CN104876979B - 一种具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物及其制备方法和用途，此化合物为具有抗凝血作用的五糖化合物的衍生物，具有显著的抗Xa因子活性。

Description

一种具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种化合物，具体涉及一种具有抗Xa因子活性的磺酸 化五糖化合物。

技术背景

血栓性疾病是严重危害人类健康的疾病，根据血栓形成部位、条件与性质，主要分为动 脉血栓与静脉血栓。动脉血栓形成是从动脉血管壁动脉粥样硬化病变与血小板激活开始，其 导致的严重临床疾病主要为急性心肌梗死、脑卒中；静脉血栓由静脉血管中多种原因诱发形 成，可导致静脉血栓栓塞，其主要临床表现为深静脉血栓形成和肺栓塞。大规模临床试验证 据显示，抗凝治疗可阻止血栓的蔓延和复发，并进一步降低脑卒中、肺栓塞等的发生率和死 亡率。因此，抗凝治疗已成为目前临床预防和治疗血栓栓塞性疾病的核心和基础，而抗凝药 物的研发也始终是新药研发的热点。

目前，正在研发或已经上市的新型抗凝药物主要包括直接凝血酶抑制剂、Xa因子抑制剂、 IX因子抑制剂、组织因子抑制剂以及新型维生素K拮抗剂。其中，直接凝血酶抑制剂和Xa 因子抑制剂是最具代表性的抗凝新药。

磺达肝癸钠是一种人工合成的选择性活化因子(Xa)抑制剂，通过与AT III的选择性结 合，增强了AT III对因子Xa固有的中和作用，因子Xa的中和作用可干扰凝血级联系统，并 能同时抑制凝血酶形成和血栓发展，其化学结构式如下(用D、E、F、G、H分别表示从左至右5个单糖)：

发明内容

本发明目的在于提供一种具有抗Xa因子活性的磺酸化五糖化合物(以下简称为化合物 A)。

本发明所述的化合物A，经测定其具有非常好的抗Xa因子活性，其抗Xa效价为612IU/mg，约是磺达肝癸钠的1.5倍，具有极高的药用价值和显著的治疗效果。

本发明所述的化合物A，其化学结构式如下(用D、E、F、G、H分别表示从左至右5 个单糖)：

本发明的另一个目的在于提供化合物A的制备方法。

具体的，本发明的化合物A的合成路线如下：

本发明所述的化合物A的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，D的制备：

将D1以适量无水二氯甲烷溶解，加入三氯乙腈，加入DBU，室温反应0.5h，得产品D；

步骤2，DEF的制备：

,将D和EF溶于适量无水二氯甲烷中，加入适量干燥4A分子筛，室温下搅拌30分钟后， 于氮气保护、-20℃下加入三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷溶液，反应30分钟，得DEF1。 将DEF1溶于适量乙酸酐中，于氮气保护、0℃下加入三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷 溶液，室温反应3小时；再加入氨水，室温反应4小时；最后加入适量三氯乙腈和DBU， 氮气保护，室温反应3小时，得产品DEF；

步骤3，GH的制备：

,将G、BSP和4A分子筛溶于无水二氯甲烷，氮气保护下室温搅拌30min，降温至-60℃， 缓慢滴加Tf₂O，滴毕后，温度升至-40℃，加入用无水二氯甲烷溶解稀释后的H，-40℃反应1h，得产品GH1。将GH1溶于适量无水二氯甲烷中，在室温下加入三乙胺，反应3h， 得产品GH；

步骤4，DEFGH的制备：

,将DEF和GH溶于适量无水二氯甲烷中，加入适量干燥4A分子筛，室温搅拌30分钟后，于 氮气保护、-20℃下加入适量三氟甲磺酸三甲基硅酯的二氯甲烷溶液，反应1小时，加入适 量三乙胺，搅拌30分钟，过滤，滤液浓缩至干，加入适量二氯甲烷溶解，依次用水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干，过硅胶柱，得产品DEFGH；

步骤5，化合物A的制备

,将DEFGH溶于THF，加入纯化水，之后滴加NaOH溶液，反应18小时，滴加盐酸中和，然后加入三氯甲烷萃取，取有机相，减压浓缩至干。所得样品溶于DMF，加入三氧化硫 三甲胺络合物，氮气保护，反应18小时，减压浓缩，滤液上样至葡聚糖凝胶LH-20层析 柱除盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至732钠型强酸性阳离子交换树脂层析柱，将 收集的产品液减压浓缩至干。将所得样品、纯化水和10％钯碳加入氢化釜中，釜内加氢至 1.5MPa，反应68小时，反应结束后，过滤，将滤液减压浓缩。将浓缩剩余物移至反应釜 中，加入纯化水，将三氧化硫吡啶络合物分批加入反应釜中，反应7小时，至溶液澄清透 明后，过滤，上样至葡聚糖凝胶G-25层析柱脱盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至 732钠型强酸性阳离子交换树脂层析柱，将收集的产品液减压浓缩至干，经制备纯化后得 化合物A。

优选的，本发明化合物A的制备方法，包括以下步骤：

步骤1，D的制备：

将D1(18.0g，42.1mmol)溶于90ml无水二氯甲烷中，加入三氯乙腈(21ml，209.4mmol)， 加入DBU(1.3ml，8.7mmol)，室温反应0.5h。减压浓缩至干，过硅胶柱，得产品D(22.6g， 39.6mmol)。

步骤2，DEF的制备：

将D(22.6g，39.6mmol)和EF(17.5g，29.2mmol)溶于200ml无水二氯甲烷中，加入40g干燥4A分子筛，室温下搅拌30分钟后，于氮气保护、-20℃下加入TBSOTf(2.7ml，11.8mmol)的二氯甲烷溶液，反应30分钟，过硅胶柱，得DEF1(19.0g，18.8mmol)。将 DEF1(19.0g，18.8mmol)溶于95ml乙酸酐中，于氮气保护、0℃下加入TBSOTf(0.9ml， 3.9mmol)的二氯甲烷溶液，室温反应3小时；再加入氨水2ml，室温反应4小时；最后 加入三氯乙腈(11.3ml，113.0mmol)和DBU(0.4ml，2.7mmol)，氮气保护，室温反应3 小时，过硅胶柱，得产品DEF(11.1g，9.2mmol)。

步骤3，GH的制备：

将G(30.0g，41.8mmol)、BSP(11.4g，54.6mmol)和30g干燥的4A分子筛溶于150ml无水二氯甲烷，氮气保护下室温搅拌30min，降温至-60℃，缓慢滴加Tf₂O(9.6ml，58.5mmol)，滴毕后，温度升至-40℃，加入用无水二氯甲烷溶解稀释后的H(23.1g，50.4mmol)，-40℃反应1h，过硅胶柱，得产品GH1(16.5g，15.8mmol)。将GH1(16.5g，15.8mmol)溶于150ml无水二氯甲烷中，在室温下加入三乙胺(55ml，294.7mmol)，反 应3h，过硅胶柱，得产品GH(11.8g，14.0mmol)。

步骤4，DEFGH的制备：

将DEF(11.1g，9.2mmol)和GH(9.3g，11.0mmol)溶于100ml无水二氯甲烷中，加入20g 干燥的4A分子筛，室温搅拌30分钟后，于氮气保护、-20℃下加入TMSOTf(0.7ml，3.9mmol) 的二氯甲烷溶液，反应1小时，加入适量三乙胺，搅拌30分钟，过滤，滤液浓缩至干，加 入适量二氯甲烷溶解，依次用水洗，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩至干，过硅胶柱， 得产品DEFGH(12.2g，6.4mmol)。

步骤5，化合物A的制备：

将DEFGH(12.2g，6.4mmol)溶于150ml四氢呋喃中，加入80ml纯化水，之后滴加1N氢氧化钠溶液120ml，室温反应18小时，滴加1N盐酸中和，然后加入三氯甲烷萃取，取 有机相，减压浓缩至干。所得样品溶于100ml N,N-二甲基甲酰胺中，加入三氧化硫三甲胺 络合物(15.5g，112.0mmol)，氮气保护，60℃反应18小时，减压浓缩，滤液上样至葡聚 糖凝胶LH-20层析柱除盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至732钠型强酸性阳离子 交换树脂层析柱，将收集的产品液减压浓缩至干。将所得样品、360ml纯化水和10.8g 10％ 钯碳加入氢化釜中，釜内加氢至1.5MPa，30℃反应68小时，反应结束后，过滤，将滤液 减压浓缩。将浓缩剩余物移至反应釜中，加入纯化水，将三氧化硫吡啶络合物(9.5g， 59.7mmol)分批加入反应釜中，10℃反应7小时，至溶液澄清透明后，过滤，上样至葡聚 糖凝胶G-25层析柱脱盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至732钠型强酸性阳离子交 换树脂层析柱，将收集的产品液减压浓缩至干，经制备纯化后得化合物A(2.6g，1.5mmol)。

本发明的另一个目的在于提供一种含有化合物A的药物组合物。

本发明的药物组合物中的药物活性物质为本发明的化合物，其在制剂中所占重量百分比 可以是0.01-99.99％，其余为药物可接受的载体。

本发明的药物组合物，在使用时可以根据需要制备成任何药物制剂形式，如口服制剂形 式，注射剂形式等。

本发明的药物组合物在制备成药物制剂时，根据需要可以加入药学上可接受的载体。

本发明的药物组合物，以单位剂量的制剂形式存在，所述单位剂量是指制剂的单位，如 片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。

本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜 衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、 喷雾剂、滴剂、滴丸剂、贴剂。

本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、 稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀 粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸 镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。

本发明可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使 活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。

口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者 可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的 添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维 素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶； 非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙 二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可 含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度， 可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将 其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和 缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻， 并在真空下将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述 药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半 胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、 木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍 生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、 碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β－环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬 脂酸钙、硬脂酸镁等。

优选的，本发明药物剂型为注射剂。

本发明所述注射剂，单位制剂中化合物A的含量为1.5mg-6.5mg。

本发明的另一个目的在于提供化合物A的药物用途。

本发明所述的化合物A在在制备具有抗Xa因子活性的药物中的应用。

本发明所述的化合物A在制备治疗血栓性疾病的药物中的应用。

本发明所述血栓性疾病主要分为动脉血栓与静脉血栓性疾病。

本发明还提供化合物A化学结构和纯度的测定方法。

本发明所述化合物A的纯度测定方法，包括以下步骤：

采用高效液相色谱仪，以季铵阴离子薄壳树脂为填充剂的聚合阴离子交换柱，水和氯化 钠溶液为流动相，检测化合物A的纯度。

本发明的具体检测方法请见说明书实施例2.

本发明还提供化合物A的结构测定。

本发明通过核磁和质谱鉴定化合物A的结构。从核磁氢谱看，与磺达肝癸钠相比，2.74 处多了一个甲基峰，H糖2位的氢化学位移由3.25移向低场3.66，H糖3位的氢由3.62移向3.93， 其他位置变化不大。从核磁碳谱看，与磺达肝癸钠相比，32.76处多了一个碳峰，H糖2位的碳 由60.37移向62.85，H糖1位和3位的碳也有不同程度的变化，其他位置变化不大。通过高分辨 质谱检测，推断该化合物的精确分子量为：1740.7864，分子式为C₃₂H₄₅N₃Na₁₀O₄₉S₈。结合质 谱可以推断与H糖2位相连的氨基上的氢被甲基取代，使得H糖2位的氢的化学位移移向低场， 同时，H糖1位与3位也发生了变化。

本发明按照国家食品药品监督管理局颁布的，低分子量肝素钙的国家药品标准WS1- (X-147)-2005Z中效价测定法测定化合物A的抗Xa因子(FXa)活性。测定化合物A的抗Xa 因子效价为612IU/mg，磺达肝癸钠效价为400IU/mg，低分子量肝素钙效价为105IU/mg。

化合物A属于新的化合物，目前国内外文献专利未对其进行报导。通过对化合物A的抗Xa因子活性进行测定，其抗Xa效价为612IU/mg，大约是磺达肝癸钠的1.5倍，其表 现出更好的抗Xa因子活性，未来有可能成为磺达肝癸钠的升级或更新换代品种。

此外，作为新的化合物，化合物A可能还具有其它潜在的药理方面的作用，从长远考虑， 经过更加深入的研究，其还会有更高的价值。

本发明的化合物A与现有产品相比较，具有生物活性强，副作用少等特点。如比磺达肝 癸钠和低分子肝素钙具有更强的生物活性；化合物A属于单一化合物，比属于混合物的低分 子肝素钙的副作用少。

本发明所述化合物D1，EF、G,、H，属于现有产品，可以在市场上购买到。

对文中所述的名词作进一步的解释：

DBU：1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯

TBSOTf：三氟甲磺酸三甲基硅酯

TMSOTf：三氟甲磺酸三甲基硅脂

BSP：1-(苯基亚硫酰基)哌啶

上述原料属于现有产品，可以在市场上买到。

附图说明

图1：本发明化合物A的液相色谱图

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步的解释，但不作为本发明的限制。

实施例1：化合物A的制备

步骤1，D的制备：

将D1(18.0g，42.1mmol)溶于90ml无水二氯甲烷中，加入三氯乙腈(21ml，209.4mmol)， 加入DBU(1.3ml，8.7mmol)，室温反应0.5h。减压浓缩至干，过硅胶柱，得产品D(22.6g， 39.6mmol)。

步骤2，DEF的制备：

将D(22.6g，39.6mmol)和EF(17.5g，29.2mmol)溶于200ml无水二氯甲烷中，加入40g干燥4A分子筛，室温下搅拌30分钟后，于氮气保护、-20℃下加入TBSOTf(2.7ml，11.8mmol)的二氯甲烷溶液，反应30分钟，过硅胶柱，得DEF1(19.0g，18.8mmol)。将 DEF1(19.0g，18.8mmol)溶于95ml乙酸酐中，于氮气保护、0℃下加入TBSOTf(0.9ml， 3.9mmol)的二氯甲烷溶液，室温反应3小时；再加入氨水2ml，室温反应4小时；最后 加入三氯乙腈(11.3ml，113.0mmol)和DBU(0.4ml，2.7mmol)，氮气保护，室温反应3 小时，过硅胶柱，得产品DEF(11.1g，9.2mmol)。

步骤3，GH的制备：

将G(30.0g，41.8mmol)、BSP(11.4g，54.6mmol)和30g干燥的4A分子筛溶于150ml无水二氯甲烷，氮气保护下室温搅拌30min，降温至-60℃，缓慢滴加Tf₂O(9.6ml，58.5mmol)，滴毕后，温度升至-40℃，加入用无水二氯甲烷溶解稀释后的H(23.1g，50.4mmol)，-40℃反应1h，过硅胶柱，得产品GH1(16.5g，15.8mmol)。将GH1(16.5g，15.8mmol)溶于150ml无水二氯甲烷中，在室温下加入三乙胺(55ml，294.7mmol)，反 应3h，过硅胶柱，得产品GH(11.8g，14.0mmol)。

步骤4，DEFGH的制备：

将DEF(11.1g，9.2mmol)和GH(9.3g，11.0mmol)溶于100ml无水二氯甲烷中，加入20g 干燥的4A分子筛，室温搅拌30分钟后，于氮气保护、-20℃下加入TMSOTf(0.7ml，3.9mmol) 的二氯甲烷溶液，反应1小时，减压浓缩至干，过硅胶柱，得产品DEFGH(12.2g，6.4mmol)。

步骤5，化合物A的制备：

将DEFGH(12.2g，6.4mmol)溶于150ml四氢呋喃中，加入80ml纯化水，之后滴加1N氢氧化钠溶液120ml，反应18小时，滴加1N盐酸中和，然后加入三氯甲烷萃取，取有机 相，减压浓缩至干。所得样品溶于100ml N,N-二甲基甲酰胺中，加入三氧化硫三甲胺络合 物(15.5g，112.0mmol)，氮气保护，反应18小时，减压浓缩，滤液上样至葡聚糖凝胶 LH-20层析柱除盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至732钠型强酸性阳离子交换树脂 层析柱，将收集的产品液减压浓缩至干。将所得样品、360ml纯化水和10.8g 10％钯碳加 入氢化釜中，釜内加氢至1.5MPa，反应68小时，反应结束后，过滤，将滤液减压浓缩。 将浓缩剩余物移至反应釜中，加入纯化水，将三氧化硫吡啶络合物(9.5g，59.7mmol)分 批加入反应釜中，反应7小时，至溶液澄清透明后，过滤，上样至葡聚糖凝胶G-25层析 柱脱盐，将收集的产品液减压蒸馏，并上样至732钠型强酸性阳离子交换树脂层析柱，将 收集的产品液减压浓缩至干，经制备纯化后得化合物A(2.6g，1.5mmol)。

实施例2通过高效液相色谱仪器检测化合物A

色谱柱为Dionex CarboPac^TM PA1(250×4mm)，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm， 柱温为35℃，以水为流动相A(1000ml水中加入约10μl二甲亚砜)，116.9g/l氯化钠溶液为流 动相B，梯度如表所示：

化合物A的纯度检测结果如附图1所示：保留时间为16.304min，纯度为99.73％。

实施例3：通过核磁和质谱对化合物A进行结构鉴定

仪器检测条件：Agilent 6520 Q-TOF LCMS高分辨质谱仪，流速1ml/min，进样1μl，离 子源ESI；BRUKER 400MHz核磁共振仪；溶剂：D₂O；内标：TMS。检测数据如下：

表1氢谱与碳谱数据

表2高分辨质谱数据

从核磁氢谱看，如表1所示，与磺达肝癸钠相比，2.74处多了一个甲基峰，H糖2位的氢化 学位移由3.25移向低场3.66，H糖3位的氢由3.62移向3.93，其他位置变化不大。从核磁碳谱看， 与磺达肝癸钠相比，32.76处多了一个碳峰，H糖2位的碳由60.37移向62.85，H糖1位和3位的 碳也有不同程度的变化，其他位置变化不大。通过高分辨质谱检测，如表2所示，推断该化合 物的精确分子量为：1740.7864，分子式为C₃₂H₄₅N₃Na₁₀O₄₉S₈。结合质谱可以推断与H糖2位相 连的氨基上的氢被甲基取代，使得H糖2位的氢的化学位移移向低场，同时，H糖1位与3位也 发生了变化。由此确定，化合物A的结构式如下：

实施例4：化合物A的Xa因子(FXa)活性检测

按照国家食品药品监督管理局颁布的，低分子量肝素钙的国家药品标准WS1-(X-147) -2005Z中效价测定法测定，即体外通过抗凝血酶III(AT III)与低分子肝素(LMWH)标准 品比较以测定供试品加速抑制Xa因子(FXa)的活性。具体方法如下：

一、溶液配制

三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)：取三羟甲基氨基甲烷6.08g和氯化钠8.77g 加水500ml使溶解，加牛血清白蛋白10g，用盐酸调节pH值至7.4，加水稀释至1000ml。

三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四醋酸二钠缓冲液(pH 8.4)：取氯化钠5.12g、三羟甲基氨基 甲烷3.03g和乙二胺四醋酸二钠1.4g，加水250ml使溶解，用盐酸调节pH值至8.4，加水稀释 至500ml。

LMWH标准品及供试品溶液的配制：用三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)分别 将标准品(S)和供试品(T)稀释成4个不同浓度的溶液，各剂量间的剂距比一般为1:0.7～ 1:0.6该浓度应在log剂量-反应的线性范围内。一般为每1ml中含0.025IU～0.2IU。

抗凝血酶(AT III)溶液：以三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)制成每1ml中含1IU 的溶液。

发色底物s-2765(或其他FXa特异性发色底物)：溶液用水制成0.003mol/L的溶液，临用 前用三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四醋酸二钠缓冲液(pH 8.4)稀释至0.0005mol/L。

Xa因子(FXa)溶液：用三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)，配制FXa溶液，调试其浓度，使之在用0.9％氯化钠溶液代替LMWH的抗Xa因子实验中，在405nm的波长处 的吸收值在0.6～0.7。

二、测定法

取小试管16支，分别标记T₁、T₂、T₃、T₄及S₁、S₂、S₃、S₄。各浓度平行做两管。每管分 别加人4种浓度的供试品(T)或标准品(S)稀释液50μl，及抗凝血酶溶液50μl，混匀(不 得产生气泡)。按S₁、S₂、S₃、S₄、T₁、T₂、T₃、T₄、T₁、T₂、T₃、T₄、S₁、S₂、S₃、S₄顺序 排列，37℃平衡1分钟。每管加FXa溶液100μl，混匀，37℃平衡1分钟，加发色底物溶液250 μl，混合，37℃准确保温4分钟后，各加30％醋酸溶液375μl，终止反应。用1cm光程的半微 量比色池，以三羟甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)为空白，在405nm的波长处测定每 管的吸光度。以三轻甲基氨基甲烷-氯化钠缓冲液(pH 7.4)代替供试品溶液(平行做两管) 同法操作作为空白对照管，在16支管开始和结尾时，分别测定空白对照管的吸光度。两者的 吸光度不得有显著性差异。以吸光度为纵坐标，标准品溶液(或供试品溶液)浓度的对数值 为横坐标分别作线性回归，按生物检定统计法(中国药典2005年版二部附录X IV)中的量反 应平行线原理4×4法实验设计，计算效价及实验误差。平均可信限率(FL％)不得大于15％。 三、试验结果

经上述方法测定，化合物A的抗Xa因子效价为612IU/mg，磺达肝癸钠效价为400IU/mg, 低分子量肝素钙效价为105IU/mg。与磺达肝癸钠相比，化合物A的抗Xa因子效价约为其1.5 倍。

实施例5化合物A注射液

处方：

制备工艺：

步骤1，在无菌条件下，取处方量80％注射用水，加入处方量氯化钠溶解，以0.1M氢氧 化钠或盐酸溶液调节pH至5.0-8.0；

步骤2，在无菌条件下，取处方量化合物A加入上述溶液中，搅拌，使溶解；

步骤3，在无菌条件下，向上述所得溶液中加入注射用水至全量；

步骤4，在无菌条件下，向上述所得溶液加入0.1％药用炭，保温，搅拌30分钟；

步骤5，在无菌条件下，将上述所得溶液分装至玻璃安瓿中，即得成品。

Claims (4)

1.化合物A在制备具有抗Xa因子活性的药物中的应用，其特征在于，化合物A结构如下：

2.化合物A在制备治疗血栓性疾病的药物中的应用，所述血栓性疾病为动脉血栓或静脉血栓性疾病,其特征在于，化合物A结构如下：

3.一种含有化合物A的注射用组合物，特征在于，单位制剂中化合物A的含量为1.5mg-6.5mg。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，制备方法包括以下步骤：

步骤1，在无菌条件下，取处方量80％注射用水，加入处方量氯化钠溶解，以0.1M氢氧化钠或盐酸溶液调节pH至5.0-8.0；

步骤2，在无菌条件下，取处方量化合物A加入上述溶液中，搅拌，使溶解；

步骤3，在无菌条件下，向上述所得溶液中加入注射用水至全量；

步骤4，在无菌条件下，向上述所得溶液加入0.1％药用炭，保温，搅拌30分钟；

步骤5，在无菌条件下，将上述所得溶液分装至玻璃安瓿中，即得成品。