CN106092860A - 一种血小板活化率的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血小板活化率的检测方法，包括以下步骤：取定量的血液，测定血液中血小板的初始数值；加入诱聚剂反应后，测定血液中血小板的数量，则活化前测定的血小板数量和活化后测定的血小板数量差值与活化前血小板数量的比值即为血小板活化率，所述诱聚剂含有包被纤维蛋白原的乳胶微球。本发明不需要改动现有仪器结构，只需要在诱聚剂里面加入纤维蛋白原包被的微球即可，操作简便，测量结果准确性高。
Description
技术领域
本发明属于医学检验检测技术领域，特别是一种血小板活化率的检测方法。
背景技术
血小板活化与多种血栓性疾病有关。血液中活化血小板增高可作为动脉血管病局部血栓形成的标志物，活化血小板的测定，对于血栓形成的预防、诊断及治疗有着重要的意义，血小板的活化是通过对血小板功能的检测来体现的。
血小板功能检测的方法有多种，依据所检测的血小板功能的方法可以概括为四大类检测方法：血小板粘附功能检测方法、血小板聚集功能检测方法、血小板释放功能检测方法以及其它检测方法。其中，以上世纪50年代Bron氏发明的以光学比浊法为基本原理检测血小板聚集功能的方法应用最为普遍，该方法沿用至今一直作为血小板功能检测的经典方法用于相关科研。但是由于该方法操作十分繁琐、检测结果稳定性差，在临床实际工作中无法普及开展。除此之外其它的血小板功能检测的方法如血小板粘附功能检测，血小板释放功能检测等方法也因为检测操作方便程度、设备成本、检测结果质量等原因也没有得到普及应用。
近年来国内外对血小板聚集功能方法研究开发比较活跃，先后有美国的verifynow、Plateletworks和中国的PL-11血小板仪等新方法、新产品通过注册进入临床。现有的血小板聚集功能检测是在体外模拟体内状况，在全血或富含血小板血浆中加入诱聚剂(ADP、花生四希酸、胶原等)刺激血小板上相应的受体，诱导血小板聚集，并对其聚集功能水平进行评价的方法，存在标本分离、制备、诱导剂种类与浓度选择、正常值设定等影响因素，缺乏各实验室之间的可比性。
发明内容
发明的目的在于提供一种血小板活化率的检测方法。
实现本发明目的的技术方案为：一种血小板活化率的检测方法，包括以下步骤：
取定量的血液，测定血液中血小板的初始数值M1；
加入诱聚剂反应后，测定血液中血小板的数量M2，计算血小板活化率：
(M1-M2)/M1×100％
所述诱聚剂含有包被纤维蛋白原的乳胶微球。
与现有技术相比，本发明的显著效果为：
(1)本发明的微球体积与血小板体积差异大，粘附到微球上的血小板不存在误判，结果重复性更好；
(2)本发明通过比较前后两次测量的血小板数值即可，不需要连续计数；
(3)本发明不需要改动现有仪器结构，只需要在诱聚剂里面加入纤维蛋白原包被的微球，操作简便。
附图说明
图1为实施例1中本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率所得结果的相关性分析图。
图2为实施例2中本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率所得结果的相关性分析图。
图3为实施例3中本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率所得结果的相关性分析图。
图4为实施例4中本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率所得结果的相关性分析图。
具体实施方式
本发明的一种血小板活化率的检测方法，包括以下步骤：
取定量的血液，测定血液中血小板的初始数值M1；
加入诱聚剂反应后，测定血液中血小板的数量M2，计算血小板活化率：
(M1-M2)/M1×100％
所述诱聚剂含有包被纤维蛋白原的乳胶微球。
进一步的，所述乳胶微球的体积为30-100fl。
进一步的，所述诱聚剂中乳胶微球的含量为0.05％-10％(V/V)。
进一步的，所述诱聚剂中包被纤维蛋白原的含量2-200mg/L。
进一步的，加入诱聚剂后反应时间为5-15min。
进一步的，加入诱聚剂反应过程中保持恒温，温度在15-40℃。
进一步的，所述诱聚剂与血液的体积比小于1：10。
测定血小板数量的方法有手工计数法，全自动血细胞分析仪计数法和血细胞聚集仪等。
血小板受到血小板诱导剂的作用而活化聚集。血小板活化后，其表面将形成糖蛋白IIb/IIIa受体，又称纤维蛋白原受体，该受体与血液中含有的纤维蛋白原结合，使多个血小板连接在一起，形成多个血小板复合物，称之为血小板血栓。
传统的电阻抗法、光散射法均利用血液中各细胞的体积大小区分血小板和其他细胞。通常单个血小板的体积在2-30fl之间，而红细胞和白细胞体积在30fl以上。本发明将纤维蛋白原交联在大小为30-100fl的乳胶微球表面，形成纤维蛋白原包被微球。将该微球与活化的血小板混合，包被在微球表面的纤维蛋白原与血小板表面的纤维蛋白原受体结合，形成“血小板—纤维蛋白原—乳胶微球”复合物。由于微球的大小在30-100fl之间，复合物的体积将远远大于25fl。再次测定血小板数量时，这些活化并粘附在微球表面的血小板由于体积变大，将不会被记录为血小板，而未活化的血小板由于体积不变，仍然被记录为血小板。通过比对前后血小板的数量变化，即可计算出血小板的活化率。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
本实施例中采用型号为PL-12的多参数血小板功能分析仪及本发明的活化率检测方法为一个检测系统，该系统是全自动化检测。向400ul全血中加入诱聚剂20ul，诱聚剂中含有包被纤维蛋白原的乳胶微球，诱聚剂中包被纤维蛋白原的含量为54mg/L，诱聚剂中乳胶微球的含量为1％(V/V)，微球大小50fl，反应温度37℃，反应时间10min。
血小板活化率＝(活化前测定的血小板数量-活化后测定的血小板数量)/活化前血小板数量×100％
测定的结果与光学比浊法检测血小板活化率的结果做相关性比较，该比浊法参见：Born GVR.Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and itsreversal.Nature(Lond.).1962；194:927。
以10份枸橼酸钠抗凝全血为标本，分别用本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率。即二种方法分别同时对相同样本检测血小板活化率，结果见下表1。
表1
以本检测系统测定结果为x轴，比浊法聚集仪测定结果为y轴，绘制散点图。同时进行线性回归分析，可得图1和表2。由图1结果可知，本发明检测方法与比浊法仪器测定结果的相关系数R2＝0.7880，R＝0.8876。
表2
表2表明，斜率的P＝0.001，按α＝0.05水平，P＜0.05。可认为两产品测定结果之间存在直线关系，相关性良好。
实施例2
本实施例中采用型号为PL-12的多参数血小板功能分析仪及本发明的活化率检测方法为一个检测系统，该系统是全自动化检测。向500ul全血中加入诱聚剂40ul，诱聚剂中含有包被纤维蛋白原的乳胶微球，诱聚剂中包被纤维蛋白原的含量为43mg/L，诱聚剂中乳胶微球的含量为0.8％(V/V)，微球大小30fl，反应温度35℃，反应时间11min。
血小板活化率＝(活化前测定的血小板数量-活化后测定的血小板数量)/活化前血小板数量×100％
测定的结果与光学比浊法检测血小板活化率的结果做相关性比较，该比浊法参见：Born GVR.Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and itsreversal.Nature(Lond.).1962；194:927。
以10份枸橼酸钠抗凝全血为标本，分别用本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率。即二种方法分别同时对相同样本检测血小板活化率，结果见下表3。
表3
| 样本 | 本检测方法检测活化率％ | 某比浊法聚集仪检测活化率％ |
| 1 | 63 | 53 |
| 2 | 78 | 63 |
| 3 | 45 | 40 |
| 4 | 79 | 73 |
| 5 | 78 | 63 |
| 6 | 65 | 68 |
| 7 | 53 | 41 |
| 8 | 49 | 34 |
| 9 | 62 | 43 |
| 10 | 53 | 44 |
以本检测系统测定结果为x轴，比浊法聚集仪测定结果为y轴，绘制散点图。同时进行线性回归分析，可得图2和表4。由图2结果可知，本发明检测方法与比浊法仪器测定结果的相关系数R2＝0.7805，R＝0.8835。
表4
表4表明，斜率的P＝0.001，按α＝0.05水平，P＜0.05。可认为两产品测定结果之间存在直线关系，相关性良好。
实施例3
本实施例中采用型号为PL-12多参数血小板功能分析仪及本发明的活化率检测方法为一个检测系统，该系统是全自动化检测。向400ul全血中加入诱聚剂30ul，诱聚剂中含有包被纤维蛋白原的乳胶微球，诱聚剂中包被纤维蛋白原的含量为74mg/L，诱聚剂中乳胶微球的含量为1.5％(V/V)，微球大小100fl，反应温度37℃，反应时间13min。
血小板活化率＝(活化前测定的血小板数量-活化后测定的血小板数量)/活化前血小板数量×100％
测定的结果与光学比浊法检测血小板活化率的结果做相关性比较，该比浊法参见：Born GVR.Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and itsreversal.Nature(Lond.).1962；194:927。
以10份枸橼酸钠抗凝全血为标本，分别用本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率。即二种方法分别同时对相同样本检测血小板活化率，结果见下表5。
表5
| 样本 | 本检测方法检测活化率％ | 某比浊法聚集仪检测活化率％ |
| 1 | 61 | 53 |
| 2 | 71 | 63 |
| 3 | 48 | 40 |
| 4 | 79 | 73 |
| 5 | 78 | 63 |
| 6 | 65 | 41 |
| 7 | 51 | 41 |
| 8 | 49 | 31 |
| 9 | 61 | 43 |
| 10 | 51 | 44 |
以本检测系统测定结果为x轴，比浊法聚集仪测定结果为y轴，绘制散点图。同时进行线性回归分析，可得图3和表6。由图3结果可知，本发明检测方法与比浊法仪器测定结果的相关系数R2＝0.7860，R＝0.8866。
表6
表6表明，斜率的P＝0.001，按α＝0.05水平，P＜0.05。可认为两产品测定结果之间存在直线关系，相关性良好。
实施例4
本实施例与实施例1中的区别在于，采用型号为HB-7021的全自动血细胞分析仪及本发明的活化率检测方法为一个检测系统，该系统为手工检测。其他参数同实施例1。
以10份枸橼酸钠抗凝全血为标本，分别用本发明检测方法及比浊法仪器检测血小板活化率。即二种方法分别同时对相同样本检测血小板活化率，结果见下表7。
表7
| 样本 | 本检测方法检测活化率％ | 某比浊法聚集仪检测活化率％ |
| 1 | 63 | 53 |
| 2 | 77 | 61 |
| 3 | 45 | 40 |
| 4 | 79 | 73 |
| 5 | 78 | 62 |
| 6 | 65 | 68 |
| 7 | 51 | 41 |
| 8 | 49 | 34 |
| 9 | 62 | 43 |
| 10 | 51 | 44 |
以本检测系统测定结果为x轴，比浊法聚集仪测定结果为y轴，绘制散点图。同时进行线性回归分析，可得图4和表8。由图4结果可知，本发明检测方法与比浊法仪器测定结果的相关系数R2＝0.7612，R＝0.8724。
表8
表8表明，斜率的P＝0.001，按α＝0.05水平，P＜0.05。可认为两产品测定结果之间存在直线关系，相关性良好。
Claims (7)
1.一种血小板活化率的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
取定量的血液，测定血液中血小板的初始数值M1；
加入诱聚剂反应后，测定血液中血小板的数量M2，计算血小板活化率：
(M1-M2)/M1×100％
所述诱聚剂含有包被纤维蛋白原的乳胶微球。
2.根据权利要求1所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，所述乳胶微球的体积为30-100fl。
3.根据权利要求2所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，诱聚剂中乳胶微球的含量为0.05％-10％(V/V)。
4.根据权利要求3所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，诱聚剂中包被纤维蛋白原的含量2-200mg/L。
5.根据权利要求1所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，加入诱聚剂后反应时间为5-15min。
6.根据权利要求1或5所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，加入诱聚剂反应过程中保持恒温，温度在15-40℃。
7.根据权利要求1所述的血小板活化率的检测方法，其特征在于，所述诱聚剂与血液的体积比小于1：10。
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