CN106153809A - 康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，是以杠板归对照药材和咖啡酸对照品为对照，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂的薄层色谱法。本发明提供的康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，采用杠板归对照药材和咖啡酸对照品作为双对照，可控性更高，操作简单、分离度高、重现性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家层析板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对康妇灵胶囊中杠板归成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了康妇灵胶囊的质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。
Description
技术领域
本发明涉及康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，属于中药检测技术领域。
背景技术
康妇灵胶囊是由杠板归、苦参、黄柏、鸡血藤、益母草、红花龙胆、土茯苓和当归八味制成的，其功能主治为：苗医：蒙凯，布发讲港，嘎几昂代。嘎溜纳洛，巢窝蒙秋，巢窝即得。中医：清热燥湿，活血化瘀，调经止带。用于宫颈炎、阴道炎，月经不调，赤白带下，痛经，附件炎等。
康妇灵胶囊是贵州百灵企业集团和仁堂药业有限公司的独家品种，批准文号为：国药准字Z20025767。目前该药的执行标准编号为(WS-10558(ZD-0558)-2002-2012Z)，在原标准中，该药的鉴别仅有当归、黄柏和苦参三项薄层鉴别。康妇灵胶囊在市场上有较高的占有率，为了保证该药的质量和疗效，就该药品目前的执行标准来看，并未对主药杠板归药材进行质量检测。
杠板归为蓼科植物杠板归Polygonum perfoliatum L.的干燥地上部分。性微寒，味酸。功能主治利水消肿，清热解毒，止咳。用于肾炎水肿，百日咳，泻痢，湿疹，疔肿，毒蛇咬伤。但现有技术中，关于康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，尚未见到相关文献报道。因此，为进一步完善康妇灵胶囊的质量检测标准，保证药品质量的可控性以及用药的安全性，有必要建立康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，以对康妇灵胶囊产品的质量进行有效控制。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，操作简单，分离度高，重现性好。
本发明的康妇灵胶囊，按照重量份数计，是由杠板归600份、苦参300份、黄柏150份、鸡血藤300份、益母草300份、红花龙胆200份、土茯苓150份和当归180份制得。前述八味，当归粉碎成细粉，备用；其余杠板归等七味加水浸泡30分钟后，煎煮二次，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.25～1.30(40℃)的清膏，加入上述当归细粉，混匀，80℃以下干燥，粉碎，制成颗粒，干燥，装入胶囊，即得。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法是以杠板归对照药材和咖啡酸对照品为对照，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂的薄层色谱法。
进一步地，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物3～5g，加沸程为60～90℃的石油醚30～50mL，超声30～80分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水20～25mL，置80℃水浴上边振摇边热浸30～50分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1～3滴，用乙酸乙酯振摇提取2～4次，每次用乙酸乙酯30～50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各1～3μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
更进一步地，具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物5g，加沸程为60～90℃的石油醚50mL，超声30分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水25mL，置80℃水浴上边振摇边热浸30分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1滴，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次用乙酸乙酯30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
为了确保本发明鉴别方法科学、合理、可行，对本发明的鉴别方法进行了研究和考察。
杠板归为蓼科植物杠板归Polygonum perfoliatum L.的干燥地上部分，收载于2010年版《中国药典》一部。杠板归作为康妇灵胶囊处方的君药，咖啡酸是其在方中的专属性成分，因此，本实验将选取咖啡酸对照品和杠板归对照药材作为双对照，先采用石油醚脱脂除杂，后用双相酸水解的方法提取康妇灵胶囊中杠板归的咖啡酸成分，对杠板归药材进行薄层鉴别，并考察不同展开介质、不同点样量、不同厂家薄层板、不同温度、不同湿度对该制剂中杠板归药材薄层色谱的影响。试验结果表明：以杠板归对照药材和咖啡酸对照品为对照，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂，对杠板归药材进行薄层色谱鉴别特征明显，专属性强，可作为康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法。
1、仪器与试药
康妇灵胶囊(20130811、20130905、20131001)贵州百灵企业集团和仁堂药业有限公司提供；杠板归对照药材(1109105-2001004)、咖啡酸对照品(110805-200102)由中国药品生物制品检定所提供；聚酰胺薄膜(上海鑫楚实业有限公司及浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)；KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，DGG-9246A电热恒温鼓风干燥箱(上海齐欣科学仪器有限公司)，十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)，甲醇(分析纯20130811，上海申博化工有限公司)。甲酸(分析纯20140518，上海申博化工有限公司)。
2薄层色谱条件的考察
2.1薄层板的选择
分别吸取杠板归鉴别项下的步骤(1)和步骤(3)中供试品溶液2μL和对照品溶液2μL，以薄层硅胶G板和聚酰胺薄膜2种不同类型材料薄层板，进行展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图1和图2。
由图1和图2可知，薄层硅胶G板并未将供试品分离；聚酰胺薄膜层析板分离效果良好，斑点圆整，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色斑点。故选取聚酰胺薄膜层析板展开。
2.2最佳点样量考察
分别吸取杠板归鉴别项下的步骤(1)和步骤(3)中供试品溶液和对照品溶液1、2、3、4、5、6μL，分别点于不同聚酰胺薄膜层析板上，进行考察，展开，取出，晾干，喷以显色剂，105℃加热5min，于365nm紫外灯下检视。见图3和图4。
由图3和图4可知，供试品2μL点样量效果最佳，当点样量大于3μL时，供试品溶液位置斑点出现拖尾现象；对照品溶液点样量1～6μL皆可，故选择点样量为1～3μL，最佳点样量2μL。
结合上述2种因素考察实验结果，可确定选用聚酰胺薄膜层析板，供试品溶液和对照品溶液最佳点样量皆为2μL。经预实验验证，确定杠板归的薄层鉴别方法，并按照《中国药典》2010版一部附录ⅩⅧA中药质量标准分析方法验证指导原则进行方法学验证。
3、专属性试验
取康妇灵胶囊样品按照本发明所述方法制备供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液；取缺杠板归的阴性样品，按照步骤(1)供试品溶液的制备方法制得阴性供试品溶液；分别取供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液和对照药材溶液按照步骤(4)鉴别进行点样、展开，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。在供试品色谱中，与对照药材及对照品色谱相应的位置上显相同的斑点。在阴性样品色谱中，与对照药材及对照品色谱相应的位置上未显斑点，且斑点分离较好，无干扰，如图5所示。
4、耐用性试验
4.1聚酰胺薄膜层析板：按步骤(4)鉴别所述色谱条件，取康妇灵胶囊供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液分别点于两个不同厂家(上海鑫楚实业有限公司和浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂)生产的聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，结果斑点分离好，无干扰，如图6和图7所示。表明本发明的鉴别方法适用于不同厂家生产的聚酰胺薄膜层析板。
4.2温度：按步骤(4)鉴别所述色谱条件，取康妇灵胶囊供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液分别点于聚酰胺薄膜板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，在低温6℃和室温25℃下展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，结果斑点分离好，无干扰，如图8和图9所示。表明温度对本发明的鉴别方法不产生影响。
4.3湿度：按步骤(4)鉴别所述色谱条件，取康妇灵胶囊供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液分别点于聚酰胺薄膜板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，分别于高湿度65％和低湿度32％条件下展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，结果斑点分离好，无干扰，如图10和图11所示。表明湿度对本发明杠板归的鉴别方法不产生影响。
上述试验结果表明：本发明所选用的薄层鉴别方法效果好，可作为康妇灵胶囊中杠板归药材的鉴别方法。
本发明的有益之处在于：本发明提供的康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，采用杠板归对照药材和咖啡酸对照品作为双对照，可控性更高，操作简单、分离度高、重现性好，并且阴性对照无干扰，不同厂家层析板和温度、湿度条件均不影响。本发明鉴别方法能够对康妇灵胶囊中杠板归成分进行准确、全面、科学有效的鉴别，提升了康妇灵胶囊的质量检测标准，进一步确保了产品质量的稳定以及临床用药的安全、有效。
附图说明
图1是用薄层硅胶G板的杠板归薄层色谱图；
图2是用聚酰胺薄膜层析板的杠板归薄层色谱图；
图3是供试品溶液点样量分别为1、2、3、4、5、6μL的薄层色谱图；
图4是对照品溶液点样量分别为1、2、3、4、5、6μL的薄层色谱图；
图5是本发明的供试品溶液、阴性供试品溶液、对照品溶液和对照药材溶液的薄层色谱图；
图6是采用上海鑫楚实业的聚酰胺薄膜层析板的薄层色谱图；
图7是采用浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂的聚酰胺薄膜层析板的薄层色谱图；
图8是在低温6℃下的薄层色谱图；
图9是在室温下的薄层色谱图；
图10是在32％湿度下的薄层色谱图；
图11是在65％湿度下的薄层色谱图；
图中附图标记的含义：图1中：1胶囊样品20140301,2胶囊样品20140302，3胶囊样品20140303,4～5咖啡酸对照品；图2中：1胶囊样品20140301,2胶囊样品20140302，3胶囊样品20140303,4咖啡酸对照品；图5～图11中:1胶囊样品20140301,2胶囊样品20140302，3胶囊样品20140303,4杠板归对照药材，5咖啡酸对照品，6缺杠板归的阴性样品。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步的介绍。
实施例1康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，具体包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物5g，加沸程为60～90℃的石油醚50mL，超声30分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水25mL，置80℃水浴上边振摇边热浸30分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1滴，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次用乙酸乙酯30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例2康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，具体包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物3g，加沸程为60～90℃的石油醚30mL，超声80分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水20mL，置80℃水浴上边振摇边热浸50分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸3滴，用乙酸乙酯振摇提取4次，每次用乙酸乙酯50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各3μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝150∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例3康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，具体包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物4g，加沸程为60～90℃的石油醚40mL，超声55分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水23mL，置80℃水浴上边振摇边热浸40分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸2滴，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次用乙酸乙酯40mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝180∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例4康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，具体包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物3.5g，加沸程为60～90℃的石油醚45mL，超声60分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水22mL，置80℃水浴上边振摇边热浸35分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸3滴，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次用乙酸乙酯45mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝160∶1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例5康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，具体包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物4.5g，加沸程为60～90℃的石油醚35mL，超声40分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水24mL，置80℃水浴上边振摇边热浸45分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸2滴，用乙酸乙酯振摇提取4次，每次用乙酸乙酯35mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各1μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝170∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
Claims (3)
1.康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，其特征在于：所述鉴别方法是以杠板归对照药材和咖啡酸对照品为对照，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂的薄层色谱法。
2.根据权利要求1所述的康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物3～5g，加沸程为60～90℃的石油醚30～50mL，超声30～80分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水20～25mL，置80℃水浴上边振摇边热浸30～50分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1～3滴，用乙酸乙酯振摇提取2～4次，每次用乙酸乙酯30～50mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各1～3μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200～150∶1～2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
3.根据权利要求2所述的康妇灵胶囊中杠板归的鉴别方法，其特征在于：具体的鉴别方法包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：取本制剂内容物5g，加沸程为60～90℃的石油醚50mL，超声30分钟，滤过，除去石油醚液，药渣挥干溶剂，加水25mL，置80℃水浴上边振摇边热浸30分钟，取出，趁热滤过，滤液加稀盐酸1滴，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次用乙酸乙酯30mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1mL使其溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取杠板归对照药材2g按步骤(1)中方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：取咖啡酸对照品加甲醇制成每1mL含0.5mg咖啡酸对照品的溶液作为对照品溶液；
(4)鉴别：照《中国药典》2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各2μL，分别点于同一聚酰胺薄膜层析板上，以甲醇-甲酸＝200∶2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧
光主斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
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| CN101549021A (zh) * | 2009-06-03 | 2009-10-07 | 贵州师范大学 | 杠板归药材的质量检测方法 |
| CN101716260A (zh) * | 2009-12-04 | 2010-06-02 | 贵阳春科药业技术研发有限公司 | 治疗皮肤病的胶囊制剂的质量控制方法 |
| CN102028760A (zh) * | 2010-11-30 | 2011-04-27 | 贵州远程制药有限责任公司 | 一种杠板归药材的质量检测方法 |
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2015
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Patent Citations (3)
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|---|---|---|---|---|
| CN101549021A (zh) * | 2009-06-03 | 2009-10-07 | 贵州师范大学 | 杠板归药材的质量检测方法 |
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|---|
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106153809B (zh) | 2017-08-01 |
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