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CN106471110A - 改进的非蛋白酶类酶稳定化 - Google Patents

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CN106471110A
CN106471110A CN201580033593.4A CN201580033593A CN106471110A CN 106471110 A CN106471110 A CN 106471110A CN 201580033593 A CN201580033593 A CN 201580033593A CN 106471110 A CN106471110 A CN 106471110A
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Novo Nordisk AS
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Abstract

当枯草杆菌蛋白酶抑制剂的浓度高于浓度C时，非枯草杆菌蛋白酶类酶在液体洗涤剂中通过某些枯草杆菌蛋白酶抑制剂进行的稳定化特别有效。

Description

改进的非蛋白酶类酶稳定化
对序列表的引用
本申请包含一个计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用结合在此。
发明领域
本发明涉及非枯草杆菌蛋白酶类酶在液体洗涤剂组合物中的稳定化。
背景
WO 98/13458、WO 94/04651、WO 98/13460、WO 95/25791、以及WO 2009/118375披露了具有由肽醛稳定化的枯草杆菌蛋白酶型的蛋白酶的液体洗涤剂。WO 2011/036153披露向一种微粒状包含枯草杆菌蛋白酶的洗涤剂中添加肽醛可以改进脱垢性。
熟知的是，醛可以与NaHSO3形成可溶性加合物(重亚硫酸盐或亚硫酸氢盐加合物)并且肽醛趋向于是略微水溶性的。WO 2013/004636中公开了肽醛亚硫酸氢盐加合物及其在洗涤剂中的用途。
WO 98/47523和US 6,500,802披露了肽基-2-氨基-1-羟基链烷磺酸及其作为蛋白酶抑制剂的用途。US 5,436,229披露了L-精氨酸醛衍生物的重亚硫酸盐加合物及其作为凝血酶抑制剂的用途。
US 4,703,036、US 4,478,745以及US 5,578,574披露了制备处于干燥形式的肽醛的方法。
概述
本发明的诸位发明人已经发现，向液体洗涤剂中掺入高于一定浓度的枯草杆菌蛋白酶抑制剂，相比于枯草杆菌蛋白酶的储存稳定性，更好地改进了非枯草杆菌蛋白酶类酶的储存稳定性。
相应地，本发明提供了用于改进非枯草杆菌蛋白酶类酶在含有枯草杆菌蛋白酶和非枯草杆菌蛋白酶的液体洗涤剂组合物中的储存稳定性的方法，包括制备含有枯草杆菌蛋白酶、非枯草杆菌蛋白酶和超过浓度C的枯草杆菌蛋白酶抑制剂的液体洗涤剂组合物；其中C被确定为抑制剂的浓度，当枯草杆菌蛋白酶抑制剂的浓度从C增加到两倍C时，在洗涤剂M中在40℃下孵育一周之后，枯草杆菌蛋白酶的相对残余活性增加了从没有抑制剂至C的增加量的25％。
在一个实施例中，非枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性改进比枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性改进更高。
本发明的其他方面和实施例在说明书和实例下是显而易见的。
详细说明
我们已经发现用于改进非蛋白酶类酶(像淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶和其他的洗涤剂酶)稳定性所需的蛋白酶抑制剂水平比用于保证蛋白酶类酶稳定性所需的蛋白酶抑制剂水平更高；而且将第二次添加的抑制剂添加至第一次添加的抑制剂之上的稳定化效果在非蛋白酶类酶上比在蛋白酶上更强。因此，通过将蛋白酶抑制剂添加至独立的非蛋白酶类酶产物中将导致用于改进整体酶组合物的稳定性的更优选的抑制剂剂量，而且相比于依赖于非蛋白酶类酶的选择和包合率而不得不选择不同抑制剂水平的蛋白酶，这对于洗涤剂生产商来说更容易并且更方便。而且，抑制剂剂量将会被“自动调整”至所希望的水平。
本发明涉及含有枯草杆菌蛋白酶、非枯草杆菌蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶抑制剂的洗涤剂组合物；其中该枯草杆菌蛋白酶抑制剂浓度高于一定的浓度C。第一次抑制剂添加(浓度C)主要增加了蛋白酶稳定性，然而当抑制剂浓度高于C时，相比对蛋白酶类酶，额外的抑制剂添加对非蛋白酶类酶将会有更显著的储存效果；并且因此可以有益地将额外的抑制剂与非蛋白酶类酶作为非蛋白酶产物的一部分一同添加。本发明因此还涉及含有非蛋白酶类酶和蛋白酶抑制剂的液体组合物，以及使用这种液体组合物来增加多种酶溶液在含有蛋白酶的液体洗涤剂中的稳定性，该液体组合物可能已经含有或可能并未含有蛋白酶抑制剂。
定义
抑制剂浓度C
定义了抑制剂浓度C，因此当抑制剂浓度从浓度C加倍至2C的浓度(即，2C＝2x C)时，残余蛋白酶活性增加(“2C时的残余蛋白酶活性”-“C时的残余蛋白酶活性”)了从无抑制剂至C的残余蛋白酶活性增加量的25％(“C时的残余蛋白酶活性”-“没有抑制剂下的残余活性”)。“没有抑制剂”意味着抑制剂的浓度为零。
实例1中描述了确定“剂量1”(C)和“剂量2”(2C)的测试系统。使用了标准洗涤剂系统(洗涤剂A)，并且添加了蛋白酶、脂肪酶和不同浓度的蛋白酶抑制剂(洗涤剂M)。通过将在40℃下储存一周以后的活性与在-18℃下储存一周的活性进行比较来确定残余蛋白酶活性。该数据被用来准备用于确定抑制剂浓度C的剂量反应曲线。以相对于在实例1中的测试系统的摩尔比和mg/L来给出抑制剂浓度，并且如果蛋白酶浓度升高，则将mg/L相似地升高。
本发明的组合物因此可被描述为具有蛋白酶和具有超过“剂量1”的蛋白酶抑制剂(C)的非蛋白酶类酶的洗涤剂组合物；其中
；并且“剂量2”＝2x“剂量1”。
枯草杆菌蛋白酶
在本发明中应用的枯草杆菌蛋白酶类酶包括细菌、真菌、植物、病毒或动物来源的那些，例如植物或微生物来源。优选微生物来源。包括化学修饰的或蛋白质工程处理的突变体。
在本发明的上下文中，枯草杆菌蛋白酶家族(EC 3.4.21.62)应理解为如下文献所述：西仁(Siezen)等人，蛋白质工程(Protein Engng.)4(1991)719-737；和西仁等人，蛋白质科学(Protein Science)6(1997)501-523。如文中所描述的，枯草杆菌蛋白酶家族可以划分为3个亚组，即I-S1(“真正的”枯草杆菌蛋白酶)、I-S2(高碱性蛋白酶)以及细胞内枯草杆菌蛋白酶。
枯草杆菌蛋白酶的实例是来源于芽孢杆菌的那些，如枯草杆菌蛋白酶lentus、迟缓芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶Novo、嘉士伯枯草杆菌蛋白酶(subtilisin Carlsberg)、地衣芽孢杆菌、枯草杆菌蛋白酶BPN’、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147以及枯草杆菌蛋白酶168(描述于WO 89/06279中)以及蛋白酶PD138(WO 93/18140)。另外的实例描述于WO98/020115、WO 01/44452、WO 01/58275、WO 01/58276、WO 03/006602以及WO 04/099401中。
有用的变体的实例于以下各项中描述：WO 92/19729、WO 98/20115、WO 98/20116和WO 98/34946，尤其是在以下位置的一个或多个中具有取代的变体：3、4、9、15、27、36、57、68、76、87、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、106、118、120、123、128、129、130、160、167、170、194、195、199、205、206、217、218、222、224、232、235、236、245、248、252以及274，使用BPN’进行编号。更优选地，这些枯草杆菌酶变体可以包含以下突变：S3T、V4I、S9R、A15T、K27R、*36D、V68A、N76D、N87S,R、*97E、A98S、S99G,D,A、S99AD、S101G,M,R、S103A、V104I,Y,N、S106A、G118V,R、H120D,N、N123S、S128L、P129Q、S130A、G160D、Y167A、R170S、A194P、G195E、V199M、V205I、L217D、N218D、M222S、A232V、K235L、Q236H、Q245R、N252K、T274A(使用BPN’进行编号)。
可商购的枯草杆菌蛋白酶的实例包括KannaseTM、EverlaseTM、PrimaseTM、DuralaseTM、EsperaseTM、AlcalaseTM、DurazymTM、SavinaseTM、OvozymeTM、LiquanaseTM、CoronaseTM、PolarzymeTM、PyraseTM以及Clear-LensTMPro；BlazeTM(诺维信公司(NovozymesA/S))。其他可商购的蛋白酶包括RonozymeTMPro、MaxataseTM、MaxacalTM、MaxapemTM、OpticleanTM、ProperaseTM、PurafectTM、Purafect OxTM、Purafact PrimeTM、ExcellaseTM、FN2TM、FN3TM以及FN4TM(可从杜邦公司(Dupont)获得)。
在本发明的一个实施例中，该枯草杆菌蛋白酶是枯草杆菌蛋白酶309或枯草杆菌蛋白酶BPN’、或任何这些的变体。优选地，该枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少60％的序列一致性，优选地至少70％，更优选地至少80％，更优选地至少90％，更优选地至少95％、96％、97％、98％、99％，并且最优选地100％的序列一致性。
在一个实施例中，引入SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列中的氨基酸取代、缺失和/或插入的数目多达10个，例如1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个或10个；或多达5个，例如1个、2个、3个、4个或5个。这些氨基酸变化可以具有微小性质，即，不会显著地影响蛋白质的折叠和/或活性的保守氨基酸取代或插入；典型地1-30个氨基酸的小缺失；小的氨基-或羧基-末端延伸，如氨基末端的甲硫氨酸残基；多达20-25个残基的小接头肽；或便于通过改变净电荷或另一种功能来纯化的小延伸，如聚组氨酸段(tract)、抗原表位或结合结构域。
保守取代的实例是在下组的范围内：碱性氨基酸(精氨酸、赖氨酸及组氨酸)、酸性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)、极性氨基酸(谷氨酰胺和天冬酰胺)、疏水性氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸及缬氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸)及小氨基酸(甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸及甲硫氨酸)。一般不会改变比活性的氨基酸取代是本领域已知的并且例如由H.诺伊拉特(Neurath)和R.L.希尔(Hill)，1979，在蛋白质(The Proteins)，学术出版社(Academic Press)，纽约中描述。常见取代是Ala/Ser、Val/Ile、Asp/Glu、Thr/Ser、Ala/Gly、Ala/Thr、Ser/Asn、Ala/Val、Ser/Gly、Tyr/Phe、Ala/Pro、Lys/Arg、Asp/Asn、Leu/Ile、Leu/Val、Ala/Glu、以及Asp/Gly。
可以根据本领域中已知的程序，如定点诱变或丙氨酸扫描诱变(Cunningham(坎宁汉)和Wells(威尔斯)，1989，Science(科学)244:1081-1085)来鉴定多肽中的必需氨基酸。在后一项技术中，在分子中的每个残基处引入单个丙氨酸突变，并且测试所得突变分子的枯草杆菌蛋白酶活性以鉴定对分子的活性关键的氨基酸残基。还参见希尔顿(Hilton)等人，1996，生物化学杂志(J.Biol.Chem.)271:4699-4708。也可以结合假定接触位点氨基酸的突变，通过如核磁共振、结晶学、电子衍射或光亲和标记等技术进行测定，来对结构进行物理学分析，从而确定枯草杆菌蛋白酶的活性位点或其他生物学相互作用。参见，例如，德沃斯(de Vos)等人，1992，科学(Science)255:306-312；史密斯(Smith)等人，1992，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)224:899-904；Wlodaver等人，1992，欧洲生化学会联合会快报(FEBS Lett.)309:59-64。还可以从与相关多肽的比对推断鉴别必需氨基酸。
可以做出单个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入并且使用诱变、重组和/或改组的已知方法进行测试，随后进行相关筛选程序，如由里德哈尔-奥尔森(Reidhaar-Olson)和萨奥尔(Sauer)，1988，科学(Science)241:53-57；博维(Bowie)和萨奥尔，1989，美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)86:2152-2156；WO 95/17413；或WO 95/22625所披露的那些。可以使用的其他方法包括易错PCR、噬菌体展示(例如，罗曼(Lowman)等人，1991，生物化学(Biochemistry)30:10832-10837；美国专利号5,223,409；WO 92/06204)和区域定向诱变(德比舍尔(Derbyshire)等人，1986，基因(Gene)46:145；Ner等人，1988，DNA 7:127)。
两个氨基酸序列之间的关联度通过参数“序列一致性”来描述。出于本发明的目的，使用如在EMBOSS包(EMBOSS：欧洲分子生物学开放软件套件(The European MolecularBiology Open Software Suite)，赖斯(Rice)等人，2000，遗传学趋势(Trends Genet.)16:276-277)(优选5.0.0版或更新版本)的尼德尔(Needle)程序中所实施的尼德尔曼-翁施(Needleman-Wunsch)算法(Needleman(尼德尔曼)和Wunsch(翁施)，1970，分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)48:443-453)来确定两个氨基酸序列之间的序列一致性。所使用的参数是空位开放罚分10、空位延伸罚分0.5，和EBLOSUM62(BLOSUM62的EMBOSS版本)取代矩阵。尼德尔标注的“最长的一致性”的输出(使用-非简化选项获得)被用作百分比一致性，并且计算如下：
(一致的残基x 100)/(比对长度-比对中的空位总数)。
非枯草杆菌蛋白酶类酶
根据本发明，有待与枯草杆菌蛋白酶抑制剂(和枯草杆菌蛋白酶)结合的非枯草杆菌蛋白酶类酶可以是选自下组的一种或多种非枯草杆菌蛋白酶类酶，该组由以下各项组成：脂肪酶、角质酶、淀粉酶、糖酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶、木聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶(氧化酶、漆酶、过氧化物酶、卤代过氧化物酶)。
本发明的方法和组合物可包括1、2、3、4、5、6、7、或8种非枯草杆菌蛋白酶类酶。一种非枯草杆菌蛋白酶类酶是酶，优选地是一种不是枯草杆菌蛋白酶的洗涤剂酶。
一般而言，一种或多种所选酶的特性应与选定的洗涤剂相容(即，最适pH，与其他酶和非酶成分的相容性，等等)，并且该一种或多种酶应以有效量存在。
本发明的优选的方法和组合物包括枯草杆菌蛋白酶抑制剂(肽醛、亚硫酸氢盐加合物；苯基硼酸或其衍生物)和一种或多种选自下组的非枯草杆菌蛋白酶类酶，该组由以下各项组成：淀粉酶；脂肪酶/角质酶；纤维素酶；果胶酸裂解酶；甘露聚糖酶；DNA酶；过水解酶；氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶；淀粉酶和纤维素酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和DNA酶；淀粉酶和过水解酶；淀粉酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶；纤维素酶和DNA酶；纤维素酶和过水解酶；纤维素酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；果胶酸裂解酶和DNA酶；果胶酸裂解酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶；甘露聚糖酶和过水解酶；甘露聚糖酶和氧化还原酶；DNA酶和过水解酶；DNA酶和氧化还原酶；过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；纤维素酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；以及淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶。
脂肪酶/角质酶
适合的脂肪酶和角质酶包括细菌或真菌起源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。实例包括来自嗜热真菌属的脂肪酶，例如，如描述于EP 258068和EP 305216中的来自疏绵状嗜热丝孢菌(早先命名为疏棉状腐质霉)；来自腐质霉属的角质酶，例如如描述于WO 96/13580中的特异腐质霉；假单胞菌属脂肪酶，例如来自产碱假单胞菌或类产碱假单胞菌(EP 218272)、洋葱假单胞菌(EP 331376)、施氏假单胞菌(GB 1372034)、萤光假单胞菌、假单胞菌属物种菌株SD 705(WO 95/06720和WO 96/27002)、威斯康星假单胞菌(P.wisconsinensis)(WO 96/12012)；芽孢杆菌属脂肪酶，例如来自枯草芽孢杆菌(达图瓦(Dartois)等，生物化学与生物物理学报(Biochemica et Biophysica acta)，(1993)1131，253-360)，嗜热脂肪芽孢杆菌(JP 64/744992)或短小芽孢杆菌(W0 91/16422)；GDSL-型链霉菌属脂肪酶(WO 10/065455)；来自稻瘟病菌的角质酶(WO 10/107560)；来自门多萨假单胞菌的角质酶(US 5,389,536)；来自褐色嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的脂肪酶(WO11/084412)；嗜热脂肪土芽孢杆菌脂肪酶(WO 11/084417)；来自枯草芽孢杆菌的脂肪酶(WO11/084599)；以及来自灰色链霉菌(WO 11/150157)和始旋链霉菌(S.pristinaespiralis)的脂肪酶(WO 12/137147)。
其他实例是例如WO 92/05249、WO 94/01541、EP 407225、EP 260105、WO 95/35381、WO 96/00292、WO 95/30744、WO 94/25578、WO 95/14783、WO 95/22615、WO 97/04079、WO 97/07202、WO 00/060063、WO 07/087508以及WO 09/109500中所描述的那些脂肪酶变体。
优选的可商购脂肪酶包括LipolaseTM、Lipolase UltraTM和LipexTM；LecitaseTM、LipolexTM；LipocleanTM、LipoprimeTM(诺维信公司)。其他可商购脂肪酶包括Lumafast(杰能科国际公司)；Lipomax(吉斯特-布劳卡德斯公司(Gist-Brocades)/杰能科国际公司)和来自苏威公司(Solvay)的芽孢杆菌脂肪酶。
糖酶
糖酶是裂解碳水化合物的酶的通用术语。一般来说，糖酶以它们所起作用的底物命名，例如淀粉酶对淀粉酶起作用并且纤维素酶对纤维素起作用。许多糖酶已经适用于清洁和洗衣应用中，如淀粉酶、纤维素酶、果胶酶、果胶酸裂解酶、甘露聚糖酶、阿拉伯糖酶、半乳聚糖酶以及木聚糖酶，并且所有这些糖酶都可以应用于液体组合物中。
淀粉酶
合适的淀粉酶包括那些细菌或真菌来源的淀粉酶。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。淀粉酶包括例如从芽孢杆菌属获得的α-淀粉酶，例如，在GB 1,296,839中更详细描述的地衣芽孢杆菌的特定菌株。
适合的淀粉酶的实例包括具有WO 95/10603中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:3具有90％序列一致性的变体。优选的变体描述于WO 94/02597、WO 94/18314、WO97/43424以及WO 99/019467的SEQ ID NO:4中，例如在一个或多个以下位置中具有取代的变体：15、23、105、106、124、128、133、154、156、178、179、181、188、190、197、201、202、207、208、209、211、243、264、304、305、391、408以及444。
不同的适合的淀粉酶包括具有WO 02/010355中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQ ID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在位置181和182中具有缺失并且在位置193中具有取代的那些。其他适合的淀粉酶是包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和示于WO 2006/066594的SEQ ID NO:4中的地衣芽孢杆菌α-淀粉酶的残基36-483的杂合α-淀粉酶或其具有90％序列一致性的变体。这一杂合α-淀粉酶的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：G48、T49、G107、H156、A181、N190、M197、I201、A209以及Q264。包括示于WO 2006/066594的SEQ ID NO：6中的来源于解淀粉芽孢杆菌的α-淀粉酶的残基1-33和SEQ ID NO：4的残基36-483的杂合α-淀粉酶的最优选变体是具有以下取代的那些：
M197T；
H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S；或
G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S。
适合的另外的淀粉酶是具有WO 99/019467中的SEQ ID NO:6的淀粉酶或其与SEQID NO:6具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:6的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R181、G182、H183、G184、N195、I206、E212、E216以及K269。特别优选的淀粉酶是在位置R181和G182或位置H183和G184中具有缺失的那些。
可以使用的另外的淀粉酶是具有WO 96/023873的SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQID NO:2或SEQ ID NO:7的那些或其与SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ IDNO:7具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:7的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：140、181、182、183、184、195、206、212、243、260、269、304以及476。更优选的变体是在位置181和182或位置183和184中具有缺失的那些。SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7的最优选的淀粉酶变体是在位置183和184中具有缺失并且在位置140、195、206、243、260、304以及476中的一个或多个中具有取代的那些。
可以使用的其他淀粉酶是具有WO 08/153815中的SEQ ID NO:2、WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的淀粉酶或其与WO 08/153815的SEQ ID NO:2具有90％序列一致性或与WO01/66712中的SEQ ID NO:10具有90％序列一致性的变体。WO 01/66712中的SEQ ID NO:10的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：176、177、178、179、190、201、207、211以及264。
另外的适合的淀粉酶是具有WO 09/061380中的SEQ ID NO:2的淀粉酶或其与SEQID NO:2具有90％序列一致性的变体。SEQ ID NO:2的优选变体是在以下位置中的一个或多个中具有C-末端的截短和/或取代、缺失或插入的那些：Q87、Q98、S125、N128、T131、T165、K178、R180、S181、T182、G183、M201、F202、N225、S243、N272、N282、Y305、R309、D319、Q320、Q359、K444以及G475。SEQ ID NO:2的更优选变体是在一个或多个以下位置中具有取代的那些：Q87E,R、Q98R、S125A、N128C、T131I、T165I、K178L、T182G、M201L、F202Y、N225E,R、N272E,R、S243Q,A,E,D、Y305R、R309A、Q320R、Q359E、K444E以及G475K和/或位置R180和/或S181或T182和/或G183的缺失。SEQ ID NO:2的最优选的淀粉酶变体是具有以下取代的那些：
N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；
N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K；
S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K；或
S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K，其中这些变体是C-末端截短的并且任选地进一步在位置243处包括取代和/或在位置180和/或位置181处包括缺失。
其他适合的淀粉酶是具有WO 01/66712中的SEQ ID NO:12的α-淀粉酶或与SEQ IDNO:12具有至少90％序列一致性的变体。优选的淀粉酶变体是在WO 01/66712中的SEQ IDNO:12的以下位置中的一个或多个中具有取代、缺失或插入的那些：R28，R118，N174；R181，G182，D183，G184，G186，W189，N195，M202，Y298，N299，K302，S303，N306，R310，N314；R320，H324，E345，Y396，R400，W439，R444，N445，K446，Q449，R458，N471，N484。特别优选的淀粉酶包括具有D183和G184的缺失并且具有R118K、N195F、R320K及R458K的取代的变体，以及另外在选自下组的一个或多个位置中具有取代的变体：M9、G149、G182、G186、M202、T257、Y295、N299、M323、E345以及A339，最优选的是另外在所有这些位置中具有取代的变体。
其他实例是例如描述于WO 2011/098531、WO 2013/001078及WO 2013/001087中的那些淀粉酶变体。
可商购的淀粉酶是StainzymeTM、Stainzyme PlusTM、AmplifyTM、ResilienceTM、EverestTM、DuramylTM、TermamylTM、Termamyl UltraTM；NatalaseTM、FungamylTM及BANTM(来自诺维信公司(Novozymes A/S))、RapidaseTM和PurastarTM/EffectenzTM、PoweraseTM和Preferenz S100(来自杰能科国际有限公司/杜邦公司(Genencor International Inc./DuPont))。
裂解酶
裂解酶可以是一种果胶酸裂解酶，来源于芽孢杆菌属，尤其是地衣芽孢杆菌或粘琼脂芽孢杆菌(B.agaradhaerens)，或一种来源于这些来源中任一种的变体，例如，正如在US 6124127、WO 99/027083、WO 99/027084、WO 02/006442、WO 02/092741、WO 03/095638中所述的，可商购的果胶酸裂解酶是XPectTM；PectawashTM和PectawayTM(诺维信公司)。
甘露聚糖酶
甘露聚糖酶可以是家族5或26的碱性甘露聚糖酶。它可以是一种来自芽孢杆菌属或腐质霉属的野生型，特别是粘琼脂芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、耐盐嗜碱芽孢杆菌(B.halodurans)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)或特异腐质霉。合适的甘露聚糖酶在WO 99/064619中描述。一种可商购的甘露聚糖酶是MannawayTM(诺维信公司)。
纤维素酶
合适的纤维素酶可以是细菌或真菌起源的。包括化学或遗传修饰的突变体。适合的纤维素酶包括来自芽孢杆菌属、假单胞菌属、腐质霉属、镰孢属、梭孢壳菌属、支顶孢属的纤维素酶，例如披露于US 4,435,307、US 5,648,263、US 5,691,178、US 5,776,757以及WO89/09259中的由特异腐质霉、嗜热毁丝霉和尖孢镰孢属产生的真菌纤维素酶。
尤其适合的纤维素酶是具有颜色护理益处的碱性或中性纤维素酶。此类纤维素酶的实例是描述于EP 0 495 257、EP 0 531 372、WO 96/11262、WO 96/29397、WO 98/08940中的纤维素酶。其他实例为例如在WO 94/07998、EP 0 531 315、US 5,457,046、US 5,686,593、US中描述的那些纤维素酶变体
可商购的纤维素酶包括CarezymeTM、CelluzymeTM、CellucleanTM、CelluclastTM、EndolaseTM、雷诺酶(RenozymeTM)、怀特酶(WhitezymeTM)(诺维信公司)、ClazinaseTM、普拉达克(Puradax)、普拉达克HA(Puradax HA)以及普拉达克EG(Puradax EG)(购自杰能科)以及KAC-500(B)TM(花王公司(Kao Corporation))。
过氧化物酶/氧化酶
适合的过氧化物酶包括由国际生物化学与分子生物学联合会(IUBMB)命名委员会陈述的酶分类EC 1.11.1.7，或源自其中的展示出过氧化物酶活性的任何片段。
适合的过氧化物酶包括植物、细菌或真菌来源的那些。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。有用的过氧化物酶的实例包括来自拟鬼伞属，例如来自灰盖拟鬼伞(C.cinerea)的过氧化物酶(EP 179,486)，及其变体，如在WO 93/24618、WO 95/10602以及WO 98/15257中描述的那些。
这些过氧化物酶还包括卤代过氧化物酶，例如氯过氧化物酶、溴过氧化物酶以及展示出氯过氧化物酶或溴过氧化物酶活性的化合物。根据其对卤素离子的特异性将卤代过氧化物酶加以分类。氯过氧化物酶(E.C.1.11.1.10)催化从氯根离子形成次氯酸盐。
在一个实施例中，本发明的卤代过氧化物酶是氯过氧化物酶。优选地，该卤代过氧化物酶是钒卤代过氧化物酶，即含钒酸盐的卤代过氧化物酶。在本发明的优选方法中，将含钒酸盐的卤代过氧化物酶与氯根离子来源组合。
已经从许多不同真菌，特别是从暗色丝孢菌(dematiaceous hyphomycete)真菌组中分离出了卤代过氧化物酶，比如卡尔黑霉属(Caldariomyces)(例如煤卡尔黑霉(C.fumago))、链格孢属、弯孢属(例如疣枝弯孢(C.verruculosa)和不等弯孢(C.inaequalis))、内脐蠕孢属、细基格孢属以及葡萄孢属。
还已经从细菌，如假单胞菌属(例如，吡咯假单胞菌(P.pyrrocinia))和链霉菌属(例如，金色链霉菌(S.aureofaciens))中分离出了卤代过氧化物酶。
在一个优选实施例中，该卤代过氧化物酶可源自弯孢属，特别是疣枝弯孢(Curvularia verruculosa)或不等弯孢，如如描述于WO 95/27046中的不等弯孢CBS102.42或描述于WO 97/04102中的疣枝弯孢CBS 147.63或疣枝弯孢CBS 444.70；或可源自如描述于WO 01/79459中的Drechslera hartlebii，如描述于WO 01/79458中的盐沼小树状霉(Dendryphiella salina)、如描述于WO 01/79461中的Phaeotrichoconis crotalarie或如描述于WO 01/79460中的Geniculosporium属。
适合的氧化酶具体包括由酶分类EC 1.10.3.2囊括的任何漆酶或源自其中的展示出漆酶活性的任何片段、或展示出类似活性的化合物，例如儿茶酚氧化酶(EC 1.10.3.1)、邻氨基苯酚氧化酶(EC 1.10.3.4)或胆红素氧化酶(EC 1.3.3.5)。
优选的漆酶是微生物来源的酶。这些酶可以源自植物、细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。
来自真菌的适合实例包括可源自以下项的菌株的漆酶：曲霉属，脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌)，柄孢壳菌属，葡萄孢属，金钱菌属(Collybia)，层孔菌属(Fomes)，香菇属，侧耳属，栓菌属(例如，长绒毛栓菌和变色栓菌)，丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R.solani))，拟鬼伞属(例如，灰盖拟鬼伞、毛头拟鬼伞(C.comatus)、弗瑞氏拟鬼伞(C.friesii)及C.plicatilis)，小脆柄菇属(Psathyrella)(例如，白黄小脆柄菇(P.condelleana))，斑褶菇属(例如，蝶形斑褶菇(P.papilionaceus))，毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉)，Schytalidium(例如，S.thermophilum)，多孔菌属(例如，P.pinsitus)，射脉菌属(例如，射脉侧菌(P.radiata))(WO 92/01046)或革盖菌属(例如，毛革盖菌(C.hirsutus))(JP 2238885)。
来自细菌的适合实例包括可源自芽孢杆菌属的菌株的漆酶。优选的是源自拟鬼伞属或毁丝霉属的漆酶；特别是源自灰盖拟鬼伞的漆酶，如披露于WO 97/08325中；或源自嗜热毁丝霉，如披露于WO 95/33836中。
脱氧核糖核酸酶(DNA酶)
适合的脱氧核糖核酸酶(DNA酶)是催化DNA骨架中的磷酸二酯键的水解切割从而降解DNA的任何酶。根据本发明，可获得自细菌的DNA酶是优选的；特别地，可获得自芽孢杆菌属的DNA酶是优选的；特别地，可获得自枯草芽孢杆菌或地衣芽孢杆菌的DNA酶是优选的。此类DNA酶的实例描述于专利申请WO 2011/098579或PCT/EP 2013/075922中。
过水解酶
适合的过水解酶能够催化过水解反应，该反应导致在过氧化物源(例如，过氧化氢)的存在下从羧酸酯(酰)底物产生过酸。虽然许多酶以低水平进行该反应，过水解酶展示出高的过水解:水解比率，通常大于1。适合的过水解酶可以是植物、细菌或真菌来源的。包括化学修饰的变体或蛋白质工程变体。
有用的过水解酶的实例包括天然存在的分枝杆菌属过水解酶或其变体。一种示例性酶来源于耻垢分枝杆菌。这种酶，其酶特性、其结构及其变体描述于WO 2005/056782、WO2008/063400、US 2008/145353以及US 2007167344中。
枯草杆菌蛋白酶抑制剂
在本发明的方法和组合物中使用的枯草杆菌蛋白酶抑制剂是苯基硼酸或其衍生物；或肽醛、其亚硫酸氢盐加合物、或一种肽甲基酮。该甲基可任选地被卤素取代，并且该肽可任选地具有一个N-端保护基团。
优选地，该枯草杆菌蛋白酶抑制剂是一种肽醛、其亚硫酸氢盐加合物、或一种肽甲基酮。
肽醛或酮
该抑制剂可具有式：P-(A)y-L-(B)x-B0-R*，其中：
R*是H(氢)、CH3、CX3、CHX2或CH2X。优选地，R*＝H从而该抑制剂是一种具有式P-(A)y-L-(B)x-B0-H的肽醛；
X是卤素原子，特别是F(氟)；
B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
x是1、2或3；
Bx独立地是各自经由其C端连接到下一个B或B0上的单一氨基酸残基；
L不存在或独立地是具有式-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-的连接基团；
A不存在(如果L不存在)或独立地是经由氨基酸的N端连接到L上的单一氨基酸残基；
P选自下组，该组由以下各项组成：氢或(如果L不存在)一种N端保护基团；
y是0、1或2，
R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
R'独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；并且
R″是C1-6烷基。
x可以是1、2或3并且因此B对应地可以是1、2或3个氨基酸残基。因此，B可以表示B1、B2-B1或B3-B2-B1，其中B3、B2和B1各自表示一个氨基酸残基。y可以是0、1或2并且因此A可以不存在，或是对应地具有式A1或A2-A1的1个或2个氨基酸残基，其中A2和A1各自表示一个氨基酸残基。
B0可以是具有L-或D-构型的单一氨基酸残基，它经由氨基酸的C端被连接到H上。B0具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-，其中R是C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基侧链，如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、苯基或苄基，并且其中R可以任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代。B0的具体实例是D或L形式的精氨酸(Arg)、3,4-二羟基苯丙氨酸、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、间酪氨酸、对酪氨酸(Tyr)以及缬氨酸(Val)。一个具体实施例是当B0是亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、对酪氨酸以及缬氨酸时。
经由氨基酸的C端连接到B0上的B1可以是脂肪族、疏水性和/或中性氨基酸。B1的实例是丙氨酸(Ala)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B1的具体实例是丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B1是丙氨酸、甘氨酸或缬氨酸时。
如果存在，经由氨基酸的C端连接到B1上的B2可以是脂肪族、疏水性、中性和/或极性氨基酸。B2的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉啶(Cpd)、半胱氨酸(Cys)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、脯氨酸(Pro)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)以及缬氨酸(Val)。B2的具体实例是丙氨酸、精氨酸、卷须霉啶、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B2是精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸或缬氨酸时。
经由氨基酸的C端连接到B2上的B3(如果存在)可以是大型、脂肪族、芳香族、疏水性和/或中性氨基酸。B3的实例是异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。B3的具体实例是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸以及色氨酸。
连接基团L可以不存在或选自下组，该组由以下各项组成：-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-。本发明的具体实施例是当L不存在或L是羰基-C(＝O)-时。
经由氨基酸的N端连接到L上的A1(如果存在)可以是脂肪族、芳香族、疏水性、中性和/或极性氨基酸。A1的实例是丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、卷须霉啶(Cpd)、甘氨酸(Gly)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苏氨酸(Thr)、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。A1的具体实例是丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸以及缬氨酸。一个具体实施例是当B2是亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸或色氨酸时。
经由氨基酸的N端连接到A1上的A2残基(如果存在)可以是大型、脂肪族、芳香族、疏水性和/或中性氨基酸。A2的实例是精氨酸(Arg)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)、正亮氨酸(Nle)、正缬氨酸(Nva)、苯丙氨酸(Phe)、苯基甘氨酸、酪氨酸(Tyr)、色氨酸(Trp)以及缬氨酸(Val)。A2的具体实例是苯丙氨酸和酪氨酸。
N端保护基团P(如果存在)可以选自甲酰基、乙酰基(Ac)、苄酰基(Bz)、三氟乙酰基、甲氧基丁二酰基、芳香族和脂肪族氨基甲酸酯保护基团，如芴基甲氧羰基(Fmoc)、甲氧羰基(Moc)、(氟甲氧基)羰基、苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)以及金刚烷氧羰基；对甲氧基苄基羰基、苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)、对甲氧基苯基(PMP)、甲氧基乙酰基、甲氨基羰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基、苄基磺酰基、甲基磷酰胺基(MeOP(OH)(＝O))以及苄基磷酰胺基(PhCH2OP(OH)(＝O))。
在含保护基团的三肽醛(即x＝2，L不存在并且A不存在)的情况下，P优选地是乙酰基、甲氧羰基、苄氧羰基、甲氨基羰基、甲基磺酰基、苄基磺酰基以及苄基磷酰胺基。在含保护基团的四肽醛(即x＝3，L不存在并且A不存在)的情况下，P优选地是乙酰基、甲氧羰基、甲基磺酰基、乙基磺酰基以及甲基磷酰胺基。
适合的肽醛描述在WO 94/04651、WO 95/25791、WO 98/13458、WO 98/13459、WO98/13460、WO 98/13461、WO 98/13462、WO 07/141736、WO 07/145963、WO 09/118375、WO10/055052以及WO 11/036153中。更具体地，该肽醛可以是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H。用于在本发明的液体组合物中使用的一种优选的抑制剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基。
这类肽醛的另外的实例包括α-MAPI、β-MAPI、Phe-C(＝O)-Arg-Val-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Gly-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Phe-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Tyr-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-L-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Nva-H、Phe-C(＝O)-Gly-Ala-Nle-H、Tyr-C(＝O)-Arg-Val-Tyr-H、Tyr-C(＝O)-Gly-Ala-Tyr-H、Phe-C(＝S)-Arg-Val-Phe-H、Phe-C(＝S)-Arg-Val-Tyr-H、Phe-C(＝S)-Gly-Ala-Tyr-H、抗痛素、GE20372A、GE20372B、糜蛋白酶抑素A、糜蛋白酶抑素B以及糜蛋白酶抑素C。
亚硫酸氢盐加合物
该枯草杆菌蛋白酶抑制剂可以是如上所述的肽醛的亚硫酸氢盐加合物，例如，如在WO 2013/004636中所述的。该加合物可以具有式P-(A)y-L-(B)x-N(H)-CHR-CH(OH)-SO3M，其中P、A、y、L、B、x以及R如上文所定义，并且M是H或碱金属，优选Na或K。一个优选实施例是亚硫酸氢盐加合物，其中P＝Cbz；B2＝Gly；B1＝Ala；B0＝Tyr(因此R＝PhCH2，R’＝OH)，x＝2，y＝0，L＝A＝不存在并且M＝Na。
肽醛或亚硫酸氢盐加合物
该抑制剂可以是一种具有式P-B2-B1-B0-H的醛或一种具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
d)R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R″是一个C1-6烷基；并且
g)P是一个N端保护基团。
组分b)至g)可以如上所述进行选择。
苯基硼酸
该枯草甘酸蛋白酶抑制剂可以是苯基硼酸或其衍生物。
在本发明的一个实施例中，该苯基硼酸衍生物具有以下化学式：
其中R选自下组，该组由以下各项组成：氢、羟基、C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基以及取代的C1-C6烯基。优选地，R是氢、CH3、CH3CH2或CH3CH2CH2。
在一个优选实施例中，该枯草甘酸蛋白酶抑制剂(苯基硼酸衍生物)为4-甲酰基-苯基-硼酸(4-FPBA)。
在另一个具体实施例中，该枯草甘酸蛋白酶抑制剂选自下组，该组由以下各项组成：
噻吩-2硼酸、噻吩-3硼酸、乙酰胺苯基硼酸、苯并呋喃-2硼酸、萘-1硼酸、萘-2硼酸、2-FPBA、3-FBPA、4-FPBA、1-噻蒽硼酸、4-二苯并呋喃硼酸、5-甲基噻吩-2硼酸、硫茚硼酸(thionaphthene boronic acid)、呋喃-2硼酸、呋喃-3硼酸、4,4联苯-二硼酸(4,4biphenyl-diborinic acid)、6-羟基-2-萘(6-hydroxy-2-naphtalene)、4-(甲硫基)苯基硼酸、4(三甲基-甲硅烷基)苯基硼酸、3-溴代噻吩硼酸、4-甲基噻吩硼酸、2-萘基硼酸、5-溴噻吩硼酸(5-bromothiphene boronic acid)、5-氯代噻吩硼酸、二甲基噻吩硼酸、2-溴代苯基硼酸、3-氯代苯基硼酸、3-甲氧基-2-噻吩、对-甲基-苯乙基硼酸、2-噻蒽硼酸、二苯并噻吩硼酸、4-羧基苯基硼酸、9-蒽基硼酸、3,5二氯苯基硼酸、二苯基硼酸酐、邻-氯代苯基硼酸、对-氯代苯基硼酸、间-溴代苯基硼酸、对-溴代苯基硼酸、对-氟代苯基硼酸、对-甲苯基硼酸、邻-甲苯基硼酸、辛基硼酸、1,3,5三甲基苯基硼酸、3-氯代-4-氟代苯基硼酸、3-氨基苯基硼酸、3,5-二-(三氟甲基)苯基硼酸、2,4二氯代苯基硼酸、4-甲氧基苯基硼酸。
适于作为洗涤剂组合物中的枯草杆菌蛋白酶抑制剂的其他硼酸衍生物描述于US4,963,655、US 5,159,060、WO 95/12655、WO 95/29223、WO 92/19707、WO 94/04653、WO 94/04654、US 5442100、US 5488157以及US 5472628中。
液体洗涤剂组合物
该液体洗涤剂组合物具有一种物理形式，它不是固体(或气体)。它可以是一种可倾流的液体，一种可倾流的凝胶或一种不可倾流的凝胶。它可以是各向同性的或结构性的，优选各向同性的。它可以是一种配制品，用于在自动洗衣机中洗涤或用于手洗。
该液体洗涤剂组合物可以是水性的，典型地包含按重量计至少20％并且高达95％的水，例如高达70％的水、高达50％的水、高达40％的水、高达30％的水、或高达20％的水。包括但不限于链烷醇、胺、二醇、醚以及多元醇的其他类型的液体可以被包括在水性液体洗涤剂中。水性液体洗涤剂可以包含从0％-30％的有机溶剂。液体洗涤剂甚至可以是非水性的，其中水含量低于10％，优选低于5％。
洗涤剂成分可以通过水可溶性袋中的室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
该洗涤剂组分可以采用一种单位剂量产物的形式。单位剂量产品是不可重复使用的容器中的单一剂量的包装。它被越来越多地用于洗衣和餐具洗涤的洗涤剂中。一个洗涤剂单位剂量产品是在单次洗涤中所用的洗涤剂量值的包装(例如，在由一种水溶性薄膜制得的一个袋中)。
袋可以是适于保存该组合物的任意形式、任何形状、和任何材料，例如不允许该组合物在与水接触之前从该袋中释放出。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料，优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，在膜中的聚合物(例如PVA)的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。薄膜还可以是一种混合组合物，包括可通过水解可降解的以及水溶性的聚合物混合物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考(Trade reference)M8630下，由Chris Craft In.Prod.Of Gary，Ind.，US销售)，以及增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。组合物中，液体组分的室可以与含有固体的室不同(见例如US 2009/0011970)。
洗涤剂组分的选择可以包括(用于纺织品保养)有待清洁的纺织品的类型、污物的类型和/或程度、进行清洁时的温度、以及洗涤剂产品的配制的考虑。尽管根据一种具体的功能性对以下提及的组分由通用标题进行分类，但是这并不被解释为限制，因为如将被普通技术人员所理解，一种组分可以包括另外的功能性。
另外的组分的选择在普通技术人员技术内并且包括常规成分，包括以下列出的示例性、非限制性组分。
表面活性剂
洗涤剂组合物可以包括一种或多种表面活性剂，它们可以是阴离子的和/或阳离子的和/或非离子的和/或半极性的和/或兼性离子的或其混合物。在一个具体实施例中，洗涤剂组合物包括一种或多种非离子型表面活性剂和一种或多种阴离子表面活性剂的混合物。这种或这些表面活性剂典型地以按重量计从约0.1％至60％的水平存在，例如约1％至约40％、或约3％至约20％、或约3％至约10％。基于所希望的清洁应用来选择这种或这些表面活性剂，并且这种或这些表面活性剂包括本领域中已知的任何一种或多种常规表面活性剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何表面活性剂。
当包含在其中时，所述去污剂通常将会含有按重量计约1％至约40％，例如约5％至约30％，包括约5％至约15％，或约20％至约25％的阴离子型表面活性剂。阴离子表面活性剂的非限制性实例包括硫酸盐和磺酸盐，具体地说是直链烷基苯磺酸盐(LAS)、LAS的异构体、支链烷基苯磺酸盐(BABS)、苯基链烷磺酸盐、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烯烃磺酸盐、链烯烃磺酸盐、链烷-2,3-二基双(硫酸盐)、羟基链烷磺酸盐以及二磺酸盐、烷基硫酸盐(AS)(如十二烷基硫酸钠(SDS))、脂肪醇硫酸盐(FAS)、伯醇硫酸盐(PAS)、醇醚硫酸盐(AES或AEOS或FES，也被称为醇乙氧基硫酸盐或脂肪醇醚硫酸盐)、仲链烷磺酸盐(SAS)、石蜡烃磺酸盐(PS)、酯磺酸盐、磺化的脂肪酸甘油酯、α-磺酸基脂肪酸甲酯(α-SFMe或SES)(包括甲酯磺酸盐(MES))、烷基琥珀酸或烯基琥珀酸、十二烯基/十四烯基琥珀酸(DTSA)、氨基酸的脂肪酸衍生物、磺酸基琥珀酸或皂的二酯和单酯、及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约10％的阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂的非限制性实例包括烷基二甲基乙醇季胺(ADMEAQ)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)、二甲基二硬脂酰氯化铵(DSDMAC)、以及烷基苄基二甲基铵、烷基季铵化合物、烷氧基化季铵(AQA)化合物及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.2％至约40％的非离子型表面活性剂，例如从约0.5％至约30％，特别是从约1％至约20％、从约3％至约10％，例如从约3％至约5％、或从约8％至约12％。非离子型表面活性剂的非限制性实例包括醇乙氧基化物(AE或AEO)、醇丙氧基化物、丙氧基化的脂肪醇(PFA)，烷氧基化的脂肪酸烷基酯(例如乙氧基化的和/或丙氧基化的脂肪酸烷基酯)，烷基酚乙氧基化物(APE)，壬基酚乙氧基化物(NPE)，烷基多糖苷(APG)，烷氧基化胺，脂肪酸单乙醇酰胺(FAM)，脂肪酸二乙醇酰胺(FADA)，乙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(EFAM)，丙氧基化的脂肪酸单乙醇酰胺(PFAM)，多羟基烷基脂肪酸酰胺，或葡萄糖胺的N-酰基N-烷基衍生物(葡糖酰胺(GA)，或脂肪酸葡糖酰胺(FAGA))，连同在SPAN和TWEEN商品名下可获得的产品及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约20％的半极性表面活性剂。半极性表面活性剂的非限制性实例包括氧化胺(AO)，例如烷基二甲基氧化胺、N-(椰油基烷基)-N,N-二甲基氧化胺和N-(牛油-烷基)-N,N-双(2-羟乙基)氧化胺、脂肪酸链烷醇酰胺和乙氧基化的脂肪酸链烷醇酰胺及其组合。
当被包括在其中时，洗涤剂将通常包含按重量计从约0.1％至约10％的兼性离子表面活性剂。兼性离子表面活性剂的非限制性实例包括甜菜碱、烷基二甲基甜菜碱、磺基甜菜碱及其组合。
助水溶剂
助水溶剂是如下化合物，该化合物在水性溶液中溶解疏水化合物(或相反地，在非极性环境中的极性物质)。一般地，助水溶物具有亲水和疏水两种特征(所谓的两亲性质，如由表面活性剂已知的)；然而，助水溶物的分子结构一般不利于自发性自聚集，参见例如由霍奇登(Hodgdon)和卡勒(Kaler)(2007)，胶体&界面科学新见(Current Opinion inColloid&Interface Science)12：121-128的综述。助水溶剂并不显示临界浓度，高于该浓度就会发生如对表面活性剂而言所发现的自聚集以及脂质形成胶束、薄层或其他很好地定义的中间相。相反，许多助水溶物显示连续类型的聚集过程，其中聚集物的大小随着浓度增加而增长。然而，很多助水溶剂改变了包括极性和非极性特征的物质的系统(包括水、油、表面活性剂、和聚合物的混合物)的相行为、稳定性、和胶体特性。经典地从制药、个人护理、食品跨行业至技术应用使用助水溶剂。助水溶剂在洗涤剂组合物中的使用允许例如更浓的表面活性剂配制品(如在通过去除水而压缩液体洗涤剂的过程中)而不引起不希望的现象，例如相分离或高粘度。
洗涤剂可以包含按重量计0-5％，例如约0.5％至约5％、或约3％至约5％的助水溶剂。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何助水溶剂。助水溶剂的非限制性实例包括苯磺酸钠、对甲苯磺酸钠(STS)、二甲苯磺酸钠(SXS)、枯烯磺酸钠(SCS)、伞花烃磺酸钠、氧化胺、醇和聚乙二醇醚、羟基萘甲酸钠、羟基萘磺酸钠、乙基己基磺酸钠及其组合。
助洗剂和共助洗剂
洗涤剂组合物可以包含按重量计约0-65％，例如约5％至约50％的洗涤剂助洗剂或共助洗剂或其混合物。在洗涤餐具洗涤剂中，助洗剂的水平典型地是40％-65％，特别是50％-65％。助洗剂和/或共助洗剂可以具体是形成具有Ca和Mg离子的水溶性复合物的螫合剂。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何助洗剂和/或共助洗剂。助洗剂的非限制性实例包括柠檬酸盐、沸石、二磷酸盐(焦磷酸盐)、三磷酸盐例如三磷酸钠(STP或STPP)、碳酸盐例如碳酸钠、可溶性硅酸盐例如硅酸钠、层状硅酸盐(例如来自赫斯特公司(Hoechst)的SKS-6)、乙醇胺例如2-氨基乙-1-醇(MEA)、二乙醇胺(DEA，也称为亚氨基二乙醇)、三乙醇胺(TEA，也称为2,2’,2”-次氮基三乙醇)、以及羧甲基菊粉(CMI)及其组合。
洗涤剂组合物还可以包含按重量计0-50％，例如约0.5％至约10％的洗涤剂共助洗剂或其混合物。洗涤剂组合物可以单独地包括一种共助洗剂，或与一种助洗剂，例如柠檬酸助洗剂组合。共助洗剂的非限制性实例包括聚丙烯酸酯的均聚物或其共聚物，例如聚(丙烯酸)(PAA)或共聚(丙烯酸/马来酸)(PAA/PMA)。另外的非限制性实例包括柠檬酸盐，螯合剂，例如氨基羧酸盐、氨基多羧酸盐和膦酸盐，以及烷基-或烯基琥珀酸。另外的具体实例包括2,2’,2”-次氨基三乙酸(NTA)、乙二胺四乙酸(EDTA)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDS)、乙二胺-N,N’-二丁二酸(EDDS)、甲基甘氨酸二乙酸(MGDA)、谷氨酸-N,N-二乙酸(GLDA)、1-羟基乙烷-1,1-二膦酸(HEDP)、乙二胺四-(亚甲基膦酸)(EDTMPA)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTMPA或DTPMPA)、N-(2-羟乙基)亚氨基二乙酸(EDG)、天冬氨酸-N-单乙酸(ASMA)、天冬氨酸-N,N-二乙酸(ASDA)、天冬氨酸-N-单丙酸(ASMP)、亚氨基二丁二酸(iminodisuccinic acid)(IDA)、N-(2-磺甲基)-天冬氨酸(SMAS)、N-(2-磺乙基)-天冬氨酸(SEAS)、N-(2-磺甲基)-谷氨酸(SMGL)、N-(2-磺乙基)-谷氨酸(SEGL)、N-甲基亚氨基二乙酸(MIDA)、α-丙氨酸-N,N-二乙酸(α-ALDA)、丝氨酸-N,N-二乙酸(SEDA)、异丝氨酸-N,N-二乙酸(ISDA)、苯丙氨酸-N,N-二乙酸(PHDA)、邻氨基苯甲酸-N,N-二乙酸(ANDA)、磺胺酸-N,N-二乙酸(SLDA)、牛磺酸-N,N-二乙酸(TUDA)以及磺甲基-N,N-二乙酸(SMDA)、N-(2-羟乙基)-亚乙基二胺-N,N’,N’-三乙酸盐(HEDTA)、二乙醇甘氨酸(DEG)、二亚乙基三胺五(亚甲基膦酸)(DTPMP)、氨基三(亚甲基膦酸)(ATMP)及其组合和盐。其他示例性助洗剂和/或共助洗剂描述于例如WO 09/102854、US 5977053中。
聚合物
所述洗涤剂可以包含按重量计0-10％，例如0.5％-5％、2％-5％、0.5％-2％或0.2％-1％的聚合物。可以利用本领域中已知的用于在洗涤剂中使用的任何聚合物。该聚合物可以作为如以上提到的共助洗剂起作用，或可以提供抗再沉积、纤维保护、污垢释放、染料转移抑制、油污清洁和/或防沫特性。一些聚合物可以具有多于一种的以上提到的特性和/或多于一种的以下提到的基序(motif)。示例性聚合物包括(羧甲基)纤维素(CMC)、聚(乙烯醇)(PVA)、聚(乙烯吡咯烷酮)(PVP)、聚(乙二醇)或聚(环氧乙烷)(PEG)、乙氧基化的聚(亚乙基亚胺)、羧甲基菊粉(CMI)、和聚羧化物，例如PAA、PAA/PMA、聚-天冬氨酸、和甲基丙烯酸月桂酯/丙烯酸共聚物、疏水改性CMC(HM-CMC)和硅酮、对苯二甲酸和低聚乙二醇的共聚物、聚(对苯二甲酸乙二酯)和聚(氧乙烯对苯二甲酸乙二酯)的共聚物(PET-POET)、PVP、聚(乙烯基咪唑)(PVI)、聚(乙烯吡啶-N-氧化物)(PVPO或PVPNO)以及聚乙烯吡咯烷酮-乙烯基咪唑(PVPVI)。另外的示例性聚合物包括磺化的聚羧酸酯、聚环氧乙烷和聚环氧丙烷(PEO-PPO)以及乙氧基硫酸二季铵盐。其他示例性聚合物披露于例如WO 2006/130575以及US 5,955,415中。也考虑了以上提到的聚合物的盐。
织物调色剂
本发明的洗涤剂组合物还可以包括织物调色剂，例如染料或色素，当配制在洗涤剂组合物中时，当所述织物与一种洗涤液接触时织物调色剂可以沉积在织物上，该洗涤液包括所述洗涤剂组合物，并且因此通过可见光的吸收/反射改变所述织物的色彩。荧光增白剂发射至少一些可见光。相比之下，因为它们吸收至少一部分可见光光谱，所以织物调色剂改变表面的色彩。适合的织物调色剂包括染料和染料-粘土轭合物，并且还可以包括色素。适合的染料包括小分子染料和聚合物染料。适合的小分子染料包括选自下组的小分子染料，该组由落入颜色索引(Colour Index)(C.I.)分类的以下染料组成：直接蓝、直接红、直接紫、酸性蓝、酸性红、酸性紫、碱性蓝、碱性紫和碱性红或其混合物，例如如描述于WO2005/03274、WO 2005/03275、WO 2005/03276以及EP 1876226(通过引用而特此结合)中。洗涤剂组合物优选包括从约0.00003wt％至约0.2wt％、从约0.00008wt％至约0.05wt％、或甚至从约0.0001wt％至约0.04wt％的织物调色剂。该组合物可以包括从0.0001wt％至0.2wt％的织物调色剂，当该组合物处于单位剂量袋的形式时，这可以是特别优选的。适合的调色剂还披露于例如WO 2007/087257和WO 2007/087243中。
另外的酶
该液体洗涤剂组合物可包括另外的酶，使用其他的制剂技术，例如微囊(像如在PCT/EP 2014/059017或WO 1997/024177中所描述的)、颗粒或酶水溶性膜(像如在PCT/US2014/027603、PCT/US 2014/027462、或WO 2013/148492中所描述的)。
辅料
还可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何洗涤剂组分。其他任选的洗涤剂组分包括防腐剂、防缩剂、抗污垢再沉积剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、腐蚀抑制剂、崩解剂(disintegrant)/崩解试剂(disintegration agent)、染料、酶稳定剂(包括硼酸、硼酸盐、CMC和/或多元醇如丙二醇)、织物整理剂(包括粘土)、填充剂/加工助剂、荧光增白剂/光学增亮剂、增泡剂、泡沫(泡)调节剂、香料、污垢助悬剂、软化剂、抑泡剂、晦暗抑制剂以及芯吸剂，单独或组合使用。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何成分。此类成分的选择完全在普通技术人员的技术内。
分散剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包含分散剂。具体地说，粉状洗涤剂可以包括分散剂。适合的水溶性有机材料包括均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括至少两个羧基，这两个羧基被不超过两个碳原子彼此分开。适合的分散剂例如描述于粉末洗涤剂，表面活性剂科学系列(Surfactant Science Series)，第71卷中，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker)。
染料转移抑制剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种染料转移抑制剂。适合的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、N-乙烯吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯噁唑烷酮以及聚乙烯咪唑或其混合物。当存在于主题组合物中时，染料转移抑制剂可以按组合物重量计的以下水平存在：从约0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％或甚至从约0.1％至约3％。
荧光增白剂-本发明的洗涤剂组合物还将优选地包含另外的组分，这些组分可以给正清洁的物品着色，例如荧光增白剂或光学增亮剂。其中增亮剂优选以约0.01％至约0.5％的水平存在。在本发明的组合物中可以使用适合用于在衣物洗涤剂组合物中使用的任何荧光增白剂。最常用的荧光增白剂是属于以下类别的那些：二氨基芪-磺酸衍生物、二芳基吡唑啉衍生物和二苯基-联苯乙烯基衍生物。二氨基芪-磺酸衍生物类型的荧光增白剂的实例包括以下的钠盐：4,4'-双-(2-二乙醇氨基-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2,4-二苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2.2'-二磺酸盐、4,4'-双-(2-苯胺基-4-(N-甲基-N-2-羟基-乙基氨基)-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐、4,4'-双-(4-苯基-1,2,3-三唑-2-基)芪-2,2'-二磺酸盐以及5-(2H-萘并[1,2-d][1,2,3]三唑-2-基)-2-[(E)-2-苯基乙烯基]苯磺酸钠。优选的荧光增白剂是可从汽巴-嘉基股份有限公司(Ciba-Geigy AG)(巴塞尔，瑞士)获得的天来宝(Tinopal)DMS和天来宝CBS。天来宝DMS是4,4'-双-(2-吗啉代-4-苯胺基-s-三嗪-6-基氨基)芪-2,2'-二磺酸盐的二钠盐。天来宝CBS是2,2'-双-(苯基-苯乙烯基)-二磺酸盐的二钠盐。还优选荧光增白剂，是可商购的ParawhiteKX，由派拉蒙矿物与化学(Paramount Minerals and Chemicals)，孟买，印度供应。适合用于在本发明中使用的其他荧光剂包括1-3-二芳基吡唑啉和7-烷氨基香豆素。
适合的荧光增亮剂水平包括从约0.01wt％、从0.05wt％、从约0.1wt％或甚至从约0.2wt％的较低水平至0.5wt％或甚至0.75wt％的较高水平。
污垢释放聚合物-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种污垢释放聚合物，这些污垢释放聚合物帮助从织物，例如棉或聚酯基织物上除去污垢，特别是从聚酯基织物上除去疏水污垢。污垢释放聚合物可以例如是非离子型或阴离子型对苯二甲酸基聚合物、聚乙烯基己内酰胺和相关共聚物、乙烯基接枝共聚物、聚酯聚酰胺，参见例如粉末洗涤剂，表面活性剂科学系列第71卷第7章，马塞尔·德克尔公司(Marcel Dekker，Inc.)。另一种类型的污垢释放聚合物是包括核心结构和连接至该核心结构的多个烷氧基化基团的两亲性烷氧基化油污清洁聚合物。核心结构可以包括聚烷基亚胺结构或聚烷醇胺结构，如WO2009/087523中详细描述的(将其通过引用而特此结合)。此外，随机接枝共聚物是适合的污垢释放聚合物。适合的接枝共聚物更详细地描述于WO 2007/138054、WO 2006/108856和WO2006/113314中(将其通过引用而特此结合)。其他污垢释放聚合物是取代的多糖结构，尤其是取代的纤维素结构，例如改性纤维素衍生物，例如EP 1867808或WO 2003/040279中描述的那些(将二者都通过引用而特此结合)。适合的纤维素聚合物包括纤维素、纤维素醚、纤维素酯、纤维素酰胺及其混合物。适合的纤维素聚合物包括阴离子改性的纤维素、非离子改性的纤维素、阳离子改性的纤维素、兼性离子改性的纤维素及其混合物。适合的纤维素聚合物包括甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、酯羧甲基纤维素及其混合物。
抗再沉积剂-本发明的洗涤剂组合物还可以包括一种或多种抗再沉积剂，例如羧甲基纤维素(CMC)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚环氧乙烷和/或聚乙二醇(PEG)、丙烯酸的均聚物、丙烯酸与马来酸的共聚物以及乙氧基化聚乙亚胺。以上在污垢释放聚合物下描述的纤维素基聚合物还可以用作抗再沉积剂。
流变改性剂是结构剂或增稠剂，不同于降粘剂。流变改性剂选自下组，该组由以下各项组成：非聚合物结晶、羟基功能材料、聚合物流变改性剂，它们为组合物的水性液相基质赋予剪切稀化特征。可以通过本领域已知的方法修饰和调整洗涤剂的流变学和粘度，例如如在EP 2169040中所示。
其他适合的辅料包括但不限于防缩剂、抗皱剂、杀细菌剂、粘合剂、载体、染料、酶稳定剂、织物柔软剂、填充剂、泡沫调节剂、助水溶剂、香料、色素、抑泡剂、溶剂以及用于液体洗涤剂的结构剂和/或结构弹性剂。
漂白系统
由于这些组分的不相容性，仍然有少数结合漂白剂和酶的液体洗涤剂的实例(例如，US 5,275,753或WO 99/00478)。洗涤剂可以包含0-50％的漂白系统。可以利用本领域中已知的用于在衣物洗涤剂中使用的任何漂白系统。适合的漂白系统组分包括漂白催化剂、光漂白剂、漂白活化剂、过氧化氢源如过碳酸钠和过硼酸钠、预成型过酸及其混合物。适合的预成型过酸包括但不限于：过氧羧酸及盐，过碳酸及盐，过亚氨酸(perimidic acid)及盐，过氧单硫酸及盐(例如过硫酸氢钾(Oxone(R))，及其混合物。漂白系统的非限制性实例包括基于过氧化物的漂白系统，该系统可以包括例如一种与过酸形成漂白活化剂组合的无机盐，包括碱金属盐，例如过硼酸盐(通常是单水合物或四水合物)、过碳酸盐、过硫酸盐、过磷酸盐、过硅酸盐的钠盐。术语漂白活化剂在此意指一种与过氧化物漂白剂(像过氧化氢)反应以形成过酸的化合物。以此方式形成的过酸构成活化的漂白剂。有待在此使用的适合漂白活化剂包括属于酯酰胺、酰亚胺或酸酐类别的那些。适合的实例是四乙酰基乙二胺(TAED)、4-[(3,5,5-三甲基己酰)氧基]苯磺酸钠(ISONOBS)、二过氧月桂酸、4-(十二酰基氧基)苯磺酸盐(LOBS)、4-(癸酰基氧基)苯磺酸盐、4-(癸酰基氧基)苯甲酸盐(DOBS)、4-(壬酰基氧基)-苯磺酸盐(NOBS)和/或披露于WO 98/17767中的那些。感兴趣的漂白活化剂的具体家族披露于EP 624154中并且在那个家族中特别优选的是乙酰柠檬酸三乙酯(ATC)。ATC或短链甘油三酸酯(像三醋汀)具有以下优点，它是环境友好的，因为它最终降解为柠檬酸和醇。此外，乙酰柠檬酸三乙酯和三醋汀在储存时在产品中具有良好的水解稳定性，并且它是一种有效的漂白活化剂。最后，ATC为洗衣添加剂提供一种良好的助洗能力。可替代地，漂白系统可以包括例如酰胺、酰亚胺、或砜型的过氧酸。漂白系统还可以包括过酸，例如6-(邻苯二甲酰亚胺基)过氧己酸(PAP)。该漂白系统还可以包括漂白催化剂。在一些实施例中，漂白组分可以是选自下组的有机催化剂，该组由以下各项组成：具有下式的有机催化剂：
及其混合物；其中每个R1独立地是包含从9至24个碳的支链烷基基团或包含从11至24个碳的直链烷基基团，优选地，每个R1独立地是包含从9至18个碳的支链烷基基团或包含从11至18个碳的直链烷基基团，更优选地，每个R1独立地选自下组，该组由以下各项组成：2-丙基庚基、2-丁基辛基、2-戊基壬基、2-己基癸基、正-十二烷基、正-十四烷基、正-十六烷基、正-十八烷基、异-壬基、异-癸基、异-十三基和异-十五烷基。其他示例性漂白系统描述于例如WO 2007/087258、WO 2007/087244、WO 2007/087259以及WO 2007/087242中。适合的光漂白剂可以例如是磺化的酞菁锌。
洗涤剂产品的配制品
本发明的液体洗涤剂组合物可以是任何方便的形式，例如，具有一个或多个室的袋、凝胶、或规则的、压缩的或浓缩的液体洗涤剂(参见，例如，WO 2009/098660或WO 2010/141301)
袋可以被配置为单个或多个的室。它可以具有适合保存该组合物的任何形式、形状和材料，例如在与水接触之前，不允许该组合物从袋中释放出来。袋由封装内体积的水溶性膜制成。可以将所述内体积分为具有袋的室。优选的膜是形成膜或片的聚合材料，优选是聚合物。优选的聚合物、共聚物或其衍生物选自聚丙烯酸酯、和水溶性丙烯酸酯共聚物、甲基纤维素、羧甲基纤维素、糊精钠、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、麦芽糊精、聚甲基丙烯酸酯，最优选地是聚乙烯醇共聚物以及羟丙基甲基纤维素(HPMC)。优选地，在膜中的聚合物(例如PVA)的水平是至少约60％。优选的平均分子量将典型地是约20,000至约150,000。膜还可以是共混组合物，该共混组合物包括可水解降解并且水可溶的聚合物共混物，例如聚乳酸和聚乙烯醇(已知在贸易参考M8630下，如由美国印第安纳州的MonoSolLLC公司销售)加增塑剂，像甘油、乙二醇、丙二醇、山梨醇及其混合物。这些袋可以包括固体衣物清洁组合物或部分组分和/或液体清洁组合物或由水溶性膜分开的部分组分。用于液体组分的室在构成上可以与包含固体的室不同。
洗涤剂成分可以通过水可溶性袋中的室彼此物理性地分开。因此，可以避免组分间的不良的存储相互作用。在洗涤溶液中，每个室的不同溶解曲线还可以引起选择的组分的延迟溶解。
组合物、方法和用涂
如以上段落所述，本发明提供了用于改进非枯草杆菌蛋白酶类酶在含有枯草杆菌蛋白酶和非枯草杆菌蛋白酶的液体洗涤剂组合物中的储存稳定性的方法，包括制备含有枯草杆菌蛋白酶、非枯草杆菌蛋白酶和超过浓度C的枯草杆菌蛋白酶抑制剂的液体洗涤剂组合物，其中C被确定为抑制剂的浓度，当枯草杆菌蛋白酶抑制剂的浓度从C增加到两倍C时，在洗涤剂M中在40℃下孵育一周之后，枯草杆菌蛋白酶的相对残余活性增加了从没有抑制剂至C的增加量的25％。优选地，非枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性从C至两倍C的改进比枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性改进更高。
在一个实施例中，C是10mg/L，或C对应于抑制剂:枯草杆菌蛋白酶为3:1的化学计量比率。该液体洗涤剂组合物可含有高达100mg/L的枯草杆菌蛋白酶抑制剂。
在一个实施例中，该液体洗涤剂组合物通过将枯草杆菌蛋白酶组合物与非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物结合进行制备，其中该非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物包括部分或全部枯草杆菌蛋白酶抑制剂。优选地，该非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物包括至少50％的枯草杆菌蛋白酶抑制剂。
在一个实施例中，该非枯草杆菌蛋白酶类酶是一种或多种选自下组的酶，该组由以下各项组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶。优选地，该一种或多种非枯草杆菌蛋白酶类酶选自下组，该组由以下各项组成：淀粉酶；脂肪酶/角质酶；纤维素酶；果胶酸裂解酶；甘露聚糖酶；DNA酶；过水解酶；氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶；淀粉酶和纤维素酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和DNA酶；淀粉酶和过水解酶；淀粉酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶；纤维素酶和DNA酶；纤维素酶和过水解酶；纤维素酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；果胶酸裂解酶和DNA酶；果胶酸裂解酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶；甘露聚糖酶和过水解酶；甘露聚糖酶和氧化还原酶；DNA酶和过水解酶；DNA酶和氧化还原酶；过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；纤维素酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和脂肪酶/角质酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；淀粉酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶；以及淀粉酶和脂肪酶/角质酶和纤维素酶和果胶酸裂解酶和甘露聚糖酶和DNA酶和过水解酶和氧化还原酶。
在一个实施例中，该液体洗涤剂组合物进一步包含表面活性剂和/或洗涤剂助洗剂。
在一个实施例中，该枯草杆菌蛋白酶抑制剂是一种肽醛或其亚硫酸氢盐加合物，或苯基硼酸或其衍生物。优选地，该枯草杆菌蛋白酶抑制剂是一种具有式P-(A)y-L-(B)x-B0-R*的醛或酮或这种醛的亚硫酸氢盐加合物，其中：
a)R*是H(氢)、CH3、CX3、CHX2或CH2X；
b)X是卤素原子；
c)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
d)x是1、2或3；
e)Bx独立地是各自经由其C端连接到下一个B或B0上的单一氨基酸残基；
f)L不存在或独立地是具有式-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-的连接基团；
g)A不存在(如果L不存在)或独立地是经由氨基酸的N端连接到L上的单一氨基酸残基；
h)P选自下组，该组由以下各项组成：氢或(如果L不存在)一种N端保护基团；
i)y是0、1或2，
j)R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R'取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
k)R’独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；并且
l)R”是C1-6烷基。
m)x可以是1、2或3。
优选地，该抑制剂是一种具有式P-B2-B1-B0-H的醛或一种具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
d)R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R’取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R”是一个C1-6烷基；并且
g)P是一个N端保护基团。
在一个实施例中，R是这样的，使得B0＝-NH-CH(R)-C(＝O)-是Phe、Tyr或Leu。
在一个实施例中，B1是Ala、Gly或Val。
在一个实施例中，B2是Arg、Phe、Tyr或Trp。
在一个实施例中，x＝2，L不存在，A不存在，并且P是对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)。
在一个实施例中，该组合物的抑制剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H、或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。优选地，该抑制剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。最优选地，该抑制剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基。
在另一方面，本发明提供了可通过本发明的方法获得的液体洗涤剂组合物。
本发明还提供了上述组合物和方法用于改进非枯草杆菌蛋白酶类酶的储存稳定性的用途。
该液体洗涤剂组合物的pH可以在6.0-11的范围内；尤其是在6.0-10的范围内；尤其是在6.5-9.5之间；或在7-9之间。pH可以在该组合物中或在水中的5％溶液中测量。
实例
用作缓冲液和底物的化学品是至少试剂级的商业产品。
实例1
不同的肽醛由定制肽合成公司产生，均具有大于80％的纯度。在使用之前，将这些肽醛溶解于DMSO中至10mg/mL的浓度。
制备了标准液体洗涤剂(洗涤剂M)用于测定蛋白酶抑制剂，如表1和表2中所示。
表1.洗涤剂基底。
表2.洗涤剂M
组分 ％w/w
洗涤剂基底 99.0
蛋白酶(特定一种如下所列) 0.5
脂肪酶(Lipex 100L，诺维信) 0.5
进一步制备了如下具有蛋白酶抑制剂的洗涤剂。将这些洗涤剂在40℃的密闭玻璃容器中放置。一周后使用标准酶分析方法测量蛋白酶的残余活性(通过与储存在-18℃下的参照比较)(通过在40℃，pH＝8.3下N,N-二甲基酪蛋白的水解测量蛋白酶)。受测试的抑制剂水平相对于蛋白酶是在0.5-500摩尔比范围内(抑制剂:蛋白酶)。将数据点相连并且通过内插确定抑制剂的剂量1和剂量2，因此((剂量2下的残余蛋白酶活性)-(剂量1下的残余蛋白酶活性))/((剂量1下的残余蛋白酶活性)-(无抑制剂下的残余蛋白酶活性))＝0.25；并且剂量2＝2x剂量1。
表3。
实例2
制备了添加了酶的商业洗涤剂(无硼酸，EU中档洗涤剂)，如表4所示。
表4.洗涤剂B。
组分 ％w/w
洗涤剂基底 97.8
蛋白酶(Savinase 16L) 0.8
脂肪酶(Lipex 100L) 0.2
淀粉酶(Termamyl 300L) 0.6
纤维素酶(诺维信342) 0.6
进一步制备了如下具有蛋白酶抑制剂的洗涤剂。将这些洗涤剂在30℃的密闭玻璃容器中放置。脂肪酶和蛋白酶的残余活性在4周后测量(通过与在-18℃下储藏的对照相比较)，使用标准酶分析方法(蛋白酶通过在40℃，pH 8.3下水解N,N-二甲基酪蛋白测量，而脂肪酶通过在40℃，pH 7.7下水解戊酸对硝基苯酯来测量)进行。
将浓度12.9mg/L(剂量1)和26.0mg/L(剂量2)的Z-GA-NHCH(CH2C6H4OH)CH(OH)SO3Na添加至其中。
表5。
实例3
制备了添加了酶的商业洗涤剂(无硼酸，EU中档洗涤剂)，如表6所示。
表6.洗涤剂C。
组分 ％w/w
洗涤剂基底 99.0
蛋白酶(Liquanase或Savinase) 0.5
脂肪酶(Lipex 100L) 0.5
进一步制备了如下具有蛋白酶抑制剂的洗涤剂。将这些洗涤剂在30℃的密闭玻璃容器中放置。脂肪酶和蛋白酶的残余活性在4周后测量(通过与在-18℃下储藏的对照相比较)，使用标准酶分析方法(蛋白酶通过在40℃，pH 8.3下水解N,N-二甲基酪蛋白测量，而脂肪酶通过在40℃，pH 7.7下水解戊酸对硝基苯酯来测量)进行。
将浓度8.1mg/L(剂量1)和16.1mg/L(剂量2)的Z-GA-NHCH(CH2C6H4OH)CH(OH)SO3Na添加至其中。将浓度80mg/L(剂量1)和160mg/L(剂量2)的4-FPBA添加至其中。
表7。
序列表
<110> 诺维信公司（Novozymes A/S）
<120> 改进的非蛋白酶类酶稳定化
<130> 12982-WO-PCT
<160> 11
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 269
<212> PRT
<213> 迟缓芽孢杆菌
<400> 1
Ala Gln Ser Val Pro Trp Gly Ile Ser Arg Val Gln Ala Pro Ala Ala
1 5 10 15
His Asn Arg Gly Leu Thr Gly Ser Gly Val Lys Val Ala Val Leu Asp
20 25 30
Thr Gly Ile Ser Thr His Pro Asp Leu Asn Ile Arg Gly Gly Ala Ser
35 40 45
Phe Val Pro Gly Glu Pro Ser Thr Gln Asp Gly Asn Gly His Gly Thr
50 55 60
His Val Ala Gly Thr Ile Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly Val Leu
65 70 75 80
Gly Val Ala Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu Gly Ala
85 90 95
Ser Gly Ser Gly Ser Val Ser Ser Ile Ala Gln Gly Leu Glu Trp Ala
100 105 110
Gly Asn Asn Gly Met His Val Ala Asn Leu Ser Leu Gly Ser Pro Ser
115 120 125
Pro Ser Ala Thr Leu Glu Gln Ala Val Asn Ser Ala Thr Ser Arg Gly
130 135 140
Val Leu Val Val Ala Ala Ser Gly Asn Ser Gly Ala Gly Ser Ile Ser
145 150 155 160
Tyr Pro Ala Arg Tyr Ala Asn Ala Met Ala Val Gly Ala Thr Asp Gln
165 170 175
Asn Asn Asn Arg Ala Ser Phe Ser Gln Tyr Gly Ala Gly Leu Asp Ile
180 185 190
Val Ala Pro Gly Val Asn Val Gln Ser Thr Tyr Pro Gly Ser Thr Tyr
195 200 205
Ala Ser Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Thr Pro His Val Ala Gly Ala
210 215 220
Ala Ala Leu Val Lys Gln Lys Asn Pro Ser Trp Ser Asn Val Gln Ile
225 230 235 240
Arg Asn His Leu Lys Asn Thr Ala Thr Ser Leu Gly Ser Thr Asn Leu
245 250 255
Tyr Gly Ser Gly Leu Val Asn Ala Glu Ala Ala Thr Arg
260 265
<210> 2
<211> 275
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> BPN’变体
<400> 2
Ala Gln Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gln Ile Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
His Ser Gln Gly Tyr Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Ile Asp
20 25 30
Ser Gly Ile Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Ser Met Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gln Asp Asn Asn Ser His
50 55 60
Gly Thr His Val Ala Gly Thr Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Ile Gly
65 70 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu
85 90 95
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gln Tyr Ser Trp Ile Ile Asn Gly Ile Glu
100 105 110
Trp Ala Ile Ala Asn Asn Met Asp Val Ile Asn Met Ser Leu Gly Gly
115 120 125
Pro Ser Gly Ser Ala Ala Leu Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala
130 135 140
Ser Gly Val Val Val Val Ala Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly
145 150 155 160
Ser Ser Ser Thr Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Pro Ser Val Ile Ala
165 170 175
Val Gly Ala Val Asp Ser Ser Asn Gln Arg Ala Ser Phe Ser Ser Val
180 185 190
Gly Pro Glu Leu Asp Val Met Ala Pro Gly Val Ser Ile Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Pro Gly Asn Lys Tyr Gly Ala Leu Asn Gly Thr Ser Met Ala Ser
210 215 220
Pro His Val Ala Gly Ala Ala Ala Leu Ile Leu Ser Lys His Pro Asn
225 230 235 240
Trp Thr Asn Thr Gln Val Arg Ser Ser Leu Glu Asn Thr Thr Thr Lys
245 250 255
Leu Gly Asp Ser Phe Tyr Tyr Gly Lys Gly Leu Ile Asn Val Gln Ala
260 265 270
Ala Ala Gln
275
<210> 3
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 3
Leu Gly Ala Tyr
1
<210> 4
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 4
Phe Gly Ala Tyr
1
<210> 5
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Tyr
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 5
Tyr Gly Ala Tyr
1
<210> 6
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Phe；MeO-CO-Phe；MeSO2-Phe；或EtSO2-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 6
Phe Gly Ala Leu
1
<210> 7
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Phe或MeO-CO-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 7
Phe Gly Ala Phe
1
<210> 8
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 8
Phe Gly Val Tyr
1
<210> 9
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Phe
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Met-H
<400> 9
Phe Gly Ala Met
1
<210> 10
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> Acetyl-Trp
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Tyr-H
<400> 10
Trp Leu Val Tyr
1
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 枯草杆菌蛋白酶抑制剂
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> MeO-P(OH)(O)-Leu
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> Leu-H
<400> 11
Leu Gly Ala Leu
1

Claims (15)

1.一种用于改进非枯草杆菌蛋白酶类酶在含有枯草杆菌蛋白酶和非枯草杆菌蛋白酶的液体洗涤剂组合物中的储存稳定性的方法，包括制备含有枯草杆菌蛋白酶、非枯草杆菌蛋白酶和超过浓度C的枯草杆菌蛋白酶抑制剂的液体洗涤剂组合物；其中C被确定为抑制剂的浓度，当该枯草杆菌蛋白酶抑制剂的浓度从C增加到两倍C时，在洗涤剂M中在40℃下孵育一周之后，该枯草杆菌蛋白酶的相对残余活性增加了从没有抑制剂至C的增加量的25％。
2.如权利要求1所述的方法，其中该非枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性改进比该枯草杆菌蛋白酶的相对储存稳定性改进更高。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该液体洗涤剂组合物是通过将枯草杆菌蛋白酶组合物与非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物结合而制备的，其中该非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物包括部分或全部枯草杆菌蛋白酶抑制剂。
4.如权利要求3所述的方法，其中该非枯草杆菌蛋白酶类酶组合物包括至少50％的该枯草杆菌蛋白酶抑制剂。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中该非枯草杆菌蛋白酶类酶是一种或多种选自下组的酶，该组由以下各项组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶。
6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中该液体组合物进一步含有表面活性剂和/或洗涤剂助洗剂。
7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中该枯草杆菌蛋白酶抑制剂是肽醛或其亚硫酸氢盐加合物；或苯基硼酸或其衍生物。
8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中该抑制剂是具有式P-(A)y-L-(B)x-B0-R*的肽醛或酮或这种醛的亚硫酸氢盐加合物，其中：
a)R*是H(氢)、CH3、CX3、CHX2或CH2X；
b)X是卤素原子；
c)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
d)x是1、2或3；
e)Bx独立地是各自经由其C端连接到下一个B或B0上的单一氨基酸残基；
f)L不存在或独立地是具有式-C(＝O)-、-C(＝O)-C(＝O)-、-C(＝S)-、-C(＝S)-C(＝S)-或-C(＝S)-C(＝O)-的连接基团；
g)如果L不存在，A不存在或者A独立地是经由氨基酸的N端连接到L上的单一氨基酸残基；
h)P选自下组，该组由以下各项组成：氢或者如果L不存在，N端保护基团；
i)y是0、1或2，
j)R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R’取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
k)R’独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；并且
l)R”是C1-6烷基；
m)x可以是1、2或3。
9.如权利要求8所述的方法，其中该抑制剂是具有式P-B2-B1-B0-H的醛或具有式P-B2-B1-N(H)-CHR-CHOH-SO3M的加合物，其中
a)H是氢；
b)B0是具有式-NH-CH(R)-C(＝O)-的L-或D-构型的单一氨基酸残基；
c)B1和B2独立地是单一氨基酸残基；
d)R独立地选自下组，该组由以下各项组成：任选地被一个或多个相同或不同的取代基R’取代的C1-6烷基、C6-10芳基或C7-10芳烷基；
e)R’独立地选自下组，该组由以下各项组成：卤素、-OH、-OR”、-SH、-SR”、-NH2、-NHR”、-NR”2、-CO2H、-CONH2、-CONHR”、-CONR”2、-NHC(＝N)NH2；
f)R”是C1-6烷基；并且
g)P是N端保护基团。
10.如权利要求8或9所述的方法，其中R是这样的，使得B0＝-NH-CH(R)-C(＝O)-是Phe、Tyr或Leu；并且B1是Ala、Gly或Val；并且B2是Arg、Phe、Tyr或Trp。
11.如权利要求8-10中任一项所述的方法，其中x＝2，L不存在，A不存在，并且P是对甲氧羰基(Moc)或苄氧羰基(Cbz)。
12.如权利要求8-11中任一项所述的方法，其中该抑制剂是Cbz-Arg-Ala-Tyr-H、Ac-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-H、Cbz-Gly-Ala-Tyr-CF3、Cbz-Gly-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-H、Cbz-Val-Ala-Leu-CF3、Moc-Val-Ala-Leu-CF3、Cbz-Gly-Ala-Phe-H、Cbz-Gly-Ala-Phe-CF3、Cbz-Gly-Ala-Val-H、Cbz-Gly-Gly-Tyr-H、Cbz-Gly-Gly-Phe-H、Cbz-Arg-Val-Tyr-H、Cbz-Leu-Val-Tyr-H、Ac-Leu-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Tyr-Gly-Ala-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Leu-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Phe-H、Ac-Phe-Gly-Val-Tyr-H、Ac-Phe-Gly-Ala-Met-H、Ac-Trp-Leu-Val-Tyr-H、MeO-CO-Val-Ala-Leu-H、MeNCO-Val-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeO-CO-Phe-Gly-Ala-Phe-H、MeSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、MeSO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Val-Ala-Leu-H、EtSO2-Phe-Gly-Ala-Leu-H、PhCH2SO2-Val-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Leu-Ala-Leu-H、PhCH2O-P(OH)(O)-Phe-Ala-Leu-H、或MeO-P(OH)(O)-Leu-Gly-Ala-Leu-H或任何这些的亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
13.如权利要求8-12中任一项所述的方法，其中该抑制剂是Cbz-Gly-Ala-Tyr-H或Moc-Val-Ala-Leu-H、或其亚硫酸氢盐加合物，其中Cbz是苄氧羰基并且Moc是甲氧羰基。
14.一种液体洗涤剂组合物，可通过如权利要求1-13中任一项所述的方法获得。
15.一种在如权利要求3或4所述的方法中使用的液体组合物，包括一种或多种选自下组的非枯草杆菌蛋白酶类酶，该组由以下各项组成：淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、果胶酶、甘露聚糖酶、DNA酶、过水解酶、和氧化还原酶；以及是肽醛或其亚硫酸氢盐加合物的枯草杆菌蛋白酶抑制剂。
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