CN104721130A

CN104721130A - 一种布佐林胺包合物眼用制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN104721130A
Application number: CN201510114253.6A
Authority: CN
Inventors: 宋相容; 魏于全
Original assignee: Sichuan University
Current assignee: Sichuan University
Priority date: 2013-02-21
Filing date: 2013-02-21
Publication date: 2015-06-24
Anticipated expiration: 2033-02-21
Also published as: CN104721130B

Abstract

本发明涉及医药领域，具体涉及布林佐胺包合物眼用制剂及其制备方法和用途。目的在于或延长其眼部滞留时间，或提高其生物利用度，可用于治疗高眼压和青光眼等疾病，凝胶剂可延长药物在眼部的保留时间，减少给药次数和给药剂量，不仅提高了患者顺应性，且能降低药物的副作用。同时，因未添加任何防腐剂，采用单剂量包装，降低了滴眼剂长期使用对眼部的刺激性，大大提高了用药的安全性。

Description

一种布佐林胺包合物眼用制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及布林佐胺包合物眼用制剂及其制备方法和用途。

背景技术

青光眼是一种引起视神经损害的疾病。视神经由很多神经纤维组成，当眼内压增高时，可导致神经纤维损害，引起视野缺损。控制青光眼的关键是降低眼压，而房水的生成、排出是控制眼压的关键，如果房水生成、排出失衡，引起眼球壁压力太大，则导致视神经损害。碳酸酐酶(CA)存在于包括眼组织在内的很多身体组织内，催化二氧化碳水化成碳酸，以及碳酸脱水的可逆反应。睫状体通过此反应产生房水，故抑制眼部睫状体的碳酸酐酶可以减少房水的分泌，从而降低眼压。布林佐胺主要抑制眼组织中占优势的碳酸酐酶Ⅱ型同工酶，从而减少房水的生成，适用于高眼压症，开角型高眼压及其他药物治疗无效的青光眼。

EP2348026和EP1985618公开了布林佐胺的合成，US5461081、US5378703、US5240923和US005948801A公开了布林佐胺的合成和作为滴眼剂的使用，其中有混悬剂的处方，即为爱尔康公司的派立明滴眼液(Azopt)，其制剂为混悬剂，能达到缓释的作用，但患者耐受性不佳，且与其他药物联合运用时只能做成混悬剂，对其应用有很大局限性；JP2010037327公开了布林佐胺水制剂的专利，但药物成盐后，其眼部滞留时间短，且角膜透过性不佳，缓释作用差；WO2009073216A1提出布林佐胺纳米混悬剂的处方，但需要制成冻干制剂，对需要每天用药的青光眼患者来说，使用非常不便；CN2005100434124，其凝胶基质选自甲基纤维素的多价酸盐，为腔体用温敏凝胶，但未提出布林佐胺制剂的详细处方；CN2010101485162公开了高压静电制备壳聚糖凝胶的方法，其凝胶基质选自壳聚糖，但没有提出布林佐胺具体处方。CN2010100011309公开了一种温敏眼用凝胶，其凝胶基质为壳聚糖等，其目的是延长制剂在眼中的保留时间，亦无布林佐胺的详细处方。总之，上述产品和专利均未同时解决布林佐胺滴眼液在眼部保留时间短和防腐剂长期使用的刺激性问题，本领域非常需要将布林佐胺制成安全、高效、稳定、可控的方便眼部滴用的液体制剂。

眼用凝胶常以亲水性高分子材料为载体，有较好的生物相容性，为半固体制剂，可延长药物的作用时间，减少给药次数，能克服滴眼液生物利用度低、眼膏剂油腻不易涂抹以及混悬剂眼部不适等缺点。而原位凝胶系统在结膜囊内的特定的理化条件(比如：pH、温度、离子等)下，自身将会产生溶胶－凝胶的相变，而由滴入时较稀的液体转变成较稠的凝胶，因引起相转变的触变因素的不同，又分为pH敏感型、温度敏感型及离子敏感型三种。发明人欲开发布林佐胺的原位凝胶剂以达到缓释作用长效控制眼压，并为与其他降眼压药物的联合应用提供可能性，提高患者的顺应性。

眼用包合物是将药物镶嵌于环糊精的空腔，环糊精搭载药物分散于溶剂中，实现对药物的增溶作用，且在一定的范围内，增加环糊精的比例有利于提高药物累积角膜透过率，故发明人拟使用环糊精对药物进行包合，制备具有良好的角膜透过性的冻干制剂。

如前文所述，发明人欲实施的各种布林佐胺滴眼制剂具有各自的特点，可以通过一些特定的方法制成眼用制剂，若能够将制备的布林佐胺制剂与凝胶材料组合，能很好的解决其稳定性问题，即使其成为稳定的溶液而不需制成冻干制剂，或者能够减少各制剂中稳定剂的用量，或者具有原位凝胶的相转变特性。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供几种布林佐胺眼用制剂，目的在于或延长其眼部滞留时间，或提高其生物利用度，为降低眼压或治疗青光眼提供新的剂型选择。

一、本发明的提供的布林佐胺眼用制剂之一为眼用原位凝胶剂

眼用原位凝胶剂包括温度敏感眼用原位凝胶剂(简称温敏原位凝胶剂)、pH敏感眼用原位凝胶剂及离子敏感眼用原位凝胶剂三种类型。

1、温敏原位凝胶剂(简称制剂1)

温度敏感原位凝胶公开的处方较多，大多较为相似，用公开的处方直接装载布林佐胺难以成型或达到质量要求，同时也难以达到增强的降眼压效果。

CN2005100434124公开了可逆性热凝胶化水性药物组合物的组方和制法，其特征是温敏基质采用的是一定浓度的甲基纤维素和多价酸盐组成。本发明的温敏凝胶材料主要选用泊洛沙姆、壳聚糖的一种或多种的任意组合，材料已经有商品化的产品可以获得，便于产业化；同时用CN2005100434124的处方制备的布林佐胺温敏凝胶，其凝胶相转变没有本发明公布的灵敏度高。

CN2010101485162公布了一种协同治疗型多物质缓释滴眼剂及制备方法，其特征是凝胶基质由壳聚糖和透明质酸组成，制剂工艺比较复杂，需要在直流高压静电作用下方能成型。本发明相比之下，制备工艺更简单，易于产业化。

CN2010100011309公开了温敏型原位凝胶药物组合物的处方和制法，其凝胶基质采用的也是壳聚糖，但其辅助凝胶基质使用的是葡萄糖磷酸酯。用该处方制备的布林佐胺温敏凝胶，其凝胶相转变没有本发明公布的灵敏度高。

采用CN200710000552公开的喷昔洛韦眼用温度敏感原位凝胶制剂及其制备方法中的实施例1制备布林佐胺的温敏原位凝胶，相转变温度为25℃，在贮存过程中就已形成凝胶，无法像滴眼液一样使用，不能形成真正意义上的原位凝胶。用CN200910029314公开的醋甲唑胺眼用温度敏感原位凝胶制剂及其制备方法实施例3制备布林佐胺的温敏原位凝胶，也在室温就相转变为凝胶了，无法形成原位凝胶。

温敏凝胶材料与生物黏附性增稠剂高分子基质复合使用形成双系统，调节其相转变温度在28～34℃之间，具有较高生物利用度和较低的刺激性。

在100ml凝胶中，含有如下重量的组分：

布林佐胺或布林佐胺盐通常为0.1～10.0g；优选0.1～5.0g；最优选0.5～2.0g；

凝胶基质通常为0.1～40g；优选5.0～30g；最优选10～30g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～12g；

渗透压调节剂通常为0.01～8.0g；优选0.1～6.0g；最优选0.1～4.0g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

上述组分中，布林佐胺或布林佐胺盐、凝胶基质、稳定剂、渗透压和pH调节剂的用量可采用“通常用量”、“优选用量”、“最优选用量”的任意组合。

制剂1所述的温敏凝胶基质为凝胶材料和增稠剂，温敏凝胶基质选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：泊洛沙姆、壳聚糖。

由于是眼用制剂，为符合药品制剂标准，本发明处方中的水均采用蒸馏水或注射用水。

为了延长药物在角膜表面的滞留时间，调节药物的释放速度，改善凝胶体系的流变学性质，凝胶中加入了不超过5％的增稠剂高分子基质，在此范围内，制剂的渗透压和黏度已经符合要求，增大的辅料浓度不仅不会进一步改善制剂的性质，反而造成患者的不适，制剂1所述的增稠剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：如糊精及衍生物、海藻酸钠及其衍生物、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、阿拉伯胶、西黄耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、泰洛沙泊。

所述的渗透压调节剂是甘露醇、山梨醇、氯化钠、聚乙二醇、甘油、丙二醇或葡萄糖中的至少一种。

温度敏感眼用原位凝胶剂的制备方法包括如下步骤：

A、取增稠剂高分子基质，加水溶解；

B、再按比例称取温敏凝胶基质，加水溶解，冷藏放置至全部溶解；(说明：步骤B所用冷藏法属化学、制剂领域溶解高分子基质的常用方法。)

C、布林佐胺或布林佐胺盐、渗透压调节剂和稳定剂加水溶解，将滤液与步骤A和步骤B所得溶液合并，调pH值至5.0～9.0，加水至全量，除菌(可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部)，单剂量分装即得。

其中步骤C调pH值采用氢氧化钠、盐酸、硼酸、硼砂、碳酸盐、磷酸盐、醋酸盐、三乙胺中任意一种或其混合物。

作为本发明优选的实施方案之一，本发明的温度敏感眼用原位凝胶剂为，在100ml凝胶中，含有如下重量的组分：

布林佐胺或布林佐胺盐	0.5～2.0g
		凝胶材料	10～28g
增稠剂	0.1～2g
		渗透压调节剂	0.1～4.0g
pH调节剂	0.1～1.0g
		水	补充至100ml

其中凝胶材料选自泊洛沙姆、壳聚糖的一种或多种的任意组合。优选的泊洛沙姆的分子量范围为5000～20000，其氧乙基与氧丙基比例范围为4:1～1:4，最优选采用泊洛沙姆407(F127)和泊洛沙姆188(F68)。优选的壳聚糖，分子量为4万至25万之间，其特征在于脱乙酰度大于85％，最优选采用脱乙酰度大于90％。增稠剂优选自壳聚糖、糊精及衍生物、卡波普、羟丙基甲基纤维素、透明质酸、海藻酸钠、西黄耆胶；稳定剂优选自吐温80、卵磷脂、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙甲纤维素和依地酸、依地酸盐；渗透压调节剂优选自氯化钠、氯化钾、甘油、山梨醇和葡萄糖；pH调节剂优选自磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸、硼砂、碳酸钠、碳酸氢钠、醋酸、醋酸钠、氢氧化钠、盐酸和三乙胺。

有益效果：本发明利用泊洛沙姆的热敏性质及粘性高分子聚合物的性质，制备出了具有合适相转变温度且相转变灵敏的布林佐胺眼用原位凝胶制剂。，该制剂在室温条件下呈液体状态，以溶液的形式方便滴注给药，易于准确控制剂量；温度升高到接近体温时于角膜表面转变为凝胶，从而增加药物在眼部的滞留时间，延缓消除，提高眼部生物利用度；减少给药次数，方便患者用药。同时，该原位凝胶制剂具有良好的生物相容性，对眼部无刺激。

2、pH敏感眼用原位凝胶剂(简称制剂2)

pH敏感原位凝胶公开的处方较多，大多较为相似，用公开的处方直接装载布林佐胺难以成型或达到质量要求。如CN200810116084公开了阿昔洛韦眼用pH敏感原位凝胶及制备方法，该制剂处方中凝胶基质选用的是卡波普，实施例中用到了卡波普与纤维素衍生物配伍作为凝胶基质，但该发明未对卡波普与纤维素进行筛选。本发明则对卡波普与纤维素的用量进行大量优化筛选，使用卡波普时，其用量严格控制在0.3％以下，才能确保产品最终pH能控制在5～9；用优选后的用量制备的实施例4～6和实施例A13～A20的pH敏感凝胶均有较好的pH敏感相变特性，且黏度适中，便于准确控制剂量，方便患者使用。采用CN200810116084中实施例1和实施例5公布的处方分别制备布林佐胺的pH敏感原位凝胶，制得的原位凝胶黏度均太大，液滴滴眼时难于滴下，无法准确控制剂量。

在100ml凝胶中，含有如下重量的组分：

凝胶基质通常为0.1～10.0g；优选0.1～8.0g；最优选0.1～6.0g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～12g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

制剂2所述的pH敏感凝胶基质包括凝胶材料和增稠剂，其中凝胶基质选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：聚羧乙烯、聚卡波菲、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆、聚乙烯醇、透明质酸钠、壳聚糖、甘油磷酸钠、泰洛沙泊。

制剂2所述的增稠剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠及其衍生物、阿拉伯胶、西黄耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、糊精及衍生物、泰洛沙泊。

凝胶基质优选纤维素衍生物和聚羧乙烯的混合物，重量比为：

纤维素衍生物：聚羧乙烯＝1:0.02～1；

优选的：纤维素衍生物：聚羧乙烯＝1:0.04～0.8。

纤维素衍生物包括甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、羧甲基纤维素中的一种或其任意组合，优选羟丙甲纤维素(简称HPMC，下同)，优选采用黏度为1000～30000cP的羟丙甲纤维素，如卡乐康公司规格为HPMC E4M或HPMC EIOM等产品。聚羧乙烯包括聚丙烯酸、聚丙烯酸盐或交联聚丙烯酸树脂中的一种，优选交联聚丙烯酸树脂，商品名为卡波普，更优选采用黏度为2000-30000cP的卡波普，如Lubrizol公司规格为卡波普971，卡波普980或卡波普981等产品。纤维素衍生物和聚羧乙烯混合作为凝胶基质，在水溶液中可形成聚合物互穿网络凝胶，产生显著的流变协同作用，实现布林佐胺的缓释作用。羟丙甲纤维素与卡波普的流变协同作用结果见表1。单独使用羟丙甲纤维素不具有相转变特性而单独使用卡波普不能达到适宜的黏度，故二者通过一定比例混合，具有很好的pH敏感性和适宜的黏度，但是当羟丙甲纤维素浓度过大时，制剂在非生理条件下的黏度就已经很大，不利于药物在制剂中分散均匀，且难于滴下，不能准确控制每次的药量。

表1 羟丙甲纤维素和卡波普(CP980)的流变协同作用

样品	0.5％HPMC E4M	0.5％HPMC ElOM	1.0％HPMC E4M	0.1％CP 980
					黏度(cp，25℃)	45	102	300	2440
+0.1％CP 980	3975	5355	＞9999

所述的渗透压调节剂优选非离子性化合物，如甘露醇、山梨醇、葡萄糖、甘油或丙二醇等。

本发明pH敏感眼用原位凝胶剂中的pH调节剂添加量是依据调节最终凝胶剂的pH值至5.0～9.0。

上述组分中，布林佐胺或布林佐胺盐、凝胶基质、稳定剂、渗透压调节剂的用量可采用“通常用量”、“优选用量”、“最优选用量”的任意组合。

具体的，凝胶基质优选采用纤维素衍生物、聚羧乙烯的混合物，重量比为：

纤维素衍生物:聚羧乙烯＝1:0.02～1。

优选的：纤维素衍生物:聚羧乙烯＝1:0.04～0.67。

在上述处方中，为了提高制剂的稳定性，本发明凝胶剂还可加入络合剂，如依地酸或依地酸二钠。添加量为，每100ml凝胶含0.01～5.0g络合剂，优选添加量为0.02～1.0g。本发明所述的pH敏感眼用原位凝胶剂的制备方法，优选包括如下步骤：

A、凝胶基质溶于总重量25～35％的水中获得凝胶基质水溶液；

B、将布林佐胺或布林佐胺盐、渗透压调节剂和稳定剂，加入总重量25～35％的水，溶解；

C、混合步骤A所得凝胶基质水溶液与步骤B所得，调pH值至5.0～9.0；

D、加余量水混合，除菌(可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部)，即得。

若添加络合剂，则在步骤B中加入，与渗透压调节剂一并加入溶解即可。

pH敏感眼用原位凝胶剂选择可产生流变协同作用的羟丙甲纤维素和卡波普作为混合凝胶基质，利用两种高分子材料形成聚合物互穿网络凝胶，制备布林佐胺眼用凝胶剂，卡波普在低pH值时为低粘度的液态溶液，而当其与泪液接触，泪液的缓冲能力使其pH值增加，其折叠的支链张开，黏度增加。由于两者具有显著的流变协同作用，较低的用量即可产生高黏度的凝胶，从而延长药物在眼部的滞留时间，另一方面，带正电荷的药物布林佐胺可与带负电荷的卡波普通过静电相互作用形成复合物，从而进一步延缓布林佐胺从凝胶的释放，产生更好的缓释作用，并降低药物的副作用。同时，本发明所述的眼用凝胶剂不含防腐剂，从而降低了长期使用时对眼的刺激性，提高了用药安全性。

3、离子敏感眼用原位凝胶剂(简称制剂3)

离子敏感原位凝胶公开的处方较多，大多较为相似，用公开的处方直接装载布林佐胺难以成型或达到质量要求。如中国发明专利201210203569公开了盐酸倍他洛尔离子敏感型眼用原位凝胶及其制备方法，该制剂处方中需要使用防腐剂；本发明提供的制剂处方可不使用防腐剂，避免了防腐剂引起的角膜炎症反应。

在100ml凝胶中，含有如下重量的组分：

凝胶基质通常为0.1～10.0g；优选0.1～6.0g；最优选0.1～2.0g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～12g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

该原位凝胶组合物的pH值为4.5至9.0。

制剂3所述的离子敏感凝胶基质包括凝胶材料和增稠剂，其中凝胶基质可以仅采用海藻酸盐、结冷胶、去乙酰结冷胶、羟丙甲纤维素等医用亲水高分子材料作为基质应用；也可以将上述医用亲水高分子材料与增稠剂配加作为基质应用。

其中，凝胶基质中宜采用结冷胶。其与泪液中的钙离子、钠离子、钾离子等金属离子络合形成稳定的氢键，而呈凝胶状态。还不会因温度和pH值改变而凝胶化，方便灌装。

凝胶基质还宜采用海藻酸钠。由于海藻酸盐水溶液与一定浓度的二价或三价金属离子会发生胶凝化，形成半固体状凝胶。同时，海藻酸钠毒性很低，应用于眼睛等重要器官是很安全的。

制剂3所述的凝胶基质中的增稠剂选自以下高分子基质，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠及其衍生物、阿拉伯胶、西黄耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、糊精及衍生物、泰洛沙泊等。

渗透压调节剂优选非离子性化合物，如甘露醇、山梨醇、葡萄糖、甘油或丙二醇等。

本发明提供了一种离子敏感眼用原位凝胶剂的制备方法，包括如下步骤：

按每100ml凝胶剂含布林佐胺或布林佐胺盐0.1～10.0g、凝胶基质0.1～10.0g、渗透压调节剂0.1～4.0g，pH调节剂0.1～1.0g，余量为水配制。

B、将布林佐胺或布林佐胺、渗透压调节剂，加入总重量25～35％的水，溶解；

C、混合步骤A所得凝胶基质水溶液与步骤B所得，调pH值至4.5～9.0；

本发明提供了一种离子敏感眼用原位凝胶剂的制备方法，优选包括如下步骤：

按每100g凝胶剂含布林佐胺0.1～10.0g、凝胶基质0.1～10.0g、渗透压调节剂0.1～4.0g、络合剂0.01～0.05g，pH调节剂0.1～1.0g，余量为水配制。

B、将布林佐胺或布林佐胺盐、络合剂、渗透压调节剂，加入总重量25～35％的水，溶解；

最终获得凝胶剂的pH值为4.5至9.0。

使用结冷胶等凝胶基质所制备的离子敏感型原位凝胶，有很好的离子敏感性，且辅料用量少，非生理条件下流动性好，易于滴入眼部，在体外能够持续释药；海藻酸盐也常用于制备离子敏感型凝胶，具有毒副作用小，对离子敏感等优点，因此，本发明使用该类材料制备离子敏感凝胶，制剂的相转变敏感，辅料毒副作用小。

本发明的目的是提供一种布林佐胺的眼用原位凝胶制剂，所述制剂优选温度敏感眼用原位凝胶剂或含有温度敏感特性的多重凝胶，原因在于：与布林佐胺pH敏感原位凝胶、布林佐胺离子敏感原位凝胶或不含温度敏感特性的多重凝胶相比，相转变敏感度高、溶液稳定性好，且具有更好的降眼压效果，对眼部刺激性也较小，是一种优良的青光眼治疗制剂。

本发明所述的含有温度敏感特性的多重凝胶，包括温度－pH混合敏感的眼用多重原位凝胶剂、温度－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂以及温度－pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂三种类型。特点是：该原位凝胶在形态上可像滴眼液一样滴入眼睛，在结膜囊内受到温度、泪液pH值或泪液中离子中的两种或三种因素协同诱发而产生溶胶－凝胶的相变，使滴入时较稀的液体转变成较稠的凝胶。由于是多重因素诱发，可提高相转变灵敏度。

其特征在于100ml凝胶中，含有如下重量的组分：

布林佐胺或其药学上可接受的盐通常为0.05～10.0g；优选0.05～5.0g；最优选0.1～2.0g；

凝胶基质：

温度敏感型通常为0.1～40g；优选1.0～30g；最优选1.0～28g；

或pH敏感型通常为0.01～10.0g；优选0.1～8.0g；最优选0.1～6.0g；

或离子敏感型通常为0.1～10.0g；优选0.1～5.0g；最优选0.5～2.0g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～12g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

或其他药学上可接受的眼用成分如防腐剂、金属离子络合剂等；

以及，用水补足100ml。

本发明还提供了一种制备上述多重凝胶方法，通过两种或两种以上的相转变凝胶配方相结合，值得具有双重或多重敏感性的凝胶制剂，具有更好的相转变灵敏度，并增加药物在制剂中的稳定性，其特征在于：A、凝胶基质溶于总重量25～35％的水中获得凝胶基质水溶液；

B、将布林佐胺或布林佐胺盐、渗透压调节剂，加入总重量25～35％的水，溶解；

二、本发明的提供的布林佐胺眼用制剂之一为布林佐胺包合物及其复合凝胶剂

4、布林佐胺包合物(简称制剂4)

在100ml包合物制剂中，含有如下重量的组分：

包合物材料通常为1.0～50.0g；优选1.0～40.0g；最优选1.0～30.0g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～10g；

冻干保护剂通常为1.0～20.0g；优选1.0～10.0g；最优选2.0～10.0g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

上述组分中，布林佐胺、包合物材料、稳定剂、冻干保护剂、渗透压和pH调节剂的用量可采用“通常用量”、“优选用量”、“最优选用量”的任意组合。

制剂4所述的包合物材料选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：环糊精(CD)、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精中的至少一种；优选β-环糊精和羟丙基-β-环糊精；更优选羟丙基-β-环糊精。

使用不同材料和比例的环糊精制备的包合物，能较好的解决布林佐胺溶解度，且环糊精有角膜促透性，使药物更好的透过角膜屏障到达靶部位。

布林佐胺包合物的制备方法，可选常用的制备包合物的方法，如研磨法、饱和溶液法、冷冻干燥法、中和法、超声波法、共沉淀法、溶剂蒸发法等。优选溶剂蒸发法，具体包括以下步骤：

(1)将布林佐胺或布林佐胺盐和包合材料溶解于有机溶剂中，得有机相分散介质A；

(2)将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B；

(3)用减压旋蒸或其他方式除尽A中有机溶剂后，加入水相B溶解，得到制剂C；

(4)补充蒸馏水至处方量，加入冻干保护剂，调节pH值和渗透压，除菌(可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部)，冷冻干燥，即得。

制剂中所用的有机溶剂选自以下常用的有机试剂，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：氯仿、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、正丁醇、乙二醇、乙醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯、丙酮、乙腈等。优选为氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮和乙醇。

将药物镶嵌于环糊精的空腔，环糊精搭载药物分散于溶剂中，实现对药物的增溶作用，且在一定的范围内，增加环糊精的比例有利于提高药物累积角膜透过率，本发明包合物具有良好的角膜透过性，且包合材料可生物降解，毒副作用小。

5、布林佐胺包合物复合凝胶剂(简称制剂5)

在100ml包合物复合制剂中，含有如下重量的组分：

凝胶基质通常为0.1～40g；优选0.1～30g；最优选0.1～28g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～10g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

上述组分中，布林佐胺、包合物材料、稳定剂、凝胶基质、渗透压和pH调节剂的用量可采用“通常用量”、“优选用量”、“最优选用量”的任意组合。

制剂5所述的包合物材料选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：环糊精(CD)、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精中的至少一种；优选β-环糊精和羟丙基-β-环糊精；更优选羟丙基-β-环糊精。

制剂5所述的凝胶基质包括制剂1至3所述的凝胶材料和增稠剂，并且可以通过制剂1至3的处方配比实现原位凝胶的相转变特性，其中凝胶基质选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：泊洛沙姆、壳聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠及其衍生物、阿拉伯胶、西黄耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、糊精及衍生物、透明质酸钠、壳聚糖、甘油磷酸钠、海藻酸盐、结冷胶、去乙酰结冷胶、聚羧乙烯、聚卡波菲、泰洛沙泊等。制剂5所述的凝胶基质中的增稠剂选自以下高分子基质，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：如聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、海藻酸钠及其衍生物、阿拉伯胶、西黄耆胶、瓜尔豆胶、卡波普、植物凝集素、透明质酸、黄原胶、壳聚糖、糊精及衍生物、泰洛沙泊等。

将布林佐胺制成包合物以后，因其溶液态只能稳定一定的时间，常需要进一步冻干制成冻干制剂，所以本发明考虑将包合物制成中间体后进一步将其与凝胶剂相结合，可选的凝胶材料范围和制剂处方罗列于制剂1至3，具体而言，可选的做法如下：

布林佐胺包合物复合凝胶剂的制备方法，包括以下步骤：

(2)将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B；

(4)使用余量的水溶解凝胶基质，溶解完全后，将C与凝胶基质水溶液混合，调节pH值和渗透压，除菌(可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部)，即得。

布林佐胺包合物还可采用制剂4所述的常用的方法制备，如研磨法、饱和溶液法、冷冻干燥法、中和法、超声波法、共沉淀法等，在上述方法制得布林佐胺包合物溶液后，使用余量的注射用水溶解凝胶基质，并将二者混合均匀调节pH值和渗透压后，除菌(可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部)，即得布林佐胺包合物复合凝胶制剂。

制备成为包合物复合凝胶剂后，既解决了布林佐胺包合物溶液的稳定性问题同时兼具凝胶的优点，即在眼部滞留时间较长，且又能平稳释药，具有较好的缓释作用。

进一步说明：

制剂1至制剂5所述的布林佐胺盐包括以下布林佐胺盐可行成的盐或任意种类盐的任意比例组合：枸橼酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、盐酸盐、醋酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、磷酸氢盐、磷酸氢二盐、硼酸盐等。

制剂1至制剂5所述的稳定剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：吐温20、吐温60、吐温80、司盘20、司盘80、卖泽35、月桂醇硫酸钠、十二烷基硫酸钠、卵磷脂、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、乙烯基吡咯烷酮-乙烯乙酸酯共聚物、乙烯-醋酸乙烯共聚物、泊洛沙姆、聚乙二醇、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素钠、卡波普、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、依地酸、依地酸盐、异抗坏血酸及其钠盐、硫脲、丙烯酸树脂类、纤维素及其衍生物、聚氧乙烯蓖麻油、泰洛沙泊。

制剂1至制剂5所述的渗透压调节剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：氯化钠、葡萄糖、醋酸钠、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硼酸、硼砂、丙二醇、丙三醇、甘露醇。

制剂1至制剂5的冻干保护剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：聚乙烯吡咯烷酮、甘露醇、蔗糖、乳糖、葡萄糖、聚乙二醇、葡聚糖、海藻糖、白蛋白。

制剂1至5还可加入络合剂，选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠、依地酸、依地酸二钠、枸橼酸钠。

制剂1至制剂5所述的pH调节剂选自以下材料，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：氢氧化物、有机胺和或无机酸及其盐、有机酸及其盐、碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硼酸、硼砂。

制剂1至制剂5中所用的有机溶剂选自以下常用的有机试剂，包含以下材料中的一种或多种的任意组合：乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、正己烷、正丁醇、乙二醇、乙醇、丙二醇、甘油、聚甘油酯、丙酮等。

本发明布林佐胺眼用制剂，可以用于治疗高眼压和青光眼等疾病，剂量一般为1次/天，每次给患眼1滴，具体的，可根据病人的病情、年龄等，由医师决定。因防腐剂对眼睛有刺激性，尤其是长期使用时可能会引起严重的刺激性。因此，本发明所述的布林佐胺眼用制剂不含防腐剂，为一次性使用的单剂量包装无菌制剂。

综上，本发明为青光眼和高眼压患者提供多种缓释布林佐胺眼用制剂，该制剂具有长时间缓慢释药且无异物感的特点，可显著提高患者的顺应性；且较市售制剂降眼压效果更好、作用时间更持久；同时，所用制剂未添加任何防腐剂，采用单剂量包装，降低了滴眼剂长期使用对眼部的刺激性，大大提高了用药的安全性。该长效缓释制剂技术还可用于其他眼局部用的药物，实现缓释长效。

附图说明

图1 布林佐胺原位凝胶24％泊洛沙姆407和0.5％泊洛沙姆188配伍泪液稀释前后黏度变化。

图2 布林佐胺pH敏感型凝胶A、B在不同pH值时粘度变化

A、0.1％卡波普980-0.5％HPMC E4M-1％布林佐胺凝胶

B、0.2％卡波普980-0.5％HPMC E4M-1％布林佐胺凝胶

图3 三种凝胶体外释药与溶液剂、混悬剂的比较(温度敏感凝胶-实施例1，pH敏感凝胶-实施例4，离子敏感凝胶-实施例8)。

图4 三种凝胶剂和溶液剂离体角膜透过累积药物量结果(温度敏感凝胶-实施例1，pH敏感凝胶-实施例4，离子敏感凝胶-实施例8)。

图5 不同浓度包合材料对家兔离体角膜透过累积药物量的结果。

图6-1 温度敏感原位凝胶(实施例A6)的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

图6-2 温度敏感原位凝胶(实施例A6)相对于pH敏感眼用原位凝胶剂(实施例A16)及离子敏感眼用原位凝胶剂(实施例A25)的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

图6-3 温度－pH混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A35)、温度－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A36)、pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A37)以及温度－pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A38)的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

图7 布林佐胺纳米粒(实施例B12)的眼内压降低值百分比与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

图8 纳米混悬剂(实施例C24)的眼内压降低值百分比与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

图9-1 纳米混悬剂(实施例C24)与纳米混悬剂-温度敏感凝胶(实施例D19)眼内压降低值对比(“*”表示p<0.05)。

图9-2 纳米粒凝胶复合制剂(实施例D6)、纳米混悬凝胶复合制剂(实施例D19)与包合物-pH敏感凝胶眼内压降低值对比(“*”表示p<0.05)。

图9-3 纳米粒凝胶复合制剂(实施例D6)、纳米混悬凝胶复合制剂(实施例D19)与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。

具体实施方式

以下通过对本发明具体实施方式的描述说明但不限制本发明。

实施例1～3

注：“/”表示未添加。

实施例1至3为布林佐胺或布林佐胺盐温度敏感型凝胶处方，制法如下按比例称取增稠剂高分子基质，加入蒸馏水，充分搅拌，放置至全部溶解；再按比例称取泊洛沙姆，加入蒸馏水中，搅拌使部分溶解，于冰箱冷藏室中放置至全部溶解；将布林佐胺或布林佐胺和增溶剂、渗透压调节剂、防腐剂溶于蒸馏水中，搅拌使其溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤，将滤液与上述高分子溶液合并，加蒸馏水至全量，以pH调节剂调节溶液的pH值为5.0～9.0，搅拌均匀，即得。

实施例4～6

实施例4至6为布林佐胺或布林佐胺盐pH敏感型凝胶处方，制法如下将羟丙甲纤维素和卡波普分散于30ml注射用水中浸泡过夜，搅拌，获得溶液，备用，将布林佐胺或布林佐胺盐、渗透压调节剂，加注射用水30ml，搅拌下溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，将滤液加入到上述制备的羟丙甲纤维素和卡波普溶液中，补加注射用水至100ml，加入适量pH调节剂溶液调至体系的pH为5.5，并搅拌均匀，获得布林佐胺眼用凝胶剂。

实施例7～9

注：“/”表示未添加。

实施例7至9为布林佐胺或布林佐胺盐离子敏感型凝胶处方，制法如下：将处方量的高分子材料加入20至30ml注射用水中，磁力搅拌，分散均匀后，将药物，渗透压调节剂，加注射用水30ml，搅拌下溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，将滤液加入到上述制备的羟丙甲纤维素和卡波普溶液中，调节pH值和渗透压，并补加注射用水至100ml，搅拌均匀，获得布林佐胺眼用凝胶剂。

申请人在优先权期内对上述三种原位凝胶进一步研究分析。

实施例A1～A10 布林佐胺温度敏感眼用原位凝胶剂

注：“/”表示未添加。

实施例A1至A5布林佐胺或布林佐胺盐温度敏感型凝胶处方，制法如下按比例称取增稠剂高分子基质，加入蒸馏水，充分搅拌，放置至全部溶解；再按比例称取泊洛沙姆，加入蒸馏水中，搅拌使部分溶解，于冰箱冷藏室中放置至全部溶解；将布林佐胺或布林佐胺和增溶剂、渗透压调节剂溶于蒸馏水中，搅拌使其溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤，将滤液与上述高分子溶液合并，加蒸馏水至全量，以pH调节剂调节溶液的pH值为5.0～9.0，搅拌均匀，即得。

实施例A6至A10为布林佐胺或布林佐胺盐温度敏感型凝胶处方，制法如下按比例称取增稠剂高分子基质，加入蒸馏水，充分搅拌，放置至全部溶解；称取处方量的壳聚糖，分散于预先制备的0.1M盐酸，磁力搅拌24小时使其溶解；将布林佐胺或布林佐胺和增溶剂、渗透压调节剂溶于蒸馏水中，搅拌使其溶解，经0.22μm微孔滤膜过滤，将滤液与上述高分子溶液合并，加蒸馏水至全量，以pH调节剂调节溶液的pH值为5.0～9.0，搅拌均匀，即得。

实施例A13～A20 布林佐胺pH敏感眼用原位凝胶剂

注：“/”表示未添加。

实施例A13至A20为布林佐胺或布林佐胺盐pH敏感型凝胶处方，制法如下将羟丙甲纤维素和卡波普分散于30ml注射用水中浸泡过夜，搅拌，获得溶液，备用，将布林佐胺或布林佐胺盐、渗透压调节剂，加注射用水30ml，搅拌下溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，将滤液加入到上述制备的羟丙甲纤维素和卡波普溶液中，补加注射用水至总重量为100ml，加入适量pH调节剂溶液调至体系的pH为5.5，并搅拌均匀，获得布林佐胺眼用凝胶剂。

实施例A21～A30 布林佐胺离子敏感眼用原位凝胶剂

注：“/”表示未添加。

实施例A21至A30为布林佐胺或布林佐胺盐离子敏感型凝胶处方，制法如下：将处方量的高分子材料加入20至30ml注射用水中，磁力搅拌，分散均匀后，将药物，渗透压调节剂，加注射用水30ml，搅拌下溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，调节pH值和渗透压，并补加注射用水至总重量为100ml，搅拌均匀，获得布林佐胺眼用凝胶剂。制的的凝胶剂按40:7加入人工泪液(氯化钠：8.3g，二水氯化钙：0.084g，氯化钾：1.4g，水：1L)，均能形成凝胶剂。

实施例A31～A40 多重凝胶剂制备

注：“/”表示未添加；“－”表示未检测。

实施例A31至A40为布林佐胺或布林佐胺盐多重敏感凝胶处方，制法如下：将处方量的高分子材料加入20至30ml注射用水中，磁力搅拌，分散均匀后，将药物，渗透压调节剂，加注射用水30ml，搅拌下溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，调节pH值和渗透压，并补加注射用水至总重量为100ml，搅拌均匀，获得布林佐胺眼用凝胶剂。

实验例A1 药效学评价

取正常家兔随机分组，每组6只，雌雄各半。双侧眼给予50μl盐酸奥布卡因(倍诺喜，日本)眼部麻醉，使用眼压计测定双眼基线眼压，记为0时刻眼压。单侧眼给予50μl制剂(测试制剂：温度敏感原位凝胶(实施例A6)、pH敏感眼用原位凝胶剂(实施例A16)、离子敏感眼用原位凝胶剂(实施例A25)、温度－pH混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A35)、温度－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A36)、pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A37)、温度－pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂(实施例A38)或市售混悬剂爱尔康公司生产的 )至实验组家兔眼结膜囊内。于给药后的30、60、120、180、240和300分钟分钟测定双侧眼压变化，并计算眼内压降低值(mmHg)：眼内压降低值＝某时刻眼压-基础眼压。采用SPSS13.0软件中的t检验进行统计学处理，p<0.05用“*”标识。

得到结果参见图6-1温度敏感原位凝胶的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)，结论是温敏凝胶的降眼压效果明显优于市售制剂，眼压值下降显著且作用时间持久；图6-2温度敏感原位凝胶相对于pH敏感眼用原位凝胶剂及离子敏感眼用原位凝胶剂的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)，结论是：三种凝胶的降眼压效果强弱顺序为：温敏凝胶>pH敏感凝胶>离子敏感凝胶，其中温敏凝胶眼压值下降成都及持续作用时间最佳；图6-3温度－pH混合敏感的眼用多重原位凝胶剂、温度－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂、pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂以及温度－pH－离子混合敏感的眼用多重原位凝胶剂的眼内压降低值与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)，结论是4种凝胶的降眼压效果均优于市售制剂，含温敏凝胶的3个多重凝胶制剂效果较不含温敏凝胶的pH－离子混合敏感降眼压作用持续时间长。

实施例10～12

实施例10至12是制剂4布林佐胺包合物处方，制法如下：将处方量的布林佐胺和羟丙基-β-环糊精加入20至30ml乙醇中，磁力搅拌，分散均匀后，置于旋转蒸发仪中25℃蒸去有机溶剂形成薄膜，将稳定剂溶解，加入溶解薄膜，并补加注射用水至总重量为100克，搅拌均匀，使用pH值调节剂和渗透压调节剂，调节pH值和渗透压，0.22μm微孔滤膜滤过，将滤液加入冻干保护剂，搅拌均匀，与-80℃预冻24小时，冷冻干燥，即得布林佐胺包合物制剂。

实施例13～15

注：“/”表示未添加。

实施例13至15是布林佐胺脂质体的处方，制法如下：称取处方量的磷脂、胆固醇和药物，乙醇溶解，混合均匀混合液于旋转蒸发仪上，减压蒸去有机溶剂，制备磷脂膜；向磷脂膜中加入50％的溶有稳定剂的注射用水，水化完全，高压均质或超声波处理调整脂质体粒径；补加注射用水至全量，调节pH值和渗透压，微孔滤膜过滤，即得，无菌分装或加入冻干保护剂制备布林佐胺脂质体冻干制剂。

实施例16～18

注：“/”表示未添加。

实施例16至18是布林佐胺纳米粒的处方，制备方法如下：将处方量的材料和药物溶于二氯甲烷中制的有机相，配制的含稳定剂的溶液为水相，将有机相倒入水相中，10000rpm搅拌3～5分钟后，探头超声细胞粉碎机中，100W超声5分钟，得到乳剂，减压旋转蒸除去有机溶剂，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，用2％～10％的蔗糖溶液重新分散后进行冷冻干燥，即得布林佐胺纳米制剂。

申请人在优先权期内对纳米粒制剂进一步研究如下：

实施例B1～B6 布林佐胺用量优选

注：＝表示与市售混悬剂药效相当，+表示药效强于市售混悬剂的程度。

将布林佐胺和PCL溶于二氯甲烷与丙酮的混合溶剂中，加入聚乙烯醇水溶液中，冰浴条件下300W探头超声分钟5分钟，得到O/W乳剂，37℃水浴减压蒸馏除尽有机溶液，调节pH值和渗透压，或加入防腐剂，加水定容至100ml，即得。与市售混悬剂进行降眼压效果比较，结果显示，布林佐胺为0.05mg/100ml时，药效与市售相当，提高用量，药效显著强于市售，且随着浓度增加，药效逐渐增加，当浓度达到2mg/100ml时，药效作用达到峰值，进一步增加药物浓度，药效不再有明显变化。

实施例B7～B16 纳米载体材料优选

注：“/”表示未添加。

将布林佐胺和纳米粒载体材料溶于有机溶剂中，加入含有稳定剂的水溶液中，冰浴条件下300W探头超声5分钟或磁力搅拌，得到O/W乳剂或直接得到纳米粒子，37℃水浴减压蒸馏除尽有机溶液，调节pH值和渗透压，或加入防腐剂，加水定容至100ml，即得。

实施例B17～B22 纳米载体材料优选

注：“/”表示未添加。

将布林佐胺与辅料混合，加入含有稳定剂的水溶液中，高压均质或分散剂分散，直接得到纳米粒子，调节pH值和渗透压，或加入防腐剂，加水定容至100ml，即得。

实验例B1 药效学评价

试验操作同试验例A1。所用测试制剂为：实施例B12。

得到结果参见图7布林佐胺纳米粒(实施例B12)的眼内压降低值百分比与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)，结论是布林佐胺纳米粒的降眼压效果明显优于市售制剂，眼压值下降显著。

实施例19～21

注：“/”表示未添加。

实施例19至21是布林佐胺纳米混悬剂的处方，实施例19和20的制备方法：将药物和辅料溶解于有机相中，使用高剪切乳化机10000rpm，乳化剪切5分钟，得到初悬液，高压均质300bar，循环6次，500bar循环6次，800bar循环6次，1000bar循环20次，调节pH值和渗透压和渗透压，过0.22μm滤膜，即得。

实施例21的制备方法为：将药物和辅料溶解于有机相中，使用高剪切乳化机6000rpm，乳化剪切5分钟，得到初悬液，冰浴下探头超声90W超声5分钟,，过0.22μm滤膜，即得。

实施例C1～C6 布林佐胺用量优选

将布林佐胺和聚乙烯吡咯烷酮K30分散于水中，使用高剪切乳化机剪切5分钟，得到粗悬液，高压均质500bar循环5次，1000bar循环5次，调节pH和渗透压，加入金属离子络合剂和防腐剂，加水定容至100ml，即得。与市售混悬剂进行降眼压效果比较，结果显示，布林佐胺为0.05mg/100ml时，药效与市售相当，提高用量，药效显著强于市售，且随着浓度增加，药效逐渐增加，当浓度达到2mg/100ml时，药效作用达到峰值，进一步增加药物浓度，药效不再有明显变化。

实施例C7～C15 稳定剂优选

注：“/”表示未添加。

将布林佐胺与辅料混合，并与一定量的水加入至球磨机的石英杯子里，使用氧化锆为研磨介质，35Hz研磨6小时，取出制剂，过滤除去研磨介质，调节pH值和渗透压，加入金属离子络合剂或防腐剂，加水定容至100ml，即得。粒径测定结果显示，用甘油做稳定剂时粒径太大且分布极不均匀，因此，甘油不被选作稳定剂。

注：“/”表示未添加。

将布林佐胺与辅料混合，并与一定量的水加入至球磨机的石英杯子里，使用氧化锆为研磨介质，35Hz研磨6小时，取出制剂，过滤除去研磨介质，调节pH值和渗透压，加入金属离子络合剂或防腐剂，加水定容至100ml，即得；或加入冻干保护剂，制成冻干制剂，即得。粒径测定结果显示，用单一稳定剂时，甘油制得的纳米混悬剂粒径太大且分布极不均匀，仅能稳定1天，因此，甘油不被选作稳定剂。泊洛沙姆、吐温80、聚乙烯吡咯烷酮K30、羧甲基纤维素钠、丙烯酸树脂RL100和乙基纤维素单用时，纳米混悬剂的稳定时间均≧2个月，作为优选的稳定剂。

实验例C1 药效学评价

试验操作同试验例A1。所用测试制剂为：实施例C24。

得到结果参见图8纳米混悬剂(实施例C24)的眼内压降低值百分比与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)。，结论是布林佐胺纳米混悬剂的降眼压效果明显优于市售制剂，眼压值下降显著。

实施例22～25

注：“/”表示未添加。

实施例22至25是布林佐胺复合凝胶剂，实施例22处方选自制剂5，制备方法：取处方量的布林佐胺和包合材料溶解于有机溶剂中，得有机相分散介质A，将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B，向B中缓慢的滴加有机相分散介质A，搅拌均匀，混合液除去有机溶剂，得到制剂C，使用余量的水溶解凝胶基质，溶解完全后，将C与凝胶基质水溶液混合均匀，调节pH值和渗透压，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即得。

实施例23和24制备方法：将药物和助悬剂等辅料溶解于有机溶剂中，得到有机相分散介质A；将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B；向水相B中缓慢的滴加有机相分散介质A，同时使用乳化机等物理方法制备混悬剂初乳，继而使用探头超声或高压均质等物理方法增加混悬剂初乳的稳定性，得到混悬乳剂C；除去C中的有机溶剂，得到终混悬剂D；使用余量的注射用水溶解凝胶基质，搅拌均匀，得到凝胶基质水溶液E，将D和E混匀，调节pH值和渗透压，0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即得；

实施例D1～D10 纳米粒原位凝胶复合制剂

注：“/”表示未添加。

布林佐胺复合制剂的制备方法，包括以下步骤：使用处方量50％～80％的水如下法制备纳米粒：将布林佐胺和纳米粒载体材料溶于有机溶剂中，加入含有稳定剂的水溶液中，冰浴条件下300W探头超声5分钟或磁力搅拌，得到O/W乳剂或直接得到纳米粒子，37℃水浴减压蒸馏除尽有机溶液，然后使用处方量20％～50％的水制备原位凝胶制剂，将纳米制剂分散于原位凝胶中，调节pH值和渗透压，或加入防腐剂，即得。

实施例D11～D20 纳米混悬剂原位凝胶

注：“/”表示未添加。

布林佐胺复合制剂的制备方法，包括以下步骤：使用处方量50％～80％的水如下法制备纳米混悬剂：将布林佐胺与辅料混合，并与一定量的水加入至球磨机的石英杯子里，使用氧化锆为研磨介质，35Hz研磨6小时，取出制剂，过滤除去研磨介质，加入凝胶基质和稳定剂，调节pH值和渗透压，加入金属离子络合剂或防腐剂，补水至100ml，即得。

实验例D1 药效学评价

试验操作同试验例A1。所用测试制剂为：纳米粒溶液混悬剂(实施例C24)与纳米粒离子混悬剂-温度敏感凝胶(实施例D19)。

得到结果参见图9-1纳米粒溶液混悬剂(实施例C24)与纳米粒离子混悬剂-温度敏感凝胶(实施例D19)眼内压降低值对比(“*”表示p<0.05)，结论是纳米混悬剂与温度敏感凝胶复合后，降眼压效果依然很好，且能维持更长时间；图9-2纳米粒凝胶复合制剂(实施例D6)、纳米混悬凝胶复合制剂(实施例D19)与包合物-pH敏感凝胶眼内压降低值对比(“*”表示p<0.05)，结论是：3种复合制剂均由一定的降眼压效果，持续作用时间长短顺序为：纳米粒凝胶复合制剂>纳米混悬凝胶复合制剂>包合物-pH敏感凝胶；图9-3纳米粒凝胶复合制剂(实施例D6)、纳米混悬凝胶复合制剂(实施例D19)与市售制剂对比(“*”表示p<0.05)，结论是：纳米粒凝胶复合制剂和纳米混悬凝胶复合制剂的降眼压效果均优于市售制剂。

实验例1 布林佐胺温度、pH及离子敏感眼用凝胶的相转变检测

1.1 温敏型凝胶相转变温度测定：

将凝胶溶液加入西林瓶内，加入磁力搅拌子后，将小瓶置于带磁力搅拌的水浴装置中，控制磁力搅拌速度为100rpm，然后调节温度，每分钟升高0.5℃，维持2分钟，观察搅拌子停止转动的温度并记录，测定3次计算平均值。

表1-1 不同处方的布林佐胺凝胶制剂凝胶相转变温度测定结果(n＝3)

表1-1结果表明：加入羟丙甲纤维素能在一定程度上降低泊洛沙姆127的胶凝温度。与单用相同浓度的泊洛沙姆127相比，凝胶的粘度增加，粘度增加的效果与加入量相关，处方均在适宜温度可形成凝胶，更改处方的材料配比，如增高泊洛沙姆127的比例，凝胶相转变温度降低，对生产、运输和储存的条件要求较高，成本增加，且使用不便，而降低泊洛沙姆127的比例，其相转变温度升高，眼球表面的温度为34℃至37℃，不能满足其相转变的要求，无法形成凝胶。

1.2 pH敏感型凝胶相转变pH值的测定：

在34±0.2℃下，分别设置pH值为4.0-9.0测定该pH值时凝胶的黏度，以其黏度突然变大的点作为相转变pH点，如图2所示。

表1-2 不同处方布林佐胺凝胶制剂凝胶相转变pH测定结果(n＝3)

表2结果表明：卡波姆的量增加，凝胶相转变pH值变低，但仍在适宜的范围内，具有较好的凝胶特性，若继续增加卡波姆的用量，则其酸性逐渐增强，眼表泪液难以缓冲至相转变pH值，且对眼部的刺激性相应增加，不宜用于眼部给药。

1.3 离子敏感凝胶相转变测定：

主要通过比较加入泪液前后凝胶粘度变化，具体方法为在34℃条件下，反复测定3次布林佐胺离子敏感凝胶与不同比例人工泪液混合后的流变学变化。结果表明，人工泪液的加入可明显提高胶凝后制剂的黏度(η)和弹性模量(G')。正常眼表泪液量约为7μL，当布林佐胺凝胶与人工泪液以40∶7的比例混合时，η和G'比胶凝前制剂分别提高约2Pa·s和5Pa；当混合比例达到40∶14及更高比例(40∶32)时，上述流变学参数继续提高，可见布林佐胺离子敏感型凝胶具有良好的离子敏感型胶凝能力。

实验例2 制剂学性质评价

2.1 包合物的溶液稳定性

将制备好的包合物溶液置于室温观察其析晶时间，用以断定其稳定性，为制备后续的冻干制剂做准备。

表2-1 布林佐胺包合物析晶时间

由表2-1可以看出，布林佐胺包合物溶液的稳定性不佳，包合材料浓度较小的在制备完成后直接析出结晶，无法冻干制成稳定的冻干制剂，而包合材料浓度过大后，对眼部会造成很大刺激，故对其材料浓度进行了筛选，得到的包合材料为10％至50％的浓度比较适宜。

2.2 布林佐胺脂质体的表征

激光散射粒度测定仪测定粒径及PDI，制得的制剂过0.22μm的滤膜，滤膜上为未包入脂质体未溶解的药物，滤液为脂质体溶液，用甲醇和氯仿破坏，定容，测定药物浓度，然后按下式计算包封率E％＝C1/C×100％，C为总药浓度，C1为包入脂质体中的药物浓度。

表2-2 布林佐胺脂质体

2.3 布林佐胺纳米粒的表征

使用激光粒度仪测定脂质体的粒径和PDI，称取一定量的纳米粒冻干制剂，加入一定DMSO将其溶解，高效液相色谱测定含量，计算其包封率。

表2-3 布林佐胺纳米粒

2.4 纳米混悬剂的稳定性

测定制备好的纳米混悬剂的粒径，而后加入冻干保护剂，冻干后注射用水复溶，测定其粒径情况。

表2-4 布林佐胺纳米混悬剂稳定性

由表2-2可见，布林佐胺纳米混悬粒径较小，性质比较稳定，而冻干后的制剂也比较稳定，45天后，能够轻松的复溶于水溶液中，制剂粒径变化不大。

2.5 复合凝胶剂的稳定性

将制备好的制剂观察和测定粒径后分为两份，一份加入凝胶基质搅拌均匀，一份不加凝胶基质搅拌均匀，置于室温45天后观察和测定粒径。

表2-5 布林佐胺纳米混悬凝胶剂储存45天后的粒径变化

注：表中的“/”表示不需测定，即实施例22和对比例3为包合物，不需测定粒径；表中“-”表示无法测定，因其已经形成絮状沉淀。

表2-5中对比例为不加凝胶剂的析晶时间及粒径变化，由表中可见，当制备成为溶液后，包合物和纳米混悬剂均不稳定，45天后已经析晶或产生沉淀，轻摇无法重新分散于溶液中，而加入凝胶基质后，制剂的稳定性增加，未产生沉淀或轻摇后重新悬浮于溶液中，且粒径变化不大。

实验例3 布林佐胺眼用制剂对家免眼刺激性评价

眼部刺激研究性研究采用动物同体左右侧自身对照法，采用重2至3kg的雌性新西兰白兔进行，左眼每天给药两次，连续给药两周，右眼滴入生理盐水作空白对照，给药后，兔子眼睑被动闭合10秒钟，定期(每天给药前观察一次，取两次中高分，以及最后一次给药后12小时、24小时、48小时、72小时)观察兔眼部的发红、肿胀及充水情况，评价按per Draize technique进行。实验结果见表3-1。

表3-1 眼部刺激性实验结果

注：1％布林佐胺滴眼液为布林佐胺加入1％的枸橼酸制成的水溶液，使用渗透压调节剂调剂渗透压至等渗。

该评分标准为大于3分的制剂认为对眼部刺激较大，小于等于3分的制剂对眼无刺激或刺激性很轻，表3-1显示，布林佐胺枸橼酸盐刺激性很大，而本专利制备的制剂均没有刺激性，显示出良好的眼部耐受性，也未见对角膜、虹膜及结膜的损伤以及异常的临床症状。

实验例4 布林佐胺眼用凝胶体外释药实验

采用透析袋进行布林佐胺的体外释放试验，用吸量管精密吸取1ml制剂样品，加入到预先处理好的透析袋中，密封后，将透析袋浸入40ml释放介质中，温度控制在37℃。释放介质为模拟泪液(STF，组成如下：NaCl 0.67g，NaHCO₃，0.20g，CaCl₂.2H₂O 0.008g.蒸馏水加至100ml)，以100rpm转速磁力搅拌。每次取1ml释放样品液，并补充相同体积模拟泪液，释放样品液经0.45μm针筒滤器过滤后，进行HPLC分析，以测定其中布林佐胺浓度。试验结果见图3三种凝胶体外释药与溶液剂、混悬剂的比较。

图3结果表明，溶液剂释放较快，混悬剂有一定的缓释作用，三种凝胶剂均能使药物缓慢的平稳释放。药物自这些聚合物载体中的体外释放主要由扩散控制，属非fick扩散。

实验例5 布林佐胺眼用缓释凝胶对家免眼角膜的体外透过性

将正常家兔处死，分离完整的角膜。将角膜固定于扩散池上，角膜内侧(房水侧)面向接受池，接受池内接受液为GBR试液(谷胱甘肽-碳酸氢钠格林试剂：A液：氯化钠12.4g/L、氯化钾0.716g/L、磷酸二氢钠0.206g/L、碳酸氢钠4.908g/L，B液：氯化钙0.230g/L、氯化镁0.318g/L、葡萄糖1.8g/L、谷胱甘肽(氧化型)0.184g/L，低温贮存，用前等量混合)取实施例1、实施例4、实施例7的布林佐胺眼用缓释凝胶和混悬剂0.5g置于供给池，于37℃下进行透过实验。用相同浓度的布林佐胺生理盐水溶液(TMS)作对照。分别于不同时间从接受池中取接受液0.2ml，补充相同体积的GBR试液。HPLC法测定接受液中布林佐胺的浓度，并计算累计透过量，实验结果见图4三种凝胶剂和溶液剂离体角膜透过累积药物量结果。

由图4可见，在体外角膜透过试验中，在相同时间内，凝胶中的药物透过角膜的量较混悬剂少，这主要是因为药物在凝胶中的扩散速度较水溶液慢，且药物与高分子材料间具有较强的静电相互作用，从而进一步延缓了药物的扩散和透过。

同法取实施例10、实施例11、实施例12的布林佐胺包合物制剂和混悬剂置于供给池，于37℃下进行透过实验。用相同浓度的布林佐胺生理盐水溶液(TMS)作对照。分别于不同时间从接受池中取接受液0.2ml，补充相同体积的GBR试液。HPLC法测定接受液中布林佐胺的浓度，并计算累计透过量，实验结果见图5。结论是：在一定范围内，包合材料的量增高，有助于药物透过角膜，而当材料超过一定的量，则对透角膜起阻滞作用。

实验例6 家免眼部给予布林佐胺缓释凝胶后泪液中布林佐胺浓度

取正常家兔6只，随机分为两组，每组3只。取实施例1的眼用缓释凝胶50μl给予到实验组家兔眼里，对照组给予相同浓度和剂量的布林佐胺生理盐水溶液。于给药后不同时间，用适量脱脂棉置于家免眼结膜囊内30s蘸取泪液，称取泪液重量，并用流动相洗脱后，HPLC法测定泪液中布林佐胺的浓度，结果见表4。

表4 家免眼部给予TMS和TMG后不同时间泪液中的布林佐胺浓度

由表4可见，家免眼部给予布林佐胺缓释凝胶后不同时间1小时后，泪液中布林佐胺浓度显著高于相同时间的混悬剂，表明溶液剂可被迅速清除，而凝胶剂在眼中的保留时间显著延长。

因此，本发明眼用原位凝胶制剂可提高布林佐胺在眼部的生物利用度，具有可行性。

Claims

1.一种布林佐胺眼用制剂，其特征在于所述制剂选自布林佐胺包合物、布林佐胺包合物复合凝胶剂。

2.根据权利要求1所述的布林佐胺眼用制剂，其特征在于所述布林佐胺包合物，在100ml包合物制剂中，含有如下重量的组分：

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～10g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

3.根据权利要求1所述的布林佐胺眼用制剂，其特征在于所述布林佐胺包合物复合凝胶剂，在100ml包合物复合制剂中，含有如下重量的组分：

凝胶基质通常为0.1～40g；优选0.1～30g；最优选0.1～28g；

稳定剂通常为0.1～20g；优选0.1～15g；最优选0.1～10g；

pH调节剂通常为0.01～2.0g；优选0.1～2.0g；最优选0.1～1.0g；

以及，用水补足100ml。

4.根据权利要求2或3所述的布林佐胺眼用制剂，其特征在于所述包合物材料选自以下材料中的一种或多种的任意组合：环糊精(CD)、β-环糊精、羟丙基-β-环糊精中的至少一种；优选β-环糊精和羟丙基-β-环糊精；更优选羟丙基-β-环糊精。

5.一种布林佐胺包合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将布林佐胺或布林佐胺盐和包合材料溶解于有机溶剂中，得有机相分散介质A；

（2）将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B；

（3）用减压旋蒸或其他方式除尽A中有机溶剂后，加入水相B溶解，得到制剂C；

（4）补充蒸馏水至处方量，加入冻干保护剂，调节pH值和渗透压，除菌（可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部），冷冻干燥，即得。

6.一种布林佐胺包合物复合凝胶剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（2）将稳定剂分散于处方量的注射用水中，得到水相B；

（4）使用余量的水溶解凝胶基质，溶解完全后，将C与凝胶基质水溶液混合，调节pH值和渗透压，除菌（可采用0.22μm微孔滤膜过滤或辐射灭菌等常用的除菌方式，该步骤用于除去细菌，以免本发明眼用制剂中再加入防腐剂以刺激眼部），即得。

7.权利要求1-3任一项的布林佐胺眼用制剂在制备治疗青光眼的药物中的应用。