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CN105092854A - 体外诊断装置和试剂盒 - Google Patents

体外诊断装置和试剂盒 Download PDF

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徐丽华
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Abstract

本发明提供了一种用于预测或检测子痫前期的渗滤检测装置，包括一个由上盖和底槽相互卡固形成的一封闭壳体。在封闭壳体中，上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂诸如染色剂、洗脱液等等。所述壳体中自上而下叠有至少渗滤层和吸水层。所述渗滤层包括一种微孔膜，它能让正常蛋白和其它小分子化合物通过，但却不能让错误折叠蛋白聚集物通过。这种微孔膜可以是纤维素膜，例如硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。优选地，渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂、或者错误折叠蛋白聚集物本身、或者二者兼具。

Description

体外诊断装置和试剂盒
技术领域
本发明涉及疾病诊断，尤其是诊断子痫前期的试剂盒。
背景技术
子痫(eclampsia)是怀孕妇女在怀孕后20周以后、特别是妊娠晚期发生的一种复杂和危险的疾病，以抽搐及昏迷为特点，并伴有水肿、高血压和蛋白尿等主要症状，可并发肾功能衰竭、心力衰竭、肺水肿、大脑出血、胎盘早期剥离等。先兆子痫（亦称为“子痫前期”）(pre-eclampsia)则是于子痫抽搐前，有头痛、头晕、上腹不适、恶心呕吐、胸闷、视力模糊、眼冒金花、忧虑、易激动等症状，预示子痫即将发生的阶段,常伴有高血压和蛋白尿等主要症状，如果血压和蛋白尿持续增加或者出现末端器官损坏（包括胎儿生长限制）的症状，就会被认为是重度先兆子痫（sPE）。子痫抽搐前多数有先兆子痫症状，但也有些患者前驱症状不明显，突然发作抽搐或进入昏迷。
对于重度子痫前期，目前临床上采用静脉点滴硫酸镁，防止发生抽搐，如果血压特别高，另外加用降压药。当怀孕在34周以上时，安排引产或进行剖腹产分娩，即有医学指征分娩。据统计，全球每年有大约76,000孕妇因先兆子痫/子痫而死亡。
目前，临床上还没有任何能够预测或者诊断先兆子痫的检测试剂，只能通过临床观察、根据血压升高和尿蛋白质的出现来主观地判断，具体地说，根据孕前无高血压、肾小球肾炎病史，孕20周后出现高血压、蛋白尿、水肿及血尿酸升高等症状。这种诊断方法存在几方面的缺陷：一是诊断时机太晚，有些患者在诊断时或诊断后不久就出现严重而危险的子痫症状，诊断晚了，不能有效地治疗先兆子痫而预防子痫；二是不准确，据统计有38%的子痫患者没有高血压或蛋白尿症状；三是对一大部分孕妇无法应用：孕前即患有慢性高血压、蛋白尿、或肾病的孕妇，以及孕20周后才来第一次检查而对其之前是否有高血压、或蛋白尿无从知晓的孕妇。因此临床急需一种更早期、更准确的不需要医师进行主观判断的临床检验和诊断先兆子痫的试剂盒和方法。
发明内容
本发明提供了一种用于预测或检测子痫前期的渗滤检测装置，包括一个由上盖和底槽相互卡固形成的一封闭壳体。在封闭壳体中，上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂诸如染色剂、洗脱液等等。所述壳体中自上而下叠有至少渗滤层和吸水层。所述渗滤层包括一种微孔膜，它能让正常蛋白和其它小分子化合物通过，但却不能让错误折叠蛋白聚集物通过。这种微孔膜可以是纤维素膜，例如硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。优选地，渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂、或者错误折叠蛋白聚集物本身、或者二者兼具。
本发明的另一方面提供了上述渗滤检测装置在制备用于检测和预测子痫前期的试剂盒中的应用。
另一方面，还提供了用于检测和预测子痫前期的试剂盒，其中包括上述渗滤检测装置、洗脱液或比色卡或者三者同时。
另外，本发明还涉及上述渗滤检测装置、试剂盒的制备方法，以及使用上述渗滤检测装置、试剂盒用于检测和预测子痫前期的方法。
附图说明
图1为本发明的渗滤装置的一个实施方案的剖面图。
图2是显示应用本发明渗滤装置检测子痫前期孕妇和正常孕妇尿液试验结果的照片。
具体实施方式
本发明涉及一种渗滤法检测孕妇尿液中是否存在错误折叠蛋白聚集物，以判定所检测的孕妇是否患有子痫前期或者具有子痫前期风险。
特别地，本发明提供了一种用于预测或检测子痫前期的渗滤检测装置，包括一个由上盖和底槽相互卡固形成的一封闭壳体。在封闭壳体中，上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂诸如染色剂、洗脱液等等。封闭壳体可以采用任何材质（塑料、金属等等），形状以扁壳体较好，例如圆形、正方形、长方形、椭圆形、三角形等等，从上到下的厚度可以是2-10mm。所述壳体中自上而下叠有至少渗滤层和吸水层。所述渗滤层包括一种微孔膜，它能让正常蛋白和其它小分子化合物通过，但却不能让错误折叠蛋白聚集物通过。这种微孔膜可以是纤维素膜，例如硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。
优选地，渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂、或者错误折叠蛋白聚集物本身、或者二者兼具。特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂可以是任何能够和错误折叠蛋白聚集物结合的试剂，这些试剂都已为领域内技术人员所熟知，包括染料（杂环染料、刚果红或者硫磺素、伊文思蓝）、抗体（例如A11抗体、Officer抗体、OC抗体、M118抗体、M204抗体、M205抗体、M89抗体和M09抗体）等等。将上述错误折叠蛋白聚集物的标记试剂包被到渗滤层的微孔膜上方法可以采用任何常规方法，例如，将染料溶液或者含抗体的溶液点滴到膜上，然后晾干、风干或烘干。
吸水层的目的是将液体从渗滤层上面吸下来，其材质一般来说必须是吸水性较强的材料，如海绵、吸水纸、棉花、滤纸等等，可以是单层或多层。
优选地，在吸水层和渗滤层之间还包含一支撑层，用于支撑渗滤层使微孔膜能够保持平整而不变形或出褶，但是样品和试剂中的液体应该仍能自由透过支撑层。因此支撑层可以采用质地稍微坚硬、表面比较平滑、尤其浸湿之后不变形的滤纸材料，例如玻璃纤维纸。
制备本发明的渗滤检测装置的一般方法可以包括以下步骤（顺序不限）：（1）提供一个上盖和一个底槽，两者能够相互卡固形成的一封闭壳体；（2）提供一个包被有错误折叠蛋白聚集物标记试剂的微孔膜（渗滤层），具体方法可以采用任何常规方法，例如，将含有标记试剂（例如染料、抗体）的溶液点滴到膜上，或者将膜浸泡在将含有标记试剂（例如染料、抗体）的溶液中，使标记试剂（例如染料、抗体）吸附到膜上，然后晾干、风干或烘干；（3）将吸水层、支撑层（如果需要的话）、以及包被有错误折叠蛋白聚集物标记试剂的微孔膜（渗滤层）（或者不含有错误折叠蛋白聚集物标记试剂的渗滤层）按一定的顺序叠放在扁平壳体里；（4）然后将上盖和底槽相互卡固形成一封闭壳体，并且使得上盖在点样孔处与渗滤层紧密接触以至于液体在渗滤层上基本不从侧面横向流出点样孔以外的区域。
本发明的另一方面提供了上述渗滤检测装置在制备用于检测和预测子痫前期的试剂盒中的应用。
另一方面，还提供了用于检测和预测子痫前期的试剂盒，其中包括上述渗滤检测装置、洗脱液或比色卡或者三者同时。
另外，本发明还涉及上述渗滤检测装置、试剂盒的制备方法，以及使用上述渗滤检测装置、试剂盒用于检测和预测子痫前期的方法。
使用方法
本发明的渗滤检测装置和试剂盒可以很方便地用于检测孕妇尿样以预测或检测子痫前期。具体地说，一种方法是取上述渗滤检测装置其中渗滤层的微孔膜包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂如刚果红，从点样孔加入孕妇尿样（可以是1-500微升体积），待尿液全部渗透过渗滤层后，加入洗脱液（可以是1-500微升体积），待洗脱液完全渗透过渗滤层后观察点样孔内微孔膜颜色，以刚果红为例，洗脱液可以是60%乙醇，洗脱后，如果颜色是红色则为检测阳性，即受检孕妇患有子痫前期或者有子痫前期风险，若颜色仍是微孔膜原色，则检测为阴性，受检孕妇没有子痫前期。
特别地，在上述检测过程中，从点样孔加入孕妇尿样、待尿液全部渗透过渗滤层后，患有子痫前期或者有子痫前期风险的孕妇尿液中有错误折叠蛋白聚集物，而这些错误折叠蛋白聚集物会吸附在渗滤层之上而不能透过渗滤层，尤其在经洗脱液洗脱后，这些错误折叠蛋白聚集物仍会吸附在渗滤层，此时便形成了本发明提供的一种渗滤检测装置，其中所述上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂，所述壳体中自上而下设有渗滤层和吸水层，所述渗滤层包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂以及与所述标记试剂结合的错误折叠蛋白聚集物。
实施例一
将硝酸纤维素膜浸染在刚果红工作液0.1mg/ml过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5mmx5mm方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5mmx5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装：吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，干燥20min。在点样孔加入50%乙醇250ul，待乙醇吸收干后再次加入50%乙醇250ul，待吸收干后观察加样空内颜色，红色为阳性，白色为阴性。结果见附图1。
共计试验了12个确诊为子痫前期的孕妇的尿样，6个临产或产后但没有子痫前期症状的孕妇的尿样，灵敏度75%，特异性100%，PPV=100%,NPV=67%。
实施例二
将硝酸纤维素膜浸染在硫磺素S工作液0.1mg/ml过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5mmx5mm方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5mmx5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装：吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，干燥20min。在点样孔加入50%乙醇250ul，待乙醇吸收干后再次加入50%乙醇250ul，待吸收干后观察加样空内颜色，黄色为阳性，白色为阴性。
实施例三
将硝酸纤维素膜浸染在针对Aβ寡聚物的小鼠IgG抗体SW11工作液中4oC过夜，将浸染好的硝酸纤维素膜干燥，将其裁剪成5mmx5mm方块。将滤纸、吸水纸等其它材料裁剪成5mmx5mm方块。在渗滤塑料壳中从下至上按下列顺序组装：吸水纸〉Whatman滤纸〉硝酸纤维素膜，密封塑料壳。在塑料壳加样孔加样250ul孕妇尿液，待尿液完全渗入，在点样孔加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体，待渗入后，加250ul洗涤液，然后加入5－氨基水杨酸底物显色，棕色为阳性。

Claims (4)

1.一种渗滤检测装置，包括
上盖和底槽相互卡固形成一封闭壳体，其中
所述上盖开有点样孔用于添加待测样本以及其它试剂；
所述壳体中自上而下设有渗滤层和吸水层，所述渗滤层包含有特异性结合错误折叠蛋白聚集物的标记试剂。
2.根据权利要求1所述的一种渗滤检测装置，其中所述渗滤层还包括与所述标记试剂结合的错误折叠蛋白聚集物。
3.根据权利要求1或2中所述的一种渗滤检测装置，在制备用于检测和预测子痫前期的试剂盒中的应用。
4.用于检测和预测子痫前期的试剂盒，包括权利要求1或2中所述渗滤检测装置，以及洗脱液和比色卡。
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