CN104706580A - 一种兽用干扰素诱导剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为10-80g/L的氯化钙水溶液、浓度为0.1-5g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸。本发明还提供该兽用干扰素诱导剂的制备方法。本发明的兽用干扰素诱导剂副反应少、刺激性低、安全性高，制备方法能够避免氯化钙与其他成分产生沉淀。
Description
技术领域
本发明涉及一种干扰素诱导剂，具体涉及一种兽用干扰素诱导剂基及其制备方法。
背景技术
干扰素(Interferon，IFN)，是一种细胞因子，具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。干扰素作为一种广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞(NK细胞)、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。它们在同种细胞上具有广谱的抗病毒、影响细胞生长，以及分化、调节免疫功能等多种生物活性。
聚肌胞，又称多聚肌苷酸-胞苷酸，是人工合成的双链RNA聚合物，是干扰素强诱生剂，除具有广谱抗病毒的作用，同时还具有抗菌、抗原虫、抗肿瘤、抗辐射和免疫调节等多种生物学作用。此外，聚肌胞因其独特的化学结构，在体内可被降解掉，不会造成残留，危害人类健康，具有安全、环保的特点。聚肌胞在实验动物上的试验、人医的I期和II期临床上治疗疾病的效果已经被证实。目前聚肌胞在人医临床上广泛应用于疱疹病毒、流感病毒、肝炎病毒等病毒性疾病和某些肿瘤疾病的防治。在兽医临床上主要用于治疗病毒性疾病的研究。
目前的聚肌胞注射液产品中含有卡那霉素作为阳离子稳定剂，而卡那霉素的使用容易造成抗生素的残留等问题。壳聚糖虽然可以作为阳离子稳定剂替换卡那霉素，但壳聚糖是一种氨基多糖，由于分子间的作用力较强，只能溶于某些特殊的酸性溶液，且壳聚糖酸溶液贮存过程中易发生降解，黏度和分子质量会发生较大变化而影响品质稳定，极大限制了壳聚糖的广泛应用。曾有报道利用壳聚糖将聚肌胞包被形成纳米微囊，其依据是运用激光笔检验最终制剂的丁达尔现象，由于壳聚糖溶解在酸性溶液中即形成粘性的胶体，在光照下本身就会出现丁达尔现象，与形成含聚肌胞纳米微囊无必然联系，因此，该法尚不足以证明聚肌胞被壳聚糖包裹，此外，因为聚肌胞在酸性溶液中容易降解，聚肌胞-壳聚糖酸溶液并不适合长期保存。
钙离子对稳定聚肌胞的二级结构也有重要的作用，现有技术在合成过程中直接在反应液中添加氯化钙粉末，由于氯化钙本身比较难溶，直接添加粉末会导致高浓度钙离子容易与反应体系中的磷酸氢根、游离的聚肌苷酸和聚胞苷酸等成分形成沉淀而影响产品品质以及合成浓度。
此外，现有的聚肌胞制备技术还用到焦亚硫酸钠、赋形剂等物质，如公开号为CN101810638A的发明专利申请文件，公开了一种内源干扰素诱导物的注射液和纳米微囊化溶液的制备方法，其中具体公开了：在注射水中加入焦亚磷酸钠、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠，然后加热20-60摄氏度，接着加入聚胞苷酸搅拌、溶解，保温10min，然后再加入聚肌苷酸，搅拌、溶解，保温15-30min。焦亚硫酸钠、赋形剂等物质易对机体产生不同程度的刺激，尤其是焦亚硫酸钠毒性大不可吞食，接触到人畜眼睛还会产生严重伤害，也不利于车间人员生产操作。上述现有技术制备的聚肌胞产品在给动物注射或者药浴、拌饵给药时有出现副反应以及污染环境的风险，若用于肉用经济动物还牵涉到食品安全问题，难以推广。
发明内容
本发明的目的在于提供一种副反应少、刺激性低、安全性高的兽用干扰素诱导剂，同时本发明还提供该兽用干扰素诱导剂的制备方法。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为10-80g/L的氯化钙水溶液、浓度为0.1-5g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸，所述聚肌苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述聚胞苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述氯化钙水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2-16：1000，所述壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为984-998：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1。
本发明中所述pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液由二水合磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠和水混合而成；每1L氯化钠-磷酸盐缓冲液中含有0.262g二水合磷酸二氢钠、1.546g磷酸氢二钠、8.768g氯化钠。
本发明中的兽用干扰素诱导剂，其制备方法包括如下步骤：
a.取聚肌苷酸，然后用1/2体积的所述氯化钠-磷酸盐缓冲液(即配方中的氯化钠-磷酸盐缓冲液总体积的一半)溶解，然后在40-70℃的温度下加热5-10分钟；
b.取聚胞苷酸，然后用1/2体积的所述的氯化钠-磷酸盐缓冲液(即配方中的氯化钠-磷酸盐缓冲液总体积的一半)溶解，然后在40-70℃的温度下加热5-10分钟；
c.将a步骤和b步骤得到的液体混合，然后以10-40转/分的速度搅拌3-10分钟；然后在40-70℃的温度下反应20-60分钟，反应过程中保持10-40转/分的速度搅拌，得到反应液；
d.待反应液冷却至室温，然后每间隔5-20s逐滴滴加氯化钙水溶液，所述滴加的氯化钙水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2-16:1000，滴加过程保持10-40转/分的速度搅拌；
e.向经过d步骤处理的反应液中缓慢加入配方量的壳聚糖盐酸盐水溶液(即上文限定的壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为984-998：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1)，加入过程保持10-40转/分的速度搅拌；
f.将经过e步骤处理的反应液用孔径0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
本发明中，优选的方案为所述d步骤中的氯化钙水溶液由如下步骤制得：根据所述氯化钙水溶液的浓度(即10-80g/L)，取氯化钙溶于水，然后用0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
本发明中，优选的方案为所述e步骤中的壳聚糖盐酸盐水溶液由如下步骤制得：根据所述壳聚糖盐酸盐水溶液的浓度(即0.1-5g/L)，取壳聚糖盐酸盐溶于水，然后用0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
1、本发明中使用可溶性壳聚糖盐酸盐代替卡那霉素和壳聚糖，具有以下优点：1)壳聚糖盐酸盐对动物机体和环境均无毒副作用，成本低；2)壳聚糖盐酸盐具有强阳离子性，可以作为聚肌胞稳定剂，有效抵抗机体或环境中RNA酶的降解作用，无抗生素残留，并且促进体细胞对药物成分的吸收；3)壳聚糖盐酸盐可在中性水中快速溶解，其水溶液的pH值接近中性，可与PH＝7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液配伍，非常有利于在兽用注射液等对刺激性要求比较苛刻的领域应用，也避免了酸性溶液对聚肌胞的降解；4)壳聚糖盐酸盐水溶液性质稳定，容易存储，避免了传统壳聚糖应用时必须现配现用从而制约大批量生产开展的弊端；
2、无需添加焦亚硫酸钠，卡那霉素，赋形剂等物质，在确保药效的同时，能够降低对机体的副反应，避免抗生素和毒物残留，无食品安全问题，不污染环境，特别适合于肉用经济动物养殖业使用；
3)本发明的兽用干扰素诱导剂的制备方法，优化了氯化钙等辅料的添加工艺，避免其在溶解时与其它成分产生沉淀，确保合成效果，浓度在0.1-20g/L之间的聚肌胞溶液均能顺利制备。
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
具体实施方式
实施例1
一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：体积为500mL的pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、体积为1mL的浓度为44.4g/L的氯化钙水溶液、体积为499mL浓度为0.65g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、0.5g的聚肌苷酸、0.5g的聚胞苷酸。
该兽用干扰素诱导剂的制备方法包括如下步骤：
a.取0.5g的聚肌苷酸，然后用250mL的氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在45℃的温度下加热5分钟；
b.取0.5g的聚胞苷酸，然后用250mL的氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在45℃的温度下加热5分钟；
c.将a步骤和b步骤得到的液体混合，然后以30转/分的速度搅拌3分钟；然后在45℃的温度下反应30分钟，反应过程中保持30转/分的速度搅拌，得到反应液；
d.待反应液冷却至室温，然后每间隔5s逐滴滴加氯化钙水溶液，所述滴加的氯化钙水溶液的总体积为1mL，滴加过程保持30转/分的速度搅拌；
e.向经过d步骤处理的反应液中缓慢加入499mL的壳聚糖盐酸盐水溶液，加入过程保持30转/分的速度搅拌；
f.将经过e步骤处理的反应液用孔径0.22μm的滤膜过滤，收集滤液，即得；
所述d步骤中的氯化钙水溶液由如下步骤制得：根据所述氯化钙水溶液的浓度(即44.4g/L)，取氯化钙溶于水，然后用0.22μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
本发明中，优选的方案为所述e步骤中的壳聚糖盐酸盐水溶液由如下步骤制得：根据所述壳聚糖盐酸盐水溶液的浓度(即0.65g/L)，取壳聚糖盐酸盐溶于水，然后用0.22μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
将本实施例制得的兽用干扰素诱导剂与市售某品牌的人用聚肌胞注射液的质量进行比较，比较的依据为国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，具体检测结果如下表1：
表1：本技术制备的干扰素诱导剂与同类样品质量检测结果对比(1mg/ml)
由表1检测结果可以看出，本发明所制得的兽用干扰素诱导剂符合国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，且洁净无菌，可直接使用，有效含量高，产品质量稳定。
对本实施例制得的兽用干扰素诱导剂对抵抗RNA酶降解稳定性进行测试，取本实施例制得的兽用干扰素诱导剂、市售某品牌的人用聚肌胞注射液组，然后根据本实施例的配方和方法但不添加壳聚糖盐酸盐制得的兽用干扰素诱导剂作为对照组，将所有样品稀释至有效浓度为0.08mg/ml，加入20ul 10mg/ml的RNA酶，37℃水浴，每隔15分钟测量一次248nm吸光度值(检测结果详见表2)。
由检测结果可以看出，本发明制得的兽用干扰素诱导剂抵抗RNA酶降解的能力优于对照组，也好于市售人用聚肌胞注射液。提示其对环境与动物体内的RNA酶降解具有较好的耐受性，适合应用于养殖中的饮水、拌饵给药以及药浴。
表2：抗RNA酶降解试验248nm吸光度值
ɑ干扰素诱导试验
将30只21日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施例的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射氯化钠-磷酸盐缓冲液作为空白对照组。每只鸡按0.01mg/kg体重注射，间隔3天再注射一次，在最后一次注射后的第12小时和第36小时采血，用ELISA方法测定血液中的ɑ干扰素含量。具体结果详见表3：
表3：ɑ干扰素诱导试验结果
注：同行ab表示与对照组相比差异显著，ac表示与对照组差异极显著，字母相同差异不显著。
由检测结果可以看出，0.01mg/kg体重注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组和市售某品牌的人用聚肌胞注射液组诱导产生ɑ干扰素的能力均高于空白对照组且差异极显著，而本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组高于市售某品牌的人用聚肌胞注射液组，但差异不显著。
安全性试验
将30只14日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射“氯化钠-磷酸盐缓冲液”作为空白对照组。每只鸡按0.1mg/kg体重注射，连用3天，在注射后观察动物是否出现异常反应，末次注射后的第7天剖杀所有动物，检查注射部位和内脏器官组织。
结果表明：注射后各组动物均未异常反应，试验结束，剖杀所有动物，注射部位和内脏器官组织均正常，说明本制剂对鸡是安全的。
实施例2
一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为10g/L的氯化钙水溶液、浓度为0.1g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸，所述聚肌苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5g/L，所述聚胞苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5g/L，所述氯化钙水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为16：1000，所述壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为984：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1。
本发明中的兽用干扰素诱导剂，其制备方法包括如下步骤：
a.取聚肌苷酸，然后用1/2体积的所述氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在40℃的温度下加热10分钟；
b.取聚胞苷酸，然后用1/2体积的所述的氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在70℃的温度下加热10分钟；
c.将a步骤和b步骤得到的液体混合，然后以10转/分的速度搅拌10分钟；然后在40℃的温度下反应60分钟，反应过程中保持10转/分的速度搅拌，得到反应液；
d.待反应液冷却至室温，然后每间隔10s逐滴滴加氯化钙水溶液，所述滴加的氯化钙水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为16:1000，滴加过程保持10转/分的速度搅拌；
e.向经过d步骤处理的反应液中缓慢加入配方量的壳聚糖盐酸盐水溶液，加入过程保持10转/分的速度搅拌；
f.将经过e步骤处理的反应液用孔径0.2μm的滤膜过滤，收集滤液，即得；
所述d步骤中的氯化钙水溶液由如下步骤制得：根据所述氯化钙水溶液的浓度(即10g/L)，取氯化钙溶于水，然后用0.2μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
本发明中，优选的方案为所述e步骤中的壳聚糖盐酸盐水溶液由如下步骤制得：根据所述壳聚糖盐酸盐水溶液的浓度(即0.1g/L)，取壳聚糖盐酸盐溶于水，然后用0.2μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
将本实施例制得的兽用干扰素诱导剂与市售某品牌的人用聚肌胞注射液的质量进行比较，比较的依据为国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，具体检测结果如下表4：
表4：本技术制备的干扰素诱导剂与同类样品质量检测结果对比(1mg/ml)
由表4检测结果可以看出，本发明实施例制得的兽用干扰素诱导剂符合国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，且洁净无菌，可直接使用，有效含量高，产品质量稳定。
对本实施例制得的兽用干扰素诱导剂对抵抗RNA酶降解稳定性进行测试，取本实施例制得的兽用干扰素诱导剂、市售某品牌的人用聚肌胞注射液组，然后根据本实施例的配方和方法但不添加壳聚糖盐酸盐制得的兽用干扰素诱导剂作为对照组，将所有样品稀释至有效浓度为0.08mg/ml，加入20ul 10mg/ml的RNA酶，37℃水浴，每隔15分钟测量一次248nm吸光度值(检测结果详见表5)。
由检测结果可以看出，本发明制得的兽用干扰素诱导剂抵抗RNA酶降解的能力优于对照组，也好于市售人用聚肌胞注射液。提示其对环境与动物体内的RNA酶降解具有较好的耐受性，适合应用于养殖中的饮水、拌饵给药以及药浴。
表5：抗RNA酶降解试验248nm吸光度值
ɑ干扰素诱导试验
将30只21日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射氯化钠-磷酸盐缓冲液作为空白对照组。每只鸡按0.01mg/kg体重注射，间隔3天再注射一次，在最后一次注射后的第12小时和第36小时采血，用ELISA方法测定血液中的ɑ干扰素含量。具体结果详见表6：
表6：ɑ干扰素诱导试验结果
注：同行ab表示与对照组相比差异显著，ac表示与对照组差异极显著，字母相同差异不显著。
由检测结果可以看出，0.01mg/kg体重注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组和市售人用聚肌胞注射液组诱导产生ɑ干扰素的能力均高于空白对照组且差异极显著，而本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组高于市售人用聚肌胞注射液组，但差异不显著。
安全性试验
将30只14日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射“氯化钠-磷酸盐缓冲液”作为空白对照组。每只鸡按0.1mg/kg体重注射，连用3天，在注射后观察动物是否出现异常反应，末次注射后的第7天剖杀所有动物，检查注射部位和内脏器官组织。
结果表明：注射后各组动物均未异常反应，试验结束，剖杀所有动物，注射部位和内脏器官组织均正常，说明本制剂对鸡是安全的。
实施例3
一种兽用干扰素诱导剂，其由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为80g/L的氯化钙水溶液、浓度为5g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸，所述聚肌苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为10g/L，所述聚胞苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为10g/L，所述氯化钙水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2：1000，所述壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为998：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1。
本发明中的兽用干扰素诱导剂，其制备方法包括如下步骤：
a.取聚肌苷酸，然后用1/2体积的所述氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在70℃的温度下加热6分钟；
b.取聚胞苷酸，然后用1/2体积的所述的氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在70℃的温度下加热6分钟；
c.将a步骤和b步骤得到的液体混合，然后以40转/分的速度搅拌3分钟；然后在70℃的温度下反应20分钟，反应过程中保持40转/分的速度搅拌，得到反应液；
d.待反应液冷却至室温，然后每间隔10s逐滴滴加氯化钙水溶液，所述滴加的氯化钙水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2:1000，滴加过程保持40转/分的速度搅拌；
e.向经过d步骤处理的反应液中缓慢加入配方量的壳聚糖盐酸盐水溶液(即壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为998：1000)，加入过程保持40转/分的速度搅拌；
f.将经过e步骤处理的反应液用孔径0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得；
所述d步骤中的氯化钙水溶液由如下步骤制得：根据所述氯化钙水溶液的浓度(即80g/L)，取氯化钙溶于水，然后用0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
本发明中，优选的方案为所述e步骤中的壳聚糖盐酸盐水溶液由如下步骤制得：根据所述壳聚糖盐酸盐水溶液的浓度(即5g/L)，取壳聚糖盐酸盐溶于水，然后用0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
将本实施例制得的兽用干扰素诱导剂与市售某品牌的人用聚肌胞注射液的质量进行比较，比较的依据为国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，具体检测结果如下表7：
表7：本技术制备的干扰素诱导剂与同类样品质量检测结果对比(1mg/ml)
由表7检测结果可以看出，本实施例制得的兽用干扰素诱导剂符合国家药品监督局国家药品标准[WS1-XG-050-2000]，且洁净无菌，可直接使用，有效含量高，产品质量稳定。
对本实施例制得的兽用干扰素诱导剂对抵抗RNA酶降解稳定性进行测试，取本实施例制得的兽用干扰素诱导剂、市售某品牌的人用聚肌胞注射液组，然后根据本实施例的配方和方法但不添加壳聚糖盐酸盐制得的兽用干扰素诱导剂作为对照组，将所有样品稀释至有效浓度为0.08mg/ml，加入20ul 10mg/ml的RNA酶，37℃水浴，每隔15分钟测量一次248nm吸光度值(检测结果详见表8)。
由检测结果可以看出，本发明制得的兽用干扰素诱导剂抵抗RNA酶降解的能力优于对照组，也好于市售人用聚肌胞注射液。提示其对环境与动物体内的RNA酶降解具有较好的耐受性，适合应用于养殖中的饮水、拌饵给药以及药浴。
表8：抗RNA酶降解试验248nm吸光度值
ɑ干扰素诱导试验
将30只21日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射氯化钠-磷酸盐缓冲液作为空白对照组。每只鸡按0.01mg/kg体重注射，间隔3天再注射一次，在最后一次注射后的第12小时和第36小时采血，用ELISA方法测定血液中的ɑ干扰素含量。具体实验结果详见表9：
表9：ɑ干扰素诱导试验结果
注：同行ab表示与对照组相比差异显著，ac表示与对照组差异极显著，字母相同差异不显著。
由检测结果可以看出，0.01mg/kg体重注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组和市售某品牌的人用聚肌胞注射液组诱导产生ɑ干扰素的能力均高于空白对照组且差异极显著，而本实施例制得的兽用干扰素诱导剂组高于市售某品牌的人用聚肌胞注射液组，但差异不显著。
安全性试验
将30只14日龄SPF鸡随机分为三组，每组10只，分别注射本实施例制得的兽用干扰素诱导剂，市售某品牌的人用聚肌胞注射液，另外一组注射“氯化钠-磷酸盐缓冲液”作为空白对照组。每只鸡按0.1mg/kg体重注射，连用3天，在注射后观察动物是否出现异常反应，末次注射后的第7天剖杀所有动物，检查注射部位和内脏器官组织。
结果表明：注射后各组动物均未异常反应，试验结束，剖杀所有动物，注射部位和内脏器官组织均正常，说明本制剂对鸡是安全的。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (4)
1.一种兽用干扰素诱导剂，其特征在于由如下组分制成：pH值为7.2的氯化钠-磷酸盐缓冲液、浓度为10-80g/L的氯化钙水溶液、浓度为0.1-5g/L的壳聚糖盐酸盐水溶液、聚肌苷酸、聚胞苷酸，所述聚肌苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述聚胞苷酸质量与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为0.5-10g/L，所述氯化钙水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2-16：1000，所述壳聚糖盐酸盐水溶液与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为984-998：1000；所述氯化钙水溶液和壳聚糖盐酸盐水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为1:1。
2.一种根据权利要求1所述的兽用干扰素诱导剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
a.取聚肌苷酸，然后用1/2体积的所述氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在40-70℃的温度下加热5-10分钟；
b.取聚胞苷酸，然后用1/2体积的所述的氯化钠-磷酸盐缓冲液溶解，然后在40-70℃的温度下加热5-10分钟；
c.将a步骤和b步骤得到的液体混合，然后以10-40转/分的速度搅拌3-10分钟；然后在40-70℃的温度下反应20-60分钟，反应过程中保持10-40转/分的速度搅拌，得到反应液；
d.待反应液冷却至室温，然后每间隔5-20s逐滴滴加氯化钙水溶液，所述滴加的氯化钙水溶液的总体积与氯化钠-磷酸盐缓冲液的体积比为2-16:1000，滴加过程保持10-40转/分的速度搅拌；
e.向经过d步骤处理的反应液中缓慢加入配方量的壳聚糖盐酸盐水溶液，加入过程保持10-40转/分的速度搅拌；
f.将经过e步骤处理的反应液用孔径0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
3.根据权利要求2所述的兽用干扰素诱导剂的制备方法，其特征在于所述d步骤中的氯化钙水溶液由如下步骤制得：根据所述氯化钙水溶液的浓度，取氯化钙溶于水，然后用0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
4.根据权利要求2所述的兽用干扰素诱导剂的制备方法，其特征在于所述e步骤中的壳聚糖盐酸盐水溶液由如下步骤制得：根据所述壳聚糖盐酸盐水溶液的浓度，取壳聚糖盐酸盐溶于水，然后用0.2-0.45μm的滤膜过滤，收集滤液，即得。
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