CN104744547B - 一种抗乳腺癌转移作用的孕甾烷生物碱衍生物及医药用途 - Google Patents
一种抗乳腺癌转移作用的孕甾烷生物碱衍生物及医药用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种具有抗乳腺癌细胞转移作用的孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐，其结构如通式I：其中，R1与R2分别独立的选自氢，碳原子数1‑8的直链或支链烷基，环烷基，不饱和的烷基，苄基，苯环取代的苄基；或者R1R2N为哌啶基或吡咯基；R3与R4分别独立的选自氢，羟基；或者R3R4共同代表羰基氧原子；R5与R6为不同的取代基分别独立的选自氢或甲基；所述药学上可接受的盐是指与无机酸或有机酸形成的盐，其中无机酸或有机酸选自盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，甲磺酸，苯甲磺酸，草酸，酒石酸，马来酸，柠檬酸或者抗坏血酸。本发明还提供了该类孕甾烷生物碱衍生物在制备抗乳腺癌转移药物方面的用途。
Description
技术领域
本发明涉及一种孕甾烷生物碱衍生物、制备方法及其作为抗乳腺癌转移药物的应用，属于药物化学研究领域。
背景技术
近年来，肿瘤发病率越来越高，已成为危害人们身体健康的头号杀手。而肿瘤转移是肿瘤治疗的主要障碍，据不完全统计，在确诊的临床肿瘤患者中，大约60％的患者已经出现转移。肿瘤已成为当今严重威胁人类健康的重大疾病之一。随着生命科学的进步和医学的发展，人类对肿瘤的认识已经深入到分子细胞层面，各种新的手术治疗手段和化疗药物不断问世。然而，据美国癌症研究所统计，50余年来，癌症治疗并没有得到根本改观，癌症死亡率仍然居高不下，主要原因是肿瘤转移，没有肿瘤转移的有效治疗手段和药物。目前世界公认转移是恶性肿瘤患者死亡的主要原因，大约90％的恶性肿瘤患者死于肿瘤转移。因此，控制转移是决定肿瘤患者预后的关键因素。
化学药物治疗，是原发肿瘤治疗及手术后预防转移的重要治疗手段。几十年的临床实践表明，化疗药物多药耐药性的发生以及化疗药物非常严重的毒副作用，不仅严重削弱了化疗效果，而且化疗药物严重损害患者的免疫系统，基本上破坏了抵抗肿瘤细胞侵袭迁移的第一道屏障，半年内的肿瘤复发率高达69％，这是化学治疗的两难选择。迄今为止，世界上尚没有抗肿瘤转移药物问世。
肿瘤转移是由肿瘤原发部位直接向周围组织扩张和扩散，或者通过血道或淋巴道转移瘤细胞在远端组织落户发展形成新生肿瘤的过程。各种来源的肿瘤细胞在体内的转移在多数情况下具有其固定的靶器官，即这些具有转移性的肿瘤亚细胞群在控制得很好的实验条件下会按照一定的过程在特定区域内形成肿瘤转移灶。虽然在不同的肿瘤形成过程中，肿瘤细胞的基因会发生不同的变化，但是在肿瘤的转移过程大致相同。2001年，ZlotnikA小组研究发现，细胞的趋化运动在肿瘤细胞的转移和扩散中起着关键的作用。趋化因子CXCL12可以诱导乳腺癌细胞发生趋化运动。如果使用抑制趋化因子CXCL12的受体CXCR4活性的抗体则可以减弱乳腺癌细胞的趋化能力，并抑制其扩散，抑制肿瘤细胞的趋化运动将能有效地抑制肿瘤细胞的转移和扩散。
因此，在干扰或阻断恶性肿瘤在宿主体内播散的过程中，抑制肿瘤细胞的趋化运动是抗肿瘤转移药物研究中最重要的环节，是延长生存期、提高生存质量和降低死亡率的最有效手段。另一方面，由于常规原发肿瘤切除后的抗肿瘤转移药物治疗是持续的、长期给药过程，理想的抗肿瘤转移药物不仅阻断肿瘤细胞在体内的侵袭转移，而且应该是非细胞毒药物或者毒副作用很低，不会对免疫系统造成损害。鉴于目前抗肿瘤转移化疗药物疗效的局限性及其毒副作用。从中药中寻找安全性高、且能够有效预防和控制肿瘤转移的药物越来越受到重视。
本研究组发明专利公开了一种抗肿瘤转移作用的转筋草生物碱类化合物(申请号：201010114809.9)，在该发明基础上本研究组以活性成分Salignone为先导，合成了一系列衍生物，并进行了抗乳腺癌转移活性研究，其中大部分化合物显示了较强的抗乳腺癌转移活性，化合物5，17a，18a，21d，22c，23f，26b和26c尤为突出。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗乳腺癌转移作用的孕甾烷生物碱衍生物以及所述化合物在用于制备抗乳腺癌转移药物中的用途。
本发明是通过下述技术方案加以实现的：
一方面，本发明提供了一种孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐，其结构如式1所示：
其中，R1与R2分别独立地选自氢、碳原子数1-8的直链或支链烷基、环烷基、不饱和烷基、苄基、苯环取代的苄基；或者R1R2N为哌啶基或吡咯基；
R3与R4分别独立地选自氢、羟基、或者R3R4代表羰基氧原子；
R5与R6为不同的取代基分别独立地选自氢或甲基；
所述药学上可接受的盐是指与无机酸或有机酸形成的盐，其中无机酸或有机酸选自盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、苯甲磺酸、草酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸或者抗坏血酸。
本发明提供的一种孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法，其主要步骤为：以雄酮或表雄酮为原料经过Wittig反应引入双键，进一步的经过Mitsunobu反应和肼解反应引入氨基，进一步的经过Riley氧化反应和Dess-Martin氧化引入羟基和羰基。其中，邻苯二甲酰基与叔丁氧碳酰基作为氨基保护基以避免氨基被氧化。一部分目标衍生物经卤代反应或还原胺化反应或酰胺还原反应制得，另一部分目标衍生物则经保护基脱除制得。
本发明的具体合成路线如式2所示：
式2 孕甾生物碱衍生物的合成路线
另一方面，本发明提供了一种孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗乳腺癌转移药物方面的用途。
首先，本发明对合成的孕甾烷生物碱衍生物进行了细胞毒性的测定，进一步以非细胞毒剂量进行了抗乳腺癌转移活性筛选，所筛选的衍生物化学结构如式3所示：
式3 孕甾烷生物碱衍生物的化学结构
各衍生物对乳腺癌细胞的毒性作用
MTT比色测定法的原理：此分析方法以还原3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)为基础，是一种检测细胞存活和生长状况的常用方法。MTT为一种通用的细胞染色剂，活细胞的线粒体中存在与NADP相关的琥珀酸脱氢酶，可将外源性黄色MTT还原为不溶性的蓝紫色结晶物甲臜(Formazane)，并沉积在细胞中，死细胞此酶消失，MTT不被还原。用DMSO溶解Formazane后用酶标仪在550nm波长处检测光密度的变化大小，来衡量测试药物对细胞的生长抑制作用，进而评价细胞毒性。
实验步骤：将培养好的细胞用0.25％的胰酶消化，吸出胰酶后，用含10％FBS的培养液终止消化，混匀细胞悬液，计数调节密度为1x104，将调好的细胞悬液加于96孔板，每孔180ul，置于37℃，5％CO2的孵箱内培养24小时，24小时后加药，每个浓度5个复孔，加好药后继续置于37℃，5％CO2的孵箱内培养48小时，之后每孔加5mg/ml的MTT20ul，继续置于37℃，5％CO2的孵箱内培养4小时，4小时后取出96板，将上清吸出，每孔加100ul的DMSO，用酶标仪在570nm波长下测量吸光度。抑制率＝(1-加药组OD值/空白组OD值)x100％
抗乳腺癌转移活性评价 Transwell chemotaxis方法原理：
在Transwell小室上腔直接将8μm孔径滤膜安放在侵袭腔室的上下腔室之间，肿瘤细胞通过变形运动穿过滤膜，用这种模型能够分析细胞运动能力的大小。在药物筛选时加入趋化诱导剂(趋化因子EGF)，通过衡量与测试药物共培养的肿瘤细胞和空白组肿瘤细胞趋化穿过滤膜的细胞数量变化，来表达测试药物抑制肿瘤细胞的趋化迁移能力的大小，进而评价测试药物抗肿瘤转移的活性强弱。阳性对照为试剂LY294002(一种具有抗肿瘤转移作用的P13K抑制剂)。
实验步骤：
1.样品非细胞毒剂量的筛选：利用MTT法筛选出非细胞毒作用的样品浓度。
2.样品与细胞共培养：将细胞铺于6孔板，置于37℃，5％CO2的孵箱内培养24小时使其贴壁，24小时后以确定的浓度将样品加于6孔板内，37℃5％CO2孵箱内共孵育24小时。
3.趋化实验：将用样品处理过的细胞分别用0.25％的胰酶消化后，用含10％FBS的培养液终止消化，该细胞悬液1300rpm离心5分钟。将上清倒出，加0.1％的BM将细胞混匀后再次离心5分钟后，计数，将细胞密度调成5x105，放置在孵箱内备用。于冰上配置趋化因子EGF，加于趋化小室的下室，每孔30ul，将包被好的膜铺于下室上，放好胶垫，固定上室，将之前准备好的细胞悬液加到上室，每孔50ul，每个样品浓度3个复孔，加好后置于CO2孵箱内培养3.5h后取出，取出下室，刮去没有趋化过来的细胞，然后用三步染色试剂进行固定和染色，染色后将膜用石蜡油固定，于显微镜下计数。
4.统计计算方法：计数时，每个孔选取5个视野分别计数，取平均值，三个复孔再取平均即为该样品浓度下的趋化细胞数。数据用SPSS11.5进行处理，计算半数抑制率IC50。
计算公式：
实验结果
优选化合物对MB-MDA-231(人乳腺癌细胞)趋化抑制率如表1所示：
表1 优选化合物对MB-MDA-231趋化抑制率
抗乳腺癌转移活性评价表明，优选化合物均在非细胞毒剂量下显示出抗乳腺癌转移活性，其中化合物5，17a，18a，21d，22c，23f，26b和26c活性尤为突出。
具体实施方式
实施例1.
化合物1和2的合成方法
称取4当量叔丁醇钾和4当量乙基三苯基溴化膦于反应瓶中，加入适量无水THF，于室温下搅拌1小时。向反应液中加入1当量的表雄酮或雄酮，在氮气保护下回流，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵水溶液终止反应，二氯甲烷萃取，水洗3次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品。粗品经二氯甲烷-甲醇重结晶得纯品。
(Z)-3β-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(1)
以表雄酮为原料，按上述方法制备，粗品经甲醇重结晶得白色固体，产率97.8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.11(q，J＝6.9Hz，1H)，3.59(m，1H)，1.65(d，J＝6.9Hz，3H)，0.87(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.5，113.2，71.3，56.3，54.4，44.8，44.4，38.2，37.2，37.0，35.5，31.9，31.4，28.7，24.4，21.4，16.9.ESI-MS m/z：301[M-H]-.
(Z)-3α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(2)
以雄酮为原料，按上述方法制备，粗品经甲醇重结晶得白色固体，产率84.0％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ5.12(qt，J1＝2.0，J2＝7.1Hz，1H)，4.06(s，1H)，1.67(dt，J＝2.0，7.1Hz，3H)，0.88(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.5，113.2，66.6，56.3，54.3，44.4，39.1，37.2，36.2，35.9，35.0，32.2，31.9，31.4，29.0，28.5，24.3，21.0，16.9，13.1，11.2.ESI-MS m/z：301[M-H]-.
实施例2.
化合物3和4的合成方法
称取1.13当量三苯基膦，1.1当量邻苯二甲酰亚胺和1当量化合物1或2于反应瓶中，加适量无水四氢呋喃于冰浴下搅拌1小时。向反应液中加2当量偶氮二甲酸二异丙酯，于室温下密封搅拌，TLC监测至反应结束。加水淬灭反应，减压浓缩除去THF，二氯甲烷萃取，水洗三次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品。粗品经重结晶得纯品。
(Z)-3β-邻苯二甲酰亚氨基孕甾-17(20)-烯的合成(3)
以9.66g化合物2为原料，按上述方法制备，粗品用甲醇和二氯甲烷混合溶剂重结晶得白色固体5.07g，产率36.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82-7.79(m，2H)，7.70-7.68(m，2H)，5.13(qt，J11.9，7.2Hz，1H)，4.22-4.13(m，1H)，1.66(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H)，0.97(s，3H)，0.88(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.5，150.5，133.8，132.1，123.0，113.2，56.2，54.1，50.6，46.1，44.4，37.8，37.2，35.6，35.1，31.8，31.7，31.4，28.6，25.1，24.4，21.3，16.9，13.1，12.2.ESI-MS m/z：430[M-H]-.
(Z)-3α-邻苯二甲酰亚氨基孕甾-17(20)-烯的合成(4)
以12.50g化合物1为原料，按上述方法制备，粗品用甲醇和二氯甲烷混合溶剂重结晶得白色固体4.34g，产率21.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.81-7.82(m，2H)，7.71-7.69(m，2H)，5.12(q，J＝6.8Hz，1H)，4.51(br s，1H)，1.66(d，J＝6.8Hz，3H)，0.89(s，3H)，0.87(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)δ169.2，155.6，133.8，132.1，122.9，119.3，74.4，54.5，52.4，47.5，44.5，40.4，37.4，35.1，35.0，34.4，32.7，31.6，31.6，28.5，24.6，20.9，17.6，13.2，12.4.ESI-MS m/z：430[M-H]-.
实施例3.
化合物5，6，11和12的合成方法
称取1当量原料于反应瓶中，加入适量甲醇和40当量80％水合肼回流。TLC监测反应结束。冷却至室温，加氢氧化钠水溶液(4～6mol/L)适量至溶液呈白色浑浊。抽滤，水洗，干燥后得粗品，粗品经HW-40凝胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-氨基孕甾-17(20)-烯的合成(5)
以化合物3为原料，按上述方法制备，粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得白色固体，产率为68.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.10(qt，J＝2.0，6.8Hz，1H)，2.67(br s，1H)，1.64(dt，J＝2.0，6.8Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.5，113.2，56.3，54.5，51.1，45.5，44.4，37.6，37.2，35.6，35.1，31.9，31.4，31.3，28.7，28.6，24.4，21.3，16.9，13.1，12.3.ESI-MS m/z：300[M-H]-.
(Z)-3α-氨基孕甾-17(20)-烯的合成(6)
以化合物4为原料，按上述方法制备，粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得白色固体，产率为80.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.10(q，J＝6.8Hz，1H)，3.16(brs，1H)，1.64(d，J＝6.8Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.2，113.1，56.2，54.4，49.4，45.6，44.3，39.1，37.1，36.3，34.9，32.0，31.8，31.3，28.9，28.6，24.3，20.9，16.8，13.0，11.2.ESI-MS m/z：300[M-H]-.
(E)-3β-氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(11)
以化合物9为原料，按上述方法制备，粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得白色固体，产率为83.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.57(q，J＝6.8Hz，1H)，4.42(d，J＝4.4Hz，1H)，2.66(br s，1H)，1.73(d，J＝6.8Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.6，119.3，74.454.5，52.5，51.1，45.5，44.5，39.4，37.6，37.4，35.6，35.1，34.4，32.6，31.9，28.7，21.2，17.6，13.2，12.3.ESI-MS m/z：316[M-H]-.
(E)-3α-氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(12)
以化合物10为原料，按上述方法制备，粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得白色固体，产率为62.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.58(q，J＝7.2Hz，1H)，4.43(d，J＝4.9Hz，1H)，3.21(br s，1H)，1.74(dt，J＝7.2Hz，3H)，0.87(s，3H)，0.81(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)δ155.5，119.3，74.3，54.4，52.5，45.8，44.6，39.1，37.4，36.4，36.0，35.1，32.0，31.8，28.9，28.6，20.8，17.6，13.2，11.3.ESI-MS m/z：316[M-H]-.
实施例4.
化合物9和10的合成方法
将0.5当量二氧化硒和7.9当量过氧叔丁醇，冰浴下搅拌1h，滴加1当量原料的二氯甲烷溶液，继续冰浴反应。TLC监测反应结束。用10％亚硫酸氢钠溶液淬灭，搅拌15min，用二氯甲烷萃取，合并有机相，减压浓缩，干燥得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(E)-3β-邻苯二甲酰亚氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(9)
以1000mg化合物3为原料，按上述方法制备，3.5h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝8∶1-3∶1，V/V)纯化得白色固体896.8mg，产率86.5％。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ7.82-7.80(m，2H)，7.70-7.68(m，2H)，5.58(q，J＝7.2Hz，1H)，4.43(d，J＝5.2Hz，1H)，4.22-4.13(m，1H)，1.74(d，J＝7.2Hz，3H)，0.99(s，3H)，0.89(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ168.5，155.6，133.8，132.1，123.0，119.4，74.4，54.1，52.5，50.5，46.1，44.5，37.7，37.4，35.6，35.1,34.4，31.8，31.7，28.5，25.1，21.2，17.6，13.2，12.2.ESI-MS m/z：446[M-H]-.
(E)-3α-邻苯二甲酰亚氨基-16-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(10)
以504.0mg化合物4为原料，按上述方法制备，3h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝8∶1-4∶1，V/V)纯化得白色固体323.2mg，产率61.8％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82-2.80(m，2H)，7.71-7.69(m，2H)，5.56(q，J＝7.2Hz，1H)，4.49(br s，1H)，4.41(d，J＝5.4Hz，1H)，1.72(d，J＝7.2Hz，3H)，0.87(s，3H)，0.86(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ169.2，155.6，133.8，132.1，122.9，119.4，74.4，54.5，52.4，47.5，44.5，40.4，37.4，35.1，34.9，34.5，32.7，31.6，28.5，24.6，20.9，17.6，13.2，12.4.ESI-MS m/z：446.6[M-H]-.
实施例5.
化合物7a，8a，13a和14a的合成方法
将1当量原料称于反应瓶中，加入适量二氯甲烷溶解，冰浴下滴加1.5当量乙酰氯，滴毕后室温反应，TLC监测至反应结束。加入饱和碳酸氢钠水溶液淬灭反应，二氯甲烷萃取，合并有机相，减压浓缩，干燥得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-乙酰氨基孕甾-17(20)-烯的合成(7a)
以327mg化合物5和乙酰氯为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝2∶1,V/V)纯化得白色固体238mg，产率67.44％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.67(d，J＝8.0Hz，1H)，5.10(qt，J＝2.0，7.2Hz，1H)，3.78-3.70(m，1H)，1.95(s，3H)，1.64(dt，J＝2.0，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ169.3，150.3，113.2，56.2，54.3，49.0，45.3，44.3，37.3，37.2，35.5，35.4，35.0，31.8，31.4，28.8，28.5，24.4，23.5，21.3，16.9，13.1，12.2.ESI-MSm/z：342[M-H]-.
(Z)-3α-乙酰氨基孕甾-17(20)-烯的合成(8a)
以600mg化合物6和乙酰氯为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝3∶1-1∶2，V/V)纯化得白色固体647.51mg，产率90.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.84(brs，1H)，5.10(qt，J＝1.9，7.2Hz，1H)，4.10(d，J＝7.0Hz，1H)，1.98(s，3H)，1.64(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ169.2，150.4，113.3，56.4，54.6，44.8，44.4，41.0，37.2，36.1，35.0，33.2，32.8，31.8，31.4，28.5，28.4，26.0，24.3，23.7，21.0，16.9，13.1，11.4.ESI-MS m/z：342[M-H]-.
(E)-3β-乙酰氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(13a)
以化合物11为原料，按上述方法制备，2h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝1∶4，V/V)纯化得白色固体，产率44％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.58(dd，J＝1.1，7.2Hz，1H)，5.35(d，J＝7.5Hz，1H)，4.43(d，J＝5.2Hz，1H)，3.77(m，1H)，1.96(s，3H)，1.74(dd，J＝1.1，7.2Hz，3H)，0.87(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ169.2，155.5，119.4，74.4，54.3，52.4，48.9，45.3，44.5，37.4，37.3，35.5，35.4，35.0，34.4，31.7，28.9，28.4，23.6，21.2，17.6，13.2，12.2.ESI-MS m/z：358.6[M-H]-.
(E)-3α-乙酰胺基-16α-羟基-孕甾-17(20)-烯的合成(14a)
以化合物12为原料，按上述方法制备，1h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝1∶3-1∶6，V/V)纯化得白色固体，产率45.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.73(br s，1H)，5.35(qd，J＝1.6，7.2Hz，1H)，4.79(d，J＝5.2Hz，1H)，4.13(s，1H)，1.99(s，3H)，1.78(d，J＝7.2Hz，3H)，0.82(s，3H)，0.73(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ169.2，156.2，117.5，71.1，55.0，51.7，44.7，44.1，41.1，36.7，36.2，35.9，34.6，33.2，32.8，31.9，28.4，26.0，23.7，20.8，20.6，14.6，11.4.ESI-MS m/z：358[M-H]-.
实施例6.
化合物7g，8g，13g和14g的合成方法
将1当量原料用少量四氢呋喃溶解，冰浴下加2当量碳酸氢钠，滴加2当量二碳酸二叔丁酯的四氢呋喃溶液，继续室温下搅拌，TLC监测反应完全，蒸干溶剂后，二氯甲烷萃取，水洗两次，再用饱和氯化钠水溶液洗一次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯的合成(7g)
以化合物5为原料，按上述方法制备，20h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1-14∶1，V/V)得白色固体，产率47.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.11(qt，J＝1.9，7.1Hz，1H)，4.37(s，1H)，3.41(br s，1H)，1.64(dt，J＝1.9，7.1Hz，3H)，1.44(s，9H)，0.86(s，3H)，0.78(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.3，150.4，113.2，79.0，56.2，54.3，50.1，45.4，44.3，37.4，37.2，35.8，35.5，35.0，31.8，31.4，29.2，28.5，28.4，24.4，21.3，16.9，13.1，12.2.ESI-MS m/z：401[M-H]-.
(Z)-3α-叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯的合成(8g)
以化合物6为原料，按上述方法制备，15h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝12∶1，V/V)得白色固体，产率12.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.11(qt，J＝2.0，7.1Hz，1H)，3.84(s，1H)，1.65(dt，J1＝2.0Hz，J2＝7.1Hz，3H)，1.45(s，9H)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.4，113.2，56.4，54.5，44.4，37.2，36.1，35.0，33.3，31.8，31.4，28.5，26.4，24.3，21.0，16.9，13.1，11.4.ESI-MS m/z：400.6[M-H]-.
(E)-3β-叔丁氧甲酰氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(13g)
以化合物11为原料，按上述方法制备，17h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝8∶1-4∶1，V/V)得白色固体，产率80.1％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.57(q，J＝6.8Hz，1H)，4.41(d，J＝4.8Hz，1H)，3.41(br s，1H)，1.73(d，J＝6.8Hz，3H)，1.73(d，J＝6.8Hz，3H)，1.44(s，9H)，0.85(s，3H)，0.78(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.5，119.4，74.4，54.3，52.5，45.4，44.5，37.4，35.8，35.5，35.1，34.4，31.7，29.2，28.5，21.2，17.6，13.2，12.2.ESI-MS m/z：416[M-H]-.
(E)-3α-叔丁氧甲酰氨基-16α-羟基孕甾-17(20)-烯的合成(14g)
以化合物12为原料，按上述方法制备，19h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝12∶1，V/V)纯化得白色固体，产率16.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ5.58(q，J＝7.1Hz，1H)，4.42(d，J＝4.9Hz，1H)，3.84(br s，1H)，1.45(s，9H)，0.85(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.5，155.3，119.4，74.3，54.5，52.5，44.5，40.7，37.4，36.1，35.1，34.4，33.3，33.0，31.8，28.5，28.4，26.4，20.8，17.6，13.2，11.4.ESI-MS m/z：416[M-H]-.
实施例7.
化合物23-26e和23-26f的合成方法
称取1当量原料于反应瓶中，加无水THF溶解，加入6当量LiAlH4的无水THF溶液，于60℃下搅拌16h，TLC检测至反应结束，滴加NaOH溶液至碱性淬灭反应，加入适量水、甲醇和二氯甲烷，硅藻土过滤，浓缩，二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥，浓缩得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-甲氨基孕甾-17-烯(23e)
以化合物7g为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→EA+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率51.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.2Hz，1H)，2.42(s，3H)，1.65(dt，J＝1.9，7.1Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，59.3，56.5，54.7，45.5，44.6，37.6，37.5，36.3，35.8，35.2，33.8，32.2，31.6，29.2，29.0，24.6，21.5，17.1，13.3，12.5.ESI-MS m/z：316[M+H]+.
(Z)-3α-甲氨基孕甾-17-烯(24e)
以化合物8g为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶1→EA+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率16.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.09(qt，1H，J＝1.9，7.1Hz)，2.70(d，1H，J＝2.8Hz)，2.38(s，3H)，1.64(dd，3H，J＝2.0，7.1Hz)，0.86(s，3H)，0.81(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，56.5，54.7，54.6，44.6，39.8，37.4，36.5，35.2，34.5，33.2，32.8，32.0，31.6，28.9，25.9，24.5，21.1，17.6，13.2，11.7.ESI-MS m/z：316[M+H]+.
(Z)-3β-乙氨基孕甾-17-烯(23f)
以化合物7a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→EA+1％TEA，V/V)，得63.9mg白色固体，产率72.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(qt，1H，J1＝2.0Hz，J2＝7.2Hz)，2.69(dq，J＝1.0，7.2Hz，2H)，1.64(dt，J＝1.9Hz，7.1Hz，3H)，1.09(t，J＝7.1Hz，6H)，0.85(s，3H)，0.78(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，57.6，56.5，54.7，45.6，44.6，41.4，37.7，37.4，36.3，36.2，35.3，32.2，31.6，29.6，29.0，24.6，21.5，17.1，15.8，13.3，12.5.ESI-MS m/z：330[M+H]+.
(Z)-3α-乙氨基孕甾-17-烯(24f)
以化合物8a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶1→PE∶EA＝1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率31.2％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(q，J＝6.8Hz，1H)，2.85(s，1H)，2.61(q，J＝6.9Hz，2H)，1.65(d，J＝7.4Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)：δ150.8，113.3，56.5，54.5，52.4，44.6，41.8，39.9，37.4，36.5，35.2，33.5，32.8，32.0，31.6，31.5，28.9，26.1，24.5，21.1，17.0，15.7，13.2，11.7.ESI-MSm/z：330[M+H]+.
(E)-3β-甲氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(25e)
以化合物13g为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶4→PE∶EA＝1∶4+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率17.9％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.56(qd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，4.40(d，J＝5.0Hz，1H)，2.40(s，3H)，1.71(dd，3H，J＝0.84，7.1Hz)，0.84(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.5，119.2，74.2，59.1，54.5，52.5，45.3，44.5，37.4，37.3，36.1，35.6，35.1，34.4，33.7，31.9，29.0，28.8，21.2，17.6，13.2，12.3.ESI-MS m/z：332[M+H]+.
(E)-3α-甲氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(26e)
以化合物14g为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→EA+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率21.8％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.58(qd，1H，J＝1.1，7.2Hz)，4.42(d，J＝4.7Hz，1H)，2.74(br s，1H)，2.40(s，3H)，1.73(dd，J＝0.76，7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.6，119.2，74.3，54.6，54.2，52.5，44.6，39.6，37.4，36.3，35.1，34.5，34.2，32.8，32.5，31.7，28.7，25.5，20.8，17.6，13.2，11.5.ESI-MS m/z：332[M+H]+.
(E)-3β-乙氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(25f)
以化合物13a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→PE∶EA＝1∶2+1％TEA，V/V)得白色固体，产率54.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.55(qd，J＝1.1，7.2Hz，1H).4.40(d，J＝5.0Hz，1H)，2.65(qd，J＝1.4，7.2Hz，2H)，2.46(m，1H)，2.23(m，1H)，1.73(dd，J＝0.80，7.2Hz，3H)，1.09(qd，J＝7.1Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.6，119.3，74.3，57.4，54.5，52.5，45.4，44.5，41.2，37.4，36.1，36.0，35.1，34.4，31.9，29.4，28.8，21.2，17.6，15.6，13.2，12.3.ESI-MS m/z：346[M+H]+.
(E)-3α-乙氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(26f)
以化合物14a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→PE∶EA＝1∶2+1％TEA，V/V)得白色固体，产率53.5％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.56(q，J＝6.8Hz，1H)，4.40(d，J＝4.4Hz，1H)，2.85(s，1H)，2.61(d，J＝6.8Hz，2H)，2.22(m，1H)，1.73(d，J＝6.8Hz，3H)，1.12(t，J＝6.8Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：155.6，119.2，74.3，54.3，52.5，52.2，44.6，41.6，39.7，37.4，36.3，35.1，34.4，33.2，32.5，31.8，28.7，25.8，20.8，17.6，15.4，13.2，11.5.ESI-MS m/z：346[M+H]+.
实施例8.
化合物15a-c和16a-c的合成方法
将1当量原料与1.5当量Dess-Martin氧化剂置于反应瓶中，加适量二氯甲烷室温反应，TLC监测至反应结束。反应液中加入饱和碳酸氢钠水溶液搅拌，用二氯甲烷萃取，合并的有机相以饱和氯化钠水溶液洗两次，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(E)-3β-叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(15a)
以化合物22为原料，按上述方法制备，1h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝6∶1-4∶1，V/V)纯化得白色固体，产率44.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.49(q，J＝7.2Hz，1H)，4.40(br s，1H)，3.42(br s，1H)，1.84(d，J＝7.2Hz，3H)，1.44(s，9H)，1.01(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.6，148.0，129.0，54.0，50.0，45.4，43.4，37.9，37.1，36.3，35.7，35.6，34.2，31.9，29.1，28.4，28.3，20.8，17.6，13.2，12.2.ESI-MSm/z：414[M-H]-.
(E)-3α-叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(16a)
以化合物10为原料，按上述方法制备，2h后反应结束。粗品经快速硅胶柱色谱(PE∶EA＝6∶1-4∶1，V/V)纯化得白色固体，产率55.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.49(q，J＝7.2Hz，1H)，4.83(brs，1H)，3.85(br s，1H)，1.84(d，J＝7.2Hz，3H)，1.45(s，9H)，1.01(s，3H)，0.84(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.5，155.2，147.9，129.0，79.0，54.2，50.1，45.7，43.4，40.6，37.9，36.3，36.2，34.1，33.2，32.7，31.9，28.5，28.2，26.3，20.5，17.6，13.2，11.4.ESI-MS m/z：414[M-H]-.
(E)-3β-N-甲基叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(15b)
以化合物13h为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝10∶1)，得到白色固体，产率36％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.48(q，J＝7.6Hz，1H)，1.84(d，J＝7.6Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.01(s，3H)，0.84(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ206.5，155.7，148.0，128.9，79.1，54.0，50.0，45.8，43.4，37.9，37.4，36.3，35.6，34.2，31.9，28.5，25.2，20.9，17.6，13.1，12.3.ESI-MS m/z：430[M+H]+.
(E)-3α-N-甲基叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(16b)
以化合物14h为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝10∶1-8∶1)，得白色固体，产率35％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.48(q，J＝7.6Hz，1H).2.74(s，3H)，1.84(d，J＝7.6Hz，1H)，1.46(s，9H)，1.01(s，3H)，0.84(s，3H)13C NMR(150Hz，CDCl3)：δ206.5，155.7，148.0，128.9，79.1，54.0，50.0，45.8，43.4，37.9，37.4，36.3，35.6，34.2，32.0，28.6，28.5，25.2，20.9，17.6，13.1，12.3.ESI-MS m/z：430[M+H]+.
(E)-3β-N-乙基叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(15c)
以化合物13i为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝18∶1)，得白色固体，产率64％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δH0.85(s，3H)，1.01(s，3H)，1.10(t，J＝6.8Hz，3H)，1.46(s，9H)，1.84(d，J＝7.2Hz，3H)，3.14(s，2H)，6.48(q，J＝7.6Hz，1H).13CNMR(150Hz，CDCl3)：δ206.8，155.4，148.0，128.9，79.0，54.0，50.0，46.0，43.4，37.9，37.6，36.3，35.7，34.0，33.0，31.9，28.6，28.5，26.3，20.9，17.7，13.1，12.4ESI-MS m/z：444[M+H]+.
(E)-3α-N-乙基叔丁氧甲酰氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(16c)
以化合物14i为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝15∶1)洗脱，得白色固体，产率64％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.49(q，J＝7.2Hz，1H)，3.13(s，2H)，1.84(d，J＝7.6Hz，1H)，1.46(s，9H)，1.11(t，J＝7.0Hz，3H)，1.01(s，3H)，0.85(s，3H).13C NMR(100Hz，CDCl3)：δ206.5，155.4，148.0，128.9，79.0，54.0，50.8，50.0，46.0，43.4，37.9，37.6，36.3，35.7，34.2，33.0，31.9，28.6，20.9，17.6，13.1，12.4.ESI-MS m/z：444[M+H]+.
实施例9.
化合物17a-c和18a-c的合成方法
称取1当量原料于反应瓶，加适量二氯甲烷于冰浴下搅拌，再加适量三氟乙酸搅拌，TLC监测至反应结束。减压蒸干溶剂，加碳酸氢钠水溶液至pH＝9～10。二氯甲烷萃取3次，合并有机相，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩得粗品。粗品经HW-40凝胶柱色谱纯化得纯品。
(E)-3β-氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(17a)
以化合物23为原料，按上述方法制备，1h后反应结束。粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得黄色油状物，产率为92.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.48(q，J＝7.6Hz，1H)，2.67(br s，1H)，1.84(d，J＝7.6Hz，3H)，1.01(s，3H)，0.83(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.6，148.0，129.0，54.2，51.1，50.1，45.5，43.4，39.3，38.0，37.3，36.4，35.7，34.2，32.5，32.0，28.5，20.9，17.7，13.2，12.3.ESI-MS m/z：316[M+H]+.
(E)-3α-氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(18a)
以化合物11为原料，按上述方法制备，1h后反应结束。粗品经HW-40凝胶柱色谱(DCM∶MeOH＝2∶1，V/V)纯化得黄色油状物，产率为96.1％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.48(q，J＝7.2Hz，1H)，3.24(br s，1H)，1.84(d，J＝7.2Hz，3H)，1.01(s，3H)，0.83(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.6，148.0，128.9，54.1，50.1，45.8，43.4，39.0，37.9，36.5，36.3，35.8，34.2，31.9，31.8，28.7，28.4，20.5，17.7，13.2，12.3.ESI-MS m/z：316[M+H]+.
(E)-3β-甲氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(17b)
以化合物15b为原料，按上述方法制备，反应产物无需纯化，收率为93.9％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.48(q，J＝7.5Hz，1H)，4.13(s，1H)，2.48(s，3H)，1.83(d，J＝7.5Hz，3H)，1.00(s，3H)，0.83(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ206.4，148.0，128.9，58.8，54.1，50.0，45.1，43.4，37.5，36.8，36.3，36.1，34.2，34.0，32.4，31.9，28.5，27.5，20.9，17.6，13.1，12.1.ESI-MS m/z：330[M+H]+.
(E)-3α-甲氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(18b)
以化合物16b为原料，按上述方法制备，反应产物无需纯化，收率为65.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.81(m，2H)，7.69(m，2H)，4.18(m，1H)，0.99(s，3H)，0.88(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ221.3，168.5，133.8，132.1，123.0，54.2，51.4，50.4，47.8，46.1，37.8，35.9，35.7，35.1，31.6，30.8，28.3，25.0，21.8，20.4，13.8，12.2.ESI-MS m/z：330[M+H]+.
(E)-3β-甲氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(17c)
以化合物15c为原料，按上述方法制备，反应产物无需纯化，收率为67.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.47(q，J＝7.5Hz，1H)，2.80(q，J＝7.2Hz，2H)，2.65(m，1H)，1.83(d，J＝7.2Hz，3H)，1.17，(t，J＝7.2Hz，3H)，0.10(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ206.4，148.0，128.9，57.1，54.1，50.1，45.1，43.4，40.6，37.9，36.9，36.3，36.0，34.2，34.1，31.9，28.4，27.5，20.8，17.6，14.0，13.1，12.1.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
(E)-3α-乙氨基孕甾-17(20)-烯-16-酮的合成(18c)
以化合物16c为原料，按上述方法制备，反应产物无需纯化，收率为75.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.81(m，2H)，7.69(m，2H)，4.18(m，1H)，1.00(s，3H)，0.84(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ221.3，168.5，133.8，132.1，123.0，54.2，51.4，50.4，47.8，46.1，37.8，35.9，35.7，35.1，31.6，30.8，28.3，25.0，21.8，20.4，13.8，12.2.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
实施例10.
化合物21-26a的合成方法
称取约100mg原料于反应瓶，加适量二氯甲烷溶解，再加入约0.4g多聚甲醛，50℃下搅拌回流1h后加入3当量NaBH(OAc)3，继续搅拌。TLC监测反应结束。饱和NaHCO3淬灭反应，二氯甲烷萃取3次，合并的有机相以水洗两次，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品。粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-二甲氨基孕甾-17-烯的合成(23a)
以化合物5为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率55.7％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.09(qt，J＝1.8，7.1Hz)，2.26(s，6H)，1.65(dt，3H，J＝1.7，7.1Hz)，0.85(s，3H)，0.76(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.6，113.3，64.3，56.5，54.7，45.9，44.6，42.0，37.9，37.4，36.0，35.2，32.2，31.6，31.3，29.2，24.9，24.5，21.5，17.0，13.3，12.4.ESI-MS m/z：330[M+H]+.
(Z)-3α-二甲氨基孕甾-17-烯的合成(24a)
以化合物6为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率11.9％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.2Hz，1H)，2.23(s，6H)，1.65(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.9，113.3，62.0，56.5，54.3，44.6，44.1，39.7，37.4，36.4，35.3，33.0，32.0，31.6，29.0，25.1，24.6，21.2，17.1，13.3，12.3.ESI-MS m/z：330[M+H]+.
(E)-3β-二甲氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(25a)
以化合物11为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→1∶2+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率18.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.57(qd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，4.41(d，J＝4.8Hz，1H)，2.28(s，6H)，1.73(dd，J＝0.8，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.78(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.8，119.5，74.5，64.3，54.7，52.7，45.9，44.7，42.0，37.9，37.6，36.0，35.3，34.6，32.1，31.2，29.1，24.9，21.2，17.8，13.4，12.6.ESI-MS m/z：346[M+H]+.
(E)-3α-二甲氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(26a)
以化合物12为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶2→1∶2+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率75.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.55(qd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，4.38(d，J＝4.8Hz，1H)，2.20(s，6H)，1.71(d，J＝0.96，7.2Hz，3H)，0.83(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.7，119.2，74.4，61.8，54.2，52.6，44.8，44.1，39.7，37.6，36.4，35.4，34.7，33.1，32.0，31.9，28.8，25.1，21.0，17.7，13.2，12.2.ESI-MS m/z：346[M+H]+.
(E)-3β-二甲氨基孕甾-17-烯-16-酮(21a)
以化合物17a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率63.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.48(q，J＝7.5Hz，1H)，2.28(s，6H)，1.83(d，J＝7.5Hz，3H)，1.00(s，3H)，0.81(s，3H).13C DEPT135(100MHz，CDCl3)：δ128.9，64.1，54.2，50.6，45.6，41.8，37.9，37.4，36.3，34.2，32.0，31.0，28.8，24.7，20.9，17.7，13.2，12.3.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
(E)-3α-二甲氨基孕甾-17-烯-16-酮(22a)
以化合物18a为原料，按上述方法制备，粗品经硅胶柱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率50.5％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.47(q，J＝7.5Hz，1H)，2.22(s，6H)，1.83(d，J＝7.5Hz，3H)，1.00(s，3H)，0.85(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ206.7，148.1，128.8，61.6，53.9，50.1，43.9，43.5，39.5，38.0，36.4，36.3，34.2，32.7，31.9，31.8，28.5，24.9，20.6，17.7，13.1，12.1.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
实施例11.
化合物21-26d，24m和26g的合成方法
称取约1当量原料和1.2当量对氰基苯甲醛于反应瓶，加适量二氯甲烷溶解，40℃下搅拌回流4h后加入3当量NaBH(OAc)3，继续搅拌。TLC监测至反应结束。饱和NaHCO3淬灭反应，二氯甲烷萃取3次，合并的有机相以水洗两次，。无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩得粗品，粗品经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-对氰基苄氨基孕甾-17-烯的合成(23d)
以化合物5为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(流动相PE∶二乙胺＝20∶1)，得黄褐色固体，收率27.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，2H，J＝8.0Hz)，7.44(d，2H，J＝8.0Hz)，5.10(qt，1H，J＝7.2，2.0Hz,)，3.88(s，2H)，1.65(dt，3H，J＝7.2，2.0Hz)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.5，132.2，128.6，119.0，113.2，110.6，57.0，56.3，54.5，50.9，50.6，45.3，44.4，37.4，37.2，36.1，35.1，31.9，31.4，29.4，28.8，24.4，21.3，16.9，13.1，12.4ESI-MS m/z：417[M+H]+.
(Z)-3α-对氰基苄氨基孕甾-17-烯的合成(24d)
以化合物6为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶二乙胺＝20∶1)，得红褐色固体，收率28.6％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，2H，J＝8.0Hz)，7.47(d，2H，J＝8.0Hz)，5.11(qt，1H，J＝7.2，3.2Hz，)，3.82(s，2H)，2.84(s，1H)，1.65(d，3H，J＝7.2Hz)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.5，132.1，128.6，119.0，113.1，110.6，56.3，54.5，51.9，51.1，，44.4，39.7，37.3，36.4，35.1，33.4，32.7，31.9，31.4，28.7，26.0，24.3，21.0，16.9，13.1，11.5.ESI-MS m/z：417[M+H]+.
(Z)-3β-对氰基苄氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(25d)
以化合物11为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(流动相PE∶EA＝3∶1-1∶1)，得黄色固体，收率25.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，2H，J＝7.6Hz)，7.46(d，2H，J＝7.6Hz)，5.56(q，1H，J＝7.2Hz)，4.41(d，1H，J＝4.0Hz)，3.88(s，2H)，2.45(s，1H)，1.72(d，3H，J＝7.6Hz)，0.87(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.6，132.2，128.8，119.4，118.9，110.8，74.4，60.4，56.9，54.5，52.5，50.4，45.3，44.5，37.4，37.3，36.1，35.1，34.4，31.8，28.7，21.2，21.0，17.6，14.2，13.2,12.3.ESI-MS m/z：433[M+H]+.
(E)-3α-对氰基苄氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(26d)
以化合物12为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶二乙胺＝10∶1)，得黄色油状物，收率29.8％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(d，2H，J＝8.4Hz)，7.46(d，2H，J＝8.4Hz)，5.57(qd，1H，J＝1.2，7.2Hz，)，4.41(d，1H，J＝3.6Hz)，3.81(s，2H)，2.84(s，1H)，1.73(dd，3H，J1＝1.2Hz，J2＝7.2Hz)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ155.6，147.1，132.1，128.6，119.1，119.3，110.5，74.4，54.5，52.6，51.9，51.1，44.6，43.7，37.4，36.4，35.1，34.4，33.4，32.6，31.8，28.6，26.0，20.9，17.6，13.2，11.5.ESI-MSm/z：433[M+H]+.
(E)-3β-对氰基苄氨基孕甾-17-烯-16-酮的合成(21d)
以化合物17a为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝3∶1，V/V)，得白色固体，收率25.8％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.51(d，2H，J＝8.0Hz)，7.39(d，2H，J＝8.0Hz)，6.41(q，1H，J＝7.6Hz，)，3.75(s，2H)，2.79(s，1H)，1.77(d，3H，J＝7.6Hz)，0.94(s，3H)，0.77(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.5，148.0，132.1，129.0，128.6，118.9，110.8，54.2，52.4，50.5，50.1，44.4，39.6，37.4，36.5，36.4，34.4，32.4，32.0，28.7，21.2，20.5，17.7，14.3，13.1，11.5.ESI-MS m/z：431[M+H]+.
(E)-3α-对氰基苄氨基孕甾-17-烯-16-酮的合成(22d)
以化合物18a为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝3∶1，V/V)，得白色固体，收率23.8％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.51(d，2H，J＝8.0Hz)，7.39(d，2H，J＝8.0Hz)，6.41(q，1H，J＝7.6Hz,)，3.75(s，2H)，2.79(s，1H)，1.77(d，3H，J＝7.6Hz)，0.94(s，3H)，0.77(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ206.5148.0，132.1，128.9，128.7，119.0，110.6，54.2，51.9，51.1，50.1，43.4，39.6，37.9，36.5，36.4，34.2，33.3，32.4，32.0，28.4，26.0，20.5，17.7，13.1，11.5.ESI-MS m/z：431[M+H]+.
(Z)-3α-苄氨基孕甾-17-烯-16-酮的合成(24m)
以化合物6为原料，按上述方法制备，粗品经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝4∶1)，得白色油状物，收率37.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(q，4H，J＝7.2Hz)，7.16(d，1H，J＝7.2Hz)，5.03(q，1H，J＝6.8Hz)，3.69(s，2H)，2.81(s，1H)，1.57(d，3H，J＝6.8Hz)，0.79(s，3H)，0.73(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)δ150.6，128.3，128.1，126.8，113.1，56.4，54.5，51.6，51.4，，44.4，39.6，37.3，36.4，35.1，33.4，32.7，31.9，31.5，28.8，26.0，24.4，21.0，16.9，13.1，11.6.ESI-MS m/z：392[M+H]+.
实施例12.
化合物21-26b，21-26c，23g和24g-1的合成方法
称取1当量原料和2-3当量的碳酸钾(或碳酸氢钠)于反应瓶，加入适量甲苯后加入5-10当量相应的溴代烷，回流下反应。TLC监测至反应结束，冷却至室温，经快速硅胶柱色谱纯化得纯品。
(Z)-3β-四氢吡咯基孕甾-17-烯(23b)
以化合物5为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶4+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率21.74％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(qt，J＝2.0，7.2Hz，1H)，2.58(s，4H)，1.64(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.79(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，64.6，56.5，54.7，52.0，45.4，44.6，37.6，37.4，36.0，35.2，34.8，32.2，31.6，29.0，28.0，24.5，23.4，21.4，17.1，13.3，12.5.ESI-MS m/z：356[M+H]+.
(Z)-3α-四氢吡咯基孕甾-17-烯(24b)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶4+2％TEA，V/V)，得白色固体，产率15.3％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.1Hz，1H).2.46(s，4H)，1.65(d，J＝1.8，7.1Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.1，65.6，56.3，52.4，44.4，37.2，36.1，35.1，33.4，31.8，32.9，31.5，30.6，28.8，24.4，23.7，22.6，21.0，19.2，16.9，13.7，13.1，12.0.ESI-MS m/z：356[M+H]+.
(Z)-3β-哌啶基孕甾-17-烯(23c)
以化合物5为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝2∶1→2∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率94.6％左右。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.09(qt，J＝1.8，7.1Hz，1H)，2.50(s，4H)，1.63(d，J＝1.8，7.1Hz，3H)，0.84(s，3H)，0.75(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，64.8，56.4，54.7，50.5，46.2，44.6，38.2，37.4，36.2，35.2，32.2，31.6，30.9，29.2，26.6，25.0，24.5，24.3，21.5，17.1，13.3，12.5.ESI-MS m/z：370[M+H]+.
(Z)-3α-哌啶基孕甾-17-烯(24c)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率47.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.16(q，J＝7.1Hz，1H)，2.36(s，4H)，1.65(d，J＝70Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ113.3，65.8，51.6，44.6，39.7，37.4，35.2，33.5，31.7，30.8，29.9，28.9，26.5，24.7，24.6，21.2，19.4，17.1，13.9，13.5，13.3，12.4.ESI-MS m/z：370[M+H]+.
(Z)-3β-正丙氨基孕甾-17-烯(23g)
以化合物5为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率14.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(q，J＝7.2Hz，1H)，2.96(br s，1H)，2.63(t，J＝7.6Hz，2H)，1.63(d，J＝7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.80(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)：δ149.5，112.1，55.1，52.9，51.7，47.8，43.3，38.3，36.1，35.1，34.0，31.3，30.7，30.4，27.6，23.3，19.9，15.9，12.1，10.7，10.5.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
(Z)-3α-正丙氨基孕甾-17-烯(24g)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率24.4％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(q，J＝7.2Hz，1H)，2.69(t，J＝7.6Hz，2H)，1.64(d，J＝7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ149.4，112.2，56.3，55.3，53.4，46.9，44.3，43.4，36.2，34.9，34.0，31.3，30.9，30.4，28.7，27.7，23.3，20.1，15.9，12.1，11.3，10.7.ESI-MS m/z：344[M+H]+.
(Z)-3β-炔丙氨基孕甾-17-烯(23h)
以化合物5为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率24.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝1.9，7.2Hz，1H)，3.47(d，J＝2.4Hz，2H)，2.71(s，1H)，2.21(t，J＝2.4Hz，1H)，1.65(dt，J＝2.0，7.2Hz，6H)，0.86(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.8，113.2，56.5，55.7，54.7，45.3，44.6，37.537.4，35.4，35.3，32.1，31.6，29.0，28.8，24.6，21.5，17.0，13.3，12.5.ESI-MS m/z：340[M+H]+.
(Z)-3α-炔丙氨基孕甾-17-烯(24h)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率22.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.1Hz，1H)，3.42(d，J＝2.4Hz，2H)，.3.07(s，1H)，2.18(t，J＝2.4Hz，1H)，1.65(dt，J＝2.0，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.8，113.3，82.8，56.5，54.5，51.2，44.6，39.7，37.4，36.5，36.0，35.2，33.2，32.8，32.0，31.6，28.8，26.1，24.5，21.1，17.1，13.3，11.7.ESI-MSm/z：340[M+H]+.
(Z)-3β-N，N-二炔丙氨基孕甾-17-烯(24i)
以化合物5为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率28.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.1Hz，1H)，3.57(d，J＝2.0Hz，4H)，2.51(m，1H)，2.20(t，J＝2.3Hz，2H)，1.65(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.78(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.4，80.1，59.9，56.4，54.6，45.7，44.6，39.3，37.8，37.4，35.9，35.2，32.9，32.1，31.6，29.1，26.2，24.5，21.4，17.1，13.3，12.4.ESI-MS m/z：378[M+H]+.
(Z)-3α-N，N-二炔丙氨基孕甾-17-烯(24i)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率29.5％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.2Hz，1H).3.52(d，J＝2.0Hz，4H)，2.65(s，1H)，2.19(s，2H)，1.65(dt，J＝1.9，7.2Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.7，113.3，79.9，56.5，54.8，54.3，44.6，40.0，39.7，37.4，36.5，35.2，33.1，32.0，31.6，31.5，28.7，24.7，24.5，21.2，17.1，13.3，12.2.ESI-MS m/z：378[M+H]+.
(Z)-3α-N-环己基氨基孕甾-17-烯(24j)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率27.1％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.11(qt，J＝2.0，7.2Hz，)，1.64(dq，J＝1.8，7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.6，113.1，56.3，54.5，53.7，48.4，44.4，39.8，37.2，36.2，35.0，34.1，34.0，33.6，32.7，31.8，31.4，28.7，26.2，26.0，25.4，25.3，24.3，21.0，16.9，13.1，11.5.ESI-MS m/z：384[M+H]+.
(23-3α-N-环庚基氨基孕甾-17-烯(24k)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率21.7％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(q，J＝7.0Hz，1H)，2.88(s，1H)，2.60(m，1H)，1.64(d，3H，J＝7.0Hz)，0.86(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.5，113.1，56.3，56.1，54.5，48.8，44.4，40.0，37.2，36.2，35.7，35.3，35.0，33.7，32.8，31.9，31.4，28.7，28.1，27.9，25.9，24.7，24.6，24.3，21.0，16.9，13.1，11.5.ESI-MS m/z：398[M+H]+.
(Z)-3α-正辛氨基孕甾-17-烯(241)
以化合物6为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝20∶1→10∶1，V/V)，得白色固体，产率21.7％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.10(q，J＝7.0Hz，1H)，2.81(br s，1H)，2.53(t，J＝6.8Hz，2H)，1.64(d，J＝7.0Hz，3H)，0.86(s，3H)，0.79(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ150.6，113.1，56.3，54.4，52.3，47.6，44.4，39.7，37.2，36.3，35.1，33.4，32.7，31.9，31.8，31.4，30.4，29.5，29.3，28.8，27.5，25.9，24.3，22.7，21.0，16.9，14.1，13.1，11.5.ESI-MSm/z：414[M+H]+.
(E)-3β-四氢吡咯基-16α-羟基孕甾-17-烯(25b)
以化合物11为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→PE∶EA＝1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率9.4％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.57(q，J＝7.2Hz，1H)，4.41(d，J＝3.8Hz，1H)，2.63(br s，4H)，1.81(s，4H)，1.73(d，J＝7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.81(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.8，119.5，74.6，64.6，54.7，52.7，51.9，45.5，44.7，37.6，37.5，36.0，35.3，34.6，32.1，29.0，27.9，23.4，21.4，17.8，13.4，12.5.ESI-MS m/z：372[M+H]+.
(E)-3α-四氢吡咯基-16α-羟基孕甾-17-烯(26b)
以化合物12为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→PE∶EA＝1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率10.3％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.57(qd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，4.40(d，J＝4.8，1H)，2.46(br s，4H)，1.76(s，4H)，1.72(d，J＝7.2Hz，3H)，0.84(s，3H)，0.80(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：155.7，119.2，74.4，61.2，53.9，52.5，52.4，44.6，39.3，37.4，36.2，35.2，34.5，33.3，32.8，31.8，28.7，26.3，23.7，20.9，17.6，13.2，12.0.ESI-MSm/z：372[M+H]+.
(E)-3β-哌啶基-16α-羟基孕甾-17-烯(25c)
以化合物11为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率60.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.57(qd，J＝1.2，7.2Hz，1H)，4.41(s，1H)，2.51(s，4H)，1.72(dd，J＝1.2，7.2Hz，3H)，0.85(s，3H)，0.77(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.5，119.4，74.4，64.5，54.5，52.5，50.4，46.0，44.5，38.0，37.4，35.9，35.1，34.4，31.9，30.7，29.0，26.5，24.9，24.2，21.2，17.6，13.2，12.4.ESI-MS m/z：386[M+H]+.
(E)-3α-哌啶氨基-16α-羟基孕甾-17-烯(26c)
以化合物12为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率73.9％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.57(qd，J＝1.1，7.1Hz，1H)，4.41(br s，1H)，2.36(br s，4H)，2.11(br s，1H)，1.74(dd，3H，J1＝0.68Hz，J2＝7.2Hz)，0.85(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ155.5，119.3，77.2，74.4，59.3，54.4，52.5，51.4，39.6，37.4，35.1，34.4，33.2，31.8，31.3，28.6，26.4，24.7，24.4，20.9，17.6，13.2，12.3.ESI-MSm/z：386[M+H]+.
(E)-3β-四氢吡咯基孕甾-17-烯-16-酮(21b)
以化合物17a为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率24.2％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ6.49(qd，J＝2.0，7.5Hz，1H).4.30(m，1H)，2.74(br s，4H)，1.85(dd，J＝2.0，7.5Hz，3H)，1.01(s，3H)，0.87(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ206.5.148.0，128.8，64.4，54.1，51.6，50.1，45.2，43.4，37.9，36.3，35.9，34.2，32.0，30.6，28.5，23.2，20.8，19.2，17.7，13.2，12.3.ESI-MSm/z：370[M+H]+.
(E)-3α-四氢吡咯基孕甾-17-烯-16-酮(22b)
以化合物18a为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率3.8％。1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ5.69(q，J＝7.2Hz，1H)，2.47(s，4H)，1.84(d，J＝7.2Hz，1H)，1.00(s，3H)，0.85(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)206.5.148.1，128.8，65.6，64.4，54.1，52.3，50.1，43.4，37.9，36.3，35.9，34.2，32.0，30.6，28.5，23.2，20.8，19.2，17.7，13.2，11.9.ESI-MS m/z：370[M+H]+.
(E)-3β-哌啶基孕甾-17-烯-16-酮(21c)
以化合物17a为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率31.0％。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ5.69(q，J＝7.2Hz，1H)，2.59(s，4H)，2.07(d，J＝7.2Hz，1H)，0.90(s，3H)，0.82(s，3H).13C NMR(100MHz，CDCl3)：δ205.4，147.1，127.8，63.6，49.4，49.1，45.0，42.4，36.9，36.7，35.7，35.4，35.1，33.2，31.0，29.5，28.7，27.7，25.2，23.7，23.0，19.9，16.6，12.1，11.4.ESI-MS m/z：384[M+H]+.
(E)-3α-哌啶基孕甾-17-烯-16-酮(22c)
以化合物18a为原料，按上述方法制备，反应混合物经快速硅胶柱色谱纯化(PE∶EA＝1∶1→PE∶EA＝1∶1+1％TEA，V/V)，得白色固体，产率23.9％。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ6.48(q，1H，J＝7.5Hz)，2.36(br s，4H)，1.84(d，3H，J＝7.5Hz)，1.01(s，3H)，0.85(s，3H).13CNMR(100MHz，CDCl3)δ206.5，148.1，128.8，59.3，54.1，51.4，50.1，43.5，39.5，38.0，36.3，34.3，33.0，32.0，30.6，28.5，26.4，24.7，24.4，20.6，19.2，17.7，13.7，13.2，12.3.ESI-MSm/z：384[M+H]+.
实施例13.
各衍生物的抗乳腺癌转移活性评价
具体实验方法及步骤如前文所述，实验结果见表2：
表2 化合物对MB-MDA-231(人乳腺癌细胞)趋化抑制率
*在测试剂量下显示细胞毒性。
发明人认为，研究人员一直在寻找具有抗肿瘤转移活性的化合物，每获得一类具有可接受活性水平的化合物结构对于制备抗肿瘤转移药物都具有重要的意义。本发明依据本课题组前期发现的天然先导化合物Salignone，以孕甾烷母核上3、16和20位作为衍生合成的结构修饰位点，进行了大量的不同取代基、不同立体构型(α和β)的衍生物设计与合成，所合成的52个衍生物均为本课题组首次合成的、未见文献报道的新化合物。进一步通过细胞毒性和抗乳腺癌转移活性筛选实验，从中优选了22个活性衍生物，并进一步优选8个强活性衍生物，其抗乳腺癌转移活性与阳性对照LY294002相当。
本领域技术人员难以根据现有技术中公开的普通孕甾烷生物碱的结构，经过如此大量的结构修饰，然后优选取代基并限定到较小的范围内，从而获得本发明要求保护的化合物，即本发明的化合物结构对于本领域技术人员来说并不是显而易见的。
进一步地，由于本发明首先经过细胞毒性筛选，剔除具有细胞毒性的衍生物，经活性测定的衍生物均为在非细胞毒剂量下、显示出抗乳腺癌转移作用，其中具有代表性的8个衍生物的活性与阳性对照LY294002相当(现有的抗肿瘤转移上市药物中，尚未有抗肿瘤转移的小分子合成药物上市)。这种不具有细胞毒性的抗乳腺癌转移活性化合物能够满足临床上防治癌症转移所需要的长期给药需求，可见本发明已经具有了显著的进步。本发明的化合物具有预料不到的技术效果，相对于一般意义上的抗肿瘤转移活性化合物来说，本发明具有更加重要的应用价值。
Claims (3)
1.一种孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐，其结构如式I所示：
所述药学上可接受的盐是指与无机酸或有机酸形成的盐，其中无机酸或有机酸选自盐酸，氢溴酸，硫酸，磷酸，甲磺酸，苯甲磺酸，草酸，酒石酸，马来酸，柠檬酸或者抗坏血酸。
2.如权利要求1所述的孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐，其选自化合物17a，18a，21d，22c，23f，26b和26c。
3.如权利要求1和2任意一项所述的孕甾烷生物碱衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗乳腺癌转移药物方面的用途。
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