CN105368786B - 分泌鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种分泌鸭1型甲肝病毒亚型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A2,保藏号为：CGMCC NO.:10420。本发明以纯化的鸭1型甲肝病毒亚型灭活的全病毒抗原三次免疫小鼠后，再用其VP1蛋白加强免疫；将针对鸭1型甲肝病毒亚型抗体效价最高的小鼠取脾细胞，与SP2/0骨髓细胞进行融合，筛选获得抗鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白杂交瘤细胞株1A2。用本发明方法制备获得的单克隆抗体1A2具有特异性强、效价高、稳定性好等特点，可应用于制备鸭1型甲肝病毒亚型抗体检测试剂。

Description

分泌鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株

技术领域

本发明涉及于鸭1型甲肝病毒亚型的病原学领域，尤其涉及一种分泌鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

鸭1型甲肝病毒（duck hepatitis A virus 1，DHAV-1）是小RNA病毒科（Pacornaviridae）禽肝病毒属（Avihepatovirus）的成员之一，主要侵害6周龄左右的雏鸭，以发病急、病程短、致死率高和病死鸭呈角弓反张等为临床症状，以肝脏肿大和出血为肉眼病变特征。

2005年Guérin等自表现胰腺炎和脑炎的番鸭中分离到鸭1型甲肝病毒，而发病鸭肝脏未出现肿大出血病变。

011年9月，我国的福建、浙江、上海、广东等省份相继出现10-30日龄雏番鸭、半番鸭以胰腺泛黄、出血（俗称胰腺炎）为特征的疫病，其发病率和病死率分别达10%-30%、25%-40%。

本研究室对患该病的雏番鸭病例开展了病原学研究，并对已分离到的病毒进行蚀斑纯化、形态特征、全基因组测序与分析、生物学及理化学特性和动物致病性试验等一系列相关研究，结果发现该病毒粒子呈球形、直径为30-40 nm；其全基因组序列与DHAV-1参考毒株核苷酸序列和氨基酸同源性分别介于93.5%-99.6%和97.9%-99.6%之间，结构蛋白VP1基因与经典肝炎型的DHAV-1 VP1基因序列同源性较高；其致病性与经典肝炎型的鸭1型甲肝病毒存在明显差异，主要引起胰腺出血、发黄。

综合以上研究确定其病原为胰腺炎型鸭1型甲肝病毒，即胰腺炎型DHAV-1。

但经鸭胚交叉中和试验测定发现，胰腺炎型DHAV-1与肝炎型DHAV-1的抗原相关R值为0.62，处于0.32~0.7之间，表明胰腺炎型DHAV-1属于鸭1型甲肝病毒的亚型，即DHAV-1a。

而近年来，新发现的鸭1型甲肝病毒的亚型给我国水禽疫病的防控带来更大的难度。

然而，目前还没有单克隆抗体用于鸭1型甲肝病毒的亚型检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了解决现没有鸭1型甲肝病毒的亚型单克隆抗体，未能用于鸭1型甲肝病毒的亚型检测及治疗的问题，而提供了一种鸭1型甲肝病毒的亚型单克隆抗体的制备方法和一种分泌鸭1型甲肝病毒亚型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A2；其保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；

分类命名：抗鸭1型甲肝病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株 ；

保藏日期为：2015年4月10日；

保藏号为：CGMCC No.10420 ；

以及采用权利1所属的菌株制备的鸭1型甲肝病毒亚型抗体检测试剂。

鸭1型甲肝病毒的亚型单克隆的制备方法按以下步骤实现：

一、免疫原的制备

即鸭1型甲肝病毒亚型灭活后进行超速离心纯化，作为免疫抗原。利用鸭成纤维细胞繁殖500mL鸭1型甲肝病毒亚型，收集细胞培养液，离心去除细胞沉淀后，以浓度为0.3%的甲醛进行灭活，而后添加适量的氯仿进行过夜处理，经10000rpm离心15min，收集上清，接着25000rpm离心1h去除沉淀后再40000rpm离心3h收集沉淀即可获得较高纯度的免疫原。

二、动物免疫

取体重为10~12g的12周龄的SPF雌性BALB/C小鼠5只进行免疫；首次免疫用鸭1型甲肝病毒亚型与等量弗氏完全佐剂混合，混匀振荡器乳化完全后，以100µg/只的剂量进行背部皮下多点注射，每间隔2周换用鸭1型甲肝病毒亚型与等量弗氏不完全佐剂进行加强免疫，第三次免疫后，采集血清测定血清效价，加强免疫直至血清效价达到1:100000为止；在融合前三天以100µg的VP1蛋白进行强化免疫。

三．杂交瘤细胞株的建立

1、骨髓瘤细胞悬液的制备

融合前48h，将SP2/0骨髓瘤细胞扩大培养于直径为9cm的细胞培养皿中，每块加10mL含10%血清DMEM培养液，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养；融合当天，选择形态良好、呈对数生长的SP2/0细胞，将其从瓶壁上轻轻吹下，收集于50 mL离心管内，1000r/min离心5min，弃上清；用不完全DMEM培养液混匀细胞后计数，取所需细胞数，用不完全DMEM培养液洗2次，以10mL不完全DMEM培养液重新悬浮备用。

2、饲养细胞的制备

在融合前2d，取1只健康未免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，拉颈脱臼处死，将小鼠尸体于75%酒精中浸泡消毒5min，随即移入无菌操作台内，腹部朝上固定在解剖板上；在小鼠左侧腹壁剪一小口，撕开皮肤，用灭菌镊子提起腹膜，剪开左侧腹膜及肋骨，暴露脾脏，换用另一套灭菌器械，用镊子提起脾脏，取出脾脏置于灭菌的平皿中，用不完全DMEM培养液轻轻洗3次，并剥去周围的结缔组织；将脾脏移入另一灭菌平皿中，置于200目铜网上，用灭菌的西林瓶底部挤压研磨脾脏，并用不完全DMEM培养液轻轻冲洗铜网，使脾细胞全部通过铜网压挤到溶液中；将脾细胞溶液转至50mL离心管中，加不完全培养液至20mL，混匀；1000r/min离心5min，弃上清；沉淀细胞再用不完全DMEM培养液同法离心洗涤一次；先用5mL HAT培养液将沉淀细胞悬浮并混匀，作细胞计数，然后根据细胞计数结果，补加HAT培养液至30mL，使细胞浓度为2×10⁵个/mL；将细胞悬液滴于6块96孔细胞培养板中，每孔50μL，然后将培养板置37℃、含5%CO₂培养箱内培养24h后观察细胞生长状态，细胞呈多形性，贴壁，折光性好时即可使用。

3、免疫淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合

取加强免疫3 d后的BABL/c小鼠，摘除眼球采血；按照上述的操作方法制备脾细胞悬液；将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10的比例混合在一起，转入50mL离心管内，1000r/min离心10min，弃上清，用滴管吸净残留液体；用滴管轻轻搅动沉淀，使其松散均匀成糊状；在37℃水浴中融合：一手均匀地转动离心管，另一手用吸管吸取PEG4000溶液1mL，并沿转动的管壁（尽量接近细胞处）加入，从加入到加完的时间控制在1min左右，边加边搅动，用吸管在1min内加入1mL预热至37℃不完全DMEM培养液 ，重复3次，往后每分钟加入3mL，直至加满到25mL为止（注意此时操作应轻柔，边转动边加，尽量不搅散细胞）；37℃培养箱静置10min，800r/min离心10min，弃上清；加入10mL HAT培养液，轻轻吹吸混匀；根据所用96孔培养板的数量，按一块96孔培养板用液15mL计算补加HAT培养液至所需的量；将融合好的细胞悬液加入含有饲养细胞的96孔板，每孔150µL（相当于3滴），37℃、5%CO₂培养箱内培养。

4、杂交瘤细胞的选择性培养及观察

将融合后的细胞悬浮于HAT培养液中，置于37℃、5%CO₂的培养箱内培养。根据情况，每5d半换液1次，第11d改换同量的HT培养液，维持2周。仔细观察融合细胞的生长情况，凡有污染的孔立即滴加1%的NaOH，以免污染扩散，如果细胞生长太慢可补加1次饲养细胞。细胞融合后的3d内不提倡在CO₂培养箱外长时间的观察，因为培养箱外温度和CO₂浓度的不适会影响融合细胞的生长。

5、阳性杂交瘤细胞的筛选

待融合后的细胞克隆生长到覆盖细胞孔底部l/10时，用间接ELISA方法对所有有克隆生长的培养上清进行检测，检测为阳性的细胞进行克隆并扩大培养，选出阳性和特异性最强的孔进行克隆，并注意随时冻存保种。用间接ELISA方法和系列稀释法进行筛选，经过4次亚克隆，直至所有克隆化细胞检测阳性率为100%，获得1株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为1A2。

6、阳性杂交瘤细胞的克隆

对筛选所获得的阳性杂交瘤细胞孔以有限稀释法进行克隆，以获取能稳定分泌抗体的单克隆孔。具体步骤如下：

克隆前2d，按1.2.4.2方法制备小鼠饲养细胞；将96孔细胞培养板中抗体分泌阳性的杂交瘤细胞集落（强阳性孔）吹起，混匀，取适量细胞悬液至一无菌EP管中，做适当稀释，将上述EP管中细胞计数，计算细胞密度；取上述细胞悬液的130个细胞加入到6.5mL含20%胎牛血清的HT培养液（初次克隆）或完全培养液，即20个细胞/mL，100μL/孔加A、B、C三排为每孔2个细胞，余下2.9mL细胞悬液补加2.9mL含20%胎牛血清的HT培养液或完全培养液，细胞数为10个细胞/mL，100μL/孔加D、E、F三排，为00μL；适时观察细胞的生长状况，待细胞集落生长到孔底1/10面积时半换液，并用所换出的培养液上清进行抗体检测；选择OD值高、细胞活力好、只有一个细胞集落的孔再次克隆和亚克隆，同时每次将克隆剩余细胞转入24孔细胞培养板培养（并在原孔中补加另一批培养基，以防二者同时污染或细胞死亡），继而转入6孔板和普通细胞培养皿中进行扩大培养，并及时冻存；经过多次克隆操作，直至所有克隆的细胞孔检测阳性率为100%时，即可确定已获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株；获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后，及时进行扩大培养并冻存。

四、腹水的制备

选取12周龄SPF雌性BALB/C小鼠腹腔注射0.4 mL/只的弗氏不完全佐剂；1周后每只小鼠注射5×10⁵个杂交瘤细胞；至10~12d，观察小鼠腹部明显隆起时，抽取腹水，离心后吸取上清液，小管分装保存于-80℃；采用饱和硫酸铵法提纯单克隆抗体。

五、单克隆抗体的生物学特性的鉴定：

1、单抗效价的测定

采用间接ELISA方法测定。用纯化的鸭1型甲肝病毒亚型包被酶标板，将腹水从1:100倍开始做倍比稀释，同时以阴性腹水做同等稀释度作为对照，以平行稀释的单抗OD_450nm+OD_630nm /对照OD_450nm+OD_630nm比值大于2的最高稀释倍数为单抗的效价。

测定其效价为1：10⁵。

2、单抗亚型的鉴定

按Hycult biotechnology公司的Mouse mab Isotyping Test Kit (10 assaykit)的说明书进行结果确定单克隆抗体经鉴定为IgG1（κ）。

3、单抗特异性鉴定

（1）交叉性ELISA检测

采用间接ELISA方法测定单克隆抗体的特异性，用纯化的鸭1型甲肝病毒亚型包被酶标板，将单抗腹水作一定倍数稀释，同时设立阴性和空白对照；采用间接ELISA方法测定单克隆抗体与坦布苏病毒、小鹅瘟、鸭瘟、番鸭细小病毒和鸭疫的阳性血清进行交叉反应，结果显示只有单克隆抗体为阳性，其他病毒的阳性血清为阴性。

（2）Western-blotting鉴定单抗

将从含鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白的凝胶转移至PVDF膜，然后进行以下操作：

封闭：电转完毕后，将PVDF膜作好标记，放入大小适当的玻璃平皿中，用5%脱脂奶粉-TBS 12℃封闭过夜；以TBS洗涤3次，每次10min；加一抗：将一定倍数稀释的单抗腹水加入1%脱脂奶粉-TBS中，加入量以完全覆盖膜为准并尽量排出气泡，37℃摇床孵育8h；同上洗涤；加二抗：将辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（1：500稀释）加入1%脱脂奶粉-TBS中，缓慢振摇过夜；同上洗涤；显色：称取10mg DAB溶于20mL TBS中，过滤后加入20µL浓度为30%的H₂O₂，将PVDF膜置于显色液中显色，待出现特异的反应条带后，立即浸入双蒸水中洗膜终止反应。用吸水纸吸干膜上水分，避光干燥保存。结果显示：重组蛋白的跑道出现一条特异性条带表明单抗与鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白发生特异性反应，而未诱导表达的重组菌跑道未见明显的条带，说明单抗不与未诱导表达的重组菌发生反应。

本发明的有益效果：

本发明抗鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体的制备方法简单、效果好，为建立一种灵敏、特异、快速、操作简单且适合于大批量样品的检测方法储备条件；本发明抗鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体的效价高达1:100000，纯化方法简单，且纯度高；本发明以抗鸭1型甲肝病毒亚型单克隆抗体为基础，建立鸭1型甲肝病毒亚型免疫学检测方法，为快速检测鸭1型甲肝病毒亚型奠定了基础。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明一种分泌鸭1型甲肝病毒亚型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A2；其保藏号为：CGMCC No.10420。

采用权利1所属的菌株制备的鸭1型甲肝病毒亚型抗体检测试剂。

鸭1型甲肝病毒的亚型单克隆的制备方法按以下步骤实现：

一、免疫原的制备

即鸭1型甲肝病毒亚型灭活后进行超速离心纯化，作为免疫抗原。利用鸭成纤维细胞繁殖500mL鸭1型甲肝病毒亚型，收集细胞培养液，离心去除细胞沉淀后，以浓度为0.3%的甲醛进行灭活，而后添加适量的氯仿进行过夜处理，经10000rpm离心15min，收集上清，接着25000rpm离心1h去除沉淀后再40000rpm离心3h收集沉淀即可获得较高纯度的免疫原。

二、动物免疫

取体重为10~12g的12周龄的SPF雌性BALB/C小鼠5只进行免疫；首次免疫用鸭1型甲肝病毒亚型与等量弗氏完全佐剂混合，混匀振荡器乳化完全后，以100µg/只的剂量进行背部皮下多点注射，每间隔2周换用鸭1型甲肝病毒亚型与等量弗氏不完全佐剂进行加强免疫，第三次免疫后，采集血清测定血清效价，加强免疫直至血清效价达到1:100000为止；在融合前三天以100µg的VP1蛋白进行强化免疫。

三、杂交瘤细胞株的建立

1、骨髓瘤细胞悬液的制备

融合前48h，将SP2/0骨髓瘤细胞扩大培养于直径为9cm的细胞培养皿中，每块加10mL含10%血清DMEM培养液，置于37℃、5％CO₂培养箱中培养；融合当天，选择形态良好、呈对数生长的SP2/0细胞，将其从瓶壁上轻轻吹下，收集于50 mL离心管内，1000r/min离心5min，弃上清；用不完全DMEM培养液混匀细胞后计数，取所需细胞数，用不完全DMEM培养液洗2次，以10mL不完全DMEM培养液重新悬浮备用。

2、饲养细胞的制备

在融合前2d，取1只健康未免疫6周龄的雌性BALB/c小鼠，拉颈脱臼处死，将小鼠尸体于75%酒精中浸泡消毒5min，随即移入无菌操作台内，腹部朝上固定在解剖板上；在小鼠左侧腹壁剪一小口，撕开皮肤，用灭菌镊子提起腹膜，剪开左侧腹膜及肋骨，暴露脾脏，换用另一套灭菌器械，用镊子提起脾脏，取出脾脏置于灭菌的平皿中，用不完全DMEM培养液轻轻洗3次，并剥去周围的结缔组织；将脾脏移入另一灭菌平皿中，置于200目铜网上，用灭菌的西林瓶底部挤压研磨脾脏，并用不完全DMEM培养液轻轻冲洗铜网，使脾细胞全部通过铜网压挤到溶液中；将脾细胞溶液转至50mL离心管中，加不完全培养液至20mL，混匀；1000r/min离心5min，弃上清；沉淀细胞再用不完全DMEM培养液同法离心洗涤一次；先用5mL HAT培养液将沉淀细胞悬浮并混匀，作细胞计数，然后根据细胞计数结果，补加HAT培养液至30mL，使细胞浓度为2×10⁵个/mL；将细胞悬液滴于6块96孔细胞培养板中，每孔50μL，然后将培养板置37℃、含5%CO₂培养箱内培养24h后观察细胞生长状态，细胞呈多形性，贴壁，折光性好时即可使用。

3、免疫淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞的融合

取加强免疫3 d后的BABL/c小鼠，摘除眼球采血；按照上述的操作方法制备脾细胞悬液；将骨髓瘤细胞与脾细胞按1：10的比例混合在一起，转入50mL离心管内，1000r/min离心10min，弃上清，用滴管吸净残留液体；用滴管轻轻搅动沉淀，使其松散均匀成糊状；在37℃水浴中融合：一手均匀地转动离心管，另一手用吸管吸取PEG4000溶液1mL，并沿转动的管壁（尽量接近细胞处）加入，从加入到加完的时间控制在1min左右，边加边搅动，用吸管在1min内加入1mL预热至37℃不完全DMEM培养液 ，重复3次，往后每分钟加入3mL，直至加满到25mL为止（注意此时操作应轻柔，边转动边加，尽量不搅散细胞）；37℃培养箱静置10min，800r/min离心10min，弃上清；加入10mL HAT培养液，轻轻吹吸混匀；根据所用96孔培养板的数量，按一块96孔培养板用液15mL计算补加HAT培养液至所需的量；将融合好的细胞悬液加入含有饲养细胞的96孔板，每孔150µL（相当于3滴），37℃、5%CO₂培养箱内培养。

4、杂交瘤细胞的选择性培养及观察

将融合后的细胞悬浮于HAT培养液中，置于37℃、5%CO₂的培养箱内培养。根据情况，每5d半换液1次，第11d改换同量的HT培养液，维持2周。仔细观察融合细胞的生长情况，凡有污染的孔立即滴加1%的NaOH，以免污染扩散，如果细胞生长太慢可补加1次饲养细胞。细胞融合后的3d内不提倡在CO₂培养箱外长时间的观察，因为培养箱外温度和CO₂浓度的不适会影响融合细胞的生长。

5、阳性杂交瘤细胞的筛选

待融合后的细胞克隆生长到覆盖细胞孔底部l/10时，用间接ELISA方法对所有有克隆生长的培养上清进行检测，检测为阳性的细胞进行克隆并扩大培养，选出阳性和特异性最强的孔进行克隆，并注意随时冻存保种。用间接ELISA方法和系列稀释法进行筛选，经过4次亚克隆，直至所有克隆化细胞检测阳性率为100%，获得1株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

6、阳性杂交瘤细胞的克隆

对筛选所获得的阳性杂交瘤细胞孔以有限稀释法进行克隆，以获取能稳定分泌抗体的单克隆孔。具体步骤如下：

克隆前2d，按1.2.4.2方法制备小鼠饲养细胞；将96孔细胞培养板中抗体分泌阳性的杂交瘤细胞集落（强阳性孔）吹起，混匀，取适量细胞悬液至一无菌EP管中，做适当稀释，将上述EP管中细胞计数，计算细胞密度；取上述细胞悬液的130个细胞加入到6.5mL含20%胎牛血清的HT培养液（初次克隆）或完全培养液，即20个细胞/mL，100μL/孔加A、B、C三排为每孔2个细胞，余下2.9mL细胞悬液补加2.9mL含20%胎牛血清的HT培养液或完全培养液，细胞数为10个细胞/mL，100μL/孔加D、E、F三排，为00μL；适时观察细胞的生长状况，待细胞集落生长到孔底1/10面积时半换液，并用所换出的培养液上清进行抗体检测；选择OD值高、细胞活力好、只有一个细胞集落的孔再次克隆和亚克隆，同时每次将克隆剩余细胞转入24孔细胞培养板培养（并在原孔中补加另一批培养基，以防二者同时污染或细胞死亡），继而转入6孔板和普通细胞培养皿中进行扩大培养，并及时冻存；经过多次克隆操作，直至所有克隆的细胞孔检测阳性率为100%时，即可确定已获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株；获得稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后，及时进行扩大培养并冻存。

四、腹水的制备

选取12周龄SPF雌性BALB/C小鼠腹腔注射0.4 mL/只的弗氏不完全佐剂；1周后每只小鼠注射5×10⁵个杂交瘤细胞；至10~12d，观察小鼠腹部明显隆起时，抽取腹水，离心后吸取上清液，小管分装保存于-80℃；采用饱和硫酸铵法提纯单克隆抗体。

五、单克隆抗体的生物学特性的鉴定：

1、单抗效价的测定

采用间接ELISA方法测定。用纯化的鸭1型甲肝病毒亚型包被酶标板，将腹水从1:100倍开始做倍比稀释，同时以阴性腹水做同等稀释度作为对照，以平行稀释的单抗OD_450nm+OD_630nm /对照OD_450nm+OD_630nm比值大于2的最高稀释倍数为单抗的效价。

测定其效价为1：10⁵。

2、单抗亚型的鉴定

按Hycult biotechnology公司的Mouse mab Isotyping Test Kit (10 assaykit)的说明书进行结果确定单克隆抗体经鉴定为IgG1（κ）。

3、单抗特异性鉴定

（1）交叉性ELISA检测

采用间接ELISA方法测定单克隆抗体的特异性，用纯化的鸭1型甲肝病毒亚型包被酶标板，将单抗腹水作一定倍数稀释，同时设立阴性和空白对照；采用间接ELISA方法测定单克隆抗体与坦布苏病毒、小鹅瘟、鸭瘟、番鸭细小病毒和鸭疫的阳性血清进行交叉反应，结果显示只有单克隆抗体为阳性，其他病毒的阳性血清为阴性。

（2）Western-blotting鉴定单抗

将从含鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白的凝胶转移至PVDF膜，然后进行以下操作：

封闭：电转完毕后，将PVDF膜作好标记，放入大小适当的玻璃平皿中，用5%脱脂奶粉-TBS 12℃封闭过夜；以TBS洗涤3次，每次10min；加一抗：将一定倍数稀释的单抗腹水加入1%脱脂奶粉-TBS中，加入量以完全覆盖膜为准并尽量排出气泡，37℃摇床孵育8h；同上洗涤；加二抗：将辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG（1：500稀释）加入1%脱脂奶粉-TBS中，缓慢振摇过夜；同上洗涤；显色：称取10mg DAB溶于20mL TBS中，过滤后加入20µL浓度为30%的H₂O₂，将PVDF膜置于显色液中显色，待出现特异的反应条带后，立即浸入双蒸水中洗膜终止反应。用吸水纸吸干膜上水分，避光干燥保存。结果显示：重组蛋白的跑道出现一条特异性条带表明单抗与鸭1型甲肝病毒亚型VP1蛋白发生特异性反应，而未诱导表达的重组菌跑道未见明显的条带，说明单抗不与未诱导表达的重组菌发生反应。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。

凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种分泌鸭1型甲肝病毒亚型的单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A2；保藏号为：CGMCCNO.:10420。

2.一种鸭1型甲肝病毒亚型抗体检测试剂，其特征在于，采用权利要求1所述的细胞株制备而成。