CN106620543B - 具有抗血栓作用的广西莪术提取物的应用 - Google Patents
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Abstract
具有抗血栓作用的广西莪术提取物的应用，该提取物是指从广西莪术，拉丁学名为Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang的干燥根茎中提取分离得到的广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%的乙醇洗脱部位提取物及大孔吸附树脂体积浓度为70%的乙醇洗脱部位提取物，并将这两种提取物应用于制备治疗抗血栓的药物；而这两种提取物可明显抑制胶原蛋白‑肾上腺素诱发的小鼠体内血栓形成，降低动物死亡和偏瘫数，提高恢复数；明显减轻大鼠体内静脉血栓湿重；明显延长电刺激致大鼠颈总动脉血栓形成时间；明显减轻大鼠动静脉旁路血栓湿重；具有明显的抗血栓作用，可用于血栓性疾病的治疗。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域，尤其涉及中药提取物，具体涉及具有抗血栓作用的广西莪术提取物的应用。
背景技术
血栓性疾病严重威胁人类健康和生命，冠心病、心绞痛、脑中风、心肌梗死等血栓性疾病发病率、致残率和致死率都很高，且近年来，血栓性栓塞引起的疾病发病率逐渐增加，造成病患者生活质量下降，劳动力丧失致残，严重阻碍了经济发展与人民生活水平的进一步提高。从中药中应用具有良好抗血栓作用的中药及其提取物，用于防治血栓性疾病。
广西莪术为姜科植物广西莪术（Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）的干燥根茎，性味辛、苦、温，具有行气破血，消积止痛之功效，在广西、云南、四川、福建等地有分布，在广西主产于钦州、南宁、大新、贵港、上思等地，是广西地道药材，做为中药莪术使用，在广西已大量人工栽培种植成功，为广西大宗药材，广西民间广泛用于瘀血经闭、食积胀痛、跌打损伤等。
广西莪术主要含桉油精、樟脑、异龙脑、莪术烯等30余种挥发油成分及姜黄素类、吉马酮、β-谷甾醇、羽扇豆醇等化学成分，现代药理研究表明，广西莪术具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗炎、抗溃疡等药理作用。
发明内容
本发明的目的是从广西莪术（Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang）的干燥根茎中提取分离得到的广西莪术提取物，而该提取物具有抗血栓方面的用途，用于治疗血栓性疾病，为血栓性疾病患者带来福音。
本发明通过如下技术方案解决上述技术问题。
广西莪术药材用水提取，提取液浓缩后，80℃烘干得干膏，上聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，依次用蒸馏水、体积浓度为30%的乙醇、体积浓度为50%的乙醇、体积浓度为70%的乙醇、体积浓度为90%的乙醇进行梯度洗脱，分别收集各洗脱部位液体，减压浓缩，真空干燥，得水洗脱部位、体积浓度为30%乙醇洗脱部位、体积浓度为50%乙醇洗脱部位、体积浓度为70%乙醇洗脱部位、体积浓度为90%乙醇洗脱部位。
以对胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成的影响试验，对大鼠体内静脉血栓形成的影响试验，对电刺激致大鼠颈总动脉血栓形成的影响试验，对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响试验为抗血栓作用药效学指标，进行抗血栓作用药效学评价，结果发现，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位和大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位具有很好的抗血栓作用，用于制备治疗血栓性疾病的抗血栓方面的药物。
所述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂，而用D101大孔吸附树脂柱进行洗脱完成后的处理：待洗脱完成后，在D101大孔吸附树脂柱中，加入高于大孔吸附树脂层10-20厘米的体积浓度为5%盐酸溶液浸泡4小时后，用5-7倍柱体积量的体积浓度为5%盐酸溶液冲洗，再用蒸馏水充分冲洗，直至出口洗涤液pH值呈中性，然后以体积浓度为5%氢氧化钠溶液按以上方法浸泡4小时，并用5-7倍柱体积量的体积浓度为5%氢氧化钠溶液冲洗，再用蒸馏水充分冲洗直至出水pH值呈中性后，D101大孔吸附树脂柱可重新使用。
上述提取方法中涉及的提取、浓缩、洗脱、干燥均为本领域的常规操作。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
1、本发明采用水提取广西莪术药材后，用大孔吸附树脂柱进行洗脱分离，得到抗血栓作用有效洗脱提取部位：广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位。
2、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位提取物及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物可明显抑制胶原蛋白-肾上腺素诱发的小鼠体内血栓形成，降低动物死亡和偏瘫数，提高恢复数；明显减轻大鼠体内静脉血栓湿重；明显延长电刺激致大鼠颈总动脉血栓形成时间；明显减轻大鼠动静脉旁路血栓湿重；具有明显的抗血栓作用，可用于血栓性疾病的治疗。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的特点和实质，下面用实施例的形式提供广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位抗血栓作用的药理试验结果，说明其在医药技术领域的用途。
以下是本发明的实施例，具体实施例并不对本发明做任何限制。
实施例1 广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位的制备方法
将晾干的广西莪术药材切碎，用按物料重量8倍量的水浸泡1h后，加热煮沸2h，过滤；滤渣加8倍量水后加热煮沸1h，过滤；滤渣再加8倍量水后加热煮沸1h，过滤，合并3次滤液，浓缩后，80℃烘干得干膏，上聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，依次用蒸馏水、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为90%乙醇进行梯度洗脱，分别收集各洗脱部位液体，减压浓缩，真空干燥，得广西莪术水洗脱部位、体积浓度为30%乙醇洗脱部位、体积浓度为50%乙醇洗脱部位、体积浓度为70%乙醇洗脱部位、体积浓度为90%乙醇洗脱部位。
所述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂，而用D101大孔吸附树脂柱进行洗脱完成后的处理：待洗脱完成后，在D101大孔吸附树脂柱中，加入高于大孔吸附树脂层10-20厘米的体积浓度为5%盐酸溶液浸泡4小时后，用5-7倍柱体积量的体积浓度为5%盐酸溶液冲洗，再用蒸馏水充分冲洗，直至出口洗涤液pH值呈中性，然后以体积浓度为5%氢氧化钠溶液按以上方法浸泡4小时，并用5-7倍柱体积量的体积浓度为5%氢氧化钠溶液冲洗，再用蒸馏水充分冲洗直至出水pH值呈中性后，D101大孔吸附树脂柱可重新使用。
实施例2 广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位对胶原蛋白-肾上腺素诱发小鼠体内血栓形成的影响
取体重18～22g小鼠120只，随机分为12组，每组10只，雌雄各半，分别为正常对照组，血塞通组，广西莪术各洗脱部位提取物高、低剂量组。各药物组小鼠每日灌胃给药一次，正常对照组给予等体积蒸馏水，连续7d，于末次给药后1h，小鼠自尾静脉注射胶原蛋白（225μg/只）与肾上腺素（9μg/只）的混合诱导剂，注射后观察5min内小鼠死亡数和15min内小鼠偏瘫的未恢复数。结果见表1。
表1结果表明，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物高、低剂量组均能明显抑制胶原蛋白-肾上腺素诱发的小鼠体内血栓形成，降低动物死亡和偏瘫数，提高恢复数，对胶原蛋白-肾上腺素诱发的小鼠体内血栓具有抗血栓作用。
实施例3 广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位对大鼠体内静脉血栓形成的影响
取体重200～250g SD大鼠120只，随机分为12组，每组10只，雌雄各半，分别为正常对照组，血塞通组，广西莪术各洗脱部位提取物高、低剂量组。各药物组大鼠每日灌胃给药一次，正常对照组给予等体积蒸馏水，连续7d，末次给药前禁食不禁水12h，末次给药后1h，大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg－1），剖开腹腔，分离下腔静脉，于左肾静脉下方用手术丝线结扎，缝合腹壁，4h后重新打开腹腔，在结扎处下方2cm处用止血钳夹闭血管，纵向打开血管，取出血栓，放于滤纸上，吸干血液，用电子分析天平称其血栓湿重。结果见表2。
表2结果表明，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物高、低剂量组均能明显减轻大鼠体内静脉血栓湿重，具有明显的抗血栓作用。
实施例4 广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位对电刺激致大鼠颈总动脉血栓形成的影响
取体重250～300g SD大鼠80只，随机分为8组，每组10只，雌雄各半，分别为正常对照组，血塞通组，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位高、中、低剂量组及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位高、中、低剂量组。各药物组大鼠每日灌胃给药一次，正常对照组给予等体积蒸馏水，连续7d，末次给药后1h，各组大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg－1），分离右侧颈总动脉，用YLS-14B小动物血栓生成仪进行电刺激右侧颈总动脉形成血栓，记录血栓形成时间（秒，S）。结果见表3。
表3结果表明，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物高、中、低剂量组均能明显延长电刺激致大鼠颈总动脉血栓形成时间，抑制血栓形成，具有明显的抗血栓作用。
实施例5 广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位、广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位对大鼠动静脉旁路血栓形成的影响
取体重250～300g SD大鼠80只，随机分为8组，每组10只，雌雄各半，分别为正常对照组，血塞通组，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位高、中、低剂量组及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位高、中、低剂量组。各药物组大鼠每日灌胃给药一次，正常对照组给予等体积蒸馏水，连续7d，末次给药后1h，各组大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉（300mg·kg－1），分离右侧颈总动脉和左侧颈外动脉，取在中段放入长5cm的4号手术丝线的三段聚乙烯管组成的套管，将肝素生理盐水溶液（50U/ml）充满聚乙烯管腔，一端插入左侧颈外动脉，另一端插入右侧颈总动脉，建立动静脉旁路，开放血流15min后中断血流，取出丝线，在滤纸上吸除浮血后称重，总重量减去丝线重即为血栓湿重。结果见表4。
表4结果表明，广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物高、中、低剂量组均能明显减轻大鼠动静脉旁路血栓湿重，具有明显的抗血栓作用。
Claims (2)
1. 具有抗血栓作用的广西莪术提取物的应用，其特征在于：该提取物是指从广西莪术，拉丁学名为Curcuma kwangsiensis S . G . Lee et C . F . Liang的干燥根茎中提取分离得到的大孔吸附树脂体积浓度为50%的乙醇洗脱部位提取物、大孔吸附树脂体积浓度为70%的乙醇洗脱部位提取物；并将这两种提取物单独或两者组方应用于制备治疗抗血栓的药物；
所述的广西莪术提取物的制备方法为：将晾干的广西莪术药材切碎，用物料重量8倍量的水浸泡1h后，加热煮沸2h，过滤；滤渣加8倍量水后加热煮沸1h，过滤；滤渣再加8倍量水后加热煮沸1h，过滤，合并3次滤液，浓缩后，80℃烘干得干膏，上聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，依次用蒸馏水、体积浓度为30%乙醇、体积浓度为50%乙醇、体积浓度为70%乙醇、体积浓度为90%乙醇进行梯度洗脱，分别收集各洗脱部位液体，减压浓缩，真空干燥，得广西莪术水洗脱部位、体积浓度为30%的乙醇洗脱部位、体积浓度为50%乙醇洗脱部位、体积浓度为70%乙醇洗脱部位、体积浓度为90%乙醇洗脱部位；
所述的聚苯乙烯型大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂。
2.根据权利要求1所述的具有抗血栓作用的广西莪术提取物的应用，其特征在于：所述的药物包含广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为50%乙醇洗脱部位提取物及广西莪术大孔吸附树脂体积浓度为70%乙醇洗脱部位提取物单独、两者组方或与其他药物组方制成的制剂；所述的药物制剂包含药剂学上的任何剂型。
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