724,126.063,121.633,120.213,112.271×2,111.438,107.846,60.597,49.633,47.756×2,25.583×2,22.876,14.300.ESI-MS m/z:480.9(M+H)⁺,calcd forC₂₅H₂₅N₃O₃S₂:479.61.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例19所合成的化合物74的化学结构表征数据

化合物(74):2-((4-二乙氨基)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-(diethylamino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末77.2％yield,m.p:171.1-172.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.749(s,1H),7.368(d,J＝9.0Hz,2H),7.202(d,J＝4.8Hz,1H),7.088(d,J＝3.0Hz,1H),6.904-6.918(m,1H)，6.698(d,J＝9.0Hz,2H)，6.540(s,1H)，4.135-4.203(m,2H),3.429(q,J＝7.2Hz,4H),2.539(s,3H)，1.203-1.239(m,9H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.890,165.681,157.440,153.996,149.689,143.560,135.346,133.063×2,126.955,126.719,126.065,119.997,112.355,111.717×2,107.865,60.601,49.643,44.767×2,22.889,14.302,12.718×2.ESI-MS m/z:482.5(M+H)⁺,calcd for C₂₅H₂₇N₃O₃S₂:481.63.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例20所合成的化合物81的化学结构表征数据

化合物(81):2-((5-甲基呋喃-2-)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-7-methyl-2-((5-methylfuran-2-yl)methylene)-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,60.5％yield,m.p:150.0-151.3℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.492(s,1H),7.195(d,J＝5.4Hz,1H),7.065(d,J＝3.0Hz,1H),6.893-6.907(m,1H),6.685(d,J＝3.0Hz,1H),6.503(s,1H),6.182(d,J＝3.0Hz,1H),4.126-4.186(m,2H),2.520(s,3H),2.394(s,3H),1.210(t,J＝7.2Hz,3H).165.581,165.316,157.827,157.348,153.671,148.532,143.250,126.973,126.774,126.123,119.799,119.752,116.464,110.236,108.261,60.665,49.712,22.923,14.287×2.ESI-MS m/z:415.6(M+H)+,calcd forC₂₀H₁₈N₂O₄S₂:414.49.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例21所合成的化合物83的化学结构表征数据

化合物(83):2-((1-氢-吡咯-2-)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-((1H-pyrrol-2-yl)methylene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

黄色粉末,39.5％yield,m.p:155.1-156.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):8.937(s,1H),7.711(s,1H),7.173(d,J＝4.8Hz,1H),7.050(t,J＝2.4Hz,1H),7.030(d,J＝3.6Hz,1H),6.875(t,J＝5.4Hz,1H)，6.626(t,J＝2.4Hz,1H),6.486(s,1H),6.426-6.410(m,1H),4.113-4.174(m,2H),2.501(s,3H),1.199(t,J＝7.2Hz,3H).ESI-MS m/z:415.69(M+H)⁺,calcd for C₂₀H₁₈N₂O₄S₂:414.49.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例22所合成的化合物84的化学结构表征数据

2-(4-((2-二甲氨基)乙基)(甲基)氨基)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-((2-(dimethylamino)ethyl)(methyl)amino)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,50.8％yield,m.p:190.3-192.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.744(s,1H),7.370(d,J＝9.0Hz,2H),7.199(d,J＝5.4Hz,1H),7.078(d,J＝3.0Hz,1H),6.880-6.909(m,1H),6.716(d,J＝9.0Hz,2H),6.528(s,1H),4.125-4.188(m,2H),3.529(t,J＝7.8Hz,2H),3.054(s,3H),2.528(s,3H),2.499(t,7.2Hz,2H),2.309(s,6H),1.211(t,7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.878,165.671,157.192,153.990,150.800,143.514,135.050,132.817×2,126.954,126.732,126.069,120.729,113.186,111.974×2,107.969,60.600,56.152,50.909,49.649,46.018×2,38.818,22.942,14.296.ESI-MSm/z:512.1(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₃₀N₄O₃S₂:510.67.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例23所合成的化合物86的化学结构表征数据

2-(4-(3-(二甲氨基)丙氧基)苯基亚甲基-7-甲基-3-氧-5-噻吩-3,5-二氢-2H-噻唑[3,2-a]嘧啶-6-羧酸乙酯

ethyl(Z)-2-(4-(3-(dimethylamino)propoxy)benzylidene)-7-methyl-3-oxo-5-(thiophen-2-yl)-2,3-dihydro-5H-thiazolo[3,2-a]pyrimidine-6-carboxylate

红色粉末,20.5％yield,m.p:146.3-149.9℃.¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ(ppm):7.776(s,1H),7.428(d,J＝8.4Hz,2H),7.207(d,J＝4.8Hz,1H),7.081(d,J＝3.0Hz,1H),6.974(d,J＝9.0Hz,2H),6.903-6.917(m,1H),6.526(s,1H),4.117-4.193(m,2H),4.081(t,J＝6.0Hz,2H),2.529(s,3H),2.513(t,5.4Hz,2H),2.311(s,6H),1.994-2.039(m,2H),1.211(t,7.2Hz,3H).¹³C NMR(150MHz,CDCl₃)δ(ppm):165.580,165.508,161.105,156.338,153.575,143.068,133.966,132.301×2,127.008,126.903,126.227,125.888,117.293,115.467×2,108.517,66.488,60.710,56.274,49.769,45.413×2,27.236,22.868,14.265.ESI-MS m/z:512.9(M+H)⁺,calcd for C₂₆H₂₉N₃O₄S₂:511.66.如图1所示为本发明合成的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的化学结构。

实施例24化合物对LPS刺激原代巨噬细胞释放炎症因子的抑制

采用化合物对LPS刺激原代巨噬细胞释放炎症因子(TNF-α和IL-6)抑制的方法测试了化合物的体外初步抗炎活性，具体方法如下：1.2×10⁶个原代巨噬细胞用DMEM培养液培养于37℃，24小时后更新培养液，并加入受测化合物(终浓度为10μM)预处理2小时，再用0.5μg/mL的LPS继续处理22小时，收集培养液用ELISA法检测TNF-α和IL-6含量；收集细胞检测总蛋白浓度，ELISA结果用相应的总蛋白浓度相除较准，以LPS对照组的TNF-α和IL-6含量定标为100；每个化合物重复测试3次，计算平均值和误差值。化合物对TNF-α和IL-6释放的抑制活性见图2。大部分有效化合物对LPS刺激的IL-6和TNF-α释放有减少作用，效果较好的具体而言为化合物25、29、35、42和61。

实施例25活性化合物抑制LPS刺激巨噬细胞释放炎症因子的量效关系

进一步测试了活性化合物25、29、35、42和61抑制LPS刺激RAW264.7巨噬细胞释放TNF-α和IL-6的量效关系，方法：同实施例24。实验数据见图3。化合物25、29、35、42和61的抑制活性均具有较好的量效关系，IC₅₀基本都在2μM以下的较好水平。

实施例26活性化合物对人正常肝细胞HL-7702的毒性

将HL-7702细胞以每孔5000个细胞的密度铺到96-孔板中，用含有5％热灭活的血清、100U/mL的青霉素、100μg/mL链霉素的1640培养基在37℃的含5％CO₂的培养箱中培养24h。将用DMSO溶解的待测化合物加入到培养基中，终浓度为20μM，作用72h后进行MTT检测。每孔中加入用生理盐水溶解的MTT(5mg/mL)25μL培育3h。然后用100μL DMSO溶解细胞，在波长570nm下用酶标仪检测OD值。实验数据见图4。待测活性化合物25、29、35、42和61对HL-7702细胞没有表现出毒性。实施例27化合物25和61缓解急性肺损伤大鼠生理学变化

用0.5％羧甲基纤维素钠与化合物25和61制成混悬液，于造模前连续灌胃给药7天。各组大鼠乙醚麻醉后暴露气管，除对照组外，其余各组气管内缓慢滴入50μL 5mg/kgLPS，造成大鼠急性肺损伤，对照组以相同的方式滴入等量生理盐水，缝合伤口，建立急性肺损伤模型。动物造模24h后，按照5mL/kg的剂量腹腔注射10％的水合氯醛麻醉老鼠，开胸结扎左肺，右肺用1mL生理盐水进行支气管肺泡灌洗，收集灌洗液，相同操作重复3次。

肺泡灌洗液收集后，4℃1000rpm离心5分钟，取上清液，测肺泡灌洗液的蛋白浓度。肺泡灌洗液离心后，用50ul生理盐水重悬沉淀，混匀后取20ul用细胞计数仪Standard计数肺泡灌洗液中的总细胞数。此外，取右肺上叶，滤纸吸去组织上的水分后称取湿重，放入60℃烘烤48h以上，直到其重量不在发生变化为止，称取干重，计算肺组织湿重/干重比(W/D)，判断肺水肿程度。实验数据见图5，两个实验结果均表明化合物25和61在生理学上可有效缓解大鼠急性肺损伤。

实施例28说明化合物25和61缓解急性肺损伤中肺组织的病理学变化

实验数据见图6,正常对照组大鼠肺泡腔清晰，结构完整，壁光滑；气管滴注LPS造成急性肺损伤模型后，肺泡壁明显水肿、增厚，炎症细胞浸润增加；给予化合物25和61治疗后细胞水肿、增厚显著减弱，且炎症细胞浸润明显减少，与正常组差别不大，说明化合物25和61可有效缓解急性肺损伤中肺组织损伤。

综上所述，在本发明中，由本发明实施例24可知，我们首先进行了化合物体外抗炎活性的初筛，用不同的化合物考察对LPS刺激的原代巨噬细胞释放炎症因子(TNF-α和IL-6)释放的影响，本发明的噻唑并[3,2-a]嘧啶类似物具有较好的抗炎活性。以化合物25、29、35、42和61五个化合物尤为明显。因此，我们选择这五个化合物进一步进行了抑制LPS刺激巨噬细胞释放炎症因子的量效关系研究，详情见实施例25，发现五个化合物对TNF-α和IL-6的抑制具有很好的量效关系，IC₅₀基本都在2μM以下的较好水平。同时我们也在正常人肝细胞上测试了活性化合物的毒性(详情见实施例26)，发现这几个活性化合物对正常细胞均没有毒性表现。最后综合以上的实验结果，我们选取了29和61作为探针化合物在动物急性肺损伤模型上验证它的抗炎活性。实验发现化合物29和61能缓解急性肺损伤大鼠生理学变化(详情见实施例27)，实验结果表明：化合物29和61可有效降低肺泡灌洗液的蛋白浓度和以及显著降低急性肺损伤导致的湿干重比值增加，这表明本发明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物能缓解LPS导致的肺水肿。同时能缓解急性肺损伤中肺组织的病理学变化(详情见实施例28)。H&E染色技术和荧光染色进一步观察到应用活性化合物29和61后，肺泡壁增厚显著减弱，且炎症细胞浸润明显减少，与正常组差别不大。

实施例29

一种含有一类噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的药物组合物，该药物组合物包括有效成分和药用辅料，所述有效成分为一类以噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物及其可药用盐中的几种或几种组成，所述一类噻唑并[3,2-a]嘧啶具有下列通式：

其中：R¹选自可以被1至3个相同或不同的取代基任选取代的芳基、烷基、环丙基、环己基或杂环基，所述取代基选自卤素、烷氧基、羟基、烯丙氧基；

R²选自或杂环基，其中，波浪线表示连接位置。

R³为低级烷氧基，-O(CH₂)_nCH₃；

有效成分选自下列中的任一化合物：

本发明的药物组合物可与现已上市的抗炎药物联合使用，制备得到的防治炎症疾病类药物的组合物，已上市的抗炎药物包括各种甾体类抗炎药物和非甾体类抗炎药物；药学上可接受的盐是这样一些盐，它们保持母体化合物的理想的生物活性，并且没有给予不希望的毒理学作用，这样的盐的例子包括与无机酸形成的盐，如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸等；与有机酸形成的盐，如乙酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸等；以及由元素阴离子形成的盐，如氯、溴和碘；

本发明药物组合物中的药用辅料指药学领域常规的药物载体，包括但不限于任何被美国食品药物管理局批准为可接受用于人或家畜的佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、悬浮剂、稳定剂、等张剂、溶剂或乳化剂。

本发明的制剂包括那些适于口服、直肠、局部、口腔、舌下、肠胃外(例如，皮下、肌肉、静脉内)以及经皮给药的制剂，尽管在任何给定的情况下，最适宜的路线将取决于所治疗的病症的性质和严重性以及取决于所使用的特定活性化合物的性质。

由本发明上述实施例可知，本发明提供一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的用途，进行大量噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的药物设计、合成、药理活性筛选，得出本发明一类噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物，并且本发明的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物具有高效、广谱的抗炎用途。本发明还提供一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物的药物组合物，该药物组合物具有高效、广谱的抗炎用途。

上述详细说明是针对发明的可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明的等效实施或变更，均应当包含于本发明的专利范围内。

另外，本领域技术人员还可在本发明权利要求公开的范围和精神内做其它形式和细节上的各种修改、添加和替换。当然，这些依据本发明精神所做的各种修改、添加和替换等变化，都应包含在本发明所要求保护的范围之内。

Claims

1.一种噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐，其特征在于，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物为化合物29；

化合物29的结构如下：

2.一种如权利要求1所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐的应用，其特征在于，所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物用于制备抗炎药物。

3.根据权利要求2所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐的应用，其特征在于，所述的抗炎药物用于治疗由炎症引起的急性肺损伤或由炎症细胞因子超出正常量表达和释放而导致的与炎症相关的疾病。

4.根据权利要求2或3所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐的应用，其特征在于，所述的抗炎药物用于抑制炎症因子TNF-α和IL-6的释放。

5.根据权利要求3所述的噻唑并[3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐的应用，其特征在于，所述与炎症相关的疾病为脓毒症、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、骨关节炎、消化道炎症、多发性肌炎、皮肌炎、痛风性关节炎、神经炎症、风湿性关节炎、化学性疼痛、炎性疼痛、肉芽肿、肉芽肿性血管炎、动脉炎、皮肤炎症、脂膜炎、腹膜后纤维化、肝炎、肺炎、胰腺炎、败血症、感染性休克。

6.一种药物制剂，包括有效成分和药用辅料，其特征在于，所述的有效成分包括权利要求1所述的噻唑并 [3,2-a]嘧啶衍生物或其可药用盐。

7.根据权利要求6所述的药物制剂，其特征在于，所述的药物制剂为注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、软膏剂、控释剂、缓释剂或纳米制剂的任一种。