CN105164098A

CN105164098A - 曲前列环素的固体形式

Info

Publication number: CN105164098A
Application number: CN201480011253.7A
Authority: CN
Inventors: 肯尼斯·法尔斯; 迈克尔·斯坎内尔
Original assignee: United Therapeutics Corp
Current assignee: United Therapeutics Corp
Priority date: 2013-03-14
Filing date: 2014-03-07
Publication date: 2015-12-16
Also published as: KR20150126908A; US10167247B2; CA3212313A1; WO2014159050A1; CA3125504C; JP2016517410A; EP2970091A4; IL240677A0; US20180072649A1; CA3125504A1; IL269227B; CA2905720A1; US20140275262A1; EP2970091A1; KR102347340B1; CA2905720C; IL269227A; US9822057B2

Abstract

本发明提供了曲前列环素的各个多晶型形式以及包含所述形式的药物制剂、制备和使用所述形式的方法。所述多晶型形式包含结晶曲前列环素一水合物晶型A、结晶曲前列环素一水合物晶型B、以及曲前列环素晶型C。本发明提供了制备这些形式的方法、通过差示扫描量热（DSC）的它们的表征。

Description

曲前列环素的固体形式

相关申请

本申请要求2013年3月14日提交的美国临时专利申请61/781,303号的优先权，其全文以引用的方式并入本文中。

技术领域

本申请大体涉及前列环素衍生物的固体形式，并且特别地，涉及曲前列环素（treprostinil）的固体形式及其制备和使用方法。

发明内容

一个实施方式是结晶曲前列环素一水合物晶型A，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在11.6、16.2和20.0 °2θ± 0.2 °2θ的峰，并且除了残留溶剂之外具有至少90%的纯度。在另一个实施方式中，所述衍射图进一步包含在5.2、21.7和27.7 °2θ± 0.2 °2θ的峰。在另一个实施方式中，所述衍射图基本上是如在图2中示出的。

另一个实施方式是结晶曲前列环素一水合物晶型B，其特征在于，如在1.54184 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在5.9、12.1和24.4 °2θ± 0.2 °2θ的峰，并且除了残留溶剂之外具有至少90%的纯度。在另一个实施方式中，所述衍射图包含在10.7、20.6和22.3 °2θ± 0.2 °2θ的峰。在另一个实施方式中，所述衍射图基本上是如在图9中示出的。

另一个实施方式是制备结晶曲前列环素一水合物晶型A的方法，所述方法包含：搅拌非质子性有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。

另一个实施方式是制备结晶曲前列环素一水合物晶型B的方法，所述方法包含：搅拌质子性有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。

一个实施方式是一种组合物，其实质上包含曲前列环素一水合物晶型A或曲前列环素一水合物晶型B的一种晶型。

在另一个实施方式中，提供了一种治疗医学病症的方法，所述方法包含：向有此需要的对象施用药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的曲前列环素一水合物晶型A或曲前列环素一水合物晶型B。

在一个实施方式中，进一步提供了使用曲前列环素一水合物晶型A或B以治疗医学病症的方法，其包含本领域已知来使用曲前列环素的方法，例如在以下文献中描述的：Drug of the Future, 2001, 26(4), 364-374、美国专利号5,153,222; 5,234,953; 6,521,212; 6,756,033; 6,803,386; 7,199,157; 6,054,486; 7,417,070; 7,384,978; 7,879,909; 8,563,614; 8,252,839; 8,536,363; 8,410,169; 8,232,316; 8,609,728; 8,350,079; 8,349,892; 7,999,007; 8,658,694; 8,653137；美国专利申请公开号2005/016511 1; 2009/0036465; 2008/0200449; 2010-0076083; 2012-0216801 ; 2008/0280986; 2009-0124697; 2013-0261 187。

附图说明

图1是来自曲前列环素的固体形式屏幕的独特的结晶XRPD图案的XRPD图案之间的比较。

图2是曲前列环素一水合物晶型A的X射线粉末衍射图案。

图3是曲前列环素一水合物晶型A的差示扫描量热法图谱。

图4是曲前列环素一水合物晶型A的热重图谱。

图5是曲前列环素一水合物晶型A的动态蒸汽吸附/解吸等温线。

图6是曲前列环素一水合物晶型A的红外光谱。

图7是曲前列环素一水合物晶型A的拉曼光谱。

图8是曲前列环素一水合物晶型A的固态¹³C交叉极化魔角自旋核磁共振光谱。

图9是曲前列环素一水合物晶型B的X射线粉末衍射图案。

图10是曲前列环素一水合物晶型B的差示扫描量热法图谱。

图11是曲前列环素一水合物晶型B的热重图谱。

图12是曲前列环素一水合物晶型B的动态蒸汽吸附/解吸等温线。

图13是曲前列环素一水合物晶型B的红外光谱。

图14是曲前列环素一水合物晶型B的拉曼光谱。

图15是曲前列环素一水合物晶型B的固态¹³C交叉极化魔角自旋核磁共振光谱。

图16是曲前列环素晶型C的X射线粉末衍射图案。

图17是曲前列环素晶型C的差示扫描量热法图谱。

图18是曲前列环素一水合物晶型A的ORTEP绘图。原子由50％概率的各向异性热椭圆表示。

图19是晶轴a下看的曲前列环素一水合物晶型A的堆积图。

图20是晶轴b下看的曲前列环素一水合物晶型A的堆积图。

图21是晶轴c下看的曲前列环素一水合物晶型A的堆积图。

图22是b轴下的曲前列环素一水合物晶型A中的氢键结合的通道。

图23是沿曲前列环素一水合物晶型A中的轴的氢键结合。

图24是曲前列环素一水合物晶型A的ORTEP绘图。原子由50％概率的各向异性热椭圆表示。

图25是晶轴a下看的曲前列环素一水合物晶型B的堆积图。

图26是晶轴b下看的曲前列环素一水合物晶型B的堆积图。

图27是晶轴c下看的曲前列环素一水合物晶型B的堆积图。

图28是曲前列环素一水合物晶型B的b轴下的氢键结合的螺旋。

图29是通过曲前列环素一水合物晶型B的分子之间的氢键结合的沿b轴不重复的氢键结合四聚体。

图30是两个由曲前列环素分子形成的氢键结合图案的比较。为了清楚起见没有示出水。在左边示出了闭合的四聚体，在右边示出了开放的四聚体。

图31是中间相曲前列环素的X射线粉末衍射图案。

图32是中间相曲前列环素的X射线粉末衍射图案。

详细说明

除非另有指明，否则“一”或“一个”表示“一个或多个”。

前列环素衍生物是有用的药物化合物，其具有例如抑制血小板聚集、减少胃液分泌、抑制病变和扩张支气管的活性。

曲前列环素是Remodulin^®、Tyvaso^®和Orenitram™中的活性成分，其在美国专利4,306,075中首次被描述。制备曲前列环素和其他前列环素衍生物的方法例如在Moriarty, et al in J. Org. Chem. 2004, 69, 1890-1902, Drug of the Future, 2001, 26(4), 364-374、美国专利号6,441,245, 6,528,688, 6,700,025, 6,809,223, 6,756, 117；8,461,393；8,481,782；8,242,305；8,497,393；美国专利申请号2012-0190888和2012-0197041；PCT公开号WO2012/009816中被描述。

曲前列环素的各种应用和/或各种晶型例如在美国专利号5,153,222；5,234,953；6,521,212；6,756,033；6,803,386；7,199,157；6,054,486；7,417,070；7,384,978；7,879,909；8,563,614；8,252,839；8,536,363；8,410,169；8,232,316；8,609,728；8,350,079；8,349,892；7,999,007；8,658,694；8,653137；美国专利申请公开号2005/0165111；2009/0036465；2008/0200449；2010-0076083；2012-0216801；2008/0280986；2009-0124697；2013-0261187；PCT公开号WOOO/57701；2013年3月15日提交的美国临时申请号61/791015中公开。前述引用文献的教导通过引用的方式被合并以示出如何实行本发明的实施方式。

总的来说，从医学角度来看，曲前列环素具有重要作用。因此，需要曲前列环素的稳定形式，其在例如储存、运输、搬运和配制中显示出优势。

本发明涉及曲前列环素的新形式，其包含曲前列环素一水合物和无水曲前列环素的新形式。

曲前列环素是Remodulin®的活性成分，它已经被美国FDA批准用于治疗具有YHA 等级II、III和IV症状的患者中的肺动脉高压（PAH），从而使用皮下或静脉内给药减轻与运动相关的症状。曲前列环素也是Tyvaso®吸入溶液和Orenitram™缓释片剂中的活性成分。

曲前列环素的化学名是2-((lR,2R,3aS,9aS)-2-羟基-l-((S)-3-羟基辛基)-2,3,3a,4,9,9a-六氢-lH-环戊[b]萘-5-氧基)乙酸，它具有以下结构：

。

以前例如在J. Org. Chem. 2004, 69, 1890-1902中已经描述了曲前列环素的无水形式。无水形式在室温下是不稳定的。稳定性测试显示，无水曲前列环素在25 °C下不稳定，并且在静置后形成二聚体。在更高的温度下可以形成更大量的二聚体。但是，二聚体生成在5 °C下是可以忽略不计的。因此，无水曲前列环素必须被冷藏以用于储存和运输。以往，无水曲前列环素必须被用冰袋冷藏和运输以维持低温（2°C -8°C）。

曲前列环素的一水合物以前已经在例如美国专利号8,350,079中描述，其全文以引用的形式并入本文中。曲前列环素的一水合物在以前已经被描述；但是，本文公开的曲前列环素一水合物和无水曲前列环素的多晶型没有被描述。

曲前列环素的固体形式

如上所述，本发明提供晶型A、B和晶型C的曲前列环素的固体结晶形式。发明人意外地发现，与现有技术化合物相比，晶型A更容易过滤并且更容易分离。晶型C可以在降低的压力和低于42 °C的温度下在干燥晶型A或晶型B时形成。

结晶曲前列环素一水合物晶型A的特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在11.6、16.2和20.0 °2θ± 0.2 °2θ的峰。所述衍射图包含在5.2、21.7和27.7 °2θ± 0.2 °2θ的另外的峰。晶型A还可以被表1中的一个或多个峰表征。晶型A还可以被基本上在图2中所示的其完整的X-射线粉末衍射图表征。

在一些实施方式中，晶型A的特征在于，其差示扫描量热（DSC）曲线包含在约78.3 °C的次要吸热和在约126.3 °C的主要吸热。晶型A还可以被其基本上在图3中所示的完整的DSC曲线表征。

在一个实施方式中，晶型A被制备得基本上不含结晶曲前列环素的任何其他形式。在另一个实施方式中，晶型A除了残留溶剂之外具有至少90%、95%、98%、99%或99.9%的纯度。纯度可以通过本领域已知的方法（例如NMR积分）确定。它还可以通过XRPD中对应于结晶曲前列环素的其他形式的峰的缺失或下降来确定。在一个实施方式中，结晶曲前列环素一水合物晶型A是基本上纯的形式。在一个实施方式中，晶型A是以1克至50 kg的量以一个或多个上述纯度而获得的。在一个实施方式中，晶型A是以本领域技术人员理解的足以用于曲前列环素的工业规模生产的量以一个或多个上述纯度而获得的。

结晶曲前列环素一水合物晶型B的特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在5.9、12.1和24.4 °2θ± 0.2 °2θ的峰。所述衍射图包含在10.7、20.6和22.3 °2θ± 0.2 °2θ的另外的峰。晶型B还可以被表3中的一个或多个峰表征。晶型B还可以被基本上在图9中所示的其完整的X-射线粉末衍射图表征。

在一些实施方式中，晶型B的特征在于，其差示扫描量热（DSC）曲线包含在约78.3 °C的次要吸热和在约126.3 °C的主要吸热。晶型B还可以被其基本上在图10中所示的完整的DSC曲线表征。

在一个实施方式中，晶型B被制备得基本上不含结晶曲前列环素的任何其他形式。在另一个实施方式中，晶型B除了残留溶剂之外具有至少90%、95%、98%、99%或99.9%的纯度。纯度可以通过本领域已知的方法（例如NMR积分）确定。它还可以通过XRPD中对应于结晶曲前列环素的其他形式的峰的缺失或下降来确定。在一个实施方式中，结晶曲前列环素一水合物晶型B是基本上纯的形式。在一个实施方式中，晶型B是以1克至50 kg的量以一个或多个上述纯度而获得的。在一个实施方式中，晶型B是以本领域技术人员理解的足以用于曲前列环素的工业规模生产的量以一个或多个上述纯度而获得的。

无水曲前列环素晶型C的特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Ka辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在6.55 °2θ± 0.2 °2θ的峰。晶型C还可以被表1中的一个或多个峰表征。晶型C还可以被基本上在图16中所示的其完整的X-射线粉末衍射图表征。

在一些实施方式中，晶型C的特征在于，其差示扫描量热（DSC）曲线包含在约78.3 °C的次要吸热和在约126.3 °C的主要吸热。晶型C还可以被其基本上在图17中所示的完整的DSC曲线表征。

在一个实施方式中，晶型C被制备得基本上不含结晶曲前列环素的任何其他形式。在另一个实施方式中，晶型C除了残留溶剂之外具有至少90%、95%、98%、99%或99.9%的纯度。纯度可以通过本领域已知的方法（例如NMR积分）确定。它还可以通过XRPD中对应于结晶曲前列环素的其他形式的峰的缺失或下降来确定。在一个实施方式中，结晶曲前列环素一水合物晶型C是基本上纯的形式。如通过对应的XRPD能够看到的，无水曲前列环素晶型C与多晶型曲前列环素不同。在一个实施方式中，晶型C是以1克至50 kg的量以一个或多个上述纯度而获得的。在一个实施方式中，晶型C是以本领域技术人员理解的足以用于曲前列环素的工业规模生产的量以一个或多个上述纯度而获得的。

中间相曲前列环素的特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，其X-射线粉末衍射图包含在5.0和40 °2θ± 0.2 °2θ之间的实质性的峰的缺失。中间相曲前列环素还可以被如基本上在图31-21的任何一个X-射线粉末衍射图中示出的其X-射线粉末衍射图中的一个或多个峰表征。中间相曲前列环素还可以被如基本上在图31-21的任何一个X-射线粉末衍射图中示出的其部分X-射线粉末衍射图表征。

在一个实施方式中，中间相曲前列环素被制备得基本上不含结晶曲前列环素的任何形式。在另一个实施方式中，中间相曲前列环素除了残留溶剂之外具有至少90%、95%、98%、99%或99.9%的纯度。纯度可以通过本领域已知的方法（例如NMR积分）确定。它还可以通过XRPD中对应于结晶曲前列环素的其他形式的峰的缺失或下降来确定。在一个实施方式中，中间相曲前列环素是基本上纯的形式。如通过对应的XRPD能够看到的，中间相曲前列环素与多晶型曲前列环素不同。在一个实施方式中，中间相曲前列环素是以1克至50 kg的量以一个或多个上述纯度而获得的。在一个实施方式中，中间相曲前列环素是以本领域技术人员理解的足以用于曲前列环素的工业规模生产的量以一个或多个上述纯度而获得的。

图31的中间相曲前列环素是由以下溶液从上至下形成的：（1）0.40带有丙酮的水活性浆体2天；（2）DCM浆体60至30 °C；（3）0.80带有异丙醇的水活性浆体7天；（4）1-丙醇/水1 : 1 v/v浆体环境温度；（5）晶型B + A +中间相50 °C 7天，（6）乙腈浆体环境温度；（7）晶型A50 °C 15小时；（8）甲醇/乙酸乙酯蒸发；（9）来自甲基乙基酮的甲苯快速沉淀。中间相曲前列环素还可以如图32所示通过以下方法形成：97% RH 12天；在压力前中间相+弱的晶型B（顶部）；中间相（底部）。

曲前列环素的固体形式的组合物和应用

另一个实施方式是一种药物制剂，其包含曲前列环素一水合物晶型A或晶型B或无水曲前列环素晶型C以及药学上可接受的载体或赋形剂。

术语“药物”当在本文中被用作形容词时，是指对受体哺乳动物基本上无害的。通过“药物制剂”，它是指载体、稀释剂、赋形剂和活性成分必须与制剂的其他成分相容，并且对其受体无害。

曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或晶型C可以在施用之前配制。制剂的选自应该由主治医师考虑与确定有效量所涉及的相同因素而决定。

这些制剂中的总活性成分包含按制剂的重量计的0.1%至99.9%。曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C可以与一种或多种其他活性成分一起配制，或者作为单独的活性成分配制。

本发明的药物制剂使用熟知并且容易获得的成分通过本领域已知的程序制备。例如，曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或晶型C与常用的赋形剂、稀释剂、或载体一起单独地或与其他活性成分一起配制，并且形成片剂、胶囊、悬浮液、溶液、注射剂、气雾剂、粉剂等。

用于胃肠外施用的本发明的药物制剂包含无菌水性或非水性溶液、分散体、悬浮液、或乳液以及无菌粉末，其在使用进无菌溶液或悬浮液之前立即重构。合适的无菌水性和非水性载体、稀释剂、溶剂或赋形剂的例子包含水、生理盐水溶液、乙醇、多元醇（例如丙三醇、丙二醇、聚（乙二醇）等）及其合适的混合物、植物油（例如橄榄油）、以及可注射的有机酯（例如油酸乙酯）。例如通过使用包覆材料（例如卵磷脂）、通过在分散剂和悬浮剂的情况下维持合适的颗粒尺寸、以及通过使用表面活性剂，维持适当的流动性。

胃肠外制剂还可以包含佐剂，例如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。通过含有抗菌剂和抗真菌剂（例如对羟基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等），保证防止微生物的作用。还可以包含等渗剂，例如糖、氯化钠等。例如通过经过细菌截留过滤器过滤、或通过在混合前预灭菌混合物的组分，在制备的时候或在施用之前（例如在双室注射器封装的例子中）对可注射制剂灭菌。

用于口服施用的固体剂量形式包含胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂、在这些固体剂量形式中，曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C与以下物料混合：至少一种惰性的药物载体（例如柠檬酸钠、或磷酸二钙）和/或（a）填料或增量剂（例如淀粉、糖类、（包括乳糖和葡萄糖）、甘露醇和硅酸）、（b）粘合剂（例如羧甲基纤维素和其它纤维素衍生物、藻酸盐、明胶、聚（乙烯基吡咯烷）、蔗糖和阿拉伯胶）、（c）湿润剂（例如丙三醇）、（d）崩解剂（例如琼脂、碳酸钙、碳酸氢钠、土豆淀粉或木薯淀粉、藻酸、硅酸盐和碳酸钠）、（e）保湿剂（例如甘油）、（f）溶液阻滞剂（例如石蜡）、（g）吸收促进剂（例如季铵化合物）、（h）润湿剂（例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯）、（i）吸收剂（例如高岭土和膨润土）以及（j）润滑剂（例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚（乙二醇）、月桂基硫酸钠）及其混合物。在胶囊、片剂和丸剂的情况中，剂量形式还可以包含缓冲剂。

相似类型的固体制剂还可以包含使用赋形剂（例如乳糖和高分子量聚（乙二醇）等）在软或硬的明胶胶囊中的填充。固体剂量形式（例如片剂、锭剂、胶囊、丸剂和颗粒）可以与包衣或外壳（例如肠溶包衣或药物制剂领域中公知的其它包衣）一起制备。所述包衣可以包含乳浊剂或在消化道的特定部位释放活性成分的药剂，例如用于在胃中释放活性成分的酸溶性包衣、或用于在肠道中释放活性成分的碱溶性包衣。所述活性成分还可以被微胶囊包封在缓释包衣中，微胶囊被制成胶囊制剂的药丸的一部分。固体剂量形式的曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C作为片剂、锭剂、胶囊、丸剂和颗粒的应用可以是优选的。

另一个实施方式是一种治疗医学病症的方法，所述方法包含向有此需要的对象（例如人类）施用治疗有效量的前述药物制剂（例如固体制剂），所述制剂包含曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C。所述被治疗的医学病症包含但不限于肺高血压（包括原发性和继发性肺高血压和肺动脉高血压）、充血性心脏衰竭、周围性血管疾病、哮喘、严重的间歇性跛行、免疫抑制、增生性疾病、癌症（例如肺癌、肝癌、脑癌、胰腺癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌和头颈癌）、缺血性病变、神经性足部溃疡以及肺纤维化、肾功能以及间质性肺疾病。在一些实施方式中，所述药物制剂可以包含除了曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C之外的一种或多种活性成分。

曲前列环素一水合物晶型A或晶型B、或无水曲前列环素晶型C还可以被用于储存、运输和/或搬运曲前列环素。

制备方法

曲前列环素的晶型A和晶型B可以通过从水性有机溶剂中浆化或沉淀而制备。例如，可以使用有机溶剂和大于或等于约50% v/v水。在一个实施方式中，水性有机溶剂中的水含量是从约50%至约60或70或80%（v/v）。本领域技术人员将理解，在搅拌的部分或全部期间，浆体可以包含水，而沉淀中的水可以在一个点加入或增加，从而降低曲前列环素的溶解度并形成沉淀。

一个实施方式是一种制备结晶曲前列环素一水合物晶型A的方法，所述方法包含：搅拌有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。在一个实施方式中，所述有机溶剂是非质子性和/或非极性的有机溶剂。非质子性和/或非极性的有机溶剂的例子包含但不限于己烷、苯、甲苯、1,4-二噁烷、氯仿、乙醚、二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、二甲基甲酰胺、乙腈、二甲亚砜以及它们的组合。在一个实施方式中，所述有机溶剂是丙酮或1,4-二噁烷。在一个实施方式中，所述搅拌是1,4-二噁烷/ H20中的浆体或从丙酮w/ H2O沉淀的形式。在一个实施方式中，所述有机溶剂不是乙醇。在一个实施方式中，所述空气干燥温度是约15°C至约25°C，或其间的任何温度或范围。

一个实施方式是一种制备结晶曲前列环素一水合物晶型B的方法，所述方法包含：搅拌有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。在一个实施方式中，所述有机溶剂是质子性有机溶剂。质子性有机溶剂的例子包含但不限于甲酸、M-丁醇、异丙醇、硝基甲烷、甲醇、乙酸。在一个实施方式中，所述有机溶剂是甲醇。在一个实施方式中，所述搅拌是从MeOH w/ H₂O沉淀的形式。在一个实施方式中，所述有机溶剂不是乙醇。在一个实施方式中，所述空气干燥温度是约15°C至约25°C，或其间的任何温度或范围。

一个实施方式是一种制备无水曲前列环素晶型C的方法，通过将曲前列环素一水合物晶型A和/或晶型B在低于42 °C的温度下暴露至低湿度和/或真空。应该理解，所述温度必须低于42 °C，但是足以允许一水合物的水在施加的大气压力下蒸发。

现在将参考以下实施例描述本发明。这些实施例并非视为限制本发明的范围，而将仅以说明性的方式生效。

实施例

材料

除非另有说明，否则材料是以接收状态使用并且溶剂是HPLC级或ACS级。曲前列环素起始材料接收时是冷的并且储存在冷藏条件下。通常允许固体在使用前升温至环境温度。生成的样品通常储存在环境温度。

晶型 A 一 水合物的制备

将曲前列环素（500 mg; 1.3 mmol）和1, 4-二噁烷/水1 : 1 v/v (3.0 mL)加入玻璃小瓶。搅拌混合物，生成均匀的浆体。将该浆体在环境温度下留在轮上旋转。大约3天后，将浆体转移至实验室通风柜中的滤纸以分离固体，将形成的糊状稀薄物摊开以利于干燥。在称量纸上继续干燥，摊开样品稀薄物，随着其干燥轻轻地打碎并粉碎固体。轻轻地粉碎看似干燥的固体，并转移至干净的玻璃小瓶。将该小瓶用穿孔铝箔覆盖，并留在实验室通风柜中大约20小时以完全干燥固体。在干燥期间的重量损失是大约0.9%。白色固体由双折射的片状物和针状物组成。固体回收是373 mg。考虑到固体中的4.62%水，实验产量大约是71%。

表 1. 观察到的曲前列环素一水合物晶型A的X射线粉末衍射图案的峰

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表 2. 曲前列环素一水合物晶型A一水合物的表征

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晶型 A 的单晶分析

通过1,4-二噁烷/水（~1 :2.5 v/v）中的曲前列环素的升温（-80 °C）浆体过夜而制备。在Paratone-N油中从该样品分离晶体，以用于单晶X射线提交。

将尺寸大约为0.20 x 0.08 x 0.06 mm的C2₃H₃₆O₆ [C2₃H₃4O5, H₂0]的无色针状物以随机取向安装在纤维上。在安装有共焦光学器件的理学快速II（Rigaku Rapid II）衍射仪上通过Cu K_α辐射(λ = 1.54184 A)进行初步检查和数据采集。使用SHELX97 Sheldrick, G. M. Acta Cryst., 2008, A64, 112进行精修。

使用3° < θ< 66°范围内的10698个反射的设定角度，由最小二乘精修获得用于数据采集的晶胞常数和取向矩阵。由CrystalClear得到的精确的镶嵌度（mosaicity）是1.25°，表明晶体质量差。CrystalClear：An Integrated Program for the Collection and Processing of Area Detector Data, Rigaku Corporation, © 1997-2002。空间群是由SHELXTL v. 6.12., Bruker AXS Inc., Madison, WI, USA, 2002中的项目XPREP. Bruker, XPREP确定的。从条件hkl h+k = 2n的系统性存在，以及从后续的最小二乘精修，确定空间群是C2 (no. 5)。

在150 ±1 K的温度下，采集数据至133.14°的最大2左值。

通过CrystalClear整合框架。采集了总共10698个反射，其中3963个是独特的。向数据施加洛伦兹和极化修正。对于Cu K_α辐射的线性吸收系数是0.686 mm^-1。施加使用CrystalClear的经验吸收修正。传输系数的范围是0.858至0.960。施加二次消光修正[1]。在最小二乘中精修的最终的系数是0.00320（绝对单位）。将等效反射的强度平均。基于强度的用于平均的偏离因子是5.42%。

使用帕特森（Patterson）重原子方法解析结构，该方法揭示一个O原子的位置。在随后的差异傅立叶（difference Fourier）合成中定位剩余的原子。独立地精修在氧原子上的氢原子。所有其他氢原子被包含在该精修中，但被限制在它们结合的原子上。通过最小化以下函数，在全矩阵最小二乘中精修结构：

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重量w被定义为1/[ σ²(F₀ ² ) + (0.0478P)² +(1.5389P)]，其中P = (F₀ ² +2F_c ²)/3。

从“结晶学国际统计表”（结晶学国际统计表，Vol. C，Kluwer Academic Publishers: Dordrecht, The Netherlands, 1992, 表4.2.6.8和6.1.1.4）取得散射因子。在用在精修的3963个反射中，只有具有F₀ ² > 2σ(F _c ²)的反射被用于计算拟合残差（fit residual）R。总共2595个反射被用于计算。精修的最后一个循环包含284个可变参数并且通过以下未加权的和加权的偏离因子收敛（最大的参数变化是< 0.01乘以其估计的标准偏差）：

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单位重量（拟合优度）的观察的标准偏差是1.153。在最后的差异傅立叶中最高的峰的高度是0.25 e/A ³。最小的负峰的高度为-0.26 e/A ³。用于确定绝对结构的弗莱克（Flack）因子被精修为0.3(4)。Flack, H. D. Acta Cryst. 1983, A39, 876。

使用PLATON软件包（Spek, A. L. PLATON. Molecular Graphics Program. Utrecht University, Utrecht, The Netherlands, 2008. Spek, A. L, J.Appl. Cryst. 2003, 36, 7）中的ORTEP III (Johnson, C. K. ORTEPIII, Report ORNL-6895, Oak Ridge National Laboratory, TN, U.S.A. 1996. OPTEP-3 for Windows V1.05, Farrugia, L.J., J. Appl. Cryst. 1997, 30, 565)程序制备ORTEP图。原子由50%概率的各向异性热椭圆表示。使用CAMERON建模软件（Watkin, D. J.; Prout, C .K.; Pearce, L. J. CAMERON, Chemical Crystallography Laboratory, University of Oxford, Oxford, 1996）制备堆叠图。通过PLATON软件包进行手性中心的评估。使用分子手性规则的规范评估绝对构型。参见例如Cahn, R.S.; Ingold, C; Prelog, V. Angew. Chem. Intern. Ed. Eng., 1966,5 , 385和Prelog, V. G. Helmchen. Angew. Chem. Intern. Ed. Eng.,1982 , 21, 567。通过Mercury 3.0可视化软件包（Macrae, C. F. Edgington, P. R. McCabe, P. Pidcock, E. Shields, G. P. Taylor, R. Towler M. and van de Streek, J.; J. Appl. Cryst, 2006, 39, 453-457）生成其他图。氢键被表示为虚线。

单斜晶胞参数和计算出的体积是：a = 30.213(5) A, b = 4.4372(6) A, c = 22.079(4) A, α= 90.00°, β = 129.545(9)°, γ = 90.00°, V= 2282.4(6) A³。曲前列环素一水合物晶型A的晶体结构中的不对称单元的式量是408.54 g mol^-1并且Z = 4，使得计算出的密度为1.189 g cm^-3。空间群被确定为C2。空间群和晶胞参数与先前从XRPD指标化确定的晶型A的一致。

如拟合残差所示（R为0.056 (5.6%)），得到的结构的质量较高。在0.02至0.06范围内的R值被引用为最可靠地确定的结构。Glusker, Jenny Pickworth; Trueblood, Kenneth N. Crystal Structure Analysis: A Primer, 2^nd ed.; Oxford University press: New York, 1985; p.87。

在图18中示出了曲前列环素一水合物晶型A的ORTEP图。在单晶结构的不对称单元中观察到的分子与本文提供的提出的分子结构一致。在图19至23中示出的不对称单元对每一个水分子包含一个曲前列环素分子，表明晶型A是一水合物。曲前列环素的单晶结构被确定来确认分子结构，并且观察到的绝对构型与提出的绝对构型一致。曲前列环素的结构被确定为一水化晶型，标记为晶型A。该晶体结构在不对称单元中包含一个曲前列环素分子和一个水分子。

晶型 B 一 水合物的制备

将曲前列环素（1019 mg; 2.6 mmol）和甲醇(3.5 mL)加入玻璃小瓶。将混合物搅拌并超声处理，生成澄清的溶液。将该溶液过滤至干净的玻璃小瓶并与水(3.5 mL)结合，形成固态的浆体。将小瓶上盖并留在环境温度下。大约3天后，将形成的厚的糊状物转移至实验室通风柜中的滤纸以分离固体，将稀薄物摊开以利于干燥。在称量纸上继续干燥，摊开样品稀薄物，随着其干燥轻轻地打碎并粉碎固体。轻轻地粉碎看似潮湿的固体，并转移至干净的玻璃小瓶。将该小瓶留在实验室通风柜中大约44小时以完全干燥固体，周期性地打碎并粉碎固体以利于干燥。在小瓶上设置或不设置穿孔铝箔盖完成干燥。在干燥期间的重量损失是大约32.4%。白色固体由树枝-玫瑰花状簇中的双折射的针状物组成。固体回收是956 mg。考虑到固体中的12.24%水，实验产量大约是82%。在浆化和干燥期间固体形成硬质块。

以和晶型A的单晶确定相似的程序，确定晶型B。

通过CrystalClear整合框架。采集了总共21922个反射，其中7134个是独特的。向数据施加洛伦兹和极化修正。对于Cu K_α辐射的线性吸收系数是0.683 mm^-1。施加使用CrystalClear的经验吸收修正。传输系数的范围是0.837至0.986。施加二次消光修正[1]。在最小二乘中精修的最终的系数是0.000370（绝对单位）。将等效反射的强度平均。基于强度的用于平均的偏离因子是5.76%。

使用帕特森重原子方法解析结构，该方法揭示一个O原子的位置。在随后的差异傅立叶合成中定位剩余的原子。独立地精修某些氢原子，虽然大部分氢原子被包含在该精修中，但被限制在它们结合的原子上。通过最小化以下函数，在全矩阵最小二乘中精修结构：

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重量w被定义为1/[ σ²(F₀ ² ) + (0.0589P)² +(3.342 IP)]，其中P = (F₀ ² +2F_c ²)/3。

从“结晶学国际统计表”取得散射因子。在用在精修的7134个反射中，只有具有F₀ ² > 2σ(F _c ²)的反射被用于计算拟合残差R。总共3905个反射被用于计算。精修的最后一个循环包含551个可变参数并且通过以下未加权的和加权的偏离因子收敛（最大的参数变化是< 0.01乘以其估计的标准偏差）：

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单位重量（拟合优度）的观察的标准偏差是1.063。在最后的差异傅立叶中最高的峰的高度是0.28 e/A ³。最小的负峰的高度为-0.22 e/A ³。用于确定绝对结构的弗莱克因子被精修为0.0(4)。

单斜晶胞参数和计算出的体积是：a = 29.8234(8) A, b = 4.63510(10) A, c = 36.126(3) A, α= 90.00°, β = 113.334(8)°, γ = 90.00°, V= 4585.5(4) A³。曲前列环素一水合物晶型B的晶体结构中的不对称单元的式量是407.53 g mol^-1并且Z = 8，使得计算出的密度为1.181 g cm^-3。空间群被确定为C2。空间群和晶胞参数与先前从XRPD指标化确定的一致。

如拟合残差所示（R为0.068 (6.8%)），得到的结构的质量中等。在0.02至0.06范围内的R值被引用为最可靠地确定的结构。参见例如Glusker, Jenny Pickworth; Trueblood, Kenneth N. Crystal Structure Analysis: A Primer, 2^nd ed.; Oxford University press: New York, 1985; p.87。虽然该结构的整体质量在标准范围之外，但是该数据足以确定曲前列环素分子的分子构象和不对称单元的内容。

曲前列环素的单晶结构被确定来确认分子结构，并且观察到的绝对构型与提出的绝对构型一致。曲前列环素的结构被确定为一水化晶型，标记为晶型B。该晶体结构在不对称单元中包含两个曲前列环素分子和两个水分子。从晶体结构中确定的绝对结构最可能是分别位于CI 1 (C21)、C12 (C22)、C14 (C24)、CI 13 (C213)和CI 16 (C216)的R,R,S,S和S构型。在实验图案中的所有峰都在计算出的XRPD图案中表示，表明整个材料可能是单一的相。

表 3. 观察到的曲前列环素一水合物晶型B的X射线粉末衍射图案的峰

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表 4. 曲前列环素一水合物晶型B一水合物的表征

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晶型 C 脱水物的制备

将曲前列环素一水合物晶型B (521 mg)加入玻璃小瓶。用滤纸覆盖小瓶，并在环境温度下暴露至真空大约20小时，以干燥固体。在干燥期间的重量损失大约为15.7%。得到的固体是白色的并且包含0.0%的水。固体回收是439 mg。

表 5. 观察到的曲前列环素晶型C的XRPD的峰

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表 6. 曲前列环素晶型C的表征

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实验方法

近似溶解度

通过溶剂添加方法评估溶解度，其中用测试溶剂的等分处理称取的样品。通常在添加之间对混合物进行漩涡和/或超声处理，以便于溶解。通过视觉检查确定测试材料的完全溶解。根据被用来提供完全溶解的总溶剂评估溶解度。真实溶解度可能大于计算值，因为使用的溶剂等份太大或因为溶解速度较慢。如果在实验期间没有发生溶解，则溶解度被表达为“小于”。

蒸发

将溶剂加入至玻璃小瓶中称取的固体。通常对样品进行加热、搅拌和/或超声处理以便于溶解。形成的溶液被过滤进干净的小瓶中，小瓶没有加盖（快速蒸发）或宽松地加盖（缓慢蒸发）以在环境温度或特定的搅拌盘设定温度下在实验室通风柜中蒸发溶剂。溶液也被旋转蒸发。除非另有说明，否则样品被取来干燥。

浆体

在玻璃小瓶中生成混合物，使得留有未溶解的固体。除非另有说明，否则在特定的设定温度下在搅拌盘上搅拌样品，或者在环境温度下在旋转轮上搅拌。在特定的时间，移除样品以用于通过PLM检查和/或固体回收以用于XRPD分析。通常通过真空过滤或将糊状物转移至滤纸来回收固体，使得固体能够在实验室通风柜中干燥（除非另有指明）。

使用丙酮、乙醇、异丙醇和甲醇进行特定的水活性[7,8,9,10]的浆体。使用水性溶剂混合物和/或将水加入至固体然后加入特定溶剂来制备浆体。在特定的时间取样浆体以用于XRPD，移液进1.0 mm玻璃毛细管并通过离心浓缩固体。在第一次取样之前，将固体和/或水性溶剂混合物加入至某些浆体，以维持砂浆稠度。0.8水活性的丙酮浆体不能被直接取样进毛细管，所以在装进毛细管之前，通过倾析上清液分离固体并在实验室通风柜中在滤纸上部分干燥。

缓慢冷却

对于缓慢冷却实验，在特定的搅拌盘设定温度下制备溶液，并过滤至干净的玻璃小瓶。停止加热，使得样品能够缓慢地冷却至环境温度。如果沉淀不足，则将样品置于冷藏条件之下。以与浆体的描述相同的方式分离固体。

快速冷却

对于快速冷却实验，在环境温度或特定的搅拌盘设定温度下制备溶液，并过滤至干净的玻璃小瓶。通过干冰和异丙醇的冷浴快速地冷却溶液，在冷浴中至少停留数分钟。如果沉淀不足，则将样品置于冷藏条件之下。以与浆体的描述相同的方式分离固体。

快速沉淀

对于快速沉淀实验，将溶液过滤进包含已知体积的抗溶剂的玻璃小瓶，或者将等分的抗溶剂加入至过滤的溶液。如果沉淀不足，则将样品留在环境温度或者其他特定的条件下。以与浆体的描述相同的方式分离固体。

蒸气扩散

对于蒸气扩散实验，通过放置进底部有抗溶剂的更大的小瓶，将包含已过滤的溶液的玻璃小瓶暴露至各种蒸汽。

研磨

使用大约100 mg的固体，在Retsch MM200混合研磨机中，通过玛瑙球在玛瑙罐中进行研磨。在30 Hz, 每次研磨2分钟的条件下研磨固体6次，在每次研磨之后将固体从玛瑙刮除。

熔化 / 淬火

使用热板（Thomas-Hoover毛细管熔点仪或Wagner & Munz Heizbank系统（Kofler型WME））加热固体。持续加热直至所有固体看似已经熔化。通过移除至冷硬的金属散热片或环境温度的实验台，实现熔融物的快速固化（淬火）。

在玻璃小瓶中完成热板实验。加热设定是130至140 °C。从小瓶壁刮下固体，缓慢地转动小瓶以促进固体的液化。随着小瓶表面失去与热的接触，熔融物的固化快速发生。

对于毛细管实验，将1.0 mm玻璃毛细管置于稍大的玻璃毛细管内。淬火之后，材料环绕毛细管的壁展开，所以固体块不再足够致密以用于XRPD。通过NIST-可追踪温度计测量温度。

在玻璃载片上完成Kofler实验，将样品跨过热台移动以使整个固体穿过大约141 °C。使用USP熔点标准校准热台。

冻干

将固体溶解在1,4-二噁烷或1,4-二噁烷/水混合物中。过滤得到的溶液并然后将其通过冷冻器缓慢地冷冻或通过干冰和异丙醇的冰浴快速地冷冻。使用FTSsystems Flexi-Dry冷冻干燥机将冷冻的样品置于大约-50 °C下的真空下。

环境应力

在各种干燥和相对湿度（RH）环境下在玻璃小瓶中对固体施加应力至特定的时间，通常监控施加应力期间的重量变化。通过环境、P2O5、真空（环境和高温）和对流炉实验完成干燥，其中在表中列出的干燥条件只有炉温度。通过将样品暴露在实验室通风柜中进行环境实验。通过将样品置于包含饱和盐溶液的密封腔室内，或将样品置于用于0% RH的包含P2O5粉末的单独腔室内，实现特定的RH值。根据ASTM标准程序选择和制备盐溶液。对于真空实验，用尼龙过滤器覆盖小瓶以防止可能的固体损失。对于高温实验，通过NIST-可追踪温度计测量温度。对于其他应力实验，用穿孔铝箔覆盖小瓶或使小瓶不被覆盖。在XRPD分析之前将固体储存在环境温度下密封的小瓶中。

偏光显微镜（ PLM ）

通常，使用Leica MZ12.5体视显微镜进行PLM。在有或没有使用0.8-1 Ox.的各种物镜的正交偏振器和一阶红色补偿器的情况下，原位或在玻璃载片（通常覆盖在矿物或Paratone-N油中）上观察样品。通过双折射和消光的观察来表示结晶度。

对于lot 01C 10010，使用装备有SPOT Insight™彩色数码相机的Leica DM LP显微镜进行PLM。将样品置于玻璃载片上，将盖玻片置于样品上，加入一滴矿物油以通过毛细作用覆盖样品。使用具有交叉偏振器和一阶红色补偿器的10、20和40物镜观察样品。使用SPOT软件（v. 4.5.9）捕获图像。将微米棒插入在每个图像上以作为颗粒尺寸的参照。

射线粉末衍射（ XRPD ）

Inel XRG-3000 衍射仪

通过Inel XRG-3000衍射仪采集XRPD图案。使用细焦点管和抛物线梯度多层镜制造Cu Ka辐射的入射光束。在分析之前，分析硅试样，以确认观察到的Si 111峰的位置与NIST认证的位置一致。将样品的试样装进薄壁玻璃毛细管，并使用光束阻挡器将来自空气的背景值最小化。使用Windif v. 6.6软件和具有120°的2θ范围的弯曲位置敏感Equinox探测器，在透射几何图形中采集衍射图案。每个图案的数据采集参数显示于附件C的图像之上；数据被显示为2.5 - 40° 2θ。

衍射仪

通过PANalytical X'Pert PRO MPD衍射仪采集高分辨率XRPD图案，该衍射仪使用通过Optix长细焦光源制造的Cu辐射的入射光束。使用椭圆梯度多层镜来使Cu Ka X射线穿过试样聚焦在检测仪上。在分析之前，分析硅试样(NIST SRM 640d)，以确认观察到的Si 111峰的位置与NIST认证的位置一致。将样品的试样夹在3^m厚薄膜之间，并在透射几何图形中分析。使用光束阻挡器、短防散射扩展器和防散射刀刃将来自空气的背景值最小化。使用用于入射光束和衍射光束的索勒狭缝将轴向发散形成的拓宽最小化。使用距离试样240 mm的扫描位置灵敏检测器(X'Celerator)和Data Collector软件v. 2.2b采集衍射图案。每个图案的数据采集参数显示于附件C的图像之上，其包含镜子前的发散狭缝(DS)和入射光束防散射狭缝(SS)；数据被显示为2.5 - 40° 2θ。

通过PANalytical X'Pert PRO MPD衍射仪采集高分辨率XRPD图案，该衍射仪使用通过长细焦光源和镍过滤器制造的Cu Kα辐射的入射光束。使用对称的布拉格-布伦塔诺（Bragg-Brentano）几何图形配置衍射仪。在分析之前，分析硅试样(NIST SRM 640d)，以确认观察到的Si 111峰的位置与NIST认证的位置一致。将样品的试样制备为在零硅背景基底中心上的薄且圆的层。使用防散射狭缝(SS) 将来自空气的背景值最小化。使用用于入射光束和衍射光束的索勒狭缝将轴向发散形成的拓宽最小化。使用距离样品240 mm的扫描位置灵敏检测器(X'Celerator)和Data Collector软件v. 2.2b采集衍射图案。每个图案的数据采集参数是：

晶型A：Panalytical X-Pert Pro MPD PW3040 Pro X射线管：Cu(l.54059 A) 电压：45 kV安培数：40 mA 扫描范围：1.00 - 39.99 °2θ步长：0.017 °2θ 采集时间：719 s 扫描速度：3.37 分钟狭缝DS：112° SS：空值旋转时间：1.0 s 模式：传输。

晶型B：Panalvtical X-Pert Pro MPD PW3040 Pro X射线管：Cu(l.54059 A) 电压：45 kV安培数：40 mA 扫描范围：1.00 - 39.99 °2θ步长：0.017 °2θ 采集时间：3883 s 扫描速度：0.6 分钟狭缝DS：1/2° SS：空值旋转时间：1.0 s 模式：传输。

晶型C：X射线管：Cu(l.54059 A) 电压：45 kV安培数：40 mA 扫描范围：1.00 - 39.99 °2θ步长：0.017 °2θ 采集时间：719 s 扫描速度：3.3 分钟狭缝DS：1/2° SS：空值旋转时间：1.0 s 模式：传输。

差示扫描 量热（ DSC ）

使用TA Instruments 2920和Q2000差示扫描量热仪进行DSC。使用NIST-可追踪铟金属进行温度校准。将样品置入铝DSC锅，用盖子覆盖，精确地记录重量。将被配置为样品锅的称取的铝锅放置于晶胞的参考侧。除非另有指明，否则报告的吸热温度是转变最大值。每个热图谱的数据采集参数和锅配置显示于图像部分的图像中。热图谱上的方法代码是开始温度、结束温度以及加热速率的缩写；例如-50-250-10是指“从-50 °C至250 °C，10 °C/分钟”。下标总结了在用于锅配置的每个图像中使用的缩写：

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热重分析（ TGA ）

使用TA Instruments Q5000 IR热重分析仪进行TG分析。使用镍和镍铝进行温度校准。将每个样品置于铝锅中。密封样品，将盖刺穿，然后插入进TG炉。在氮气下加热炉。每个热图谱的数据采集参数显示于图像部分的图像中。热图谱上的方法代码是开始温度、结束温度以及加热速率的缩写；例如00-350-10是指“从当前温度至350 °C，10 °C/分钟”，即在开始分析之前温度未达到平衡。

热重 - 红外（ TG-IR ）光谱

在TA Instruments热重(TG)分析仪（型号2050）上进行热重-红外（TG-IR）分析，该分析仪被接口至装备有Ever-Glo中/远IR光源、溴化钾（KBr）分束器以及碲化汞镉（MCT-A）检测器的Magna-IR 560^®傅里叶变换红外（IR）分光光度计(Thermo Nicolet)。使用聚苯乙烯进行IR波长验证，TG校准标准是镍和Alumel™。将样品置于铂样品锅中，该锅被插入进TG炉。首先开启TG仪器，然后立即开启FT-IR仪器。对于吹扫和平衡分别在90和10 cc/分钟的氦气流下操作TG仪器。在氦气下以20 °C/分钟的速率加热炉直至97 °C的最终温度。大约每16秒钟采集IR图谱至大约13分钟。每个IR图谱表示在4 cm^-1的图谱分辨率下采集的16个共同相加的扫描。从High Resolution Nicolet Vapor Phase spectral library (v. 1990-1994)的检索中鉴定挥发物。

热台显微镜

使用安装在装备有SPOT Insight™彩色数码相机的Leica DM LP显微镜上的Linkam热台（FTIR 600）进行热台显微镜术。使用USP熔点标准进行温度校准。将样品置于盖玻片上，并将第二块盖玻片置于样品的顶部。随着热台被加热，使用具有交叉偏振器和一阶红色补偿器的20x物镜视觉观察每个样品。使用SPOT软件(v. 4.5.9)捕获图像。

卡尔 - 费休（ Karl-Fischer ）滴定（ KF ）

使用Mettler Toledo DL39 KF滴定仪进行用于确定水的库仑KF分析。在分析之前进行空白滴定。在干燥的氮气气氛下制备样品，其中将11至78 mg的样品溶解于在预先干燥的小瓶中的1 mL干燥的Hydranal-Coulomat AD中。将整个溶液穿过隔膜加入KF库仑计，并混合10秒钟。然后通过发生电极滴定样品，该电极通过电化学氧化：2 I^-→ I₂ + 2e^-生成碘。得到两个重复以保证可重复性。

傅里叶变换红外（ IR ）光谱

在装备有Ever-Glo中/远IR光源、溴化钾（KBr）分束器以及氘化三甘氨酸硫酸盐（DTGS）检测器的Nexus 670^® IR分光光度计(Thermo Nicolet)上获得IR图谱。使用NIST SRM 1921b（聚苯乙烯）进行波长验证。衰减全反射（ATR）配件（Thunderdome™, Thermo Spectra-Tech）以及锗（Ge）晶体被用于数据采集。每个图谱表示在4 cm^-1的图谱分辨率下采集的256个共同相加的扫描。通过干净的锗晶体获得背景数据。通过取得这两个数据组彼此的比率，得到Log 1/R (R =反射率)图谱。

傅立叶变换拉曼（ Raman ）光谱

在拉曼模块上获得拉曼图谱，该拉曼模块被接口至装备有铟镓砷（InGaAs）检测仪的Nexus 670 IR分光光度计(Thermo Nicolet)。使用硫和环己烷进行波长验证。通过将每个样品置于玻璃管、毛细管或球粒中并放置在涂覆金的保持器中，制备样品以用于分析。使用大约1 W的Nd:YV0₄激光功率（1064 nm激发波长）照射样品。每个图谱的数据采集参数显示于附件C的图像之上。

溶液质子核磁共振（ ¹ H-NMR ）

通过Varian ^UNITY INOVA 400光谱仪获得¹H -NMR图谱。通过将大约3至13 mg的样品溶解在含有TMS的DMSO-d₆ 中以制备样品。数据采集参数显示于附件C的图谱的第一条曲线。

固态碳核磁共振（ ¹³ C-NMR ）

通过Varian ^UNITY INOVA 400光谱仪获得 ¹³C-NMR固态NMR图谱。通过将样品装进4 mm PENCIL型氧化锆转子中并以魔角在12 kHz下旋转，制得样品。数据采集参数显示于附件C的图谱的第一条曲线。

动态蒸汽吸附（ DVS ）

在VTI SGA-100蒸汽吸附分析仪上采集DVS数据。NaCl和PVP被用作校准标准。在分析前不干燥样品。在氮气吹扫下以10% RH增量在5至95% RH（或者对于晶型B是55至95% RH）的范围中采集吸附和解吸数据。用于分析的平衡判据是5分钟内小于0.0100%的重量变化，最大平衡时间为3小时。对于样品的初始含水量不采集数据。

指标化

使用X'Pert High Score Plus [12]对曲前列环素晶型A和B的XRPD图案进行指标化。允许的峰位置（用红棒标记）和观察到的峰之间的一致性表明一致的晶胞确定。与分配的消光标志一致的空间群、晶胞参数、以及导出量被列出在图表之下。指标化和结构精修是计算机学的研究，它根据"Procedures for SSCI Non-cGMP Activities."进行。

虽然前文指向特定的优选实施方式，但是应该理解，本发明不因此被限制。本领域一般技术人员将理解，可以对公开的实施方式进行各种修改，而这些修改旨在处于本发明的范围内。

在本说明书中引用的所有公开物、专利申请和专利以其全文通过引用的方式并入本文中。

Claims

1.结晶曲前列环素一水合物晶型A，其特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，X-射线粉末衍射图包含11.6、16.2和20.0 °2θ± 0.2 °2θ的峰，并且除了残留溶剂之外具有至少90%的纯度。

2.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，其中所述衍射图进一步包含在5.2、21.7和27.7 °2θ± 0.2 °2θ的峰。

3.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，其中所述衍射图基本上如图2所示。

4.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，其中差示扫描量热（DSC）曲线包含在约78.3 °C的次要吸热和在约126.3 °C的主要吸热。

5.根据权利要求4所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，其中DSC曲线基本上如图3所示。

6.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，所述晶型A除了残留溶剂之外具有至少95%的纯度。

7.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，所述晶型A基本上不含结晶曲前列环素的任何其他形式。

8.根据权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A，所述晶型A基本上为纯的形式。

9.一种制备权利要求1所述的结晶曲前列环素一水合物晶型A的方法，所述方法包含：搅拌非质子性有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述有机溶剂是丙酮或1,4-二噁烷。

11.结晶曲前列环素一水合物晶型B，其特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Κα辐射在衍射仪上确定的，X-射线粉末衍射图包含5.9、12.1和24.4 °2θ± 0.2 °2θ的峰，并且除了残留溶剂之外具有至少90%的纯度。

12.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，其中所述衍射图进一步包含在10.7、20.6和22.3 °2θ± 0.2 °2θ的峰。

13.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素晶型I，其中所述衍射图基本上如图9所示。

14.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，其特征在于，差示扫描量热（DSC）曲线包含在约74.8 °C的次要吸热和在约125.2 °C的主要吸热。

15.根据权利要求14所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，其中DSC曲线基本上如图10所示。

16.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，所述晶型B除了残留溶剂之外具有至少95%的纯度。

17.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，所述晶型B基本上不含结晶曲前列环素的任何其他形式。

18.根据权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B，所述晶型B基本上为纯的形式。

19.一种制备权利要求11所述的结晶曲前列环素一水合物晶型B的方法，所述方法包含：搅拌非质子性有机溶剂和水中的无水或湿的曲前列环素，然后在约15°C至约35°C的温度下通过空气干燥固体以去除溶剂，直至没有额外的溶剂蒸发。

20.根据权利要求19所述的方法，其中所述有机溶剂是甲醇。

21.一种组合物，实质上包含曲前列环素一水合物晶型A或曲前列环素一水合物晶型B的一种晶型。

22.根据权利要求21所述的组合物，实质上包含曲前列环素一水合物晶型A。

23.根据权利要求21所述的组合物，实质上包含曲前列环素一水合物晶型B。

24.一种药物制剂，包含治疗有效量的曲前列环素一水合物晶型A或曲前列环素一水合物晶型B，以及药学上可接受的载体。

25.一种治疗医学病症的方法，所述方法包含：向有此需要的对象施用药物制剂，所述药物制剂包含治疗有效量的曲前列环素一水合物晶型A或曲前列环素一水合物晶型B，其中所述医学病症选自肺高血压、充血性心脏衰竭、周围性血管疾病、严重的间歇性跛行、免疫抑制、增生性疾病、哮喘、肺癌、肝癌、脑癌、胰腺癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、头颈癌、缺血性病变、神经性足部溃疡、肺纤维化、间质性肺疾病和引起肾功能障碍或衰竭的疾病或病症。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述医学病症是肺高血压。

27.根据权利要求25所述的方法，其中所述药物制剂包含治疗有效量的曲前列环素一水合物晶型A。

28.曲前列环素晶型C，其特征在于，如在1.54059 A的波长下使用Cu-Ka辐射在衍射仪上确定的，X-射线粉末衍射图包含6.55 °2θ± 0.2 °2θ的峰，并且除了残留溶剂之外具有至少90%的纯度。

29.根据权利要求28所述的曲前列环素晶型C，其中所述衍射图基本上如图16所示。