CN105497109A - 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 - Google Patents
利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105497109A CN105497109A CN201610017089.1A CN201610017089A CN105497109A CN 105497109 A CN105497109 A CN 105497109A CN 201610017089 A CN201610017089 A CN 201610017089A CN 105497109 A CN105497109 A CN 105497109A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- crude extract
- total flavones
- radix astragali
- ethanol
- astragali total
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 title claims abstract description 54
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 title claims abstract description 54
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 title claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 26
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 26
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 title claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 7
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 title abstract 5
- 235000010110 Astragalus glycyphyllos Nutrition 0.000 title abstract 5
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 claims abstract description 65
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 22
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 17
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims abstract description 16
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 claims abstract description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 51
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 claims description 49
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 25
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 claims description 11
- 238000007906 compression Methods 0.000 claims description 11
- 230000006835 compression Effects 0.000 claims description 11
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 11
- 239000012043 crude product Substances 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- 238000005204 segregation Methods 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 8
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 7
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 claims description 5
- 229940107666 astragalus root Drugs 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 5
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 5
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 5
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 5
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 5
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 4
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000012092 media component Substances 0.000 claims description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 4
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 9
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 abstract description 5
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 abstract description 5
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 abstract description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 abstract description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 abstract description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 abstract description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract 2
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 2
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 abstract 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 abstract 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract 1
- 239000008395 clarifying agent Substances 0.000 abstract 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 abstract 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 abstract 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 abstract 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 6
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 4
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 3
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000202807 Glycyrrhiza Species 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N iodinated glycerol Chemical compound CC(I)C1OCC(CO)O1 LTINPJMVDKPJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
- A61K36/481—Astragalus (milkvetch)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/10—Preparation or pretreatment of starting material
- A61K2236/19—Preparation or pretreatment of starting material involving fermentation using yeast, bacteria or both; enzymatic treatment
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation or decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及黄芪药物提取技术领域，具体说是利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺。该方法步骤清洗、干燥、粉碎后接入1~2倍体积的菌种液发酵，后离心去除上清液，加入3~6倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置放凉，加入天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，静置后旋转蒸发浓缩粗提液得到浸膏粗品；浸膏粗品中加入乙醇，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，依次经大孔吸附树脂柱、硅胶柱、ODS开放柱、中压柱分离纯化技术得到纯品黄芪总黄酮。本发明利用微生物分解、转化纤维素等使细胞破壁，促进总黄酮物质溶出，并且引入的澄清除杂过程能够高效去除黄芪总黄酮中的蛋白质、核酸、淀粉等大分子杂质。
Description
技术领域
本发明属于黄芪药物提取技术领域，尤其涉及利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺。
背景技术
黄芪为豆科植物的，味甘，性微温，归肺、脾经，具有补气升阳、益味固表、利尿消肿、生津养血、托毒排脓、敛疮生肌等功效。黄芪总黄酮是黄芪生长过程中形成的次级代谢产物之一，具有多种生物学活性；近年来，食品安全和保健性食品备受人们的青睐，黄芪总黄酮也逐渐成为被研究的热点。黄芪的化学成分分析表明主要含有黄酮类和皂甙类，而研究表明总黄酮对人体生理代谢有益的调节功能，为其开发利用展示了广阔前景。随着社会压力的增加，心脑血管疾病的急剧爆发，而黄酮有抑制肿瘤，抗炎消肿，降低血脂等功能，因此逐渐被人们所重视和研究。
目前水提法是提取中药黄酮的传统方法，水提法方法简单，操作简便易行，但是能耗较大，提取方法不稳定，提取得到的黄酮纯度不高，多含有蛋白质、核酸、淀粉等杂质。本发明为了解决上述的水提法提取到的黄芪黄酮得率不高、提取能耗大问题，根据黄芪总黄酮中大部分有效成分的理化特性及为了节约成本，引入澄清剂除杂过程和多级分离吸附作用，有效除去药物成分中的杂质，降低提取过程因需要高温过程产生的能耗，并使提取技术工艺流程趋于稳定，方法重复性好。
发明内容
本发明的目的是克服现有药用甘草提取黄芪总黄酮纯度、提取率低等缺点，提供一种利用水提技术生产黄芪总黄酮的工艺。
本发明的实现技术方案为，一种利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，以黄芪为原料，其特征在于，该方法步骤包括：
1）粗提液获取：干燥黄芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后接入1~2倍体积的菌种液，在pH=3~5、温度为35~40℃、转速条件下进行发酵10~18h，发酵结束后离心去除上清液，加入3~6倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置得到粗提液；
2）浓缩蒸发：在步骤1）得到的粗提液中加入加入天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，加入量为5~10g/L，静置20~30min后旋转蒸发浓缩粗提液，得到浸膏粗品；
3）溶解除杂：在步骤2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇进行搅拌后静置，离心收集沉淀物；
4）大孔吸附树脂柱分离纯化：将步骤3）得到的沉淀物上大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅰ；
5）硅胶柱分离纯化：将步骤4）烘干得到的粗提物Ⅰ用乙醇溶解后上硅胶柱，用含甲醇的氯仿溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并风干，得到粗提物Ⅱ；
6）用ODS开放柱分离纯化：将步骤5）得到的粗提物Ⅱ用乙醇溶解后上ODS开放柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅲ；
7）用中压柱分离纯化：将步骤6）得到的粗提物Ⅲ上中压柱，用乙醇水溶液洗脱，从出峰开始收集洗脱液，至峰下降后停止收集，洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅳ；
8）过滤结晶：将步骤7）得到的粗提物Ⅳ用甲醇溶解，用滤膜过滤后缓慢加入水进行结晶，边加入边搅拌至出现黄色絮状物时停止搅拌，静置20-50min，滤纸过滤，将留在滤纸上的黄色药物挥干，收集挥干后的黄色药物既为黄芪总黄酮。
作为本发明的进一步限定条件，所述的清洗为用清水清洗2~3次；所述的粉碎为黄芪粉碎至50~100目。
作为本发明的进一步限定条件，所述的旋转蒸发浓缩为将粗提液蒸发至水比重d为1.0~1.50的浸膏。
作为本发明的进一步限定条件，所述的步骤3）中乙醇的加入量为浸膏的2~5倍体积。
作为本发明的进一步限定条件，所述的天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC为由科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂。
作为本发明的进一步限定，所述的步骤5）中含甲醇的氯仿溶液为含1~5%甲醇的氯仿溶液。
作为本发明的进一步限定，所述的步骤4）、步骤6）、步骤7）中的乙醇水溶液为60~80%的乙醇水溶液。
作为本发明的进一步限定，所述的步骤9）中的滤膜孔径为0.35~0.5μm。
本发明取得了以下实质性进步和突出效果：
以药用黄芪开始，经过一系列工序提取优质黄芪总黄酮，在微生物发酵作用的基础上，引入植物中药澄清技术实现高品质黄芪总黄酮的提取纯化，由于微波辐射导致植物细胞表面出现孔洞和裂纹，胞外溶剂容易进入细胞内，溶解更总黄酮，胞内总黄酮也容易被释放出来，有效提高了总黄酮的收率，并且引入的澄清除杂过程能够高效去除黄芪总黄酮中的蛋白质、核酸、淀粉等大分子杂质，并结合大孔吸附树脂柱、硅胶柱、ODS开放柱、中压柱分离纯化技术，提高黄芪总黄酮中有效成分提取产率，改进后的方法黄芪总黄酮提取率为1.3~1.9mg/g以上，得到的黄芪总黄酮可用于兽医临床中对动物免疫调节、抗病毒、抗菌方面等药物预防治疗。
本发明黄芪总黄酮按照一定的比例拌入动物的喂养饲料中，一日三餐中喂养一餐，可以显著提高动物的免疫力，发病率从最初的32%降低到了20.5%，实现动物的健康饲养，减少抗生素、激素药物的治疗，实现生态饲养，提高畜牧养殖经济价值。
具体实施方式
以下实施例描述本发明利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定，以下实施例中所用到的所有试剂均可通过商业手段购买。
实施例1
本实施例以干燥黄芪为原料，制备方法步骤包括：
1）粗提液获取：干燥黄芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后（清洗为用清水清洗3次，粉碎为黄芪粉碎至50目），在pH=5、温度为35℃、转速条件下进行发酵18h，发酵结束后离心去除上清液，加入6倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置放凉，得到粗提液；菌种液为乳酸菌菌种在基础培养基中培养18h；所述的基础培养基成分包括1%蛋白胨、0.5%氯化钠、0.5%磷酸钠，余量为水。
2）浓缩蒸发：在步骤1）得到的粗提液中加入由科立尔生物科技有限公司生产的天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，加入量为5g/L，静置30min后旋转蒸发浓缩粗提液，至水比重d为1.50的浸膏，得到浸膏粗品；
3）溶解除杂：在步骤2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量为浸膏的5倍体积，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇进行搅拌后静置，离心收集沉淀物；
4）大孔吸附树脂柱分离纯化：将步骤3）得到的沉淀物上大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅰ；
5）硅胶柱分离纯化：将步骤4）烘干得到的粗提物Ⅰ用乙醇溶解后上硅胶柱，用含甲醇的氯仿溶液为含15%甲醇的氯仿溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并风干，得到粗提物Ⅱ；
6）用ODS开放柱分离纯化：将步骤5）得到的粗提物Ⅱ用乙醇溶解后上ODS开放柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅲ；
7）用中压柱分离纯化：将步骤6）得到的粗提物Ⅲ上中压柱，用乙醇水溶液洗脱，从出峰开始收集洗脱液，至峰下降后停止收集，洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅳ；
8）f过滤结晶：将步骤7）得到的粗提物Ⅳ用甲醇溶解，用滤膜过滤后缓慢加入水进行结晶，边加入边搅拌至出现黄色絮状物时停止搅拌，静置20min，滤纸过滤，将留在滤纸上的黄色药物挥干，收集挥干后的黄色药物既为黄芪总黄酮。
步骤4）、步骤6）、步骤7）中的乙醇水溶液为60%的乙醇水溶液，步骤8）中的滤膜孔径为0.4μm。
本是实施例黄芪总黄酮的提取率为1.3mg/g。
实施例2
1）粗提液获取：干燥黄芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎（清洗为用清水清洗2次，粉碎为黄芪粉碎至100目），在pH=3、温度为40℃、转速条件下进行发酵10h，发酵结束后离心去除上清液，加入3倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置放凉，得到粗提液；菌种液为乳酸菌菌种在基础培养基中培养12h；所述的基础培养基成分包括0.5%蛋白胨、2%氯化钠、2%磷酸钠，余量为水。
2）浓缩蒸发：在步骤1）得到的粗提液中加入由科立尔生物科技有限公司生产的天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，加入量为10g/L，静置20min后旋转蒸发浓缩粗提液，至水比重d为1.0的浸膏，得到浸膏粗品；
3）溶解除杂：在步骤2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量为浸膏的2倍体积，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇进行搅拌后静置，离心收集沉淀物；
4）大孔吸附树脂柱分离纯化：将步骤3）得到的沉淀物上大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅰ；
5）硅胶柱分离纯化：将步骤4）烘干得到的粗提物Ⅰ用乙醇溶解后上硅胶柱，用含甲醇的氯仿溶液为含1%甲醇的氯仿溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并风干，得到粗提物Ⅱ；
6）用ODS开放柱分离纯化：将步骤5）得到的粗提物Ⅱ用乙醇溶解后上ODS开放柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅲ；
7）用中压柱分离纯化：将步骤6）得到的粗提物Ⅲ上中压柱，用乙醇水溶液洗脱，从出峰开始收集洗脱液，至峰下降后停止收集，洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅳ；
8）f过滤结晶：将步骤7）得到的粗提物Ⅳ用甲醇溶解，用滤膜过滤后缓慢加入水进行结晶，边加入边搅拌至出现黄色絮状物时停止搅拌，静置50min，滤纸过滤，将留在滤纸上的黄色药物挥干，收集挥干后的黄色药物既为黄芪总黄酮。
步骤4）、步骤6）、步骤7）中的乙醇水溶液为80%的乙醇水溶液。所述的步骤8）中的滤膜孔径为0.5μm。
本是实施例黄芪总黄酮的提取率为1.6mg/g。
实施例3
1）粗提液获取：干燥黄芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎（清洗为用清水清洗3次，粉碎为黄芪粉碎至75目），在pH=4、温度为37℃、转速条件下进行发酵15h，发酵结束后离心去除上清液，加入5倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置放凉，得到粗提液；菌种液为乳酸菌菌种在基础培养基中培养15h；所述的基础培养基成分包括0.8%蛋白胨、1.0%氯化钠、1.0%磷酸钠，余量为水。
2）浓缩蒸发：在步骤1）得到的粗提液中加入由科立尔生物科技有限公司生产的天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，加入量为7.5g/L，静置25min后旋转蒸发浓缩粗提液，至水比重d为1.20的浸膏，得到浸膏粗品；
3）溶解除杂：在步骤2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，乙醇的加入量为浸膏的3倍体积，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇进行搅拌后静置，离心收集沉淀物；
4）大孔吸附树脂柱分离纯化：将步骤3）得到的沉淀物上大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅰ；
5）硅胶柱分离纯化：将步骤4）烘干得到的粗提物Ⅰ用乙醇溶解后上硅胶柱，用含甲醇的氯仿溶液为含3%甲醇的氯仿溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并风干，得到粗提物Ⅱ；
6）用ODS开放柱分离纯化：将步骤5）得到的粗提物Ⅱ用乙醇溶解后上ODS开放柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅲ；
7）用中压柱分离纯化：将步骤6）得到的粗提物Ⅲ上中压柱，用乙醇水溶液洗脱，从出峰开始收集洗脱液，至峰下降后停止收集，洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅳ；
8）f过滤结晶：将步骤7）得到的粗提物Ⅳ用甲醇溶解，用滤膜过滤后缓慢加入水进行结晶，边加入边搅拌至出现黄色絮状物时停止搅拌，静置30min，滤纸过滤，将留在滤纸上的黄色药物挥干，收集挥干后的黄色药物既为黄芪总黄酮。
步骤4）、步骤6）、步骤7）中的乙醇水溶液为70%的乙醇水溶液。所述的步骤8）中的滤膜孔径为0.35μm。
本是实施例黄芪总黄酮的提取率为1.9mg/g。
应用实施例1
黄芪总黄酮按照一定的比例拌入猪的喂养饲料中（1kg的饲料中添加5.0g黄芪总黄酮），一日三餐中喂养一餐，可以显著提高动物的免疫力，发病率从最初的30%降低到了18.5%，实现动物的健康饲养，减少抗生素、激素药物的治疗，实现生态饲养，提高畜牧养殖经济价值。
应用实施例2
黄芪总黄酮按照一定的比例拌入牛的喂养饲料中（1kg的饲料中添加6.5g黄芪总黄酮），一日三餐中喂养一餐，可以显著提高动物的免疫力，发病率从最初的32%降低到了20.5%，实现动物的健康饲养，减少抗生素、激素药物的治疗，实现生态饲养，提高畜牧养殖经济价值。
本发明上述实施例方案仅是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求中指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应当认为是包括在权利要求书的范围内。
本发明是经过多位黄芪总黄酮提取加工人员长期工作经验积累，并通过创造性劳动创作而出，其在在实际黄芪总黄酮的提取过程中，该方法可得到黄芪总黄酮提取率为1.3~1.9mg/g，得到的黄芪总黄酮可用于兽医临床中对动物免疫调节、抗病毒、抗菌方面等药物预防治疗。
Claims (9)
1.一种利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，以黄芪为原料，其特征在于，该方法步骤包括：
1）粗提液获取：干燥黄芪根原料1kg，清洗、干燥、粉碎后接入1~2倍体积的菌种液，在pH=3~5、温度为35~40℃、转速条件下进行发酵10~18h，发酵结束后离心去除上清液，加入3~6倍体积的水搅拌提取2次，合并提取液静置得到粗提液；
2）浓缩蒸发：在步骤1）得到的粗提液中加入天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC，加入量为5~10g/L，静置20~30min后旋转蒸发浓缩粗提液，得到浸膏粗品；
3）溶解除杂：在步骤2）得到的浸膏粗品中加入乙醇，搅拌浸膏进行溶解，静置沉淀，离心去除上清液得到沉淀物，沉淀物再加入乙醇进行搅拌后静置，离心收集沉淀物；
4）大孔吸附树脂柱分离纯化：将步骤3）得到的沉淀物上大孔吸附树脂柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅰ；
5）硅胶柱分离纯化：将步骤4）烘干得到的粗提物Ⅰ用乙醇溶解后上硅胶柱，用含甲醇的氯仿溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并风干，得到粗提物Ⅱ；
6）用ODS开放柱分离纯化：将步骤5）得到的粗提物Ⅱ用乙醇溶解后上ODS开放柱，用乙醇水溶液进行洗脱，收集黄绿色洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅲ；
7）用中压柱分离纯化：将步骤6）得到的粗提物Ⅲ上中压柱，用乙醇水溶液洗脱，从出峰开始收集洗脱液，至峰下降后停止收集，洗脱液并减压浓缩烘干，得到粗提物Ⅳ；
8）过滤结晶：将步骤7）得到的粗提物Ⅳ用甲醇溶解，用滤膜过滤后缓慢加入水进行结晶，边加入边搅拌至出现黄色絮状物时停止搅拌，静置20-50min，滤纸过滤，将留在滤纸上的黄色药物挥干，收集挥干后的黄色药物既为黄芪总黄酮。
2.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的清洗为用清水清洗2~3次；所述的粉碎为黄芪粉碎至50~100目。
3.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的旋转蒸发浓缩为将粗提液蒸发至水比重d为1.0~1.50的浸膏。
4.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的步骤3）中乙醇的加入量为浸膏的2~5倍体积。
5.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的菌种液为乳酸菌菌种在基础培养基中培养12~18h；所述的基础培养基成分包括0.5-1%蛋白胨、0.5-2%氯化钠、0.5-2%磷酸钠，余量为水。
6.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的天然植物提取液澄清剂KBT-ZTC为由科立尔生物科技有限公司生产的澄清剂。
7.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的步骤5）中含甲醇的氯仿溶液为含1~5%甲醇的氯仿溶液。
8.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的步骤4）、步骤6）、步骤7）中的乙醇水溶液为60~80%的乙醇水溶液。
9.根据权利要求1所述的利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺，其特征在于，所述的步骤9）中的滤膜孔径为0.35~0.5μm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610017089.1A CN105497109A (zh) | 2016-01-12 | 2016-01-12 | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610017089.1A CN105497109A (zh) | 2016-01-12 | 2016-01-12 | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105497109A true CN105497109A (zh) | 2016-04-20 |
Family
ID=55705668
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610017089.1A Pending CN105497109A (zh) | 2016-01-12 | 2016-01-12 | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105497109A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107115509A (zh) * | 2017-06-22 | 2017-09-01 | 贵州省安顺市黔艺贝纺织有限公司 | 一种外用艾纳香散瘀药酒 |
| CN107412292A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-12-01 | 长沙爱扬医药科技有限公司 | 利用鸭嘴花制取总黄酮和挥发油的方法 |
| CN107417689A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-12-01 | 苏州科技大学 | 一种从鸭嘴花中提取高纯度鸭嘴花碱的方法 |
| CN113577128A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-11-02 | 兰州大学 | 一种黄芪发酵液及其制备方法和应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104958349A (zh) * | 2015-06-29 | 2015-10-07 | 兰捷 | 一种从黄芪中提取高纯度总黄酮的方法 |
-
2016
- 2016-01-12 CN CN201610017089.1A patent/CN105497109A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104958349A (zh) * | 2015-06-29 | 2015-10-07 | 兰捷 | 一种从黄芪中提取高纯度总黄酮的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 区海燕: "黄芪总黄酮的提取分离及其指纹图谱和生物活性的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》 * |
| 陈玉昆: "《中药提取生产工艺学上册》", 31 March 1992 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107115509A (zh) * | 2017-06-22 | 2017-09-01 | 贵州省安顺市黔艺贝纺织有限公司 | 一种外用艾纳香散瘀药酒 |
| CN107412292A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-12-01 | 长沙爱扬医药科技有限公司 | 利用鸭嘴花制取总黄酮和挥发油的方法 |
| CN107417689A (zh) * | 2017-08-09 | 2017-12-01 | 苏州科技大学 | 一种从鸭嘴花中提取高纯度鸭嘴花碱的方法 |
| CN113577128A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-11-02 | 兰州大学 | 一种黄芪发酵液及其制备方法和应用 |
| CN113577128B (zh) * | 2021-09-01 | 2022-10-14 | 兰州大学 | 一种黄芪发酵液在制备缓解急性肺损伤药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104829743B (zh) | 一种辣木叶多糖的制备方法及其用途 | |
| CN102816251B (zh) | 一种高活性黄芪多糖及其药物组合物的制备方法 | |
| CN103432193A (zh) | 一种微波辅助双水相提取分离葛根总黄酮的方法 | |
| CN112870236B (zh) | 一种黄蜀葵花黄酮类有效部位及其制备方法与应用 | |
| CN105497109A (zh) | 利用微生物发酵技术生产黄芪总黄酮的工艺 | |
| CN105504079A (zh) | 利用超声波技术生产黄芪多糖的工艺 | |
| CN104258193A (zh) | 一种治疗神经衰弱和预防老年痴呆症的药物组合物 | |
| CN105400845A (zh) | 利用微生物发酵技术生产黄芪多糖的工艺 | |
| CN108329368A (zh) | 一种从黄芩中制备黄芩苷的方法 | |
| CN106543245A (zh) | 一种从牛蒡中分离纯化牛蒡苷的方法 | |
| CN104098634B (zh) | 枳实中联合提取辛弗林、橙皮甙和PMFs的工艺 | |
| CN107286264A (zh) | 大枣营养物质分离的深加工方法 | |
| CN103505486A (zh) | 一种灵芝西洋参颗粒及其制备方法 | |
| CN109180829A (zh) | 一种葛根总黄酮及多糖提取物的制备方法及应用 | |
| CN107619427A (zh) | 一种从重楼中提取纯化重楼皂苷ⅰ的方法 | |
| CN109223865B (zh) | 一种桑叶生物碱的制备方法及制备得到的桑叶生物碱的应用 | |
| CN105399852A (zh) | 利用碱法提取技术生产黄芪多糖的工艺 | |
| CN106860489A (zh) | 一种杨梅叶多酚的提取方法 | |
| CN105535080A (zh) | 利用微波技术生产黄芪总黄酮的工艺 | |
| CN101278974A (zh) | 一种肉桂皂甙提取物及其制备方法和应用 | |
| CN105641028A (zh) | 利用碱法提取技术生产黄芪总黄酮的工艺 | |
| CN105440148A (zh) | 利用水提技术生产黄芪多糖的工艺 | |
| CN106074630A (zh) | 一种银杏叶中黄酮类化合物提取方法 | |
| CN107582582A (zh) | 一种提取纯化辣木黄酮的工艺 | |
| CN106317005A (zh) | 一种从玫瑰花渣水中提取玫瑰黄酮的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160420 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |