CN106668865B - 用于治疗脑缺血的药物组合物、制剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于治疗脑缺血的药物组合物、制剂及其应用，属于药物领域。其由NMDA受体拮抗剂和绿原酸组成。在一个实施方案中，所述药物组合物中还包括冰片。

Description

用于治疗脑缺血的药物组合物、制剂及其应用

技术领域

本发明涉及一种用于治疗脑缺血的药物组合物、制剂及其应用，属于药物领域。

背景技术

脑血管疾病是导致我国中老年人死亡的第一号杀手，也是世界性卫生战略研究重点之一。在脑血管疾病中，急性缺血性疾病的发病率居于首位，具有致残率高、死亡率高和复发率高的特点。流行病学研究结果显示，全球脑卒中病死逾150万例/年，并随着老年人口的增加呈逐年增长的趋势，严重威胁着人类生命健康和生活质量。

急性脑缺血后引起一系列的病理生理损伤，包括局部血管病变、缺血区神经元病变。导致机体危害的是神经元功能的变化，主要表现为神经元蛋白质合成停止、去极化、钙离子内流增加、兴奋性氨基酸大量释放等，导致细胞内钙超载，氧自由基生成增多，线粒体功能改变，诱发神经元凋亡等。

目前，在治疗脑缺血药物研究方面，主要基于两种策略，一是以保护神经细胞功能为目的进行的神经保护剂的开发，旨在通过药物阻断神经细胞死亡的级联反应以保护和恢复缺血区神经功能；二是以改善供血为目的进行的针对血管功能的研究，希望通过溶栓、扩张血管或血管重构以恢复脑缺血区血液供应。其中改善供血的药物为目前临床较为常用的；例如t-PA，其具有极佳的溶栓作用，较短时间内即可恢复脑缺血患者的血供，但是t-PA应用具有严格时间窗限制，这是因为缺血区域如果时间过长，一旦恢复血供会导致缺血再灌注损伤，从而加速患者死亡。

而神经保护剂是基于对细胞病理生化级联的干预，可以通过降低细胞内钙超载、拮抗兴奋性氨基酸毒性、清除氧自由基以及抑制炎症反应等途径减轻缺血性脑损伤，促进神经功能的恢复。

NMDA受体拮抗剂就是神经保护剂的一种。在脑缺血过程中，受影响的神经元释放的大量谷氨酸可过度刺激N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体，其反过来引起神经元死亡或凋亡。NMDA受体拮抗剂可阻断NMDA受体导致的神经元死亡或凋亡，抑制神经兴奋性毒性。但是NMDA受体拮抗剂在临床试验中表现不佳，原因在于在给脑缺血或脑卒中患者施用NMDA受体拮抗剂时如果剂量较高容易导致高血压、记忆障碍甚至反过来导致神经毒性加速患者死亡；而剂量较低往往又起不到神经保护的作用；正是上述缺陷限制了NMDA受体拮抗剂作为脑缺血治疗药物方面的应用。

发明内容

本发明的一个目的是一种用于治疗脑缺血的药物组合物，其由NMDA受体拮抗剂和绿原酸组成。

在一个实施方案中，所述NMDA受体拮抗剂选自哌替啶、美沙酮、右丙氧芬、曲马多、酚派丙酮、右美沙芬、苯环己哌啶、盐酸金刚烷胺、乙酸异丁酯、右啡烷、加环利定、伊博格碱、美金刚、咯环利定、替诺立定、噻环乙胺、依利罗、瑞马西胺、阿替加奈、钩藤碱、犬尿喹啉酸、拉科酰胺、MK801、艾芬地尔、CP-101606、GLYX-13、AP5、AP7和WMS2539中的一种或多种。

在进一步地实施方案中，所述NMDA受体拮抗剂为CP-101606。CP-101606也称Traxoprodil，中文名称曲那罗地，是一种NR2B亚基选择性NMDA受体拮抗剂；目前在国外用于治疗脑缺血疾病已进行到二期临床，施药患者较对照组脑梗死面积明显降低，但是由于NMDA受体拮抗剂常见的副反应存在，其死亡率与对照组无明显区别，从而限制了CP-101606的进一步应用，所述CP-101606的化学结构式如下：

在另一个实施方案中，所述NMDA受体拮抗剂和绿原酸的重量比为1：1-5；优选为1：3。

在又一个实施方案中，所述药物组合物中还包括冰片，所述NMDA受体拮抗剂、绿原酸和冰片的重量比：1：3：0.1。

本发明的另一个目的是提供一种包含所述药物组合物的药物制剂，其由所述药物组合物和药学上可接受的辅料组成。

在一个实施方案中，所述药物制剂为口服制剂或注射剂。

在进一步地实施方案中，所述药学上可接受的辅料选自淀粉、β-环糊精、卡波姆、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、甘露醇、十二烷基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交联聚乙烯吡咯烷酮、对羟基苯甲酸乙酯、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、阿斯巴甜、甜橙香精、碳酸氢钠、碳酸钠、肠溶包衣粉中的一种或几种。上述制剂的所用辅料及制备方法均可采用其常规的辅料和制备方法制得。

本发明的又一个目的是提供所述药物组合物在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。

上述所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药，对于本发明药物组合物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。

本发明发现NMDA受体拮抗剂和绿原酸在治疗脑缺血疾病方面产生了明显的协同作用，尤其在特定重量比的条件下协同作用最佳，从而在应用中可以明显降低NMDA受体拮抗剂的给药剂量，减少其带来的相关副反应，并且出人意料的是绿原酸还可以减轻由于NMDA受体拮抗剂所带来的相关副反应。

本发明的药物之间的协同作用是指各组分组合后的生物学效应，与基于单独使用单个组分时期望产生给定的生物学效应所要求的含量相比，上述组合物能够通过使用更少量的组分而取得该生物学效应，也就是说组合物的活性明显高于单个组分的叠加效应，即药物之间产生了协同作用。

具体实施方式

还可进一步通过实施例来理解本发明，其中所述实施例说明了一些制备或使用方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和以下要求保护的本发明范围之内。

实施例1药物组合物对神经细胞的缺氧缺糖模型的保护作用

大鼠脑皮层神经细胞原代培养：孕16d SD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75％乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的D-Hanks’平衡盐液中。在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm³大小，加入胰酶-EDTA消化液并放入37℃孵箱内消化20min，中间摇晃一次。随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM+10％FBS)的离心管内终止消化液作用5min。离心去上清，加培养液将神经细胞重悬后，计数，然后按5×10⁴个/孔添加到96孔板中，置于孵箱内培养2天后用于后续试验。

实验分组：正常对照组，持续通以95％O₂和5％CO₂的混合气；第二组为缺糖缺氧(OGD)模型组：神经细胞移去正常培养液，换入不含葡萄糖的HBSS溶液(140mM NaCl,3.5mMKCl,12mM MgSO₄，5mM NaHCO₃,1.7mM CaCl₂,0.4mM KH₂PO₄，10mM Hepes)，放入专用的缺氧罐，通以95％N₂和5％CO₂的混合气，缺糖缺氧6h；治疗组，细胞用包含不同药物组合物的DMEM液预处理3h后，细胞再经上述OGD模型6h。

1、采用MTT方法测定各组细胞存活率，协同指数采用金正均q值法进行判定，q值由以下的公式求得：q＝P_A+B/(P_A+P_B-P_A×P_B)。式中P_A、P_B和P_A+B分别为A药组、B药组和两药联用组治疗率。q＜1说明两药合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两药合用后产生协同作用，q＝1说明两药合用后产生相加作用。

具体结果如下：

经Oneway-ANOVA检验，##表示与正常组相比P<0.01；*和**表示与模型组相比，P<0.05和P<0.01。

2、采用LDH生化试剂盒检测各组细胞上清液中LDH含量，具体结果如下：

本发明还发现在PC12细胞(大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤神经细胞株)和大鼠原代海马神经细胞的OGD模型中，CP-101606和绿原酸均表现出了明显的协同作用，并且以重量比1：3协同作用最佳。

实施例2药物组合物对大鼠MCAO模型的保护作用

模型制备

SD大鼠，禁食过夜，自由饮水。实验当天用异氟烷气体麻醉并维持。仰卧位固定，沿颈正中线切开皮肤，暴露右侧颈总动脉，小心分离颈总动脉分叉至颅底部的血管周围的神经及筋膜，分离颈外动脉分支枕动脉、甲状腺上动脉、舌动脉和上颚上颌动脉，结扎，剪断。从颈外动脉游离端插入3#丝线(直径0.260mm)，从颈外动脉远心端将尼龙线导入到颈内动脉，插至Willis环大脑中动脉处，以有效阻断大脑中动脉，插入的尼龙线长度距颈总动脉分叉处18～20mm。然后将颈外动脉游离端连同腔内尼龙线一并结扎，以防出血。逐层缝合皮下筋膜和皮肤，肌肉注射青霉素防止感染。假手术组动物仅分离出颈内动脉。大鼠苏醒10min后进行神经缺陷评分，有明显神经功能缺陷者(>8分)为造型成功。

分组及给药：具体分为假手术组、模型组及给药组。造模1小时后，采用尾静脉输注给药的方式给药，给药体积以最大给药体积计算，即均定容成1.5ml/100g(大鼠体重)，输注时间40min。假手术组和模型组给予等量生理盐水，造模24h后处死大鼠进行相关检测。

1、死亡率和TTC梗死面积检测：处死各组大鼠前，统计各组死亡率，并用骨钳将鼠脑取出，沿冠状面切成2mm厚的切片，间隔取上述一半脑片放入2％TTC染液中，避光37℃温孵10min进行染色，采用数码成像系统将数字影象存储于计算机中，并用图象分析软件测量梗死区和全脑面积，计算脑梗死范围(梗死区面积占全脑面积百分比),具体结果如下：

2、采用ELISA检测方法检测各组大鼠血清中LDH、VEGF和TNF-a含量，具体结果如下：

实施例3片剂

将1g CP-101606、3g绿原酸、0.1g冰片、32g预胶化淀粉和40g微晶纤维素研细混匀，以70％乙醇制粒过筛，添加2g硬脂酸镁混匀，压片即得。

实施例4注射剂

称取0.1gCP-101606、0.3g绿原酸、0.5g聚乙二醇300和0.9gNaCl，加注射用水1L，加热溶解，调pH值至7.3左右，灭菌灌装即得。

本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案，其中一个或更多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合，这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内，就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。

Claims (6)

1.一种用于治疗脑缺血的药物组合物，其由NMDA受体拮抗剂和绿原酸组成；所述NMDA受体拮抗剂为CP-101606；所述NMDA受体拮抗剂和绿原酸的重量比为1∶3。

2.一种用于治疗脑缺血的药物组合物，其由NMDA受体拮抗剂、绿原酸和冰片组成，所述NMDA受体拮抗剂、绿原酸和冰片的重量比：1∶3∶0.1；所述NMDA受体拮抗剂为CP-101606。

3.一种包含权利要求1或2任一项所述药物组合物的药物制剂，其由所述药物组合物和药学上可接受的辅料组成。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为口服制剂或注射剂。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于，所述药学上可接受的辅料选自淀粉、β-环糊精、卡波姆、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、甘露醇、十二烷基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交联聚乙烯吡咯烷酮、对羟基苯甲酸乙酯、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、阿斯巴甜、甜橙香精、碳酸氢钠、碳酸钠、肠溶包衣粉中的一种或几种。

6.权利要求1或2任一项所述药物组合物在制备治疗脑缺血疾病药物中的应用。