CN105461587A - Ahu-377半钙盐晶型及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了AHU-377半钙盐晶型及其制备方法和应用。一种AHU-377半钙盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°，3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。通过将AHU-377制备成钙盐来改变AHU-377的理化性质，改善了AHU-377或其钠盐的吸湿性，提高了化学稳定性等，利于储存，具有广阔的应用前景。

Description

AHU-377半钙盐晶型及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种NEP抑制剂AHU-377半钙盐晶型及其制备方法和应用。

背景技术

中性内肽酶(EC3.4.24.11；脑啡肽酶；必肽酶；NEP)是一种可以在芳族氨基酸的氨基末端上裂解各种肽底物的包含锌的金属蛋白酶。这种酶的底物非限制性地包括心钠素(ANF，也被称为ANP)、脑钠肽(BNP)、met和leu脑啡肽、缓激肽、神经激肽A和P物质。

ANF是一族血管舒张、利尿和抗高血压的肽类，一种形式——ANF99-126是在心脏扩张情况中由心脏释放的循环肽激素。ANF的功能是维持盐和水的体内平衡以及调节血压。ANF在循环中被至少两个过程迅速灭活：受体-介导的清除和在NEP进行的酶灭活。NEP抑制剂增强了实验动物进行药理学ANF注射后的低血压、利尿、促尿钠排泄和血浆ANF响应。通过两种特定的NEP抑制剂进行的ANF的增强，1988年，美国专利US4749688中一般性地公开了可以用NEP来增强ANF。同年，美国专利US4740499中公开了噻奥芬(thiorphan)和凯拉托芬也可以用于增强心房肽的应用。此外，NEP抑制剂可降低血压和发挥ANF-样作用如在一些形式的实验性高血压中的利尿和增加环鸟苷3’，5’-单磷酸(cGMP)排泄的作用。因为ANF的抗体将抵消血压的降低，所以NEP抑制剂的抗高血压作用是通过ANF介导的。长期和不进行控制的高血压血管疾病最终将导致靶器官如心和肾的各种病理学改变。持续的高血压也能导致中风的发生率增加。因此，强烈需要对抗高血压治疗的功效进行评估，即对除了血压降低以外的其它心血管终点事件进行检查以进一步发现联合治疗的益处。

1993年，GaryKsander等在美国专利US5217996中公开了一类联芳基取代的4-氨基丁酸衍生物，该类化合物被发现具有明显的NEP抑制活性，其中最具代表性的一个化合物为N-(3-羧基-1-氧代丙基)-(4S)-对-苯基苯基甲基)-4-氨基-2R-甲基丁酸乙酯(又称AHU-377)。

在实际生产制备过程中AHU-377通常以油状物出现，不利于保存及后续药物开发。AHU-377粗品经叔丁醇酯化、氢氧化钠碱水解后得到的AHU-377钠盐经二氯甲烷/正己烷重结晶后聚集状态不明，而且经发明人深入研究发现AHU-377钠盐吸湿性相当大，物质不稳定且不利于储存，因此，AHU-377作为药物活性成分，其产品质量、物质稳定性、储存或称量等均存在很大问题，其钠盐也没有解决上述问题，虽然美国专利US5217996也公开了AHU-377还可以制备成各种盐型化合物，例如碱金属盐、碱土金属盐、胺盐、烷基胺盐、羟烷基胺盐等，但是，主要还是从AHU-377含有一个羧基的化学结构上推断得出，并未实际得到各种除钠盐之外的其它盐型化合物，不能解决AHU-377产品质量差、物质不稳定、难以储存及称量等问题。

此外，该药的应用对象为有高血压和心衰类心血管疾病的病人，钠的摄入也会增加心血管负担，因此十分有必要将钠盐更换成其他盐型，或其他类对心血管无害或有益的盐类如钙盐等。钙离子对心血管的有益作用被广泛认同，钙离子降血压的作用可能由以下机制所致：1、钙的膜稳定作用，钙结合在细胞膜上，可降低细胞膜通透性，提高兴奋阈，能使血管平滑肌松弛；2、钙自身可阻断钙通道，使细胞外的钙离子不能进入细胞内；3、血钙高可对抗高钠所致的排钾增加，而钾离子对稳定细胞膜起重要作用。人维持足够的高钙摄入，可对抗高钠的有害作用；4、有学者认为，40％的血压升高与甲状旁腺有关。甲状旁腺可产生一种耐高热的多肽物质，这是引起高血压的罪魁祸首，被称为“致高血压因子”。“致高血压因子”的产生受低钙饮食刺激，而高钙饮食可抑制其产生“致高血压因子”。现代研究证明，中老年人多吃含钙丰富的食物可以预防动脉硬化，高血压病人在服用降压药的同时配合补钙，还能更好地使过高的血压降到正常。所以，对于缺钙的人，长期大量地补充钙质，使血钙保持正常水平，维持平滑肌细胞内外钙代谢的平衡，避免血管平滑肌的痉挛，从而达到有效预防动脉血管硬化、降低血压的目的。因此，将AHU377的钠盐换成钙盐，不仅可以减少钠盐带来的副作用，还可以带来额外的对心血管疾病的有益作用。

虽然WO2008031567也公开了AHU-377游离酸制备成钙盐的合成路线，如下所示：

但是，本领域人员可以了解，上述常见的成盐反映技术路线是基于含有羧基的化合物与钙盐成盐的一般技术路线，但是该技术路线并不能适合所有羧基化合物，也无从知晓是否可以通过这个反映来制备出AHU377的钙盐。该技术路线无实施例支持，所以更加不可知该技术路线是否可以产生晶型的钙盐。另外，该技术路线只有在特殊条件下成立，尤其是合成路线中第二步，是AHU-377钠盐与CaCl2发生的离子交换反应，如果不能创造AHU-377钙盐或者氯化钠从体系析出的特殊条件，则上述合成路线则不成立。其次，从该通用的技术路线，无法推测是否可以制备固体形式的AHU-377钙盐，所得钙盐是否为晶型，是何种晶型。因此，该通用的技术路线无法得到AHU-377钙盐或结晶形式的AHU-337钙盐晶体。

发明内容

为了解决现有技术存在的问题，改善AHU-377或其钠盐的理化性质，发明人在深入研究的基础上制备得到了AHU-377半钙盐晶型。通过将AHU-377制备成钙盐来改变AHU-377或其钠盐的理化性质，例如结晶性、溶解性、吸湿性等。

本发明第一方面提供一种AHU-377半钙盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第二方面提供一种AHU-377半钙盐三水合物晶型(指定为晶型I)，其X射线粉末衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于14.74±0.2°,15.42±0.2°,7.82±0.2°,19.42±0.2°,16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表1所示：

表1

2θ(°)	强度％	2θ(°)	强度％
				7.32	39	15.90	37.3
7.82	15.1	16.64	13.4
				12.70	100	17.54	11.6
14.74	27.3	18.56	33.5
				15.42	18.4	19.42	13.5

本发明第三方面提供一种AHU-377半钙盐无水晶型(指定为晶型II)，其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于20.48±0.2°,14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为更进一步优选的方案，最优选其X射线粉末衍射图与图3中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同，其X射线粉末衍射数据如表2所示：

表2

2θ(°)	强度％	2θ(°)	强度％
				3.62	58.2	17.82	36.8
4.02	100	19.66	13.8
				14.50	25.8	20.48	29

本文所使用的关于X射线衍射峰位置的术语“基本上相同的”意指考虑典型的峰位置和强度可变性。例如，本领域技术人员将理解，峰位置(2θ)将由于XRPD仪器不同，而造成测量值有所变化，有时这种变化达有时多达0.2°。此外，本领域技术人员将理解，XRPD样品制样方法，XRPD仪器，样品结晶度，样品用量以及晶体择优取向等因素将导致样品XRPD衍射图中相对峰强度的改变。

本发明第四方面提供一种AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，包括，

1)将AHU-377游离酸溶解或混悬在合适的溶剂中，与等量或过量可溶于该体系的苛性碱或弱碱性钠盐或钾盐相混合制备生成AHU-377相应的盐，优选将弱碱性钠盐或钾盐相混合；

2)将上述AHU-377盐体系与水溶性钙盐在水或含有机溶剂的水体系中相混合，产生AHU-377钙盐沉淀；

3)收集上述成盐反应过程中产物得到AHU-377半钙盐三水合物晶型。

作为进一步优选的方案，步骤1)所述合适的溶剂为结晶溶剂，包括水、水溶性溶剂或其混合物。

作为更进一步优选的方案，所述水溶性溶剂选自醇类、酮类、环醚类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物，优选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其混合物；

作为进一步优选的方案，步骤1)所述苛性碱为氢氧化钠或氢氧化钾。

作为进一步优选的方案，步骤1)所述弱碱性钠盐选自碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、甲酸钠、丙酸钠、丙烯酸钠、苯甲酸钠或其混合物；优选碳酸氢钠、醋酸钠或其混合物；步骤1)所述弱碱性钾盐选自碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钾、甲酸钾、丙酸钾、丙烯酸钾、苯甲酸钾或其混合物；优选碳酸氢钾、醋酸钾或其混合物；

作为进一步优选的方案，步骤2)所述水溶性钙盐选自氯化钙、溴化钙、碘化钙、硝酸钙、氯酸钙、次氯酸钙，高氯酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙或其混合物；

作为更进一步优选的方案，步骤2)所述水溶性钙盐选自氯化钙、氯酸钙或其混合物。

作为进一步优选的方案，所述溶解是指本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以适当的加热使AHU-377游离酸原料溶解或溶清，或者加大溶剂的用量来使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述适当的加热优选将结晶正溶剂加热至30～80℃使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为更进一步优选的方案，所述加大溶剂的用量优选结晶溶剂的加入量为AHU-377游离酸的2-20倍体积质量比，使AHU-377游离酸原料溶解或溶清。

作为进一步优选的方案，步骤3)所述的收集上述成盐反应过程中产物的步骤具体可以是直接收集上述成钙盐反应过程中析出的固体产物、或者通过挥发溶剂、或者加入反溶剂、或者直接降温析晶、或者加入晶种，得到AHU-377钙盐多晶型。

作为更进一步优选的方案，所述反溶剂是指极性较小的有机溶剂，包括但不限定于以下溶剂：正庚烷、正己烷、异辛烷、戊烷、环己烷、环戊烷、乙醚或其组合物。加入反溶剂的量为结晶溶剂1-10倍体积比。

作为进一步优选的方案，本发明步骤3)所得到的AHU-377钙盐晶型I其粉末X射线衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第五方面提供一种AHU-377半钙盐无水晶型的制备方法，将AHU-377半钙盐三水合物加热到50℃以上，使其脱水转变成无水晶型得到AHU-377半钙盐无水晶型。

作为进一步优选方案，所述加热是本领域的普通技术人员一般的操作，通常可以在氮气保护下或真空条件下升温。

作为进一步优选方案，所述加热温度范围在50-100℃。

作为进一步优选的方案，本发明所得到的AHU-377钙盐无水晶型(晶型II)其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

作为进一步优选的方案，优选其X射线粉末衍射图还包括位于20.48±0.2°,14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

本发明第六方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II以及药学上可接受的载体或赋形剂。

作为进一步优选的方案，所述可药用载体或赋形剂选自稀释剂或填充剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂、着色剂或其组合。

作为更进一步优选的方案，所述稀释剂或填充剂选自糖粉、可压缩糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、糊精、甘露醇、微晶纤维素、山梨醇、淀粉或其组合；稀释剂或填充剂的用量为组合物重量的4.0％～60.0％，优选10.0％～40.0％。

作为更进一步优选的方案，所述崩解剂选自淀粉、粘土、纤维素、藻酸盐、树胶、交联聚合物(例如交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钙或其组合)、大豆多糖、瓜尔胶或其组合；崩解剂的用量为组合物重量的0％～65.0％，优选1.0％～40.0％。

作为更进一步优选的方案，所述粘合剂选自淀粉、纤维素及其衍生物、蔗糖、葡萄糖、玉米糖浆、明胶、聚维酮或其组合，其中纤维素及其衍生物选自微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或其组合；优选羟丙基纤维素；更优选低取代羟丙基纤维素；粘合剂的用量为组合物重量的1.0％～60.0％，优选5.0％～40.0％，更优选10.0％～30.0％。

作为更进一步优选的方案，所述助流剂或润滑剂选自胶态二氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石粉、正磷酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸钙、氧化镁、聚乙二醇、粉状纤维素、山嵛酸甘油酯、硬脂酸、氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、硬脂酰醇富马酸钠或其组合；助流剂或润滑剂的用量为组合物重量的0％～10.0％，优选0.5％～5.0％。

作为更进一步优选的方案，所述药物组合物进一步包括(ⅳ)利尿剂；所述利尿剂选自呋塞米、依他尼酸、布美他尼、托拉塞米、氢氯噻嗪、氯噻酮、苄氟噻嗪、环戊噻嗪、泊利噻嗪、美托拉宗、吲达帕胺或其组合；利尿剂的用量为组合物重量的0.1％～10.0％，优选0.5％～5.0％。

作为更进一步优选的方案，所述药物组合物可以制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂。

作为更进一步优选的方案，所述胶囊剂组分配比如下：

组分	名称	重量百分比
			(ⅰ)	AHU-377钙盐晶型I	5.0％～50.0％
(ⅱ)	稀释剂或填充剂	10.0％～40.0％
			(ⅲ)	崩解剂	1.0％～40.0％
(ⅳ)	粘合剂	10.0％～30.0％
			(ⅴ)	助流剂或润滑剂	0.5％～5.0％

作为最优的方案，所述胶囊剂组分配比如下：

组分	名称	重量百分比
			(ⅰ)	AHU-377钙盐晶型I	20.0％～50.0％
(ⅱ)	稀释剂或填充剂	10.0％～30.0％

(ⅲ)	崩解剂	5.0％～30.0％
			(ⅳ)	粘合剂	10.0％～30.0％
(ⅴ)	助流剂或润滑剂	1.0％～5.0％
			(ⅵ)	利尿剂	0.5％～5.0％

本发明第七方面提供一种前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途。

作为更进一步优选的方案，所述抗高血压的药物是指通过改善功效和具有更高的相应率而产生了更有效的抗高血压治疗的药物，包括但不限于抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物。

本发明第六方面提供一种前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II、或包含治疗有效剂量的前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰如、充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动或有害的血管重构药物中的用途。

本发明第八方面提供一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的前述AHU-377半钙盐晶型、AHU-377钙盐晶型I或晶型II和血管紧张素Ⅱ(AT1)受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

作为进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐。

作为更进一步优选的方案，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

本发明第九方面提供一种前述药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。

“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/药学上可接受的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以或其他组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。

与现有技术相比，本发明具有一下优势：

1)本发明提供一种新的AHU-377钙盐三水合物，改善了AHU-377或其钠盐的吸湿性，提高了化学稳定性等，利于储存。

2)本发明AHU-377钙盐三水合物，纯度高，质量稳定可靠。

3)本发明结晶方法可操作性强，工艺成熟，易于控制。

4)本发明所得AHU-377钙盐晶型I利于药物应用，所制备的胶囊剂可以满足医学或药学需要，适宜工业化。

5)本发明所得AHU-377钙盐和钠盐相比，在高血压和心衰治疗过程中，可以减少钠的摄入，减轻了患者心血管负担。并且钙对血管有舒缓作用，有利于心血管疾病的治疗。因此AHU-377这个主要用于高血压和心衰治疗的药物制成钙盐在安全性和有效性上较钠盐具有明显的优势。

附图说明

图1为AHU-377钙盐三水合物晶型的X射线粉末衍射图(XRPD图)；

图2为AHU-377钙盐三水合物晶型的热重分析图(TGA图)；

图3为AHU-377钙盐无水晶型的X射线粉末衍射图(XRPD图)。

具体实施方式

以下提供的具体实施例以及制备方法例将进一步举例说明本发明实施方案的特定方面。下列实施例的范围将不以任何方式限制本发明的范围。

方法和材料

AHU-377钙盐多晶型由它们的X射线粉末衍射图表征。因此，在具有使用CuKα辐射以反射方式操作的GADDS(一般面积衍射检测器系统)CS的BrukerD8DiscoverX射线粉末衍射仪上采集所述盐的X射线粉末衍射图。管电压和电流量分别设置为40kV和40mA采集扫描。在3.0°至40°的2θ范围内扫描样品60秒的时期。针对2θ表示的峰位置，使用刚玉标准品校准衍射仪。在通常是20℃-30℃的室温下实施所有分析。使用用于4.1.14T版WNT软件的GADDS，采集和积分数据。使用2003年发行的具有9.0.0.2版Eva的DiffracPlus软件，分析衍射图。XRPD样品的制备，通过是将样品至于单晶硅片上，用玻璃片或等效物压样品粉末以确保样品的表面平坦并有适当的高度。然后将样品支架放入BrukerXRPD仪器，并使用上文描述的仪器参数采集X射线粉末衍射图。由包括以下的多种因素产生与这类X射线粉末衍射分析结果相关的测量差异：(a)样品制备物(例如样品高度)中的误差，(b)仪器误差，(c)校准差异，(d)操作人员误差(包括在测定峰位置时出现的那些误差)，和(e)物质的性质(例如优选的定向误差)。校准误差和样品高度误差经常导致所有峰在相同方向中的位移。一般地说，这个校准因子将使测量的峰位置与预期的峰位置一致并且可以在预期的2θ值±0.2°的范围中。

本发明原料AHU-377游离酸是根据专利US5217996A报道制备方法而得为油状物。本发明实施例所得各多晶型的角度2θ(°)值和强度值(作为最高峰值的％)已列入表1-表2中。

实施例1

称取500mg(1.215mmol)AHU-377游离酸(油状)置于50.0mL圆底烧瓶中，加入5.0mL丙酮，搅拌溶清，加入12.2mL浓度为0.10mmol/mL的碳酸氢钠水溶液，搅拌反应12小时，，加入0.65mL浓度为1.0mmol/mL的氯化钙水溶液，然后再加15mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，熔点为：其X射线粉末衍射图(XRPD图)如图1所示。

用热重分析仪(TGA，型号TAQ500)测量AHU-377钙盐晶型I热失重情况。测量条件为从室温加热到400℃，升温速率为10℃每分钟，加热在氮气气氛下进行，氮气流量为50mL每分钟。AHU-377钙盐晶型I的TGA图如图2所示。在100℃以内失重为10％，与AHU377半钙盐三水合物理论失重近似(理论失重为11％)因此可以判断AHU-377钙盐晶型I为AHU377半钙三水晶合物。

实施例2

称取50mg(0.12mmol)AHU-377游离酸(油状)置于10.0mL圆底烧瓶中，加入1.0mL异丙醇，搅拌溶清，加入0.25mL浓度为0.50mmol/mL的醋酸钠水溶液，搅拌反应12小时，加入0.15mL浓度为0.5mmol/mL的溴化钙水溶液，然后再加5mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与如图1一致。

实施例3

称取50mg(0.12mmol)AHU-377游离酸(油状)置于10.0mL圆底烧瓶中，加入0.5mL四氢呋喃，搅拌溶清，加入1.0mL浓度为0.10mmol/mL的碳酸氢钾水溶液，搅拌反应12小时，加入0.25mL浓度为0.5mmol/mL的氯化钙水溶液溶液，然后再加5mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与如图1一致。

实施例4

称取50mg(0.12mmol)AHU-377游离酸(油状)置于10.0mL圆底烧瓶中，加入0.3mLN，N-二甲基甲酰胺，搅拌溶清，加入0.65mL浓度为0.20mmol/mL的丙酸钾水溶液，搅拌反应12小时，加入0.30mL浓度为0.5mmol/mL的氯化钙水溶液，然后再加5mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与如图1一致。

实施例5

称取50mg(0.12mmol)AHU-377游离酸(油状)置于10.0mL圆底烧瓶中，加入1.0mL乙醇，加热至60℃搅拌溶清，加入1.4mL浓度为0.10mmol/mL的碳酸氢钾水溶液，搅拌反应12小时，加入0.15mL浓度为0.5mmol/mL的乳酸钙水溶液，然后再加5mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与如图1一致。

实施例6

称取50mg(0.12mmol)AHU-377游离酸(油状)置于10.0mL圆底烧瓶中，加入1.0mL乙腈，加热至40℃搅拌溶清，加入1.3mL浓度为0.10mmol/mL的苯甲酸钠水溶液，搅拌反应12小时，加入0.2mL浓度为0.5mmol/mL的乳酸钙水溶液，然后再加5mL的水，搅拌24小时使其充分反应。固液分离得到AHU-377钙盐晶型I，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与如图1一致。

实施例7

称取20mgAHU-377钙盐晶型I，在热重分析仪中，加热至90℃，自然降温后，迅速取出，用XRPD检测晶型，其X射线粉末衍射图(XRPD图)基本与图3一致。

实施例8

组分	每单位的组成(mg)	组成(％)
			AHU-377钙盐晶型I	150	46.87
微晶纤维素	32	10.0
			聚维酮	70	21.88
交联聚乙烯吡咯烷酮	21.6	6.75
			胶态二氧化硅	3.2	1.0
硬脂酸镁	3.2	1.0
			总重量	320	100.0

首先将硬脂酸镁、胶态二氧化硅和微晶纤维素通过30目筛进行筛分。然后将上述混合物、活性成分AHU-377钙盐晶型I、交联聚乙烯吡咯烷酮和聚维酮在料斗混合机中混合约120转。使用滚压机用30kN的压力压制所述混合物。压制后，使用研磨机研磨所述混合物并经18目筛筛分，得到最终的内相或颗粒。将颗粒灌装于胶囊，制成胶囊剂。

实施例9

组分	每单位的组成(mg)	组成(％)
			AHU-377钙盐晶型I	96	30.0
微晶纤维素	96	30.0
			低取代羟丙基纤维素	32	10.0

交联聚乙烯吡咯烷酮	89.6	28.0
			胶态二氧化硅	3.2	1.0
硬脂酸镁	3.2	1.0
			总重量	320	100

首先通过40目筛筛分所述活性成分AHU-377钙盐晶型I。向活性成分中加入微晶纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮，通过20目筛筛分该混合物。然后将该混合物在料斗混合机中混合旋转约100转。然后将低取代羟丙基纤维素和胶态二氧化硅加入料斗混合机中，再使其旋转100转。最后加入硬脂酸镁。然后将粉末状混合物压缩成片。

制剂的稳定性及溶出检测

将实施例8的胶囊和实施例9的片剂分别置不同条件下，考察制剂的稳定性，结果如下表所示：

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制本发明，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (21)

1.一种AHU-377半钙盐晶型，其X射线粉末衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，或其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

2.一种AHU-377半钙盐三水合物晶型，其X射线粉末衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于14.74±0.2°,15.42±0.2°,7.82±0.2°,19.42±0.2°,16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；更优选其X射线粉末衍射图与图1中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。

3.一种AHU-377半钙盐无水晶型，其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于20.48±0.2°,14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；更优选其X射线粉末衍射图与图3中显示的衍射角(2θ)处的峰基本上相同。

4.一种AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤，

1)将AHU-377游离酸溶解或混悬在合适的溶剂中，与等量或过量可溶于该体系的苛性碱或弱碱性钠盐或钾盐相混合制备生成AHU-377相应的盐，优选的，与等量或过量的弱碱性钠盐或钾盐相混合；

2)将上述AHU-377盐体系与水溶性钙盐在水或含机溶剂的水体系中相混合，产生AHU-377钙盐沉淀；

3)收集上述成盐反应过程中产物得到AHU-377半钙盐三水合物晶型；

步骤1)所述合适的溶剂为结晶溶剂，包括水、水溶性溶剂或其混合物。

5.根据权利要求4所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，其特征在于，所述水溶性溶剂选自醇类、酮类、环醚类、酰胺类、亚砜类有机溶剂或其混合物，优选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、乙腈、丙酮、甲乙酮、四氢呋喃、二氧六环、N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜或其混合物。

6.根据权利要求4所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，其特征在于，步骤1)所述苛性碱为氢氧化钠或氢氧化钾，所述弱碱性钠盐选自碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸钠、甲酸钠、丙酸钠、丙烯酸钠、苯甲酸钠或其混合物，优选碳酸氢钠、醋酸钠或其混合物，所述弱碱性钾盐选自碳酸钾、碳酸氢钾、醋酸钾、甲酸钾、丙酸钾、丙烯酸钾、苯甲酸钾或其混合物，优选碳酸氢钾、醋酸钾或其混合物；步骤2)所述水溶性钙盐选自氯化钙、溴化钙、碘化钙、硝酸钙、氯酸钙、次氯酸钙，高氯酸钙、乳酸钙、葡萄糖酸钙或其混合物，优选自氯化钙、氯酸钙或其混合物。

7.根据权利要求4所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型的制备方法，其特征在于，步骤3)所得到的AHU-377钙盐晶型I其粉末X射线衍射图包括位于12.70±0.2°,7.32±0.2°,15.90±0.2°和18.56±0.2°的衍射角(2θ)处的峰，优选其X射线粉末衍射图还包括位于14.74±0.2°,15.42±0.2°,7.82±0.2°,19.42±0.2°,16.64±0.2°和17.54±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

8.一种AHU-377半钙盐无水晶型的制备方法，其特征在于，将AHU-377半钙盐三水合物加热到50℃以上，使其脱水转变成无水晶型；优选加热温度范围在50-100℃。

9.根据权利要求8所述的AHU-377半钙盐无水晶型的制备方法，其特征在于，所得到的AHU-377半钙盐无水晶型其X射线粉末衍射图包括位于4.02±0.2°,3.62±0.2°和17.82±0.2°的衍射角(2θ)处的峰；优选其X射线粉末衍射图还包括位于20.48±0.2°,14.50±0.2°和19.66±0.2°的衍射角(2θ)处的峰。

10.一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377半钙盐晶型、权利要求2所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型或权利要求3所述的AHU-377半钙盐无水晶型以及药学上可接受的载体或赋形剂。

11.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述可药用载体或赋形剂选自稀释剂或填充剂、崩解剂、粘合剂、助流剂、润滑剂、着色剂或其组合。

12.根据权利要求11所述的药物组合物，其特征在于，所述稀释剂或填充剂选自糖粉、可压缩糖、葡萄糖、蔗糖、乳糖、糊精、甘露醇、微晶纤维素、山梨醇、淀粉或其组合，稀释剂或填充剂的用量为组合物重量的4.0％～60.0％，优选10.0％～40.0％；所述崩解剂选自淀粉、粘土、纤维素、藻酸盐、树胶、交联聚合物、大豆多糖、瓜尔胶或其组合，所述交联聚合物优选自交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钙或其组合，崩解剂的用量为组合物重量的0％～65.0％，优选1.0％～40.0％；所述粘合剂选自淀粉、纤维素及其衍生物、蔗糖、葡萄糖、玉米糖浆、明胶、聚维酮或其组合，所述纤维素及其衍生物优选自微晶纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素或其组合；更优选羟丙基纤维素；最优选低取代羟丙基纤维素，粘合剂的用量为组合物重量的1.0％～60.0％，优选5.0％～40.0％，更优选10.0％～30.0％；所述助流剂或润滑剂选自胶态二氧化硅、三硅酸镁、淀粉、滑石粉、正磷酸钙、硬脂酸镁、硬脂酸铝、硬脂酸钙、碳酸钙、氧化镁、聚乙二醇、粉状纤维素、山嵛酸甘油酯、硬脂酸、氢化蓖麻油、单硬脂酸甘油酯、硬脂酰醇富马酸钠或其组合，助流剂或润滑剂的用量为组合物重量的0％～10.0％，优选0.5％～5.0％。

13.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物进一步包括利尿剂；所述利尿剂选自呋塞米、依他尼酸、布美他尼、托拉塞米、氢氯噻嗪、氯噻酮、苄氟噻嗪、环戊噻嗪、泊利噻嗪、美托拉宗、吲达帕胺或其组合；利尿剂的用量为组合物重量的0.1％～10.0％，优选0.5％～5.0％。

14.根据权利要求10-13中任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物可以制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂。

15.根据权利要求14所述的药物组合物，其特征在于，所述胶囊剂组分配比如下：

组分 名称 重量百分比 (ⅰ) AHU-377钙盐晶型I 5.0％～50.0％ (ⅱ) 稀释剂或填充剂 10.0％～40.0％ (ⅲ) 崩解剂 1.0％～40.0％ (ⅳ) 粘合剂 10.0％～30.0％ (ⅴ) 助流剂或润滑剂 0.5％～5.0％

16.根据权利要求14所述的药物组合物，其特正在于，所述胶囊剂组分配比如下：

组分 名称 重量百分比 (ⅰ) AHU-377钙盐晶型I 20.0％～50.0％ (ⅱ) 稀释剂或填充剂 10.0％～30.0％ (ⅲ) 崩解剂 5.0％～30.0％ (ⅳ) 粘合剂 10.0％～30.0％ (ⅴ) 助流剂或润滑剂 1.0％～5.0％ (ⅵ) 利尿剂 0.5％～5.0％

17.一种权利要求1所述的AHU-377半钙盐晶型、权利要求2所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型或权利要求3所述的AHU-377半钙盐无水晶型，或包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377半钙盐晶型、权利要求2所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型或权利要求3所述的AHU-377半钙盐无水晶型的药物组合物在制备治疗或预防与中性内肽酶有关的疾病、心血管、抗高血压的药物中的用途，所述抗高血压的药物选自抗恶性高血压、原发性高血压、肾血管性高血压、糖尿病性高血压、单纯收缩期高血压或其它继发性高血压药物。

18.一种权利要求1所述的AHU-377半钙盐晶型、权利要求2所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型或权利要求3所述的AHU-377半钙盐无水晶型，或包含治疗有效剂量的权利要求1所述的AHU-377半钙盐晶型、权利要求2所述的AHU-377半钙盐三水合物晶型或权利要求3所述的AHU-377半钙盐无水晶型的药物组合物在制备治疗或预防急慢性心衰或有害的血管重构药物中的用途，优选的，所述急慢性心衰选自充血性心衰、左心室机能障碍、肥厚性心肌病、糖尿病性心肌病、室上性和室性心律不齐、心房纤维颤动、心房扑动。

19.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂。

20.根据权利要求19所述的药物组合物，其特征在于，所述血管紧张素Ⅱ拮抗剂选自洛沙坦、厄贝沙坦、奥美沙坦、替米沙坦、缬沙坦、阿齐沙坦、坎地沙坦、依普罗沙坦、氯沙坦、沙普利沙坦、依利沙坦、他索沙坦、艾利沙坦或其可药用盐；优选自缬沙坦、阿齐沙坦或其可药用盐。

21.权利要求10或权利要求19所述的药物组合物在制备治疗或预防心肌梗塞及其后遗症、动脉粥样硬化、心绞痛、糖尿病性或非糖尿病性肾机能不全、继发性醛固酮增多症、原发性或继发性肺高血压、糖尿病性肾病、肾小球肾炎、硬皮病、肾小球硬化、原发性肾病的蛋白尿、肾血管高血压、糖尿病性视网膜病、偏头痛、外周血管病、雷诺氏病、腔的增生、认知机能障碍、青光眼或中风药物中的用途。